RU2661600C1 - Способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка - Google Patents
Способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка Download PDFInfo
- Publication number
- RU2661600C1 RU2661600C1 RU2017133366A RU2017133366A RU2661600C1 RU 2661600 C1 RU2661600 C1 RU 2661600C1 RU 2017133366 A RU2017133366 A RU 2017133366A RU 2017133366 A RU2017133366 A RU 2017133366A RU 2661600 C1 RU2661600 C1 RU 2661600C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- her2
- metastases
- nfkb1
- expression
- tumor
- Prior art date
Links
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000011161 development Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 201000006585 gastric adenocarcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 title claims abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 26
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims abstract description 3
- 101000937544 Homo sapiens Beta-2-microglobulin Proteins 0.000 claims abstract 3
- 102100027314 Beta-2-microglobulin Human genes 0.000 claims abstract 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 14
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 12
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 11
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 6
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 206010030137 Oesophageal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 108700020302 erbB-2 Genes Proteins 0.000 description 4
- 208000028653 esophageal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 208000036764 Adenocarcinoma of the esophagus Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000007550 esophagus adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 239000000092 prognostic biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 2
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008617 Cholecystitis chronic Diseases 0.000 description 1
- 208000000668 Chronic Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 101150054472 HER2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000009875 Ki-67 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010020437 Ki-67 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000007433 Lymphatic Metastasis Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033649 Pancreatitis chronic Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102000009339 Proliferating Cell Nuclear Antigen Human genes 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 1
- 208000036765 Squamous cell carcinoma of the esophagus Diseases 0.000 description 1
- 241000589500 Thermus aquaticus Species 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 description 1
- 231100001075 aneuploidy Toxicity 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 108700021031 cdc Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008711 chromosomal rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 230000006552 constitutive activation Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 206010013864 duodenitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 208000007276 esophageal squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 238000013110 gastrectomy Methods 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001046 green dye Substances 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000000565 lesser omentum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000011591 microinvasive gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 230000005853 oncogenic activation Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004879 pulmonary tissue Anatomy 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 210000000574 retroperitoneal space Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000007863 steatosis Effects 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к молекулярной онкологии и представляет собой способ прогнозирования метастазов в регионарные лимфоузлы при аденокарциноме желудка, отличающийся тем, что осуществляют амплификацию фрагментов локусов В2М, NFKB1 и HER2 NFKB1 и HER2 методом ПЦР в реальном времени, рассчитывают относительную копийность генов по формуле rC=rCопухоль/rCнорма=2-ΔCt (опухоль/2-ΔCt (норма), где rC - относительная копийность гена, ΔCt - разность среднего значения сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам для гена мишени и среднего Ct по трем повторам для референсного гена: ΔCt=Ct(ген мишень)-Ct(B2M), осуществляют иммуногистохимическое исследование на срезах парафиновых блоков с помощью моноклональных антител к Ki67 и HER2, и при значениях rCNFKB1<0,8±0,02 и rCHER2<1,1±0,08 в комбинации с уровнем экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki67игх<35,6±6,1 и негативной экспрессией HER2игх(-) прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rCNFKB1>0,9±0,01 и rCHER2>2,0±0,1 в комбинации с уровнем экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki67игх>54,2±4,9 и позитивной экспрессией HER2игх (+++) прогнозируют развитие метастазов. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств прогнозирования развития метастазов, а также создание способа, быстрого в исполнении и высокочувствительного. 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярной биологии, онкологии, и касается способа прогнозирования вероятности развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка.
Рак желудка занимает одно из ведущих мест в общей структуре онкологических заболеваний в РФ: 8,2% у мужчин и 5,4% у женщин. В структуре смертности населения России от злокачественных новообразований рак желудка занимает второе место с показателем 10,7% или 30788 человек в 2014 году (см. Под редакцией А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой // Злокачественные новообразования в России в 2015 году (заболеваемость и смертность), Москва, 2017).
Аденокарцинома желудка составляет 95% от общего числа злокачественных новообразований данного органа (см. Dicken BJ, Bigam DL, Cass С, Mackey JR, Joy AA, Hamilton SM. Gastric Adenocarcinoma: Review and Considerations for Future Directions. Annals of Surgery. 2005; 241(1):27-39. doi:10.1097/01.sla.0000149300.28588.23).
Метастазы возникают у 90% больных, при этом выживаемость составляет 65% в случае ранней диагностики заболевания и менее 15% на поздних стадиях развития онкологического процесса (см. Takuji G., Yanagisawa A., Sasako М. Ono Н, Nakanishi Y., Shimoda Т., Kato Y. Incidence in lymph node metastasis from early gastric cancer: estimation with a large number of cases at two large centers. // Gastric Cancer. - 2000. - V. 3. - P. 219-225). Поэтому поиск потенциальных молекулярных и иммуногистохимических маркеров, пригодных для прогнозирования течения этого заболевания, является актуальной задачей.
Изменение копийности генов (Copy Number Variation или CNV) является одним из основных механизмов контроля раковой клеткой ключевых для выживания и малигнизации экспрессии генов. Копийность генов - вид генетического полиморфизма, возникающий в результате несбалансированных хромосомных перестроек, таких как делеции и дупликации.
Результатом вариации может явиться снижение или повышение числа копий определенного гена и, следовательно, пониженная или повышенная экспрессия продукта гена - белка или не кодирующей РНК. CNV представляют собой критические генетические события, которые способствуют развитию и прогрессированию злокачественных новообразований у человека (см. Кит О.И., Водолажский Д.И., Кутилин Д.С., Гудуева Е.Н. Изменение копийности генетических локусов при раке желудка // Молекулярная биология. - 2015. - Т. 49, №4. - С. 658-666.).
C-erbB-2 (HER2/neu) - представитель семейства гомологичных трансмембранных рецепторов эпидермального фактора роста, обладающих тирозинкиназной активностью. Белок HER2, не имея собственного лиганда, взаимодействует с другими рецепторами и усиливает функционирование всей системы (см. Harari D., Yarden Y, Molecular mechanisms underlying ErbB2/HER2 action in breast cancer Oncogene. 2000 Dec 11; 19(53):6102-14.; см. McCormick Matthews L.H., Noble F., Tod J. et al. Systematic review and meta-analysis of immunohistochemical prognostic biomarkers in resected oesophageal adenocarcinoma. British Journal of Cancer. 2015; 113(1):107-118.). При изучении аденокарциномы пищевода отмечается отрицательный прогностический эффект при избыточной экспрессии HER2 (см. McCormick Matthews L.H. et al., 2015).
Область исследования экспрессии HER2 в последнее время значительно расширилась, охватив такие нозологии, как рак молочной железы, рак желудка и рак пищевода.
В настоящее время проводится проспективное клиническое исследование. Первичные результаты свидетельствуют о том, что чувствительность и специфичность для диагностики аденокарциномы пищевода составляют 88 и 100% соответственно, при одновременном гистохимическом определении HER2, c-myc, и анеуплоидии (см. С. Tan, X. Qian, Z. Guan, В. Yang, Y. Ge, F. Wang, J. Cai. Potential biomarkers for esophageal cancer Springerplus. 2016; 5: 467.).
Единого мнения о прогностической ценности гиперэкспрессии белка HER2 при РЖ пока нет (см. Song Y., Huang J., Wang J.W. Relationship between HER2/neu gene amplification and protein expression and prognosis in patients with advanced gastric carcinoma. Chin J Cancer. 2010; 29(1):76-81.). Большинство исследований указывает на то, что избыточная мембранная экспрессия HER2 ассоциирована с плохим прогнозом заболевания и может служить прогностическим показателем для инвазивных характеристик опухоли и метастазирования в лимфатические узлы (см. Zhang XL, Yang YS, Xu DP, Qu JH, Guo MZ, Gong Y, Huang J., Comparative study on overexpression of HER2/neu and HER3 in gastric cancer. World J Surg. 2009; 33(10):2112-8).
Особое значение в прогнозировании поведения опухоли придают ее пролиферативной активности.
Наиболее распространенным маркером пролиферации является регуляторный белок Ki 67. Несмотря на общее использование Ki 67 для индексации клеточной пролиферации его прогностическая значимость при плоскоклеточном раке пищевода остается неубедительной.
В трех исследованиях, включавших в общей сложности 192 пациента, наблюдался незначительный прогностический эффект (см. McCormick Matthews L.H., Noble F., Tod J, Jaynes E, Harris S, Primrose J N, Ottensmeier C, Thomas G J, Underwood T J. Systematic review and meta-analysis of immunohistochemical prognostic biomarkers in resected oesophageal adenocarcinoma. Br J Cancer. 2015; 113(1): 107-118.).
Напротив, исследование, проведенное Sittel С. et al. (см. Sittel С, Ruiz S, Kvasnicka H M, Volling P, 
Eckel H E. 2000. Prognostic relevance of proliferation marker Ki-67 (MIB 1), PCNA and p53 in combined surgically and radiologically treated cancers of the oropharynx and mouth cavity Laryngo-rhino-otologie 79 (2): 86-92.) показало, что высокая экспрессия Ki 67 является неблагоприятным фактором в прогнозе течения и общей безрецидивной выживаемости.
Антитела к Ki 67 выявляют пролиферирующие клетки, находящиеся в разных фазах цикла. Ki 67 является надежным индикатором пролиферации практически во всех опухолевых образованиях человека. Антиген Ki 67, выявляемый соответствующими моноклональными антителами, представляет собой короткоживущий протеин, он разрушается в течение 1,5-2 часов. Поэтому антитела к Ki 67 выявляют только делящиеся клетки, так как Ki-67 не успевает накапливаться и не остается в покоящихся клетках (см. Петров С.В., Райхлин Н.Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. Казань: Татмедиа, 2012. - 623 с.).
Транскрипционный фактор NFKB (ядерный фактор «каппа-би») контролирует экспрессию генов иммунного ответа, апоптоза и клеточного цикла. Нарушение регуляции NFKB вызывает воспаление, аутоиммунные заболевания, а также развитие рака.
Так как одним из важных свойств NFKB является его способность защищать клетку от апоптоза, гены его субъединиц относят к протоонкогенам. В норме активность сигнального пути NFKB в клетке находится под строгим контролем, однако мутации различных генов могут стать причиной его конститутивной активации. Это имеет место при лимфомах разного происхождения, множественной миеломе и раке (см. Staudt L.М. Oncogenic activation of NF-kappaB // Cold Spring Harb Perspect Biol. - 2010. - T. 2, вып. 6. - С. a000109.)
Поэтому в качестве маркеров для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом аденокарцинома желудка адекватно комбинированное использование показателей относительной копийности генов NFKB1 и HER2 и иммуногистохимической экспрессии белков KI67 и HER2.
Анализ патентных источников показал наличие близких по тематике изобретений:
1. «Способ прогнозирования продолжительности жизни онкологических больных после радикальных операций» (см. патент RU 2101704 C1, G01N 33/49 по заявке №94005926): на основе определения онкологических индексов - измерения антропометрических данных и характеристик опухоли, показателей общего и биохимического анализов крови.
2 «Способ прогнозирования метастазов у больных раком желудка» (см. патент RU №2445632 С1, опубл. 20.03.2012, Бюл. №8): на основе иммуногистохимического исследования, маркера пролиферативной активности Ki-67 и маркеров апоптоза р53, bcl-2 у больных раком желудка.
Описанные изобретения используют в анализе способы, принципиально отличающиеся от нашего, обладающие меньшей чувствительностью или специфичностью, чем предлагаемый нами, сочетающий комбинацию молекулярно-генетического и иммуногистохимического подходов.
Изобретение «Способ прогнозирования развития метастазов у пациентов с аденокарциномой желудка на основе молекулярно-генетического и иммуногистохимического анализа» является новым, так как данная панель генов/белков и методов ранее не использовалась для заявленной в способе цели.
Техническим результатом заявляемого изобретения является создание нового, простого в исполнении, не дорогостоящего и более точного способа прогнозирования развития метастазов у больных аденокарциномой желудка.
Технический результат достигается тем, что осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, NFKB1 и HER2 NFKB1 и HER2 методом ПЦР в реальном времени с помощью высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=rCопухоль/rCнорма=2-ΔCt (опухоль)/2-ΔCt (норма), где rC - относительная копийность гена, ΔCt - разность среднего значения сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам для гена мишени и среднего Ct по трем повторам для референсного гена: ΔCt=Ct(ген мишень) - Ct(B2M), параллельно осуществляют иммуногистохимическое исследование на срезах парафиновых блоков с помощью моноклональных антител к Ki67 и HER2, сравнивают полученные значения rC с прогностическими значениями копийности, и при значениях rCNFKB1<0,8±0,02 и rCHER2<1,1±0,08 в комбинации с уровнем экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki67игх<35,6±6,1 и негативной экспрессией HER2игх(-) прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rCNFKB1>0,9±0,01 и rCHER2>2,0±0,1 в комбинации с уровнем экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki67игх>54,2±4,9 и позитивной экспрессией HER2игх (+++) прогнозируют развитие метастазов.
Заявляемый способ является экономически оправданным, осуществляется в условиях стандартной лаборатории молекулярной биологии (ПЦР+ИГХ), без использования специального дорогостоящего оборудования; обладает высокой чувствительностью и специфичностью, универсален, его осуществление возможно с операционными биоптатами (парафиновыми блоками), регистрацию результатов производят однократно в конце исследования, способ занимает менее 8 часов.
Заявленный анализ основан на определении количества копий генов NFKB1 и HER2 относительно референсного локуса В2М (β-2 микроглобин) в опухолевой ткани желудка, и последующем сравнении полученных значений с интервалом копийности rCNFKB1 и rCHER2 характерным для развития метастазов или их отсутствия, а также на иммуногистохимическом определении экспрессии белков Ki 67 и HER2 и сравнении полученных значений с показателями ИГХ (Ki 67 и HER2) характерными для развития метастазов или их отсутствия.
Заявленный способ включает следующие приемы:
- выделение тотальной ДНК из тканевых проб или из парафиновых блоков с помощью метода фенол-хлороформной экстракции;
- определение относительной копийности генетических локусов методом ПЦР-РВ в присутствии красителя EVA-Green и специфичных праймеров на матрице выделенной ДНК;
- анализ первичных данных с помощью программного продукта амплификатора;
- расчет относительной копийности гена (rC) на основании соотношения сигналов, продуцируемых амплификатами изучаемой и референсной последовательностей,
- сравнение rC пробы с прогностическими значениями копийности rCстандарт, определенными для больных раком желудка с метастазами или без метастазов в лимфоузлах.
- иммуногистохимическое исследование на срезах парафиновых блоков, предназначенных для стандартного морфологического исследования, с помощью моноклональных антител к KI67 и HER2.
- сравнение полученных значений с показателями ИГХ (KI67 и HER2) характерными для развития метастазов или их отсутствия
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
На первом этапе отбираются образцы опухолевой и нормальной тканей из операционного или биопсийного материала. Для транспортировки в лабораторию и хранения образцы замораживаются в жидком азоте.
Фрагменты ткани измельчаются скальпелем и/или ножницами, затем растираются в фарфоровых ступках в присутствии лизирующего SDS-содержащего буфера. К лизатам добавляется протеиназа К и инкубируется при t=56°C в течение 1 часа.
ДНК выделяется из прозрачного лизата тканей с использованием фенол-хлороформной экстракции (см. Корниенко И.В., Водолажский Д.И., Вейко В.П. и др. Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел. - Ростов-н/Д: ООО Ростиздат, 2001).
Концентрация полученных препаратов ДНК измеряется на флюориметре. Для проведения ПЦР-РВ концентрацию ДНК в каждом образце нормализуют до 2 нг/мкл.
Анализируемые последовательности генетических локусов амплифицируют в 25 мкл ПЦР-смеси, содержащей 10 нг геномной ДНК, 0,2 м М dNTPs, 2,5 мМ MgCl2, 1х-ый ПЦР-буфер, 1 е.а. ДНК-полимеразы Thermus aquaticus («Синтол», Россия), краситель SYBR@Green I (Invitrogen, США) и по 200 нМ прямого и обратного праймеров для референсного гена (β-2 микроглобин) или гена-мишени.
Прямые и обратные праймеры были разработаны для нуклеотидных последовательностей, содержащих интронные и экзонные участки генетических локусов, с использованием данных NCBI GenBank (таблица 1).
Для оптимизации ПЦР использовали только праймеры, которые обеспечивали специфичную амплификацию необходимого количества продукта и не образовывали между собой высокоэнергетических внутренних структур: шпилек и дуплексов.
Оптимизировали такие параметры ПЦР, как концентрация MgCl2 и праймеров в ПЦР-смеси, соотношение прямых и обратных праймеров, количество циклов амплификации, время элонгации, денатурации и отжига праймеров. В результате оптимизации подобрали одинаковую температуру отжига праймеров для всех локусов.
Количественную ПЦР-РВ амплификацию проводят на термоциклере, например, Bio-Rad CFX96 (USA), в соответствии с инструкциями производителя по следующей программе. Первичная денатурация: t=95°C в течение 3 мин. 40 циклов: t=95°C в течение 10 с, t=55°C в течение 30 с, t=72°C в течение 30 с.
Относительную копийность генетических локусов определяют по формуле rC=rCопухоль/rCнорма=2-ΔCt (опухоль)/2-ΔCt (норма), где rC - относительная копийность гена, ΔCt - разность среднего значения сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам для гена мишени и среднего Ct по трем повторам для референсного гена: ΔCt=Ct(ген мишень)-Ct(B2M).
Иммуногистохимическое исследование проводят на срезах парафиновых блоков, предназначенных для стандартного морфологического исследования, с помощью моноклональных антител к Ki67 и HER2
Депарафинизацию и дегидратацию парафиновых срезов выполняли по стандартной методике. "Демаскировку" антигенов проводили в PT-Link Thermo.
Согласно протоколу, вначале срезы подвергались предварительному нагреву до 65°C, далее происходило восстановление антигена в течение 20 минут при температуре 97°C и охлаждение до 65°C. После этого стекла промывали в течение 1-3 минут TBS-буфером (Dako) и помещали в автостейнер Thermo Scientific для окрашивания в автоматическом режиме. Визуализация иммуногистохимической реакции выполнялась с использованием системы детекции Reveal Polyvalent HRP-DAB Detection System.
Перед заключением покровных стекол под бальзам Bio-Mount срезы докрашивали гематоксилином Майера. Оценку результатов иммуногистохимической реакции проводили с применением светового микроскопа «Leica» (Германия) под увеличением ×10, ×20, ×40.
Приводим клинические примеры применения способа.
Пример №1
Больной Р., дата рождения 06.02.1950 г., госпитализирован в отделение абдоминальной онкологии №1 РНИОИ с верифицированным диагнозом рак желудка, ФГС - Cancer субкардиального отдела желудка. Атрофический анацидный (РН-5,0) Нр-не ассоциированный гастрит. Дуоденит.
При СРКТ органов грудной клетки, брюшной полости и малого таза перигастральных, периинтестинальных образований не выявлено. Легочная ткань - с обеих сторон в легких диффузный пневмосклероз, что позволило предположить до операции стадию II, T3NxM0.
19.11.2014 выполнена лапаротомия, гастрэктомия с расширенной лимфаденкэктомией. При макроскопическом исследовании в удаленном желудке обнаружена опухоль до 6 см в диаметре по малой кривизне, инфильтративно язвенного типа, увеличенные лимфоузлы вдоль левых желудочных сосудов (до 10).
Результаты оценки копийности целевых генов и параметров ИГХ в биоптате у данной пациентки: rCNFKB1=0,95 и rCHER2=2,6; уровень экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка KI67игх=59,5 и позитивная экспрессия HER2игх (+++), находились в границах прогностического критерия развития метастазов.
По данным патоморфологического исследования после операции - аденокарцинома с изъязвлением инвазией всей толщи стенки желудка и подлежащей жировой ткани; в 1 из 10 лимфоузлов-метастаз аденокарциномы.
Таким образом, степень распространения процесса согласно классификации TNM соответствовала T3N1M0.
Пример №2
Больная П., дата рождения 20.05.1960 г., госпитализирована в отделении абдоминальной онкологии №1 РНИОИ 30.06.2015 г. с верифицированным диагнозом рак желудка. ФГДС - рак антрального отдела желудка, гистологическое исследование - малодифференцированная аденокарцинома. КТ брюшной полости и забрюшинного пространства: КТ-признаки диффузных изменений паренхимы печени по типу стеатоза, хронического холецистита, густой желчи в полости желчного пузыря, хронического панкреатита, признаков метастатического поражения не выявлено, что позволило предположить до операции стадию II, T3NxM0.
02.07.2015 была выполнена операция: дистальная субтотальная резекция желудка по Бильрот 2 с расширенной лимфаденэктомией. При макроскопическом исследовании в удаленной части желудка обнаружена опухоль в выходном отделе до 6 см в диаметре, инфильтративно-язвенного типа, на разрезе - белесоватого цвета, в большом и малом сальнике увеличенных лимфоузлов не выявлено.
Результаты оценки копийности целевых генов и параметров ИГХ в биоптате у данной пациентки: rCNFKB1=0,65 и rCHER2=1,0; уровень экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki 67игх=26,2 и экспрессия HER2игх негативная(-), находились в границах прогностического критерия отсутствия развития метастазов.
По данным патоморфологического исследования после операции - аденокарцинома с инвазией в клетчатку, метастазов опухоли в лимфоузлах нет. Таким образом, степень распространения процесса согласно классификации TNM соответствовала T4aN0M0.
Предлагаемым способом было осуществлено прогнозирование вероятности развития метастазов у 30 пациентов с диагностированной аденокарциномой желудка.
«Способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка» позволяет с высокой точностью прогнозировать течение такого заболевания как аденокарцинома желудка. Заявляемый способ является экономически оправданным для уточнения особенностей течения заболевания и дает возможность скорректировать тактику лечения, осуществляется в условиях стандартной лаборатории молекулярной биологии и ИГХ, без использования специального дорогостоящего оборудования; обладает высокой чувствительностью, универсален, его осуществление возможно с операционными биоптатами, способ занимает менее 8 часов.
Claims (1)
- Способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка, включающий получение ДНК из операционного материала опухолевой и условно здоровой ткани пациента и иммуногистохимическое исследование на срезах парафиновых блоков, отличающийся тем, что осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, NFKB1 и HER2 NFKB1 и HER2 методом ПЦР в реальном времени с помощью высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=rCопухоль/rCнорма=2-ΔCt (опухоль/2-ΔCt (норма), где rC - относительная копийность гена, ΔCt - разность среднего значения сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам для гена мишени и среднего Ct по трем повторам для референсного гена: ΔCt=Ct(ген мишень)-Ct(B2M), параллельно осуществляют иммуногистохимическое исследование на срезах парафиновых блоков с помощью моноклональных антител к Ki67 и HER2, сравнивают полученные значения rC с прогностическими значениями копийности, и при значениях rCNFKB1<0,8±0,02 и rCHER2<1,1±0,08 в комбинации с уровнем экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki67игх<35,6±6,1 и негативной экспрессией HER2игх(-) прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rCNFKB1>0,9±0,01 и rCHER2>2,0±0,1 в комбинации с уровнем экспрессии в ядрах опухолевых клеток белка Ki67игх>54,2±4,9 и позитивной экспрессией HER2игх (+++) прогнозируют развитие метастазов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017133366A RU2661600C1 (ru) | 2017-09-25 | 2017-09-25 | Способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017133366A RU2661600C1 (ru) | 2017-09-25 | 2017-09-25 | Способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2661600C1 true RU2661600C1 (ru) | 2018-07-17 |
Family
ID=62917184
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017133366A RU2661600C1 (ru) | 2017-09-25 | 2017-09-25 | Способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2661600C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2696054C1 (ru) * | 2018-12-17 | 2019-07-30 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования исхода заболевания у больных раком желудка после хирургического лечения |
| RU2732700C1 (ru) * | 2019-11-19 | 2020-09-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ оценки метастатического поражения сигнального лимфатического узла при ранних формах плоскоклеточного рака полости рта |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2425639C1 (ru) * | 2010-01-18 | 2011-08-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "ОрГМА Росздрава") | Способ прогнозирования риска лимфогенного метастазирования при раке желудка |
| RU2445632C1 (ru) * | 2010-08-03 | 2012-03-20 | Федеральное государственное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Способ прогнозирования метастазов у больных раком желудка |
-
2017
- 2017-09-25 RU RU2017133366A patent/RU2661600C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2425639C1 (ru) * | 2010-01-18 | 2011-08-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "ОрГМА Росздрава") | Способ прогнозирования риска лимфогенного метастазирования при раке желудка |
| RU2445632C1 (ru) * | 2010-08-03 | 2012-03-20 | Федеральное государственное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Способ прогнозирования метастазов у больных раком желудка |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| HU J.-D. et al. Prediction of gastric cancer metastasis through urinary metabolomic investigation using GC/MS // World J Gastroenterol. 2011. Vol. 17, No. 6. P. 727-734. * |
| LIN X. et al. Molecular classification and prediction in gastric cancer // Comput Struct Biotechnol J. 2015. Vol. 13. P. 448-458. * |
| WU J. et al. Identification of Biomarkers for Predicting Lymph Node Metastasis of Stomach Cancer Using Clinical DNA Methylation Data // Dis Markers. 2017. Vol. 2017. Article ID 5745724. * |
| WU J. et al. Identification of Biomarkers for Predicting Lymph Node Metastasis of Stomach Cancer Using Clinical DNA Methylation Data // Dis Markers. 2017. Vol. 2017. Article ID 5745724. HU J.-D. et al. Prediction of gastric cancer metastasis through urinary metabolomic investigation using GC/MS // World J Gastroenterol. 2011. Vol. 17, No. 6. P. 727-734. LIN X. et al. Molecular classification and prediction in gastric cancer // Comput Struct Biotechnol J. 2015. Vol. 13. P. 448-458. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2696054C1 (ru) * | 2018-12-17 | 2019-07-30 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования исхода заболевания у больных раком желудка после хирургического лечения |
| RU2732700C1 (ru) * | 2019-11-19 | 2020-09-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ оценки метастатического поражения сигнального лимфатического узла при ранних формах плоскоклеточного рака полости рта |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lam et al. | Molecular analysis of gene fusions in bone and soft tissue tumors by anchored multiplex PCR–based targeted next-generation sequencing | |
| Kawahara et al. | Identification of non-small-cell lung cancer with activating EGFR mutations in malignant effusion and cerebrospinal fluid: rapid and sensitive detection of exon 19 deletion E746-A750 and exon 21 L858R mutation by immunocytochemistry | |
| Sugita et al. | NUTM2A-CIC fusion small round cell sarcoma: a genetically distinct variant of CIC-rearranged sarcoma | |
| Kato et al. | Overexpression of KIAA0101 predicts poor prognosis in primary lung cancer patients | |
| Min et al. | S100A4 expression is associated with lymph node metastasis in papillary microcarcinoma of the thyroid | |
| Sapino et al. | Current challenges for HER2 testing in diagnostic pathology: state of the art and controversial issues | |
| Sudo et al. | Expression of mesenchymal markers vimentin and fibronectin: the clinical significance in esophageal squamous cell carcinoma | |
| ES2525545T3 (es) | Métodos y usos para identificar el origen de un carcinoma de origen primario desconocido | |
| Das et al. | Mutually exclusive FGFR2, HER2, and KRAS gene amplifications in gastric cancer revealed by multicolour FISH | |
| Sasaki et al. | Salivary Secretory Carcinoma Harboring a Novel ALK Fusion: Expanding the Molecular Characterization of Carcinomas Beyond the: ETV6: Gene | |
| Bertazza et al. | Survivin gene levels in the peripheral blood of patients with gastric cancer independently predict survival | |
| US20070231822A1 (en) | Methods for the detection and treatment of cancer | |
| CN102459646A (zh) | 胃癌的检测标志物 | |
| Lopez et al. | Liquid biopsies in gastrointestinal malignancies: when is the big day? | |
| Burdelski et al. | p16 upregulation is linked to poor prognosis in ERG negative prostate cancer | |
| Duregon et al. | CAVEOLIN-1 expression in brain metastasis from lung cancer predicts worse outcome and radioresistance, irrespective of tumor histotype | |
| Sun et al. | Expression of HGF and Met in human tissues of colorectal cancers: biological and clinical implications for synchronous liver metastasis | |
| RU2661600C1 (ru) | Способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка | |
| Tretiakova | Chameleon TFE3-translocation RCC and how gene partners can change morphology: accurate diagnosis using contemporary modalities | |
| Heah et al. | p53 Expression as a marker of microinvasion in oral squamous cell carcinoma | |
| CN109402252A (zh) | 急性髓系白血病风险评估基因标志物及其应用 | |
| Kidd et al. | Utility of molecular genetic signatures in the delineation of gastric neoplasia | |
| Wang et al. | Clinical and prognostic significance of Raf kinase inhibitory protein expression in gastrointestinal stromal tumors | |
| RU2624505C1 (ru) | Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком желудка | |
| Goan et al. | Deregulated p21WAF1 overexpression impacts survival of surgically resected esophageal squamous cell carcinoma patients |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190926 |