RU2694614C1 - Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом - Google Patents
Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом Download PDFInfo
- Publication number
- RU2694614C1 RU2694614C1 RU2019101706A RU2019101706A RU2694614C1 RU 2694614 C1 RU2694614 C1 RU 2694614C1 RU 2019101706 A RU2019101706 A RU 2019101706A RU 2019101706 A RU2019101706 A RU 2019101706A RU 2694614 C1 RU2694614 C1 RU 2694614C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oscillations
- multiple sclerosis
- patients
- lymphocytes
- pathological process
- Prior art date
Links
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 title claims abstract description 20
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 48
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims abstract description 37
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000005672 electromagnetic field Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 12
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 12
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 10
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 8
- FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M Methylprednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)CC[C@H]21 FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- VKZRWSNIWNFCIQ-WDSKDSINSA-N (2s)-2-[2-[[(1s)-1,2-dicarboxyethyl]amino]ethylamino]butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NCCN[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VKZRWSNIWNFCIQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 5
- 208000004044 Hypesthesia Diseases 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 208000034783 hypoesthesia Diseases 0.000 description 5
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 5
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 5
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 4
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 4
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 4
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 208000035824 paresthesia Diseases 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 229940038850 rebif Drugs 0.000 description 3
- 229940087854 solu-medrol Drugs 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 2
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000007971 neurological deficit Effects 0.000 description 2
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N (R)-lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC[C@@H]1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- IKMNOGHPKNFPTK-UHFFFAOYSA-N 2-ethyl-6-methylpyridin-1-ium-3-ol;4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O.CCC1=NC(C)=CC=C1O IKMNOGHPKNFPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-2-{[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl)methyl]sulfinyl}-1H-benzimidazole Chemical compound N=1C2=CC(OC)=CC=C2NC=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 206010009244 Claustrophobia Diseases 0.000 description 1
- 208000003164 Diplopia Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 206010029216 Nervousness Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 210000000877 corpus callosum Anatomy 0.000 description 1
- 102000009854 cortexin Human genes 0.000 description 1
- 108010034906 cortexin Proteins 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 208000029444 double vision Diseases 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000003565 oculomotor Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002640 perineum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000019899 phobic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом. Для этого проводят определение средней амплитуды колебаний лимфоцитов методом компьютерного микроэлектрофореза в условиях переменного электромагнитного поля при значении частоты переменного тока 0,25 Гц, напряжения 28 В. Дополнительно определяют среднюю амплитуду колебаний эритроцитов и отношение значений средних амплитуд колебаний эритроцитов к средним амплитудам колебаний лимфоцитов. При величине отношения 0,950-1,250 диагностируют обострение патологического процесса. А при величине отношения 1,600-1,900 диагностируют ремиссию патологического процесса. Изобретение обеспечивает раннюю диагностику обострений рассеянного склероза и позволяет проводить оценку эффективности проводимого лечения у больных рассеянным склерозом. 2 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике рассеянного склероза, и может быть использовано в отделениях неврологии и иммунологии.
Рассеянный склероз (PC) представляет собой хронической демиелинизирующее заболевание центральной нервной системы с ремиттирующим течением (фаза обострений сменяется фазой ремиссии) и неясным патогенезом, в основе которого лежит аутоиммунный механизм разрушения миелиновой оболочки нервных волокон.
В настоящее время, по разным оценкам, в мире насчитывается около 3 млн. больных PC. В последние годы показатели распространенности и заболеваемости PC во всем мире имеют тенденцию к росту. Российская Федерация относится к зоне среднего риска распространенности PC (частота встречаемости от 10 до 50 случаев на 100000 населения).
Современный рост заболеваемости PC связан не только с реальным увеличением количества случаев PC, но и с улучшением качества диагностики патологического процесса, привлечением инновационных технологий для своевременного выявления дебюта заболевания, использованием унифицированных диагностических шкал, позволяющих систематизировать клинико-лабораторные данные и, наконец, с расширением возможностей патогенетической и симптоматической терапии, способствующей улучшению качества жизни пациентов с PC и пролонгации течения заболевания.
Медико-социальная значимость данного неврологического заболевания определяется поражением преимущественно лиц молодого, трудоспособного возраста, тяжестью прогрессирующих органических поражений центральной и периферической нервной системы, приводящих к ранней временной, а затем и постоянной утрате трудоспособности, высоким экономическим бременем, связанным с расходами на профилактические, диагностические, лечебные и реабилитационные процедуры. В связи с этим остро стоит проблема оперативной и незатратной диагностики активности патологического процесса, выявление ранних признаков обострения заболевания, контроля эффективности проводимого лечения с возможностью своевременной замены препарата или изменения его дозировки.
Для установления достоверного диагноза рассеянного склероза обычно проводят анализ совокупности клинических и анамнестических данных, результатов магнитно-резонансной томографии головного и спинного мозга и нейрофизиологических паттернов, исследование вызванных потенциалов и иммунологические тесты.
Наиболее признанным методом в диагностике PC является МРТ головного и спинного мозга, проводимая в режиме Т2, Т1 и с контрастным усилением. Однако данный метод многим пациентам противопоказан из-за аллергической реакции на контрастное вещество, клаустрофобии, наличия металлических протезов в организме, снижения скорости клубочковой фильтрации, беременности и др. В этих случаях при подозрении на обострение заболевания врач вынужден опираться на жалобы пациента и оценку неврологического статуса, которые не всегда объективны.
Иммунологическая диагностика рассеянного склероза включает показатели, среди которых выделяются: повышение уровня гамма-глобулинов в спинно-мозговой жидкости; выявление олигоклональных иммуноглобулинов G в спинно-мозговой жидкости; повышенное содержание в спинно-мозговой жидкости основного белка миелина, что может служить признаком обострения процесса. Также для оценки характера течения рассеянного склероза используют цитофлюориметрический или иммунофлюоресцентный методы определения субпопуляций Т- и В-лимфоцитов с помощью наборов моноклональных антител; метод оценки пролиферации лимфоцитов; метод определения активности супрессорных лимфоцитов; метод определения чувствительности иммунокомпетентных клеток к нейроспецифическим антигенам; метод определения кислородзависимой бактерицидности фагоцитирующих клеток периферической крови; метод радиальной иммунодиффузии в геле для определения количества иммуноглобулинов классов A, G, М. Однако перечисленные методы достаточно дорогостоящие, технически сложные, требуют длительного времени для их постановки. Кроме того, велико количество как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов.
Известен способ определения стадии патологического процесса в тестах оценки функциональной активности лимфоцитов (Патент РФ №2175769, МПК G01N 33/68, G01N 33/566, публ. 2001 г. ), основанный на проведении реакции спонтанного розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана в присутствии препаратов иммуномодулируюшего действия, содержащих естественные регуляторные пептиды тимического и костнмозгового происхождения. Вычисляется индекс чувствительности лимфоцитов к препаратам, который определяет индекс активности патологических процессов.
Недостатками данного способа являются длительность и сложность постановки реакции розеткообразования, необходимость проведения на регулярной основе процессов заготовки и хранения в условиях ограниченного времени препаратов живых эритроцитов периферической крови животного (барана), субъективность в оценке результатов реакции при подсчете под микроскопом количества розеткообразующих лимфоцитов, а также неспецифичность полученных результатов, которые могут изменяться в широком диапазоне при различных патологических состояниях и зависеть от множества разнообразных факторов, вызывающих нарушение иммунитета.
Известен способ дифференциальной диагностики ремитирующего и вторично-прогрессирующего типа течения рассеянного склероза (Патент РФ №2428693, МПК G01N 33/48, G01N 33/50, публ. 2006 г. ), основанный на определении глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах периферической крови у пациентов с рассеянным склерозом. Сущность данного способа дифференциальной диагностики заключается в том, что проводят определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах периферической крови у пациентов страдающих рассеянным склерозом. При превышении активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах периферической крови на 80% и более относительно показателей для здоровых лиц диагностируют ремиттирующий тип течения рассеянного склероза. При снижении активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах периферической крови у пациентов с рассеянным склерозом на 25% и более относительно показателей для здоровых лиц диагностируют вторично-прогрессирующий тип течения рассеянного склероза.
К недостаткам этого способа относятся низкая точность диагностики, основанная на неспецифических показателях биохимической активности эритроцитов, которые могут изменяться в широком диапазоне в зависимости от активности любых воспалительных реакций.
Наиболее близким является способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом (Патент №2613908, МПК G01N 33/49, публ. 2017 г. ) путем исследования лимфоцитов методом компьютерного микроэлектрофореза в условиях переменного электромагнитного поля при значении частоты переменного тока 0,25 Гц, напряжения 28 В. Если количестве неподвижных лимфоцитов менее 10% и средней амплитуде колебаний подвижных лимфоцитов в пределах 8,0-11,0 мкм диагностируют обострение патологического процесса, а при количестве неподвижных лимфоцитов более 10% и средней амплитуде колебаний подвижных лимфоцитов в пределах 5,0-7,0 мкм -ремиссию патологического процесса.
Недостатками данного способа являются то, что его точность не во всех случаях достаточно высокая в связи с широкой индивидуальной вариабельностью абсолютных показателей электрофоретической подвижности лимфоцитов периферической крови пациентов, связанной с наличием возможных изменений морфофункционального состояния лимфоцитов при развитии различных сопутствующих патологических состояний. Также существует необходимость проведения учета и комплексного анализа изменений нескольких различных показателей (подсчета общего количества лимфоцитов, подсчета количества неподвижных лимфоцитов, определения амплитуды колебаний подвижных лимфоцитов), что усложняет постановку диагноза.
Задачей настоящего изобретения является устранение указанных недостатков, повышение точности диагностики за счет использования относительных величин независимых друг от друга показателей электрофоретической подвижности клеток крови, разработка способа определения активности рассеянного склероза, позволяющего сократить время исследования, уменьшить количество регистрируемых и анализируемых показателей.
Для этого при оценке активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом, включающей исследование лимфоцитов периферической крови методом компьютерного микроэлектрофореза в условиях переменного электромагнитного поля при значении частоты переменного тока 0,25 Гц, напряжения 28 В, определение средней амплитуды колебаний лимфоцитов, предложено дополнительно определять среднюю амплитуду колебаний эритроцитов. По полученным данным предложено определять отношение значений средних амплитуд колебаний эритроцитов к средним амплитудам колебаний лимфоцитов, и при величине отношения в пределах от 0,950 до 1,250 диагностируют обострение патологического процесса, а при величине отношения от 1,600 до 1,900 -ремиссию патологического процесса.
В основе определения активности патологического процесса у больных PC лежит оценка электрокинетических свойств лимфоцитов и эритроцитов периферической крови, которую проводят с использованием компьютерного микроэлектрофореза (МЭФ) на базе приборного комплекса «Биони-КЭА» (ТУ 9443-009-17390471-2016, ООО «Весттрейд», Москва).
Регистрация перемещения клеток крови в электрическом поле позволяет оценить морфофункциональное состояние мембран клеток и общие закономерности изменения гомеостаза организма.
При обострении PC количество иммунных комплексов и степень их связывания с рецепторами мембраны лимфоцитов увеличивается, вызывая изменение заряда их поверхности и, соответственно, их электрофоретических свойств: подвижности лимфоцитов и амплитуды их движения в условиях переменного электромагнитного поля.
Эритроциты при PC отличаются измененной деформируемостью, повышенной агрегацией из-за высоких уровней воспаления на периферии и, следовательно, измененной гемореологией. Кроме того, они потенциально способствуют окислительному стрессу за счет нарушения антиоксидантной способности. Все эти факторы находят количественное отражение в изменении поверхностного электрического заряда эритроцитов, их подвижности и, соответственно, амплитуды колебаний в условиях переменного электромагнитного поля. Таким образом, на основании анализа электрокинетических свойств методом микроэлектрофореза лимфоциты и эритроциты при PC могут быть использованы в качестве биомаркеров заболевания и помогать стратификации пациентов.
Способ осуществляется следующим образом.
Цельную венозную кровь забирают из кубитальной вены в объеме 3 мл в пластиковую пробирку с добавлением 25 ед. гепарина на 1 мл для предотвращения свертывания крови. Для получения эритроцитов с помощью пипетки-дозатора из пробирки с цельной венозной кровью берут 5 мкл, разводят в 1 мл 0,3 М раствора сахарозы и отстаивают 10 минут. Лимфоциты выделяют по стандартной методике (Новиков Д.К., Новикова B. И. Клеточные методы иммунодиагностики. - Минск: Беларусь, -1979. -
C. 20-27).
В пробирку с 300 мкл 0,3М сахарозы добавляют 30 мкл взвеси лимфоцитов или эритроцитов и тщательно перемешивают. 40 мкл полученной суспензии клеток в растворе сахарозы с помощью дозатора помещают в центр рабочей зоны электрофоретической ячейки между электродами. Включают исполнительный блок «Биони-КЭА», устанавливают необходимые значения частоты 0,25 Гц и напряжения 28 В на электродах электрофоретической камеры. Заправленную электрофоретическую камеру располагают на столике микроскопа так, чтобы объектив находился над центром рабочей зоны. Фокусируют объектив микроскопа на препарате до появления четкого изображения клеток крови на дисплее компьютера. Подают напряжение на электроды камеры, делают запись 2-3 полных колебаний клеток. Клетки снимают в течение 15 секунд по 4 поля зрения. Проводят автоматическую обработку записанных видеофайлов и оценивают следующие параметры анализируемой клеточной популяции:
- среднее значение амплитуды колебаний подвижных лимфоцитов (Ал, мкм);
- среднее значение амплитуды колебаний подвижных эритроцитов (Аэ, мкм).
По полученным данным определяется отношение значений средних амплитуд колебаний эритроцитов к средним амплитудам колебаний лимфоцитов (Аэ/Ал).
По предлагаемому способу изучены электрофоретические свойства лимфоцитов периферической крови 15 больных с верифицированным диагнозом рассеянного склероза до и после обострения PC. Проведено детальное изучение клинической картины заболевания, данные анамнеза, неврологического и соматического статуса, результаты магнитно-резонансной томографии головного и шейного отделов спинного мозга. Тяжесть клинического состояния оценивали с использованием шкал: EDSS, FS, SCRIPSS. По шкале неврологического дефицита FS средний балл составил 7,3±0,49, по шкале инвалидизации EDSS - 3,12±0,35 балла (средняя степень тяжести заболевания), по шкале неврологического дефицита SCRIPSS - 76,8±3,21 балла, индекс прогрессирования заболевания составил 0,9±0,07 балла.
Критериями включения в исследование были:
- ремитирующее течение заболевания;
- наличие не менее двух обострений за последние 2 года;
- EDSS до 5,5 баллов;
- способность больного самому себе самостоятельно делать инъекции;
- письменное согласие больного на лечение.
Обострение PC идентифицировали на основании жалоб, клинической картины и данных МРТ.
Для лечения обострения заболевания больные получали пульс-терапию метилпреднизолоном в суммарной дозе 5000 мг в течение 7 дней.
Группу контроля составили 20 здоровых добровольцев. Оценку электрофоретических свойств лимфоцитов и эритроцитов проводили с использованием компьютерного микроэлектрофореза (МЭФ) на базе приборного комплекса «Биони-КЭА».
При исследовании электрофоретических свойств лимфоцитов и эритроцитов периферической крови в контрольной группе (здоровые добровольцы) по предлагаемому способу, установлено, что в норме средняя амплитуда колебаний подвижных лимфоцитов находится в диапазоне 2,0 -5,0 мкм, средняя амплитуда колебаний подвижных эритроцитов - в диапазоне 1,0 - 4,0 мкм, величина отношения данных показателей составляет от 0,500 до 0,800.
У больных PC в стадии обострения отмечается более высокая активность лимфоцитов: средняя амплитуда колебаний подвижных лимфоцитов увеличивается в 2 раза находится в диапазоне 8,0 - 11,0 мкм. Средняя амплитуда колебаний эритроцитов находится в диапазоне 7,0 -12,0 мкм. Величина отношения данных показателей составляет от 0,950 до 1,250.
У больных PC в стадии ремиссии активность лимфоцитов превышает нормальные значения контрольной группы, но является достоверно ниже показателей больных с обострением PC: средняя амплитуда колебаний подвижных лимфоцитов смещается в диапазон значений - 5,0 - 7,0 мкм. Средняя амплитуда колебаний эритроцитов находится в диапазоне 8,0 -13,0 мкм. Величина отношения данных показателей составляет от 1,600 до 1,900.
В таблицах 1 и 2 представлены результаты исследования электрофоретической активности лимфоцитов и эритроцитов больных рассеянным склерозом в стадии обострения и ремиссии. 
Пример 1.
Пациент П., 34 года. Клинический диагноз: Рассеянный склероз. Ремиттирующее течение. Обострение. EDSS 3.0
Жалобы при поступлении: покалывания в области левой половины лица, боль в области правой пятки, дрожь в пальцах, нервозность.
Анамнез vitae: Перенесенные заболевания: ОРВИ. Вредные привычки отрицает. Семейное положение, условия труда и быта удовлетворительные. Наследственность не отягощена. Не работает.
Анамнез morbi: со слов пациентки 1-ое обострение, сопровождавшееся двоением в глазах, головокружением, повышенной утомляемостью, произошло в мае 2016 г. и продолжалось в течение 3 недель. Настоящее состояние регистрируется с 14.07.2018.
МРТ головного мозга от 22.07.2018 - MP-картина многоочагового поражения белого вещества головного мозга с наличием супратенториальных очагов соответствует демиелинизирующему заболеванию. На основании клинической картины и данных МРТ идентифицировано обострение PC.
Проведено исследование лимфоцитов и эритроцитов периферической крови по предлагаемому способу. Результат МЭФ от 21.07.2018 г: средняя амплитуда колебаний подвижных лимфоцитов - 10,11 мкм, средняя амплитуда колебаний подвижных эритроцитов - 10,62 мкм, величина отношения Аэ/Ал - 1,050. Заключение: рассеянный склероз в стадии обострения.
Проведена гормональная терапия Метилпреднизолоном (Солу-Медрол) 1000 мг в/в капельно,метил-преднизолоном (Солу-Медролом), Омез, КCl, Кортексин, витамины В1, В 6, В12, диета№15.
При выписке состояние удовлетворительное. В клинической картине отмечается положительная динамика в виде уменьшения глазодвигательных нарушений, уменьшение чувства онемения. EDSS 2.0
Рекомендации: наблюдение невролога по месту жительства; режим общий, диета №15, глатирамера ацетат 1.0 и/к ежедневно, мексидол 1 табл. 3 раза в день 1 месяц, нейромультивит 1 таб 2 р/д 1 мес.Повторная консультация через 3 мес.
При плановом обследовании 15.10.2018 жалобы не предъявляет. Состояние удовлетворительное. Получает глатирамера ацетат в течение трех месяцев, переносит хорошо. Обострений не было. Для определения активности патологического процесса проведено исследование лимфоцитов и эритроцитов по предлагаемому способу. Результат МЭФ от 15.10.2018 г: средняя амплитуда колебаний подвижных лимфоцитов - 6,34 мкм, средняя амплитуда колебаний подвижных эритроцитов - 10,15 мкм, величина отношения Аэ/Ал - 1,600. Заключение: рассеянный склероз в стадии ремиссии.
На повторном МРТ от 25.10.18 положительная динамика в виде уменьшения очага в размерах и отсутствия признаков активности. Диагноз: рассеянный склероз. Ремиттирующее течение. Ремиссия.
Пример 2.
Пациентка К., 37 лет.Клинический диагноз: Рассеянный склероз. Ремиттирующее течение. Обострение. Атаксия. EDSS - 3,0 балла.
Жалобы при поступлении: "не чувствую все тело", шаткость при ходьбе.
Анамнез заболевания: со слов пациентки 25.08.18 отметила онемение и покалывание в правой ноге, 31.08.2018 возникло онемение ног, затем живота, груди, рук, онемение промежности. Ранее отмечала эпизоды онемения в области ног и рук в 2015 году и 20137 году. К врачу не обращалась и лечения не получала.
Анамнез vitae: перенесенные заболевания ОРВИ, аллергоанамнез не отягощен. Вредные привычки отрицает.
МРТ головного мозга от 11.09.2018 - MP-картина многоочагового поражения вещества головного мозга (супра- и инфратенториально, с вовлечением в процесс мозолистого тела) и вещества спинного мозга на уровне шейного отдела позвоночника, с нарушением целостности ГЭБ (накопление контрастного препарата: 10 супратенториальных очагов и 1 крупный очаг в спинном мозге).
Проведено исследование лимфоцитов и эритроцитов периферической крови по предлагаемому способу. Результат МЭФ от 11.09.2018 г: средняя амплитуда колебаний подвижных лимфоцитов - 8,54 мкм, средняя амплитуда колебаний подвижных эритроцитов - 10,50 мкм, величина отношения Аэ/Ал - 1,230. Заключение: рассеянный склероз в стадии обострения.
Пациента получила лечение: режим стационарный, Вит В12 500 мкг в/м, Октолипен (Берлитион) 600 в/в капельно, Метилпреднизолон (Солу Медрол) 1000 мг в/в капельно, Калия хлорид 1 г. 3р/д, Омепразол 20 мг утром, Плазмаферез 3 сеанса по 500 мл, диета№15.
Выписывается в удовлетворительном состоянии с положительным эффектом. В клинической картине сохраняются парестезии в конечностях.
Рекомендации: наблюдение невролога по месту жительства; режим общий, диета №15, ребиф 44 мкг 3р/нед п/к, постоянно, нейромультивит 1 таб 3 р/д 1 мес, Актовегин 1 табл 3р/д 1 мес.Повторная консультация через 3 мес.
При плановом обследовании 17.12.2018 жалобы не предъявляет.Состояние удовлетворительное. Получает ребиф в течение трех месяцев, переносит хорошо. Обострений не было. Для определения активности патологического процесса проведено исследование лимфоцитов и эритроцитов по предлагаемому способу. Результат МЭФ от 17.12.2018 г: средняя амплитуда колебаний подвижных лимфоцитов - 6,40 мкм, средняя амплитуда колебаний подвижных эритроцитов - 11,62 мкм, величина отношения Аэ/Ал - 1,815. Заключение: рассеянный склероз в стадии ремиссии.
Новых жалоб нет. Получает Ребиф 44 в течение трех месяцев, переносит хорошо. Обострений не было. На повторном МРТ от 18.12.18 положительная динамика в виде уменьшения очагов в размерах и отсутствия признаков активности. Диагноз: рассеянный склероз. Ремиттирующее течение. Ремиссия.
Таким образом, изменение величины отношения средних амплитуд колебаний эритроцитов к средним амплитудам колебаний лимфоцитов коррелирует с исчезновением клинико-функциональных симптомов рассеянного склероза и данными МРТ головного мозга.
Преимущества предлагаемого нами способа заключаются в том то, что он является доступным для учреждений практического здравоохранения; простым в выполнении; практически безреагентным, т.е. не требует дополнительного использования дорогостоящих лабораторных расходных материалов; оперативным, т.к. позволяет получать результат в течение 3-5 минут и ориентироваться на минимальное количество измеряемых параметров; и объективным, т.к. измерения электрокинетических параметров живых клеток и их получение анализируемых данных производится в автоматическом режиме.
Полученные нами результаты указывают, что экспресс-анализ морфофункционального состояния лимфоцитов и эритроцитов периферической крови больных с рассеянным склерозом на основе их электрокинетических показателей является эффективным и экономически оправданным. Применение предлагаемого способа будет способствовать ранней диагностике обострений рассеянного склероза и оперативной оценке эффективности проводимых лечебных мероприятий, что даст возможность непосредственно в процессе наблюдения за пациентом отслеживать динамику течения заболевания и своевременно вносить изменения в протокол лечебных и реабилитационных процедур.
Кроме того, исследование особенностей морфофункционального состояния лимфоцитов и эритроцитов периферической крови при PC может способствовать расширению понимания патологических механизмов этого сложного и гетерогенного заболевания, что, в свою очередь, послужит основой для разработки новых методов лечения, способных значительно улучшить качество жизни пациентов.
Claims (1)
- Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом, включающий определение средней амплитуды колебаний лимфоцитов методом компьютерного микроэлектрофореза в условиях переменного электромагнитного поля при значении частоты переменного тока 0,25 Гц, напряжения 28 В, отличающийся тем, что дополнительно определяют среднюю амплитуду колебаний эритроцитов, определяют отношение значений средних амплитуд колебаний эритроцитов к средним амплитудам колебаний лимфоцитов, и при величине отношения 0,950-1,250 диагностируют обострение патологического процесса, а при величине отношения 1,600-1,900 - ремиссию патологического процесса.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019101706A RU2694614C1 (ru) | 2019-01-22 | 2019-01-22 | Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019101706A RU2694614C1 (ru) | 2019-01-22 | 2019-01-22 | Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2694614C1 true RU2694614C1 (ru) | 2019-07-17 |
Family
ID=67309211
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019101706A RU2694614C1 (ru) | 2019-01-22 | 2019-01-22 | Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2694614C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2807865C1 (ru) * | 2023-08-15 | 2023-11-21 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НЕВРОЛОГИИ" | Способ оценки типа течения рассеянного склероза |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002059604A2 (en) * | 2001-01-26 | 2002-08-01 | Oxford Glycosciences (Uk) Ltd | Diagnosis and treatment of multiple sclerosis |
| JP2016197123A (ja) * | 2006-05-26 | 2016-11-24 | フェノメノーム ディスカバリーズ インク | 多発性硬化症を診断するための生物マーカー、及びその方法 |
| RU2613908C1 (ru) * | 2016-01-29 | 2017-03-21 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" | Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом |
-
2019
- 2019-01-22 RU RU2019101706A patent/RU2694614C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002059604A2 (en) * | 2001-01-26 | 2002-08-01 | Oxford Glycosciences (Uk) Ltd | Diagnosis and treatment of multiple sclerosis |
| JP2016197123A (ja) * | 2006-05-26 | 2016-11-24 | フェノメノーム ディスカバリーズ インク | 多発性硬化症を診断するための生物マーカー、及びその方法 |
| RU2613908C1 (ru) * | 2016-01-29 | 2017-03-21 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" | Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ЯКУШИНА Т.И. и др. Дополнительные показатели для оценки эффективности терапии рассеянного склероза (предварительные данные), Журнал неврологии и психиатрии имени С.С. Корсакова. Рассеянный склероз. 2013, N 2, С.61-65 - . * |
| ЯКУШИНА Т.И. и др. Дополнительные показатели для оценки эффективности терапии рассеянного склероза (предварительные данные), Журнал неврологии и психиатрии имени С.С. Корсакова. Рассеянный склероз. 2013, N 2, С.61-65 - реферат. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2807865C1 (ru) * | 2023-08-15 | 2023-11-21 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НЕВРОЛОГИИ" | Способ оценки типа течения рассеянного склероза |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bresnick et al. | Predicting progression to severe proliferative diabetic retinopathy | |
| Ritvo et al. | Increased blood serotonin and platelets in early infantile autism | |
| Beghi et al. | Hypothyroidism and polyneuropathy. | |
| Eftimov et al. | Diagnostic challenges in chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy | |
| Cerhan et al. | Diagnostic utility of letter fluency, category fluency, and fluency difference scores in Alzheimer's disease | |
| Costello | Vision disturbances in multiple sclerosis | |
| Barohn | Approach to peripheral neuropathy and neuronopathy | |
| Lunding et al. | Oligoclonal bands in cerebrospinal fluid: a comparative study of isoelectric focusing, agarose gel electrophoresis and IgG index | |
| Hernández-Molina et al. | Clinimetric methods in Sjögren's syndrome | |
| Zahr et al. | Dissociable contributions of precuneus and cerebellum to subjective and objective neuropathy in HIV | |
| RU2694614C1 (ru) | Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом | |
| Farr et al. | Assessment of rheumatoid activity based on clinical features and blood and synovial fluid analysis. | |
| WO2016117618A1 (ja) | 慢性炎症性脱髄性多発神経炎の診断方法、キット及びバイオマーカー | |
| Bansil et al. | Serum sAPO‐1/Fas levels in multiple sclerosis | |
| Pietravalle et al. | Early complications in type 1 diabetes: central nervous system alterations precede kidney abnormalities | |
| RU2272292C1 (ru) | Способ прогнозирования течения рассеянного склероза | |
| Masha et al. | Neuromyelitis optica: Clinical course and potential prognostic indicators | |
| Yoshioka et al. | Seronegative ocular myasthenia gravis in an older woman with transient dizziness and diplopia | |
| RU2613908C1 (ru) | Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом | |
| Miller | Diagnosis of multiple sclerosis | |
| Teigland et al. | Utility of the H‐reflex in diagnosing polyneuropathy | |
| Nakanishi et al. | Electrophysiological assessment and classification of motor pathway function in patients with spinal dural arteriovenous fistula | |
| RU2438133C1 (ru) | Способ прогнозирования эффективности лечения рассеянного склероза глюкокортикоидами | |
| Råstam et al. | Population screening and referral for hypercholesterolemia | |
| RU2528882C1 (ru) | Способ прогнозирования стадии рассеянного склероза с учетом показателей иммунологического статуса |