RU2669945C1 - Способ экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза - Google Patents
Способ экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2669945C1 RU2669945C1 RU2017144675A RU2017144675A RU2669945C1 RU 2669945 C1 RU2669945 C1 RU 2669945C1 RU 2017144675 A RU2017144675 A RU 2017144675A RU 2017144675 A RU2017144675 A RU 2017144675A RU 2669945 C1 RU2669945 C1 RU 2669945C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vital dye
- solution
- model system
- added
- chemiluminescence
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 33
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 claims abstract description 15
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 11
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims abstract description 10
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 claims abstract description 10
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000004448 titration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 claims description 15
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 5
- 241000207199 Citrus Species 0.000 claims 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 claims 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 abstract description 50
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 abstract description 5
- 230000003244 pro-oxidative effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 abstract description 5
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 abstract 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 abstract 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 abstract 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 6
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- -1 free radical lipid Chemical class 0.000 description 4
- 230000006950 reactive oxygen species formation Effects 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 208000001351 Epiretinal Membrane Diseases 0.000 description 3
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 3
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 3
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000000678 effect on lipid Effects 0.000 description 2
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 206010012688 Diabetic retinal oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010065319 Macular rupture Diseases 0.000 description 1
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 201000011190 diabetic macular edema Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003090 exacerbative effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- NEGYEDYHPHMHGK-UHFFFAOYSA-N para-methoxyamphetamine Chemical class COC1=CC=C(CC(C)N)C=C1 NEGYEDYHPHMHGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмохирургии, и может быть использовано для экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза. Для этого проводят сравнение железоиндуцированной хемилюминесценции модельной системы свободнорадикального окисления, в которую добавляют в терапевтических дозах исследуемый раствор витального красителя. В качестве модельной системы используют фосфатный буфер, включающий дистиллированную воду, KHPOи KCl, цитрат натрия и люминол. При этом в полученный раствор с рН 7,45 ед. добавляют куриный желток. Исследуемый раствор витального красителя добавляют путем титрования в модельную систему в соотношении 1:5 для развития процесса хемилюминесценции. По интенсивности хемилюминесценции судят о процессах перекисного окисления липидов, сходных по составу к липидам крови. О сохранности или времени сохранения антиоксидантных свойств раствора витального красителя в биологической среде судят по уменьшению медленной вспышки при добавлении раствора витального красителя в модельную систему, содержащую липиды куриного желтка. Изобретение позволяет повысить точность оценки качества витальных красителей, в том числе обладающих прооксидантной и антиоксидантной активностью, по показателям перекисного окисления липидов. 1 табл., 3 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмохирургии, и может быть использовано для оценки качества и биологической безопасности витального красителя для контрастирования заднего сегмента глаза. Использование изобретения повышает достоверность получаемого результата при оценке качества исследуемого красителя в биологических жидкостях.
Хирургия макулярных разрывов должна быть атравматичной и при этом требует особой деликатности. Витальные красители стали неотъемлемой частью при операциях на заднем сегменте глаза, особенно при макулярной хирургии (макулярные разрывы, эпиретинальные мембраны, диабетический макулярный отек). Так, с целью улучшения результатов хирургического лечения, был разработан и предложен метод усиления визуализации интравитреальных и преретинальных мембран и структур сетчатки - хромовитрэктомия. Способность красителей улучшать визуализацию внутриглазных структур облегчает и повышает безопасность хирургического вмешательства с минимизацией травмирования нейроэпителия сетчатки глаза. Внедрение в витреоретинальную хирургию красителей обеспечило более точную идентификацию и безопасное удаление оптически полупрозрачных тканей с улучшением качества зрения после оперативных вмешательств.
Стремление витреоретинальных хирургов максимально повысить эффективность хирургического лечения привело к изучению и внедрению в практику совершенно новой технологии интраоперационного контрастирования тончайших структур заднего сегмента глаза с помощью красителей - хромовйтрэктомии. Красителями называют соединения, обладающие способностью поглощать и преобразовывать световую энергию в видимой и ближних ультрафиолетовой и инфракрасной областях спектра. Поглощая часть световых лучей определенной длины волны, эти соединения становятся «цветными». Использование красителей обеспечивает лучшую визуализацию интраокулярных структур во время операции, а также безопасное удаление оптически полупрозрачных кортикальных слоев, внутренней пограничной мембраны (ВПМ) и эпиретинальных мембран.
В то же время процессы свободаорадакального окисления играют важную роль в патологии заднего сегмента глаза. Сетчатка, являясь тканью с высоким парциальным напряжением кислорода (70 мм. рт.ст.), очень уязвима к оксидативному стрессу (Whitehead A.J., Mares J.A., Boulton М.Е. et al., 2006). Одним из важных критериев при использовании медицинских изделий в хирургии витреоретинальной патологии является биологическая инертность без усугубления оксидативного стресса.
В связи с этим для оценки качества и биологической активности раствора окрашивающего для офтальмохирургии на сегодняшний день используется методика железоиндуцированной хемилюминесценции полученного витального раствора, по которой оценивают состояние свободаорадикальных процессов и антиокислительной активности свободнорадикального окисления. Для этого проводят исследования по определению интенсивности реакции перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активных форм кислорода (АФК) заявленного раствора в биологически активных веществах.
При оценке качества витального красителя регистрируют железоиндуцируемую хемилюминесценцию модельной системы, оценивают состояние свободаорадикальных процессов и антиокислительной активности (ОАО) окрашивающего раствора в модельных системах in vitro с использованием прибора «Хемилюминометр ХЛ-003».
Для этого исследуемый препарат разводят в физиологическом растворе так, чтобы концентрация была сопоставима с терапевтической дозой. Отбирают от 0,005 до 0,1 мл и добавляют в тест-системы, в которых ишийируют реакции свободно-радикального окисления (СРО) - образование активных форм кислорода и свободно-радикальное перекисное окисление липидов - процессы, наиболее часто встречающиеся в организме.
В качестве модельной системы для оценки состояния свободаорадикальных процессов и антиокислительной активности (ОАО) используют 20 мл фосфатного буфера (КН2РО4 - 20mM, KCl - 105 тМ), с цитратом (50 тМ) и люминолом (10-5 М). Состав буфера: 2,72 г KH2PO4, 7,82 г KCL, цитрата натрия C6H807N3*5,5H2O на 1 литр дистиллированной воды. Величину рН получаемого раствора доводят до заданной величины 7,45 ед. титрованием насыщенным раствором КОН и добавляют 0,2 мл маточного раствора люминола (10-5 М). Образование АФК инициируют введением 1 мл 50 тМ раствора инициатора, сернокислого железа (FeSO47H2O). Перед измерением свечения исследуемый объем помещают в светоизолированную камеру прибора и ведут запись хемилюминесценции (ХЛ) при комнатной температуре в течение 5 минут. В готовый буфер добавляют исследуемый раствор в зависимости от терапевтической дозы, свечение индуцируют добавлением раствора сернокислого железа.
Исследования проводят на хемилюминометре ХЛ -003, настроенном по программе: «Мешалка - быстро», «Термостат - выключен», «Время измерения - 5 минут». Прибор ХЛ-003 на дисплее компьютера выводит кривые записи хемилюминесценции, отражающие интенсивность процессов свечения изучаемого препарата, зависящую, в свою очередь, от скорости реакций свободнорадикального окисления липидов.
Данный способ известен из патента RU №2533216, G01N 33/48, G01N 33/52, опубл. 20.11.14. Это решение принято в качестве прототипа.
Данный известный способ как технический прием широко используется для оценки различных биологических растворов (RU 2278382, 2165620, 2192009).
Особенностью известного способа является то, что он позволяет определить светосумму и максимальную светимость при железоиндуцированной хемилюминесценции. Результаты средних значений светосуммы и максимальной интенсивности свечения позволяют определить амплитуду максимального свечения I мах. и интегральные параметры люминол-зависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) в модельной системе и в индуцированной системе, свидетельствующие о подавлении генерации АФК. Данный способ позволяет установить присутствие в растворе антиоксидантных свойств.
Однако, данный способ оценки качества биологических растворов не позволяет выявить степень сохранения или длительности сохранения антиоксидантных свойств раствора в биологической среде.
Настоящее изобретение направлено на достижение технического результата, заключающегося в повышении точности оценки качества витальных красителей, в том числе обладающих про- и антиоксидантной активностью, по показателям перекисного окисления липидов.
Указанный технический результат достигается тем, что в способе экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза, заключающемся в проведении сравнения железоиндуцированной хемилюминесценции модельной системы свободнорадикального окисления, содержащей фосфатный буфер, и той же модельной системы, в которую добавляют в терапевтических дозах исследуемый раствор витального красителя, в качестве модельной системы используют фосфатный буфер, включающий в себя дистиллированную воду, KH2PO4 и KCl, к которым добавлены цитрат натрия и люминол, при этом в полученный раствор с рН 7,45 ед. добавляют куриный желток, а исследуемый раствор витального красителя добавляют путем титрования в модельную систему в соотношении 1:5 для развития процесса хемилюминесценции, по интенсивности которого судят о процессах перекисного окисления липидов, сходных по составу к лип идам крови, а о сохранности или времени сохранения антиоксидантных свойств раствора витального красителя в биологической среде судят по уменьшению медленной вспышки при добавлении раствора витального красителя в модельную систему, содержащую липиды куриного желтка.
Указанные признаки являются существенными и взаимосвязаны с образованием устойчивой совокупности существенных признаков, достаточной для получения требуемого технического результата.
Настоящее изобретение поясняется конкретными примерами исследований, которые наглядно демонстрируют возможность достижения требуемого технического результата.
На фиг. 1 - представлена графическая запись хемилюминесценции раствора окрашивающего для офтальмологической хирургии по ТУ 9393-019-29792921-2015 (ЗАО «Оптимедсервис», Россия): 1- контроль (буферный раствор и инициатор ХЛ 1 мл сернокислое железо); 2,3,4,5, - к модельной Системе добавляли краситель по ТУ 9393-019-29792921-2015 (ЗАО «Оптимедсервис», Россия) в зависимости от терапевтической дозы исследуемого препарата - 2 - 0,005 мл, 3 - 0,01 мл, 4 - 0,05 мл, 5-0,1 мл;
фиг. 2 - представлена графическая запись ХЛ в модельной системе, генерирующей АФК, после добавления раствора окрашивающего для офтальмологической хирургии по по ТУ 9393-019-29792921-2015 (ЗАО «Оптимедсервис», Россия): 1 - контроль, 2 - 0,005 мл; 3 - 0,01 мл, 4 - 0,05 мл, 5 0,1 мл;
фиг. 3 - сравнительная характеристика витального красителя по ТУ 9393-019-29792921-2015 (ЗАО «Оптимедсервис», Россия): 1 - контроль, 2 - 0,05 мл витального красителя по ТУ 9393-019-29792921-2015 (ЗАО «Оптимедсервис», Россия), 3 - 0,01 мл витального красителя по ТУ 9393-019-29792921-2015 (ЗАО «Оптимедсервис», Россия), и витального красителя зарубежного производства: 4 -0,05 мл «Dorc», 5 - 0,1 мл "Dorc".
Согласно настоящего изобретения рассматривается новый способ экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза по показателям инертности и безопасности при сохранении про- и антиоксидантной активности.
Для проведения исследований был использован отечественный витальный краситель для контрастирования внутриглазных структур именно заднего сегмента глаза, который содержит следующие компоненты в следующем соотношении, на 1 мл раствора:
Краситель Trypan blue - 1,3 мг;
Краситель BBG - 0,2 мг;
Динатрий фосфат - 3,1 мг;
Дигидрофосфат натрия - 0,3 мг;
Натрий хлористый - 7,6 мг;
Полиэтиленгликоль (ПЭГ) - 20 мг;
Гиалуронат натрия - 3 мг;
Дистиллированная вода - до 1 мл.
Соотношения компонентов на 1 мл раствора получены в результате экспериментального подбора и протестированы испытаниями. Данный раствор витального красителя создан ЗАО «Оптимедсервис», Россия по ТУ 9393-019-29792921-2015.
Созданный раствор окрашивающий для офтальмологической хирургии на основе красителя Trypan blue обладает биологической инертностью, безопасностью и про и/или антиоксидантным действием, что позволит в дальнейшем расширить арсенал перспективной отечественной технологической платформы для витреоретинальной хирургии.
В связи с этим для оценки качества и биологической активности раствора окрашивающего для офтальмохирургии авторами была использована методика железоиндуцированной хемилюминесценции полученного раствора, по которой оценивают состояние свободаорадикальных процессов и антиокислительной активности свободнорадикального окисления. Для этого были проведены исследования по определению интенсивности реакции ПОЛ и АФК заявленного раствора в биологически активных веществах.
При оценке качества витального красителя регистрируют железоиндуцируемую хемилюминесценцию модельной системы, оценивают состояние свободаорадикальных процессов и антиокислительной активности (ОАО) окрашивающего раствора в модельных системах in vitro с использованием прибора «Хемилюминометр ХЛ-003». Для Определения сохранности антиокислительных свойств исследуемого раствора в биологической среде оценивают его влияние и на перекисное окисление липидов (ПОЛ).
Для этого исследуемый препарат разводят в физиологическом растворе так, чтобы концентрация была сопоставима с терапевтической дозой. Отбирают от 0,005 до 0,1 мл и добавляют в тест-системы, в которых инициируют реакции СРО -образование активных форм кислорода и свободно-радикальное перекисное окисление липидов - процессы, наиболее часто встречающиеся в организме.
В качестве первой модельной системы для оценки состояния свободаорадикальных процессов и антиокислительной активности (ОАО) используют 20 мл фосфатного буфера (KH2PO4 - 20 mM, KCl - 105 mM), с цитратом (50 mM) и люминолом (10-5 М). Состав буфера: 2,72 г KH2PO4, 7,82 г KCL, цитрата натрия C6H8O7N3*5,5H2O на 1 литр дастиллированной воды. Величину рН получаемого раствора доводят до 7,45 ед. титрованием насыщенным раствором КОН и добавляют 0,2 мл маточного раствора люминола (10-5 М). Образование АФК инициируют введением 1 мл 50 mM раствора сернокислого железа (FeSO47H2O).
Перед измерением свечения исследуемый объем помещают в светоизолированную камеру прибора и ведут запись хемилюминесценции (ХЛ) при комнатной температуре в течение 5 минут. В готовый буфер добавляют витальный краситель в зависимости от терапевтической дозы, свечение индуцируют добавлением раствора сернокислого железа.
Исследования проводят на хемилюминометре ХЛ -003, настроенном по программе: «Мешалка - быстро», «Термостат - выключен», «Время измерения - 5 минут». Прибор ХЛ-003 на дисплее компьютера выводит кривые записи хемилюминесценции, отражающие интенсивность процессов свечения изучаемого препарата, зависящую, в свою очередь, от скорости реакций свободнорадикального окисления липидов.
А в качестве второй модели для оценки сохранности антиокислительных свойств исследуемого раствора в биологической среде и его влияния и на перекисное окисление липидов (ПОЛ) использовали ту же модельную систему с тем же фосфатным буфером и добавлением путем титрования в соотношении 1:5 куриного желтка и исследуемого препарата. Введение ионов железа в желтковую среду приводит к окислению ненасыщенных жирных кислот, входящих в состав липидов, развивается хемилюминесценция, по интенсивности которой судят о процессах перекисного окисления липидов (ПОЛ), сходными по составу к лип идам крови (Клебанов Г.И., 1988).
Помимо кинетических характеристик оценивают наиболее информативные параметры ХЛ: светосумму свечения по интенсивности излучения и амплитуду максимального свечения (I max). Интенсивность данных параметров модельной системы без добавления образцов принимают за 100%, проводили не менее 6 измерений в каждом объеме образца.
Изобретение иллюстрируется графиком на фиг. 1. где представлена запись хемилюминесценции отечественного витального красителя согласно настоящего изобретения: 1- контроль (буферный раствор и инициатор ХЛ 1 мл сернокислое железо); 2, 3, 4, 5, - к модельной системе добавляли краситель в зависимости от терапевтической дозы исследуемого препарата - 2 - 0,005 мл; 3 - 0,01 мл, 4 - 0,05 мл, 5 - 0,1 мл.
Определяли светосумму и максимальную светимость при железоиндуцированной хемилюминесценции. Результаты средних значений светосуммы и максимальной интенсивности свечения приведены в таблице 1 (показатели хемилюминесценции витальных красителей отечественного и зарубежного производства при комнатной температуре).
Из таблицы 1 видно, что под действием витального красителя согласно изобретения I мах. уменьшились интегральные параметры ЛЗХЛ в модельной системе - в 1,1 - 1,6 раза, в индуцированной - в среднем 1,4 раза, что свидетельствует о подавлении генерации АФК.
Антиоксидантные свойства витального красителя сохранялись и в биологической среде, что нашло отражение в уменьшении медленной вспышки при добавлении его в модельную систему, содержащую липиды куриного желтка (фиг. 2).
На представленных графических записях хемилюминесценции видно, как уменьшаются показатели медленной вспышки при добавлении в данную модельную систему витального красителя (фиг. 1), т.е. антиокислительные свойства препарата сохранялись и биологической среде (фиг. 2).
Антиоксидантный эффект был дозозависимым - с повышением концентрации красителя происходило пропорциональное снижение интенсивности хемилюминесценции.
Для экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза в части сохранения антиоксидантных свойств использовали схожую методику проведения железоиндуцированной хемилюминесценцию модельной системы свободнорадикального окисления, содержащей фосфатный буфер, и той же модельной системы, в которую добавляют в терапевтических дозах исследуемый раствор витального красителя.
В качестве модельной системы используют фосфатный буфер, включающий в себя дистиллированную воду, КН2РО4 и KCl, к которым добавлены цитрат натрия и люминол, при этом в полученный раствор с рН 7,45 ед. добавляют куриный желток, а исследуемый раствор витального красителя добавляют путем титрования в модельную систему в соотношении 1:5 для развития процесса хемилюминесценции, по интенсивности которого судят о процессах перекисного окисления липидов, сходных по составу к липидам крови, А о сохранности или времени сохранения антиоксидантных свойств раствора витального красителя в биологической среде судят по уменьшению медленной вспышки при добавлении раствора витального красителя в модельную систему, содержащую липиды куриного желтка.
Для оценки ПОЛ используют фосфатный буфер и добавляют путем титрования в соотношении 1:5 куриный желток и исследуемый препарат. Введение ионов железа в желтковую среду приводит к окислению ненасыщенных жирных кислот, входящих в состав липидов, развивается хемилюминесценция, по интенсивности которой судят о процессах перекисного окисления липидов (ПОЛ), сходными по составу к липидам крови (Клебанов Г.И., 1988).
В качестве контрольного сравнения использовали вышеуказанную методику для зарубежного аналога - Раствор окрашивающий для офтальмохирургии MembraneBlue Dual (D.O.R.C. mtemational, Нидерланды), зарегистрированный на территории РФ и разрешенный к применению в медицинской практике (№ФСЗ 2011/09078 от 24 февраля 2011 года). На фиг. 3 представлена сравнительная характеристика отечественного витального красителя в дозах 0,05 мл (кривая 2) и 0,01 (кривая 3) по отношению к кривой 1, принимаемой за 100% в части интенсивности этого параметра в модельной системе без добавления образцов.
Кривые 4 - 0,05 мл «Dork», 5-0,1 мл "Dork" показывают тот же параметр витального красителя зарубежного производства компании «Dork», Netherlands.
Оценка проводилась по параметрам светосуммы свечения и максимальной светимости по отношению к модельной системе. Как видно, отечественный раствор витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза обладает высокой контрастирующей эффективностью и высокой антиокислительной активностью, превышающей аналогичные параметры рекомендованных к применению зарубежных образцов. Данные параметры заявленного витального красителя прямо указывают на высокую безопасность витального раствора, обладающего про- и антиоксидантной активностью, за счет усиления биологической инертности, что приводит к уменьшению возможных побочных эффектов.
Собственные данные. Антиоксидантные свойства красителя сохранялись и в биологической среде, что нашло отражение в уменьшении медленной вспышки при добавлении его в модельную систему, содержащую липиды куриного желтка. Полученные данные свидетельствуют о высокой антиокислительной активности и позволяют на более высоком уровне оценивать длительность этой активности.
Claims (1)
- Способ экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза, заключающийся в проведении сравнения железоиндуцированной хемилюминесценции модельной системы свободнорадикального окисления, содержащей фосфатный буфер, и той же модельной системы, в которую добавляют в терапевтических дозах исследуемый раствор витального красителя, отличающийся тем, что в качестве модельной системы используют фосфатный буфер, включающий в себя дистиллированную воду, KH2PO4 и KCl, к которым добавлены цитрат натрия и люминол, при этом в полученный раствор с рН 7,45 ед. добавляют куриный желток, а исследуемый раствор витального красителя добавляют путем титрования в модельную систему в соотношении 1:5 для развития процесса хемилюминесценции, по интенсивности которого судят о процессах перекисного окисления липидов, сходных по составу к липидам крови, а о сохранности или времени сохранения антиоксидантных свойств раствора витального красителя в биологической среде судят по уменьшению медленной вспышки при добавлении раствора витального красителя в модельную систему, содержащую липиды куриного желтка.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144675A RU2669945C1 (ru) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | Способ экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144675A RU2669945C1 (ru) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | Способ экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2669945C1 true RU2669945C1 (ru) | 2018-10-17 |
Family
ID=63862350
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017144675A RU2669945C1 (ru) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | Способ экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2669945C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2552491A1 (en) * | 2010-04-01 | 2013-02-06 | Medical Technology Transfer Holding B.V. | Staining composition |
| RU2545808C1 (ru) * | 2014-06-17 | 2015-04-10 | Антон Валерьевич Катаев | Средство, ингибирующее перекисное окисление липидов |
-
2017
- 2017-12-20 RU RU2017144675A patent/RU2669945C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2552491A1 (en) * | 2010-04-01 | 2013-02-06 | Medical Technology Transfer Holding B.V. | Staining composition |
| RU2545808C1 (ru) * | 2014-06-17 | 2015-04-10 | Антон Валерьевич Катаев | Средство, ингибирующее перекисное окисление липидов |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| VECKENEER M., et al., Ocular toxicity study of trypan blue injected into the vitreous cavity of rabbit eyes, Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology, 2001, 239(9), P.698 - 704. * |
| МУХАМАДЕЕВ Т. Р., Научное обоснование, разработка, комплексная оценка клинической эффективности и безопасности "офтальмохирургической платформы" для катарактальных и витреоретинальных вмешательств, Уфа, 2016, Дис. на соиск. уч. ст. д.м.н. - описание с.34, 50-53,97-104. Найдено из Интернета [он-лайн] на сайте:http://www.medprofedu.ru/upload-files/ds03/MukhamadeevTR_diss.pdf. * |
| МУХАМАДЕЕВ Т. Р., Научное обоснование, разработка, комплексная оценка клинической эффективности и безопасности "офтальмохирургической платформы" для катарактальных и витреоретинальных вмешательств, Уфа, 2016, Дис. на соиск. уч. ст. д.м.н. - описание с.34, 50-53,97-104. Найдено из Интернета [он-лайн] на сайте:http://www.medprofedu.ru/upload-files/ds03/MukhamadeevTR_diss.pdf. VECKENEER M., et al., Ocular toxicity study of trypan blue injected into the vitreous cavity of rabbit eyes, Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology, 2001, 239(9), P.698 - 704. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Loschenov et al. | Photodynamic therapy and fluorescence diagnostics | |
| Grimes et al. | Carboxyfluorescein: a probe of the blood-ocular barriers with lower membrane permeability than fluorescein | |
| AU2016378925C1 (en) | Eye treatment system | |
| Kim et al. | Autophagy-induced regression of hyaloid vessels in early ocular development | |
| Stepinac et al. | Light-induced retinal vascular damage by Pd-porphyrin luminescent oxygen probes | |
| Fine et al. | A non-invasive method for the assessment of hemostasis in vivo by using dynamic light scattering | |
| Li et al. | Photostimulation of lymphatic clearance of red blood cells from the mouse brain after intraventricular hemorrhage | |
| Costa et al. | Vital dyes and light sources for chromovitrectomy: comparative assessment of osmolarity, pH, and spectrophotometry | |
| Sadlowski et al. | Hydrocyanines: a versatile family of probes for imaging radical oxidants in vitro and in vivo | |
| Abdelkawi et al. | Vitreous humor rheology after Nd: YAG laser photo disruption | |
| RU2669945C1 (ru) | Способ экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза | |
| WO2018156965A1 (en) | Compositions for real-time oxygen measurements and methods of making and using same | |
| US10994030B2 (en) | Compositions and methods for measuring and expanding blood volume | |
| Bergandi et al. | Induction of oxidative stress in human aqueous and vitreous humors by Nd: YAG laser posterior capsulotomy | |
| Vetrugno et al. | Red blood cell deformability, aggregability and cytosolic calcium concentration in normal tension glaucoma | |
| Patial et al. | Use of intraoperative fluorescein dye for prediction of flap viability | |
| Zalesskaya et al. | Spectral studies of photomodification of blood by therapeutic doses of optical radiation at different wavelengths | |
| Türk et al. | Total oxidant status, total antioxidant capacity and oxidative stress index levels in patients with mature and immature senile cataract | |
| Naganobu et al. | Hydroxyl radical formation in lactated Ringer’s solution and BSS Plus® intraocular irrigating solution | |
| RU2471429C1 (ru) | Способ диагностики ишемической гастропатии методом эндоскопической лазерной допплеровской флоуметрии | |
| Farruggio | Direct/indirect protective effects elicited by anti-vascular endothelial growth factor drugs on retinal pigment epithelium cells (ARPE-19 cell line) | |
| RU2800671C1 (ru) | Способ оценки эффективности антиагрегантного препарата в образцах цельной периферической крови | |
| Li et al. | Noninvasive technology of photostimulation of lymphatic clearance of red blood cells from the mouse brain after intraventricular hemorrhage. | |
| RU2690152C2 (ru) | Способ дифференциальной диагностики возрастной и осложненной катаракты | |
| Bertalanffy et al. | In vivo effect of visible light on feline cortical microcirculation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191221 |