RU2690502C1 - Способ оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек с пубертатной гиперандрогенией - Google Patents
Способ оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек с пубертатной гиперандрогенией Download PDFInfo
- Publication number
- RU2690502C1 RU2690502C1 RU2018105820A RU2018105820A RU2690502C1 RU 2690502 C1 RU2690502 C1 RU 2690502C1 RU 2018105820 A RU2018105820 A RU 2018105820A RU 2018105820 A RU2018105820 A RU 2018105820A RU 2690502 C1 RU2690502 C1 RU 2690502C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- follistatin
- ovarian dysfunction
- amh
- severity
- hyperandrogenism
- Prior art date
Links
- 208000015124 ovarian disease Diseases 0.000 title claims abstract description 27
- 201000004535 ovarian dysfunction Diseases 0.000 title claims abstract description 27
- 231100000543 ovarian dysfunction Toxicity 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 201000010066 hyperandrogenism Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 208000019255 Menstrual disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 102100030173 Muellerian-inhibiting factor Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108010005853 Anti-Mullerian Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000000868 anti-mullerian hormone Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000002294 pubertal effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 238000009534 blood test Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 20
- 201000010065 polycystic ovary syndrome Diseases 0.000 description 18
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 14
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 13
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 7
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 7
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 4
- 230000009247 menarche Effects 0.000 description 4
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 3
- 206010020112 Hirsutism Diseases 0.000 description 3
- 206010039792 Seborrhoea Diseases 0.000 description 3
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 3
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 206010027339 Menstruation irregular Diseases 0.000 description 2
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 2
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 2
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 description 2
- 229960005471 androstenedione Drugs 0.000 description 2
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 2
- CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone sulfate Chemical compound C1[C@@H](OS(O)(=O)=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 2
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100026818 Inhibin beta E chain Human genes 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 102000001307 androgen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 description 1
- 201000002996 androgenic alopecia Diseases 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000001733 follicular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000037312 oily skin Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 230000000624 ovulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009933 reproductive health Effects 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 description 1
- 208000008742 seborrheic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 230000010009 steroidogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно гинекологии и эндокринологии, и может быть использовано для определения тяжести овариальной дисфункции у девочек-подростков, страдающих нарушениями менструального цикла. Для этого у девочек с пубертатной гиперандрогенией при нарушениях менструального цикла на 4-5 день цикла в сыворотке крови проводят определение АМГ и фоллистатина, при этом при повышении уровня АМГ до 10 нг/мл и фоллистатина до 1000 пг/мл диагностируют овариальную дисфункцию легкой степени, при повышении уровня АМГ более 10 нг/мл и фоллистатина более 1000 пг/мл диагностируют овариальную дисфункцию тяжелой степени. Способ позволяет с высокой точностью определить ту или иную форму овариальной дисфункции с целью прогноза и оптимизации подходов к лечению для каждой пациентки. 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно гинекологии, эндокринологии и найдет широкое применение для оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек-подростков с синдромом гиперандрогении.
Гиперандрогения - патологический процесс, ассоциированный с избыточными эффектами андрогенов в женском организме. Причиной гиперандрогении могут быть совершенно разные по патогенезу состояния, вероятным следствием которых, является патология функции воспроизводства в различные возрастные периоды жизни женщины. Клиническими признаками гиперандрогении является группа симптомов, таких как гирсутизм, акне, жирная себорея и андрогенная алопеция, развивающихся под генерализованным или локальным воздействием избытка андрогенов на волосяные луковицы, сальные железы и другие компоненты кожи и может существовать как проявление системного заболевания, протекающего с избыточной продукцией андрогенов, так и самостоятельно в результате повышенной чувствительности рецепторов андрогенов или измененного метаболизма стероидных гормонов (Schaefer I., Rustenbach S., Zimmer L. et al. 2008).
Проблема гиперандрогении касается не только женщин репродуктивного возраста, но и девочек-подростков. Пубертат относят критическому периоду в развитии женского организма, так как на его фоне генетические и средовые факторы способствуют манифестации различных нейроэндокринных синдромов. При этом возможен вариант существования как серьезных нарушений менструального цикла и репродуктивных проблем, так и полное их отсутствие при сходных клинико-биохимических проявлениях синдрома гиперандрогении (Чагай Н.Б., Фадеев В.В., 2009). В условиях синдрома гиперандрогении особый интерес вызывает изучение факторов, которые влияют на фолликулогенез, так как высокие уровни андрогенов подавляют созревание фолликулов на разной стадии и приводят к формированию типичных увеличенных яичников с множеством мелких фолликулов. Кроме того при сходных клинико-биохимических вариантах гиперандрогении необходимо выявить критерии и оценить степень тяжести развития овариальной дисфункции.
Метод диагностики степени тяжести овариальной дисфункции на основании только клинической симптоматики весьма неспецифичен, поскольку нарушения менструального цикла могут встречаться в пубертатном периоде достаточно часто и носить при этом функциональный транзиторный характер, будучи обусловлены несовершенством и незрелостью репродуктивной системы. Подобные нарушения в этом возрасте могут зависеть от длительности становления менархе, эмоционального состояния подростка, степени выраженности умственных и физических нагрузок, воздействия различных негативных факторов внутренней и внешней среды, для которых организм девочки - подростка в данный возрастной период наиболее уязвим.
Также весьма неспецифичен способ оценки овариальной дисфункции у подростков на основании У3-эхографии, так как множественные кисты в яичниках считаются нормальным, физиологическим явлением в пубертате, они регрессируют параллельно с развитием овуляторной функции (Богданова Е.С., Карева М.А., 2010). Кроме того, увеличение объема яичников встречается в норме у 25% здоровых женщин. Хотя для повышения точности эхографической диагностики СПКЯ выделяют количественные показатели -ЯМИ (в норме 3,5), повышение которого имеет важное значение для уточнения диагноза СПКЯ, однако у подавляющего большинства больных -91%, выявляется уменьшение переднезаднего размера матки при одновременном увеличении размеров и объема яичников -98%. (Парамонова О.В., 2012).
Известен также способ, выбранный в качестве прототипа (Чайка В.К., Матыцина Л.А., Иотенко Б.А., Способ диагностики синдрома поликистозных яичников у девочек-подростков, 1999), предусматривающий определение уровня гормонов в крови у девочек со времени начала менархе, оценку численного значения степени гирсутизма и яичниково-маточного индекса, после чего рассчитывают степень тяжести СПКЯ по формуле:
y=0,02012p1+040292Iп(t)+0,07243р-1,12114п(tm)-0,04008b+0,07146gir+0,07565ями+3,74045, где у - степень тяжести заболевания; p1 - уровень пролактина, определяемый в крови иммунофлюоресцентным методом, нг/л; р - уровень прогестерона в сыворотке крови, нмоль/л; t - уровень тестостерона в сыворотке крови, нмоль/л; b - уровень тестостерон-эстрадиол (связывающего глобулина), нмоль/л; gir - степень гирсутизма; ями - яичниково-маточный индекс; tm - толщина матки, мм; при этом, если значение у 0,5, считают девочку здоровой; 0,5<у<1,0 - относят к группе риска по развитию СПКЯ; 1,0<у<2,0 - диагностируют легкую степень течения СПКЯ; 2,0<у<3,0 - средняя степень течения СПКЯ; у>3,0 - тяжелое течение СПКЯ.
Недостатками данного способа являются:
- его трудоемкость,
- арифметическая сложность для поликлинического врача,
- не учитывается высокая вариабельность значений пролактина и прогестерона в зависимости от фазы менструального цикла,
- не оправдана привязка к гирсутному числу, так как тяжесть андрогензависимой дермопатии не коррелирует с выраженностью овариальной дисфункции, а определяется активностью соответствующего рецепторного аппарата. Данные недостатки способа-прототипа снижают его точность и достоверность.
Задача изобретения: разработка доступного, точного, достоверного способа оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек-подростков с гиперандрогенией.
Поставленная задача достигается тем, что у девочек-подростков с клинической гиперандрогенией при нарушениях менструального цикла на 4-5 день цикла в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа проводят определение уровня антимюллерова гормона (АМГ) и фоллистатина, при повышении уровня АМГ до 10 нг /мл и фоллистатина до 1000 пг/мл диагностируют овариальную дисфункцию легкой степени, при повышении уровня АМГ более 10 нг/мл и фоллистатина более 1000 пг/мл диагностируют овариальную дисфункцию тяжелой степени.
Технический результат от использования метода: четкие критерии диагностики степени тяжести заболевания, повышение точности, расширение возрастного диапазона обследуемых пациентов, что позволит своевременно провести дифференцированные лечебные мероприятия, что в дальнейшем будет способствовать сохранению репродуктивного здоровья будущих женщин.
Сложность и многофакторность патогенеза гиперандрогении связаны с тем, что функция яичников, надпочечников, гипоталамуса и гипофиза тесно переплетены друг с другом, и порой представляется весьма затруднительным выделить какое-либо одно ведущее патогенетическое звено в формировании нарушений менструального цикла (Шилин Д.Е., 2004).
Данные многочисленных исследований свидетельствуют о тесной патогенетической связи между повышением уровня АМГ и синдромом поликистозных яичников у женщин вследствие нарушения стероидогенеза в яичниках (Александрова Н.В., 2007). В литературе ведется дискуссия о верхнем пределе значений АМГ в качестве диагностического и прогностического маркера СПКЯ у женщин. Называются значения (с различной степенью специфичностью и достоверности) - от 3,15 ng/ml до 8,4 ng/ml (Budi W., Mai-darti M., 2014). Была доказана прогностическая значимость АМГ в подростковом возрасте со значением cut-off 3,15 нг/мл для СПКЯ, диагностированном в возрасте 26 лет у когорты женщин (Shahrzad Zadehmodarres М., Zahra Heidar М., 2015). Исследование АМГ при различных вариантах течения СПКЯ выявило, что самые высокие уровни АМГ были обнаружены в случаях, когда присутствовали наиболее выраженные его формы, охватывающие все три основных диагностических критерия синдрома (Homburg R., Ray А., 2007).
Также одним из факторов, влияющих на фолликулогенез, является фоллистатин - гликозилированный полипептид, выделенный в фолликулярной жидкости, который опосредует большинство своих эффектов через нейтрализацию стимулирующего действия белка активина на фолликулостимулирующий гормон (La Marca G., Stabile, А., 2006). Есть основания предполагать, что именно генетически детерминированные изменения секреции фоллистатина играют ключевую роль в нарушении фолликулогенеза при синдроме гиперандрогении (Дедов И.И., 2007). Кроме того, по данным Urbanek et al., изучившего 37 кандидатных генов СПКЯ, полиморфизм гена фоллистатина показал наиболее сильную связь с гормональными и метаболическими проявлениями этого заболевания (Urbanek М., Legro R.,1999). Накоплено много данных, свидетельствующих о важном клинико-диагностическом значении АМГ и фоллистатина у женщин с СПКЯ (Ramaswamy S., Subbian М., 2010). Проведенное нами, комплексное изучение маркеров фолликулогенеза у девочек с синдромом гиперандрогении в зависимости от степени выраженности овариальной дисфункции показало необходимость выделения группы риска по формированию синдрома поликистозных яичников и разработки дифференцированных подходов к лечению.
Подробное описание способа и примеры его конкретного выполнения.
У пациенток 15-17 лет, с нарушениями менструального цикла, с признаками клинической гиперандрогении определяют исходный уровень АМГ и фоллистатина в сыворотке крови на 4-5 день менструального цикла.
Уровень АМГ в сыворотке крови пациентов определяют методом имму-ноферментного анализа с помощью набора DSL-10-14400 ACTIVE® Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian Hormone (MIS/АМН) Enzyme-Linked Immunosorbent (ELISA (США). Стандартные растворы, растворы конъюгатов, промывочный буфер готовят согласно инструкции к набору. Все реагенты и образцы перед началом анализа должны быть выдержаны при комнатной температуре (~25о С) и тщательно перемешаны перед использованием осторожным переворачиванием. Вносят по 20 мкл стандартов, контролей и образцов в соответствующие лунки планшета. Добавляют по 100 мкл раствора рабочего буфера АМН GEN II в каждую ячейку, используя полуавтоматический диспенсер. Затем инкубируют в течение 1 часа при ~25°С на орбитальном шейкере при 600-800 об/мин. Используя автоматическую вошер, промывают 5 раз промывочным буфером и высушивают планшет, перевернув его на фильтрованную бумагу. Далее добавляют по 100 мкл раствора биотинового коньюгата в каждую ячейку, по окончании инкубации 5 раз промывают планшет, как описано выше. Затем добавляют 100 мкл раствора стрептавидин-ферментного конъюгата в каждую лунку. Вновь по окончании инкубации проводят пятикратную промывку планшета и высушивают его, перевернув на фильтрованную бумагу. Добавляют 100 мкл хромо-генного раствора ТМБ в каждую лунку, используя полуавтоматический диспенсер. Добавляют 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку, также используя полуавтоматический диспенсер. Измеряют оптическую плотность ячеек при 450 нм измерение оптической плотности микропланшета должно быть выполнено в течение 30 минут после добавления стоп-реагента раствора. Выражают уровень АМГ в сыворотке крови пациента в нг/л.
Уровень фоллистатина в сыворотке крови пациентов определяют методом иммуноферментного анализа с помощью набора R&D Systems (USA).
Определение фоллистатина основано на технологии двухстадийного «сэндвич-анализа», когда реакция протекает в лунках с предварительно нанесенными в них моноклональными антителами к определяемому анализу. На первой стадии в лунку вносятся стандартные исследуемые образцы проб, которые специфически реагируют с нанесенными в лунку антителами и определяемое вещество из этих образцов связывается с соответствующими антителами и остается в лунке. На втором этапе после предварительной промывки и удаления всех несвязавшихся веществ в лунку вносится специфический конъюгат моноклональных антител, меченных ферментом пероксидазой хрена. Конъюгат количественно связывается с соответствующим аналитом, который перешел из исследуемой пробы на поверхность лунки, а фермент, который присутствовал в его составе затем вступает в цветную реакцию с субстратом тетраметиленбензидином и, таким образом, позволяет количественно измерить уровень фоллистатина в соответствии с величиной оптической плотности в каждой лунке. Аналитическая чувствительность метода составляла 29 пг/мл. О высокой воспроизводимости методов свидетельствовали следующие коэффициенты вариации внутри серии и между сериями соотвественно, - 2,7% и 16,3%.
На основании определения фоллистатина и АМГ предложена классификация тяжести течения овариальной дисфункции:
- нерегулярный м/цикл + синдром ГА + повышение АМГ не более 10 нг/мл и фоллистатина не более 1000 пг/мл - овариальная дисфункция легкой степени;
- нерегулярный м/цикл + синдром ГА + повышение АМГ более 10 нг/мл и фоллистатина более 1000 пг/мл - овариальная дисфункция тяжелой степени.
Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими конкретными примерами.
Пример 1.
Пациентка С-ова, 17 лет, страдает, угревой сыпью, ростом волос в атипичных местах. Менструальный цикл с 12 лет, регулярно, через 24-26 дней. Об-но: гирсутное число - 12 баллов.
УЗИ органов малого таза: объем правого яичника-8,7 см3; объем левого яичника 7,1 см3, в проекции обоих яичников единичные незрелые фолликулов до 5-7 мм в диаметре.
Результаты исследования: 17-ОН - 0,9 нг/мл; ДГЭА - 12,9 нг/мл; ДГЭА-С - 3,7 мкг/мл; тестостерон - 4,1 нмоль/л; тестостерон свободный - 3,9 пг/мл, АМГ - 4,1 нг/мл; фоллистатин - 300 пг/мл.
Нормальный уровень фоллистатина и АМГ свидетельствовал об отсутствии овариальной дисфункции.
Пример 3.
Пациентка Н-ко, 16 лет, страдает нерегулярным менструальным циклом, ростом волос в атипичных местах. Менструальный цикл с 14 лет, с задержками до 2-3-х месяцев с периода менархе. У матери был установлен диагноз-синдром поликистозных яичников.
Результаты исследования: 17-ОН - 0,8 нг/мл; ДГЭА-10,2 нг/мл; ДГЭА-С-4,1 мкг/мл; тестостерон - 4,8 нмоль/л; тестостерон свободный- 5,3 пг/мл, андростендион - 7,1 нг/мл, АМГ - 9,2 нг/мл; фоллистатин - 900 пг/мл.
УЗИ органов малого таза: объем правого яичника- 11,2 см3; объем левого яичника 10,8 см, в проекции обоих яичников множество незрелых фолликулов до 4-5 мм в диаметре.
Повышение АМГ 9,2 нг /мл и фоллистатина 900 пг/мл свидетельствовал о легкой степени овариальной дисфункции, в сочетании увеличение объема яичников и наличием множества фолликулов в структуре обоих яичников.
Пример 4.
Пациентка К-ова, 17 лет, страдает нерегулярным менструальным циклом с менархе, по типу олиго и аменореи, жалобами на угревую сыпь в области лица и спины, жирность кожи и волос. Менструальный цикл с 14 лет, кровотечения чередуются с задержками менструаций до 4-6 месяцев.
УЗИ органов малого таза: объем правого яичника- 14,9 см; объем левого яичника 15,2 см3, в проекции обоих яичников увеличение числа и объема фолликулов до 8-9 мм в диаметре.
Результаты исследования: 17-ОН - 2,1 нг/мл; ДГЭА - 9,3 нг/мл; ДГЭА-С - 3,9 мкг/мл; тестостерон - 5,4 нмоль/л; тестостерон свободный - 5,8 пг/мл, андростендион - 8,9 нг/мл, АМГ - 13,2 нг/мл; фоллистатин - 1400 пг/мл.
Повышение АМГ 13,2 нг/мл и фоллистатина 1400 пг/мл свидетельствовал о тяжелой степени овариальной дисфункции.
По заявляемому способу обследовано 125 пациенток в возрасте от 15 до 17 лет с нарушениями менструального цикла и различными клиническими проявлениями синдрома гиперандрогении. Медиана АМГ составила 5,9 (4,90; 8,10), медиана фоллистатина 725,0, (193,5; 1457,7).
- регулярный м/цикл + синдром ГА + норма АМГ и фоллистатина, нормальная УЗ структура яичников у 19 человек (31,4%);
- регулярный м/цикл + синдром ГА + повышение АМГ более 5 нг /мл и фоллистатина более 600 пг/мл, нормальная УЗ структура яичников у 28 человек (45,9%);
- нерегулярный м/цикл + синдром ГА + повышение АМГ не более 10 нг/мл и фоллистатина не более 1000 пг/мл, при УЗИ: увеличение объема яичников количества фолликулов >10 у 21 человека (32,8%);
- нерегулярный м/цикл + синдром ГА + повышение АМГ более 10 нг/мл и фоллистатина более 1000 пг/мл, при УЗИ увеличение объема яичников, количества и диаметра фолликулов у 30 человек (46,8%).
Таким образом, определение показателей АМГ и фоллистатина у девочек-подростков с нарушениями менструального цикла является информативным и объективным критерием для оценки степени тяжести и выявления сублинической формы овариальной дисфункции с целью выделения групп риска по СПКЯ среди пациенток. Точность заявляемого способа достигает 80,6%.
Исходя из вышеизложенного, заявляемый способ оценки тяжести овариальной дисфункции у девочек-подростков имеет следующие преимущества:
1. Способ позволяет осуществить оценку степени тяжести овариальной дисфункции с целью выделения групп риска по формированию СПКЯ и оптимизации подходов к лечению.
2. Данный способ объективен, точен, не зависит от вариабельности значений в зависимости от эмоционального состояния, не связан с клиническими проявлениями гиперандрогении, такими как гирсутное число и степень дермопатии, не имеет противопоказаний и позволяет достоверно оценить наличие и степень тяжести овариальной дисфункции у девочек-подростков.
3. Предлагаемый способ прост и удобен в исполнении и найдет широкое применение в гинекологической и эндокринологической практике.
Claims (1)
- Способ оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек с пубертатной гиперандрогенией путем исследования крови, отличающийся тем, что при нарушениях менструального цикла на 4-5 день цикла в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа проводят определение уровня антимюллерова гормона (АМГ) и фоллистатина, при повышении уровня АМГ до 10 нг/мл и фоллистатина до 1000 пг/мл диагностируют овариальную дисфункцию легкой степени, при повышении уровня АМГ более 10 нг/мл и фоллистатина более 1000 пг/мл диагностируют овариальную дисфункцию тяжелой степени.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018105820A RU2690502C1 (ru) | 2018-02-15 | 2018-02-15 | Способ оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек с пубертатной гиперандрогенией |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018105820A RU2690502C1 (ru) | 2018-02-15 | 2018-02-15 | Способ оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек с пубертатной гиперандрогенией |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2690502C1 true RU2690502C1 (ru) | 2019-06-04 |
Family
ID=67037767
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018105820A RU2690502C1 (ru) | 2018-02-15 | 2018-02-15 | Способ оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек с пубертатной гиперандрогенией |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2690502C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112908475A (zh) * | 2021-04-22 | 2021-06-04 | 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） | 用于评估受试者卵巢储备功能的系统 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2535096C1 (ru) * | 2013-08-22 | 2014-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики нарушений менструальной функции на фоне синдрома поликистозных яичников у девочек-подростков |
| RU2625723C1 (ru) * | 2016-08-08 | 2017-07-18 | Общество с ограниченной ответственностью "ЦЕНТР РЕПРОДУКЦИИ ЧЕЛОВЕКА И ЭКО" | Способ доклинической диагностики преждевременного истощения яичников у женщин репродуктивного возраста |
-
2018
- 2018-02-15 RU RU2018105820A patent/RU2690502C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2535096C1 (ru) * | 2013-08-22 | 2014-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики нарушений менструальной функции на фоне синдрома поликистозных яичников у девочек-подростков |
| RU2625723C1 (ru) * | 2016-08-08 | 2017-07-18 | Общество с ограниченной ответственностью "ЦЕНТР РЕПРОДУКЦИИ ЧЕЛОВЕКА И ЭКО" | Способ доклинической диагностики преждевременного истощения яичников у женщин репродуктивного возраста |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BUDI WIWEKO, MILA MAIDARTI et al. Anti-mullerian hormone as a diagnostic and prognostic tool for PCOS patients, J Assist Reprod Genet, 2014 Oct, 31(10), pp.1311-1316. RAMASWAMY S., SUBBIAN M. et al. Follistatin concentrations in women from Kerala with polycystic ovary syndrome, Iranian Journal of Reproductive Medicine, 2010, Vol. 8, N3, pp.131-134. * |
| МОСКОВКИНА А.В., ПУЗИКОВА О.З., ЛИНДЕ В.А. Фоллистатин как маркер формирующегося СПКЯ у девочек с пубертатной гиперандрогенией, Фундаментальные исследования, N7, 2014, с.315-319. БОГДАНОВА П.С., КАРЕВА М.А., ЯРОВАЯ И.С., ЗЛОТНИКОВА О.А., ИЛЬИН А.В., ДЕДОВ И.И. Антимюллеров гормон (АМГ) у девочек-подростков с гиперандрогенией. Проблемы эндокринологии, N1, 2012, с.9-16. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112908475A (zh) * | 2021-04-22 | 2021-06-04 | 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） | 用于评估受试者卵巢储备功能的系统 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kar | Role of biomarkers in early detection of preeclampsia | |
| Kumar et al. | Development of a second generation anti-Müllerian hormone (AMH) ELISA | |
| Anastasi et al. | Ovarian tumor marker HE4 is differently expressed during the phases of the menstrual cycle in healthy young women | |
| Zhang et al. | A classification of Hashimoto's thyroiditis based on immunohistochemistry for IgG4 and IgG | |
| US20110171750A1 (en) | marker for graft failure and mortality | |
| Balasch et al. | Inhibin, follicle-stimulating hormone, and age as predictors of ovarian response in in vitro fertilization cycles stimulated with gonadotropin-releasing hormone agonist-gonadotropin treatment | |
| Wynn et al. | A comparison of progesterone assays for determination of peripheral pregnane concentrations in the late pregnant mare | |
| Dimopoulou et al. | The low-dose corticotropin stimulation test in acute traumatic and non-traumatic brain injury: incidence of hypo-responsiveness and relationship to outcome | |
| RU2535096C1 (ru) | Способ диагностики нарушений менструальной функции на фоне синдрома поликистозных яичников у девочек-подростков | |
| Wen et al. | Can inhibin B reflect ovarian reserve of healthy reproductive age women effectively? | |
| Voss | Saliva as a fluid for measurement of estriol levels | |
| Ali et al. | A copeptin as a predictor marker for insulin resistance among women with polycystic ovary syndrome | |
| Srinivasan et al. | Laboratory investigations for diagnosis of autoimmune and inflammatory periocular disease: part I | |
| RU2690502C1 (ru) | Способ оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек с пубертатной гиперандрогенией | |
| Elbaradie et al. | Serum macrophage migration inhibition factor for diagnosing endometriosis and its severity: case-control study | |
| US8846324B2 (en) | In vitro method for diagnosing or predicting hypertension and/or early-stage cardiovascular end-organ damage by determining the concentration of soluble prorenin receptor | |
| Zarei et al. | Kisspeptin levels in relation to sex hormone profile among PCOS patients | |
| Sluss et al. | Mass spectrometric and physiological validation of a sensitive, automated, direct immunoassay for serum estradiol using the Architect® | |
| Jahromi et al. | Associations of insulin resistance, sex hormone-binding globulin, triglyceride, and hormonal profiles in polycystic ovary syndrome: A cross-sectional study | |
| EP0866969B1 (en) | Method of cancer detection | |
| Abdelkareem et al. | Kisspeptin and kisspeptin receptor immunoreactivity in euploid and aneuploid choriodecidual tissues of recurrent pregnancy losses | |
| US20070190580A1 (en) | Immunoassay of Fragments of Insulin-Like Growth Factor Binding Proteins | |
| Rashad et al. | Anti-Müllerian hormone: predictor of premature ovarian insufficiency in Egyptian women with autoimmune thyroiditis | |
| WO2009100327A2 (en) | Methods of diagnosing chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome | |
| Eroglu et al. | Serum and placental periostin levels in women with early pregnancy loss |