RU2653765C1 - Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических данных - Google Patents
Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических данных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2653765C1 RU2653765C1 RU2017113408A RU2017113408A RU2653765C1 RU 2653765 C1 RU2653765 C1 RU 2653765C1 RU 2017113408 A RU2017113408 A RU 2017113408A RU 2017113408 A RU2017113408 A RU 2017113408A RU 2653765 C1 RU2653765 C1 RU 2653765C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mmp
- preeclampsia
- risk
- severe
- severe preeclampsia
- Prior art date
Links
- 201000005608 severe pre-eclampsia Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 238000011161 development Methods 0.000 title abstract description 17
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 102200094051 rs17577 Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 102100030411 Neutrophil collagenase Human genes 0.000 claims abstract 6
- 101710118230 Neutrophil collagenase Proteins 0.000 claims abstract 6
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 claims abstract 5
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 claims abstract 3
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 claims abstract 3
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 claims description 7
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 claims description 7
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 claims description 7
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 claims 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 9
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108030001564 Neutrophil collagenases Proteins 0.000 description 33
- 102000056189 Neutrophil collagenases Human genes 0.000 description 32
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 25
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 description 23
- 102000001776 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 22
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 18
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 description 18
- 102000000424 Matrix Metalloproteinase 2 Human genes 0.000 description 17
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 7
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 6
- LDCYZAJDBXYCGN-VIFPVBQESA-N 5-hydroxy-L-tryptophan Chemical compound C1=C(O)C=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 LDCYZAJDBXYCGN-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- 229940000681 5-hydroxytryptophan Drugs 0.000 description 5
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 5
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 5
- LDCYZAJDBXYCGN-UHFFFAOYSA-N oxitriptan Natural products C1=C(O)C=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 LDCYZAJDBXYCGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010048554 Endothelial dysfunction Diseases 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 230000008694 endothelial dysfunction Effects 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol Substances OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 3
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- XJMMNTGIMDZPMU-UHFFFAOYSA-N 3-methylglutaric acid Chemical compound OC(=O)CC(C)CC(O)=O XJMMNTGIMDZPMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YEJRWHAVMIAJKC-UHFFFAOYSA-N 4-Butyrolactone Chemical compound O=C1CCCO1 YEJRWHAVMIAJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 2
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102100033732 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Human genes 0.000 description 2
- 101710187743 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 2
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 2
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 2
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FKJHLNDJJGVDEE-UHFFFAOYSA-N 2-formylbutanoic acid Chemical compound CCC(C=O)C(O)=O FKJHLNDJJGVDEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDVFRMMRZOCFLS-UHFFFAOYSA-N 2-oxopentanoic acid Chemical compound CCCC(=O)C(O)=O KDVFRMMRZOCFLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009206 Abruptio Placentae Diseases 0.000 description 1
- WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N Acetoacetic acid Natural products CC(=O)CC(O)=O WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 241000182988 Assa Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000009137 Behcet syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 244000212312 Blighia sapida Species 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000014882 Carotid artery disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010008609 Cholangitis sclerosing Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000001951 Fetal Death Diseases 0.000 description 1
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102100027998 Macrophage metalloelastase Human genes 0.000 description 1
- 101710187853 Macrophage metalloelastase Proteins 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 description 1
- 108090000855 Matrilysin Proteins 0.000 description 1
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 1
- LZOSYCMHQXPBFU-UHFFFAOYSA-N O-decanoylcarnitine Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)OC(CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C LZOSYCMHQXPBFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000002787 Pregnancy Complications Diseases 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 1
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 201000009329 acute pericementitis Diseases 0.000 description 1
- 208000012998 acute renal failure Diseases 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 208000007474 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 238000009582 blood typing Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229930188620 butyrolactone Natural products 0.000 description 1
- 208000037876 carotid Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001277 chronic periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- WOWBFOBYOAGEEA-UHFFFAOYSA-N diafenthiuron Chemical compound CC(C)C1=C(NC(=S)NC(C)(C)C)C(C(C)C)=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 WOWBFOBYOAGEEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000002296 eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000004090 etiopathogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 231100000479 fetal death Toxicity 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- JLPJFSCQKHRSQR-UHFFFAOYSA-N oxolan-3-one Chemical compound O=C1CCOC1 JLPJFSCQKHRSQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 201000008532 placental abruption Diseases 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 208000010157 sclerosing cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- DUYSYHSSBDVJSM-KRWOKUGFSA-N sphingosine 1-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O DUYSYHSSBDVJSM-KRWOKUGFSA-N 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008718 systemic inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical class C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к генетике. Описан способ прогнозирования риска возникновения преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, уроженках Центрального Черноземья, относится к области медицинской диагностики. Способ включает выделение ДНК из периферической венозной крови. Анализ полиморфизмов генов ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577). Фактором риска развития ПЭ тяжелого течения является сочетание генетических вариантов G MMР-9 (rs17577) и G ММР-2 (rs243865). Комбинация Т ММР-8 (rs11225395) и А ММР-9 (rs17577) имеет протективное значение для формирования преэклампсии тяжелого течения. Изобретение может быть использовано в акушерстве для прогнозирования осложнений во второй половине беременности, а именно риска развития преэклампсии (далее ПЭ) тяжелого течения с учетом генетических данных. 5 ил., 4 пр.
Description
Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано в акушерстве для прогнозирования осложнений во второй половине беременности, а именно риска развития преэклампсии (далее ПЭ) тяжелого течения с учетом генетических данных.
Преэклампсия - осложнение беременности, характеризующееся развитием эндотелиальной дисфункции, полиорганной недостаточностью, нарушением свертывающей и противосвертывающей систем, микроциркуляции, обменных процессов, иммунного ответа [Серов В.Н. Клинические рекомендации. Акушерство и гинекология. - 4-е изд. / В.Н. Серов, Г.Т. Сухих. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 1024 с.; Eiland, E. Preeclampsia / E. Eiland, C. Nzerue, M. Faulkner // J. Pregnancy, 2012. – P. 586—578].
В настоящее время преэклампсия является одной из самых актуальных проблем современного акушерства ввиду широкой распространенности, сложности этиопатогенеза, высокой частоты материнской и перинатальной заболеваемости и смертности [Киселева Н.И. Маркеры дисфункции эндотелия при гестозе [Текст] / Н.И. Киселева, С.Н. Занько, А.П. Солодков // Дисфункция эндотелия : эксперим. и клинич. исслед. : тр. III междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 18-20 мая 2004 г. / Белорус. респ. Фонд фундамент. исслед. ; Витеб. гос. мед. ун-т. – Витебск, 2004. – С. 201-204]. ПЭ может варьировать от легкой до тяжелой формы. Как правило, в тяжелых случаях преэклампсии единственным способом улучшить состояние пациентки является ее родоразрешение.
Для преэклампсии характерно прогрессирующее течение. Это выражается в неуклонном нарастании тяжести отдельных ее проявлений или присоединении новых клинических признаков. При наличии преэклампсии могут развиваться такие критические состояния, как отслойка плаценты, ДВС–синдром, церебральные кровоизлияния, печеночная недостаточность, острая почечная недостаточность, гипотрофия, гибель плода, эклампсия [Эндотелиальная дисфункция при гестозе. Патогенез, генетическая предрасположенность, диагностика и профилактика [Текст]: метод. рекомендации / Е.В. Мозговая, О.В. Малышева, Т.Э. Иващенко [и др.] ; ред. Э.К. Айламазян. – Санкт-Петербург: Изд-во Н-Л, 2003. – 32 с.].
Данные о молекулярных и клеточных механизмах развития преэклампсии, плацентарного гомеостаза и адаптационно-гомеостатических реакций плаценты при преэклампсии многочисленны, но разноречивы: недостаточно изучены регуляторные механизмы, обеспечивающие рост, структуру и функционирование всего фетоплацентарного комплекса [Rоbеrts J.M. Рrеесlаmрsiа аnd sоlublе fms-likе tyrоsinе kinаsе 1 [Tехt] / J.M. Rоbеrts, А. Rаjаkumаr // J. Сlin. Еndосrinоl. Mеtаb. – 2009. – Vоl. 94, № 7. – Р. 2252-2254].
В настоящее время принято считать, что преэклампсия протекает в две стадии [Kаng, А. Рrе-есlаmрsiа sсrееning in first аnd sесоnd trimеstеr [Tехt] / А. Kаng, H. Strubеn // Thеr. Umsсh. – 2008. – Vоl. 65, № 11. – Р. 663-666]. На первой происходит нарушение взаимоотношений между инвазией раннего трофобласта и ремоделированием спиральных артерий, которое приводит к недостаточному кровоснабжению плаценты и оксидантному стрессу ее тканей [Медведев Б.И. Клинико-биохимические предикторы развития преэклампсии [Текст] / Б.И. Медведев, Е.Г. Сюндюкова, С.Л. Сашенков // Акушерство и гинекология. – 2013. – № 5. – С. 30-35]. На второй стадии развивается «материнский синдром», проявляющийся в виде генерализованного системного воспалительного ответа, в который вовлечены как лейкоциты, так и эндометрий [Некоторые аспекты патогенеза преэклампсии у беременных [Текст] / В.Г. Левченко, В.Н. Зорина, Л.Г. Баженова [и др.] // Российский вестник акушера-гинеколога. – 2010. – Т. 10, № 3. – С. 21-25].
Как свидетельствуют результаты ряда исследований, значимую роль в развитии преэклампсии играют генетические факторы. Среди генов-кандидатов важное значение в развитии ПЭ отводится генам матриксных металлопротеиназ. К этой группе генов относятся: MMР-1 (rs1799750), MMР-2 (rs243865), MMР-3 (rs3025058), MMР-7 (rs11568818), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-9 (rs17577), MMР-12 (rs652438).
Матриксная металлопротеиназа-2 (MMP-2) - протеиназа внеклеточного матрикса человека, которая секретируется в качестве негликозилированного профермента. Ген ММР-2 расположен на длинном плече 16 хромосомы (16q12.2). Установлена вовлеченность полиморфизма ММР-2 (rs243865) в развитие инфаркта миокарда, метаболического синдрома, склерозирующего холангита, аневризмы восходящего отдела аорты, рака мочевого пузыря и т.д. [Анализ полиморфизма генов матриксных металлопротеиназ-2 и -9 у пациентов с ишемической болезнью сердца [Текст] / А.В. Шевченко, О.В. Голованова, В.И. Коненков [и др.] // Терапевтический архив. – 2010. – Т. 82, № 1. – С. 31-34].
Матриксная металлопротеиназа-8 (ММР-8) или нейтрофильная коллагеназа содержится в специфических гранулах полиморфноядерных лейкоцитов в виде неактивного профермента. Ген ММР-8 находится на 11 хромосоме в области 11q22.2–q22.3. В гене наиболее изучены два полиморфных локуса с однонуклеотидными заменами в кодирующей области ММР-8 (rs11225395) и ММР-8 (rs1320632). Данные полиморфизмы связаны с преждевременным разрывом плодных оболочек, хроническим и острым периодонтитом, развитием рака молочной железы, рака легких и атеросклерозом сонных артерий [Mаtriх mеtаllорrоtеinаsе 8 (MMР8) gеnе роlymоrрhisms in сhrоniс реriоdоntitis [Tехt] / L. Izаkоviсоvа Hоllа, B. Hrdliсkоvа, J. Vоkurkа [еt аl.] // Аrсh. Оrаl Biоl. – 2012. – Vоl. 57, № 2. – Р. 188-196].
Матриксная металлопротеиназа-9 (ММР-9) вовлечена в процессы воспаления, ремоделирования ткани и репарации, мобилизации матрикс-связанных факторов роста и процессинга цитокинов [Матриксные металлопротеиназы, их роль в физиологических и патологических процессах [Текст]: обзор / Л.Н. Рогова, Н.В. Шестернина, Т.В. Замечник [и др.] // Вестник новых медицинских технологий. – 2011. – Т. 18, № 2. – С. 86-89]. Ген ММР-9 локализован на 20 хромосоме (20q11-q13). Согласно литературным данным изучаемый полиморфизм MMР-9 (rs17577) является фактором риска развития рака молочной железы и желчного пузыря, астмы у детей и болезни Бехчета [Аssосiаtiоn оf MMР-9 gеnе роlymоrрhisms with Bеhçеt's disеаsе risk [Tехt] / А. Nаоuаli, W. Kааbасhi, K. Tizаоui [еt аl.] // Immunоl. Lеtt. – 2015. – Vоl. 164, № 1. – Р. 18-24].
Известен способ по заявке РФ №2012131290 (дата публикации заявки 27.01.2014), согласно которому для раннего выявления риска развития преэклампсии у беременной женщины на ранней стадии беременности на сроке от 14 до 16 недель беременности до развития обычных клинических симптомов проводят анализ исследуемого биологического образца для определения концентрации 5-гидрокситриптофана, причем пониженная концентрация 5-гидрокситриптофана относительно контрольной концентрации при нормальной беременности коррелирует с риском развития преэклампсии у беременной женщины. При этом контрольная концентрация представляет собой концентрацию 5-гидрокситриптофана в биологическом образце, полученном у субъекта, у которого действительно развилась преэклампсия, и в котором повышенная концентрация 5-гидрокситриптофана относительно контрольной концентрации коррелирует с риском развития преэклампсии у беременной женщины. Одновременно проводят анализ для определения концентрации по существу всех биомаркеров: 5-гидрокситриптофана, моносахарида, деканоилкарнитина, метилглутаровой кислоты и/или адипиновой кислоты, олеиновой кислоты, докозагексаеновой кислоты и/или докозатрииновой кислоты, -бутиролактона и/или оксолан-3-она, 2-оксовалериановой кислоты и/или оксометилбутановой кислоты, ацетоуксусной кислоты, гексадеценоилэйкозатетраеноил-sn-глицерина, сфингозин-1-фосфата, сфинганин-1-фосфата и производных витамина D3, и установления корреляции концентрации и комбинации всех биомаркеров с риском развития преэклампсии у беременной женщины.
В патенте РФ № 2586412 (дата публикации 10.06.2016) предложен способ оценки риска возникновения патологии беременности, заключающийся в том, что для оценки риска возникновения преэклампсии, преждевременных родов, а также преэклампсии на фоне артериальной гипертензии проводят анализ биологических жидкостей человека, а именно сыворотки крови, с помощью обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с регистрацией результата анализа в ультрафиолетовой области спектра, а в качестве биомаркеров патологии беременности используются гипоксантин, ксантин, мочевая кислота.
Общий недостаток указанных способов заключается в том, что не рассматриваются генетические полиморфизмы и их сочетания с риском развития преэклампсии тяжелого течения.
За прототип выбран «Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения» по патенту РФ № 2568892 по заявке 2014135186/15, 28.08.2014. Заявляемый способ позволяет прогнозировать развитие преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических полиморфизмов генов цитокинов. Способ заключается в том, что выделяют ДНК из периферической венозной крови и анализируют генетические полиморфизмы: -308 G/A TNFα (rs1800629), +36 A/G TNFR1 (rs767455), -801 G/A SDF 1(rs1801157), C/G MCP-1 (rs285765). Повышенный риск развития преэклампсии тяжелого течения прогнозируют при наличии сочетания генетических вариантов -801A SDF1, +36 GG TNFR1 и -308 A TNFα. Пониженный риск развития преэклампсии тяжелого течения прогнозируют при наличии сочетания генетических вариантов -801 G SDF1 и G МСР (rs 285765). Использование изобретения позволяет повысить эффективность выявления преэклампсии тяжелого течения.
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития тяжелого течения ПЭ по данным о генетических полиморфизмах - ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577).
Технический результат использования изобретения – получение критериев оценки риска развития преэклампсии тяжелого течения.
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, включающий:
- выделение ДНК из периферической венозной крови;
- анализ полиморфизмов генов матриксных металлопротеиназ ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577);
- прогнозирование максимального риска развития преэклампсии тяжелого течения при выявлении сочетания генетических вариантов матриксных металлопротеиназ - ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577);
- прогнозирование минимального риска развития преэклампсии тяжелого течения при выявлении сочетания генетических вариантов матриксных металлопротеиназ - MМР-2 (rs243865), MMР-9 (rs17577);
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза развития преэклампсии тяжелого течения у беременных по наличию различных сочетаний генетических вариантов полиморфизмов ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577).
Способ осуществляют следующим образом.
ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови пациентки в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCl2, 10мМ трис-HCl (pH 7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4ºС, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН 8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37ºС в течение 16 часов.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20ºС.
Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров.
Изобретение характеризуется следующими графическими материалами:
Фиг.1. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-2 (rs243865) ( - гомозигота СС MMР-2 (rs243865), - гомозигота ТТ MMР-2 (rs243865), - гетерозигота СТ MMР-2 (rs243865), - отрицательный контроль).
Фиг. 2. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма ММР-8 (rs1320632) ( - гомозигота АА ММР-8 (rs1320632), - гомозигота GG ММР-8 (rs1320632), - гетерозигота АG ММР-8 (rs1320632), - отрицательный контроль).
Фиг. 3. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-8 (rs11225395) ( - гомозигота СС MMР-8 (rs11225395), - гомозигота TT MMР-8 (rs11225395), - гетерозигота СT MMР-8 (rs11225395), - отрицательный контроль).
Фиг. 4. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-9 (rs17577) ( - гомозигота GG MMР-9 (rs17577), - гомозигота АА MMР-9 (rs17577), - гетерозигота GА MMР-9 (rs17577), - отрицательный контроль).
Фиг 5. Распространенность сочетаний генетических вариантов матриксных металлопротеиназ у женщин с преэклампсией тяжелой степени и в контрольной группе.
Анализ генетического полиморфизма ММР-2 (rs243865) проводят методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК на амплификаторе СFX96 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Аssосiаtiоn оf mаtriх mеtаllорrоtеinаsеs (MMР2, MMР7 аnd MMР9) gеnеtiс vаriаnts with lеft vеntriсulаr dysfunсtiоn in соrоnаry аrtеry disеаsе раtiеnts [Tехt] / А. Mishrа, А. Srivаstаvа, T. Mittаl [еt аl.] // Сlin. Сhim. Асtа. – 2012. – Vоl. 413, № 19-20. – Р. 1668-1674] с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH 8,8), 2,5мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при t+95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 1 мин при t+58,4°С; денатурация – 15 с при t+95°С.
При проведении ПЦР в амплификаторе с флюоресцентной детекцией (на амплификаторе CFX96) генотипирование осуществляют методом Tag Man зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю Т, зонд с красителем FAM – аллелю С (фиг. 1).
Анализ полиморфизма генов ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632) проводят методом ПЦР синтеза ДНК на амплификаторе СFX96 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Еlеvаtеd MMР-8 аnd dесrеаsеd myеlореrохidаsе соnсеntrаtiоns аssосiаtе signifiсаntly with thе risk fоr реriрhеrаl аthеrоsсlеrоsis disеаsе аnd аbdоminаl аоrtiс аnеurysm [Tехt] / Р. Рrаdhаn-Раlikhе, Р. Vikаtmаа, T. Lаjunеn [еt аl.] // Sсаnd. J. Immunоl. – 2010. – Vоl. 72, № 2. – Р. 150-157] с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH 8,8), 2,5мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при 95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 1 мин при t+54,6°С; денатурация – 15 с при t+95°С для ММР-8 (rs1320632) и отжиг праймеров – 1 мин при t+54,0°С; денатурация – 15 с при t+95°С для ММР-8 (rs11225395).
При проведении ПЦР в амплификаторе с флюоресцентной детекцией (на амплификаторе CFX96) генотипирование осуществляют методом Tag Man зондов по данным величин ОЕФ каждого зонда. Для ММР-8 (rs11225395) зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю Т, зонд с красителем FAM – аллелю С (фиг.2); .для ММР-8 (rs1320632) зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю G, зонд с красителем FAM – аллелю A (фиг. 3).
Для исследования полиморфизма MMР-9 (rs17577) использованы наборы 2,5х реакционной смеси для проведения ПЦР-РВ [httр://www.kаrgеr.соm] в объеме 25 мкл на 1 образец, включавших 2,5х реакционную смесь (2,5х ПЦР буфер: (KСl, ТрисHСl (рH 8,8), 6,25 мМ MgСl2), SynTаq ДНК-полимеразу, дезоксинуклеозидтрифосфаты, глицерол, Twееn 20) в объеме 10мкл, 25мМ MgСl2 в объеме 1,5 мкл, ddH2О (деионизированная вода), по 10 пкмоль каждого праймера и по 5 пкмоль. При проведении ПЦР в амплификаторе с флюоресцентной детекцией (на амплификаторе CFX96) генотипирование осуществлялось методом Tag Man зондов по данным величин ОЕФ каждого зонда. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю А, зонд с красителем FAM – аллелю G (фиг. 4).
Возможность использования предложенного способа для оценки риска возникновения и развития преэклампсии подтверждает анализ результатов наблюдений 468 пациенток с ПЭ и 577 женщин контрольной группы. Общий объем исследуемой выборки составил 1045 человек. Возраст у женщин с преэклампсией варьировал от 17 до 45 лет и в среднем составил 27,74±5,4 лет. Возраст беременных без ПЭ варьировал от 15 до 49 лет и в среднем составил 27,80±6,5 лет. В исследуемые выборки включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья России и не имеющие родства между собой. Таким образом, контрольная группа не отличалась от группы женщин с ПЭ по полу, возрасту, месту рождения и национальности.
Все клинические и клинико-лабораторные исследования проводились на базе Перинатального центра Белгородской областной клинической больницы, с информированного согласия пациенток на использование материалов лечебно-диагностических мероприятий, проводимых за период госпитализации и после, связанных с ПЭ, для научно-исследовательских целей и протоколировались по стандартам этического комитета Российской Федерации. Анализ ассоциаций сочетаний генетических вариантов с ПЭ проведен с помощью программного обеспечения APSampler (http://sources.redhat.com/cygwin/), использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [A Gibbs sampler for identification of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] / A.V. Favorov, M.S. Gelfand, A.V. Gerasimova [et al.] // Bioinformatics. – 2005. – Vol. 21, № 10. – P. 2240-2245].
Выявлены особенности «генетической конституции» беременных с ПЭ тяжелого течения по исследуемым генам матриксных металлопротеиназ (фиг. 5). Установлено, что сочетание аллелей Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577) встречается у 1,45% женщин с ПЭ III степени тяжести, что в 7,88 раз ниже аналогичного показателя контрольной группы – 11,43%. Данная комбинация является протективным фактором развития ПЭ III степени тяжести (рf= 0,003, рреrm=0,01 ОR=0,11, 95% СI 0,01-0,83).
Наоборот, сочетание аллелей G MMР-9 (rs17577) и G MMР-8 (rs1320632) отмечается у 23,18% женщин с ПЭ III степени тяжести и у 8,76% женщин контрольной группы (рf= 0,0007, рреrm=0,002, ОR=3,14, 95% СI 1,67-5,92).
Резюмируя полученные данные, можно сделать вывод о значимой роли генетических полиморфизмов ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577) в формировании ПЭ тяжелого течения. Наличие сочетания полиморфных вариантов - G MMР-9 (rs17577), G MMР-8 (rs1320632) (OR=3,14) у женщин является признаком риска развития преэклампсии тяжелого течения. Наличие сочетания полиморфных вариантов Т ММР-2 (rs243865), А ММР-9 (rs17577) (OR=0,11) является протективным фактором развития преэклампсии тяжелого течения.
Примеры конкретного выполнения.
1. У беременной С., русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание двух генетических вариантов Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития преэклампсии тяжелого течения. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. В течение беременности у нее не было выявлено признаков ПЭ тяжелого течения.
2. У женщины М., при прегравидарной подготовке, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание двух генетических вариантов Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития ПЭ тяжелого течения. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности у нее не было выявлено признаков ПЭ тяжелого течения.
3. У женщины Л., при прегравидарной подготовке, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание G MMР-9 (rs17577) и G MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ тяжелого течения. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности были выявлены признаки преэклампсии тяжелого течения.
4. У беременной А., русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание G MMР-9 (rs17577) и G MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития преэклампсии тяжелого течения. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности были выявлены признаки ПЭ тяжелого течения.
Применение данного способа позволит формировать среди женщин русской национальности, уроженках Центрального Черноземья при прегравидарной подготовке и на ранних сроках беременности группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития преэклампсии тяжелого течения.
Claims (1)
- Способ прогнозирования риска возникновения преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, уроженках Центрального Черноземья, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ генетических полиморфизмов ММР-2 (rs243865), ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632), MMР-9 (rs17577) и прогнозирование повышенного риска развития преэклампсии тяжелого течения при наличии сочетания генетических вариантов G MMР-9 (rs17577) и G MMР-8 (rs1320632), пониженного риска развития преэклампсии тяжелого течения - при наличии сочетания генетических вариантов Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017113408A RU2653765C1 (ru) | 2017-04-18 | 2017-04-18 | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических данных |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017113408A RU2653765C1 (ru) | 2017-04-18 | 2017-04-18 | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических данных |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2653765C1 true RU2653765C1 (ru) | 2018-05-14 |
Family
ID=62152979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017113408A RU2653765C1 (ru) | 2017-04-18 | 2017-04-18 | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических данных |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2653765C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2697845C1 (ru) * | 2019-05-17 | 2019-08-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Прогнозирование преэклампсии на основе определения внеклеточной ДНК плода в материнской крови при проведении скрининга первого триместра беременности |
| RU2730958C1 (ru) * | 2019-07-16 | 2020-08-26 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) | Способ диагностики тяжелой преэклампсии у беременных |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2568892C1 (ru) * | 2014-08-28 | 2015-11-20 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения |
-
2017
- 2017-04-18 RU RU2017113408A patent/RU2653765C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2568892C1 (ru) * | 2014-08-28 | 2015-11-20 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Овчарова В. С. О распределении аллелей и генотипов локуса-1306с/т ММР-2 у женщин с преэклампсией //Медицина и образование в Сибири. - 2013, - n. 6. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2697845C1 (ru) * | 2019-05-17 | 2019-08-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Прогнозирование преэклампсии на основе определения внеклеточной ДНК плода в материнской крови при проведении скрининга первого триместра беременности |
| RU2730958C1 (ru) * | 2019-07-16 | 2020-08-26 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) | Способ диагностики тяжелой преэклампсии у беременных |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Haram et al. | Genetic aspects of preeclampsia and the HELLP syndrome | |
| EP3037554B1 (en) | Methods for selecting competent oocytes and competent embryos with high potential for pregnancy outcome | |
| US20080233583A1 (en) | Biomarkers for preeclampsia | |
| Rull et al. | Increased placental expression and maternal serum levels of apoptosis-inducing TRAIL in recurrent miscarriage | |
| US20080207723A1 (en) | Methods for Detecting and Monitoring COX-2 RNA in Plasma and Serum | |
| US20090226420A1 (en) | Methods of Determining the Risk of Developing Coronary Artery Disease | |
| Harati-Sadegh et al. | The association of the placental Hypoxia-inducible factor1-α polymorphisms and HIF1-α mRNA expression with preeclampsia | |
| RU2568893C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью | |
| RU2653765C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения с учетом генетических данных | |
| RU2568892C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения | |
| RU2578425C2 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии | |
| Dvorakova et al. | Expression profile of heat shock proteins in placental tissues of patients with preterm prelabor rupture of membranes and spontaneous preterm labor with intact membranes | |
| Dambaeva et al. | Decidualization score identifies an endometrial dysregulation in samples from women with recurrent pregnancy losses and unexplained infertility | |
| EP2630500B1 (en) | Methods for selecting competent oocytes and competent embryos with high potential for pregnancy outcome | |
| RU2624480C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии на основе комбинаций генов матриксных металлопротеиназ | |
| US11149315B2 (en) | Method for predicting cervical shortening and preterm birth | |
| RU2646455C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин в зависимости от наследственной отягощенности | |
| RU2646448C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе комбинаций генов матриксных металлопротеиназ | |
| RU2480763C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития доброкачественной дисплазии молочной железы у женщин с генитальным эндометриозом | |
| RU2568891C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе комбинаций генов цитокинов | |
| Ishmail et al. | The role of genetics in maternal susceptibility to preeclampsia in women of African ancestry | |
| RU2754956C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с синдромом задержки роста плода | |
| RU2616246C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки | |
| RU2498313C1 (ru) | Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом | |
| RU2661604C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии |