RU2686337C1 - Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов - Google Patents
Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2686337C1 RU2686337C1 RU2018124240A RU2018124240A RU2686337C1 RU 2686337 C1 RU2686337 C1 RU 2686337C1 RU 2018124240 A RU2018124240 A RU 2018124240A RU 2018124240 A RU2018124240 A RU 2018124240A RU 2686337 C1 RU2686337 C1 RU 2686337C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- activity
- serum
- fraction
- antimicrobial
- whole
- Prior art date
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 50
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 34
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 27
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 6
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 claims description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 2
- 239000005862 Whey Substances 0.000 abstract 3
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 abstract 3
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 abstract 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- MMXZSJMASHPLLR-UHFFFAOYSA-N pyrroloquinoline quinone Chemical compound C12=C(C(O)=O)C=C(C(O)=O)N=C2C(=O)C(=O)C2=C1NC(C(=O)O)=C2 MMXZSJMASHPLLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000493790 Photobacterium leiognathi Species 0.000 description 1
- 241001197925 Theila Species 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии и предназначено для определения общей антимикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах сыворотки крови. Способ определения общей противомикробной активности сыворотки крови и активности фракции антимикробных пептидов сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа заключается в том, что берут образцы цельной сыворотки и указанной фракции, соединяют в пробирках с суспензией микроорганизмов, инкубируют 2 часа при температуре 32 градуса на шейкере, затем центрифугируют и к полученному осадку добавляют раствор бромкрезолового пурпурного, затем вновь термостатируют при тех же условиях, центрифугируют, измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости и рассчитывают активность образцов по формуле, при этом величина указанной активности цельной сыворотки 72,7÷91,6% и величина активности низкомолекулярной фракции сыворотки 21,2÷51,4% интерпретируются как нормальные, а при величине активности цельной сыворотки ниже 72% и величине активности низкомолекулярной фракции сыворотки ниже 21% свидетельствуют о снижении указанной активности. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.
Description
Область техники
Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии. Изобретение предназначено для определения общей антимикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах сыворотки крови посредством действия данных образцов на клетки тест-культур микроорганизмов и спектрофотометрического измерения процента красителя, вошедшего в убитые клетки, по сравнению с контролем. Такой подход позволяет установить нормальный и патологический уровень гуморальной противомикробной иммунной защиты организма и усовершенствовать тактику лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, то есть, решить вопрос о проведении иммунотерапии.
Уровень техники.
Обычно для постановки диагноза и разработки схемы лечения инфекционно-воспалительных заболеваний клиницист использует микробиологические и иммунологические исследования. Защитный потенциал конкретного пациента оценивают путем определения иммунного статуса, в который входят многие показатели клеточного и гуморального иммунитета. Гуморальная (сывороточная) противомикробная защита организма складывается из иммуноглобулинов, белков системы комплемента и антимикробных пептидов/ полипептидов (АМП). Независимо от того, какой путь действия системы комплемента реализуется - классический или альтернативный, а также от механизма действия иммуноглобулинов и различных АМП (которых в сыворотке крови свыше 25), происходит прежде всего повреждение клеточной мембраны патогенных микроорганизмов или их лизис. На этом свойстве сыворотки основаны все известные до сих пор методы оценки ее бактерицидности. Метод определения бактерицидных свойств крови входит в "Номенклатуру клинических лабораторных исследований" (п.6.3.2-общие бактерицидные свойства сыворотки крови, секретов), утвержденную Приказом Министерства здравоохранения РФ №64 от 21.02.2000 г. Однако в широкой клинической практике этот метод не нашел применения, очевидно, в силу объективных причин - трудоемкости, длительности выполнения и др. Тем не менее, такой показатель, как прямая противомикробная активность сыворотки, является очень важным.
Методы определения антимикробной активности сыворотки крови и ее компонентов можно разделить на две группы. К первой группе можно отнести "бактериологические" методы, которые основаны на подсчете количества микроорганизмов, обработанных сывороткой крови, по сравнению с контролем. Учет в данном случае проводят путем посева на плотные питательные среды.
Ко второй группе относятся "фотонефелометрические" методы, основанные на оптической регистрации задержки роста бактериальной культуры в жидкой питательной среде. Вышеперечисленные методы трудоемки и требуют больших затрат времени.
Так, из уровня техники известен способ определения бактерицидной активности сыворотки крови, в котором предлагается использование природных или рекомбинантных люминесцирующих бактерий, характеризующиеся прямой пропорциональностью между интенсивностью снижения уровня спонтанной биолюминесценции и выраженностью бактерицидного эффекта. Авторы в качестве примера приводят использование штамма Escherichia coli с генами люминесцентной системы Photobacterium leiognathi. (патент RU 2247987, приоритет 22.01.2003)
К недостаткам данного метода можно отнести модельную тест-культуру, которая не является естественным патогенным микроорганизмом, поэтому может обладать иной чувствительностью к сывороточным антимикробным соединениям, чем штаммы, выделяемые от больных.
Известен также способ определения антимикробной активности пептидов, основанный на свойстве АМП нарушать цитоплазматическую мембрану микроорганизмов (Zimmerman LB1, Worley BV, Palermo EF, Brender JR, Lee KD, Kuroda K, Ramamoorthy A, Meyerhoff ME. Absorbance-based assay for membrane disruption by antimicrobial peptides and synthetic copolymers using pyrroloquinoline quinone-loaded liposomes. AnalBiochem. 2011 Apr 15;411(2): 194-9. doi: 10.1016/j.ab.2011.01.009. Epub 2011 Jan 13). Однако исследователи предлагают использовать не суммарную фракцию АМП, а индивидуальные, причем синтетические аналоги природных АМП. В качестве тест-объекта они используют специально созданную модель - липосомы. Метод требует больших расходов на реактивы (ферменты, пирролохинолин хинон), и не предполагает получения данных об истинной активности АМП против естественных патогенов.
Известен способ определения уровней АМП (Arzumanian V., Shmeleva О., Michailova N. (2017) Elevated Activity Levels of Serum Antimicrobial Peptides in Mice as Response to Immunization with Yeast Antigens, Med Mycol Open Access Vol. 3 No. l), однако, он был реализован в опытах на мышах и, таким образом, не содержит данных касающихся человеческих сывороток, а именно, норм величин антимикробной активности цельных сывороток и их АМП-фракций.
Для оценки противомикробной защиты в клинике пользуются анализами количественной оценки иммуноглобулинов. Несмотря на то, что методы количественной оценки отдельных АМП разработаны, исследования в этой области носят сугубо фундаментальный характер. Кроме того, их действие в организме складывается не столько из суммы их количеств, сколько из их совокупной активности в отношении микробных агентов. Известно, что белки системы комплемента продуцируются в основном гепатоцитами, сывороточные иммуноглобулины - В-лимфоцитами, а сывороточные АМП - в основном нейтрофилами. Молекулярная масса иммуноглобулинов и подавляющего большинства белков комплемента выше 150 кДа, тогда как мол. масса АМП варьирует в пределах 2,8 - 80 кДа. Таким образом, определив совокупную противомикробную активность низкомолекулярной фракции, можно судить об активности АМП, т.е. об эффективности их синтеза нейтрофилами. В этой связи, очевидно, что для клинической диагностики, наряду с общей противомикробной активностью сыворотки, большое значение имеет такой показатель, как совокупная активность АМП.
Наиболее близким аналогом заявленного изобретения является способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей (патент на изобретение №2602298 от 21.10.2016). Данный метод предназначен для оценки противомикробной активности таких биожидкостей, как слюна, урина, вагинальный и кожный секреты, но не для сыворотки крови. Недостатком данного способа по сравнению с предлагаемым является использование более трудоемкого и длительного метода микроскопии образцов с подсчетом количества убитых клеток.
Задачей изобретения является разработка способа определения противомикробной активности цельной сыворотки и совокупной активности фракции антимикробных пептидов как маркеров состояния отдельных звеньев гуморального иммунитета организма человека, позволяющий за короткое время количественно оценить способность сыворотки крови противостоять инфекционным агентам.
Техническим результатом изобретения является возможность оценить общую противомикробную активность и совокупную активность антимикробных пептидов сыворотки крови. Для определения совокупной активности АМП используется быстрый метод спектрофотометрический метод оценки процента красителя, поглощенного убитыми клетками, по сравнению с контролем, вместо более длительного и трудоемкого метода микроскопирования и подсчета процента убитых клеток. Применение данного метода позволяет на основании количественных критериев определить состояние нормы или дефицита общей противомикробной активности сыворотки и совокупной активности сывороточных АМП.
Для решения поставленной задачи мы предлагаем способ определения общей противомикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов сыворотки крови человека, заключающийся в том, что в качестве образца сыворотки осуществляют сбор крови, затем образец освобождают от форменных клеток крови путем центрифугирования и делят на две аликвоты, одну из которых фильтруют через молекулярный фильтр с размером пор 100 кДа, затем обе аликвоты и контрольный образец, содержащий физраствор вместо компонентов сыворотки, соединяют в определенном соотношении с суспензией клеток экспоненциальной культуры микроорганизмов, после чего приготовленные смеси инкубируют в термостате 2 часа, центрифугируют и к полученным осадкам добавляют раствор бромкрезолового пурпурного для окрашивания убитых клеток, затем вновь термостатируют и центрифугируют, а оптическую плотность полученных супернатантов измеряют на спектрофотометре и рассчитывают процент красителя, поглощенного убитыми клетками опытных образцов в сравнении с контрольным образцом, что и отражает общую противомикробную активность сыворотки и ее совокупную активность АМП.
В частном случае для определения антимикробной активности АМП данную фракцию сыворотки соединяют с клетками грибов Candida albicans, либо грибов Cryptococcus neoformans, либо бактерий Staphylococcus aureus, либо бактерий Escherichia coli.
Краткое описание чертежей и иных поясняющих материалов
Таблица 1. Противомикробная активность цельной сыворотки и активность АМП сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа у здоровых добровольцев.
Таблица 2. Противомикробная активность цельной сыворотки и активность АМП сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа у здоровых добровольцев и пациентов с сепсисом.
Таблица 3. Противомикробная активность цельной сыворотки и активность АМП сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа у здоровых добровольцев, которую оценивали в отношении нескольких культур условно-патогенных грибов и бактерий.
Осуществление изобретения
Способ был реализован для разных видов сывороток и микроорганизмов. Ниже приведены примеры реализации способа.
Пример 1.
Образец венозной крови объемом 2 мл инкубируют 1 час, центрифугируют 5 мин со скоростью 10000 об/мин и полученный супернатант делят на две части, одну из которых отделяют (фракция I), а другую объемом 0,5 мл фильтруют через молекулярный фильтр «Amicon» с диаметром пор 100 кДа на центрифуге в течение 15 мин при 16000 об/мин (фракция II), после чего по 300 мкл из обеих фракций соединяют в пробирках типа Эппендорф с 50 мкл суспензии дрожжей С. albicans №927, полученной из культуры этих дрожжей, выращенной на среде Сабуро в течение 20 часов при 25 градусах и приготовленной из расчета 1 петля 1 мм, суспендированная в 50 мкл физраствора; контролем является пробирка, в которой 300 мкл физраствора, соединяют с 50 мкл упомянутой смеси; пробирки инкубируют 2 часа при 32 градусах на шейкере, затем центрифугируют 5 мин при 10000 об/мин, супернатанты осторожно удаляют, а к осадкам добавляют по 300 мкл раствора бромкрезолового пурпурного в фосфатном буфере рН 4,6, суспендируют и инкубируют 45 мин при 32 градусах на шейкере; после этого 5 мин при 10000 об/мин, супернатанты - по 250 мкл - собирают в отдельную пробирку для каждой пробы, перемешивают и оттуда вносят по 50 мкл в заранее подготовленные пробирки, содержащие по 2,5 мл фосфатного буфера рН 4,6; полученные растворы перемешивают и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 440 нм в кюветах 1 см; из трех измерений для каждой пробы вычисляют среднее значение оптической плотности, затем производят расчет по формуле:
А=(ОПконтр. - ОПопыт.)* 100 / ОПконтр.,
где А - противомикробная активность цельной сыворотки или полученной фракции ее антимикробных пептидов, выраженная в процентах.
ОПконтр. - это оптическая плотность смеси из контрольной пробирки; ОПопыт. - это оптическая плотность смеси из пробирки фракции I либо фракции II.
Таким образом обрабатывали сыворотки 15 здоровых добровольцев (табл. 1). При этом определяли количественные критерии нормальной противомикробной активности цельной сыворотки и полученной фракции ее антимикробных пептидов.
Пример 2. Образцы крови обрабатывали аналогично примеру 1, но в исследование были включены: контрольная группа - здоровые добровольцы и пациенты с сепсисом, противомикробную активность также оценивали в отношении дрожжей Candida albicans. Результаты приведены в табл. 2. Как видно из приведенных результатов, дефицитное состояние противомикробной активности цельной сыворотки и полученной фракции ее антимикробных пептидов диагностируется при показателях 72% и 21% соответственно.
Достоверность различий рассчитывали по критерию Манна-Уитни.
Пример 3. Образцы крови обрабатывали аналогично примеру 1, но исследование проводили только на сыворотках крови 6 здоровых добровольцев, причем активность оценивали в отношении нескольких культур условно-патогенных грибов и бактерий (таблица 3). Величины противомикробной активности цельных сывороток против разных видов микроорганизмов в норме варьируют от 72% до 92%, тогда как активность АМП-фракций - в пределах от 20% до 51%.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет быстро и точно оценить общую противомикробную активность и совокупную активность антимикробных пептидов сыворотки крови и охарактеризовать ее состояние как нормальное или дефицитное.
Claims (3)
1. Способ определения общей противомикробной активности сыворотки крови и активности фракции антимикробных пептидов сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа, для чего берут образцы цельной сыворотки и указанной фракции, соединяют в пробирках с суспензией микроорганизмов, инкубируют 2 часа при температуре 32 градуса на шейкере, затем центрифугируют и к полученному осадку добавляют раствор бромкрезолового пурпурного, затем вновь термостатируют при тех же условиях, центрифугируют, измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости и рассчитывают активность образцов по формуле:
Противомикробная активность образца = (оптическая плотность жидкости из контрольной пробирки минус оптическая плотность жидкости из опытной пробирки)×100 / оптическая плотность жидкости из контрольной пробирки, при этом величина указанной активности цельной сыворотки 72,7÷91,6% и величина активности низкомолекулярной фракции сыворотки 21,2÷51,4% интерпретируются как нормальные, а при величине активности цельной сыворотки ниже 72% и величине активности низкомолекулярной фракции сыворотки ниже 21% свидетельствуют о снижении указанной активности.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для определения антимикробной активности АМП данную фракцию сыворотки соединяют с клетками грибов Candida albicans, либо грибов Cryptococcus neoformans, либо бактерий Staphylococcus aureus, либо бактерий Escherichia coli.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018124240A RU2686337C1 (ru) | 2018-07-03 | 2018-07-03 | Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018124240A RU2686337C1 (ru) | 2018-07-03 | 2018-07-03 | Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2686337C1 true RU2686337C1 (ru) | 2019-04-25 |
Family
ID=66314579
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018124240A RU2686337C1 (ru) | 2018-07-03 | 2018-07-03 | Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2686337C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2766346C1 (ru) * | 2021-04-05 | 2022-03-15 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Пермский национальный исследовательский политехнический университет" | Способ определения противомикробной активности пептидов |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2247987C2 (ru) * | 2003-01-22 | 2005-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Центр научного зондирования" | Способ определения бактерицидной активности сыворотки крови |
| RU2602298C2 (ru) * | 2015-04-10 | 2016-11-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" (ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова) | Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей |
-
2018
- 2018-07-03 RU RU2018124240A patent/RU2686337C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2247987C2 (ru) * | 2003-01-22 | 2005-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Центр научного зондирования" | Способ определения бактерицидной активности сыворотки крови |
| RU2602298C2 (ru) * | 2015-04-10 | 2016-11-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" (ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова) | Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| E. Jardim et al. Antimicrobial effect of human serum on oral Fusobacterium nucleatum isolates from humans and monkeys / Revista de Odontologia da Universidade de Sao Paulo, 1999, 13(1) [Найдено в Интернете он-лайн 13.03.2019 http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-06631999000100003]. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2766346C1 (ru) * | 2021-04-05 | 2022-03-15 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Пермский национальный исследовательский политехнический университет" | Способ определения противомикробной активности пептидов |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Faber et al. | Tularemia in Germany—a re-emerging zoonosis | |
| Clohessy et al. | Calprotectin‐mediated zinc chelation as a biostatic mechanism in host defence | |
| Gardinali et al. | Complement activation and polymorphonuclear neutrophil leukocyte elastase in sepsis: Correlation with severity of disease | |
| CN104237525B (zh) | 一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用 | |
| Friberg et al. | Measurements of natural killer (NK) activity and NK-cell quantification | |
| CN103698511B (zh) | 结核分支杆菌蛋白在制备诊断潜伏性肺结核感染的产品中的用途 | |
| CN103698512B (zh) | 结核分支杆菌蛋白在制备诊断潜伏性肺结核感染的产品中的用途 | |
| CN101581726B (zh) | 新一代布鲁氏菌病抗体竞争酶联免疫吸附试验检测试剂盒 | |
| Marcinkiewicz et al. | There is a method to the madness: strategies to study host complement evasion by Lyme disease and relapsing fever spirochetes | |
| Chadwick et al. | Tissue-specific murine neutrophil activation states in health and inflammation | |
| CN104407156B (zh) | 检测多糖结合蛋白(lbp)的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法 | |
| Zalunardo et al. | Higher serum C-reactive protein predicts short and long-term outcomes in peritoneal dialysis-associated peritonitis | |
| RU2686337C1 (ru) | Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов | |
| Zhong et al. | S100 calcium‐binding protein A12 as a diagnostic index for subclinical mastitis in cows | |
| Jalava-Karvinen et al. | Simultaneous quantitative analysis of FcγRI (CD64) and CR1 (CD35) on neutrophils in distinguishing between bacterial infections, viral infections, and inflammatory diseases | |
| CN106191286A (zh) | 布鲁氏菌的检测方法、试剂盒及其应用 | |
| Bradbury et al. | The influence of pH of the culture medium on the sensitivity of Mycoplasma gallisepticum antigens for use in certain serological tests | |
| Arzumanian et al. | Activity of antimicrobial peptide fractions of human serum and saliva against clinically important yeasts | |
| JP2008249367A (ja) | 免疫能の評価方法、及び免疫能評価用キット | |
| KR101138343B1 (ko) | 알츠하이머 질병의 진단을 위한 신속한 시험법 | |
| Nayeri et al. | High serum hepatocyte growth factor levels in the acute stage of community-acquired infectious diseases | |
| RU2247987C2 (ru) | Способ определения бактерицидной активности сыворотки крови | |
| US20220003748A1 (en) | Method for preserving urinary cells | |
| RU2498311C2 (ru) | Способ оценки активности туберкулеза у детей и подростков | |
| Puşcaş et al. | Micro-test system for rapid isolation and identification of Candida species in urinary tract infections |