RU2689359C1 - Method for determining the bactericidal properties of materials - Google Patents
Method for determining the bactericidal properties of materials Download PDFInfo
- Publication number
- RU2689359C1 RU2689359C1 RU2018113382A RU2018113382A RU2689359C1 RU 2689359 C1 RU2689359 C1 RU 2689359C1 RU 2018113382 A RU2018113382 A RU 2018113382A RU 2018113382 A RU2018113382 A RU 2018113382A RU 2689359 C1 RU2689359 C1 RU 2689359C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- test
- materials
- iod
- samples
- incubation
- Prior art date
Links
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 83
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 36
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 20
- 241000186610 Lactobacillus sp. Species 0.000 claims abstract description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 5
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 abstract 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 11
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 6
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 6
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 5
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 5
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 5
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 5
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 5
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 5
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- KSMVZQYAVGTKIV-UHFFFAOYSA-N decanal Chemical compound CCCCCCCCCC=O KSMVZQYAVGTKIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 4
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 4
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 2
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 101001065501 Escherichia phage MS2 Lysis protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 description 1
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 description 1
- 241001468191 Lactobacillus kefiri Species 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000493790 Photobacterium leiognathi Species 0.000 description 1
- 238000001919 Rayleigh scattering spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 238000011138 biotechnological process Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 229920000554 ionomer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биоизмерительных технологий, а именно к способам оценки с помощью тестовых микроорганизмов бактерицидных свойств различных материалов.The invention relates to the field of bio-measuring technologies, and in particular to methods of evaluation of bactericidal properties of various materials using test microorganisms.
Известен «Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам» (патент RU №2505813, МПК G01N 33/48, дата приоритета 06.11.2012, опубликовано 27.01.2014), в котором антимикробную активность тестируемых веществ по отношению к тому или иному биоматериалу предлагается определять, исходя из количества колоний микроорганизмов, исходно содержащихся в означенном биоматериале и выросших на плотной накопительной питательной среде в присутствии тестируемого препарата, а также времени проявления видимого роста этих колоний. Недостатками этого способа являются его длительность (до 3-х суток), большая трудоемкость, большая материалоемкость по компонентам питательных сред, а также то, что антимикробная активность тестируемых веществ определяется визуально, а следовательно, достаточно субъективно.Known "Method for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial substances" (RU patent No. 2505813, IPC G01N 33/48, priority date 06.11.2012, published 01/27/2014), in which the antimicrobial activity of the tested substances in relation to a particular biomaterial is proposed to determine based on the number of colonies of microorganisms, initially contained in the said biomaterial and grown on a dense accumulative nutrient medium in the presence of the test preparation, as well as the time of appearance of the visible growth of these colonies. The disadvantages of this method are its duration (up to 3 days), large labor intensity, high materials consumption for nutrient media components, and also the fact that the antimicrobial activity of the tested substances is determined visually, and therefore, quite subjective.
Известен «Способ оценки эффективности антимикробного воздействия антисептиков на бактерии, существующие в форме биопленки» (патент RU №2603100, МПК C12Q, дата приоритета 29.10.2015, опубликовано 20.11.2016), в котором эффективность действия антисептиков на бактерии, выделенные из клинического материала пациента и существующие в жидкой питательной среде (ЖПС) в форме биопленки, предлагается определять как отношение рабочей концентрации антисептика к его минимальной подавляющей концентрации. При этом регистрацию эффективности действия той или иной концентрации тестируемого антисептика на биопленку предлагается проводить с помощью фотометра - по изменению цвета и помутнению ЖПС с тестовыми микроорганизмами, инкубируемой при заданной температуре в течение заданного времени (от 5-и суток и более) в присутствии тестируемого антисептика, взятого в упомянутой концентрации. Основными недостатками этого способа, как и в предыдущих случаях, являются его большая длительность и трудоемкость, а также невысокая объективность, поскольку рассматриваемый способ позволяет оценивать влияние тестируемых веществ лишь на скорость роста тестовых микроорганизмов, но не на интенсивность их метаболизма.The “Method for evaluating the effectiveness of antimicrobial effects of antiseptics on bacteria existing in the form of a biofilm” (RU patent No. 2603100, IPC C12Q, priority date 10.29.2015, published on 11/20/2016) is known, in which the effectiveness of the action of antiseptics on bacteria isolated from the patient’s clinical material and existing in a liquid nutrient medium (RPS) in the form of a biofilm, it is proposed to determine how the ratio of the working concentration of an antiseptic to its minimum inhibitory concentration. At the same time, it is proposed to record the effectiveness of a given concentration of a test antiseptic on a biofilm using a photometer — for discoloration and clouding of RIP with test microorganisms, incubated at a given temperature for a specified time (from 5 days or more) in the presence of the test antiseptic taken in the said concentration. The main disadvantages of this method, as in the previous cases, are its long duration and laboriousness, as well as low objectivity, because this method allows to evaluate the effect of test substances only on the growth rate of test microorganisms, but not on the intensity of their metabolism.
Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является «Способ определения бактерицидных свойств сыворотки крови» (патент RU №2489489, МПК C12Q 1/18, дата приоритета 26.12.2011, опубликовано 10.08.2013), в котором бактерицидные свойства проб сыворотки крови определяют по уменьшению интенсивности люминесценции инкубируемого в LB-бульоне в присутствии тестируемых проб тестового трансгенного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-10548, эффективно экспрессирующего luxAB-гены грамотрицательного морского микроорганизма Photobacterium leiognathi (в результате чего синтезируется фермент люцифераза, обеспечивающий активное свечение, интенсивность которого зависит от общего количества жизнеспособных тестовых микроорганизмов и активности их метаболизма). При этом анализ осуществляют следующим образом:Closest to the proposed technical solution is the "Method for determining the bactericidal properties of serum" (RU patent No. 2489489, IPC C12Q 1/18, priority date 12/26/2011, published on 10.08.2013), in which the bactericidal properties of serum samples are determined by reducing the intensity luminescence incubated in LB-broth in the presence of test samples of the test transgenic Bacillus subtilis strain VKPM B-10548, effectively expressing the luxAB genes of the gram-negative marine microorganism Photobacterium leiognathi (as a result of which erment luciferase providing active illumination, the intensity of which depends on the total number of viable test microorganisms and their metabolic activity). When this analysis is as follows:
на первом (подготовительном) этапе выращивают штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-10548 на LB-агаре в присутствии канамицина в конечной концентрации 40 мкг/мл (что позволяет исключить рост не люминесцирующих штаммов) при 37°C в течение 24 часов. Полученную биомассу смывают стерильным LB-бульоном, после чего полученную суспензию стандартизуют до оптической плотности 1,2 отн. ед. при 540 нм (измеряемой в кюветах с длиной оптического пути 1 см);At the first (preparatory) stage, the Bacillus subtilis VKPM B-10548 strain is grown on LB agar in the presence of kanamycin at a final concentration of 40 μg / ml (which allows to exclude the growth of non-luminescent strains) at 37 ° C for 24 hours. The resulting biomass is washed off with sterile LB-broth, after which the resulting suspension is standardized to an optical density of 1.2 rel. units at 540 nm (measured in cuvettes with an optical path length of 1 cm);
на втором (основном) этапе смешивают суспензию бактериальных клеток и исследуемого образца сыворотки крови в соотношении 1:1 и инкубируют полученную смесь при 37°C в течение 30 минут. При этом до и после инкубации из тестовой смеси производят отбор аликвот по 250 мкл в кюветы для биолюминометра. И дополнительно вносят в них по 2 мкл деканаля в конечной концентрации 7×10-6 М (окисляемого в присутствии молекулярного кислорода ферментом люциферазой - что и обеспечивает активное свечение тестового штамма).at the second (main) stage, a suspension of bacterial cells and a test serum sample in a 1: 1 ratio are mixed and the mixture is incubated at 37 ° C for 30 minutes. At the same time, before and after incubation, 250 μl aliquots are taken from the test mixture into the cuvettes for the bioluminometer. And additionally add 2 µl of decanal in them at a final concentration of 7 × 10 -6 M (oxidized in the presence of molecular oxygen by the enzyme luciferase - which ensures the active luminescence of the test strain).
На завершающем этапе осуществляют регистрацию уровня свечения в пробах в видимой сине-зеленой области спектра (420-600 им). При этом в качестве измерительного прибора могут использоваться биохемилюминометр «Биоток-10М», а также прочие отечественные и зарубежные люминометры, работающие в обозначенной области спектра и обеспечивающие соответствующую чувствительность измерений.At the final stage, the emission level is measured in samples in the visible blue-green region of the spectrum (420–600). At the same time, the biochemiluminometer “Biotok-10M” can be used as a measuring instrument, as well as other domestic and foreign luminometers operating in the designated spectral region and providing appropriate measurement sensitivity.
К основным недостаткам данного технического решения можно отнести:The main disadvantages of this technical solution include:
- узкую область применения (анализ бактерицидных свойств только лишь сыворотки крови человека и животных);- narrow field of application (analysis of bactericidal properties of only human and animal serum);
- необходимость использования специально выведенного, трансгенного, узкоспециализированного штамма тестовых микроорганизмов - что дополнительно ограничивает область применения данного технического решения, поскольку для тестирования про- и антибиотических свойств разных химических и физических факторов могут требоваться разные тестовые организмы (либо лучше даже совокупность из нескольких разных видов и штаммов тестовых организмов);- the need to use a specially bred, transgenic, highly specialized strain of test microorganisms - which further limits the scope of this technical solution, since different testing organisms may be required for testing the pro and antibiotic properties of different chemical and physical factors (or even a combination of several different types and strains of test organisms);
- кроме того, штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-10548, применяемый при реализации данного технического решения, не является широко доступным, и потому достаточно трудно сначала получить данный штамм, а затем длительное время поддерживать его чистоту, жизнеспособность и специфические свойства (выражающиеся, в частности, в активном синтезе фермента люциферазы);- in addition, the strain Bacillus subtilis VKPM B-10548, used in the implementation of this technical solution, is not widely available, and therefore it is difficult to first obtain this strain, and then for a long time to maintain its purity, viability and specific properties (expressed, in particular , in the active synthesis of the enzyme luciferase);
- а также то, что рассматриваемый метод обладает не очень высокой объективностью, поскольку влияние тестируемых объектов (в качестве которых в данном случае выступают образцы сыворотки крови животных и человека) на тестовые организмы определяется всего лишь по одному косвенному параметру (интенсивности хемилюминесценции этих объектов) и с использованием тест-культуры с метаболизмом, не типичным по ряду параметров для большинства живых организмов.- as well as the fact that the method under consideration does not have a very high objectivity, since the effect of test objects (which in this case are serum samples of blood of animals and humans) on test organisms is determined only by one indirect parameter (intensity of chemiluminescence of these objects) and using a test culture with a metabolism that is not typical in a number of parameters for most living organisms.
В связи с неуклонным ростом производства и потребления человеческим обществом различной продукции все более актуальной в настоящее время становится проблема разработки достаточно экспрессных, объективных, простых, дешевых и доступных для широкого использования методов оценки про- и антибиотических свойств различных веществ, материалов, препаратов, пищевой и иной продукции, отходов различных производств и т.п.Due to the steady growth in the production and consumption by human society of various products, the problem of developing fairly rapid, objective, simple, cheap and widely available methods for evaluating the pro- and antibiotic properties of various substances, materials, preparations, food and other products, waste of various industries, etc.
В связи с вышесказанным, целью заявляемого изобретения стало создание способа, позволяющего, по сравнению с прототипом, более широкому кругу пользователей с большей объективностью оценивать бактерицидные свойства существенно более широкого круга тестируемых материалов.In connection with the foregoing, the purpose of the claimed invention was to create a method that allows, in comparison with the prototype, a wider circle of users with greater objectivity to evaluate the bactericidal properties of a significantly wider range of tested materials.
Цель эта достигается за счет того, что в предлагаемом способе (который включает такие операции как: подготовка тестовых образцов, инкубирование этих образцов как в присутствии тестируемых материалов, так и в их отсутствие, сопровождающееся измерением свойств этих образцов в начале и в конце их инкубации, и последующее определение бактерицидных свойств тестируемых материалов на основании упомянутых измерений) тестовые образцы перед началом их инкубирования представляют собой Lactobacillus sp.в количестве от 5×105 до 5×106 жизнеспособных клеток на мл, суспендированную в водном растворе, изначально содержащем 4-10 г/л лактозы, 16-20 г/л белкового гидролизата и 1,8-2,2 г/л NaCl, и имеющем pH 6,6-7,4; инкубирование этих образцов в присутствии тестируемых материалов (в качестве которых могут выступать как отдельные химические вещества или частица, так и их разнообразные смеси) проводят в течение 6-10 часов при температуре, оптимальной для развития штамма Lactobacillus, выбранного в качестве тестового (в диапазоне от 20 до 45°C); свойства образцов определяют путем измерения значений упругого светорассеяния в диапазоне длин волн от 500 до 950 нм (Iod), pH и электропроводности (X); после чего общую степень активирования или ингибирования (+/-) жизнедеятельности тестовых микроорганизмов тестируемыми материалами определяют по формуле:This goal is achieved due to the fact that in the proposed method (which includes such operations as: preparing test samples, incubating these samples both in the presence and absence of test materials, accompanied by measuring the properties of these samples at the beginning and end of their incubation, and the subsequent determination of bactericidal properties of the test materials on the basis of said measurement) test samples before incubating Lactobacillus sp.v represent an amount of 5 × 10 May to 10 June 5 × n viable cells ml, suspended in an aqueous solution initially containing 4-10 g / l of lactose, 16-20 g / L protein hydrolyzate and 1.8-2.2 g / l NaCl, and having pH 6,6-7,4; incubation of these samples in the presence of test materials (which can be either individual chemicals or a particle, or their various mixtures) is carried out for 6-10 hours at a temperature that is optimal for the development of the Lactobacillus strain selected as a test (in the range from 20 to 45 ° C); the properties of the samples are determined by measuring the values of elastic light scattering in the wavelength range from 500 to 950 nm (Iod), pH and electrical conductivity (X); after which the total degree of activation or inhibition (+/-) of the activity of test microorganisms by the tested materials is determined by the formula:
εS=(εIod+εX+εpH)/3,ε S = (ε Iod + ε X + ε pH ) / 3,
где εIod, εX и εpH определяют по формулам εY=100×(ΔYt-ΔYc)/ΔYc,where ε Iod , ε X and ε pH is determined by the formulas ε Y = 100 × (ΔYt-ΔYc) / ΔYc,
где ΔY=Ye-Yb - разности значений Iod, X или pH, регистрируемых в начале (Yb) и в конце (Ye) инкубации тестовых образцов в присутствии тестируемых материалов (ΔYt) и в их отсутствие (ΔYc).where ΔY = Ye-Yb is the difference between the values of Iod, X or pH, recorded at the beginning (Yb) and at the end (Ye) of the incubation of test samples in the presence of test materials (ΔYt) and in their absence (ΔYc).
При этом, выбор Lactobacillus в качестве тестовых микроорганизмов связан с тем, что кисломолочные бактерии широко распространены в природе, обладая развитой ферментной системой, активно участвуют в естественном разложении многих природных и антропогенных материалов, легко культивируются и, вследствие всего вышеупомянутого, широко используются в различных методах биотестирования, научных исследованиях, а также биотехнологических процессах.At the same time, the choice of Lactobacillus as a test microorganism is associated with the fact that lactic acid bacteria are widely distributed in nature, possessing a developed enzyme system, are actively involved in the natural decomposition of many natural and anthropogenic materials, are easily cultivated and, due to all the above, are widely used in various methods biotesting, research, and biotechnological processes.
Выбор количества жизнеспособных тестовых микроорганизмов, которое должно присутствовать в тестовых образцах перед началом их инкубации в присутствии и в отсутствие тестируемых материалов (от 5×105 до 5×106 кл/мл), определяется тем, что при меньшем количестве таковых микроорганизмов увеличивается длительность инкубации, необходимая для достижения максимальной чувствительности заявляемого способа анализа; а при большем количестве тестовых микроорганизмов снижается интенсивность их роста и метаболизма, что приводит к уменьшению чувствительности анализа.The choice of the number of viable test microorganisms that must be present in the test samples before they are incubated in the presence and absence of test materials (from 5 × 10 5 to 5 × 10 6 cells / ml) is determined by the fact that with a smaller number of such microorganisms, the duration increases. incubation required to achieve maximum sensitivity of the proposed method of analysis; and with a larger number of test microorganisms, the intensity of their growth and metabolism decreases, which leads to a decrease in the sensitivity of the analysis.
Выбор исходного состава жидкой питательной среды, входящей в состав тестовых образцов (водный раствор с pH 6,6-7,4, содержащий 4-10 г/л лактозы, 16-20 г/л белкового гидролизата и 1,8-2,2 г/л NaCl), связан с необходимостью обеспечения оптимальных условий для развития в этой среде тестовых микроорганизмов - что, как и в предыдущем случае, нужно для увеличения чувствительности и снижения продолжительности анализа.The choice of the initial composition of the liquid nutrient medium, which is part of the test samples (aqueous solution with a pH of 6.6-7.4, containing 4-10 g / l of lactose, 16-20 g / l of protein hydrolyzate and 1.8-2.2 g / l NaCl) is associated with the need to ensure optimal conditions for the development of test microorganisms in this medium - which, as in the previous case, is needed to increase the sensitivity and reduce the duration of the analysis.
Выбор режима инкубирования тестовых образцов (6-10 часов при 20-45°C) связан с тем, что при более длительном инкубировании снижается интенсивность роста и метаболизма тестовых микроорганизмов (что приводит к соответствующему снижению чувствительности анализа); при других температурах инкубирования интенсивность роста и метаболизма тестовых микроорганизмов также снижается (что приводит к уменьшению чувствительности анализа и необходимости увеличения его длительности); а при меньшем времени инкубирования тестовые микроорганизмы не успевают в достаточной степени среагировать на изменения в окружающей их среде, вызванные присутствием там тестируемых материалов (что приводит к снижению как чувствительности, так и объективности анализа).The choice of incubation of test samples (6-10 hours at 20-45 ° C) is due to the fact that with longer incubation, the growth rate and metabolism of test microorganisms decrease (which leads to a corresponding decrease in the sensitivity of the analysis); at other incubation temperatures, the growth rate and metabolism of test microorganisms also decrease (which leads to a decrease in the sensitivity of the analysis and the need to increase its duration); and with less incubation time, the test microorganisms do not have enough time to react to changes in their environment caused by the presence of test materials there (which leads to a decrease in both sensitivity and objectivity of the analysis).
Увеличение (по сравнению с прототипом) объективности и спектра применимости заявляемого способа анализа обеспечивается тем, что в ходе него осуществляется точная, инструментальная, количественная оценка изменения 3-х различных параметров (Iod, pH и X), характеризующих метаболическую активность общепринятых тестовых микроорганизмов (Lactobacillus sp.) вследствие воздействия на них широкого круга тестируемых материалов (которые могут включать в себя как различные отдельные химические вещества и частицы, так и их разнообразные смеси). В то время как в прототипе влияние тестируемых материалов на тестовые микрорганизмы определялось всего лишь по одному параметру тестового образца (а именно, интенсивности его хемилюминесценции), достаточно косвенно характеризующему метаболическую активность тестовых микроорганизмов. Причем данным способом предлагалось оценивать бактерицидные свойства весьма узкого круга тестируемых материалов (а именно, сыворотки крови человека и животных), и к тому же, с помощью трансгенного, узкоспециализированного штамма тестовых микроорганизмов (Bacillus subtilis ВКПМ В-10548) с достаточно нетипичным метаболизмом.The increase (compared to the prototype) of objectivity and applicability of the proposed method of analysis is ensured by the fact that during it an accurate, instrumental, quantitative assessment of changes in 3 different parameters (Iod, pH and X) characterizing the metabolic activity of conventional test microorganisms (Lactobacillus sp.) due to exposure to a wide range of test materials (which can include both various individual chemicals and particles, and their various mixtures). While in the prototype, the effect of the tested materials on the test microorganisms was determined by only one parameter of the test sample (namely, the intensity of its chemiluminescence), rather indirectly characterizing the metabolic activity of test microorganisms. Moreover, this method proposed to evaluate the bactericidal properties of a very narrow range of tested materials (namely, human and animal serum), and also, using a transgenic, highly specialized strain of test microorganisms (Bacillus subtilis VKPM B-10548) with a rather atypical metabolism.
А доступность заявляемого способа анализа более широкому кругу пользователей обеспечивается, во-первых, возможностью применения для регистрации параметров тестовых образцов таких простых в эксплуатации, доступных и дешевых, переносных приборов, как например нефелометр «WGZ-2», иономер «Эксперт-001» и кондуктометр «Эксперт-002». Во-вторых, применением при анализе минимального числа дополнительных реагентов и ручных операций по засеву и оценке роста и метаболической активности тестовых микроорганизмов в присутствии тестируемых материалов (в то время как в прототипе предлагалось использовать такие специфические химические реагенты, как канамицин, деканаль и т.п., а также осуществлять множество дополнительных ручных операций по выращиванию тестовых микроорганизмов на LB-агаре и последующему приготовлению суспензии бактериальных клеток в LB-бульоне). И в-третьих, возможностью применения для анализа таких хорошо доступных и легко культивируемых тестовых микроорганизмов, как Lactobacillus sp.(в то время как в прототипе в качестве тестовых микроорганизмов предлагалось использовать штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-10548, мало доступный и трудно культивируемый в условиях необходимости поддержания требуемой степени чистоты и жизнеспособности данной микробиологической культуры, нужных для осуществления Bacillus subtilis ВКПМ В-10548 таких специфических свойств, как, в частности, активный синтез фермента люциферазы).And the availability of the proposed method of analysis to a wider range of users is ensured, firstly, by the possibility of using such simple to use, affordable and cheap, portable devices, such as a WGZ-2 nephelometer, Expert-001 and conductometer "Expert-002". Secondly, the use of a minimum number of additional reagents and manual operations to sow and assess the growth and metabolic activity of test microorganisms in the presence of the test materials during the analysis (while in the prototype it was proposed to use such specific chemical reagents as kanamycin, decanal, etc. ., as well as to carry out many additional manual operations for growing test microorganisms on LB agar and the subsequent preparation of a suspension of bacterial cells in LB broth). And thirdly, the ability to use for analysis such well-available and easily cultured test microorganisms as Lactobacillus sp. (While in the prototype it was proposed to use the Bacillus subtilis VKPM B-10548 strain as a test microorganism, which is poorly available and difficult to cultivate the need to maintain the required degree of purity and viability of this microbiological culture, necessary for the implementation of Bacillus subtilis VKPM B-10548 such specific properties as, in particular, the active synthesis of the luciferase enzyme).
Реализация предлагаемого способа определения бактерицидных свойств материалов осуществляется следующим образом:The implementation of the proposed method of determining the bactericidal properties of materials as follows:
Этап 1. Готовится питательная среда (ПС), представляющая собой стерильный водный раствор с pH 6,6-7,4, содержащий 4-10 г/л лактозы, 16-20 г/л белкового гидролизата и 1,8-2,2 г/л NaCl. После чего все емкости с ПС хранятся в герметично закрытом виде, в отсутствие света, при 2-4°C.Step 1. Preparing a nutrient medium (PS), which is a sterile aqueous solution with a pH of 6.6-7.4, containing 4-10 g / l of lactose, 16-20 g / l of protein hydrolyzate and 1.8-2.2 g / l NaCl. Then all containers with PS are stored in hermetically sealed form, in the absence of light, at 2-4 ° C.
Этап 2. Отбираются тестируемые материалы (ТМ); после чего доставляются в лабораторию и хранятся там до начала анализа в темном месте, в герметически закрытом виде, при 2-4°C.Stage 2. Selected test materials (TM); after which they are delivered to the laboratory and stored there until the beginning of the analysis in a dark place, in hermetically sealed form, at 2-4 ° C.
Этап 3. Подготавливается исходный тестовый образец (ТО). Для чего в одну большую емкость с ПС стерильно вносится 1-10 об. % закваски, содержащей суспендированные в ПС жизнеспособные клетки Lactobacillus sp. После чего упомянутая емкость герметично закрывается и инкубируется в течение 12 ч при температуре, оптимальной для развития штамма Lactobacillus, выбранного в качестве тестового (из диапазона от 20 до 45°C).Step 3. Prepare the initial test sample (TO). For which, 1-10 vol. Sterile is inserted into one large container with PS. % starter containing PS suspended in viable cells of Lactobacillus sp. After that, the mentioned container is hermetically sealed and incubated for 12 hours at a temperature that is optimal for the development of the Lactobacillus strain chosen as a test (from the range of 20 to 45 ° C).
Затем в упомянутой емкости измеряется интенсивность света, упруго рассеиваемого ТО на длине волны 500-950 нм (Iod). И по предварительно построенному калибровочному графику (представляющему собой зависимость Iod ТО от концентрации содержащихся в нем клеток Lactobacillus sp.) удостоверяется, что полученное значение Iod соответствует концентрации Lactobacillus sp.в ТО от 5×105 до 5×106 клеток на мл (кл/мл).Then, in the aforementioned capacitance, the intensity of the light, elastically dissipated TO at a wavelength of 500-950 nm (Iod) is measured. And according to the previously constructed calibration graph (representing the dependence of Iod MOT on the concentration of Lactobacillus sp. Cells contained in it), it is verified that the obtained Iod value corresponds to the concentration of Lactobacillus sp. in MOT from 5 × 10 5 to 5 × 10 6 cells per ml (cl / ml).
После этого, если измеренная Iod соответствует концентрации Lactobacillus sp. в ТО меньше 5×105 кл/мл; то емкость с ТО инкубируется в тех же условиях, что и ранее в течение еще 6 ч; после чего для нее проводится повторное определение Iod. А если измеренная Iod соответствует концентрации Lactobacillus sp. в ТО больше 5×106 кл/мл; то ТО в той же емкости разбавляется необходимым количеством ПС.After that, if the measured Iod corresponds to the concentration of Lactobacillus sp. in less than 5 × 10 5 cells / ml; the container with TO is incubated under the same conditions as before for another 6 hours; after which Iod is repeated for it. And if the measured Iod corresponds to the concentration of Lactobacillus sp. in more than 5 × 10 6 cells / ml; then THEN in the same container is diluted with the required amount of PS.
Этап 4. Если нас интересует концентрационная зависимость бактерицидного действия тестируемых материалов, либо эти материалы имеют слишком высокую исходную токсичность (так что ожидается, что в неразведенном виде они будут слишком сильно ингибировать развитие тестовых микроорганизмов), то делается необходимое количество разведений исходных материалов. После чего каждый материал или каждое его разведение делится на 3-5 равных частей, каждая из которых помещается в отдельную емкость, куда также добавляется заданное количество ТО, подготовленного на 3-м этапе анализа.Step 4. If we are interested in the concentration dependence of the bactericidal action of the tested materials, or these materials have too high initial toxicity (so it is expected that, undiluted, they will inhibit the development of test microorganisms too much), then the required dilution of the starting materials is done. After that, each material or each dilution is divided into 3-5 equal parts, each of which is placed in a separate container, which also adds a specified amount of TO, prepared at the 3rd stage of analysis.
Этап 5. Все емкости, приготовленные на 4-м этапе анализа, плюс некоторое количество контрольных емкостей, содержащих ТО без добавок тестируемых материалов (а также, в случае необходимости, ТО с заданным количеством вещества или смеси веществ, про- или антимикробная активность которых известны заранее) закрываются, перемешиваются и помещаются в термостат, где инкубируются в течение 6-10 часов при температуре, оптимальной для развития штамма Lactobacillus, выбранного в качестве тестового (из диапазона от 20 до 45°C). При этом непосредственно перед началом и после окончания этой инкубации во всех упомянутых емкостях регистрируются значения таких параметров ТО (изменяющихся вследствие роста и размножения там тестовых микроорганизмов, а также преобразования ими в ходе метаболической активности одних веществ, входящих в состав ТО, в другие) как pH, интенсивность света, упруго рассеиваемого в диапазоне длин волн от 500 до 950 нм (Iod) и электропроводность (X).Stage 5. All containers prepared at the 4th stage of analysis, plus a certain number of control containers containing THAT without additives of the tested materials (and, if necessary, THAT with a specified amount of a substance or mixture of substances whose pro- or antimicrobial activity is known in advance) are closed, mixed and placed in a thermostat, where they are incubated for 6-10 hours at a temperature that is optimal for the development of the Lactobacillus strain chosen as the test (from the range of 20 to 45 ° C). At the same time, immediately before the start and after the end of this incubation, the values of such TO parameters (changing as a result of the growth and reproduction of test microorganisms there, as well as their conversion during the metabolic activity of some substances that make up the TO) into others, are recorded in all the mentioned containers as pH , the intensity of light elastically diffused in the wavelength range from 500 to 950 nm (Iod) and electrical conductivity (X).
Этап 6. После этого общая степень активирования или ингибирования (+/-) жизнедеятельности тестовых микроорганизмов тестируемыми материалами рассчитывается по формуле εS=(εIod+εX+εpH)/3,Step 6. After that, the total degree of activation or inhibition (+/-) of the vital activity of the test microorganisms by the tested materials is calculated by the formula ε S = (ε Iod + ε X + ε pH ) / 3,
где εIod, εX и εpH определяют по формулам εY=100×(ΔYt-ΔYc)/ΔYc,where ε Iod , ε X and ε pH is determined by the formulas ε Y = 100 × (ΔYt-ΔYc) / ΔYc,
где ΔY=Ye-Yb - разности значений Iod, X или pH, регистрируемых в начале (Yb) и в конце (Ye) инкубации ТО в присутствии тестируемых материалов (ΔYt) и в их отсутствие (ΔYc).where ΔY = Ye-Yb is the difference between the values of Iod, X or pH recorded at the beginning (Yb) and at the end (Ye) of the incubation of TO in the presence of test materials (ΔYt) and in their absence (ΔYc).
Упомянутый способ может быть реализован с применением таких основных измерительных приборов, как нефелометр («WGZ-2» или иной, позволяющий с достаточной степенью чувствительности измерять для жидких, водных образцов интенсивность света, упруго рассеиваемого в диапазоне длин волн от 500 до 950 нм), иономер («Эксперт-001» или иной, позволяющий с достаточной степенью чувствительности измерять pH жидких, водных образцов) и кондуктометр («Эксперт-002» или иной, позволяющий с достаточной степенью чувствительности измерять изменение электропроводности жидких, водных образцов).This method can be implemented using such basic measuring devices as a nephelometer (“WGZ-2” or another, which allows measuring, for a sufficient degree of sensitivity for liquid, water samples, the intensity of light elastically dissipated in the wavelength range from 500 to 950 nm) ion meter (“Expert-001” or another, allowing to measure the pH of liquid, water samples with a sufficient degree of sensitivity) and conductometer (“Expert-002” or another, allowing to measure the change in electrical conductivity with a sufficient degree of sensitivity liquid, aqueous samples).
Более детально настоящее изобретение описывается следующим конкретным примером. Исследовались бактерицидные свойства материалов, изготовленных в виде пленок толщиной 0,3 мм на основе поливинилхлорида (ПВХ) с добавками 0, 1 и 10 масс. % крахмала и яблочного пектина. Каждый из этих материалов разрезался на 9 фрагментов размером 10×20 мм, каждый из которых помещался в отдельную пробирку с 6 мл тестовой среды (ТС), в качестве которой использовались суспензии, содержащие около 106 жизнеспособных клеток Lactobacillus acidophilus АТСС 4356, Lactobacillus helveticus АТСС 8018 либо Lactobacillus kefiri АТСС 35411 в 1 мл водного раствора, исходно стерильного, имевшего pH 7,0±0,2 и содержавшего 6,0±0,1 г/л лактозы + 18±0,1 г/л белкового гидролизата + 2,0±0,1 г/л NaCl. Затем все эти пробирки (включая 9 контрольных, содержавших те же ТС, но без добавления какого-либо из тестируемых материалов) перемешивались, закрывались ватно-марлевыми пробками и инкубировались при 30°C в течение 9-и часов. При этом непосредственно перед началом инкубации и сразу после ее окончания последовательно у ТС в каждой из пробирок регистрировались интенсивность света, упруго рассеиваемого в диапазоне длин волн от 500 до 950 нм (Iod), pH и электропроводность (X). Причем значения Iod регистрировались с помощью нефелометра «WGZ-2». Значения pH регистрировались с помощью иономера «Эксперт-001» с комбинированным электродом «ЭСК-10601/7». А значения X регистрировались с помощью кондуктометра «Экс-перт-002» с датчиком «УЭП-П-С», работающим на частоте 1,6 кГц.In more detail, the present invention is described in the following specific example. The bactericidal properties of materials made in the form of films with a thickness of 0.3 mm based on polyvinyl chloride (PVC) with additions of 0, 1 and 10 wt. % starch and apple pectin. Each of these materials was cut into 9 fragments 10 × 20 mm in size, each of which was placed in a separate tube with 6 ml of test medium (TC), as which were suspensions containing about 10 6 viable cells of Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, Lactobacillus helveticus ATCC 8018 or Lactobacillus kefiri ATCC 35411 in 1 ml of an aqueous solution, initially sterile, having a pH of 7.0 ± 0.2 and containing 6.0 ± 0.1 g / l of lactose + 18 ± 0.1 g / l of protein hydrolyzate + 2 , 0 ± 0.1 g / l NaCl. Then all these tubes (including 9 control tubes, containing the same TS, but without adding any of the tested materials) were mixed, closed with cotton-gauze plugs and incubated at 30 ° C for 9 hours. At the same time, immediately before the start of incubation and immediately after its completion, the intensity of light elastically dissipated in the wavelength range from 500 to 950 nm (Iod), pH and electrical conductivity (X) were recorded sequentially at the vehicle in each of the tubes. Moreover, the Iod values were recorded using a WGZ-2 turbidity meter. The pH values were recorded using an Expert-001 ionomer with an ESC-10601/7 combined electrode. And the X values were recorded using the Ex-Pert-002 conductometer with the UEP-P-S sensor operating at 1.6 kHz.
Далее, изменения каждого из измеренных параметров ТС рассчитывались по формуле: ΔY=Ye-Yb (где Yb и Ye - значения Iod, pH или X, зарегистрированные в каждой из контрольных и тестовых пробирок в начале и в конце их инкубирования). Затем все полученные значения ΔYi усреднялись (по пробиркам, содержащим одни и те же материалы в одних и тех же ТС), и для каждого из усредненных значений рассчитывался 95% доверительный интервал. После чего общая степень активирования или ингибирования (+/-) жизнедеятельности тестовых микроорганизмов тестируемыми материалами рассчитывалась по формуле: εS=(εIod+εpH+εX)/3,Further, the changes in each of the measured TS parameters were calculated using the formula: ΔY = Ye-Yb (where Yb and Ye are Iod, pH, or X values recorded in each of the control and test tubes at the beginning and end of their incubation). Then, all obtained ΔY i values were averaged (by test tubes containing the same materials in the same TS), and for each of the averaged values, a 95% confidence interval was calculated. Then the total degree of activation or inhibition (+/-) of the life of the test microorganisms by the tested materials was calculated by the formula: ε S = (ε Iod + ε pH + ε X ) / 3,
где εY=100×(ΔYt-ΔYc)/ΔYc, a ΔYt и ΔYc - изменения значений Iod, pH или X, произошедшие за время инкубирования ТС в присутствии тестируемых материалов (ΔYt) и в их отсутствие (ΔYc). Результаты этих расчетов представлены в таблице 1.where ε Y = 100 × (ΔYt-ΔYc) / ΔYc, a ΔYt and ΔYc are changes in the values of Iod, pH or X that occurred during the incubation of the TS in the presence of test materials (ΔYt) and in their absence (ΔYc). The results of these calculations are presented in table 1.
Условные обозначения: «К-1» и «К-10» - ПВХ материалы с добавками 1 и 10 масс. % крахмала; «К-1» и «К-10» - ПВХ материалы с добавками 1 и 10 масс. % яблочного пектина; «ПВХ» - 100% ПВХ.Legend: "K-1" and "K-10" - PVC materials with additives of 1 and 10 wt. % starch; "K-1" and "K-10" - PVC materials with additives of 1 and 10 masses. % apple pectin; PVC is 100% PVC.
Из представленного видно, что у разных видов и штаммов Lactobacillus реакция на присутствие тестируемых материалов, в целом, была в значительной мере сходной. При этом ПВХ основа тестируемых материалов сама по себе либо с минимальным количеством добавок максимально ингибировала жизнедеятельность тестовых микроорганизмов. В то время как тестируемые материалы с большим количеством крахмала или пектина в своем составе ингибировали жизнедеятельность тестовых микроорганизмов уже значительно меньше. Причем происходило это в большей мере в присутствии крахмала нежели в присутствии пектина.From the presented it is clear that in different species and strains of Lactobacillus, the reaction to the presence of the tested materials was, on the whole, largely similar. At the same time, PVC is the basis of the tested materials, by itself or with a minimum amount of additives, inhibited the vital activity of test microorganisms to the maximum. While the test materials with a large amount of starch or pectin in their composition inhibited the vital activity of test microorganisms is already much less. And this happened more in the presence of starch than in the presence of pectin.
Таким образом, заявляемый способ может обеспечить расширение области применения определения бактерицидных свойств различных материалов, а также повышение объективности такого определения и доступности его для использования более широким кругом пользователей.Thus, the inventive method can provide an expansion of the scope of the determination of the bactericidal properties of various materials, as well as increasing the objectivity of such a definition and its availability for use by a wider range of users.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018113382A RU2689359C1 (en) | 2018-04-12 | 2018-04-12 | Method for determining the bactericidal properties of materials |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018113382A RU2689359C1 (en) | 2018-04-12 | 2018-04-12 | Method for determining the bactericidal properties of materials |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2689359C1 true RU2689359C1 (en) | 2019-05-27 |
Family
ID=66636584
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018113382A RU2689359C1 (en) | 2018-04-12 | 2018-04-12 | Method for determining the bactericidal properties of materials |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2689359C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2239184C2 (en) * | 2002-05-13 | 2004-10-27 | Уральская государственная академия ветеринарной медицины | Method for detecting bactericidal activity of milk |
| RU2570637C1 (en) * | 2014-10-14 | 2015-12-10 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского" | Method to detect toxicity of medium by extent of suppression of growth of microorganism test cultures |
-
2018
- 2018-04-12 RU RU2018113382A patent/RU2689359C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2239184C2 (en) * | 2002-05-13 | 2004-10-27 | Уральская государственная академия ветеринарной медицины | Method for detecting bactericidal activity of milk |
| RU2570637C1 (en) * | 2014-10-14 | 2015-12-10 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского" | Method to detect toxicity of medium by extent of suppression of growth of microorganism test cultures |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ДЬЯЧКОВА С.Я. "Бактерицидные свойства в исследованиях общей сывороточной бактерицидности, лизоцима, лизинов и чувствительности химиопрепаратов к микроорганизмам// Вестник ВГУ, Серия химия, биология, фармация, 2003, N 1, с.96-98. * |
| СИБИРЦЕВ В.С. и др. "Кондуктометрическое биотестирование в применении к оценке про- и антибактериальных свойств католитов и анолитов"//Научно-технический вестник информационных технологий, механики и оптики, 2016, том 16 N 3, с.573-576. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Arnoldini et al. | Monitoring of dynamic microbiological processes using real-time flow cytometry | |
| Lindow | The use of reporter genes in the study of microbial ecology. | |
| Baker et al. | Bacterial bioluminescence: applications in food microbiology | |
| WO2005098023A1 (en) | Microbial growth assay | |
| CN102796660A (en) | Detection device for monitoring water quality on line and water quality on-line monitoring method | |
| Deere et al. | Evaluation of the suitability of bis-(1, 3-dibutylbarbituric acid) trimethine oxonol,(diBA-C4 (3)−), for the flow cytometric assessment of bacterial viability | |
| US5776681A (en) | Method for determining a metal present in a sample | |
| WO2000031292A1 (en) | Method for counting living cells | |
| Ishkov et al. | Environmental triggers of lrgA expression in Streptococcus mutans | |
| RU2689359C1 (en) | Method for determining the bactericidal properties of materials | |
| RU2688117C1 (en) | Method for evaluating pro- and antimicrobial properties of samples | |
| RU2688328C1 (en) | Method of determining bactericidal properties of substances | |
| RU2676094C1 (en) | Method for determining resistance of materials to biodegradation | |
| RU2708164C1 (en) | Method for determining toxicity of materials | |
| RU2247987C2 (en) | Method for detecting bactericide activity of blood serum | |
| RU2688119C1 (en) | Method for determining antibiotic properties of materials | |
| RU2688745C1 (en) | Method for determining toxicity of samples | |
| Balan et al. | Probing of potential luminous bacteria in Bay of Bengal and its enzyme characterization | |
| Brown et al. | Microfluidic-based growth and imaging of bacterial biofilms | |
| JP5823390B2 (en) | Novel nitroreductase enzyme substrate | |
| JP5730305B2 (en) | Novel nitroreductase enzyme substrate | |
| RU2566558C1 (en) | METHOD OF DETERMINATION OF POLYAMINE CADAVERINE AT MODELLING OF STRESS SITUATIONS OF Vibrio cholerae 01 AND 0139 SEROGROUPS | |
| RU2239184C2 (en) | Method for detecting bactericidal activity of milk | |
| Stewart et al. | Bioluminescence: lux as an enabling tool for the microbiological analysis of food | |
| GB2429283A (en) | Preservative efficacy testing system |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200413 |