RU2677469C1

RU2677469C1 - Method for predicting outcome of infectious endocarditis

Info

Publication number: RU2677469C1
Application number: RU2018118932A
Authority: RU
Inventors: Нина Васильевна Мальцева; Татьяна Анатольевна Лапутенко; Анна Шамильевна Смирнова; Ян Алексеевич Горбатовский
Priority date: 2018-05-22
Filing date: 2018-05-22
Publication date: 2019-01-17

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention relates to medicine, namely to therapy, cardiology and surgery. Method for predicting the outcome of infective endocarditis includes sampling of venous blood, isolation of genomic DNA, allele-specific polymerase chain reaction for the purpose of genotyping at the MTHFR ^{Ala222Val(C677T)} polymorphic locus of the methylenetetrahydrofolate reductase gene of persons at risk and in carriers of the genotype MTHFR ^Ala222A1a(^C677C) a favorable outcome of the disease is predicted, and in carriers of genotypes MTHFR ^{Ala222Val(C677T)}/MTHFR ^{Val222Val(T677T)} risk of death multiple of 12.33 is predicted.

EFFECT: invention can be used to predict the outcome of infective endocarditis.

1 cl, 3 ex, 3 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, кардиологии и хирургии, и может быть использовано для прогнозирования исхода инфекционного эндокардита.The invention relates to medicine, namely to therapy, cardiology and surgery, and can be used to predict the outcome of infectious endocarditis.

Инфекционный эндокардит (ИЭ) - одно из самых тяжелых и непредсказуемых по своему исходу заболеваний сердечно-сосудистой системы с летальностью в 20-30% случаев (Данилов А.И., Алексеева И.В., Аснер Т.В., Власова Е.Е., Данилова Е.М., Дехнич А.В. и др. Этиология инфекционного эндокардита в России. Клиническая Микробиология и Антимикробная Химиотерапия. 2015; 17(1):4-10). Количество больных ИЭ растет во всем мире. К группам риска относят людей с ревматическими, атеросклеротическими повреждениями сердечных клапанов, внутривенных наркоманов, а также пожилых пациентов с иммунодефицитными состояниями. Развитие заболевания связано с оседанием микроорганизмов на клапанах сердца, где локализуется воспалительный процесс, образуются тромбы с обильным содержанием микроорганизмов (вегетации). Основными осложнениями ИЭ являются прогрессирующая сердечная недостаточность и тромбоэмболии (Руководство по кардиологии: Учебное пособие в 3 т. / Под ред. Г.И. Сторожакова, А.А. Горбаченкова. - Т. 2. - 512 с.). Острая форма ИЭ без лечения может закончиться смертельным исходом через 1-1,5 месяца, подострая форма - через 4-6 месяцев. Причиной смерти пациентов становятся генерализация инфекционного процесса с проявлением полиорганной недостаточности, тромбоэмболии легочной артерии, тромбоэмболические осложнения с поражением центральной нервной системы: гнойные менингиты, менингоэнцефалиты, а так же отек мозга с вклинением его ствола, кровоизлиянием в мозг. Прогноз исхода ИЭ крайне актуален, т.к. может позволить уменьшить летальность и добиться ремиссии заболевания за счет назначения своевременной, адекватной терапии лицам с высоким риском летальности. Существует способ прогнозирования результатов (в том числе, исхода) консервативного лечения инфекционного эндокардита с точностью 74%, который основан на широком клинико-инструментальном обследовании и сложном математическим расчете 36 клинических показателей (Резник И.И., Кисляк В.М., Кисляк Н.В., Иофин А.И. Способ прогнозирования результатов консервативного лечения инфекционного эндокардита. Патент РФ №2226691), т.е. крайне трудоемок. Поскольку к настоящему времени выявлены гены-кандидаты ИЭ, варианты которых ассоциированы с повышенным риском этого заболевания, и предложены соответствующие способы определения генетической предрасположенности к развитию ИЭ (Патент РФ №2617060, Патент РФ №2587753), своевременен поиск генов, предрасполагающих к разному исходу заболевания. В патентной и научной литературе такие сведения отсутствуют.Infectious endocarditis (IE) is one of the most severe and unpredictable diseases of the cardiovascular system with mortality in 20-30% of cases (Danilov A.I., Alekseeva I.V., Asner T.V., Vlasova E. E., Danilova EM, Dehnich A.V. et al. Etiology of Infectious Endocarditis in Russia. Clinical Microbiology and Antimicrobial Chemotherapy. 2015; 17 (1): 4-10). The number of patients with IE is growing worldwide. Risk groups include people with rheumatic, atherosclerotic injuries of heart valves, intravenous drug addicts, as well as elderly patients with immunodeficiency conditions. The development of the disease is associated with the subsidence of microorganisms on the valves of the heart, where the inflammatory process is localized, blood clots are formed with a copious content of microorganisms (vegetation). The main complications of IE are progressive heart failure and thromboembolism (Cardiology Manual: 3-vol. Textbook / Edited by G.I. Storozhakov, A.A. Gorbachenkova. - T. 2. - 512 p.). The acute form of IE without treatment can be fatal in 1-1.5 months, the subacute form in 4-6 months. The cause of death of patients is the generalization of the infectious process with the manifestation of multiple organ failure, pulmonary thromboembolism, thromboembolic complications with damage to the central nervous system: purulent meningitis, meningoencephalitis, as well as cerebral edema with a wedge of its trunk, cerebral hemorrhage. The forecast of the outcome of IE is extremely relevant, because can reduce mortality and achieve remission of the disease by prescribing timely, adequate therapy to people at high risk of mortality. There is a method for predicting the results (including outcome) of conservative treatment of infectious endocarditis with an accuracy of 74%, which is based on a wide clinical and instrumental examination and complex mathematical calculation of 36 clinical indicators (Reznik II, Kislyak V.M., Kislyak N .V., Iofin AI Method for predicting the results of conservative treatment of infectious endocarditis. Patent of the Russian Federation No. 2226691), i.e. extremely time consuming. Since to date, candidate IE genes have been identified, variants of which are associated with an increased risk of this disease, and appropriate methods for determining a genetic predisposition to developing IE have been proposed (RF Patent No. 2617060, RF Patent No. 2587753), the search for genes predisposing to a different outcome of the disease is timely . In the patent and scientific literature, such information is not available.

Назначением настоящего изобретения является разработка способа прогнозирования исхода инфекционного эндокардита на основании выявления вариантов генов, носительство которых усиливает риск летального исхода либо способствует выживанию.The purpose of the present invention is to develop a method for predicting the outcome of infective endocarditis based on the identification of variants of genes whose carriage increases the risk of death or contributes to survival.

Назначение изобретения достигается способом прогнозирования исхода инфекционного эндокардита (ИЭ), характеризующимся тем, что проводят забор образцов венозной крови, выделение геномной ДНК, аллель-специфическую полимеразную цепную реакцию с целью генотипирования по полиморфному локусу rs1801133 (локус MTHFR ^Ala222Val ^(С677Т) гена метилен-тетрагидрофолатредуктазы) пациентов с диагнозом инфекционный эндокардит русской национальности мужского пола, и у носителей генотипа MTHFR ^{Ala222Ala(C677C)} прогнозируют благоприятный исход заболевания, а у носителей генотипов MTHFR ^{Ala222Val(С677Т)}/MTHFR ^{Val222Val(T677T)} прогнозируют 12,33-кратный риск летального исхода.The purpose of the invention is achieved by a method for predicting the outcome of infectious endocarditis (IE), characterized in that venous blood samples are collected, genomic DNA is isolated, an allele-specific polymerase chain reaction is used to genotypic the rs1801133 polymorphic locus (MTHFR ^Ala222Val locus ^(C677T) of methylene- ^tetrafene gene ) patients diagnosed with male Russian infectious endocarditis, and carriers of the MTHFR ^Ala222Ala genotype ^(C677C) predict a favorable outcome, and gene carriers types of MTHFR ^{Ala222Val (C677T)} / MTHFR ^{Val222Val (T677T)} predict a 12.33-fold risk of death.

Новизна изобретения:The novelty of the invention:

1. Генотипирование по полиморфному локусу MTHFR ^Ala222Val (^С677Т) лиц группы риска позволяет прогнозировать благоприятный исход заболевания у носителей генотипа MTHFR ^{Ala222Ala(С677С)} и 12,33-кратный риск летального исхода у носителей генотипов MTHFR ^Ala222Val ^(С677Т)/MTHFR ^{Val222Val(T677T)} при доминантной модели наследования.1. Genotyping by the polymorphic locus MTHFR ^Ala222Val ( ^С677Т ) of people at risk allows predicting a favorable outcome for carriers of the genotype MTHFR ^{Ala222Ala (С677С)} and a 12.33-fold risk of death in carriers of the genotypes MTHFR ^Ala222Val ^(С677Т) / ^MFTRVTR2 with a dominant model of inheritance.

2. В группу риска входят лица русской национальности мужского пола с диагнозом инфекционный эндокардит.2. The risk group includes persons of Russian nationality of a male sex with a diagnosis of infectious endocarditis.

Новый технический результат изобретения позволяет выявлять лиц с генетически детерминированной предрасположенностью к разному исходу ИЭ, определенной по носительству варианта локуса MTHFR^Ala222Val, т.е. прогнозировать благоприятный/неблагоприятный исход заболевания и определять тактику ведения пациентов группы риска, способствующую снижению частоты летальности.A new technical result of the invention allows to identify individuals with a genetically determined predisposition to a different outcome of IE, determined by carriage of the variant of the MTHFR ^Ala222Val locus, i.e. to predict a favorable / unfavorable outcome of the disease and determine the tactics of managing patients at risk, contributing to a decrease in the mortality rate.

Однонуклеотидный полиморфизм MTHFR^Ma222Val ^(С677Т), rs1801133, является локусом, ассоциированным с процессами тромбообразования (Bezgin Т., Kaymaz С, Akbal

Yilmaz F.,

Н.С.,

N. Thrombophilic Gene Mutations in Relation to Different Manifestations of Venous Thromboembolism: A Single Tertiary Center Study. Clin. Appl. Thromb. Hemost. 2016 Oct 11. pii: 1076029616672585). Точковая замена нуклеотидов C>T в позиции 677 гена MTHFR приводит к замене Alanine(GCC) - >Valine(GTC) в кодоне 222 фермента фолатного метаболизма метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), к снижению его активности и повышению уровня гомоцистеина в крови, повреждающего эндотелий сосудов (Frosst P., Blom Н.J., Milos R., Goyette P., Sheppard С.A., Matthews R.G., Boers G.J.., den Heijer M., Kluijt-mans L. A.J., van den Heuvel L.P., Rozen R.A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase. Nature Genet. 1995; 10:111-113; Klerk M, Verhoef P., Clarke R., Blom H.J., Kok F.J., Schouten E.G., MTHFR Studies Collaboration Group. MTHFR 677C-T polymorphism and risk of coronary heart disease: a meta-analysis. JAMA. 2002; 288: 2023-2031). 677ТТ генотип является признанным генетическим маркером различных сосудистых заболеваний, включая венозные и артериальные тромбозы (Queffeulou G., Michel С, Vrtovsnik F., Philit J.-B., Dupuis E., Mignon F. Hyperhomocysteinemia, low folate status, homozygous C677T mutation of the methylene tetrahydrofolate reductase and renal arterial thrombosis. Clin. Nephrol. 2002; 57: 158-62; Keijzer M. B. A. J., den Heijer M., Blom H. J., Bos G. M. J., Willems H. P. J., Gerrits W. B. J., Rosendaal F. R. Interaction between hyperhomocysteinemia, mutated methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) and inherited thrombophilic factors in recurrent venous thrombosis. Thromb. Hemost. 2002; 88: 723-8). Следовательно, локус MTHFR ^Ala222Val ^(C677T) может повышать риск формирования вегетаций на эндокарде. В настоящей работе впервые обнаружена связь этого локуса с риском развития и исходом ИЭ. Способ осуществляется следующим образом.The single nucleotide polymorphism MTHFR ^Ma222Val ^(C677T) , rs1801133, is a locus associated with thrombus formation processes (Bezgin T., Kaymaz C, Akbal

Yilmaz F.,

N.S.,

N. Thrombophilic Gene Mutations in Relation to Different Manifestations of Venous Thromboembolism: A Single Tertiary Center Study. Clin. Appl. Thromb. Hemost. 2016 Oct 11. pii: 1076029616672585). The point substitution of nucleotides C> T at position 677 of the MTHFR gene leads to the replacement of Alanine (GCC) -> Valine (GTC) in codon 222 of the folate metabolism enzyme methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR), to a decrease in its activity and an increase in the level of homocysteine in the blood, damaging vascular endothelium ( Frosst P., Blom N.J., Milos R., Goyette P., Sheppard S.A., Matthews RG, Boers GJ., Den Heijer M., Kluijt-mans LAJ, van den Heuvel LP, Rozen RA candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase. Nature Genet. 1995; 10: 111-113; Klerk M, Verhoef P., Clarke R., Blom HJ, Kok FJ, Schouten EG, MTHFR Studies Collaboration Group. MTHFR 677C-T polymorphism and risk of coronary heart disease: a meta-analysis. JAMA. 2002; 288: 2023-2031). The 677TT genotype is a recognized genetic marker of various vascular diseases, including venous and arterial thromboses (Queffeulou G., Michel C, Vrtovsnik F., Philit J.-B., Dupuis E., Mignon F. Hyperhomocysteinemia, low folate status, homozygous C677T mutation of the methylene tetrahydrofolate reductase and renal arterial thrombosis. Clin. Nephrol. 2002; 57: 158-62; Keijzer MBAJ, den Heijer M., Blom HJ, Bos GMJ, Willems HPJ, Gerrits WBJ, Rosendaal FR Interaction between hyperhomocysteinemia, mutatedrofatenet reductase (MTHFR) and inherited thrombophilic factors in recurrent venous thrombosis. Thromb. Hemost. 2002; 88: 723-8). Therefore, the MTHFR locus ^Ala222Val ^(C677T) may increase the risk of vegetation formation on the endocardium. In the present work, for the first time, a relationship between this locus and the risk of development and outcome of IE was found. The method is as follows.

Геномную ДНК выделяют из клеток периферической крови с помощью коммерческого реагента «ДНК-экспресс-кровь» (НПФ «Литех», Москва). Генотипирование проводят по полиморфному локусу rs1801133, Ala222Val (С677Т) гена MTHFR,Genomic DNA is isolated from peripheral blood cells using a commercial DNA-express-blood reagent (NPF Litekh, Moscow). Genotyping is carried out at the polymorphic locus rs1801133, Ala222Val (С677Т) of the MTHFR gene,

MTHFR ^Ala222Val ^(C677T) _, c помощью коммерческого комплекта реагентов для выявления мутации 1 метилентетрагидрофолатредуктазы (НПФ Литех, Москва) методом аллель-специфической полимеразной цепной реакции. Согласно инструкции, с образцом выделенной ДНК осуществляют одновременно две реакции амплификации - с двумя парами аллель-специфичных прай-меров, на параллельное выявление аллелей мутантного (редкого) и нормального (дикого) типа. Реакционная смесь для ПЦР состоит из 5 мкл исследуемого образца ДНК и 20 мкл рабочей амплификационной смеси, содержащей 0,2 мкл рабочего раствора Taq полимеразы. Амплификацию проводят в автоматическом термоциклере Терцик («ДНК-Технология», Москва). Программа амплификации, соответственно инструкции, включает следующий температурный режим - 1 цикл при 93°С в течение 1 мин, 35 циклов с этапами денатурации ДНК в течение 10 сек при 93°С, отжига праймеров в течение 10 сек при 64°С и синтеза цепей в течение 20 сек при 72°С, и 1 цикл при 72°С в течение 1 мин. Анализ ПЦР-продуктов проводят после их электрофоретического разделения в 50 мл 3%-агарозного геля на 50×ТАЕ-буфере, в который до застывания вносят 5 мкл 1% раствора бромистого этидия. В каждом геле вырезают два ряда лунок - для детекции аллеля нормального типа и мутантного аллеля. Фрагменты анализируемой ДНК проявляются в виде светящихся полос. Гели анализируют в УФ-трансиллюминаторе ЕСХ-15М (Vilber Lourmat, Франция) с помощью гельдокументирующей видеосистемы GL-2 (Россия) в проходящем ультрафиолетовом свете с длиной волны 310 нм. Изобретение иллюстрируется фотографией Фиг. 1.MTHFR ^Ala222Val ^(C677T) _, using a commercial reagent kit for the detection of 1 methylene tetrahydrofolate reductase mutation (NPF Litekh, Moscow) by allele-specific polymerase chain reaction. According to the instructions, two amplification reactions are carried out simultaneously with a sample of extracted DNA - with two pairs of allele-specific primers, for the parallel detection of mutants (rare) and normal (wild) type alleles. The PCR reaction mixture consists of 5 μl of the test DNA sample and 20 μl of the working amplification mixture containing 0.2 μl of Taq polymerase working solution. Amplification is carried out in the Tertsik automatic thermal cycler (DNA-Technology, Moscow). The amplification program, according to the instructions, includes the following temperature conditions - 1 cycle at 93 ° C for 1 min, 35 cycles with DNA denaturation steps for 10 sec at 93 ° C, primer annealing for 10 sec at 64 ° C and chain synthesis for 20 seconds at 72 ° C, and 1 cycle at 72 ° C for 1 min. The analysis of PCR products is carried out after their electrophoretic separation in 50 ml of 3% agarose gel in 50 × TAE buffer, into which 5 μl of a 1% solution of ethidium bromide are added before solidification. Two rows of holes are cut out in each gel — to detect the normal type allele and mutant allele. Fragments of the analyzed DNA appear in the form of luminous bands. The gels are analyzed in an ECX-15M UV transilluminator (Vilber Lourmat, France) using a GL-2 gel-documenting video system (Russia) in transmitted ultraviolet light with a wavelength of 310 nm. The invention is illustrated by the photograph of FIG. one.

На Фиг. 1 представлены результаты генотипирования 17 обследованных пациентов с диагнозом инфекционного эндокардита по полиморфизму MTHFR ^{Ala222Val (С677Т)} в виде электрофореграммы, на которой показаны продукты амплификации исследуемого локуса в виде светящихся полос (в круглых скобках - диагноз и исход заболевания): K- - отрицательный контроль; K+- положительный контроль; дорожки 1 (оИЭ), 2 (оИЭ), 4 (оИЭ), 5 (п/оИЭ), 8 (оИЭ), 11 (оИЭ), 12 (п/оИЭ), 14 (оИЭ), 17 (оИЭ) - гомозиготный нормальный генотип MTHFR ^Ala222Ala ^(С677С) (все пациенты выжили); дорожки 3 (п/оИЭ, выжил), 6 (оИЭ, умер), 9 (оИЭ, выжил), 10 (оИЭ, выжил), 15(оИЭ, выжил) - гетерозиготный генотип MTHFR ^Ala222Val ^(С677Т). _ДОрожки 7 (оИЭ, выжил), 13 (оИЭ, умер), 16 (оИЭ, выжил) - гомозиготный мутантный генотип MTHFR ^Val222Val ^(Т677Т).In FIG. 1 shows the results of genotyping of 17 examined patients with a diagnosis of infectious endocarditis by MTHFR ^Ala222Val polymorphism ^(C677T) in the form of an electrophoregram, which shows the amplification products of the studied locus in the form of luminous bands (in parentheses - the diagnosis and outcome of the disease): K- - negative control; K + - positive control; lanes 1 (OIE), 2 (OIE), 4 (OIE), 5 (p / OIE), 8 (OIE), 11 (OIE), 12 (p / OIE), 14 (OIE), 17 (OIE) - homozygous normal MTHFR ^Ala222Ala genotype ^(C677C) (all patients survived); lanes 3 (p / oie, survived), 6 (ui, died), 9 (ui, survived), 10 (ui, survived), 15 (ui, survived) - the heterozygous genotype MTHFR ^Ala222Val ^(C677T) . _DO horns 7 (OIE, survived), 13 (OIE, died), 16 (OIE, survived) - the homozygous mutant genotype MTHFR ^Val222Val ^(Т677Т) .

Обследовано 64 пациента (21 женщина и 43 мужчины) в возрасте от 19 до 76 лет, находившихся на стационарном лечении в терапевтических клиниках г. Новокузнецка с диагнозом инфекционного эндокардита, выставленным на основании критериев DUKE. Более половины из них принимали наркотики внутривенно (43 человека), у большинства обнаружено поражение трикуспидального клапана (ТК) сердца. Пять человек страдали хронической болезнью почек с необходимостью проведения гемодиализа. У 11 больных выявлен ревматический порок митрального и аортального клапанов сердца (МК и АК), у пяти из них проведено протезирование клапанов. Врожденные пороки сердца диагностированы у 4-х пациентов, пролапс митрального клапана 2-3 степени с систолическим шумом - у 2-х человек, у 4-х пациентов обнаружены атеросклеротические изменения МК и АК, у 2-х больных - эндокардит с поражением ТК развился на фоне тяжелой вирусной инфекции. У большинства пациентов заболевание протекало по типу сепсиса с выраженными инфекционно - токсическими проявлениями (острое течение ИЭ, оИЭ), с клиническими симптомами одно- или двусторонней пневмонии с развитием деструктивных процессов в легких и тяжелой дыхательной недостаточности, септическими тромбоэмболиями мозговых сосудов с нередким развитием гнойного менингита, менингоэнцефалита, у одного больного развился отек головного мозга с летальным исходом. Подострое течение ИЭ (п/оИЭ) без типичных проявлений сепсиса наблюдалось у 20 человек. Основными предрасполагающими факторами развития п/оИЭ были врожденные и приобретенные пороки сердца - АК, МК, а также протезированные клапаны. При посевах крови у 26 больных выявлены Staphylococcus aureus и Streptococcus viridans, у 9 человек - другие возбудители (энтеробактерии, клебсиеллы, кишечная и синегнойная палочки) либо инфекционный агент не был обнаружен вследствие получаемой ранее антибактериальной терапии на амбулаторном этапе.We examined 64 patients (21 women and 43 men) aged 19 to 76 years who were hospitalized in therapeutic clinics of Novokuznetsk with a diagnosis of infective endocarditis, based on the DUKE criteria. More than half of them took intravenous drugs (43 people), the majority showed damage to the tricuspid valve (TC) of the heart. Five people suffered from chronic kidney disease with hemodialysis. In 11 patients, rheumatic defect of the mitral and aortic valves of the heart (MK and AK) was revealed, in five of them valve prosthetics was performed. Congenital heart diseases were diagnosed in 4 patients, mitral valve prolapse of the 2nd and 3rd degree with systolic murmur - in 2 people, atherosclerotic changes in MK and AK were found in 4 patients, endocarditis with TC lesion developed in 2 patients against a background of severe viral infection. In most patients, the disease proceeded as a sepsis with severe infectious and toxic manifestations (acute course of IE, OIE), with clinical symptoms of unilateral or bilateral pneumonia with the development of destructive processes in the lungs and severe respiratory failure, septic thromboembolism of cerebral vessels with frequent development of purulent meningitis , meningoencephalitis, one patient developed cerebral edema with a fatal outcome. A subacute course of IE (p / oIE) without typical manifestations of sepsis was observed in 20 people. The main predisposing factors for the development of p / oIE were congenital and acquired heart defects - AK, MK, as well as prosthetic valves. During blood cultures in 26 patients, Staphylococcus aureus and Streptococcus viridans were detected, in 9 people - other pathogens (enterobacteria, Klebsiella, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa) or an infectious agent was not detected due to previously received antibacterial therapy on an outpatient basis.

Все обследованные лица были русскими. Забор крови и молекулярно-генетические исследования осуществляли на основании информированного согласия пациентов.All persons examined were Russian. Blood sampling and molecular genetic studies were performed based on the informed consent of the patients.

Математическую обработку результатов исследований проводили с помощью пакетов статистических программ InStatll, Microsoft Excel. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05. Соответствие распределения частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга определяли стандартно при помощи программы http://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.html. Достоверность различий в распределении частот аллелей и генотипов между группами обследованных лиц оценивали двусторонним точным критерием Фишера. Определяли непараметрический коэффициент корреляции Спирмена (r), относительный риск заболевания по искомому аллелю/генотипу вычисляли как соотношение шансов (OR-odds ratio).Mathematical processing of the research results was carried out using the statistical software packages InStatll, Microsoft Excel. The critical level of significance in testing statistical hypotheses was assumed to be 0.05. The correspondence of the frequency distribution of genotypes to Hardy-Weinberg equilibrium was determined standardly using the program http://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.html. The significance of differences in the distribution of allele and genotype frequencies between groups of examined individuals was evaluated using Fisher's two-sided exact criterion. The non-parametric Spearman correlation coefficient (r) was determined, the relative risk of the disease according to the desired allele / genotype was calculated as the odds ratio (OR-odds ratio).

Результаты.Results.

Летальный исход в клинике при ИЭ составил 10,6% (7 умерших и 59 выживших) и наблюдался только у пациентов с острым течением заболевания. Среди них умершие составили 19% (7 умерших и 36 выживших). В соответствии с расчетами, распределение частот генотипов полиморфизма MTHFR^{Ala222Val(С677Т)} в исследуемых группах не отличалось от равновесия Харди-Вайнберга - при ИЭ (χ²=3,79; р=0,0514), оИЭ (χ²=2,47; p>0,05), п/оИЭ (χ²=2,22; р>0,05) и сепсисе (χ=2,57; р>0,05). Генотипирование по локусу MTHFR^{Ala222Val(C677T)} показало, что минорный аллель MTHFR^222Val(677T) является рисковым в отношении развития оИЭ (табл. 1), обусловливая 2-кратный риск заболевания при гомо- либо гетерозиготном носительстве (доминантная модель наследования). Его носительство предрасполагает также и к летальному исходу у пациентов с ИЭ (OR=4,06 р=0,0176, табл. 2). В случае доминантной модели наследования при гомо- либо гетерозиготном носительстве аллеля MTHFR ^222Val(677T) риск неблагоприятного исхода оказался очень высоким - более чем 10-кратным относительно гомозигот дикого типа MTHFR^{Ala222Ala(C677C)}. Гомозиготное носительство нормального генотипа, MTHFR^{Ala222Ala(C677C)}, не было обнаружено среди умерших больных с диагнозом ИЭ в обследованной выборке, что может подтверждать его защитную функцию.The lethal outcome in the clinic with IE was 10.6% (7 deaths and 59 survivors) and was observed only in patients with acute course of the disease. Among them, the deceased accounted for 19% (7 deceased and 36 survivors). According to the calculations, the frequency distribution of the genotypes of the MTHFR ^Ala222Val polymorphism ^(C677T) in the studied groups did not differ from the Hardy-Weinberg equilibrium - with IE (χ ² = 3.79; p = 0.0514), OIE (χ ² = 2.47 ; p> 0.05), p / oIE (χ ² = 2.22; p> 0.05) and sepsis (χ = 2.57; p> 0.05). Genotyping at the MTHFR locus ^{Ala222Val (C677T)} showed that the minor allele MTHFR ^{222Val (677T)} is risky for the development of OIE (Table 1), causing a 2-fold risk of disease in case of homo- or heterozygous carriage (dominant inheritance model). His carriage also predisposes to death in patients with IE (OR = 4.06 p = 0.0176, table. 2). In the case of a dominant inheritance model with homo- or heterozygous carriage of the MTHFR ^{222Val (677T)} allele, the risk of an adverse outcome was very high - more than 10-fold relative to wild-type MTHFR ^{Ala222Ala homozygotes (C677C)} . A homozygous carriage of the normal genotype, MTHFR ^{Ala222Ala (C677C)} , was not found among deceased patients diagnosed with IE in the examined sample, which may confirm its protective function.

Среди 7 умерших пациентов с оИЭ была всего одна женщина с генотипом MTHFR^Ala222Val ^(С677Т), поэтому было установлено, что риск неблагоприятного исхода более вероятен для мужчин-носителей генотипов MTHFR^{Ala222Val(677T)}/MTHFR^{Val222Val(T677T)} с установленным диагнозом ИЭ, и он является 12,33-кратным в сравнении с мужчинами-гомозиготами MTHFR^{Ala222Ala(C677T)}. Также у мужчин выявлена положительная корреляционная связь между носительством аллеля MTHFR^222Val(677T) и летальным исходом (r=0,4027, р=0,0074, обследовано 43 пациента с ИЭ) и, соответственно, отрицательная связь между носительством этого аллеля и благоприятным исходом (r=-0,3074, р=0,0449, 43 пациента с ИЭ). Сообразно, между носительством аллеля MTHFR^Ala222(C677) и благоприятным исходом ИЭ обнаружена положительная корреляционная связь такой же величины (r=0,4027, р=0,0074, 43 пациента с ИЭ) и отрицательная связь между носительством данного аллеля, MTHFR^Ala222(C677), и летальным исходом (r=-0,3074, р=0,0449, 43 пациента с ИЭ).Among the 7 deceased patients with OIE, there was only one woman with the MTHFR ^Ala222Val genotype ^(C677T) , therefore, it was found that the risk of an adverse outcome is more likely for male carriers of the MTHFR ^{Ala222Val (677T)} / MTHFR ^{Val222Val (T677T) genotypes} with an established diagnosis of IE, and it is 12.33-fold in comparison with male homozygous MTHFR ^{Ala222Ala (C677T)} . Men also showed a positive correlation between carriage of the MTHFR ^222Val allele ^(677T) and death (r = 0.4027, p = 0.0074, 43 patients with IE were examined) and, accordingly, a negative relationship between carriage of this allele and a favorable outcome (r = -0.3074, p = 0.0449, 43 patients with IE). Accordingly, between the carriage of the MTHFR ^Ala222 allele ^(C677) and a favorable outcome of IE, a positive correlation was found of the same magnitude (r = 0.4027, p = 0.0074, 43 patients with IE) and the negative relationship between carriage of this allele, MTHFR ^{Ala222 ( C677)} , and fatal outcome (r = -0.3074, p = 0.0449, 43 patients with IE).

Таким образом, локус MTHFR ^{Ala222Val(C677T)} связан с риском развития и исходом инфекционного эндокардита.Thus, the MTHFR ^Ala222Val locus ^(C677T) is associated with a risk of development and outcome of infectious endocarditis.

Примечание: В таблице 1,2 представлено число вариантов генотипов/аллелей в абсолютном значении и в круглых скобках в процентах (частота встречаемости); (р) - показатель статистической достоверности разницы частот генотипов/аллелей и OR - подстрочно указывается сравниваемый столбец; OR - со отношение шансов (риск развития); в квадратных скобках - 95%-доверительный интервал.Note: Table 1.2 shows the number of variants of genotypes / alleles in absolute value and in parentheses as a percentage (frequency of occurrence); (p) - an indicator of statistical reliability of the difference in the frequencies of genotypes / alleles and OR - the compared column is indicated interlinearly; OR - odds ratio (risk of development); in square brackets is the 95% confidence interval.

В соответствии с рекомендациями Р. Флетчера и соавт. [Р. Флетчер, С. Флетчер, Э. Вагнер. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины. «Медиа Сфера», М., 1998, 352 с. - стр. 66] для оценки чувствительности, специфичности, распространенности и прогностической ценности предлагаемого нами способа прогнозирования исхода инфекционного эндокардита полученные нами данные были проанализированы с помощью четырехпольной таблицы 3.In accordance with the recommendations of R. Fletcher et al. [R. Fletcher, S. Fletcher, E. Wagner. Clinical Epidemiology. The basics of evidence-based medicine. “Media Sphere”, M., 1998, 352 p. - p. 66] to assess the sensitivity, specificity, prevalence and prognostic value of our proposed method for predicting the outcome of infectious endocarditis, our data were analyzed using a four-field table 3.

Доля лиц с положительным результатом теста в популяции с изучаемым заболеванием, т.е. доля лиц-носителей генотипа MTHFR ^{Ala222Ala(С677С)} среди выживших пациентов оказалась равной 18/(18+19)=0,48 (48%), а носителей аллеля MTHFR ^{Ala222 (С677)} - 53/53+21=0,72 (72%) (чувствительность предлагаемого теста). Доля лиц с отрицательным результатом теста, т.е. доля лиц-носителей генотипов MTHFR ^{Ala222Val(C677T)}/MTHFR^{Val222Ala(T677T)} среди умерших составила 6/(0+6)=1,0 (100%), носителей аллеля MTHFR ^222Val(^677T) - 8/8+4=0,67 (67%) (специфичность предлагаемого теста). Распространенность защитного генотипа MTHFR ^Ala222Ala ^(С677С) среди всех обследованных мужчин с ИЭ составила (18+0)/(18+0+19+6)=0,42 (42%), среди выживших - 18/(18+19)=0,49 (49%), среди умерших - 0/(0+6)=0 (0%). Прогностическая ценность положительного результата теста (вероятность выживания при носительстве генотипа MTHFR ^{Ala 222Ala(С677С)} равна 18/(18+0)=1 (100%).The proportion of individuals with a positive test result in the population with the studied disease, i.e. the proportion of individuals carrying the MTHFR ^{Ala222Ala (C677C)} genotype among surviving patients was 18 / (18 + 19) = 0.48 (48%), and the carriers of the MTHFR ^{Ala222 (C677)} allele was ^53/53 + 21 = 0.72 ( 72%) (sensitivity of the proposed test). The proportion of individuals with a negative test result, i.e. the proportion of carriers of the MTHFR ^{Ala222Val (C677T)} / MTHFR ^{Val222Ala (T677T) genotypes} among the dead was 6 / (0 + 6) = 1.0 (100%), carriers of the MTHFR ^222Val ( ^677T ) allele - ^8/8 + 4 = 0 , 67 (67%) (specificity of the proposed test). The prevalence of the protective genotype MTHFR ^Ala222Ala ^(С677С) among all examined men with IE was (18 + 0) / (18 + 0 + 19 + 6) = 0.42 (42%), among survivors - 18 / (18 + 19) = 0.49 (49%), among the dead - 0 / (0 + 6) = 0 (0%). The prognostic value of a positive test result (the probability of survival with the carriage of the MTHFR ^{Ala 222Ala (C677C) genotype} is 18 / (18 + 0) = 1 (100%).

Прогностическая ценность отрицательного результата теста (вероятность летального исхода при носительстве генотипов MTHFR ^Ala222Val/MTHFR ^Val222Val равна 6/(19+6)=0,24 (24%).The prognostic value of a negative test result (the probability of death with the carriage of the MTHFR ^Ala222Val / MTHFR ^{Val222Val genotypes} is 6 / (19 + 6) = 0.24 (24%).

Следовательно, предлагаемый способ прогнозирования исхода инфекционного эндокардита высокоспецифичен и с максимальной прогностической ценностью положительного результата позволяет определять вероятность выживания при носительстве генотипа MTHFR ^{Ala222Ala(С677С)} у пациентов мужского пола с ИЭ и может быть использован в качестве теста прогноза исхода заболевания на первых этапах клинического обследования.Therefore, the proposed method for predicting the outcome of infectious endocarditis is highly specific and with a maximum prognostic value of a positive result allows us to determine the probability of survival when the MTHFR ^{Ala222Ala (C677C)} genotype is ^carried in male patients with IE and can be used as a test for predicting the outcome of the disease at the first stages of a clinical examination.

Клинический пример №1.Clinical example No. 1.

Пациент Т., 31 год, поступил с жалобами на повышение температуры с ознобами, до 38°С, снижение массы тела, кашель с гнойной мокротой, боли в мышцах, суставах. В течение 2-3 недель употреблял наркотики внутривенно (героин, соль). При обследовании выявлен инфекционный эндокардит с поражением трикуспидального клапана (ТК), с формированием недостаточности клапана 3 степени, миокардит. Двусторонняя деструктивная пневмония. Диагноз подтвержден неоднократными посевами крови на гемокультуру (выявлен золотистый стафилококк), ЭХО КГ, рентгенологическими исследованиями. Получал антибактериальную терапию (кубицин, зивокс), иммуноглобулин человека, верошпирон, лизиноприл, бисопролол, сорбифер. Значительного эффекта от лечения не было. Госпитализирован в кардиологическое отделение МБЛПУ ГКБ №29. В анамнезе: гепатит с 1998 г., туберкулез - отрицает, ВИЧ выявлена 11.03.2015 г. Прием наркотиков внутривенно с 1998 г. (героин, соли). Курит в течение 10 лет, по 1/2 пачки в сутки. Простудные заболевания 3-4 раза в год. Хр. заболевания отрицает. При осмотре состояние тяжелое за счет интоксикационного синдрома, сердечной и дыхательной недостаточности. Температура тела 38°С. Кожа умеренной влажности, бледная, отеков нет, чистая. Пониженного питания. Грудная клетка участвует в дыхании. В легких дыхание ослаблено в подлопаточных областях, мелкопузырчатые, влажные хрипы, частота дыхания 26-28 в минуту. Cor тоны глухие ритмичные, частота сердечных сокращений 110 ударов в минуту, артериальное давление 110/70 мм. рт.ст. Верхушечный толчок в пятом межреберье на 2 см кнаружи от левой средней линии, перкуторно границы сердца расширены влево. Живот мягкий, безболезненный. Печень выступает из-под края реберной дуги на 3 см, селезенка - на 2 см. Стул, диурез в норме. При обследовании выявлены антитела к ВИЧ, вирусному гепатиту С, не выявлены к трепонеме, вирусному гепатиту В. Общий анализ крови - гемоглобин 73-97-119 г/л, эритроциты 2,5-3,4-5,7, лейкоциты - 22,8-9,2-6,7, палочкоядерные нейтрофилы 6-4-20, лимфоциты - 49-38-42, тромбоциты 483-503-280,0, СОЭ 61-48-31 мм/ч. Общий анализ мочи - удельный вес 1014, белок 0,165 г/л, лейкоциты, эритроциты - 1-2 в поле зрения, цилиндры гиалиновые 1 -2 в поле зрения. Кровь на стерильность и гемокультуру трехкратно - выявлены Staphylococcus aureus, Candida albicans. УЗИ брюшной полости и почек - гепатос-пленомегалия, диффузные изменения в паренхиме почек. ЭХО КГ - на ТК гипоэхогенный очаг вегетаций, регургитация - 3 степени, перикардит, признаков легочной гипертензии не выявлено, фракция выброса левого желудочка - 61%. ЭКГ - синусовая тахикардия 108 в мин, замедление проведения по правой ножке пучка Гиса. Флюорография органов грудной клетки - двусторонняя септическая пневмония с распадом. 20.04.15 г. развилось массивное легочное кровотечение. Лечение: цефтриаксон, зивокс, гептрал, эуфиллин, ванкомицин, максипим, эреспал, кардиомагнил, фуросемид, инфузионная, гемастатическая терапия, переливалась одногруппная кровь. Результаты генотипирования по полиморфному локусу MTHFR ^{Ala222Val (С677Т)}: выявлен генотип MTHFR ^{Ala222Ala(С677С)}, указывающий на прогнозирование благоприятного исхода заболевания. Пациент выписан с улучшением на дальнейшее амбулаторное лечение: нормализовалась температура тела, кашель стал редким, гемодинамика стабильна. Рекомендована консультация кардиохирурга для решения вопроса о протезировании трикуспидального клапана. Диагноз: Ангиогенный сепсис. В 20 IV В. Первичный эндокардит с поражением трикуспидального клапана. Выраженная трикуспидальная недостаточность. ХСН 2Б, ФК 2. Двусторонняя септическая деструктивная пневмония. Дыхательная недостаточность 2 степени. Хронический вирусный гепатит С умеренной степени активности. Массивное легочное кровотечение. Анемия 2 степени. Токсическая нефропатия. Клинический пример №2.Patient T., 31 years old, was admitted with complaints of fever with chills, up to 38 ° C, weight loss, cough with purulent sputum, pain in the muscles, joints. For 2–3 weeks he used intravenous drugs (heroin, salt). Examination revealed infectious endocarditis with damage to the tricuspid valve (TC), with the formation of valve insufficiency of 3 degrees, myocarditis. Bilateral destructive pneumonia. The diagnosis was confirmed by repeated blood cultures for blood culture (Staphylococcus aureus was detected), ECHO KG, and X-ray studies. He received antibacterial therapy (cubicin, zivox), human immunoglobulin, veroshpiron, lisinopril, bisoprolol, sorbifer. There was no significant effect of treatment. He was hospitalized in the cardiology department of MBLPU GKB No. 29. History: hepatitis since 1998, tuberculosis - denied, HIV was detected on March 11, 2015. I have been taking intravenous drugs since 1998 (heroin, salts). Smokes for 10 years, 1/2 pack per day. Colds 3-4 times a year. Chr. denies the disease. On examination, the condition is serious due to intoxication syndrome, heart and respiratory failure. Body temperature 38 ° C. The skin is of moderate humidity, pale, no swelling, clean. Low power. The chest is involved in breathing. In the lungs, breathing is weakened in the subscapular areas, fine-bubbly, moist rales, respiratory rate 26-28 per minute. Cor tones are muffled, rhythmic, heart rate 110 beats per minute, blood pressure 110/70 mm. Hg The apical impulse in the fifth intercostal space is 2 cm outward from the left midline, the percussion borders of the heart are extended to the left. The abdomen is soft, painless. The liver protrudes from the edge of the costal arch by 3 cm, the spleen - by 2 cm. Stool, diuresis is normal. The examination revealed antibodies to HIV, viral hepatitis C, not detected to treponem, viral hepatitis B. General blood test - hemoglobin 73-97-119 g / l, red blood cells 2.5-3.4-5.7, white blood cells - 22 , 8-9.2-6.7, stab neutrophils 6-4-20, lymphocytes 49-38-42, platelets 483-503-280.0, ESR 61-48-31 mm / h. Urinalysis - specific gravity 1014, protein 0.165 g / l, white blood cells, red blood cells - 1-2 in the field of view, hyaline cylinders 1 -2 in the field of view. Blood for sterility and blood culture three times - identified by Staphylococcus aureus, Candida albicans. Ultrasound of the abdominal cavity and kidneys - hepatos-plenomegaly, diffuse changes in the renal parenchyma. ECHO KG - on the TC hypoechoic focus of vegetation, regurgitation - 3 degrees, pericarditis, no signs of pulmonary hypertension were detected, ejection fraction of the left ventricle - 61%. ECG - sinus tachycardia 108 per min, slowing down the right bundle of His along the right leg. Chest x-ray - bilateral septic pneumonia with disintegration. 04/20/15, developed massive pulmonary hemorrhage. Treatment: ceftriaxone, zivox, heptral, aminophylline, vancomycin, maxipim, erespal, cardiomagnyl, furosemide, infusion, hemostatic therapy, single-group blood was transfused. ^Genotyping results for the polymorphic locus MTHFR ^{Ala222Val (С677Т)} : the genotype MTHFR ^{Ala222Ala (С677С)} was identified, indicating the prediction of a favorable outcome of the disease. The patient was discharged with an improvement for further outpatient treatment: body temperature returned to normal, coughing became rare, and hemodynamics was stable. A consultation of a cardiac surgeon is recommended to resolve the issue of tricuspid valve prosthetics. Diagnosis: Angiogenic sepsis. In 20 IV C. Primary endocarditis with damage to the tricuspid valve. Severe tricuspid insufficiency. CHF 2B, FC 2. Bilateral septic destructive pneumonia. Respiratory failure 2 degrees. Chronic viral hepatitis C moderate activity. Massive pulmonary hemorrhage. Anemia of the 2nd degree. Toxic nephropathy. Clinical example No. 2.

Пациент Ф., 37 лет, госпитализирован в экстренном порядке в кардиологическое отделение с жалобами на одышку, отеки на ногах, слабость, повышение температуры до 37,5°С. В анамнезе внутривенное употребление наркотиков в течение 7-8 лет (ханка, героин), лечение в отделении пульмонологии с диагнозом двусторонней пневмонии, выявлена ВИЧ-инфекция. При поступлении состояние тяжелое, обусловлено сердечной недостаточностью. В сознании. Пониженного питания. Выраженные плотные отеки на ногах. В легких дыхание ослаблено в подлопаточных областях, хрипов нет, частота дыхания 26 в минуту, лежа - усиление одышки до 34 в минуту. Тоны сердца глухие, ритмичные, частота сердечных сокращений 120 ударов в минуту, систолический шум в точке трехстворчатого клапана, верхушечный толчок в 5-м межреберье на 2 см кнаружи от левой среднеключичной линии. Артериальное давление 110/70 мм рт.ст. Язык влажный, чистый. Живот мягкий, безболезненный. Печень выступает из-под края реберной дуги на 7 см, селезенка - на 3 см. Физиологические отправления в норме. При обследовании: общий анализ крови - гемоглобин 177 г/л, эритроциты 5,9, лейкоциты - 11,2, палочкоядерные нейтрофилы 10, сегментоядерные нейтрофилы 72, тромбоциты 170, СОЭ 17 мм/ч. Биохимический анализ крови: сахар 9,39, мочевина 10,46, креатинин 67, билирубин 22,2, АЛТ 48,0, ACT 64, СРБ 12 мг/л, К 4,97, Na 141,2, АЧТВ 28,0, фибриноген 4,0. Общий анализ мочи: удельный вес 1007, белок 2,04 г/л, лейкоциты - 12-15 в поле зрения. ЭХО КГ: сократительная способность левого желудочка удовлетворительная - 59%, ТК - регургитация 3 степени, створки уплотнены, атипичное движение межжелудочковой перегородки, выраженная легочная гипертензия, расширены правые отделы сердца, недостаточность трикуспидального клапана 3 степени. УЗИ - гепатоспленомегалия, диффузные изменения паренхимы почек. Посев крови на стерильность №3 - отрицательный. Rn-ОГК: кардиомегалия, инфильтрация в S 8.9 справа, двусторонний гидроторакс. ЭКГ - синусовая тахикардия 90 ударов в мин, перегрузка, дилатация правых отделов сердца, дистрофические изменения в миокарде. Результаты генотипирования по полиморфному локусу MTHFR ^Ala222Val ^(С677Т) _: выявлен генотип MTHFR ^{Ala222Val (С677Т)}: указывающий на прогнозирование неблагоприятного исхода заболевания. Проводилось лечение: эналаприл 2,5 мг в сутки, фуросемид 40 мг, верошпирон 25 мг, аспирин 25 мг, лазикс внутривенно 60 мг, цефтри-аксон 2,0 внутривено капельно №2 раза в день. На фоне лечения положительной динамики нет, одышка в покое, диффузный цианоз, выраженная гипотония, тахикардия, частота сердечных сокращений до 130 в мин, АД 80\40-60\40 мм. рт.ст, к лечению добавлен дофамин, дексаметазон внутривенно капельно - с кратковременным эффектом. На 36 день госпитализации на фоне нарастающей сердечно-легочной недостаточности пациент умер.Patient F., 37 years old, was hospitalized on an emergency basis in the cardiology department with complaints of shortness of breath, swelling on the legs, weakness, fever up to 37.5 ° C. A history of intravenous drug use for 7-8 years (hunk, heroin), treatment at the pulmonology department with a diagnosis of bilateral pneumonia, revealed HIV infection. Upon admission, the condition is serious, due to heart failure. In the mind. Low power. Severe dense swelling on the legs. In the lungs, breathing is weakened in the subscapular areas, there are no wheezing, respiratory rate is 26 per minute, while lying down - increased shortness of breath to 34 per minute. Heart sounds are muffled, rhythmic, heart rate of 120 beats per minute, systolic murmur at the tricuspid valve point, apical impulse in the 5th intercostal space 2 cm outward from the left midclavicular line. Blood pressure 110/70 mm Hg The tongue is wet, clean. The abdomen is soft, painless. The liver protrudes from the edge of the costal arch by 7 cm, the spleen - by 3 cm. Physiological administration is normal. During the examination: a complete blood count - hemoglobin 177 g / l, erythrocytes 5.9, leukocytes 11.2, stab neutrophils 10, segmented neutrophils 72, platelets 170, ESR 17 mm / h. Biochemical analysis of blood: sugar 9.39, urea 10.46, creatinine 67, bilirubin 22.2, ALT 48.0, ACT 64, CRP 12 mg / L, K 4.97, Na 141.2, APTT 28.0 fibrinogen 4.0. Urinalysis: specific gravity 1007, protein 2.04 g / l, white blood cells - 12-15 in the field of view. ECHO KG: left ventricular contractility is satisfactory - 59%, TK - regurgitation of 3 degrees, cusps are condensed, atypical movement of the interventricular septum, severe pulmonary hypertension, right heart sections are enlarged, tricuspid valve insufficiency is 3 degrees. Ultrasound - hepatosplenomegaly, diffuse changes in the renal parenchyma. Blood culture for sterility No. 3 is negative. Rn-OGC: cardiomegaly, infiltration in S 8.9 on the right, bilateral hydrothorax. ECG - sinus tachycardia of 90 beats per minute, overload, dilation of the right heart, dystrophic changes in the myocardium. ^Genotyping results for the polymorphic locus MTHFR ^Ala222Val ^(С677Т) _: genotype MTHFR ^{Ala222Val (С677Т) was revealed} : indicating the prediction of an unfavorable outcome of the disease. The treatment was carried out: enalapril 2.5 mg per day, furosemide 40 mg, veroshpiron 25 mg, aspirin 25 mg, lasix intravenously 60 mg, ceftri-axon 2.0 intravenous drip No. 2 times a day. There are no positive dynamics during treatment, shortness of breath at rest, diffuse cyanosis, severe hypotension, tachycardia, heart rate up to 130 per minute, blood pressure 80 \ 40-60 \ 40 mm. Hg, dopamine is added to the treatment, dexamethasone is intravenously drip - with a short-term effect. On the 36th day of hospitalization against the background of increasing cardiopulmonary insufficiency, the patient died.

Диагноз: Первичный инфекционный эндокардит, подострое течение с поражением трикуспидального клапана. Недостаточность трикуспидального клапана. Хроническая сердечная недостаточность 2Б 3 стадии. Наркомания. В20. Пневмония в S8-9 справа. Двусторонний гидроторакс.Отек легких. Отек головного мозга, с вклинением ствола. Полиорганная недостаточность.Diagnosis: Primary infective endocarditis, subacute course with damage to the tricuspid valve. Tricuspid valve insufficiency. Chronic heart failure 2B 3 stages. Addiction. IN 20. Pneumonia in S8-9 on the right. Bilateral hydrothorax. Pulmonary edema. Cerebral edema, with stem penetration. Multiple organ failure.

Клинический пример №3.Clinical example No. 3.

Пациент К, 27 лет, поступил в отделение с жалобами на одышку смешанного характера в покое, усиливающуюся при минимальной физической нагрузке, приступообразный кашель с мокротой слизистого характера и с примесью алой крови, боль в грудной клетке слева при движении, повышение температуры тела до 38°С, озноб. Заболел остро 2 недели назад, лечился самостоятельно: жаропонижающие препараты, антибиотики - без эффекта, госпитализирован в стационар по месту жительства в г. Прокопьевск, где проводилось лечение по поводу внебольничной пневмонии в нижней доле слева. На фоне лечения сохранялась лихорадка с ознобом, усилилась одышка, появилось кровохаркание, боль в грудной клетке. Самостоятельно покинул отделение. Обратился в санпропускник №2 1-й больницы г. Новокузнецка. Госпитализирован в отделение терапии. Из анамнеза выяснено: не работает, употребляет наркотики внутривенно с 2008 г, В20 с 2007 г., специфического лечения не получает, Хронический бронхит много лет. При осмотре: состояние тяжелое за счет интоксикации, дыхательной недостаточности. Пониженного питания Р 160, вес 50 кг, бледные кожные покровы. В легких дыхание везикулярное, ослаблено в подлопаточной области слева, влажные хрипы, частота дыхания 22-24 в мин., SPO2 90%, тоны сердца приглушены, ритмичные, частота сердечных сокращений 118 ударов в минуту, АД 100/70 мм рт.ст, живот безболезненный, увеличена печень, отеков нет. Физиологические отправления в норме. При обследовании: общий анализ крови - Нв 95-60 г/л, эритроциты 3,39-2,, лейкоциты 23.5, палочкоядерные нейтрофилы 10, сегментоядерные нейтрофилы 72. Биохимический анализ крови: мочевина 10,46, креатинин 67, билирубин 24,0, белок 57,7 г/л, альбумины 24,2 г/л, АЛТ 3,11, ACT 1,48, СРБ 30,5 мг/л, сахар 6,6 ммоль/л. Найдены антитела к вирусному гепатиту С.Т help (CD 3+CD4+) - 44,.955%. Посев крови на флору №3 - роста микрофлоры нет.Анализ мокроты на флору: выделена Candida albicans, Klebsiella pneumonia, Esherichia coli. Общий анализ мочи: уд вес 1030, лейкоциты 25 в поле зрения, эритроциты 18 в поле зрения, цилиндры гиалиновые 3-4 в поле зрения.Patient K, 27 years old, was admitted to the ward with complaints of shortness of breath of mixed nature at rest, aggravated with minimal physical exertion, paroxysmal cough with sputum of mucous character and with an admixture of red blood, chest pain on the left when moving, fever up to 38 ° C, chills. He became ill sharply 2 weeks ago, was treated independently: antipyretic drugs, antibiotics - no effect, was hospitalized in a hospital at the place of residence in Prokopyevsk, where he was treated for community-acquired pneumonia in the lower lobe on the left. During treatment, fever with chills persisted, shortness of breath intensified, hemoptysis, pain in the chest appeared. Left the department on his own. He turned to the sanitary inspection room No. 2 of the 1st hospital in Novokuznetsk. Hospitalized in the therapy department. From the anamnesis it was found out: it does not work, has been using intravenous drugs since 2008, B20 since 2007, has not received specific treatment, Chronic bronchitis for many years. On examination: a serious condition due to intoxication, respiratory failure. Low nutrition P 160, weight 50 kg, pale skin. In the lungs, vesicular breathing, weakened in the subscapular region on the left, moist rales, respiratory rate of 22-24 min, SPO2 90%, muffled heart sounds, rhythmic, heart rate of 118 beats per minute, blood pressure 100/70 mm Hg, the abdomen is painless, the liver is enlarged, there is no edema. Physiological administration is normal. During the examination: a general blood test - HB 95-60 g / l, red blood cells 3.39-2, white blood cells 23.5, stab neutrophils 10, segmented neutrophils 72. Biochemical blood test: urea 10.46, creatinine 67, bilirubin 24.0 , protein 57.7 g / l, albumin 24.2 g / l, ALT 3.11, ACT 1.48, CRP 30.5 mg / l, sugar 6.6 mmol / l. Antibodies to viral hepatitis C. Found help (CD 3 + CD4 +) - 44, .955%. Blood culture for flora No. 3 - no microflora growth. Sputum analysis for flora: Candida albicans, Klebsiella pneumonia, Esherichia coli isolated. General analysis of urine: beats weight 1030, white blood cells 25 in the field of view, red blood cells 18 in the field of view, 3-4 hyaline cylinders in the field of view.

ЭХО КГ. ВПС: бикуспидальный АК, кальциноз створок, стеноз 2 ст., регургитация 1 ст., дополнительное линейное подвижное образование на створке аортального клапана. УЗИ - в брюшной полости жидкость в небольшом количестве, гепатоспленомегалия, диффузные изменения паренхимы почек. Rn-ОГК: массивный двусторонний гидроторакс, больше слева. Компрессионные ателектазы базальных сегментов нижней доли правого легкого, нижней доли и язычковых сегментов верхней доли левого легкого. Малый гидроперикард.ECHO KG. CHD: bicuspid AK, sash calcification, stenosis 2 tbsp., Regurgitation 1 tbsp., Additional linear mobile formation on the aortic valve leaflet. Ultrasound - a small amount of fluid in the abdominal cavity, hepatosplenomegaly, diffuse changes in the renal parenchyma. Rn-OGK: massive bilateral hydrothorax, larger on the left. Compression atelectases of the basal segments of the lower lobe of the right lung, lower lobe and reed segments of the upper lobe of the left lung. Small hydropericardium.

MPT головного мозга: общая сообщающаяся гидроцефалия заместительного характера, лейкоареоз. ЭКГ - синусовая тахикардия 90 ударов в минуту, перегрузка, дилатация правых отделов сердца, дистрофические изменения в миокарде. Результаты генотипирования по полиморфному локусу MTHFR ^Ala222Val ^(С677Т): выявлен генотип MTHFR ^Val222Val ^(Т677Т), указывающий на прогнозирование неблагоприятного исхода заболевания. Проводилось лечение: эуфиллин, цефабол, амписид, сумамед, сорбифер, веропамил. На фоне лечения положительной динамики нет, одышка в покое, сохраняется лихорадка до фибрильных цифр, выраженная гипотония, АД 80\40-60\40 мм. рт.ст. На фоне нарастающей сердечно-легочной недостаточности пациент умер.MPT of the brain: general reported substitutional hydrocephalus, leukoaraiosis. ECG - sinus tachycardia 90 beats per minute, overload, dilation of the right heart, dystrophic changes in the myocardium. ^Genotyping results for the polymorphic locus MTHFR ^Ala222Val ^(С677Т) : the genotype MTHFR ^Val222Val ^(Т677Т) was identified, indicating the prediction of an unfavorable outcome of the disease. The treatment was carried out: aminophylline, cefabol, ampiside, sumamed, sorbifer, veropamil. Against the background of treatment, there are no positive dynamics, shortness of breath at rest, fever up to fibril digits, severe hypotension, blood pressure 80 \ 40-60 \ 40 mm. Hg Against the background of increasing cardiopulmonary failure, the patient died.

Диагноз: Наркомания. Ангиогенный сепсис. Септическая внебольничная пневмония в нижней доле слева, тяжелое течение. Гангренозный абсцесс нижней доли слева. Септический эмбол в верхней доле справа. Локальная тромбоэмболия в S 9 слева. Кровохаркание. Дыхательная недостаточность 3 степени. Интоксикационный синдром. Осумкованный плеврит. Анемия тяжелой степени. Инфекционный эндокардит аортального клапана. Вторичный нефрит. Полиорганная недостаточность.Diagnosis: Addiction. Angiogenic sepsis. Septic community-acquired pneumonia in the lower lobe on the left, severe course. Gangrenous abscess of the lower lobe on the left. Septic embolus in the upper lobe on the right. Local thromboembolism in S 9 on the left. Hemoptysis. Respiratory failure 3 degrees. Intoxication syndrome. Pleated pleurisy. Severe anemia. Infectious endocarditis of the aortic valve. Secondary jade. Multiple organ failure.

Claims

1. A method for predicting the outcome of infectious endocarditis, characterized in that venous blood samples are collected, genomic DNA is isolated, an allele-specific polymerase chain reaction is used to genotypic the MTHFR ^{Ala222Val (C677T)} polymorphic locus of the gene of the methylene tetrahydrofolate reductase ^Al group of people of the ^{Al group of type 22 of Alta22 of type A2} carriers of ^{type A2 (C677C)} predict a favorable outcome of the disease, carriers of the MTHFR ^{Ala222Val (C677T)} / MTHFR ^{Val222Val (T677T) genotypes} predict a 12.33-fold risk of death.

2. The method according to p. 1, characterized in that the risk group includes patients with a diagnosis of infectious endocarditis of Russian male ethnicity.