RU2693896C1 - Method of cultivation of strongyle larvae from herd keeping horses for determination of eggs viability at action of critically low temperatures - Google Patents

Method of cultivation of strongyle larvae from herd keeping horses for determination of eggs viability at action of critically low temperatures Download PDF

Info

Publication number
RU2693896C1
RU2693896C1 RU2018127030A RU2018127030A RU2693896C1 RU 2693896 C1 RU2693896 C1 RU 2693896C1 RU 2018127030 A RU2018127030 A RU 2018127030A RU 2018127030 A RU2018127030 A RU 2018127030A RU 2693896 C1 RU2693896 C1 RU 2693896C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
larvae
suspension
temperature
horses
hours
Prior art date
Application number
RU2018127030A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Людмила Михайловна Коколова
Любовь Юрьевна Гаврильева
Светлана Максимовна Степанова
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Якутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Якутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Якутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"
Priority to RU2018127030A priority Critical patent/RU2693896C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2693896C1 publication Critical patent/RU2693896C1/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/033Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

FIELD: veterinary medicine.
SUBSTANCE: invention relates to veterinary science and represents a method of cultivation of strongyle larvae from herd horses at year-round pasture keeping in conditions of critically low temperatures of Yakutia, characterized in that, at ambient air temperature of -5 °C and lower to -55 °C frozen samples of feces of horses are put into refrigerator at temperature of +8 °C for 24 hours, then held at room temperature of +22 °C for 12 hours, then put in thermostat at temperature of +28 °C, thereby providing smooth transition of temperature fluctuations to reduce stress factor on helminth eggs and further development of larvas, for study of cultivated strongyle larvae use test tubes with volume of 5 ml, amount of suspension is 2.1 ml, which is 30 drops of suspension with larvas, to dislocate larval strongholds, 0.7 ml of Melizeptol Rapid solution is used, then one drop or 0.07 ml of larval suspension is applied on a slide and a large magnification of the microscope is used to calculate the number of larvas in a suspension to determine the conditional intensity of strongylatosis invasion and to determine their generic and specific accessories.
EFFECT: method enables the effective assessment of the invasion intensity, larval survival, the probability of year-round reinfection of horses, and the accurate lifetime diagnosis.
1 cl

Description

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности ветеринарии и может быть использовано для определение интенсивности инвазии лошадей находящихся в круглогодичном пастбищном содержании, для определения развития и выживаемости яиц стронгилят при критически низких температурах -45°С; -50°С; -55°С, для использования культивированных личинок стронгилят в лабораторных опытах.The invention relates to the field of veterinary medicine, in particular veterinary medicine and can be used to determine the intensity of invasion of horses in year-round grazing, to determine the development and survival of strongylite eggs at critically low temperatures of -45 ° C; -50 ° C; -55 ° C, for the use of cultured starch larvae in laboratory experiments.

Стронгиляты пищеварительного тракта лошадей - геогельминты. Цикл развития разных видов в общих чертах одинаков. В яйцах, выделившихся во внешнюю среду, при температуре 20-25°С за 12-17 часов развиваются личинки 1-й стадии (Л-I), которые (в большинстве случаев) покидают яйцо, растут и дозревают, превращаясь после двух линек в инвазионную стадию (Л-III) примерно за 4-5 суток. При пониженной температуре развитие продолжается несколько недель. Личинки Л-I и Л-II живут, как свободноживущие организмы, питаются органическими субстратами, Л-III - не питаются. Личинки способны мигрировать по листьям, стеблям растений и влажной почве. Дальнейшее развитие их в организме лошадей протекает неодинаково.Strongylates of the digestive tract of horses - geohelminths. The cycle of development of different species is generally the same. In eggs released into the environment, at a temperature of 20–25 ° C, larvae of the 1st stage (LI) develop in 12–17 hours, which (in most cases) leave the egg, grow and ripen, turning after two molts into invasive stage (L-III) in about 4-5 days. At low temperatures, development continues for several weeks. Larvae L-I and L-II live as free-living organisms, feed on organic substrates, L-III - do not feed. The larvae are able to migrate through the leaves, plant stems and wet soil. Their further development in the body of horses proceeds unequally.

Известен способ культивирования личинок стронгилят по методу П.А. Величкина (1967), по этому методу свежие пробы фекалий весом 50 г помещают в чашки Петри, слегка увлажняют, закрывают крышкой и ставят в термостат при температуре 30°С на 7-10 дней. Начиная с 7 дня пробы берут по 5 г навески, заворачивают в марлю и помещают в воронки аппарата Бермана, в воронки заливается теплая вода (до +35°С). Аппарат с пробами фекалий оставляют при комнатной температуре на 2-3 часа. За это время личинки нематод выпадают из пробы на дно воронки или до места перекрытия трубки зажимом, осадок разливают на предметные стекла и микроскопируется.There is a method of cultivation of larvae strongyl by the method of PA Velichkina (1967), according to this method, fresh samples of faeces weighing 50 g are placed in Petri dishes, slightly moistened, covered with a lid and placed in a thermostat at a temperature of 30 ° C for 7-10 days. Starting from day 7, samples are taken at 5 g of sample, wrapped in gauze and placed in the funnels of the Berman apparatus, warm water is poured into the funnels (up to + 35 ° C). The apparatus with samples of faeces left at room temperature for 2-3 hours. During this time, nematode larvae fall out of the sample to the bottom of the funnel or to the place where the tube overlaps with a clamp, the sediment is poured onto glass slides and microscopically examined.

Имеются данные о способе диагностики стронгилятозов желудочно-кишечного тракта жвачных животных, заключающийся в том, что берут пробу фекалий весом 3-5 г, помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, состоящей из насыщенного раствора натрия хлорида и глицерина в соотношении 2:1, процеживают в чистый стакан, дают взвеси отстояться в течение 15-30 мин, петлей снимают поверхностную пленку (через 15 мин определяют яйца кишечных стронгилят, а через 30 мин - личинок при их наличии), переносят ее на предметное стекло и микроскопируют (патент RU 2007138691, 2014 г.). Однако данные методы культивирования личинок нематод показывают только условную интенсивность стронгилятозной инвазий лошадей в теплое время года.There is evidence of a method for diagnosing the strangulation of the gastrointestinal tract of ruminants, which consists in taking a sample of faeces weighing 3-5 g, placed in a glass, filled with a small amount of flotation liquid consisting of a saturated solution of sodium chloride and glycerin in a 2: 1 ratio , filter into a clean glass, allow the suspension to settle for 15-30 minutes, remove the surface film with a loop (after 15 minutes, determine the eggs of intestinal strongholds, and after 30 minutes - the larvae, if present), transfer it to a glass slide and microscope Drawing (RU Patent 2007138691, 2014). However, these methods of cultivation of nematode larvae show only the conditional intensity of horse strong invasions in the warm season.

Технической задачей заявляемого изобретения является определение выживаемости яиц стронгилят и интенсивности выделения из них личинок стронгилят при содержании лошадей в экстремальных условиях Якутии, при критически низких температурах: -45°С; -50°С; -55°С и ниже.The technical task of the claimed invention is the determination of the survival rate of the eggs of strangulate and the intensity of the release of the strongest larvae from them when the horses are kept in the extreme conditions of Yakutia at critically low temperatures: -45 ° C; -50 ° C; -55 ° C and below.

В основу способа изобретения положена задача культивирования и интенсивности выделения личинок стронгилят, определение выживаемости яиц стронгилят при низких -45°С; -50°С; -55°С и ниже температурах, выхода личинок определяет вероятность круглогодичной реинвазии лошадей.The basis of the method of the invention is the task of cultivation and the intensity of the release of the strongest larvae, the determination of the survival of the strongest egg at low -45 ° C; -50 ° C; -55 ° C and lower temperatures, the release of larvae determines the probability of year-round reinvasion of horses.

Технический результат изобретения - определение выживаемости яиц в зимний период и выхода из них личинок в лабораторных условиях. Технический результат изобретения достигается следующим образом: определяется интенсивность выделения из яиц инвазионных личинок, который определяет выживаемость яиц при низких -45°С; -50°С; -55°С и ниже температурах, интенсивность инвазии лошадей стронгилятами при круглогодичной тебеневке в условиях Якутии.The technical result of the invention is the determination of the survival rate of eggs in the winter and the release of the larvae in laboratory conditions. The technical result of the invention is achieved as follows: the intensity of release from eggs of invasive larvae is determined, which determines the survival of eggs at low -45 ° C; -50 ° C; -55 ° С and lower temperatures, intensity of horse invasion with strongylats during year-round tebelenevka in Yakutia.

До постановки проб фекалий в термостат при флотационном методе исследования проб фекалий по методу Фюллеборна, обнаруживаются яйца стронгилят.Before placing the faecal samples in the thermostat in the flotation method of examining fecal samples by the Fülleborn method, the eggs are stranded.

Исследование начинают при температурах воздуха -5°С; -10°С; -15°С; -25°С, опытные пробы фекалий (целыми комками) ставят в холодильник с температурой +8°С на 24 часов, затем переносят при комнатной температуре +22°С на 12 часов, переносят в термостат при температуре +28°С. При температуре наружного воздуха -25°С; -30°С; -35°С, замерзшие пробы фекалий ставят в холодильник с температурой +8°С на 24 часа, затем переносят при комнатной температуре +22°С на 12 часов, переносят в термостат при температуре +28°С. При температуре наружного воздуха -35°С; -40°С; -45°С, замерзшие пробы фекалий (комки) переносят в помещение с постоянной температурой -10°С на 24 часа, переносят в холодильник с температурой +8°С, выдерживают в течение 24 часа, затем переносят при комнатной температуре +22°С на 12 часов, после ставят в термостат при температуре +28°С. При температуре наружного воздуха -45°С; -50°С; -55°С замерзшие пробы фекалий (комки) переносят в помещение с постоянной температурой -15°С на 24 часа, переносят в холодильник с температурой +8°С, выдерживают в течение 24 часа, затем переносят при комнатной температуре +22°С на 24 часов, после ставят в термостат при температуре +28°С.The study begins at air temperatures of -5 ° C; -10 ° C; -15 ° C; -25 ° С, experimental samples of feces (in whole lumps) are put in a refrigerator with a temperature of + 8 ° С for 24 hours, then transferred at room temperature + 22 ° С for 12 hours, transferred to a thermostat at a temperature of + 28 ° С. At an ambient temperature of -25 ° C; -30 ° C; -35 ° C, frozen samples of faeces are placed in a refrigerator with a temperature of + 8 ° C for 24 hours, then transferred at room temperature + 22 ° C for 12 hours, transferred to a thermostat at a temperature of + 28 ° C. At an outdoor temperature of -35 ° C; -40 ° C; -45 ° C, frozen faecal samples (lumps) are transferred to a room with a constant temperature of -10 ° C for 24 hours, transferred to a refrigerator with a temperature of + 8 ° C, kept for 24 hours, then transferred at room temperature + 22 ° C for 12 hours, then put in a thermostat at a temperature of + 28 ° C. At an outdoor temperature of -45 ° C; -50 ° C; -55 ° C frozen samples of faeces (lumps) are transferred to a room with a constant temperature of -15 ° C for 24 hours, transferred to a refrigerator with a temperature of + 8 ° C, kept for 24 hours, then transferred at room temperature + 22 ° C to 24 hours, then put in a thermostat at a temperature of + 28 ° C.

Гельминтоовоскопия по Фюллеборну. Но диагноз в данном случае ставится как групповой - трихостронгилидозы или стронгилятозы. Это обусловлено тем, что яйца стронгилят сходны и невозможно определить к какому виду, роду и семейству нематод они относятся.Gelmintoovoskopiya according to Fulleborn. But the diagnosis in this case is made as a group - trichostragilosis or strongylotosis. This is due to the fact that the stronghold eggs are similar and it is impossible to determine to which species, genus and family of nematodes they belong.

Яйца светло-серые с тонкой гладкой оболочкой, величиной 0,0750,120 × 0,040-0,050 мм, внутри зародыш в виде шаров дробления. Лишь яйца нематодир отличаются своей величиной - 0,160-240 × × 0,075-0,130 мм - и сравнительно легко поддаются определению.Eggs are light gray with a thin smooth shell, the size of 0.0750.120 × 0.040-0.050 mm, inside the embryo in the form of crushing balls. Only nematodir eggs differ in their size - 0.160-240 × 0.075-0.130 mm - and are relatively easy to determine.

Начиная с 5 дня после постановки в термостат, берут из проб фекалий навески по 5 г, закладывают в воронки Бермана для сбора инвазионных личинок в пробирки объемом 5 мл, который содержит 30 капель объема взвеси личинок - 2,1 мл. Одна капля взвеси личинок соответствует 0,07 мл. После образования в пробирках плотного осадка из личинок надосадочную жидкость осторожно удаляют. Исследуя надосадочную жидкость, определяют выживаемость яиц стронгилят. Живые личинки стронгилят находятся в движении или в искривленном, скрученном состоянии, что существенно затрудняет изучение их морфологии и оценку размеров. Поэтому был необходим способ обездвиживания личинок, который фиксирует их в прямом состоянии, не разрушая их морфологию и не осветляя, что позволяет осуществить исследования и возможность использования культивированных личинок для дифференциальной диагностики вида гельминта. Для обездвиживания живых личинок в 2,1 мл взвеси личинок добавляют 0,7 мл раствора Мелисептол рапид (содержащий в 100 грамме раствора - пропанол 50 грамм, дидецилдиметиламмониум хлорид - 0,075 грамм, неионные сурфактанты, отдушки).Starting from the 5th day after being placed in a thermostat, 5 g samples of the faeces are taken from samples, put into Berman's funnels to collect invasive larvae in 5 ml tubes, which contain 30 drops of the suspension volume of the larvae - 2.1 ml. One drop of suspension of larvae corresponds to 0.07 ml. After a dense precipitate has formed in the tubes, the supernatant is carefully removed from the larvae. Investigating the supernatant, determine the survival of the eggs of strangulate. Living larvae of the stronghold are in motion or in a curved, twisted state, which makes it difficult to study their morphology and estimate sizes. Therefore, a method was needed to immobilize the larvae, which fixes them in a direct state, without destroying their morphology or lightening, which allows for research and the possibility of using cultivated larvae for the differential diagnosis of helminth species. To immobilize live larvae in 2.1 ml of the larva suspension, add 0.7 ml of Meliseptol Rapid solution (containing 100 grams of solution — propanol 50 grams, didecyldimethylammonium chloride — 0.075 grams, non-ionic surfactants, perfumes).

Для определения интенсивности инвазии и подсчета личинок пробирки тщательно перемешивают, берут одну каплю - 0,07 мл взвеси, наносят на предметное стекло и под малым и большим увеличением микроскопа подсчитывают количество выделенных личинок. Данные по подсчету личинок используются как показатели условной интенсивности стронгилятозной инвазий табунных лошадей при круглогодичном пастбищном содержании в условиях критически низких температур Якутии. Постановка точного прижизненного диагноза стронгилятозной инвазии лошадей, определения выращенных инвазионных личинокдо вида, применение культивированных личинок для проведения лабораторных опытов.To determine the intensity of invasion and count the larvae, the test tubes are thoroughly mixed, one drop is taken - 0.07 ml of suspension, applied to a glass slide and the number of the selected larvae is counted under a small and high magnification microscope. Data on larvae counting are used as indicators of the conditional intensity of strong-borne invasions of herd horses with year-round grazing under conditions of critically low temperatures in Yakutia. Establishment of an accurate intravital diagnosis of a sturgeon-like invasion of horses, determination of a grown invasive larvae of the species, use of cultivated larvae for laboratory experiments.

Claims (1)

Способ культивирования личинок стронгилят от табунных лошадей при круглогодичном пастбищном содержании в условиях критически низких температур Якутии, отличающийся тем, находящиеся при температуре наружного воздуха -5оС и ниже до -55оС замерзшие пробы фекалий лошадей ставят в холодильник с температурой +8оС на 24 часов, затем выдерживают при комнатной температуре +22оС 12 часов, после ставят в термостат при температуре +28оС, тем самым обеспечивая плавный переход колебаний температур для снижения стресс-фактора на яйца гельминтов и дальнейшего развития личинок, для исследования культивированных личинок стронгилят используют пробирки объемом 5 мл, количество взвеси составляет 2,1 мл, что представляет собой 30 капель взвеси с личинками, для обездвиживания личинок стронгилят применяют 0,7 мл раствора Мелисептол рапид, затем одну каплю или 0,07 мл взвеси личинок наносят на предметное стекло и под большим увеличением микроскопа подсчитывают количество личинок во взвеси для определения условной интенсивности стронгилятозной инвазии и для определения их родовой и видовой принадлежности.Strongyles larvae cultivation method of herd horses grazing when the year-round maintenance in conditions of low critical temperature Yakutia, wherein are at an outdoor temperature of -5 C or below -55 ° C frozen stool samples horses put in a refrigerator at +8 C. for 24 hours, then allowed to stand at room temperature 22 ° C 12 hours, then placed in a thermostat at a temperature of 28 ° C, thereby providing a smooth transition temperature variations to reduce stress-factor for helminth eggs and the distance development of larvae, 5 ml tubes are used to study cultured larvae, the amount of suspension is 2.1 ml, which is 30 drops of suspension with larvae, 0.7 ml of Meliseptol Rapid solution is used to immobilize the larvae, then one drop or 0 , 07 ml of the larvae suspension is applied on a glass slide and under a high magnification of the microscope, the number of larvae in the suspension is counted to determine the conditional intensity of the strangulation invasion and to determine their generic and species status. suggesting that being.
RU2018127030A 2018-07-23 2018-07-23 Method of cultivation of strongyle larvae from herd keeping horses for determination of eggs viability at action of critically low temperatures RU2693896C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018127030A RU2693896C1 (en) 2018-07-23 2018-07-23 Method of cultivation of strongyle larvae from herd keeping horses for determination of eggs viability at action of critically low temperatures

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018127030A RU2693896C1 (en) 2018-07-23 2018-07-23 Method of cultivation of strongyle larvae from herd keeping horses for determination of eggs viability at action of critically low temperatures

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2693896C1 true RU2693896C1 (en) 2019-07-05

Family

ID=67252100

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018127030A RU2693896C1 (en) 2018-07-23 2018-07-23 Method of cultivation of strongyle larvae from herd keeping horses for determination of eggs viability at action of critically low temperatures

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2693896C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA58783U (en) * 2010-09-28 2011-04-26 Национальный Университет Биоресурсов И Природопользования Украины Method for cultivating strongylate larvae at cattle gastrointestinal strongylatos
RU2532977C2 (en) * 2012-08-27 2014-11-20 Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии METHOD FOR EQUINE STRONGYLE EGG DISINVASION WITH USE OF BACTERIAL STRAIN Bacillus subtilis TNP-3, Bacillus subtilis-TNP-5

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA58783U (en) * 2010-09-28 2011-04-26 Национальный Университет Биоресурсов И Природопользования Украины Method for cultivating strongylate larvae at cattle gastrointestinal strongylatos
RU2532977C2 (en) * 2012-08-27 2014-11-20 Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии METHOD FOR EQUINE STRONGYLE EGG DISINVASION WITH USE OF BACTERIAL STRAIN Bacillus subtilis TNP-3, Bacillus subtilis-TNP-5

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
КОКОЛОВА Л.М. И ДР. Распространение гельминтозов у лошадей табунного содержания в республике Саха (Якутия)// Российский Паразитологический Журнал 2014, выпуск 3 квартала, с.30-33. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chebanov et al. Sturgeon hatchery manual
Lewis et al. Courtship and reproduction in Carybdea sivickisi (Cnidaria: Cubozoa)
Darnell et al. Lifetime reproductive potential of female blue crabs Callinectes sapidus in North Carolina, USA
JP4990411B2 (en) Crown roach mass production method
Yamada et al. Staging and the time course of embryonic development in kurosoi, Sebastes schlegeli
Sugahara et al. Gene expression analysis of lamprey embryos
Rahman et al. Effect of feeding management of broodstock on breeding performance of bata (Labeo bata)
JP6866286B2 (en) How to maintain ovaries of marine fish, how to prepare culture medium, and how to produce eggs or fertilized eggs of marine fish
JP6985712B2 (en) Eel breeding method
Şaşı The length and weigtht relations of some reproduction characteristics of prussian carp, Carassius gibelio (Bloch, 1782) in the south aegean region (Aydın-Turkey)
Siddique et al. Effects of preincubation of eggs and activation medium on the percentage of eyed embryos in ide (Leuciscus idus), an externally fertilizing fish
RU2693896C1 (en) Method of cultivation of strongyle larvae from herd keeping horses for determination of eggs viability at action of critically low temperatures
CN106614123B (en) Method for inducing number-reducing gynogenesis of platichthys stellatus pallas by pressure shock
Whittington Hatching in two monogenean parasites from the common dogfish (Scyliorhinus canicula): the polyopisthocotylean gill parasite, Hexabothrium appendiculatum and the microbothriid skin parasite, Leptocotyle minor
Graybill Data on the development of Heterakis papillosa in the fowl
Main THE LIFE HISTORY AND FOOD RELATIONS OF EPISCHURA LACUSTRIS, FORBES (COPEPODA: CALANOIDA)
Barnes et al. The effect of temperature on the oxygen uptake and rate of development of the egg-masses of two common cirripedes, Balaus balanoides (L.) and Pollicipes polymerus JB Sowerby
García-Flores et al. Embryonic development and fecundity of the pacific pygmy octopus, Paroctopus digueti
Ikeda et al. An effective method to mass culture a lobate ctenophore (Bolinopsis mikado)
Shaharom Fish parasites of Lake Kenyir, Peninsular Malaysia
Rahman et al. Reproductive biology of Sillago aeolus in Okinawa Island, Japan
Corrales et al. Field Collection
de Moura et al. EMBRYONIC DEVELOPMENT AND HACTHING OF Meloidogyne enterolobii (NEMATODA: MELOIDOGYNIDEAE)
Wallis et al. Ontogeny of thermoregulation in Macropus parma (Marsupialia, Macropodidae)
RU2712892C1 (en) Method of in-vitro egg collection from trichuris (= trichocephalus) ovis, which causes trichuriasis of domestic and wild ruminant