RU2669796C1 - Method for determination of functional fibrinogen - Google Patents

Method for determination of functional fibrinogen Download PDF

Info

Publication number
RU2669796C1
RU2669796C1 RU2017137693A RU2017137693A RU2669796C1 RU 2669796 C1 RU2669796 C1 RU 2669796C1 RU 2017137693 A RU2017137693 A RU 2017137693A RU 2017137693 A RU2017137693 A RU 2017137693A RU 2669796 C1 RU2669796 C1 RU 2669796C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
fibrinogen
concentration
functional fibrinogen
thromboelastography
functional
Prior art date
Application number
RU2017137693A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Олеся Алексеевна Полеводова
Геннадий Мартинович Галстян
Арон Леонидович Берковский
Елена Владимировна Сергеева
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ гематологии" Минздрава России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ гематологии" Минздрава России) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ гематологии" Минздрава России)
Priority to RU2017137693A priority Critical patent/RU2669796C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2669796C1 publication Critical patent/RU2669796C1/en

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention relates to medicine and relates to method for determining functional fibrinogen comprising the examination of a whole blood sample by thromboelastography. Heparinized blood and batroksobin are introduced into a cuvette for thromboelastography, followed by thromboelastography, determining the maximum amplitude parameter (MA) on a thromboelastogram, and the concentration of functional fibrinogen (FF) is calculated by the formula: FF= 0.1153 × MA+ 0.5903, where FF– concentration of functional fibrinogen (g/l), MA– maximum amplitude on thromboelastogram with heparinized blood and batroksobin (mm), 0.1153 and 0.5903 – conversion factors.EFFECT: invention provides increase in accuracy of determining the concentration of functional fibrinogen at the maximum amplitude of thromboelastogram of heparinized blood, in which the formation of a fibrin clot is induced by the addition of batroxobin.1 cl, 4 ex, 10 dwg

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к инструментальным способам оценки функционального состояния системы гемостаза, интенсивной терапии.The invention relates to medicine, namely to instrumental methods for assessing the functional state of the hemostatic system, intensive care.

На сегодняшний день известны различные методы определения функционального фибриногена.To date, various methods for determining functional fibrinogen are known.

Так известно определение концентрации фибриногена по Клауссу, основанное на исследовании времени образования сгустка при добавлении высокой концентрации тромбина к разбавленной в 10-20 раз плазме. Тест выполняется на коагулометрах, при этом логарифм времени образования сгустка обратно пропорционален логарифму концентрации функционального фибриногена. Калибровочная кривая показывает укорочение времени свертывания при увеличении концентрации фибриногена. (Долгов В.В., Свирин П.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. - М. - Тверь: ООО «Издательство «Триада» 2005. - 227 с,). Основными ограничениями метода определения фибриногена по Клауссу является чувствительность результатов к гипо-, дис- и гиперфибриногенемии, а также к продуктам деградации фибрина, которые влияют на процесс полимеризации фибрин-мономеров и могут быть причиной ложно низких результатов. Метод выполняется только в лабораторных условиях на специальном оборудовании (центрифуга, коагулометр).So, it is known that Clauss's determination of fibrinogen concentration is based on a study of the time of clot formation when a high concentration of thrombin is added to a 10-20 times diluted plasma. The test is performed on coagulometers, while the logarithm of the time of clot formation is inversely proportional to the logarithm of the concentration of functional fibrinogen. The calibration curve shows a shortening of clotting time with increasing fibrinogen concentration. (Dolgov V.V., Svirin P.V. Laboratory diagnosis of hemostasis disorders. - M. - Tver: LLC Triad Publishing House 2005. - 227 p.). The main limitations of the Clauss method for determining fibrinogen are the sensitivity of the results to hypo-, dis- and hyperfibrinogenemia, as well as to fibrin degradation products, which affect the polymerization of fibrin monomers and can cause false low results. The method is performed only in laboratory conditions on special equipment (centrifuge, coagulometer).

Известно также определение функционального фибриногена (Functional Fibrinogen Level - FLEV)c помощью тромбоэластографии. Метод тромбоэластографии не требует центрифугирования крови, является прикроватным, широко используется в интенсивной терапии. Определение уровня функционального фибриногена с помощью тромбоэластографии заключается в регистрации максимальной амплитуды тромбоэластограммы после добавления к цитратной крови ингибитора тромбоцитарного гликопротеина IIb/IIIa (абциксимаба) и активатора вешнего пути свертывания (лиофилизированного тканевого фактора). Максимальная амплитуда (MAFF), регистрируемая при этом на тромбоэластограмме, отражает уровень функционального фибриногена (FLEV) (Rossaint R, Bouillon В, Cerny V, Coats TJ, Duranteau J,

Figure 00000001
E, et al. The European guideline on management of major bleeding and coagulopathy following trauma: fourth edition. Critical Care. Critical Care; 2016;20:100). Определенный таким образом функциональный фибриноген коррелирует с концентрацией фибриногена, определенной по Клауссу. В то же время известно, что функциональный фибриноген, определенный с помощью тромбоэластографии, может переоценивать концентрацию фибриногена (Agren A, Wikman AT, Ostlund A, Edgren G. TEG® functional fibrinogen analysis may overestimate fibrinogen levels. Anesthesia and analgesia. 2014;118:933-5). Возможной причиной переоценки фибриногена является то, что при этом методе не всегда удается полностью ингибировать тромбоциты, что было показано при сравнении его с методом тромбоэластометрии, использующим другой ингибитор тромбоцитов. Существенным недостатком является также дороговизна метода, ограничивающая его широкое использование, а возможное присутствие в пробе гепарина, который может получать обследуемый, требует выполнения теста с гепариназой.The determination of Functional Fibrinogen Level (FLEV) by thromboelastography is also known. The method of thromboelastography does not require centrifugation of blood, it is a bedside, it is widely used in intensive care. The determination of the level of functional fibrinogen using thromboelastography consists in recording the maximum amplitude of the thromboelastogram after adding an inhibitor of platelet glycoprotein IIb / IIIa (abciximab) and an activator of the coagulation pathway (lyophilized tissue factor) to citrate blood. The maximum amplitude (MA FF ) recorded on the thromboelastogram reflects the level of functional fibrinogen (FLEV) (Rossaint R, Bouillon B, Cerny V, Coats TJ, Duranteau J,
Figure 00000001
E, et al. The European guideline on management of major bleeding and coagulopathy following trauma: fourth edition. Critical Care. Critical care; 2016; 20: 100). Functional fibrinogen so determined correlates with the concentration of fibrinogen determined by Clauss. At the same time, it is known that functional fibrinogen, determined by thromboelastography, can overestimate the concentration of fibrinogen (Agren A, Wikman AT, Ostlund A, Edgren G. TEG® functional fibrinogen analysis may overestimate fibrinogen levels. Anesthesia and analgesia. 2014; 118: 118: 933-5). A possible reason for overestimating fibrinogen is that with this method it is not always possible to completely inhibit platelets, which was shown when comparing it with the method of thromboelastometry using a different platelet inhibitor. A significant disadvantage is the high cost of the method, limiting its widespread use, and the possible presence in the sample of heparin, which can be obtained by the subject, requires a heparinase test.

Известен также способ определения функционального фибриногена в тесте FIBTEM ротационной тромбоэластометрии. В этом тесте к цитратной крови добавляются ингибитор тромбоцитов цитохалазин D, рекомбинантный тканевой фактор и ингибитор гепарина, после чего определяется максимальная плотность сгустка (показатель MCF - maximum clot firmness) по данным тромбоэластометрии. Функциональный фибриноген, определенный с помощью теста FIBTEM, коррелирует с концентрацией фибриногена по Клауссу (R2 = 0.671, р<0.001) (

Figure 00000002
F,
Figure 00000003
A, Preininger A, Raggam RB, Grinschgl Y, Krumnikl J, et al. Comparison of functional fibrinogen (FF/CFF) and FIBTEM in surgical patients - a retrospective study. Clinical chemistry and laboratory medicine. 2016;54:453-8). По уровню фибриногена, определенного с помощью теста FIBTEM, рекомендуется принимать решение о коррекции гипофибриногенемии у больных с травмой. Однако и этот метод не позволяет полностью ингибировать функцию тромбоцитов и, следовательно, может завышать уровень функционального фибриногена. Причем это завышение тем выше, чем больше тромбоцитов в крови. Поэтому была предложена модификация теста FIBTEM, которая называется FIBTEM Plus (Solomon С, Baryshnikova Е, Schlimp CJ,
Figure 00000004
H, Asmis LM, Ranucci M. FIBTEM PLUS Provides an Improved Thromboelastometry Test for Measurement of Fibrin-Based Clot Quality in Cardiac Surgery Patients. Anesthesia & Analgesia. 2013;117:1054-62). В данном тесте FIBTEM Plus для лучшего подавления функции тромбоцитов наряду с цитохалазином D добавляется ингибитор тромбоцитарного гликопротеина IIb/IIIa - препарат тирофибан. Существенными недостатками является дороговизна метода, ограничивающая его широкое использование, неполное ингибирование функции тромбоцитов, что может привести к переоценке концентрации функционального фибриногена.There is also a method of determining functional fibrinogen in the FIBTEM test of rotational thromboelastometry. In this test, platelet inhibitor cytochalazine D, recombinant tissue factor and heparin inhibitor are added to citrate blood, after which the maximum clot density (MCF - maximum clot firmness) is determined by thromboelastometry. Functional fibrinogen, determined using the FIBTEM test, correlates with the Clauss fibrinogen concentration (R 2 = 0.671, p <0.001) (
Figure 00000002
F
Figure 00000003
A, Preininger A, Raggam RB, Grinschgl Y, Krumnikl J, et al. Comparison of functional fibrinogen (FF / CFF) and FIBTEM in surgical patients - a retrospective study. Clinical chemistry and laboratory medicine. 2016; 54: 453-8). By the level of fibrinogen determined using the FIBTEM test, it is recommended to make a decision on the correction of hypofibrinogenemia in patients with trauma. However, this method does not allow to completely inhibit platelet function and, therefore, may overestimate the level of functional fibrinogen. Moreover, this overestimation is the higher, the more platelets in the blood. Therefore, a modification of the FIBTEM test was proposed, which is called FIBTEM Plus (Solomon C, Baryshnikova E, Schlimp CJ,
Figure 00000004
H, Asmis LM, Ranucci M. FIBTEM PLUS Provides an Improved Thromboelastometry Test for Measurement of Fibrin-Based Clot Quality in Cardiac Surgery Patients. Anesthesia & Analgesia. 2013; 117: 1054-62). In this FIBTEM Plus test, in order to better suppress platelet function, a platelet glycoprotein IIb / IIIa inhibitor, tirofiban, is added along with cytochalazine D. Significant disadvantages are the high cost of the method, limiting its widespread use, incomplete inhibition of platelet function, which can lead to an overestimation of the concentration of functional fibrinogen.

Наиболее близким техническим решением к заявленному, является способ определения фибриногена, в котором предлагается оценивать уровень фибриногена по величине максимальной амплитуды тромбоэластограммы, выполненной с обедненной тромбоцитами плазмой (RU 2517116 от 27.05.2014). Недостатками данного метода является то, что для получения обедненной тромбоцитами плазмы необходимо центрифугировать кровь в определенных режимах. Кроме того, полученная после центрифугирования обедненная тромбоцитами плазма никогда не является полностью свободной от тромбоцитов, а их количество в ней может варьировать. Следовательно, и максимальная амплитуда тромбоэластограммы обедненной тромбоцитами плазмы будет варьировать и зависеть от количества оставшихся в ней тромбоцитов и не всегда точно отражать уровень функционального фибриногена.The closest technical solution to the claimed one is a method for determining fibrinogen, in which it is proposed to estimate the level of fibrinogen by the magnitude of the maximum amplitude of the thromboelastogram performed with platelet-poor plasma (RU 2517116 from 05.27.2014). The disadvantages of this method is that in order to obtain platelet-poor plasma, it is necessary to centrifuge the blood in certain modes. In addition, platelet-poor plasma obtained after centrifugation is never completely free of platelets, and their number in it can vary. Consequently, the maximum amplitude of the thromboelastogram of platelet-depleted plasma will vary and depend on the number of platelets remaining in it and does not always accurately reflect the level of functional fibrinogen.

Технический результат заявленного изобретения заключается в повышении точности определения функционального фибриногена по максимальной амплитуде тромбоэластограммы гепаринизированной крови, в котором образование фибринового сгустка индуцируется добавлением фермента, выделенного из яда гремучей змеи Bothrops atrox, батроксобина с активностью 5 МЕ/мл.The technical result of the claimed invention is to increase the accuracy of determining functional fibrinogen by the maximum amplitude of the thromboelastogram of heparinized blood, in which the formation of a fibrin clot is induced by the addition of an enzyme isolated from Bothrops atrox rattlesnake, batroxobin with an activity of 5 IU / ml.

Технический результат достигается тем, что определение функционального фибриногена, проводят посредством исследования цельной пробы крови путем тромбоэластографии, при этом гепаринизированную кровь и батроксобин с активностью 5 МЕ/мл вносят в кювету для тромбоэластографии в соотношении 34:1 соответственно, после чего выполняют тромбоэластографию, оценивают параметр максимальной амплитуды (МАБатрокс) на тромбоэластограмме, а концентрацию функционального фибриногена (ФФБатрокс) рассчитывают по формуле: ФФбатрокс = 0.1153 МАбатрокс + 0.5903, где ФФбатрокс - расчетная концентрация функционального фибриногена (г/л) в тесте с батроксобином, МАБатрокс - максимальная амплитуда на тромбоэластограмме с гепаринизированной кровью и батроксобином (мм), 0.1153 и 0.5903 - коэффициенты пересчета.The technical result is achieved in that the determination of functional fibrinogen is carried out by examining a whole blood sample by thromboelastography, while heparinized blood and batroxobin with an activity of 5 IU / ml are added to the thromboelastography cell in a ratio of 34: 1, respectively, after which thromboelastography is performed, and the parameter is evaluated the maximum amplitude (MA batroks) on tromboelastogramma, and the concentration of functional fibrinogen (batroks PF) is calculated according to the formula: FF = 0.1153 MA batroks batroks + 0.59 03, where FF batrox is the calculated concentration of functional fibrinogen (g / l) in the batroxobin test, MA Batrox is the maximum amplitude in the thromboelastogram with heparinized blood and batroxobin (mm), 0.1153 and 0.5903 are conversion factors.

Сущность изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION

Задачей настоящего изобретения является определение функционального фибриногена, по образованию фибринового сгустка, индуцируемого добавлением батроксобина. Особенностью метода является использование батроксобина - фермента из яда гремучей змеи Bothrops atrox, обитающей в Южной и Центральной Америке. Батроксобин - тромбиноподобная протеаза, способная вызывать переход фибриногена в фибрин. Батроксобин отщепляет от фибриногена только фибринопептид А, что отличает ее от действия тромбина, который, кроме фибринопептида А, отщепляет от фибриногена еще и фибринопептид В. Батроксобин не подавляется антитромбином и гепарином, поэтому может использоваться для оценки полимеризации мономеров фибрина в присутствии гепарина. Поскольку на определение концентрации функционального фибриногена в цельной крови оказывает влияние возможная активация тромбоцитов, одной из задач исследования было получить тромбиноподобный фермент из яда Bothrops atrox venom, который одновременно не активировал бы тромбоциты. С этой целью были подобраны условия хроматографии, которые заключались в следующем: 50 мг яда растворяли в буферном растворе состава 50 мМ трис-HCl, рН 7.4 и наносили на колонну с анионообменным сорбентом DEAE-Sepharose Fast Flow. Сорбент промывали стартовым буфером и затем связанный с сорбентом белок элюировали градиентом ионной силы натрий хлорида. В выходящих фракциях (по 5 мл) автоматически записывалась концентрация белка, а также определяли время свертывания с раствором фибриногена. Чем короче было время свертывания, тем выше активность тромбиноподобного фермента в выходящих с колонны фракциях. Тромбиноподобная активность распределялась по двум фракциям, первая элюировалась с колонны при низкой концентрации соли, а вторая - при более высокой концентрации. Обе фракции фермента собирали отдельно, стабилизировали, добавляя бычий сывороточный альбумин до концентрации 5 мг/мл, разливали по флаконам и лиофилизировали. Исследовали влияние обеих фракций батрокобсина на тромбоциты, в тесте тромбоэластографии. Для этого из пробы цельной гепаринизированной крови получали обедненную тромбоцитами и обогащенную тромбоцитами плазму, согласно общепринятым методам (Perez AG, Lana JF, Rodrigues AA, Luzo AC, Belangero WD, Santana MH. Relevant Aspects of Centrifugation Step in the Preparation of Platelet-Rich Plasma. ISRN Hematology. 2014, article ID 176060). С полученными образцами обедненной тромбоцитами плазмы и обогащенной тромбоцитами плазмы выполняли тромбоэластографию, для чего к 340 мкл каждого образца плазмы добавляли по 10 мкл раствора батроксобина с активностью 5 МЕ/мл, из первой фракции, затем так же выполняли тромбоэластографию с батроксобином из второй фракции. Оценивали максимальную амплитуду на каждой из 4 тромбоэластограмм. Установлено, что первая фракция батроксобина не активировала тромбоциты, что проявилось в одинаковой максимальной амплитуде на тромбоэластограммах с обедненной и обогащенной тромбоцитами плазме (фиг. 1А и 1В). Вторая фракция, напротив, активировала тромбоциты, что проявилось большей максимальной амплитудой на тромбоэластограмме с обогащенной тромбоцитами плазмой, чем с обедненной тромбоцитами плазмой (фиг. 1Б и 1Г), т.е. в ней содержались ферменты, способные кроме расщепления фибриногена еще и активировать тромбоциты. Для определения функционального фибриногена использовали только первую фракцию батроксобина, не активирующую тромбоциты. Выход тромбиноподобного фермента, не активирующего тромбоциты (первая фракция), составил 20 МЕ/мг яда Bathrops atrox venom.An object of the present invention is to determine the functional fibrinogen by the formation of a fibrin clot induced by the addition of batroxobin. A feature of the method is the use of batroxobin, an enzyme from the rattlesnake venom Bothrops atrox, which lives in South and Central America. Batroxobin is a thrombin-like protease that can cause the transition of fibrinogen to fibrin. Batroxobin cleaves only fibrinopeptide A from fibrinogen, which distinguishes it from the action of thrombin, which, in addition to fibrinopeptide A, also eliminates fibrinopeptide B. Batroxobin is not suppressed by antithrombin and heparin, therefore, it can be used to assess the polymerization of fibrin monomers in the presence of. Since the determination of the concentration of functional fibrinogen in whole blood is influenced by the possible activation of platelets, one of the objectives of the study was to obtain a thrombin-like enzyme from the poison Bothrops atrox venom, which would not simultaneously activate platelets. For this purpose, the chromatographic conditions were selected, which were as follows: 50 mg of the poison was dissolved in a buffer solution of 50 mM Tris-HCl, pH 7.4 and applied to a column with an anion-exchange sorbent DEAE-Sepharose Fast Flow. The sorbent was washed with starting buffer and then the protein bound to the sorbent was eluted with a sodium chloride gradient of ionic strength. In the outgoing fractions (5 ml each), the protein concentration was automatically recorded, and the clotting time with the fibrinogen solution was determined. The shorter the coagulation time, the higher the activity of the thrombin-like enzyme in the fractions leaving the column. Thrombin-like activity was distributed in two fractions, the first was eluted from the column at a low salt concentration, and the second at a higher concentration. Both fractions of the enzyme were collected separately, stabilized by adding bovine serum albumin to a concentration of 5 mg / ml, poured into vials and lyophilized. The effect of both fractions of batrocobsin on platelets was studied in a thromboelastography test. To do this, platelet-rich and platelet-rich plasma was obtained from a sample of whole heparinized blood, according to conventional methods (Perez AG, Lana JF, Rodrigues AA, Luzo AC, Belangero WD, Santana MH. Relevant Aspects of Centrifugation Step in the Preparation of Platelet-Rich Plasma ISRN Hematology. 2014, article ID 176060). Thromboelastography was performed with the obtained samples of platelet-poor plasma and platelet-rich plasma, for which 10 μl of a solution of batroxobin with an activity of 5 IU / ml from the first fraction was added to 340 μl of each plasma sample, then thromboelastography with batroxobin from the second fraction was also performed. Estimated maximum amplitude in each of the 4 thromboelastograms. It was established that the first fraction of batroxobin did not activate platelets, which was manifested in the same maximum amplitude on thromboelastograms with depleted and platelet-rich plasma (Fig. 1A and 1B). The second fraction, on the contrary, activated platelets, which was manifested by a larger maximum amplitude on the thromboelastogram with platelet-rich plasma than with platelet-poor plasma (Fig. 1B and 1G), i.e. it contained enzymes that, in addition to cleaving fibrinogen, also activate platelets. To determine the functional fibrinogen, only the first fraction of batroxobin, which did not activate platelets, was used. The output of a thrombin-like enzyme that does not activate platelets (first fraction) was 20 IU / mg of Bathrops atrox venom venom.

Определение функционального фибриногена осуществляют следующим образом: набирают кровь в пробирку, содержащую гепарин. Затем в кювету для тромбоэластографии вносят цельную гепаринизированную кровь и батроксобин с активностью 5 МЕ/мл в соотношении 34:1 соответственно. После чего выполняют тромбоэластографию, оценивают параметр максимальной амплитуды (МАбатрокс) на тромбоэластограмме, а концентрацию функционального фибриногена рассчитывают по формуле линейной регрессии:The determination of functional fibrinogen is as follows: blood is collected in a test tube containing heparin. Then, whole heparinized blood and batroxobin with an activity of 5 IU / ml in a ratio of 34: 1, respectively, are added to the thromboelastography cuvette. After that, thromboelastography is performed, the maximum amplitude parameter (MAbrox) is estimated on the thromboelastogram, and the concentration of functional fibrinogen is calculated by the linear regression formula:

ФФбатрокс = 0.1153 МАбатрокс + 0.5903,FF batroks = 0.1153 MA batroks + 0.5903,

где ФФбатрокс - это расчетная концентрация функционального фибриногена (г/л) в тесте с батроксобином с активностью 5 МЕ/мл, МАбатрокс - максимальная амплитуда на тромбоэластограмме с гепаринизированной кровью и батроксобином (мм), 0.1153 и 0.5903 - коэффициенты уравнения регрессии (коэффициенты пересчета).where FF batrox is the calculated concentration of functional fibrinogen (g / l) in the batroxobin test with an activity of 5 IU / ml, MA batrox is the maximum amplitude in the thromboelastogram with heparinized blood and batroxobin (mm), 0.1153 and 0.5903 are the coefficients of the regression equation (coefficients recount).

Примеры осуществления способа.Examples of the method.

Пример 1. Определение зависимости между концентрацией функционального фибриногена, определенной по методу Клаусса, и максимальной амплитудой на тромбоэластограмме с батроксобином активностью 5 МЕ/мл.Example 1. Determination of the relationship between the concentration of functional fibrinogen, determined by the Clauss method, and the maximum amplitude on the thromboelastogram with batroxobin activity of 5 IU / ml.

Исследовано 30 образцов крови, полученных у 17 онкогематологических больных. Кровь получали путем венепункции одной из периферических вен и помещали в пробирки S-Monovette с 3.2% раствором цитрата натрия в соотношении 1:9 (1 часть раствора цитрата, 9 частей крови) и пробирки S-Monovette с литий гепарином (концентрация гепарина 10-30 ед/мл крови).We studied 30 blood samples obtained from 17 oncohematological patients. Blood was obtained by venipuncture of one of the peripheral veins and placed in S-Monovette tubes with 3.2% sodium citrate in a ratio of 1: 9 (1 part citrate solution, 9 parts of blood) and S-Monovette tubes with lithium heparin (heparin concentration 10-30 units / ml of blood).

Концентрацию функционального фибриногена в плазме цитратной крови определяли по методу Клаусса на коагулометре Sysmex СА-620 с помощью реактивов компании Siemens (Германия).The concentration of functional fibrinogen in plasma of citrated blood was determined by the Clauss method on a Sysmex CA-620 coagulometer using reagents from Siemens (Germany).

Тромбоэластографию цельной гепаринизированной крови выполняли на тромбоэластографе TEG 5000 ("Haemoscope Corporation", США). Для этого 340 мкл гепаринизированной крови вносили в кювету, в которую было добавлены 10 мкл раствора батроксобина, полученному по описанному выше способу, с активностью 5 МЕ/мл. Определяли максимальную амплитуду (МАБатрокс) на тромбоэластограмме.Thromboelastography of whole heparinized blood was performed on a TEG 5000 thromboelastograph (Haemoscope Corporation, USA). To do this, 340 μl of heparinized blood was added to a cuvette in which 10 μl of batroxobin solution obtained by the above method with an activity of 5 IU / ml was added. The maximum amplitude ( Batrox MA) was determined on the thromboelastogram.

Концентрация фибриногена в плазме цитратной крови, определенная по методу Клаусса, колебалась в пределах от 0,5 г/л до 8,7 г/л. Величина МАБатрокс на тромбоэластограмме в пробе с батроксобином активностью 5 МЕ/мл и гепаринизированной кровью колебалась в пределах от 2,3 мм до 62,5 мм. Корреляция между концентрацией фибриногена в плазме, определенной по методу Клаусса, и МАБатрокс показана на фиг. 2. Эта зависимость представляет собой прямую линию, с коэффициентом корреляции 0,83 (р<0.001), что позволяет связать концентрацию функционального фибриногена с максимальной амплитудой уравнением:The concentration of fibrinogen in plasma of citrated blood, determined by the method of Clauss, ranged from 0.5 g / l to 8.7 g / l. The Batrox MA value on the thromboelastogram in the sample with batroxobin with an activity of 5 IU / ml and heparinized blood ranged from 2.3 mm to 62.5 mm. The correlation between plasma fibrinogen concentration determined by the Clauss method and Batrox MA is shown in FIG. 2. This dependence is a straight line, with a correlation coefficient of 0.83 (p <0.001), which allows you to connect the concentration of functional fibrinogen with maximum amplitude by the equation:

ФФБатрокс = 0.1153 × МАБатрокс + 0.5903, гдеFF Batroks = 0.1153 × MA Batroks + 0.5903, where

где ФФБатрокс - расчетная концентрация функционального фибриногена (г/л) в тесте с батроксобином активностью 5 МЕ/мл, МАБатрокс - максимальная амплитуда на тромбоэластограмме с гепаринизированной кровью и батроксобином (мм), 0.1153 и 0.5903 - коэффициенты уравнения регрессии (коэффициенты пересчета).where FF Batrox is the calculated concentration of functional fibrinogen (g / l) in the test with batroxobin activity of 5 IU / ml, MA Batrox is the maximum amplitude in the thromboelastogram with heparinized blood and batroxobin (mm), 0.1153 and 0.5903 are the coefficients of the regression equation (conversion factors) .

Концентрация функционального фибриногена в пробах с батроксобином активностью 5 МЕ/мл, рассчитанная согласно уравнению, колебалась от 0,8 г/л до 7,8 г/л, т.е. значения были близки к концентрации фибриногена по Клауссу.The concentration of functional fibrinogen in samples with batroxobin activity of 5 IU / ml, calculated according to the equation, ranged from 0.8 g / l to 7.8 g / l, i.e. the values were close to the Clauss fibrinogen concentration.

Пример 2. Сравнение методов определения функционального фибриногена по тромбоэластографии с использованием абциксимаба и батроксобина активностью 5 МЕ/мл.Example 2. Comparison of methods for determining functional fibrinogen by thromboelastography using abciximab and batroxobin with an activity of 5 IU / ml.

Исследовано 29 образцов крови, полученных у 17 онкогематологических больных. Кровь для исследования у больных получали путем венепункции одной из периферических вен и собирали в пробирки S-Monovette с 3.2% раствором цитрата натрия в соотношении 1:9 (1 часть раствора цитрата, 9 частей крови) и пробирки S-Monovette с литий гепарином (концентрация гепарина 10-30 ед/мл крови).We studied 29 blood samples obtained from 17 oncohematological patients. Blood for the study in patients was obtained by venipuncture of one of the peripheral veins and collected in S-Monovette tubes with 3.2% sodium citrate in a ratio of 1: 9 (1 part citrate solution, 9 parts of blood) and S-Monovette tubes with lithium heparin (concentration heparin 10-30 units / ml of blood).

Тромбоэластографию выполняли на тромбоэластографе TEG 5000 ("Haemoscope Corporation", США). Использовали два канала тромбоэластографа.Thromboelastography was performed on a TEG 5000 thromboelastograph (Haemoscope Corporation, USA). Two channels of thromboelastograph were used.

На одном канале 340 мкл гепаринизированной крови вносили в кювету, в которую было добавлено 10 мкл раствора батроксобина, полученного по описанному выше методу, с активностью 5 МЕ/мл. Выполняли тромбоэластографию. Определяли максимальную амплитуду (МАБатрокс) на тромбоэластограмме. На втором канале выполняли тест функционального фибриногена, как предписано инструкцией к тромбоэластографу TEG 5000 ("Haemoscope Corporation", США). Для этого в кювету для тромбоэластографии вносили 20 мкл 0,2М раствора кальция хлорида. Затем 500 мкл цитратной крови добавляли во флакон с реагентом на функциональный фибриноген (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000). Этот реагент содержит ингибитор абциксимаб и лиофилизированный тканевой фактор. После перемешивания из этого флакона отбирали 340 мкл крови и вносили в кювету, в которой уже находился раствор кальция хлорида. Выполняли тромбоэластографию. По окончанию теста определяли максимальную амплитуду стандартного метода определения функционального фибриногена (MAFF).On one channel, 340 μl of heparinized blood was added to a cuvette, in which 10 μl of a solution of batroxobin obtained by the method described above was added with an activity of 5 IU / ml. Thromboelastography was performed. The maximum amplitude ( Batrox MA) was determined on the thromboelastogram. Functional fibrinogen test was performed on the second channel, as prescribed by the TEG 5000 thromboelastograph (Haemoscope Corporation, USA). For this, 20 μl of 0.2 M calcium chloride solution was added to the thromboelastography cuvette. Then, 500 μl of citrated blood was added to the functional fibrinogen reagent vial (Functional Fibrinogen Reagent for TEG 5000). This reagent contains an abciximab inhibitor and lyophilized tissue factor. After stirring, 340 μl of blood was taken from this vial and introduced into a cuvette in which a solution of calcium chloride was already present. Thromboelastography was performed. At the end of the test, the maximum amplitude of the standard method for determining functional fibrinogen (MA FF ) was determined.

Величина максимальной амплитуды (МАБатрокс) колебалась от 2,3 мм до 62,5 мм. Величина максимальной амплитуды (MAFF) колебалась от 7,6 мм до 54,5 мм. На фиг. 3 показана корреляция между MAFF и МАБатрокс The magnitude of the maximum amplitude (MA Batrox ) ranged from 2.3 mm to 62.5 mm. The magnitude of the maximum amplitude (MA FF ) ranged from 7.6 mm to 54.5 mm. In FIG. Figure 3 shows the correlation between MA FF and MA Batrox.

Коэффициент корреляции между MFF и МАБатрокс составил 0,88 (р<0.001).The correlation coefficient between M FF and Batrox MA was 0.88 (p <0.001).

По методу Бленд-Альтмана оба показателя также соответствовали друг другу (фиг. 4). На фиг. 4 показано сравнение MAFF и МАБатрокс методом Бленд-Альтмана. Видно, что данные, полученные обоими методами, согласуются между собой. Пунктирными линиями представлены средняя разница MAFF и МАБатрокс, а также среднее разницы ± 1,96 стандартного отклонения.According to the Blend-Altman method, both indicators also corresponded to each other (Fig. 4). In FIG. 4 shows a comparison of MA FF and MA Batrox by the Blend-Altman method. It can be seen that the data obtained by both methods are consistent with each other. Dotted lines represent the average difference between MA FF and MA Batrox , as well as the average difference of ± 1.96 standard deviation.

Пример 3. Исследование функционального фибриногена двумя методами с помощью тромбоэластографии у больной с гипофибриногенемией до и после коррекции содержания фибриногена в плазме с помощью криопреципитата.Example 3. The study of functional fibrinogen by two methods using thromboelastography in a patient with hypofibrinogenemia before and after correction of plasma fibrinogen content using cryoprecipitate.

Больная З., 29 лет, госпитализирована в связи с впервые выявленным острым промиелоцитарным лейкозом. У больной имелся выраженный геморрагический синдром в виде гематом после инъекций, спонтанных гематом на коже груди, нижних конечностей. При поступлении плазменная концентрация фибриногена, определенная по методу Клаусса, составила 1,1 г/л.Patient Z., 29 years old, was hospitalized in connection with the first detected acute promyelocytic leukemia. The patient had a pronounced hemorrhagic syndrome in the form of hematomas after injections, spontaneous hematomas on the skin of the chest and lower extremities. Upon receipt, the plasma concentration of fibrinogen, determined by the Clauss method, was 1.1 g / l.

Выполнена тромбоэластография на тромбоэластографе TEG 5000 реактивом Haemonetics® для исследования функционального фибриногена. В кювету для тромбоэластографии вносили 20 мкл 0,2М раствора кальция хлорида. Затем 500 мкл цитратной крови добавляли во флакон с реагентом на функциональный фибриноген (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000). После перемешивания из этого флакона отбирали 340 мкл крови и вносили в кювету, в которой уже находился раствор кальция хлорида. Выполняли тромбоэластографию. По окончанию теста определяли максимальную амплитуду (MAFF), которая составила 13,5 мм, что соответствовало уровню функционального фибриногена (FLEV) 2,5 г/л (фиг. 5). Одновременно выполняли тест с батроксобином, полученным по описанному выше методу с активностью 5 МЕ/мл: 340 мкл гепаринизированной крови вносили в кювету, в которую было добавлены 10 мкл раствора батроксобина с активностью 5 МЕ/мл. Выполняли тромбоэластографию. Определяли максимальную амплитуду (МАБатрокс) на тромбоэластограмме, которая составила 3,6 мм (фиг. 6), что, согласно полученной нами формуле, соответствовало концентрации функционального фибриногена (ФФБатрокс) 1,0 г/л.Thromboelastography was performed on a TEG 5000 thromboelastograph with Haemonetics® reagent to study functional fibrinogen. 20 μl of 0.2 M calcium chloride solution was added to the thromboelastography cuvette. Then, 500 μl of citrated blood was added to the functional fibrinogen reagent vial (Functional Fibrinogen Reagent for TEG 5000). After stirring, 340 μl of blood was taken from this vial and introduced into a cuvette in which a solution of calcium chloride was already present. Thromboelastography was performed. At the end of the test, the maximum amplitude (MA FF ) was determined, which was 13.5 mm, which corresponded to a level of functional fibrinogen (FLEV) of 2.5 g / l (Fig. 5). At the same time, a test was performed with batroxobin obtained according to the method described above with an activity of 5 IU / ml: 340 μl of heparinized blood was added to a cuvette in which 10 μl of a solution of batroxobin with an activity of 5 IU / ml was added. Thromboelastography was performed. The maximum amplitude ( Batrox MA) was determined on the thromboelastogram, which was 3.6 mm (Fig. 6), which, according to our formula, corresponded to a concentration of functional fibrinogen ( Batrox FF) of 1.0 g / l.

Больной была выполнена коррекция гипофибриногенемии трансфузиями 40 доз криопреципитата. При повторном исследовании крови плазменная концентрация фибриногена, определенная по методу Клаусса, составила 3,7 г/л.The patient underwent correction of hypofibrinogenemia by transfusion of 40 doses of cryoprecipitate. In a second blood test, the plasma concentration of fibrinogen, determined by the Clauss method, was 3.7 g / l.

При выполнении пробы на функциональный фибриноген реактивом Haemonetics®, как описано выше, максимальная амплитуда (MAFF) составила 28,8 мм, что соответствовала концентрации функционального фибриногена (FLEV) 5,53 г/л (фиг. 7).When performing a functional fibrinogen assay with Haemonetics® reagent, as described above, the maximum amplitude (MA FF ) was 28.8 mm, which corresponded to a concentration of functional fibrinogen (FLEV) of 5.53 g / l (Fig. 7).

На фиг. 7 показана тромбоэластограмма с реактивом на функциональный фибриноген (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000) больной 3. после переливания 40 доз криопреципитата. MAFF 28,8 мм, расчетный уровень функционального фибриногена (FLEV) 5,5 3 г/лIn FIG. 7 shows a thromboelastogram with a functional fibrinogen reagent (Functional Fibrinogen Reagent for TEG 5000) of patient 3. after transfusion of 40 doses of cryoprecipitate. MA FF 28.8 mm, estimated level of functional fibrinogen (FLEV) 5.5 3 g / l

При выполнении тромбоэластографии с гепаринизированной кровью и раствором батроксибина активностью 5 МЕ/мл, как описано выше, максимальная амплитуда составила 22,1 мм (фиг. 8), что, согласно разработанной нами формуле, соответствовала концентрации функционального фибриногена 3,1 г/л. На фиг. 8 показана тромбоэластограмма с гепаринизированной кровью и батроксобином активностью 5 МЕ/мл больной 3. после переливания 40 доз криопреципитата. МАБатрокс 22,1 мм, расчетная концентрация функционального фибриногена (ФФБатрокс) 3,1 г/л.When performing thromboelastography with heparinized blood and a solution of batroxibin with an activity of 5 IU / ml, as described above, the maximum amplitude was 22.1 mm (Fig. 8), which, according to our formula, corresponded to a concentration of functional fibrinogen of 3.1 g / l. In FIG. 8 shows a thromboelastogram with heparinized blood and batroxobin activity of 5 IU / ml of patient 3. after transfusion of 40 doses of cryoprecipitate. MA Batrox 22.1 mm, the estimated concentration of functional fibrinogen (FF Batrox ) is 3.1 g / l.

Пример 4. Сравнение определения концентрации функционального фибриногена по методу Клаусса и функционального фибриногена двумя методами с помощью тромбоэластографии у больной с тромбоцитозом.Example 4. Comparison of the determination of the concentration of functional fibrinogen by the Clauss method and functional fibrinogen by two methods using thromboelastography in a patient with thrombocytosis.

Больная А. 21 года страдает талассемией. В 2013 г. была выполнена спленэктомия. С 2013 г. в клиническом анализе крови у больной выявляется тромбоцитоз. На момент исследования функционального фибриногена концентрация тромбоцитов в периферической крови составила 1333×109/л (норма 180-320×109/л), плазменная концентрация фибриногена, определенная по методу Клаусса, составила 1,1 г/л.Patient A., 21, suffers from thalassemia. In 2013, a splenectomy was performed. Since 2013, a thrombocytosis has been detected in a patient’s clinical blood test. At the time of the study of functional fibrinogen, the platelet concentration in the peripheral blood was 1333 × 10 9 / L (normal 180-320 × 10 9 / L), the plasma concentration of fibrinogen determined by the Clauss method was 1.1 g / L.

Была выполнена тромбоэластография на тромбоэластографе TEG 5000 с реактивом Haemonetics® для исследования функционального фибриногена. В кювету для тромбоэластографии вносили 20 мкл 0,2М раствора кальция хлорида. Затем 500 мкл цитратной крови добавляли во флакон с реагентом на функциональный фибриноген (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000). После перемешивания из этого флакона отбирали 340 мкл крови и вносили в кювету, в которой уже находился раствор кальция хлорида. Выполняли тромбоэластографию. По окончанию теста определяли максимальную амплитуду стандартным методом определения функционального фибриногена (MAFF), которая составила 34 мм, что соответствовало концентрации функционального фибриногена (FLEV) 6,3 г/л (фиг. 9). На фиг. 9 показана тромбоэластограмма с реактивом на функциональный фибриноген (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000) больной А с тромбоцитозом 1333×109/л. MAFF 34,4 мм, что соответствовало уровню функционального фибриногена (FLEV) 6,3 г/л. Одновременно выполняли тест с батроксобином активностью 5 МЕ/мл, полученным по описанному выше методу: 340 мкл гепаринизированной крови вносили в кювету, в которую было добавлены 10 мкл раствора батроксобина с активностью 5 МЕ/мл. Выполняли тромбоэластографию. Определяли максимальную амплитуду (МАБатрокс) на тромбоэластограмме, которая составила 6,3 мм (фиг. 10), что, согласно полученной нами формуле, соответствовало концентрации функционального фибриногена (ФФБатрокс) 1,3 г/л, это оказалось значительно ближе к концентрации фибриногена, определенного по методу Клаусса, чем с реактивом Haemonetics®. На фиг 10 показана тромбоэластограмма с гепаринизированной кровью и батроксобином с активностью 5 МЕ/мл больной А. с тромбоцитозом 1333×109/л. МАБатрокс 6,2 мм, расчетная концентрация функционального фибриногена (ФФБатрокс) 1,3 г/л. Большую величину MAFF, чем МАБатрокс, а, следовательно, и большую концентрацию функционального фибриногена можно объяснить различиями в методологических подходах. В тесте Haemonetics® максимальная амплитуда, которая должна бы соответствовать уровню фибриногена, достигается добавлением абциксимаба, ингибирующего тромбоциты, однако при тромбоцитозе, при котором количество тромбоцитов крови значительно превышает их нормальное значение, стандартная доза абциксимаба может не полностью ингибировать тромбоциты (Schlimp CJ., Solomon С, Ranucci М, Hochleitner G, Redl H,

Figure 00000004
Ню The Effectiveness of Different Functional Fibrinogen Polymerization Assays in Eliminating Platelet Contribution to Clot Strength in Thromboelastometry. Anesth Analg 2014; 118: 269-76) и, следовательно, сохраняется их вклад в максимальную амплитуду тромбоэластограммы, поэтому ее величина будет завышенной. При определении функционального фибриногена в гепаринизированной крови в тесте с батроксобином активностью 5 МЕ/мл тромбоциты вообще не участвуют в формирования сгустка и максимальной амплитуды, следовательно, их количество в крови не влияет на определяемую концентрацию функционального фибриногена.Thromboelastography was performed on a TEG 5000 thromboelastograph with Haemonetics® reagent to study functional fibrinogen. 20 μl of 0.2 M calcium chloride solution was added to the thromboelastography cuvette. Then, 500 μl of citrated blood was added to the functional fibrinogen reagent vial (Functional Fibrinogen Reagent for TEG 5000). After stirring, 340 μl of blood was taken from this vial and introduced into a cuvette in which a solution of calcium chloride was already present. Thromboelastography was performed. At the end of the test, the maximum amplitude was determined by the standard method for determining functional fibrinogen (MA FF ), which was 34 mm, which corresponded to a concentration of functional fibrinogen (FLEV) of 6.3 g / l (Fig. 9). In FIG. Figure 9 shows a thromboelastogram with a functional fibrinogen reagent (Functional Fibrinogen Reagent for TEG 5000) of patient A with a thrombocytosis of 1333 × 109 / L. MAFF 34.4 mm, which corresponded to a level of functional fibrinogen (FLEV) of 6.3 g / l. At the same time, a test was performed with batroxobin with an activity of 5 IU / ml, obtained according to the method described above: 340 μl of heparinized blood was introduced into a cuvette into which 10 μl of a solution of batroxobin with activity of 5 IU / ml was added. Thromboelastography was performed. The maximum amplitude ( Batrox MA) was determined on the thromboelastogram, which was 6.3 mm (Fig. 10), which, according to our formula, corresponded to a concentration of functional fibrinogen ( Batrox FF) of 1.3 g / l, which turned out to be much closer to the concentration fibrinogen determined by the Clauss method than with the Haemonetics® reagent. Figure 10 shows a thromboelastogram with heparinized blood and batroxobin with an activity of 5 IU / ml patient A. with thrombocytosis 1333 × 109 / L. MA Batrox 6.2 mm, the estimated concentration of functional fibrinogen (FF Batrox ) 1.3 g / l. A larger MA FF than MA Batrox , and, consequently, a higher concentration of functional fibrinogen can be explained by differences in methodological approaches. In the Haemonetics® test, the maximum amplitude that would be consistent with the level of fibrinogen is achieved by adding platelet inhibiting abciximab, but with thrombocytosis, in which the number of blood platelets is much higher than their normal value, a standard dose of abciximab may not completely inhibit platelets (Schlimp CJ, Solom. C, Ranucci M, Hochleitner G, Redl H,
Figure 00000004
Nude The Effectiveness of Different Functional Fibrinogen Polymerization Assays in Eliminating Platelet Contribution to Clot Strength in Thromboelastometry. Anesth Analg 2014; 118: 269-76) and, therefore, their contribution to the maximum amplitude of the thromboelastogram is preserved, therefore, its value will be overestimated. When determining functional fibrinogen in heparinized blood in a test with batroxobin with an activity of 5 IU / ml, platelets do not participate at all in the formation of a clot and maximum amplitude, therefore, their amount in the blood does not affect the determined concentration of functional fibrinogen.

Таким образом, максимальная амплитуда тромбоэластограммы, выполненной с гепаринизированной кровью с добавлением батроксобином с активностью 5 МЕ/мл, хорошо коррелирует с плазменной концентрацией фибриногена, измеренной по методу Клауссса, с максимальной амплитудой тромбоэластограммы, выполненной с реактивом Haemonetics® для исследования функционального фибриногена (Functional Fibrinogen Reagent для TEG 5000), отражает концентрацию функционального фибриногена у больных с гипофибриногенемией, нормальным содержанием фибриногена, при тромбоцитозе.Thus, the maximum amplitude of the thromboelastogram performed with heparinized blood supplemented with batroxobin with an activity of 5 IU / ml correlates well with the plasma concentration of fibrinogen measured by the Clauss method with the maximum amplitude of the thromboelastogram performed with the Haemonetics® reagent for the study of functional fibrinogen Reagent for TEG 5000), reflects the concentration of functional fibrinogen in patients with hypofibrinogenemia, normal fibrinogen content, and thrombocytosis.

Claims (1)

Способ определения функционального фибриногена, включающий исследование цельной пробы крови путем тромбоэластографии, отличающийся тем, что гепаринизированную кровь и батроксобин с активностью 5 МЕ/мл вносят в кювету для тромбоэластографии в соотношении 34:1 соответственно, после чего выполняют тромбоэластографию, определяя параметр максимальной амплитуды (МАБатрокс) на тромбоэластограмме, а концентрацию функционального фибриногена (ФФБатрокс) рассчитывают по формуле: ФФБатрокс = 0.1153 × МАбатрокс + 0.5903, где ФФБатрокс - концентрация функционального фибриногена (г/л), МАБатрокс - максимальная амплитуда на тромбоэластограмме с гепаринизированной кровью и батроксобином (мм), 0.1153 и 0.5903 - коэффициенты пересчета.A method for determining functional fibrinogen, including the study of a whole blood sample by thromboelastography, characterized in that heparinized blood and batroxobin with an activity of 5 IU / ml are added to a thromboelastography cuvette in a ratio of 34: 1, respectively, after which thromboelastography is performed, determining the maximum amplitude parameter (MA Batroks) on tromboelastogramma, and the concentration of functional fibrinogen (Batroks PF) is calculated according to the formula: FF = 0.1153 × Batroks MA batroks + 0.5903 where PF Batroks - concentration functional- Fibrinogen (g / l), MA Batroks - maximum amplitude at tromboelastogramma heparinized blood and batroxobin (mm), 0.1153 and 0.5903 - conversion factors.
RU2017137693A 2017-10-30 2017-10-30 Method for determination of functional fibrinogen RU2669796C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017137693A RU2669796C1 (en) 2017-10-30 2017-10-30 Method for determination of functional fibrinogen

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017137693A RU2669796C1 (en) 2017-10-30 2017-10-30 Method for determination of functional fibrinogen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2669796C1 true RU2669796C1 (en) 2018-10-16

Family

ID=63862490

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017137693A RU2669796C1 (en) 2017-10-30 2017-10-30 Method for determination of functional fibrinogen

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2669796C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2703541C1 (en) * 2019-03-15 2019-10-21 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) Method for determining fibrinogen during recalcification of citrate plasma and evaluating its functionality
WO2021028448A1 (en) * 2019-08-12 2021-02-18 Dublin City University Method for the determination of plasma fibrinogen concentration in whole blood samples
RU2786591C2 (en) * 2020-10-05 2022-12-22 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ивановский государственный химико-технологический университет" Method for determining blood plasma coagulation indicators - thrombin activity, plasma recalcification time and plasma tolerance to heparin

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009080303A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-02 Csl Behring Gmbh Diagnostic in vitro method for assessing von willebrand disease and increased bleeding risk associated with von willebrand disease and acquired or congenital disorders of platelet function
RU2517116C2 (en) * 2012-07-03 2014-05-27 Государственное бюджетное учреждение Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи им. И.И. Джанелидзе Method of estimating condition of blood coagulation system in patients in critical condition

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009080303A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-02 Csl Behring Gmbh Diagnostic in vitro method for assessing von willebrand disease and increased bleeding risk associated with von willebrand disease and acquired or congenital disorders of platelet function
RU2517116C2 (en) * 2012-07-03 2014-05-27 Государственное бюджетное учреждение Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи им. И.И. Джанелидзе Method of estimating condition of blood coagulation system in patients in critical condition

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PRULLER F. et al., Comparison of functional fibrinogen (FF/CFF) and FIBTEM in surgical patients - a retrospective study.Clin Chem Lab Med. 2016 Mar;54(3):453-8. doi: 10.1515/cclm-2015-0345. *
PRULLER F. et al., Comparison of functional fibrinogen (FF/CFF) and FIBTEM in surgical patients - a retrospective study.Clin Chem Lab Med. 2016 Mar;54(3):453-8. doi: 10.1515/cclm-2015-0345. SOLOMON C., et al., FIBTEM PLUS provides an improved thromboelastometry test for measurement of fibrin-based clot quality in cardiac surgery patients.Anesth Analg. 2013 Nov;117(5):1054-62. doi: 10.1213/ANE.0b013e3182a1afac. *
SOLOMON C., et al., FIBTEM PLUS provides an improved thromboelastometry test for measurement of fibrin-based clot quality in cardiac surgery patients.Anesth Analg. 2013 Nov;117(5):1054-62. doi: 10.1213/ANE.0b013e3182a1afac. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2703541C1 (en) * 2019-03-15 2019-10-21 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) Method for determining fibrinogen during recalcification of citrate plasma and evaluating its functionality
WO2021028448A1 (en) * 2019-08-12 2021-02-18 Dublin City University Method for the determination of plasma fibrinogen concentration in whole blood samples
RU2786591C2 (en) * 2020-10-05 2022-12-22 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ивановский государственный химико-технологический университет" Method for determining blood plasma coagulation indicators - thrombin activity, plasma recalcification time and plasma tolerance to heparin

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Paar et al. Anticoagulant action of low, physiologic, and high albumin levels in whole blood
Roullet et al. Rotation thromboelastometry detects thrombocytopenia and hypofibrinogenaemia during orthotopic liver transplantation
Smith et al. Correlation of hematocrit, platelet concentration, and plasma coagulation factors with results of thromboelastometry in canine whole blood samples
Larsen et al. Diagnostic performance and therapeutic consequence of thromboelastometry activated by kaolin versus a panel of specific reagents
Karon Why is everyone so excited about thromboelastrography (TEG)?
Edwards et al. Parameters of thromboelastography in healthy newborns
Lison et al. Postoperative changes in procoagulant factors after major surgery
Dias et al. New-generation thromboelastography: comprehensive evaluation of citrated and heparinized blood sample storage effect on clot-forming variables
Herring et al. Diagnostic approach to small animal bleeding disorders
Stang et al. Fibrinogen
Peng et al. A comparative study of viscoelastic hemostatic assays and conventional coagulation tests in trauma patients receiving fibrinogen concentrate
Carroll et al. Measurement of functional fibrinogen levels using the Thrombelastograph
JP2017520757A (en) Methods and reagents for detecting fibrinolysis and fibrinolysis enhancement
KR101298966B1 (en) Method for differentiating a XIII factor deficiency states by means of thrombelastographic engineering
RU2669796C1 (en) Method for determination of functional fibrinogen
Gant et al. Abnormal platelet activity in dogs and cats–impact and measurement
Hutton et al. Haemostatic mechanism in uraemia
Paniccia et al. Evaluation of a new point-of-care celite-activated clotting time analyzer in different clinical settings: the i-STAT celite-activated clotting time test
Odegard et al. Evaluation of the coagulation system in children with two-ventricle congenital heart disease
RU2703541C1 (en) Method for determining fibrinogen during recalcification of citrate plasma and evaluating its functionality
DeLoughery Tests of hemostasis and thrombosis
CA2883260C (en) Composition for use as an abnormal coagulation control plasma in in vitro assays
Curnow The overall hemostatic potential (OHP) assay
Smith et al. The prolonged bleeding time in hemophilia A: comparison of two measuring technics and clinical associations
Schlimp et al. Fibrinogen assays