RU2659202C1 - Средство снижения нейропатической боли - Google Patents
Средство снижения нейропатической боли Download PDFInfo
- Publication number
- RU2659202C1 RU2659202C1 RU2017127922A RU2017127922A RU2659202C1 RU 2659202 C1 RU2659202 C1 RU 2659202C1 RU 2017127922 A RU2017127922 A RU 2017127922A RU 2017127922 A RU2017127922 A RU 2017127922A RU 2659202 C1 RU2659202 C1 RU 2659202C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- neuropathic pain
- age
- cci
- pain
- hippocampus
- Prior art date
Links
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 title claims abstract description 37
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- -1 alkyl glycerol esters Chemical class 0.000 claims description 10
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 abstract description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 abstract description 11
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 abstract description 9
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 abstract description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000008533 pain sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010606 normalization Methods 0.000 abstract 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 14
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 11
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 9
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 9
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 8
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 8
- 102000009339 Proliferating Cell Nuclear Antigen Human genes 0.000 description 8
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 8
- 101000720704 Homo sapiens Neuronal migration protein doublecortin Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 102100025929 Neuronal migration protein doublecortin Human genes 0.000 description 7
- 210000001947 dentate gyrus Anatomy 0.000 description 7
- 230000006742 locomotor activity Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 6
- 230000003936 working memory Effects 0.000 description 6
- 101150053137 AIF1 gene Proteins 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 4
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 4
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 4
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 4
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 4
- 108010087765 Antipain Proteins 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N antipain Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N 0.000 description 3
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000003533 narcotic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001161496 Berryteuthis magister Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N Gabapentin Chemical compound OC(=O)CC1(CN)CCCCC1 UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 102000003840 Opioid Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090000137 Opioid Receptors Proteins 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N capsaicin Chemical compound COC1=CC(CNC(=O)CCCC\C=C\C(C)C)=CC=C1O YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N 0.000 description 2
- OROGSEYTTFOCAN-DNJOTXNNSA-N codeine Chemical compound C([C@H]1[C@H](N(CC[C@@]112)C)C3)=C[C@H](O)[C@@H]1OC1=C2C3=CC=C1OC OROGSEYTTFOCAN-DNJOTXNNSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- TVYLLZQTGLZFBW-ZBFHGGJFSA-N (R,R)-tramadol Chemical compound COC1=CC=CC([C@]2(O)[C@H](CCCC2)CN(C)C)=C1 TVYLLZQTGLZFBW-ZBFHGGJFSA-N 0.000 description 1
- ZEUITGRIYCTCEM-KRWDZBQOSA-N (S)-duloxetine Chemical compound C1([C@@H](OC=2C3=CC=CC=C3C=CC=2)CCNC)=CC=CS1 ZEUITGRIYCTCEM-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- 208000007415 Anhedonia Diseases 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004044 Hypesthesia Diseases 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100035792 Kininogen-1 Human genes 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000004257 Potassium Channel Human genes 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 208000019155 Radiation injury Diseases 0.000 description 1
- 206010039670 Sciatic nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 229940123445 Tricyclic antidepressant Drugs 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 206010053552 allodynia Diseases 0.000 description 1
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 229960002504 capsaicin Drugs 0.000 description 1
- 235000017663 capsaicin Nutrition 0.000 description 1
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000009956 central mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000009693 chronic damage Effects 0.000 description 1
- 229960004126 codeine Drugs 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 description 1
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960002866 duloxetine Drugs 0.000 description 1
- 150000002066 eicosanoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 1
- 229960002870 gabapentin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 210000000514 hepatopancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009808 hippocampal neurogenesis Effects 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- OROGSEYTTFOCAN-UHFFFAOYSA-N hydrocodone Natural products C1C(N(CCC234)C)C2C=CC(O)C3OC2=C4C1=CC=C2OC OROGSEYTTFOCAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000917 hyperalgesic effect Effects 0.000 description 1
- 208000034783 hypoesthesia Diseases 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000012241 membrane hyperpolarization Effects 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000006724 microglial activation Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 201000005518 mononeuropathy Diseases 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003040 nociceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 229940005483 opioid analgesics Drugs 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008058 pain sensation Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009955 peripheral mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008288 physiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 230000001242 postsynaptic effect Effects 0.000 description 1
- 108020001213 potassium channel Proteins 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- AYXYPKUFHZROOJ-ZETCQYMHSA-N pregabalin Chemical compound CC(C)C[C@H](CN)CC(O)=O AYXYPKUFHZROOJ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001233 pregabalin Drugs 0.000 description 1
- 210000005215 presynaptic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- JEXVQSWXXUJEMA-UHFFFAOYSA-N pyrazol-3-one Chemical compound O=C1C=CN=N1 JEXVQSWXXUJEMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000024155 regulation of cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000021014 regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical class OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000003238 somatosensory effect Effects 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000542 thalamic effect Effects 0.000 description 1
- AWLILQARPMWUHA-UHFFFAOYSA-M thiopental sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC([S-])=NC1=O AWLILQARPMWUHA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000003595 thromboxanes Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229960004380 tramadol Drugs 0.000 description 1
- TVYLLZQTGLZFBW-GOEBONIOSA-N tramadol Natural products COC1=CC=CC([C@@]2(O)[C@@H](CCCC2)CN(C)C)=C1 TVYLLZQTGLZFBW-GOEBONIOSA-N 0.000 description 1
- 239000003029 tricyclic antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 102000038650 voltage-gated calcium channel activity Human genes 0.000 description 1
- 108091023044 voltage-gated calcium channel activity Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/075—Ethers or acetals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности. Предложено применение композиции алкил-глицериновых эфиров, полученных из морских организмов, содержащей 94% химилового спирта, в качестве средства снижения нейропатической боли. Технический результат: обнаружено свойство алкил-глицериновых эфиров, полученных из морских липидов, уменьшать нейропатическую боль и её когнитивные последствия за счет предотвращения активации микроглии M1 и нормализации нейрогенеза в гиппокампе. Изобретение может быть использовано для снижения болевой чувствительности организма как при применении индивидуальной композиции алкил-глицериновых эфиров, так и в сочетании с другими веществами, обладающими биологическим действием. 5 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и может быть использовано для снижения болевой чувствительности организма как при применении индивидуальной композиции алкил-глицериновых эфиров (АГЭ), так и в сочетании с другими веществами, обладающими биологическим действием.
В мировой практике в качестве антиболевых (анальгетических) средств используют наркотические анальгетики (I), а также ненаркотические анальгетики и нестероидные противовоспалительные средства (II) (Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей. 16-е изд., 2012. М: Новая волна. С. 148-187).
I группа включает такие известные природные соединения как морфин, кодеин и др. их синтетические аналоги – промедол, трамадол и др.
При активации опиоидного рецептора ингибируется аденилатциклаза, которая играет важную роль при синтезе вторичного посредника цАМФ (cAMP), а также осуществляется регулирование работы ионных каналов. Закрытие потенциал-зависимых кальциевых каналов в пресинаптическом нейроне приводит к уменьшению выброса возбуждающих нейромедиаторов (таких как глутаминовая кислота), а активация калиевых каналов в постсинаптическом нейроне приводит к гиперполяризации мембраны, что уменьшает чувствительность нейрона к возбуждающим нейромедиаторам (Alan F. Schatzberg,Charles B. Nemeroff. The American Psychiatric Publishing Textbook of Psychopharmacology. — The American Psychiatric Publishing, 2009. — С. 32).
Нейрофизиологические исследования свидетельствуют об угнетении наркотическими анальгетиками таламических центров болевой чувствительности и блокировании передачи болевых импульсов к коре большого мозга. Этот эффект является, по всей вероятности, ведущим в физиологическом механизме действия анальгетиков данной группы.
II группа – ненаркотические анальгетики – синтетические производные салициловой кислоты, пиразолона, анилина и др. соединений.
Ацетилсалициловая кислота является ингибитором циклооксигеназы (ЦОГ) — фермента, участвующего в синтезе простагландинов и тромбоксанов и действует так же, как и другие нестероидные противовоспалительные препараты (в частности, диклофенак и ибупрофен).
Простагландины являются медиаторами с выраженным физиологическим эффектом («The Eicosanoids» // Ed.: Peter Curtis-Prior. 2004, Wiley. 654 p.). Несмотря на то что простагландины не являются медиаторами боли, данные соединения повышают чувствительность ноцицептивных рецепторов (сенсибилизируют их) к медиаторам боли, в частности к гистамину и брадикинину. Нестероидные противовоспалительные средства, блокируя фермент циклооксигеназу (ЦОГ), снижают выработку простагландинов, препятствуя развитию воспалительного процесса и болевых ощущений.
Таким образом, анальгетическое действие современных препаратов основано на связывании с опиоидными рецепторами или на ингибировании ферментативных систем в каскаде арахидоновой кислоты. Однако существующие группы лекарственных препаратов в большинстве случаев недостаточно эффективны в облегчении болевых симптомов, в частности при нейропатической боли, вызванной первичным повреждением нервной ткани. В связи с этим поиск новых анальгетиков, задействующих и другие биохимические механизмы, является одной из приоритетных задач медицины.
Задача, решаемая изобретением, – это создание новых эффективных антиболевых (анальгетических) средств, в частности применение алкил-глицериновых эфиров в качестве средства, снижающего нейропатическую боль.
Интерес к алкил-глицериновым эфирам проявили в 50-х годах прошлого века шведские ученые под руководством Astrid Brohult (Brohult A., Holmberg J. «Alkylglycerols in the treatment of leucopenia caused by irradiation» // Nature. – 1954. – Vol. 174. – P. 1102-1103). Было показано их активное влияние на сосудистую систему и гемопоэз, иммунный ответ и связанные с этим терапевтические возможности. Приведены результаты успешного применения алкил-глицеринов при онкологических заболеваниях, лучевых поражениях, иммунодефицитных состояниях, инфекционных патологиях и др. Позднее другие исследователи обнаружили проникновения их через гематоэнцефалический барьер и открывающиеся в связи с этим возможности (Латышев Н.А., Касьянов С.П., Блинов Ю.Г. Алкил-глицериновые эфиры морских организмов: структура распределение и биологическая активность // Известия ТИНРО, 2012. Т. 169. С. 261-277).
Как показали множественные работы, алкилсодержащие липиды значительно активизируют цитотоксические макрофаги, что приводит к усилению Fc-рецепторного фагоцитоза естественных киллеров, макрофагов и нейтрофилов. Кроме того, АГЭ ингибируют изоформы протеинкиназы С, что имеет большое значение для ряда различных клеточных процессов, включая регулирование клеточной адгезии, рост и дифференцировку клеток, развитие опухолей.
В последнее десятилетие большинство исследователей рассматривают липиды с простой эфирной связью в качестве средств лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний – болезней Альцгеймера, Паркинсона и др. - наиболее распространённых форм деменции. АГЭ при этом рассматриваются как предшественники для синтеза в организме физиологически активных плазмалогенов.
Сведений о проявлении алкил-глицериновыми эфирами (АГЭ) антиболевого эффекта для снятия нейропатической боли из уровня техники заявителем не найдено,
на фиг. 1, приведены структурные формулы АГЭ.
Нейропатическая боль, проявляемая рядом сенсорных симптомов, часто сопровождается нарушениями высшей нервной деятельности – ухудшением памяти, депрессией, беспокойством, ангедонией и т.д. Это подчеркивает участие супраспинальных структур, включая гиппокамп, в патогенезе нейропатической боли. В настоящей заявке рассматривается нейропатическая боль, сопровождаемая активацией микроглии и изменениями нейрогенеза в гиппокампе, а также анализируется влияние АГЭ на последствия нейропатической боли в гиппокампе.
Нейропатическая боль - это состояние, возникающее при поражении соматосенсорной нервной системы вследствие различных заболеваний центральной и периферической нервной системы. Нейропатическая боль проявляется в разнообразной комбинации положительных (аллодиния, гипералгезия) и отрицательных (гипоэстезия) сенсорных симптомов. Пациентов с невропатической болью трудно лечить, и не всегда возможно облегчить болевой синдром. Этот тип боли не поддается лечению традиционными анальгетиками, такими как наркотические анальгетики и нестероидные противовоспалительные препараты. В настоящее время, отсутствуют эффективные средства для облегчения нейропатической боли. Современные терапевтические стратегии нейропатической боли направлены на снижение возбудимости нейронов в периферической нервной системе или центральной нервной системе (ЦНС) путем модуляции активности ионных каналов (габапентин, прегабалин, карбамазепин, лидокаин и капсаицин) или путем усиления эндогенных ингибирующих механизмов (трициклические антидепрессанты, дулоксетин и опиоиды) (Scholz, J., and Woolf, C. J. The neuropathic pain triad: neurons, immune cells and glia. Nat. Neurosci., 10(11), 1361-1368, 2007). Учитывая участие иммунных клеток и глии в патогенезе нейропатических болей, разработка терапевтической стратегии, направленной на иммунную реакцию, модуляцию глиальных функций, является важным этапом в лечении нейропатической боли.
Многообещающей группой соединений, способных влиять на состояние микроглии, являются алкил-глицериновые эфиры (АГЭ), полученные из морских организмов. В настоящей заявке рассматривается нейропатическая боль, связанная с активацией микроглии и изменениями нейрогенеза гиппокампа, а также тестирование влияния АГЭ на интенсивность нейропатической боли и ее когнитивные последствия.
В экспериментах для доказательства проявления алкил-глицериновыми эфирами антиболевого эффекта, направленного на снижение нейропатической боли, использовались нижеописанные животные, у которых моделировали нейропатическую боль.
Средства и методы исследования.
Животные и хирургия
Эксперименты проводили с использованием 3-месячных самцов мыши линии C57BL/6. Животных размещали от двух до четырех на клетку с 12-часовым темно-световым циклом и свободным доступом к пище и воде. Чтобы уменьшить стресс, мышей приручали в течение 5 минут один раз в день в течение пяти последовательных дней перед экспериментами. Все процедуры были одобрены Комитетом по этике при «Национальном научном центре морской биологии» Дальневосточного отделения Российской академии наук. Нейропатическую боль моделировали с использованием модели хронического повреждения (CCI) седалищного нерва (Bennett G.J., Xie Y.K. (1988) A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain 33(1):87-107). Животных анестезировали пентобарбиталом натрия (50 мг/кг, внутрибрюшинно), затем левый седалищный нерв перевязывали с помощью 3 свободных лигатур, расположенных на расстоянии 1 мм друг от друга. В качестве контроля выступали ложнооперированные животные (ЛО) без перевязки нерва.
Приготовление алкил-глицериновых эфиров (препарат АГЭ)
Пищеварительная железа командорского кальмара Berryteuthis magister была получена из Находкинской базы активного морского рыболовства (Россия) и хранилась при -200C. Экстракция общего количества липидов проводилась в соответствии с методикой Блай и Дайер (Bligh, E.G., Dyer, W. J. (1959). A rapid method of total lipid extraction and purification. Canadian J. of Biochem. Physiol., 37, 911-917). Омыление липидов проводили по обычной схеме (Christie, W. W. (2003). Lipid analysis: isolation, separation, identification and structural analysis of lipids / Ed. Christie W.W. Bridgwater: Oily Press. 432 p.). Липидную смесь после гидролиза и подкисления растворяли в ацетоне в соотношении 1 : 5, об./об., при комнатной температуре и выдерживали в течение 24 часов при -20° C (Ermolenko E.V., Latyshev N.A., Sultanov R.M., Kasyanov S.P. (2016). Technological approach of 1-O-alkyl-sn-glycerols separation from Berryteuthis magister squid liver oil. J. Food Sci. Technol. 53, 1722-1726). Перекристаллизация полученного осадка проводилась для полного отделения АГЭ от других липидов.
Содержание АГЭ в полученном продукте составляло более 99%, когда основным компонентом был химиловый спирт - 94% приведено в табл.
Лечение животных
АГЭ вводили мышам в виде водной эмульсии в дозе 250 мг/кг с использованием метода перорального введения зондом. Период введения составлял 2 недели со дня операции.
По окончании лечения на мышах проводили поведенческие тесты, по которым оценивались поведенческие эффекты введения АГЭ при развитии нейропатической боли. Тестирование поведенческих параметров проводилось перед выведением животных из эксперимента на 14-й и 28-й день после операции, а тестирование тепловой аллодинии проводили еженедельно.
Статистический анализ
Данные экспериментов подвергались статистическому анализу с использованием однофакторного дисперсионного анализа. p≥0,05 было принято, как статистически достоверное. Все статистические тесты выполнялись с использованием программного обеспечения Microsoft Excel. Результаты представлены как среднее±среднеквадратичное отклонение. «N» представляет количество животных для поведенческих тестов, иммуногистохимического и иммуноферментного анализа.
Изобретение иллюстрируется следующими фигурами:
на фиг. 1 приведены структурные формулы АГЭ;
на фиг. 2. представлены поведенческие эффекты лечения АГЭ при развитии нейропатической боли, где 2A. Динамика тепловой аллодинии: продолжительность подъема задней лапы над горячей пластиной (+ 48°C) за 1 мин. Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, * p <0,05, ** p <0,01; 2Б. Спонтанная локомоторная активность в «открытом поле». Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, * p <0,05, ** p <0,01. 2В. Рабочая память в Y-лабиринте. Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, * p <0,05, ** p <0,01;
на фиг. 3. показаны пролиферирующие клетки и незрелые нейроны в зубчатой извилине гиппокампа, где 3A. Гистограмма, показывающая изменения количества пролиферирующих клеток (PCNA) в группах ЛО, CCI и CCI + АГЭ. Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001. 3Б. Гистограмма, показывающая изменение числа незрелых нейронов (даблкортин) в зубчатой извилине в группах ЛО, CCI и CCI + АГЭ. Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, * p <0,05. 3В. Репрезентативные изображения экспрессии PCNA. На 3Г приведены изображения даблкортина в субгранулярной зоне зубчатой извилины гиппокампа в группах ЛО, CCI и CCI + АГЭ. Шкала: 500 микрон;
на фиг. 4. показано влияние CCI и введения АГЭ на активацию микроглии, где 4A. Гистограмма плотности (клеток / мм3) Iba1-позитивных клеток в CA1 области гиппокампа на 14 и 28 день после операции. Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, * p <0,05, *** p <0,001. 4Б. Гистограмма плотности (клеток/мм3) CD86-позитивных клеток в CA1 области гиппокампа на 14 и 28 день после операции. Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, *** p <0,001. 4В. Репрезентативные фотографии Iba1-иммуногистохимически окрашенных срезов. 4Г. Репрезентативные фотографии CD86-иммуногистохимически окрашенных срезов. Шкала: 100 микрон;
на фиг.5 показано влияние CCI и введения АГЭ на экспрессию цитокинов гиппокампа, где 5A. Гистограмма экспрессии Il-1β в гиппокампе. Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001. 5Б. Гистограмма экспрессии Il-10 в гиппокампе. Среднее ± среднеквадратичное отклонение, n = 7 на группу, ** p <0,01, *** p <0,001.
В табл. приведен состав индивидуальных алкил-глицериновых эфиров используемого препарата.
Эксперимент 1. Исследование тепловой аллодинии
Гипералгезический ответ на горячую пластину считается результатом комбинации центральных и периферических механизмов и отражает болевую чувствительность (Kanaan, S. A., Saadé, N. E., Haddad, J. J., Abdelnoor, A. M.,Atweh, S. F., Jabbur, S. J., Safieh-Garabedian, B. Endotoxin-induced local inflammation and hyperalgesia in rats and mice: a new model for inflammatory pain. Pain, 66(2), 373-379, 1996). Термическую аллодинию измеряли с использованием теста на пластине (Cold / Hot Plate Analgesia Meter No.05044 Columbus Instruments, США). Испытание проводили в камере с 30-сантиметровыми акриловыми стенками на металлической пластине 30×30 см. Температура горячей пластины составляла +48°С, а время тестирования – 60 с. Мышей помещали на горячую пластину, и регистрировали время, в течение которого поврежденная лапа находилась над пластиной. Ложнооперированные животные способны выдерживать длительное воздействие этой температуры, при этом все лапы опираются на пластину. Время контакта конечности с горячей пластиной значительно уменьшается при повреждении нерва. Все функциональные тесты выполнялись ежедневно после введения вещества, и каждое животное тестировалось три раза с интервалом в 5 мин между измерениями.
Измерение тепловой аллодинии не показало значительного увеличения общего времени подъема задней лапы в группе «CCI» на 7-й день после операции по сравнению с ЛО мышами (2,68±1,57 сек vs 0,58±0,3 сек, p = 0,18). Этот параметр резко увеличился на 14 день после операции и достиг значения 10,7±2,93 сек на 28 день у животных с нейропатической болью. В группе CCI + АГЭ этот показатель несколько увеличился с 7 по 28 день после операции и достиг значения 4,03±1,34 секунды, что свидетельствует о значительных различиях с группой CCI (p=0,039) (фиг. 2А).
По результатам эксперимента после введения препарата АГЭ наблюдается снижение болевой чувствительности у мышей с нейропатическим болевым синдромом.
Эксперимент 2. Спонтанная локомоторная активность
Локомоторную активность оценивали, помещая мышь в центр круглой арены (60 см в диаметре, высота 40 см) и оставляя на 5 минут. Площадь арены была разделена на 37 квадратов. Поведение мыши непрерывно записывалось видеокамерой, расположенной над аппаратом. Оценка локомоторной активности проводилась путем подсчета пересеченных квадратов.
Как видно из результатов тестирования, представленных на фиг. 2Б, спонтанная локомоторная активность у мышей с синдромом нейропатической боли повышается на 14 день после операции. Лечение АГЭ почти полностью нормализовало локомоторную активность у мышей с CCI (фиг. 2Б).
Таким образом, следует сделать вывод, что введение АГЭ животным с нейропатической болью нормализует нарушенную локомоторную активность.
Эксперимент 3. Рабочая память
Рабочая память экспериментальных животных изучалась методом тестирования в Y-лабиринте. Y-лабиринт представляет собой устройство с тремя равными рукавами (длина 30 см, ширина 10 см и высота 20 см), изготовленными из непрозрачного акрилового стекла. Мышь помещали в центр лабиринта и оставляли на 5 минут. Выбор рукава мышью фиксировался, когда мышь входила в него всеми четырьмя лапами. Оценивалось общее количество входов (N) и количество «правильных» альтернаций (M, последовательный выбор трех неповторяющихся рукавов). Коэффициент спонтанных альтернаций рассчитывали по формуле: R (%) = M * 100 / (N-2).
Рабочая память оценивалась путем измерения коэффициента спонтанных альтернаций в Y-лабиринте. Показатель был значительно ниже у CCI-мышей, получавших плацебо, чем у ЛО животных через 14 и 28 дней после операции (p<0,01), что отражает ухудшение рабочей памяти при развитии нейропатической боли. Лечение животных АГЭ предотвращало снижение скорости спонтанных альтернаций, демонстрируя значительные различия между группами CCI и CCI+АГЭ (p<0,05) (фиг. 2В).
Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что введение АГЭ предотвращает развитие нарушений рабочей памяти, наблюдаемых при нейропатической боли.
Эксперимент 4. Иммуногистохимическое исследование нейрогенеза и активности глиальных клеток в гиппокампе животных
Эксперимент 4а. Исследование нейрогенеза
Сбор материала для последующего иммуногистохимического исследования проводился на 14-й день и 28-й день после операции. Мышей анестезировали передозировкой тиопентала натрия и транскардиально перфузировали 100 мл ледяного физраствора (~ 4°C), а затем 100 мл холодного фиксатора (4% параформальдегида в 0,1 М фосфатном буфере), pH=7,2. Далее материал постфиксировали в течение 12 ч при 4°С в свежем буферизованном 4%-ом параформальдегиде. Образцы тканей заливали в парафиновые блоки и изготавливали срезы толщиной 10 мкм. Сагиттальные парафиновые срезы после депарафинизации инкубировали в 3%-м расвором перекиси водорода для блокирования эндогенной пероксидазы. После трех промывок в 0,1 М фосфатном буфере (рН=7,2) срезы обрабатывали в течение 60 мин в 2%-м растворе бычьего сывороточного альбумина (Santa Cruz, SC-2323, США) и 0,25% Triton X-100 (Gerbu, США). Срезы инкубировали с первичными антителами на стекле во влажной камере при 4°С в течение 24 часов. После 3 промывок срезы инкубировали в растворе вторичных антител в течение 45 мин. После промывки срезы обрабатывали в течение 5-10 мин хромогеном (Thermo Scientific, DAB Plus, США), чтобы вызвать иммунопероксидазную реакцию. Срезы промывали 0,1 М фосфатным буфером (рН=7,2), дегидратировали и заключали в гистологическую среду (Dako, CS705, США). Для оценки активности микроглии проводили иммуногистохимическое окрашивание гиппокампов мышей с использованием анти-Iba-1 кроличьих поликлональных антител (1:500, ab108539, Abcam, USA) и моноклональных антител к CD86 (1:1000, ab53004, Abcam, USA); для исследования нейрогенеза определяли PCNA-иммунореактивность (мышиные моноклональные антитела против PCNA, 1:2000, ab29) в субгранулярной зоне зубчатой извилины гиппокампа (DG SZ); определение числа новообразованных нейронов в DG SZ проводили с использованием антител против даблкортина (1:500, ab18723, Abcam, USA). Соответствующие вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (PI-1000, anti-rabbit, PI-2000, anti-mouse), использовали согласно инструкциям производителя (Vector Laboratories, USA, 1:100). Микрофотографии были сохранены в виде файлов с расширением TIFF. Изображения обрабатывались и анализировались с использованием программы ImageJ (NIH, США). Количественную оценку IL-1β- и Iba1-иммуноположительных клеток проводили на каждом шестом срезе. Количественное определение PCNA и даблкортина проводилось на каждом третьем срезе. Было рассчитано количество клеток на 1 мм3.
Определялось количество пролиферирующих клеток (PCNA-положительных) и число нейронов в процессе созревания (даблкортин-положительных) в зубчатой извилине гиппокампа. Из эксперимента следует, что PCNA-меченые ядра часто присутствуют в виде кластеров (фиг. 3В). У мышей с травмой седалищного нерва показано уменьшение количества пролиферирующих клеток через 28 дней после операции. Однако через 14 дней после операции мы не обнаружили значительного снижения числа PCNA-положительных ядер в группе CCI (p=0,11). Тем не менее, в оба периода наблюдалось значительное увеличение числа пролиферирующих клеток после лечения АГЭ по сравнению с группой CCI (фиг. 3А). Подсчитано количество незрелых нейронов в субгранулярном слое зубчатой извилины, используя маркер даблкортин. Эта молекула присутствует в цитоплазме, теле клетки и в дендритах новообразованных нейронов. Мы не наблюдали значительного снижения числа незрелых нейронов в зубчатой извилине через 14 дней после операции в CCI-группе, что может быть связано с небольшим снижением интенсивности нейрогенеза у ЛО животных. При анализе количества незрелых нейронов через 28 дней после операции было обнаружено значительное снижение этого показателя в группе CCI по сравнению с ЛО животными (1414±166 клеток/мм3 в ЛО группе vs 915±67 клеток/мм3 в CCI-группе, p<0,05). Обнаружено, что введение АГЭ значительно увеличивает число незрелых нейронов через 14 дней после операции по сравнению с ЛО группой и «CCI» (p<0,05) (фиг. 3Б). На 28-й день после операции число даблкортин-положительных нейронов уменьшилось до уровня группы ЛО, но было выше, чем в группе «CCI» (p<0,05).
Эксперимент 4б. Исследование микроглиальной активности
В группах CCI и CCI+АГЭ наблюдалось увеличение Iba1-иммунопозитивного окрашивания (фиг. 4В) в CA1 области гиппокампа через 14 и 28 дней после операции (p<0,001). У мышей, получавших АГЭ, площадь окрашивания Iba1 увеличивалась на 14-й день после операции и была значительно выше, чем в группах ЛО и CCI на 28-й день после операции. Введение АГЭ вызвало незначительное повышение Iba1-позитивного окрашивания в CA1-области гиппокампа мышей с CCI через 14 дней после операции (p <0,05). На 28-й день после операции было обнаружено 2,5-кратное увеличение Iba1-позитивного окрашивания (p<0,001) по сравнению с ЛО животными (фиг. 4А). Чтобы отделить экспрессию микроглии провоспалительного фенотипа от общего пула микроглиальных клеток, проведено иммуногистохимическое выявление микроглиального маркера CD86 (фиг. 4Г). В группе CCI наблюдалось 2-кратное увеличение окрашивания CD86 как на 14-й, так и на 28-й день после операции (p<0,001). Однако на 14-й день после операции не наблюдалось увеличения экспрессии CD86 в группе «CCI+АГЭ», а на 28-й день обнаружено уменьшение этого маркера по сравнению с ЛО мышами (p<0,001) (фиг. 4Б).
Таким образом, введение АГЭ животным с нейропатическим болевым синдромом предотвращает нарушения нейрогенеза и снижает степень активации микроглии провоспалительного фенотипа.
Эксперимент 5. Экспрессия медиаторов воспаления в гиппокампе
Для количественного определения концентрации IL-1β и IL-10 в гиппокампе использовали иммуноферментный анализ. Гиппокампы извлекали из левого полушария, быстро замораживали и хранили при -70°C до использования. В соответствии с рекомендациями производителя использовались наборы для мышей IL-1β ELISA (ab100705, Abcam) и IL-10 ELISA (ab100697, Abcam). Нервную ткань гомогенизировали на льду в экстракционном буфере, рекомендованном изготовителем (100 мМ Трис, рН 7,4, 150 мМ NaCl, 1 мМ EGTA, 1 мМ ЭДТА, 1% Triton X-100, 0,5% дезоксихолат натрия) с 1 мг/мл ингибитора протеазы (cOmplete, Sigma-Aldrich) и 0,01 мг/мл ингибитора фосфатазы (P5726, Sigma-Aldrich). Концентрации белка определяли с использованием набора для анализа белка BCA (Pierce, Rockford, IL). Абсорбцию при 450 нм измеряли с помощью планшетного спектрофотометра iMark (Bio-Rad).
Выработка медиаторов воспаления в гиппокампе мыши была исследована с использованием иммуноферментного анализа на 14-й и 28-й дни после операции. В группе CCI экспрессия провоспалительного цитокина IL-1β была значительно увеличена на 28-й день после операции по сравнению с ЛО животными: 52,24±3,06 и 44,45±3,29 пг/1 мг белка (р<0,05), но на 14-й день наблюдалась лишь незначительная разница (фиг. 5А). Интересно отметить, что на 14-й день применения АГЭ у животных с перевязкой седалищного нерва наблюдалось значительное снижение концентрации IL-1 в гиппокампе, как по сравнению с ЛО мышами, так и в группе CCI. Однако на 28-й день после операции (через 2 недели после окончания введения АГЭ) этот показатель соответствовал уровню группы «CCI», но был ниже, чем в группе ЛО (p<0,01). Нейропатическая боль сопровождалась значительным увеличением концентрации противовоспалительных цитокинов IL-10 как на 14-й, так и на 28-й дни после операции в CCI-группе. На 14-й день введения АГЭ после операции наблюдалось двойное увеличение концентрации IL-10 в гиппокампе по сравнению с группой CCI (p<0,001) (фиг. 5Б).
Как видно из результатов эксперимента, представленных на фиг.5, введение АГЭ животным с нейропатической болью приводит к значительному увеличению концентрации противовоспалительного цитокина IL-10 в гиппокампе и уменьшению концентрации провоспалительного цитокина IL-1β.
В совокупности все проведенные эксперименты свидетельствуют о том, что нейропатическое болевое поведение сопровождается изменениями поляризации микроглии с преобладанием провоспалительного фенотипа микроглии, тем самым способствуя нарушениям нейрогенеза и снижению когнитивных функций у подопытных животных.
Препарат алкил-глицериновых эфиров, полученный из морских липидов, уменьшает нейропатическую боль и её когнитивные последствия, за счет предотвращения активации микроглии M1 и нормализациии нейрогенеза в гиппокампе, и может быть использован в качестве средства для снижения нейропатической боли.
Claims (1)
- Применение композиции алкил-глицериновых эфиров, полученных из морских организмов, содержащей 94% химилового спирта, в качестве средства снижения нейропатической боли.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017127922A RU2659202C1 (ru) | 2017-08-04 | 2017-08-04 | Средство снижения нейропатической боли |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017127922A RU2659202C1 (ru) | 2017-08-04 | 2017-08-04 | Средство снижения нейропатической боли |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2659202C1 true RU2659202C1 (ru) | 2018-06-28 |
Family
ID=62816016
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017127922A RU2659202C1 (ru) | 2017-08-04 | 2017-08-04 | Средство снижения нейропатической боли |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2659202C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2825186C1 (ru) * | 2024-04-02 | 2024-08-21 | Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования "Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации (ВМедА) | Способ лечения невропатического болевого синдрома с использованием мультимодальной лекарственной терапии при травмах периферической нервной системы |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4713487A (en) * | 1985-06-06 | 1987-12-15 | Kao Corporation | Ether carboxylates and process for preparing same |
| WO2007033400A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-03-29 | Medical Developments International Limited | Method of treating pain in patients |
| RU2415125C1 (ru) * | 2009-09-09 | 2011-03-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения Российской академии наук | Способ получения алкил-глицериновых эфиров из морских жиров |
| WO2014162276A1 (en) * | 2013-04-02 | 2014-10-09 | Indus Biotech Private Limited | A composition for treating neuropathy, a process and a method of treatment thereof |
-
2017
- 2017-08-04 RU RU2017127922A patent/RU2659202C1/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4713487A (en) * | 1985-06-06 | 1987-12-15 | Kao Corporation | Ether carboxylates and process for preparing same |
| WO2007033400A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-03-29 | Medical Developments International Limited | Method of treating pain in patients |
| RU2415125C1 (ru) * | 2009-09-09 | 2011-03-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения Российской академии наук | Способ получения алкил-глицериновых эфиров из морских жиров |
| WO2014162276A1 (en) * | 2013-04-02 | 2014-10-09 | Indus Biotech Private Limited | A composition for treating neuropathy, a process and a method of treatment thereof |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| APPENDINO G. et al. Homologues and isomers of noladin ether, a putative novel endocannabinoid: interaction with rat cannabinoid CB(1) receptors. Bioorg.Med.Chem.Lett. 2003 Jan 6; 13(1): 43-6. Реферат [он лайн] [найдено 01.03.2018] (найдено из интернет: www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12467613). * |
| ЛАТЫШЕВ Н.А. и др. Алкил-глицериновые эфиры морских организмов: структура, распределение и биологическая активность. Известия ТИНРО, 2012, т.169, с.261-277. * |
| ЛАТЫШЕВ Н.А. и др. Алкил-глицериновые эфиры морских организмов: структура, распределение и биологическая активность. Известия ТИНРО, 2012, т.169, с.261-277. APPENDINO G. et al. Homologues and isomers of noladin ether, a putative novel endocannabinoid: interaction with rat cannabinoid CB(1) receptors. Bioorg.Med.Chem.Lett. 2003 Jan 6; 13(1): 43-6. Реферат [он лайн] [найдено 01.03.2018] (найдено из интернет: www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12467613). * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2825186C1 (ru) * | 2024-04-02 | 2024-08-21 | Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования "Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации (ВМедА) | Способ лечения невропатического болевого синдрома с использованием мультимодальной лекарственной терапии при травмах периферической нервной системы |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fang et al. | Metformin ameliorates stress-induced depression-like behaviors via enhancing the expression of BDNF by activating AMPK/CREB-mediated histone acetylation | |
| Tsai et al. | High-fat diet suppresses the astrocytic process arborization and downregulates the glial glutamate transporters in the hippocampus of mice | |
| Ait-Bali et al. | Pre-and postnatal exposure to glyphosate-based herbicide causes behavioral and cognitive impairments in adult mice: evidence of cortical ad hippocampal dysfunction | |
| Taniguti et al. | Atorvastatin prevents lipopolysaccharide-induced depressive-like behaviour in mice | |
| Sayd et al. | Systemic administration of oleoylethanolamide protects from neuroinflammation and anhedonia induced by LPS in rats | |
| Yoshizaki et al. | Autophagy regulates inflammation in adipocytes | |
| Due et al. | Acrolein involvement in sensory and behavioral hypersensitivity following spinal cord injury in the rat | |
| Bai et al. | G-protein-coupled estrogen receptor activation upregulates interleukin-1 receptor antagonist in the hippocampus after global cerebral ischemia: implications for neuronal self-defense | |
| Piechal et al. | Maternal zinc supplementation improves spatial memory in rat pups | |
| Schaeffer et al. | Phospholipase A 2 activation as a therapeutic approach for cognitive enhancement in early-stage Alzheimer disease | |
| Manzhulo et al. | Analgetic effect of docosahexaenoic acid is mediated by modulating the microglia activity in the dorsal root ganglia in a rat model of neuropathic pain | |
| Mohammadi et al. | Microglia dependent BDNF and proBDNF can impair spatial memory performance during persistent inflammatory pain | |
| Ponomarenko et al. | N-docosahexaenoylethanolamine reduces neuroinflammation and cognitive impairment after mild traumatic brain injury in rats | |
| Jiang et al. | The correlation between accumulation of amyloid beta with enhanced neuroinflammation and cognitive impairment after intraventricular hemorrhage | |
| Blanco et al. | Perinatal asphyxia results in altered expression of the hippocampal acylethanolamide/endocannabinoid signaling system associated to memory impairments in postweaned rats | |
| Quartu et al. | Involvement of the endocannabinoid system in the physiological response to transient common carotid artery occlusion and reperfusion | |
| Seyer et al. | Insulin‐regulated aminopeptidase inhibitor‐mediated increases in dendritic spine density are facilitated by glucose uptake | |
| Zhou et al. | Fluoride stimulates anxiety-and depression-like behaviors associated with SIK2-CRTC1 signaling dysfunction | |
| Jang et al. | Changes in iNOS, GFAP and NR1 expression in various brain regions and elevation of sphingosine-1-phosphate in serum after immobilized stress | |
| Hu et al. | n‐3 polyunsaturated fatty acids improve depression‐like behavior by inhibiting hippocampal neuroinflammation in mice via reducing TLR4 expression | |
| Acar et al. | The effect of docosahexaenoic acid on apelin distribution of nervous system in the experimental mouse model of Parkinson’s disease | |
| Zhu et al. | Amorphous selenium inhibits oxidative stress injury of neurons in vascular dementia rats by activating nmdar pathway | |
| Zhang et al. | Lipin2 ameliorates diabetic encephalopathy via suppressing JNK/ERK-mediated NLRP3 inflammasome overactivation | |
| Mahaman et al. | Ferulic acid improves synaptic plasticity and cognitive impairments by alleviating the PP2B/DARPP-32/PP1 axis-mediated STEP increase and Aβ burden in Alzheimer's disease | |
| Olayinka et al. | Apigenin attenuates depressive-like behavior via modulating monoamine oxidase A enzyme activity in chronically stressed mice |