RU2660542C1 - Способ определения стадии грибовидного микоза - Google Patents
Способ определения стадии грибовидного микоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2660542C1 RU2660542C1 RU2017135188A RU2017135188A RU2660542C1 RU 2660542 C1 RU2660542 C1 RU 2660542C1 RU 2017135188 A RU2017135188 A RU 2017135188A RU 2017135188 A RU2017135188 A RU 2017135188A RU 2660542 C1 RU2660542 C1 RU 2660542C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- volume fraction
- stage
- skin
- positive
- average value
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000012937 correction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 29
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 29
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 29
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 20
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 description 10
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 8
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 7
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 7
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 6
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 6
- 208000014660 primary cutaneous lymphoma Diseases 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 5
- 206010033898 parapsoriasis Diseases 0.000 description 5
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 5
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 4
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 4
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 4
- 238000012549 training Methods 0.000 description 4
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 4
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 3
- 208000035874 Excoriation Diseases 0.000 description 3
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 3
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 3
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 3
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 210000002832 shoulder Anatomy 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 206010068773 Mechanical urticaria Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 2
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 201000000409 dermatographia Diseases 0.000 description 2
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 2
- 208000020157 familial dermatographia Diseases 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940084434 fungoid Drugs 0.000 description 2
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 2
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000012886 linear function Methods 0.000 description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 206010000349 Acanthosis Diseases 0.000 description 1
- 206010048768 Dermatosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 238000009193 PUVA therapy Methods 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031709 Skin Manifestations Diseases 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004705 lumbosacral region Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000005741 malignant process Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 description 1
- 238000005312 nonlinear dynamic Methods 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011521 systemic chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и может быть использовано для определения стадии грибовидного микоза. Сущность способа: у больного проводят биопсию кожи из очага поражения, затем проводят иммуногистохимические исследования с использованием моноклональных антител CD3, CD4, CD8 и Ki67 путем компьютерной морфометрии, затем усредняют данные показатели и рассчитывают суммарную удельную значимость иммунопозитивности указанных моноклональных антител по формуле: F=0,75⋅Х1+1,9⋅Х2+2,99⋅Х3+10,53⋅Х4+0,22, где F - суммарная удельная значимость иммунопозитивности моноклональных антител CD3, CD4, CD8 и Ki67; X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3; Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4; Х3 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD8; Х4 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67; 0,75; 1,9; 2,99; 10,53 и 0,22 - поправочные коэффициенты. При значении F от 0,220 до 1,969 диагностируют ранние I-IIA стадии, а при значении F от 1,970 до 4,973 - поздние IIВ-III стадии грибовидного микоза. Изобретение обеспечивает повышение объективности и точности диагностирования стадии грибовидного микоза. 8 ил., 5 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и может быть использовано для определения стадии грибовидного микоза, наиболее часто встречаемой нозологической разновидности первичных кожных лимфом.
Грибовидный микоз (ГМ) - форма первичной эпидермотропной Т-клеточной лимфомы кожи, характеризующаяся пролиферацией малых и средних Т-лимфоцитов с наличием церебриформных ядер и сопровождающаяся этапностью развития клинических проявлений в виде пятен, бляшек и опухолей [1, 2, 3]. Согласно рекомендациям Международного общества по лимфомам кожи и Европейской организации по изучению и лечению рака (ISLE-EORTC) выделяют ранние и поздние стадии развития ГМ (таблица 1). Определение стадии ГМ базируется на 4 характеристиках злокачественного процесса: Т - tumor (лат.) - «опухоль», N - nodus (лат.) - «узел», М - metastasis (лат.) - «перемещение» - наличие метастазов, В - blood «кровь» (анг.). Когда описывают стадию ГМ, под каждой буквой указывают число - оно характеризует морфологические элементы (пятна, папулы, бляшки, опухоли) и распространенность кожных проявлений, вовлечение в патологический процесс лимфатических узлов, внутренних органов и крови.
где
T1 - ограниченные пятна, папулы, и/или бляшки, покрывающие <10% кожного покрова,
Т2 - пятна, папулы, и/или бляшки, покрывающие >10% кожного покрова,
Т3 - один или более узлов (≥1 см в диаметре),
Т4 - сливающаяся эритема, покрывающая ≥80% поверхности тела,
N0 - нет увеличения периферических лимфатических узлов, их биопсия не требуется,
N1 - периферические лимфатические узлы увеличены; гистопатология Dutch grade 1 или NCILN0-2,
N2 - периферические лимфатические узлы увеличены; гистопатология Dutch grade 2 или NCILN3,
N3 - периферические лимфатические узлы увеличены; гистопатология Dutch grade 3-4 или NCILN4, клон-позитивны или негативны,
М0 - нет вовлечения внутренних органов,
М1 - вовлечение внутренних органов (с уточнением органа и морфологическим подтверждением).
В0 - отсутствие значительного вовлечения крови: атипичные (Сезари) клетки составляют ≤5% лимфоцитов периферической крови,
B1 - умеренное вовлечение крови: атипичные (Сезари) клетки составляют >5% лимфоцитов периферической крови,
В3 - значительное вовлечение крови: ≥1000/μL клеток Сезари с позитивным клоном.
Особенно сложной задачей для практикующего врача является дифференциальная диагностика перехода ранних стадий ГМ в поздние, так как между IIA и IIB стадиями заболевания в классификации очень много общего и при отсутствии изменения периферических лимфоузлов (N0-2), вовлечения крови (В0-1) и внутренних органов (М0), кардинальным отличием IIB стадии заболевания является появление хотя бы одного узла на коже. В тоже время, при почти одинаковой инфильтрации и размерах морфологических элементов на коже больного отсутствуют объективные критерии различия «бляшки» и «узла». Поэтому своевременная диагностика и правильное установление стадии развития ГМ являются приоритетными задачами дерматовенеролога и гематолога (онколога), поскольку имеют принципиальное значение при выборе оптимальной тактики лечения больного и определяют долгосрочный прогноз' заболевания. Так, терапия ранних (I-IIA) стадий ГМ предусматривает консервативный подход с постепенным наращиванием потенциала лечебных методов и технологий от тактики «наблюдай и жди» и наружной терапии топическими глюкокортикостероидами до применения ретиноидов, интерферона-α, метотрексата, ультрафиолетового облучения спектра В (311 нм), ПУВА-терапии и локальной лучевой терапии, тогда как, осуществление специализированной медицинской помощи больным с поздними (IIB-III) стадиями ГМ в учреждениях онкогематологического профиля предусматривает уже «агрессивный» подход с применением арсенала системной химиотерапии, биологических препаратов, электронно-лучевой терапии и аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток [1, 2, 4].
Диагностический процесс при ГМ предусматривает ряд логически связанных этапов, сочетающих оценку анамнеза и клинических проявлений заболевания, анализ данных морфологических и иммуногистохимических (ИГХ) исследований, фиксирующих наличие злокачественной лимфоидной (клональной) пролиферации в коже. Проведение только гистоморфологических исследований биоптата кожи позволяет установить диагноз ГМ на ранних стадиях заболевания лишь в 16% случаев, тогда как Применение иммуноморфологического исследования клеток лимфоидного инфильтрата повышает возможность диагностики ГМ до 90% случаев. Поэтому иммуногистохимические исследования биоптата кожи считаются «золотым стандартом» диагностики ГМ, на что указывают клинические рекомендации Европейских стран и России [1, 2, 4, 5].
Анализ результатов иммуногистохимических исследований биоптата кожи в диагностике ГМ проводится на основании оценки позитивности определенных маркеров опухолевых клеток - антигенов кластеров дифференцировки (CD) на поверхности лимфоцитов. При этом врач-патоморфолог, анализирующий иммуногистохимические реакции, использует описательные и качественные приемы оценки выраженности окрашивания маркеров с применением критериев «отрицательная/положительная реакция».
Тем не менее, в литературе встречаются и усовершенствованные методики, направленные на объективизацию способа оценки иммуногистохимических маркеров с использованием критериев и балльной шкалы в зависимости от процента окрашивания опухолевых клеток (полуколичественные методы). Методика с использованием критериев предполагает следующие условные (субъективные) оценки: «0» - отсутствие окрашивания или окрашивание менее 10% опухолевых клеток с любой интенсивностью; «1+» - слабое неполное мембранное окрашивание более 10% опухолевых клеток; «2+» - от слабого до умеренного окрашивания всей цитоплазматической мембраны более 10% опухолевых клеток; «3+» - сильное окрашивание всей цитоплазматической мембраны более 10% опухолевых клеток [6].
Из числа полуколичественных методов оценки ИГХ-маркеров одним из наиболее широко применяемых в онкомаммологии и гинекологии является расчет диагностических баллов по Allred D.C. Данная методика суммарной бальной оценки состоит из двух разделов, где раздел «а» - доля окрашенных опухолевых клеток от 0 до 5 баллов (0 баллов - отсутствие окрашивания; 1 балл - количество окрашенных клеток >0, но меньше 1/100; 2 балла - от >1/100 до 1/10; 3 балла - от >1/10 до 1/3; 4 балла - от >1/3 до 2/3; 5 баллов - от >2/3 до 1); раздел «б» - оценка интенсивности окраски опухолевых клеток (от 0 до 3 баллов). Далее вычисляется суммарный балл, состоящий из доли и интенсивности окраски изучаемых клеток, однако, определение процента и интенсивности окрашивания ИГХ-маркеров также продолжает основываться на субъективной оценке исследователя [7, 8].
В отечественной практике Сыдиковым А.А., Заславским Д.В. и соавторами для анализа результатов иммуногистохимических реакций был использован полуколичественный метод, где экспрессия исследуемого маркера расценивалась как слабая «+» при наличии окрашенных гранул в 1-50 клетках, умеренная «++» - в 51-100 клетках, и резко выраженная «+++» - в 101 и более клетках, в четырех полях зрения, также основанный на субъективной оценке данных врачом-патоморфологом [9].
Известен патент на изобретение, выполненный Поповым Ю.В., Бурыкиной П.Н. и соавторами в 2015 году, где для оценки результатов иммуногистохимических реакции у пациенток с миомой матки был использован 6-балльный полуколичественный метод: отсутствие иммуноокрашенных клеток - 0 баллов; менее 5% иммуноокрашенных клеток - 0,5 балла, менее 20% иммуноокрашенных клеток - 2 балла; от 20 до 40% окрашенных клеток - 4 балла; и более 40% окрашенных клеток - 6 баллов [10].
Описанные качественные и полуколичественные приемы оценки выраженности окрашивания клеток маркерами не лишены субъективной составляющей врача-патоморфолога, в связи с этим, использование методов количественной оценки результатов иммунофенотипирования клеток позволит объективизировать диагностический процесс, что соотносится с современными критериями доказательной медицины, своевременностью и точностью верификации диагноза.
Наиболее близким по существу к рассматриваемой проблеме является метод количественной оценки пролиферативной активности лимфоцитов в коже больных ГМ, разработанный Жуковым А.С., Белоусовой И.Э., Хайрутдиновым В.Р. и соавторами, с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из светооптического микроскопа, цифровой камеры и персонального компьютера с интегрированным программным обеспечением «Морфология 5.2» [11].
Указанный метод был использован для оценки пролиферативной активности лимфоцитов в коже у 18 больных ГМ, группу которых составили 9 больных с I стадией, 7 больных со II стадией и 2 больных с III стадией заболевания. В каждом случае проводился анализ по 3 полям зрения при увеличении 200, выбранных с учетом наибольшей позитивности исследуемых клеток. Данный метод позволил авторам получить статистически значимые различия в относительной площади экспрессии CD3 и Ki67 клеток в дерме у больных ГМ в зависимости от стадии заболевания (7,16±0,31 и 18,8±0,61 - при ГМ I стадии, 0,39±0,21 и 0,89±0,18 - при ГМ II+III стадии соответственно).
Недостатками указанного метода является следующее:
- в проведенных авторами исследованиях были объединены в одну группу больные со II и III стадиями ГМ, тогда как, именно нахождение статистических различий в позитивности лимфоцитов кожи при IIA и IIB стадиях развития онкопроцесса имеет принципиальное значение для определения дальнейшей тактики лечения больного и прогноза заболевания;
- в данной работе был использован автоматизированный анализ позитивной окраски лишь двух иммуномаркеров CD3 и Ki67, то есть была проведена оценка только общей популяции всех зрелых Т-лимфоцитов и их пролиферативной активности, тогда как при развитии первичных лимфом кожи патогенетически значимым является изучение дисбаланса между пролиферирующими лимфоцитами и процессами их апоптоза, в чем участвуют CD8 цитотоксические клетки, в том числе с продукцией Granzyme В,
- не были изучены субпопуляции Т-лимфоцитов в дерме, а именно Т-хелперная субпопуляция лимфоцитов (CD4+), соотношение хелперно-индукторной субпопуляции лимфоцитов и супрессорно-цитотоксической (CD4+/CD8+),
- данный метод применим только для научного изучения диагностической значимости пролиферативной активности лимфоцитов эпидермиса и дермы у больных грибовидным микозом и бляшечным парапсориазом, тогда как дифференциальная диагностика между IIA и IIB стадиями ГМ важна в практическом смысле и определяет подходы к терапии и степень ее «агрессивности».
Задачей изобретения является разработка способа определения стадии ГМ на основании количественной оценки позитивности иммуногистохимических маркеров биоптата кожи.
Технический результат, который будет достигнут от использования данного изобретения заключается в повышении объективности и точности диагностирования стадии ГМ.
Технический результат достигается тем, что в способе определения стадии грибовидного микоза, включающем проведение у больного биопсии кожи из очага поражения, проведение иммуногистохимических исследований с использованием моноклональных антител CD3 и Ki67, их количественную оценку и установление на этом основании стадии заболевания, для исследований дополнительно используют моноклональные антитела CD4 и CD8, определяют значения объемных долей позитивного окрашивания моноклональными антителами CD3, CD4, CD8 и Ki67 путем компьютерной морфометрии, затем усредняют данные показатели и рассчитывают суммарную удельную значимость иммунопозитивности данных антител по формуле:
F=0,75⋅X1+1,9⋅X2+2,99⋅X3+10,53⋅X4+0,22,
где
F - суммарная удельная значимость иммунопозитивности указанных моноклональных антител,
X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3,
Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4,
Х3 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD8,
Х4 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67,
0,75; 1,9; 2,99; 10,53 и 0,22 - поправочные коэффициенты.
При значении F от 0,220 до 1,969 диагностируют ранние (I-IIA) стадии, а при значении F от 1,970 до 4,973 - поздние (IIB-III) стадии ГМ.
Сущность изобретения состоит в реализованном в формуле изобретения подходе к диагностике стадий ГМ, учитывающим объективный вклад каждого из оцениваемых показателей в общую результирующую диагностики, позволяющую дифференцировать ранние и поздние стадии заболевания.
Из анализа научно-технической и патентной литературы заявляемой совокупности используемых моноклональных антител CD3, CD4, CD8 и Ki67 для оценки стадии грибовидного микоза по предлагаемой формуле нами не выявлено, что позволяет сделать выводы о соответствии заявляемого технического решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».
В клинике ГБУ СО «УрНИИДВиИ» с целью улучшения процесса диагностики ГМ и объективизации результатов иммуногистохимических исследований были изучены имиджи биоптатов кожи 36 человек: 30 больных ГМ I, II и III стадий, 6 - контрольной группы (здоровые лица). Диагноз ГМ у каждого больного был установлен на основании анамнеза, клинической картины, результатов патоморфологического, иммуногистохимического и морфометрического методов исследования.
Изобретение поясняется фиг. 1-8, где
на фиг. 1 показаны исходные оцифрованные изображения биоптата кожи больного ГМ с наличием позитивного окрашивания CD3, CD4, CD8 и Ki67 МКА;
на фиг. 2 - автоматизированная обработка изображений иммунофенотипирования биоптата кожи больного ГМ с точным выделением иммунопозитивных Т-лимфоцитов: CD3, CD4, CD8 и Ki67 (зеленый цвет) в дермальном инфильтрате, увеличение 400;
на фиг. 3 - распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD3 у всех групп больных;
на фиг. 4 - распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD4 у всех групп больных;
на фиг. 5 - распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD8 у всех групп больных;
на фиг. 6 - распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера Ki67 у всех групп больных;
на фиг. 7 - больной К., пятна и бляшки на коже туловища;
на фиг. 8 - больной Г., пятна и бляшки на коже.
Изобретение осуществляется следующим образом.
Иммунофенотипирование объектов исследования проводили в стандартных условиях на аппарате для иммуногистохимии Bond-maX LEICA (Германия) с использованием парафиновых срезов толщиной 4 мкм.
Патоморфологические и морфометрические исследования выполнены с использованием аппаратно-программного комплекса, состоящего из светового микроскопа для медико-биологических исследований Axio Imager М2, цифровой камеры AxioCam MRc 5 и специальной программы ZEN 2012 для ввода изображений, проведения измерений и документирования (ZEISS, Германия). Также в составе данного комплекса использованы персональный компьютер Intel Core i5-3570 3.4 GHz и автоматизированная система анализа изображений «SIAMS Photolab» (Россия, свидетельство об утверждении типа средства измерений RU.C.31.058.A, №40862 от 28.07.2015 г., срок действия до 28.07.2020 г.).
Обработка изображений в системе «SIAMS Photolab» производится в цепочке взаимосвязанных ячеек, содержащих исходный имидж, результаты промежуточных этапов обработки, конечное обработанное изображение и результаты измерений в виде чисел, графиков и гистограмм. В системе предусмотрена генерация отчетов формата MS Word и экспорт изображений, числовых и текстовых данных в наиболее распространенные форматы.
Использование модуля колорометрической оценки результатов иммуногистохимических реакций системы анализа изображений «SIAMS Photolab» позволило получить квантифицированную оценку площади иммунопозитивности маркеров и объективизировать процесс диагностики ГМ.
В дерме больных ГМ на стандартной площади срезов кожи нами изучены параметры позитивности моноклональных антител (МКА) CD3, CD4, CD8, Ki67 и Granzyme В. Для данных исследований использованы по 5 имиджей в каждом наблюдении.
Результаты исследований поясняются с фиг. 1-8.
Примеры исходных оцифрованных изображений биоптата кожи больного ГМ с наличием позитивного окрашивания CD3, CD4, CD8 и Ki67 МКА представлены на фиг. 1.
Обработка оцифрованных изображений иммуногистохимических реакций у больных ГМ в системе анализа изображений «SIAMS Photolab» проводилась в несколько этапов: 1 - предобработка и первичное выделение маски, 2 - разделение масок, 3 - пороговая сегментация, 4 - измерение исследуемых объектов.
На завершающем этапе обработки изображений предусматривалось их контрастирование и более точное выделение определенным цветом измеряемых иммунопозитивных объектов с помощью функции пороговой сегментации (фиг. 2).
В результате автоматизированных измерений выделенных на изображениях объектов по каждому из 5 исследуемых имиджей определялись следующие параметры (в мкм2):
1. Проанализированная площадь гистологического среза кожи.
2. Занимаемая площадь позитивного окрашивания иммуномаркером.
3. Объемная доля позитивного окрашивания иммуномаркером.
На основании обработки 5 имиджей формируется заключительный отчет по выполненному исследованию, содержащий гистограмму распределения объемных долей и таблицу формата MS Word с включением следующих данных:
1. Число проанализированных полей.
2. Проанализированная площадь гистологического среза кожи (мкм2).
3. Занимаемая площадь позитивного окрашивания иммуномаркером (мкм2).
4. Объемная доля позитивного окрашивания иммуномаркером.
5. Средняя объемная доля позитивного окрашивания иммуномаркером.
6. Среднеквадратичное отклонение объемной доли позитивного окрашивания иммуномаркером.
Предварительный анализ данных показал значительную вариабельность площади позитивной окраски иммуномаркерами в дерме у больных при стадийном развитии ГМ.
Для построения модели определения стадии заболевания исходными данными являлись значения площади позитивной окраски иммуномаркерами в дерме у больных ГМ. На основании фактических данных, полученных в результате заполнения стандартизованных карт, была создана электронная база данных в формате таблиц программы Microsoft Excel.
Дальнейшая разработка модели определения стадии ГМ осуществлялась в несколько этапов.
На первом этапе методом вероятностного анализа было проведено выявление нетипичных представителей для каждой из групп исследуемых больных ГМ, присутствие которых в выборке могло существенным образом исказить результаты анализа [12].
Произведен пересчет полученных фактических данных площади позитивной окраски иммуномаркерами в дерме у больных ГМ в безразмерные величины (доля площади иммуномаркеров xi). Для этого находилось отношение площади иммуномаркера Sим данного вида к общей площади среза Sср по формуле: xi= Sим/Sср.
Далее определяли основные статистические характеристики значений доли площади иммуномаркеров: среднее значение 
, среднеквадратичное отклонение (СКО) Sx, ошибка выборки данных Δx для одного больного и одного иммуномаркера. Расчет производится по стандартным формулам вариационной статистики:
где xi - доля площади иммуномаркера в выборке данных данного пациента с определенной стадией заболевания, N - количество срезов одного иммуномаркера у данного пациента, t - коэффициент Стьюдента.
Вычисления проводились при уровне значимости р=0,001 и р=0,01.
* - p<0,00 при сравнении между группами больных ГМ.
** - р<0,001 при сравнении между группами больных ГМ.
При обобщении данных таблицы 2, было отмечено, что изучение иммуноморфологических характеристик клеток дермального инфильтрата в биоптате кожи у больных ГМ продемонстрировало закономерные изменения их популяционного состава в динамике прогрессирования заболевания. Как видно из представленной таблицы 2, в группе больных с поздними (IIB-III) стадиями ГМ наблюдалось достоверное увеличение количества всех зрелых Т-лимфоцитов (CD3+) и Т-хелперной субпопуляции лимфоцитов (CD4+), хелперно-индукторной субпопуляции лимфоцитов над супрессорно-цитотоксической (CD4+/CD8+) при сопоставлении с аналогичными показателями дермального инфильтрата у больных ранними (I-IIA) стадиями заболевания. Кроме этого было обнаружено, что у больных ГМ в IIB-III стадии показатели объемной доли позитивности Ki67 (0,053±0,004) в 2,9 раза превышали аналогичные показатели у больных I-IIA стадиями заболевания, что свидетельствовало о высокой пролиферативной активности исследованных клеток дермального инфильтрата при поздних стадиях заболевания. В исследуемых группах больных ГМ отсутствовали изменения позитивной экспрессии Granzyme В+ на клетках инфильтрата и отмечалась недостоверная тенденция к увеличению количества Т-цитотоксической субпопуляции лимфоцитов (CD8+) при развитии последующих стадий заболевания.
На втором этапе нами был проведен расчет коэффициентов корреляций изучаемых клинико-лабораторных показателей у всех больных ГМ для выявления разнонаправленных векторов у пациентов, входящих в одну группу. Были выявлены разнонаправленные векторы значений площади позитивного окрашивания иммуномаркерами у больных ГМ (таблица 3).
В соответствии с данными таблицы 3, у больных ГМ обнаружены сильные положительные корреляционные параллели между количеством CD3 и CD4, CD3 и CD8, CD3 и Ki67, CD4 и Ki67, CD4 и CD8. Согласно методам доказательной статики обнаружена линейная зависимость между CD3, CD4 и Ki67. Количество Т-хелперной субпопуляции лимфоцитов (CD4) и показатель пролиферативной активности исследованных клеток дермального инфильтрата (Ki67) не имели существенной корреляционной связи с маркером апоптоза (Granzyme В).
Методами нелинейной динамики [13, 14] определялись пороговые значения объемной доли позитивности ИГХ маркеров биоптата кожи у больных ГМ в зависимости от стадии заболевания (таблица 4).
* - p<0,01 при сравнении между группами больных ГМ.
** - р<0,001 при сравнении между группами больных ГМ.
На третьем этапе все отобранные информативные признаки приняли участие в выработке «решающих правил» диагностики. При помощи процедуры пошагового отбора переменных удалось снизить размерность «решающего правила» при сохранении максимальной правильности распознавания образов. Согласно таблицам 3 и 4, выделены четыре базисных показателя (CD3, CD4, CD8 и Ki67), которые максимально характеризуют векторную динамику стадийного развития заболевания.
Методом наименьших квадратов с учетом пороговых значений показателей были построены линейные функции F от объемной доли позитивной окраски иммуномаркерами CD3, CD4, CD8 и Ki67 у больных ГМ (фиг. 3-6).
На фиг. 3 показано распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD3 у всех групп больных (точками обозначены данные по CD3 из таблицы 2).
На фиг. 4 показано распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD4 у всех групп больных (точками обозначены данные по CD4 из таблицы 2).
На фиг. 5 показано распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD8 у всех групп больных (точками обозначены данные по CD8 из таблицы 2).
На фиг. 6 показано распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера Ki67 у всех групп больных (точками обозначены данные по Ki67 из таблицы 2).
Регрессионным анализом и методом наименьших квадратов с учетом пороговых значений показателей была построена результирующая линейная функция F от объемной доли позитивной окраски иммуномаркерами (моноклональными антителами) CD3, CD4, CD8 и Ki67 у больных ГМ для определения стадии заболевания:
F=0,75⋅Х1+1,9⋅Х2+2,99⋅Х3+10,53⋅Х4+0,22,
где
F - суммарная удельная значимость иммунопозитивности указанных моноклональных антител,
X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3,
Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4,
Х3-среднее значение объемной доли позитивной окраски CD8,
Х4 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67,
0,75; 1,9; 2,99; 10,53 и 0,22 - поправочные коэффициенты.
Поправочные коэффициенты удельной значимости перед переменными X1, Х2, Х3, Х4 и коэффициент 0,22 в функции F были подобраны экспериментальным путем.
В результате для каждой стадии ГМ были получены следующие значения функции F:
ГМ I-IIA (ранние стадии): 0,220≤F≤1,969;
ГМ IIB-III (поздние стадии): 1,970≤F≤4,973.
Данные значения интервалов были получены с уровнем значимости р<0,05.
Способ осуществляется следующим образом:
1. После подписания больным информированного согласия на исследование проводится инцизионная биопсия кожи на участке с наиболее выраженными клиническими проявлениями дерматоза.
2. По стандартным методикам изготавливаются парафиновые блоки и гистопрепараты кожи, выполняется ИФТ с использованием панели МКА, рекомендованной для диагностики ГМ [1].
3. Выполняется оцифровка изображений и отбор 5 имиджей для количественных исследований по критерию максимального содержания в них иммунопозитивных лимфоцитов.
4. Проводится автоматизированная обработка каждого из 5 исследуемых изображений в системе «SIAMS Photolab» с вычислением значений средних объемных долей позитивного окрашивания моноклональных антител CD3, CD4, CD8 и Ki67.
5. Для определения стадии ГМ у больного рассчитывается суммарная удельная значимость и значение каждого из исследуемых иммуномаркеров, подставив в уравнение значения соответствующих признаков по формуле:
F=0,75⋅Х1+1,9⋅Х2+2,99⋅Х3+10,53⋅Х4+0,22,
где X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3, Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4, Х3 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD8, Х4 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67.
6. Сравнив между собой полученное значение переменной F у конкретного больного и пороговые значения обучающей выборки, делается заключение о наличии у больного соответствующей стадии ГМ.
Клинико-диагностическая апробация заявленного способа определения стадии ГМ:
Описываемый способ определения стадии заболевания нами был применен в клинике ГБУ СО «УрНИИДВиИ» у 30 больных ГМ. В таблице 5 приведены данные сопоставления правильности определения стадии заболевания у больных ГМ заявленным способом с экспертной оценкой и патоморфологической верификацией.
Примечание: группа I - больные ГМ I-IIA ст. (ранние стадии), группа II - больные ГМ IIB-III ст. (поздние стадии).
Как следует из представленной таблицы 5, совпадение результатов проведенных тестов на обучающей выборке (когорта больных с ранее установленным и верифицированным диагнозом и стадиями ГМ) с экспертной оценкой и патоморфологической верификацией диагноза у больных свидетельствует о специфичности разработанного нами способа определения стадии ГМ и разделения на ранние и поздние стадии. Достоверность подобного разделения больных ГМ на стадии заболевания составила в среднем 97,3%, причем 100% достоверность была зафиксирована у больных ГМ IIB-III ст., а 94,73% - при ранних стадиях заболевания (I-IIA ст.).
В качестве иллюстрации применения способа определения стадии ГМ у больных приводим следующие клинические наблюдения.
Больной К., 1973 г. рождения, поступил в клинику ГБУ СО «УрНИИДВиИ» для уточнения диагноза с жалобами на распространенные пятна и бляшки на коже туловища и конечностей, сопровождающиеся периодическим зудом, покалыванием и стягиванием кожи. Болеет в течение 4 лет, когда впервые заметил единственное пятно на коже левого плеча. Через год в связи с появлением многочисленных пятен на коже туловища и верхних конечностей впервые обратился к дерматологу по месту жительства. Для уточнения заболевания дважды амбулаторно проводились стандартные гистологические исследования кожи, больной находился под наблюдением дерматолога с диагнозом бляшечный парапсориаз, назначались Н1 антигистаминные препараты, наружно - топические глюкокортикостероиды. Сезонности обострений заболевания не отмечал, а на фоне инсоляции наблюдалось усиление окраски пятен и появление умеренного зуда. За предыдущий год отмечает прогрессирование заболевания - усиление кожного зуда и появление новых бляшек на коже, часть из которых была наиболее инфильтрирована.
Анамнез жизни, аллергоанамнез и профессиональный маршрут у больного без особенностей. Наследственность по кожным заболеваниям и онкопатологии не отягощена. При общем осмотре патологических отклонений по системам и органам не выявлено. Подмышечные лимфатические узлы диаметром до 1,5-2 см, мягкие, безболезненные и подвижные при пальпации. Физиологические отправления в норме.
Локальный статус: кожный процесс имеет распространенный характер. На коже плеч, предплечий, груди, живота, спины и правого бедра присутствуют розовато-красные пятна и умеренно инфильтрированные бляшки диаметром до 3,5 см, округлой формы, с четкими границами и шероховатой поверхностью. На поверхности бляшек отсутствует рост волос, имеются экскориации с точечными геморрагическими корочками. Кроме этого, на коже правой половины живота имеются 4 округлых высыпания, максимально возвышающихся над уровнем кожи, которые за счет своей выраженной инфильтрации не позволяют их отнести к бляшками или опухолями. Дермографизм белый (фиг. 7).
Лабораторные данные. Общий анализ крови: Hb - 139 г/л, эр. - 4,7×1012/л, лейк. - 8,5×109/л, нейтр. - 5,4×109/л, эоз. - 0,2×109/л, лимф. - 2,2×109/л, мон. - 0,5×109/л, СОЭ - 14 мм/ч. В общем анализе мочи, биохимической гепатограмме и иммунограмме отклонений не выявлено. Комплекс серологических реакций к Treponema pallidum отрицательный. Антитела к ВИЧ, гепатитам В и С не обнаружены.
Патоморфологическое исследование биоптата кожи больного: Эпидермис неравномерно гиперплазирован, с. гиперкератозом и небольшим акантозом. В верхних отделах дермы присутствуют полосовидные эпидермотропные инфильтраты из лимфоидных клеток малого и среднего размера. Дермоэпидермальная граница нечеткая, с формированием небольших единичных скоплений в эпидермисе типа микроабсцессов Потрие.
Иммуногистохимическое исследование биоптата кожи больного: опухолевый инфильтрат имеет Т-клеточный иммунофенотип: клетки экспрессируют CD3, CD4 и CD8; В-лимфоциты (CD20) - в виде единичных скоплений среди опухолевых клеток.
Иммуногистохимические препараты биоптата кожи больного были подвергнуты морфометрии с использованием компьютерной программы «SIAMS-Photolab», вычисленные показатели составили: среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3=0,263, среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4=0,152, среднее значение объемной доли позитивной окраски CD8=0,078, среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67=0,017.
Для определения у больного стадии ГМ указанным способом в уравнение были подставлены значения соответствующих признаков:
F=0,75⋅0,263+1,9⋅0,152+2,99⋅0,078+10,53⋅0,017+0,22.
У данного больного было получено значение F=1,118, что при сравнении с обучающей выборкой имело числовые параметры, характерные для ранней стадии ГМ (0,220 ≤ F≤ 1,969).
На основании анамнеза, клинической картины, данных гистологического и иммуногистохимического методов исследования биоптата кожи и результатов, полученных заявленным способом, больному был установлен окончательный диагноз: первичная лимфома кожи, грибовидный микоз, IIА стадия (T2N1M0B0).
Больной Г., 1950 г. рождения, поступил в клинику ГБУ СО «УрНИИДВиИ» с жалобами на распространенные высыпания на коже предплечий, груди, живота и спины, сопровождающиеся периодическим интенсивным зудом и стягиванием кожи. Болеет в течение 6 лет, когда впервые возникли пятна на коже правого предплечья. В течение последующих нескольких лет обращал внимание на постепенное появление аналогичных пятен на коже туловища. Наблюдался у дерматовенеролога по месту жительства с диагнозом крупнобляшечный парапсориаз, где в результате проводимой терапии (Н1-антигистаминные средства, десенсибилизирующая терапия, наружно - топические глюкокортикостероиды) больной отмечал кратковременное улучшение в виде исчезновения зуда высыпаний. За предыдущие 5-6 месяцев отметил ухудшение течения заболевания - появление новых пятен и усиление кожного зуда, в связи с чем был госпитализирован в отделение хронических дерматозов ГБУ СО «УрНИИДВиИ.
Анамнез жизни, аллергоанамнез и профессиональный маршрут у больного без особенностей. Наследственность по кожным заболеваниям и онкопатологии не отягощена. При общем осмотре патологических отклонений по системам и органам не выявлено. Подмышечные и паховые лимфатические узлы диаметром до 1,5-2,0 см, мягкие, безболезненные и подвижные при пальпации. Физиологические отправления в норме.
Локальный статус: непораженные участки кожных покровов физиологической окраски, нормальной влажности и тургора. Видимые слизистые влажные, физиологической окраски. Кожный процесс имеет распространенный характер, поражены - грудь, живот, спина, плечи и предплечья. На коже груди, живота, предплечий и поясничной области имеются многочисленные пятна бледно-красного цвета, диаметром до 2-3 см, с четкими границами, без шелушения и экскориаций. На коже живота и спины присутствуют округлые бляшки, кирпично-красного цвета, диаметром до 6 см, с точечными геморрагическими корочками в местах экскориаций. На поверхности бляшек отсутствует рост волос, имеются единичные трещинки в местах физиологических складок кожи и незначительное мелкопластинчатое шелушение. На коже левой половины живота имеются 2 наиболее инфильтрированных образования, округлой формы, диаметром 1,8 см и 2,5 см, насыщенно-красного цвета, с гладкой поверхностью, которые по своей морфологии и размерам не позволяют их отнести либо к бляшкам, либо к опухолям. Дермографизм белый (фиг. 8).
Лабораторные данные. Общий анализ крови: Hb - 146 г/л, эр. - 4,86×1012/л, лейк. - 8,1×109/л, нейтр. - 2,8×109/л, эоз. - 0,3×109/л, лимф. - 2,0×109/л, мон. - 0,4×109/л, СОЭ - 10 мм/ч. В общем анализе мочи и иммунограмме отклонений не выявлено. В биохимической гепатограмме - повышение общего билирубина до 24,3 мкмоль/л. Комплекс серологических реакций к Treponema pallidum отрицательный. Антитела к ВИЧ, гепатитам В и С не обнаружены.
Патоморфологическое исследование биоптата кожи больного: в дерме присутствует плотный, полосовидный, эпидермотропный инфильтрат из лимфоидных клеток разных размеров, «размывающий» дермоэпидермальную границу и проникающий в эпидермис, в котором прослеживается очаговая деструкция. Определяются микроабсцессы Потрие. Митотическая активность клеток достаточно высокая.
Иммуногистохимические препараты биоптата кожи больного были подвергнуты морфометрии с использованием компьютерной программы «SIAMS-Photolab», вычисленные показатели составили: среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3=0,606, среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4=0,56, среднее значение объемной доли позитивной окраски CD8=0,24, среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67=0,059.
Для определения у больного стадии ГМ указанным способом в уравнение были подставлены значения соответствующих признаков:
F=0,75⋅0,606+1,9⋅0,56+2,99⋅0,24+10,53⋅0,059+0,22.
У данного больного было получено значение F=3,07, что при сравнении с обучающей выборкой имело числовые параметры, характерные для поздних стадий ГМ (1,970≤F≤4,973).
На основании анамнеза, клинической картины, результатов патоморфологического, иммуногистохимического и морфометрического методов исследования биоптата кожи и данных, полученных заявленным способом, больному Г. был установлен окончательный диагноз: первичная лимфома кожи, грибовидный микоз, IIB стадия (T3N1M0B0). С целью назначения профильной терапии больной был направлен к гематологу.
Использованная литература
1. Федеральные клинические рекомендации. Дерматовенерология 2015: Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. - 5-е изд., перераб. и доп. - М.: Деловой экспресс, 2016. - 768 с.
2. Малишевская Н.П., Кохан М.М., Соколова А.В., Куклин И.А. и соавт. Дерматоонкология (злокачественные новообразования кожи, первичные лимфомы кожи): Атлас / Под общ. ред. Н.В. Кунгурова. – Екатеринбург, Изд-во Урал. Ун-та, 2016. - 168 с.
3. Вольф К., Голдсмит Л.А., Кац С.И. Дерматология Фицпатрика в клинической практике. Пер. с англ. М.: Изд. Панфилова. БИНОМ; 2012. - Т. 2. - С. 1514-1531.
4. Willemze R. Primary cutaneous lymphoma: ESMO Clinical Recommendations for diagnosis, treatment and follow-up / R. Willemze, M. Dreyling // Annals of Oncology. - 2009. - Vol. 20. - P. 115-118.
5. Dulmage В. The biomarker landscape in mycosis fungoides and 
syndrome / B. Dulmage, L. Geskin, J. Guitart, O. Akilov // Exp. Dermatol. - 2017. - Vol. 26 (8). - P. 668-676.
6. Сафонова Г.Д. Оптимизация диагностики и перспективы патогенетических исследований первичных лимфом кожи (обзор литературы) / Г.Д. Сафонова, М.М. Кохан, Н.В. Зильберберг, О.Г. Римар, И.А. Куклин // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2014. - №12. - С. 264-268.
7. Qureshi A. Allred scoring for ER reporting and it's impact in clearly distinguishing ER negative from ER positive breast cancers / A. Qureshi, S. Pervez // Journal Pakistan Medical Association. - 2010. - Vol. 60 (5). - P. 350-353.
8. Allred D.C. Assessment of prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemistry // Connection. - 2005. - Vol. 9. - P. 4-5.
9. Сыдиков А.А. Иммуногистохимические критерии диагностики мелкобляшечного парапсориаза, крупнобляшечного парапсориаза и грибовидного микоза / А.А. Сыдиков, Д.В. Заславский, B.C. Зайцев, Р.А. Насыров // Современные проблемы, науки и образования. - 2013. - №6. - С. 568-575.
10. Патент РФ №2553340, МПК G01N 33/48, опубл. 10.06.2015, бюл. №16.
11. Жуков А.С. Уровень пролиферативной активности лимфоцитов при грибовидном микозе и бляшечном псориазе / Жуков А.С., Белоусова И.Э., Хайрутдинов В.Р. и соавт. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2014. - №1. - С. 30-36.
12. Арнольд В.И. Математические методы классической механики. - 5-е изд., стереот. - М.: Едиториал УРСС, 2003. - 416 с.
13. Самарский А.А., Курдюмов С.П., Ахромеева Т.С., Малинецкий Г.Г. // Информатика и научно-технический прогресс. - М.: Наука, 1987. - С. 69-91.
14. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. // Математическая статистика в клинических исследованиях. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 256 с.
Claims (9)
- Способ определения стадии грибовидного микоза, включающий проведение у больного биопсии кожи из очага поражения, проведение иммуногистохимических исследований с использованием моноклональных антител CD3 и Ki67, их количественную оценку и установление на этом основании стадии заболевания, отличающийся тем, что для исследований дополнительно используют моноклональные антитела CD4 и CD8, определяют значения объемных долей позитивного окрашивания моноклональными антителами CD3, CD4, CD8 и Ki67 путем компьютерной морфометрии, затем усредняют данные показатели и рассчитывают суммарную удельную значимость иммунопозитивности указанных моноклональных антител по формуле:
- F=0,75⋅Х1+1,9⋅Х2+2,99⋅Х3+10,53⋅Х4+0,22,
- где F - суммарная удельная значимость иммунопозитивности моноклональных антител CD3, CD4, CD8 и Ki67;
- X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3,
- Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4,
- Х3 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD8,
- Х4 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67,
- 0,75; 1,9; 2,99; 10,53 и 0,22 - поправочные коэффициенты,
- и при значении F от 0,220 до 1,969 диагностируют ранние I-IIA стадии, а при значении F от 1,970 до 4,973 - поздние IIB-III стадии грибовидного микоза.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017135188A RU2660542C1 (ru) | 2017-10-04 | 2017-10-04 | Способ определения стадии грибовидного микоза |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017135188A RU2660542C1 (ru) | 2017-10-04 | 2017-10-04 | Способ определения стадии грибовидного микоза |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2660542C1 true RU2660542C1 (ru) | 2018-07-06 |
Family
ID=62815736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017135188A RU2660542C1 (ru) | 2017-10-04 | 2017-10-04 | Способ определения стадии грибовидного микоза |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2660542C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2703464C1 (ru) * | 2019-02-26 | 2019-10-17 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ дифференциальной диагностики актинического кератоза и плоскоклеточного рака кожи |
| RU2750591C1 (ru) * | 2020-05-12 | 2021-06-29 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ижевская государственная медицинская академия" | Способ определения степени окраски эндотелиальных клеток |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1715319A1 (ru) * | 1987-03-20 | 1992-02-28 | Институт биологической физики АН СССР | Способ диагностики степени т жести грибовидного микоза |
| RU2526180C1 (ru) * | 2013-08-14 | 2014-08-20 | Эльмира Фанисовна Гарифуллина | Способ дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи по относительному объему эпидермиса и митотическому индексу эпидермальных клеток |
-
2017
- 2017-10-04 RU RU2017135188A patent/RU2660542C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1715319A1 (ru) * | 1987-03-20 | 1992-02-28 | Институт биологической физики АН СССР | Способ диагностики степени т жести грибовидного микоза |
| RU2526180C1 (ru) * | 2013-08-14 | 2014-08-20 | Эльмира Фанисовна Гарифуллина | Способ дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи по относительному объему эпидермиса и митотическому индексу эпидермальных клеток |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| LIRA M. et al. Diagnostic value of combining immunostaining for CD3 and nuclear morphometry in mycosis fungoides. // J Clin Pathol. 2008. F.b. V. 61(2). P. 209-12. * |
| ЖУКОВ А.С. Уровень пролиферативной активности лимфоцитов при грибовидном микозе и бляшечном псориазе / Жуков А.С., Белоусова И.Э., Хайрутдинов В.Р. и соавт. // Вестник дерматологии и венерологии. 2014. N 1. С. 30-36. * |
| М. CLARKE et al. Combined proliferating cell nuclear antigen and morphometric analysis in the diagnosis of cutaneous lymphoid infiltrates. // J Clin Pathol. 1993. February. V.46(2). P.129-134. * |
| М. CLARKE et al. Combined proliferating cell nuclear antigen and morphometric analysis in the diagnosis of cutaneous lymphoid infiltrates. // J Clin Pathol. 1993. February. V.46(2). P.129-134. LIRA M. et al. Diagnostic value of combining immunostaining for CD3 and nuclear morphometry in mycosis fungoides. // J Clin Pathol. 2008. F.b. V. 61(2). P. 209-12. СЫДИКОВ А.А. Клинико-морфологическая характеристика крупнобляшечного и мелкобляшечного парапсориаза. Автореф. дисс. к.м.н. Санкт-Петербург, 2013, 20 с. * |
| СЫДИКОВ А.А. Клинико-морфологическая характеристика крупнобляшечного и мелкобляшечного парапсориаза. Автореф. дисс. к.м.н. Санкт-Петербург, 2013, 20 с. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2703464C1 (ru) * | 2019-02-26 | 2019-10-17 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ дифференциальной диагностики актинического кератоза и плоскоклеточного рака кожи |
| RU2750591C1 (ru) * | 2020-05-12 | 2021-06-29 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ижевская государственная медицинская академия" | Способ определения степени окраски эндотелиальных клеток |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Valli et al. | Classification of canine malignant lymphomas according to the World Health Organization criteria | |
| Loeb et al. | Evaluation of the 2015 Gleason grade groups in a nationwide population-based cohort | |
| Rubin et al. | α-Methylacyl coenzyme A racemase as a tissue biomarker for prostate cancer | |
| Scase et al. | Canine mast cell tumors: correlation of apoptosis and proliferation markers with prognosis | |
| Stoter et al. | Multivariate analysis of prognostic factors in patients with disseminated nonseminomatous testicular cancer: results from a European Organization for Research on Treatment of Cancer Multiinstitutional Phase III Study | |
| Willmann et al. | Proposed diagnostic criteria and classification of canine mast cell neoplasms: a consensus proposal | |
| Inge et al. | Development and applications of computer image analysis algorithms for scoring of PD-L1 immunohistochemistry | |
| Fonseca-Alves et al. | Ki67/KIT double immunohistochemical staining in cutaneous mast cell tumors from Boxer dogs | |
| Rao et al. | Cellular F-actin levels as a marker for cellular transformation: correlation with bladder cancer risk | |
| Crothers et al. | Proceedings of the American Society of Cytopathology companion session at the 2019 United States and Canadian Academy of Pathology meeting part 1: towards an international system for reporting serous fluid cytopathology | |
| RU2660542C1 (ru) | Способ определения стадии грибовидного микоза | |
| Acikalin et al. | Primary melanoma of the urinary tract; Clinicopathologic and molecular review of a case series | |
| Du et al. | Circulating tumor cells counting act as a potential prognostic factor in cervical cancer | |
| Russell et al. | Novel risk models for early detection and screening of ovarian cancer | |
| Yaghjyan et al. | Reliability of CD44, CD24, and ALDH1A1 immunohistochemical staining: Pathologist assessment compared to quantitative image analysis | |
| Patel et al. | Multiparametric in situ imaging of NPM1-mutated acute myeloid leukemia reveals prognostically-relevant features of the marrow microenvironment | |
| Lacayo et al. | Development and validation of a single‐cell network profiling assay‐based classifier to predict response to induction therapy in paediatric patients with de novo acute myeloid leukaemia: a report from the Children's Oncology Group | |
| RU2639448C1 (ru) | Способ определения стадии грибовидного микоза | |
| WO2016181912A1 (ja) | 免疫因子を指標とした肺腺癌の予後演算式作成方法と予後推定方法 | |
| RU2466398C2 (ru) | Способ дифференциальной диагностики заболеваний кожи | |
| Yokoi et al. | Immunophenotypic profile as a predictor of prognosis in advanced ovarian carcinoma | |
| CN114990218A (zh) | 一种预测肺癌脑转移的试剂盒 | |
| Fujishima et al. | Immunohistochemical pattern of c-MYC protein judged as “+/(weak)+/−” by a new notation correlates with MYC gene nontranslocation in large B-cell lymphoma | |
| Fu et al. | Diagnostic accuracy of urinary survivin mRNA expression detected by RT‑PCR compared with urine cytology in the detection of bladder cancer: A meta‑analysis of diagnostic test accuracy in head‑to‑head studies | |
| Aulasevich et al. | The role of the immune phenotype in tumor progression and prognosis of patients with mycosis fungoides: a quantitative immunohistology whole slide approach. Cells 2022; 11: 3570 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191005 |