RU2647768C1 - Штамм "Калмыкия-16" вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов - Google Patents
Штамм "Калмыкия-16" вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2647768C1 RU2647768C1 RU2016146044A RU2016146044A RU2647768C1 RU 2647768 C1 RU2647768 C1 RU 2647768C1 RU 2016146044 A RU2016146044 A RU 2016146044A RU 2016146044 A RU2016146044 A RU 2016146044A RU 2647768 C1 RU2647768 C1 RU 2647768C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- kalmykia
- sheep
- virological
- vaccines
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм “Калмыкия-16” вируса оспы овец семейства Poxviridae рода Capripoxvirus, выделенный от больной овцы во время эпизоотии болезни в Республике Калмыкия и депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Государственного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под номером 3160. Предложенный штамм может быть применен в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовлении вакцин и диагностических препаратов. 1 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса оспы овец (BOO), и может быть использовано в научно-исследовательских институтах и диагностических центрах в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов.
Оспа овец (ОО) - острые контагиозное вирусное заболевание, характеризующиеся лихорадкой папулезно-пустулезными поражениями эпителиальных клеток кожи и слизистых оболочек. Согласно принятой классификации вирус оспы овец относится к семейству Poxviridae род Capripoxvirus.
Вирус является этиологическим агентом высококонтагиозного заболевания, характеризующегося лихорадкой и пузырьково-пустулезной сыпью. Оспа овец регистрируется на всех континентах, за исключением Австралии и Океании (2). В Российской Федерации оспу овец регистрируют эпизодически, в частности 2015 году нотифицировано 9 вспышек (Республике Дагестан, Приморский край, Республика Калмыкия) (8).
Основными путями заражения животных является контактный и воздушно-капельный путь (1). Источник и резервуар инфекции - больные овцы. Передача вируса осуществляется в основном алиментарным путем и через механических переносчиков.
Оспа овец регистрируется во все сезоны года и имеет выраженную тенденцию к увеличению территориального охвата. Заболеваемость при оспе овец колеблется от 20 до 90%, а летальность в зависимости от породы, возраста животных и формы течения болезни может достигать 5-100%. Возбудитель оспы овец состоит в близком генетическом, антигенном и серологическом родстве с возбудителями оспы коз и нодулярного дерматита крупного рогатого скота, но по патогенности они обладают видовой специфичностью (3-7).
Целью данного изобретения является получение нового штамма вируса оспы овец, обладающего стабильными антигенными свойствами для использования в качестве референтного штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований и изготовления диагностических и вакцинных препаратов.
Поставленная цель достигнута путем выделения вируса оспы овец от больной овцы, принадлежащей КФК «Эрдня» Лаганского района Республики Калмыкия во время эпизоотии болезни. Выделенный вирус является новым штаммом возбудителя, выделенным на территории РФ. Полученный вирулентный штамм обозначен как штамм «Калмыкия 16» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН под №3160.
Новый штамм «Калмыкия-16» характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические свойства. При электронно-микроскопических исследованиях в вируссодержащем материале обнаружены вирусные частицы, размером 300×250×200 нм, морфологически тождественные представителям рода Capripoxvirus семейства Poxviridae.
Культуральные свойства. Штамм «Калмыкия -16» размножается в первичных культурах почки и тестикул ягнят, а также в перевиваемой культуре клеток ПО. Репродукция вируса сопровождается цитопатическим действием, приводящим к образованию характерных «оспенных» поражений на 3-4 сутки культивирования. В культурах гетерологичного происхождения (ПС, МДВК, VERO) без предварительной адаптации вирус не размножается.
Инфекционная активность. Обладает высокой инфекционной активностью, при внутрикожном титровании на овцах титр вируса составляет 105,1ИД/см3, в культуре клеток ПО после адаптации накапливается 104,5-5,0 ТЦД50/см3.
Антигенные свойства. Вызывает образование вируснейтрализующих антител.
Гемаглютинирующие и гемадсорбирующие свойства. Не обладает.
Патогенность для человека. Не патогенен.
Патогенные свойства. Штамм патогенен для овец всех пород и возрастных групп.
Контагиозность. Штамм контагиозен для овец. Интактные овцы заболевают оспой овец при совместном содержании с инфицированными животными.
Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами. Штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.
Способ и срок хранения, периодичность пассажей. Штамм хранят при минус 40°C и «освежают» на овцах. Периодичность освежения штамма один раз в 10 лет.
Молекулярно-генетическая характеристика.
Нуклеотидная последовательность гена GPCR (ген белка, относящегося к суперсемейству семиспиральных хемокиновых рецепторов) на 100% идентична последовательностям штаммов «Srinagar/2000 Р-5», «NISKHI», «Odisha/16», «Srinagar/2000 Р-40» вируса оспы овец.
Сущность изобретения поясняется следующими примерами.
Пример 1. Изучение биологических свойств штамма BOO «Калмыкия -16» (проверка патогенности для овец).
При внутрикожном заражении в дозе 500 ИД50/0,5 см3 инкубационный период составлял 3-5 дней. У 100% зараженных овец наблюдали угнетение, отсутствие аппетита, потерю веса и характерные оспенные поражения. У 30% зараженных животных наблюдали генерализованную форму течения болезни. Летальность составила 14%. При доброкачественном течении болезни и отсутствии осложнений наблюдали выздоровление, которое наступало на 21-28 сутки.
Пример 2. Штамм «Калмыкия - 2016» используют для получения гипериммунной сыворотки крови для диагностических исследований.
Гипериммунную сыворотку используют в качестве реагента для вирусологических реакций при обнаружении как вирусного антигена в пробах патологического материала от больных оспой овец и павших животных, а также в качестве положительного контроля в серологических реакциях.
Иммунизировали две группы овец: овцам первой группы подкожно вводили вирусвакцину против оспы овец сухую культуральную (штамм НИСХИ, клон Б-5/96) в прививной дозе. Через 14 суток овцам внутрикожно (в несколько точек) вводили по 500 ИД50/0,5 см3 эпизоотический штамм BOO штамма «Калмыкия -16».
Во 2 группу вошли овцы реконвалесценты. На 40 сутки с момента клинических проявлений болезни овцам вводили внутрикожно BOO штамма «Калмыкия -16» в дозе 500 ИД50/0,5 см3.
Динамику накопления антител в крови иммунизированных животных определяли РДП и РН (таблица №1).
Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что на 14 сутки после вакцинации у животных 1 группы титр ВНА составил 1:2. После внутрикожного введения эпизоотического вируса штамм Калмыкия-16 у вакцинированных овец, через 14 суток, активность сывороток в РДП была в разведении 1:2, а титр ВНА увеличился до 1:8.
При иммунизации животных группы №2 (реконвалесценитов) также отмечено значительное увеличение специфической активности сыворотки крови. Титр антител в РДП у переболевших животных достигал значений 1:2, в РН 1:8. После дополнительного внутрикожного введения эпизоотического вируса титры антител в РДП у этих животных оставались примерно на том же уровне, а в РН они возросли и составляли 1:32.
Результаты проведенных исследований показали, что сыворотку крови с высокой активностью можно получать при иммунизации эпизоотическим штаммом ОО «Калмыкия 16» вакцинированных и переболевших овец.
Пример 3. Секвенирование и филогенетический анализ гена GPCR вируса штамма «Калмыкия-16» вируса оспы овец.
Методом нуклеосорбции провели выделение ДНК из культурального материала, содержащего вирус оспы овец, штамм «Калмыкия-16». С использованием 2 пар праймеров GPCR1-GPCR2 и GPCR3-GPCR4 амплифицировали 2 фрагмента гена GPCR (ген белка, относящегося к суперсемейству семиспиральных хемокиновых рецепторов) вируса штамма «Калмыкия-16». Данные фрагменты секвенировали методом Сэнгера с использованием генетического анализатора «АВВ1 PRISM 3130» (Applied Biosystems, США) (Таблица 2). В результате получена нуклеотидная последовательность фрагмента гена GPCR размером 1000 п.о.: 5' -
С помощью программ «Bio Edit 6.0» и «Mega 5.0» провели выравнивание и филогенетический анализ полученной нуклеотидной последовательности с последовательностями гена GPCR штаммов вируса оспы овец, представленных в базе данных GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov).
Филогенетическое дерево строили по методу Максимальной экономии, достоверность распределения последовательностей по группам оценивали бутстрэп-анализом со 100-кратной повторностью (Рисунок 1).
На дереве видно, что изолят из Калмыкии находится в кластере штаммов вируса оспы овец, выделенных в Индии и Казахстане. Наибольшая степень нуклеотидной идентичности (100%) наблюдается со штаммами «Srinagar/2000 Р-5», «NISKHI», «Odisha/16», «Srinagar/2000 Р-40».
Источники информации
1. Hailat N., An outbreak of sheep pox associated with unusual winter conditions in Jordan./ N.Hailat, O.Al-Rawashdeh, S.Lafi and Z.Al-Rawashdeh // Trop.Anim.Health Prod. 1994. V. 26. P. - 79-80.
2. Garner M.G., The extent and impact of sheep pox and goat pox in the state of Maharashtra, India./ M.G. Garner, S.D. Sawarkar, E.K. Brett, J.R. Edwards, V.B. Kulkarni, V.B. Boyle and S.N.Singh // Trop.Anim.Health Prod.2000. V. 32. P. 205-223.
3. Cam V.M. Control of capripoxvirus infections / V.M. Carn, // Vaccine. - 1993. - V. - 11. - P. 1275-1279.
4. Subba Rao M.V., Antigenic relationships among sheep pox, goat pox and contagious pustular dermatitis viruses.. / M.V. Subba Rao and B.S. Malik, // Acta virol. 1984., 28. P. - 380-387.
5. Kitching R.P., Clinical and antigenic relationship between isolates of sheep and goat pox viruses / R.P. Kitching and W.P.Taylor. // Trop.Anim.Health Prod. 1985. 17. - P. - 64-74.
6. Gershon P.D., Physical characterization of genome of cattle of capripoxvirus / P.D. Gershon and D.N. Black, // Virology. - 1987. - V. - 160. - P. - 473-476.
7. Gershon P.D., A comparison of the genomes of capripoxvirus isolates of sheep, goats, and cattle/ P.D. Gershon and D.N. Black, // Virology. - 1988. - V. - 164. - P. - 341-349.
8. http://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Diseaseinformation/WI
Claims (1)
- Штамм «Калмыкия-16» вируса оспы овец семейства Poxviridae род Capripoxvirus, депонированный в Государственной Коллекции микроорганизмов Государственного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3160, для проведения вирусологических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016146044A RU2647768C1 (ru) | 2016-11-23 | 2016-11-23 | Штамм "Калмыкия-16" вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016146044A RU2647768C1 (ru) | 2016-11-23 | 2016-11-23 | Штамм "Калмыкия-16" вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2647768C1 true RU2647768C1 (ru) | 2018-03-19 |
Family
ID=61629441
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016146044A RU2647768C1 (ru) | 2016-11-23 | 2016-11-23 | Штамм "Калмыкия-16" вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2647768C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2786213C1 (ru) * | 2022-08-23 | 2022-12-19 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Способ дифференциации генома вакцинного штамма НИСХИ от полевых изолятов вируса оспы овец методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с анализом пиков высокого разрешения |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2560569C2 (ru) * | 2013-12-30 | 2015-08-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Штамм "алексеевский" вируса оспы свиней для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов |
-
2016
- 2016-11-23 RU RU2016146044A patent/RU2647768C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2560569C2 (ru) * | 2013-12-30 | 2015-08-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Штамм "алексеевский" вируса оспы свиней для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BOUMART Z. ET AL. Comparative innocuity and efficacy of live and inactivated sheeppox vaccines. BMC Veterinary research, 29.06.2016, V.12, P.133-138. * |
| ZRO KH. ET AL. A sheeppox outbreak in Morocco: isolation and identification of virus responsible for the new clinical form of disease. BMC Veterinary research, 2014, V.10, P.31-38. * |
| ZRO KH. ET AL. A sheeppox outbreak in Morocco: isolation and identification of virus responsible for the new clinical form of disease. BMC Veterinary research, 2014, V.10, P.31-38. BOUMART Z. ET AL. Comparative innocuity and efficacy of live and inactivated sheeppox vaccines. BMC Veterinary research, 29.06.2016, V.12, P.133-138. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2786213C1 (ru) * | 2022-08-23 | 2022-12-19 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Способ дифференциации генома вакцинного штамма НИСХИ от полевых изолятов вируса оспы овец методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с анализом пиков высокого разрешения |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Diallo et al. | Genus capripoxvirus | |
| CN104784686B (zh) | Tgev、pedv二联活疫苗及其制备方法 | |
| Li et al. | Molecular characterization of chicken infectious anemia virus from contaminated live-virus vaccines | |
| CN105802921B (zh) | 表达猪瘟病毒e2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株及其构建方法和应用 | |
| Wang et al. | Evaluation of immune effects of fowlpox vaccine strains and field isolates | |
| Mahamud et al. | Efficacy of genotype-matched Newcastle disease virus vaccine formulated in carboxymethyl sago starch acid hydrogel in chickens vaccinated via different routes | |
| CN106190988B (zh) | 猫嵌杯病毒ch-jl5株灭活疫苗 | |
| Sultana et al. | Isolation and molecular detection of Fowl pox and Pigeon pox viruses for the development of live attenuated vaccine seeds from the local isolates: Isolation and molecular detection of Fowl pox and Pigeon pox viruses | |
| Ashraf et al. | Interference between mild and pathogenic strains of infectious bursal disease virus in chickens | |
| CN106310250A (zh) | 一种猪瘟口服弱毒冻干疫苗、其制备方法及冻干保护剂 | |
| KR101510807B1 (ko) | 낭충봉아부패병 바이러스의 배양방법 및 검출방법 | |
| RU2439152C1 (ru) | Штамм "ставрополь 01/08" вируса африканской чумы свиней для вирусологических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований | |
| Yu et al. | Characterization of an orf virus isolate from an outbreak in Heilongjiang province, China | |
| CN104130981A (zh) | 鸡传染性支气管炎病毒疫苗株及其在制备灭活疫苗中的应用 | |
| RU2647768C1 (ru) | Штамм "Калмыкия-16" вируса оспы овец для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов | |
| Dandapat et al. | Development and evaluation of a chicken embryo fibroblast cell culture based live attenuated Indian strain duck plague vaccine | |
| EA et al. | Antigenic and genomic characterization of local fowlpox virus isolate in 2017 | |
| Liu et al. | Complete genome sequence analysis of Reticuloendotheliosis virus integrated in nonhomologous Avipoxvirus | |
| CN108707589A (zh) | 一种牛病毒性腹泻病毒SMU-Z6/1a/SC/2016分离株及其应用 | |
| CN110713987B (zh) | 一种重组基因vii型新城疫病毒毒株及其疫苗组合物、制备方法及应用 | |
| RU2760399C1 (ru) | Аттенуированный штамм "ASFV/CV60/2020" вируса африканской чумы свиней семейства Asfarviridae, рода Asfivirus для изучения иммунологических реакций, молекулярно-генетического анализа, генетической модификации и создания прототипа вакцины против АЧС | |
| Xu et al. | First report of variant pseudorabies virus infection in goats in China: a neglected infectious disease to ruminants | |
| RU2607791C1 (ru) | Аттенуированный штамм "СКА-2015 ВНИИВВиМ" вируса африканской чумы свиней VIII серотипа для вирусологических и молекулярно-генетических исследований | |
| CN103952378A (zh) | 自然无血凝性水貂肠炎病毒株mev-nh及其制备方法和应用 | |
| CN103898070A (zh) | 一种h3n8亚型马流感重组病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181124 |