RU2647566C1 - Strain a/goose/kalmykia/813/16 h5n8 virus avicum bird influenza virus avicum influenza type a and substitute h5 for control of antigen and immunizing activity of vaccine against avian influenza and for the manufacture of biopreparations for diagnostics and specific prevention of influenza birds of type a of substitute h5 - Google Patents
Strain a/goose/kalmykia/813/16 h5n8 virus avicum bird influenza virus avicum influenza type a and substitute h5 for control of antigen and immunizing activity of vaccine against avian influenza and for the manufacture of biopreparations for diagnostics and specific prevention of influenza birds of type a of substitute h5 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2647566C1 RU2647566C1 RU2017119735A RU2017119735A RU2647566C1 RU 2647566 C1 RU2647566 C1 RU 2647566C1 RU 2017119735 A RU2017119735 A RU 2017119735A RU 2017119735 A RU2017119735 A RU 2017119735A RU 2647566 C1 RU2647566 C1 RU 2647566C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- influenza
- strain
- kalmykia
- goose
- Prior art date
Links
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 title claims abstract description 41
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title claims abstract description 40
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 title claims abstract description 20
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 79
- 241000271566 Aves Species 0.000 title claims description 12
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title abstract description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 34
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 title description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 title description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 8
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 claims abstract description 5
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 claims abstract description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 8
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 5
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 28
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 28
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 26
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 26
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 26
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 26
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 20
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 19
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 18
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 13
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 13
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 12
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 6
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 6
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 6
- 101710118188 DNA-binding protein HU-alpha Proteins 0.000 description 5
- 101710158312 DNA-binding protein HU-beta Proteins 0.000 description 5
- 101710128560 Initiator protein NS1 Proteins 0.000 description 5
- 101710144127 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 101710144128 Non-structural protein 2 Proteins 0.000 description 5
- 101710199667 Nuclear export protein Proteins 0.000 description 5
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 101150118163 h gene Proteins 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 4
- 108091034135 Vault RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 3
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 241000272809 Anser anser Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 241000617520 H5N8 subtype Species 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 101001039853 Sonchus yellow net virus Matrix protein Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 150000001541 aziridines Chemical class 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- -1 hydrogen ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- 125000002124 5'-adenosyl group Chemical group N1=CN=C2N(C=NC2=C1N)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)C* 0.000 description 1
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical group C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 1
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 235000006576 Althaea officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000027312 Bursal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000288673 Chiroptera Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010011703 Cyanosis Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 102100030011 Endoribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010093099 Endoribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 241001500343 Influenzavirus C Species 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101150031278 MP gene Proteins 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101150118742 NP gene Proteins 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 101710132653 Protein M2 Proteins 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- OZBDFBJXRJWNAV-UHFFFAOYSA-N Rimantadine hydrochloride Chemical compound Cl.C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 OZBDFBJXRJWNAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010040007 Sense of oppression Diseases 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000011037 discontinuous sequential dilution Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001601 guanosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000004492 nuclear pore Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 235000013613 poultry product Nutrition 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000008593 response to virus Effects 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005029 transcription elongation Effects 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 230000006490 viral transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности к новому штамму Influenzae virus avicum, и может быть использовано для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц типа А подтипа Н5, а также при разработке и изготовлении средств диагностики и специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н5.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology, in particular to a new strain of Influenzae virus avicum, and can be used to control the antigenic and immunogenic activity of vaccines against avian influenza type A subtype H5, as well as in the development and manufacture of diagnostic tools and specific prophylaxis of avian influenza subtype H5.
Грипп птиц - болезнь домашних и диких птиц разных видов, способная протекать в форме эпизоотий и вызывать смертность инфицированной птицы, приближающуюся к 100%, нанося большой экономический ущерб.Bird flu is a disease of poultry and wild birds of various species, which can occur in the form of epizootics and cause mortality of infected birds approaching 100%, causing great economic damage.
Таксономически вирусы гриппа отнесены к семейству ортомиксовирусов (Orthomyxoviridae, по классификации ICTV - 00.046).Taxonomically influenza viruses are assigned to the family of orthomyxoviruses (Orthomyxoviridae, ICTV classification - 00.046).
В рамках семейства Orthomyxoviridae (по классификации ICTV - 00.046) вирусы типов А и В образуют род Genus Influenzavirus А (по классификации ICTV - 00.046.0.01, по классификации NCBI соответственно ID: 197911 и ID: 197912).Within the Orthomyxoviridae family (according to the ICTV classification - 00.046), type A and B viruses form the genus Genus Influenzavirus A (according to the ICTV classification - 00.046.0.01, according to the NCBI classification, respectively ID: 197911 and ID: 197912).
Вирусы типа С образуют род Genus Influenzavirus С (по классификации ICTV - 00.046.02.001, по классификации NCBI ID: 197913).Type C viruses form the genus Genus Influenzavirus C (according to ICTV classification - 00.046.02.001, according to classification NCBI ID: 197913).
Принадлежность штамма вируса гриппа к одному из этих родов определяется консервативными элементами генома, задающими антигенные характеристики нуклеокапсидов.The affiliation of a strain of influenza virus to one of these genera is determined by conservative elements of the genome that specify the antigenic characteristics of nucleocapsids.
Вирионы вируса гриппа имеют наружную липопротеиновую оболочку, чаще сферической формы. Диаметр сферических форм около 100 нм. Встречаются нитевидные формы вирионов до 200-350 нм. Вирусные частицы содержат РНК - 1%, белки - 70%, жиры - 20%, углеводы - до 8%.Influenza virus virions have an external lipoprotein membrane, usually spherical. The diameter of the spherical shapes is about 100 nm. There are filiform forms of virions up to 200-350 nm. Viral particles contain RNA - 1%, proteins - 70%, fats - 20%, carbohydrates - up to 8%.
Три вирусных белка пронизывают липидный слой и образуют внешнюю поверхность вириона. Два из них - вирусные гликопротеины гемагглютинин (НА) и нейраминидаза (NA). Из 550-600 структурных элементов поверхности («шипов») на долю NA приходится 50-100. Функция НА состоит в прикреплении вируса к поверхности клетки и он же производит слияние вирусной оболочки с клеточной мембраной, что и позволяет вирусному генетическому материалу проникнуть в клетку и инфицировать ее. NA - это фермент, который отщепляет сиаловую (нейраминовую) кислоту, концевой сахарный остаток олигосахаридов, присутствующих в гликопротеинах и гликолипидах клеток млекопитающих и птиц. Сиаловая кислота является рецептором для НА вирусов гриппа А и В и ее устранение необходимо для предотвращения склеивания вирусных частиц друг с другом и для успешного распространения вируса от клетки к клетке. Именно против НА и NA направлен антивирусный иммунитет.Three viral proteins penetrate the lipid layer and form the outer surface of the virion. Two of them are the viral glycoproteins hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA). Of the 550-600 structural elements of the surface ("spikes"), NA accounts for 50-100. The function of HA is to attach the virus to the cell surface and it fuses the viral membrane with the cell membrane, which allows the viral genetic material to penetrate the cell and infect it. NA is an enzyme that cleaves sialic (neuraminic) acid, the terminal sugar residue of oligosaccharides present in glycoproteins and glycolipids of mammalian and avian cells. Sialic acid is a receptor for HA viruses of influenza A and B and its elimination is necessary to prevent the adhesion of viral particles to each other and for the successful spread of the virus from cell to cell. It is against NA and NA that anti-viral immunity is directed.
Помимо НА и NA на мембране вириона экспонированы тетрамеры белка М2, эктодомены которых, будучи намного мельче эктодоменов НА, тем не менее служат поверхностными антигенами, антитела к которым усиливают иммунитет к гриппу. Молекулы М2 функционируют в качестве протонных каналов, необходимых для запуска функции слияния вирусной и эндосомной мембран. Эти каналы служат мишенями таких противовирусных химиопрепаратов, как ремантадин и амантадин.In addition to HA and NA, tetramers of the M2 protein are exposed on the virion membrane, the ectodomains of which, being much smaller than the HA ectodomains, nevertheless serve as surface antigens, antibodies to which enhance immunity to influenza. M2 molecules function as proton channels necessary to trigger the fusion function of the viral and endosomal membranes. These channels target antiviral chemotherapy drugs, such as remantadine and amantadine.
Внутренний листок оболочки вируса образован белком Ml, наиболее обильно представленным в вирусной частице (до 3 тыс. молекул на вирион). Внутренняя структура вирусной частицы - нуклеокапсид у вирусов гриппа представлена рибонуклеопротидными тяжами, содержащими вирусную РНК и 4 вирусных белка. Главный из них - белок NP предоставлен в количестве около 1 тыс. молекул на вирион. Остальные три белка - РВ1, РВ-2 и Ра - являются компонентами вирусной РНК - зависимой РНК-полимеразы.The inner sheet of the virus envelope is formed by the Ml protein, most abundantly present in the virus particle (up to 3 thousand molecules per virion). The internal structure of the viral particle, the nucleocapsid in influenza viruses, is represented by ribonucleotide strands containing viral RNA and 4 viral proteins. The main one is the NP protein, which is provided in the amount of about 1 thousand molecules per virion. The remaining three proteins - PB1, PB-2 and Ra - are components of viral RNA - dependent RNA polymerase.
Геном вируса гриппа представлен однонитевой РНК в виде 8 нитей (сегментов) в комплексе с белком нуклеопротеина (NP). Поскольку генетический материал вируса гриппа сегментирован, т.е. представлен отдельными блоками, которые реплицируются в клетке независимо один от другого, вирусы гриппа, принадлежащие к одному роду, легко могут скрещиваться, образуя вирусы - реассортанты. Геном вируса гриппа представлен однонитевой РНК негативной полярности («минус» -РНК), комплементарной по отношению к мРНК для вирусных белков.The genome of the influenza virus is represented by single-stranded RNA in the form of 8 strands (segments) in complex with a protein of nucleoprotein (NP). Since the genetic material of the influenza virus is segmented, i.e. represented by separate blocks that replicate in the cell independently of one another, influenza viruses belonging to the same genus can easily interbreed to form reassortant viruses. The genome of the influenza virus is represented by single-stranded RNA of negative polarity ("minus" RNA), complementary to the mRNA for viral proteins.
Общий размер генома составляет около 13600 нуклеотидов (н.о.).The total genome size is about 13,600 nucleotides (n.o.).
Фрагмент №1 (около 2341 н.о.) кодирует РВ2 (polymerase basic unite 2) - вторую субъединицу гетеротримерного РНК-полимеразного вирусного комплекса (основный белок 2), изоэлектрическая точка (pI) которого находится в щелочной области.Fragment No. 1 (about 2341 n.a.) encodes PB2 (polymerase basic unite 2), the second subunit of the heterotrimeric RNA polymerase virus complex (basic protein 2), whose isoelectric point (pI) is in the alkaline region.
Фрагмент №2 (2341 н.о.) кодирует другой компонент того же комплекса - основной белок РВ1 (polymerase basic unite 1).Fragment No. 2 (2341 n.a.) encodes another component of the same complex - the main protein PB1 (polymerase basic unite 1).
Фрагмент №3 (около 2250 н.о.) кодирует кислый белок РНК-полимеразного комплекса PA (polymerase acidic unite).Fragment No. 3 (about 2250 n.a.) encodes an acidic protein of the PA RNA polymerase complex (polymerase acidic unite).
Комплекс РВ1-РВ2-РА осуществляет как транскрипцию, так и репликацию генов вируса. При этом РВ1 работает как «классическая» полимераза, обеспечивающая полимеризацию в сочетании с эндонуклеазным вырезанием; РВ2 специфически связывается с кэпом - 7-метил-гуанозиновым остатком на 5' - на конце плюс-РНК, пришитым к ней посредством 5' -5' - трифосфатного сегмента; РА задействована в репликации, элонгации и эндонуклеазной активности.The PB1-PB2-RA complex carries out both transcription and replication of virus genes. At the same time, PB1 works as a “classical” polymerase, which provides polymerization in combination with endonuclease excision; PB2 specifically binds to the cap - the 7-methyl-guanosine residue at 5 '- at the end of the plus-RNA, sewn to it via the 5' -5 '- triphosphate segment; RA is involved in replication, elongation, and endonuclease activity.
В 5' и 3'-концевых участках всех генов находятся повторяющиеся 13- и 12-нуклеотидные сегменты промоторов - специфических сайтов связыванияIn the 5 'and 3'-terminal regions of all genes, there are repeating 13- and 12-nucleotide segments of promoters - specific binding sites
РВ 1. Повторы 5'- концевого участка (у вирусов типа А они имеют вид 5'- GUAGAAACAAGG) комплементарны инвертированным повторам,
расположенным на 3' - конце. Кроме того, 3' - концевые области некоторых фрагментов генома содержат консервативные отрезки, типичные для вирусных штаммов, поражающих субъектов определенного биологического вида.located at the 3 'end. In addition, the 3 '- terminal regions of some fragments of the genome contain conservative segments typical of viral strains that infect subjects of a particular biological species.
Фрагмент №4 кодирует гемагглютинин (НА). Размеры 4 сегмента у вирусов гриппа сильно варьируют (1742-1778 н.о.). Молекула НА синтезируется как единая полипептидная цепь, которая в дальнейшем подвергается процессингу (глюкозилирование, сульфатирование, ацилирование), отщепление сигнального пептида и протеолитическое расщепление на 2 субъединицы (большую и малую). Субъединицы в зрелой молекуле НА связаны дисульфидной связью, при этом расщепление необходимо для слияния вирусной оболочки с клеточной мембраной, участок расщепления представлен либо одним остатком аргинина, либо цепочкой основных аминокислотных остатков (аргинина и лизина).Fragment No. 4 encodes hemagglutinin (HA). The sizes of the 4 segments in influenza viruses vary greatly (1742-1778 n.a.). The HA molecule is synthesized as a single polypeptide chain, which is subsequently processed (glucosylation, sulfation, acylation), cleavage of the signal peptide and proteolytic cleavage into 2 subunits (large and small). The subunits in the mature HA molecule are linked by a disulfide bond, and cleavage is necessary for fusion of the viral membrane with the cell membrane; the cleavage site is represented by either one arginine residue or a chain of basic amino acid residues (arginine and lysine).
Фрагмент №5 (ген NP, около 1575 н.о.) кодирует нуклеопротеин (NP). NP не имеет кластеров основных аминокислот, но многие его регионы способны связываться с РНК. В составе нуклеокапсида вируса гриппа А каждая молекула белка NP связана с 24 нуклеотидами.Fragment No. 5 (NP gene, about 1575 n.a.) encodes a nucleoprotein (NP). NP does not have clusters of basic amino acids, but many of its regions are able to bind to RNA. In the composition of the nucleocapsid of influenza A virus, each NP protein molecule is associated with 24 nucleotides.
Фрагмент №6 (около 1420 н.о.) кодирует нейраминидазу (NA). Белок гликозилирован, но не подвергается протеолитическому расщеплению. В зрелом виде белок NA представлен грибообразным тетрамером, содержащим две пары молекул. В каждой паре молекулы соединены дисульфидным мостиком. В дистальной части тетрамера расположен активный центр нейраминидазы. Белок NA является гликопротеидом 2 типа. У него нет отщепляемого сигнального пептида, а Т-концевой участок играет роль якорного трансмембранного участка.Fragment No. 6 (about 1420 n.a.) encodes neuraminidase (NA). The protein is glycosylated, but does not undergo proteolytic cleavage. In mature form, the NA protein is represented by a mushroom-shaped tetramer containing two pairs of molecules. In each pair, the molecules are connected by a disulfide bridge. In the distal part of the tetramer is located the active center of neuraminidase. Protein NA is a
Фрагмент №7 (ген MP, около 1027 н.о.) кодирует нуклеокапсидный матриксный белок M1 и мембранный матриксный белок М2. Белок M1 кодируется полноразмерной колинеарной МРНК, комплементарной всей кодирующей части 7-го сегмента. Матричная РНК для белка М2 получается в результате сплайсинга. Белок M1 имеет несколько гидрофобных участков, в вирионе он образует внутренний листок оболочки. Белок М2 образует тетрамер, в котором центральная трансмембранная часть формирует канал, служащий для транспорта ионов водорода внутрь вирусной частицы, что является необходимым условием для отделения нуклеокапсида от белка M1 при проникновении вирусного генома в клетку.Fragment No. 7 (MP gene, about 1027 n.a.) encodes the nucleocapsid matrix protein M1 and membrane matrix protein M2. Protein M1 is encoded by full-length colinear mRNA, complementary to the entire coding part of the 7th segment. Matrix RNA for the M2 protein is obtained by splicing. Protein M1 has several hydrophobic sites; in the virion, it forms the inner sheet of the membrane. Protein M2 forms a tetramer, in which the central transmembrane part forms a channel that serves to transport hydrogen ions into the viral particle, which is a necessary condition for the separation of the nucleocapsid from the M1 protein when the viral genome enters the cell.
Фрагмент №8 (ген NS, 890 н.о.), кодирует белки NS1 и NS2. Белок NS1 образуется в результате трансляции полноразмерной МРНК, не подвергнутой сплайсингу. Белок NS1 необходим вирусу для противодействия антивироснуму эффекту интерферона и других интерлейкинов. Те молекулы МРНК, которые подвергаются сплайсингу, транслируются с образованием белка NS2, функция которого состоит в экспорте новосинтезированных нуклеокапсидов из клеточного ядра в цитоплазму. Некоторое время белок NS2 считали неструктурным белком, но позднее его обнаружили в составе вирионов. Неструктурный белок NS1 регулирует сплайсинг и трансляцию РНК, а также модулирует синтез интерферона клеткой в ответ на заражение вирусом (1).Fragment No. 8 (gene NS, 890 n.a.), encodes proteins NS1 and NS2. Protein NS1 is formed as a result of translation of full-sized mRNA not subjected to splicing. The NS1 protein is necessary for the virus to counteract the anti-viral effect of interferon and other interleukins. Those mRNA molecules that are spliced are translated to form the NS2 protein, the function of which is to export newly synthesized nucleocapsids from the cell nucleus to the cytoplasm. For some time, the NS2 protein was considered a non-structural protein, but later it was found in virions. The non-structural NS1 protein regulates RNA splicing and translation, and also modulates interferon synthesis by the cell in response to virus infection (1).
Инфекционный цикл начинается с контакта вирусной частицы с клеточной поверхностью. При этом рецепторсвязывающий карман НА связывает концевой остаток сиаловой кислоты в клеточном олигосахариде. В контакте участвуют одновременно несколько тримеров НА. Вирусная частица, находящаяся на стенке эндосомы, подвергается воздействию кислой реакции среды, что приводит к структурной перестройке НА. Участки длинной альфа-спирали в составе малой субъединицы НА перестраиваются таким образом, что гидрофобный N-концевой пептид («пептид слияния») оказывается в непосредственном контакте с липидным слоем клеточной мембраны. Происходит слияние липидных слоев и нуклеокапсид выходит в цитоплазму. За время пребывания в эндосоме внутренняя среда вириона делается все более и более кислой благодаря перекачке ионов водорода из эндосомы в вирион, осуществляемой через канал тетрамера М2. Закисление среды вызывает диссоциацию связи нуклеокапсида с белком M1 и позволяет нуклеокапсиду не только перейти в цитоплазму, но и транспортироваться в ядро клетки. Каждый сегмент вирусной РНК оказывается в клеточном ядре в составе рибонуклеопротеидного тяжа, в котором вирусная РНК ассоциирована с белком NP. Каждый рибонуклопротеидный тяж содержит по меньшей мере один тример РВ1-РВ2-РА, присоединенный к двум концам вирусной РНК. Прежде чем начать транскрипцию вирусной РНК, этот тримерный полимеразный комплекс связывает, а затем отщепляет 5'-концевой участок клеточной пре-мРНК длиной 10-13 н.о., содержащий на 5'-конце «кэп», т.е. метилированный остаток гуанозина, присоединенный пирофосфатной связью. При этом распознавание и связывание «кэпа» осуществляет белок РВ2, а эндорибонуклеазное отщепление на расстоянии 10-13 н.о. от «кэпа» выполняет белок РА. Отщепленные кэпсодержащие отрезки используются в качестве праймеров для вирусной транскрипции.The infectious cycle begins with the contact of the viral particle with the cell surface. In this case, the receptor-binding pocket of HA binds the terminal sialic acid residue in the cell oligosaccharide. Several trimers of HA are involved in the contact simultaneously. A viral particle located on the endosome wall is exposed to an acid reaction of the medium, which leads to structural rearrangement of HA. The sections of the long alpha helix in the small subunit of HA are rearranged in such a way that the hydrophobic N-terminal peptide (“fusion peptide”) is in direct contact with the lipid layer of the cell membrane. The lipid layers merge and the nucleocapsid enters the cytoplasm. During the stay in the endosome, the internal environment of the virion becomes more and more acidic due to the transfer of hydrogen ions from the endosome to the virion through the channel of the M2 tetramer. Acidification of the medium causes dissociation of the nucleocapsid bond with the M1 protein and allows the nucleocapsid not only to pass into the cytoplasm, but also to be transported to the cell nucleus. Each segment of viral RNA appears in the cell nucleus as part of a ribonucleoprotein strand, in which viral RNA is associated with the NP protein. Each ribonucloprotein strand contains at least one PB1-PB2-PA trimer attached to the two ends of the viral RNA. Before starting the transcription of viral RNA, this trimeric polymerase complex binds and then cleaves the 5'-terminal portion of the cell pre-mRNA 10-13 n.o. long, containing a "cap" at the 5'-end, i.e. a methylated guanosine residue attached by a pyrophosphate bond. The recognition and binding of the "cap" is carried out by the PB2 protein, and endoribonuclease cleavage at a distance of 10-13 n.a. from the "cap" performs the RA protein. Cleaved caps containing segments are used as primers for viral transcription.
При этом собственно функцию праймера выполняет только 3'-концевой аденозиловый остаток вирусного РНК-сегмента. Инициация транскрипции осуществляется посредством включения гуанозилового остатка, комплементарного предпоследнему цитозиловому остатку РНК-сегмента, в растущую цепь вирусной мРНК. Таким образом, в составе мРНК оказывается 10-13-нуклеотидный кэпированный праймер клеточного происхождения, за которым следует вирусоспецифическая последовательность, комплементарная вирусному геномному сегменту (начиная с предпоследнего нуклеотида на его 3'-конце). Далее происходит элонгация цепи мРНК. Как инициацию транскрипции, так и элонгацию осуществляет белок РВ1. Продвигаясь по нити геномной РНК от ее 3'-конца к 5'-концу, полимеразный комплекс постоянно сохраняет связь с 5'-концом геномного РНК-сегмента, постепенно уменьшая петлю, образованную еще нетранскрибированным участком. В каждом геномном РНК-сегменте имеется короткий (6-8 н.о.) олигоуридиловый участок на расстоянии 16 н.о. от 5'-конца. Полимераза, дойдя до этого места, не может продвинуться дальше, поскольку последний отрезок вРНК (5'-концевый 16 н.о.) находится в связи с самим полимеразным комплексом и для транскрипции механически недоступен. Поэтому полимераза останавливается и повторно транскрибирует несколько раз олигоуридиловый участок, синтезируя полиадениловую последовательность на 3'- конце мРНК. Таким образом, в составе любой молекулы вирусной мРНК присутствует на 5'-конце 10-13 - нуклеотидный участок клеточного происхождения, но отсутствует на 3'-конце участок, комплементарный 5'-концевому 16-нуклеотидному отрезку вРНК. Вирусоспецифические мРНК транспортируются из ядра в цитоплазму. Некоторые мРНК, транскрибированные с генов М и NS, предварительно подвергаются сплайсингу. В цитоплазме мРНК транслируются с образованием вирусных белков. Белки NP, РВ2, РВ1, PA, NS1, NS2 и частично M1 транспортируются в ядро. После достижения в ядре определенной концетрации белка NP вирусный полимеразный комплекс приобретает способность синтезировать полные комплементарные копии вирусных РНК-сегментов, не содержащие клеточных праймерных последовательностей, но имеющие участок, комплементарный последним 16 нуклеотидам вирусного РНК-сегмента. Такие полные комплементарные транскрипты (кРНК) сразу после синтеза вступают в ассоциацию с белком NP. Они в отличие от мРНК не транспортируются в цитоплазму, а остаются в ядре и используются вирусной РНК-полимеразной в качестве матриц для синтеза новых геномных РНК, т.е. для репликации вирусного генома. Новые геномные РНК, в свою очередь, подвергаются транскрипции с образованием основной массы вирусных мРНК. На поздней стадии инфекции новые нуклеокапсиды, содержащие вРНк, выходят в цитоплазму. В этом процессе принимают участие белки M1 и NS2 в ассоциации с клеточными белками, осуществляющими экспорт клеточных макромолекул в цитоплазму через ядерные поры.Moreover, only the 3'-terminal adenosyl residue of the viral RNA segment performs the primer function. Transcription is initiated by incorporating the guanosyl residue complementary to the penultimate cytosyl residue of the RNA segment into the growing viral mRNA chain. Thus, the mRNA contains a 10–13-nucleotide capped primer of cell origin, followed by a virus-specific sequence complementary to the viral genomic segment (starting from the penultimate nucleotide at its 3 ′ end). Next is the elongation of the mRNA chain. Both transcription initiation and elongation are performed by the PB1 protein. Moving along the strand of genomic RNA from its 3'-end to the 5'-end, the polymerase complex constantly maintains a connection with the 5'-end of the genomic RNA segment, gradually reducing the loop formed by the still non-transcribed region. Each genomic RNA segment has a short (6-8 n.a.) oligouridyl region at a distance of 16 n.a. from the 5'-end. Having reached this place, the polymerase cannot advance further, since the last segment of the vRNA (5'-
Белки НА и NA синтезируются рибосомами, которые связаны с грубым цитоплазматическим ретикулумом. Эти белки сразу после синтеза попадают в просвет внутриклеточных везикул и транспортируются к поверхности клетки, подвергаясь при этом гликозилированию и фолдингу. Белки M1 (те молекулы, которые не попадают в ядро) и М2 синтезируются на свободных рибосомах, но тоже после синтеза связываются с внутриклеточными мембранами и транспортируются к поверхности клетки. На поздней стадии инфекции значительная часть клеточной поверхности занята вирусоспецифическими «пятнами», в которых наружный слой образован трансмембранными вирусными белками, а внутренний - белком M1. Клеточные белки из этих участков полностью вытеснены. Новосинтезированные вирусные рибонуклеопротеиды транспортируются к этим «пятнам» и здесь происходит «почкование» новых вирусных частиц. Подбор вирусных РНК - сегментов в состав вириона является высокоупорядоченным процессом, в ходе которого в каждую вирусную частицу попадает по одной копии геномного сегмента. Взаимное распознавание геномных сегментов в ходе этого процесса осуществляется с участием длинных 3'- и 5'- концевых участков вРНК, захватывающих обширные области кодирующей последовательности РНК-сегментов (1).The HA and NA proteins are synthesized by ribosomes, which are associated with the crude cytoplasmic reticulum. These proteins immediately after synthesis enter the lumen of intracellular vesicles and are transported to the cell surface, undergoing glycosylation and folding. Proteins M1 (those molecules that do not enter the nucleus) and M2 are synthesized on free ribosomes, but also after synthesis, bind to intracellular membranes and are transported to the cell surface. At a late stage of infection, a significant part of the cell surface is occupied by virus-specific “spots” in which the outer layer is formed by transmembrane viral proteins, and the inner layer is formed by the M1 protein. Cellular proteins from these sites are completely crowded out. Newly synthesized viral ribonucleoproteins are transported to these "spots" and here the "budding" of new viral particles occurs. Selection of viral RNA segments in the virion is a highly ordered process, during which one copy of the genomic segment gets into each virus particle. Mutual recognition of genomic segments during this process is carried out with the participation of long 3'- and 5'-terminal regions of vRNA, which capture vast areas of the coding sequence of RNA segments (1).
Общая молекулярная масса вириона составляет 250×106, плотность 1,19 г/см3, коэффициент седиментации сфероподобных частиц 700-800 S20w. Вирионы чувствительны к воздействию растворителей жиров, неионных детергентов, формальдегида, окислителей, бета-пропиолактона, производных азиридина, быстро инактивируется при нагревании, (56°С), ультрафиолетовом облучении и при снижении pH ниже 5,0 (ICTV - International Committee on Taxonomy of Viruses).The total molecular weight of the virion is 250 × 10 6 , the density is 1.19 g / cm 3 , the sedimentation coefficient of sphere-like particles is 700-800 S 20w . Virions are sensitive to solvents of fats, nonionic detergents, formaldehyde, oxidizing agents, beta-propiolactone, aziridine derivatives, are rapidly inactivated by heating (56 ° C), ultraviolet radiation and when the pH drops below 5.0 (ICTV - International Committee on Taxonomy of Viruses).
В настоящее время вирусы гриппа птиц (ВГП) разделяют на 16 подтипов по гемагглютинину (H1-H16) и 9 подтипов по нейраменидазе (N1-N9). Также признано существование новых подтипов вируса гриппа типа А - H17N10 и H18N11, выделенных от рукокрылых в Гватемале (2).Currently, avian influenza viruses (AHV) are divided into 16 subtypes for hemagglutinin (H1-H16) and 9 subtypes for neuramenidase (N1-N9). The existence of new subtypes of type A influenza virus, H17N10 and H18N11, isolated from bats in Guatemala, has also been recognized (2).
Вирусы гриппа обладают огромной экологической пластичностью за счет высоких темпов эволюции, связанных с изменчивостью их генома. Основным резервуаром вирусов гриппа птиц в природе являются дикие птицы и их взаимоотношение существенно не отражается на состоянии популяции хозяев. Но занос вируса в неадаптированные популяции сельскохозяйственных птиц приводит к тяжелым эпизоотиям с колоссальным экономическим ущербом. Прежде всего это относится к вирусу гриппа птиц подтипов Н5, Н7 и Н9.Influenza viruses have enormous environmental plasticity due to the high rate of evolution associated with the variability of their genome. Wild birds are the main reservoir of avian influenza viruses in nature and their relationship does not significantly affect the state of the host population. But the introduction of the virus into unadapted populations of poultry leads to severe epizootics with tremendous economic damage. First of all, this refers to the avian influenza virus subtypes H5, H7 and H9.
Вирус высокопатогенного гриппа H5N8 (генетическая клада 2.3.4.4.) нанес колоссальный экономический ущерб птицеводческой отрасли многих стран в 2016-2017 гг. Вирусы гриппа A (H5N8) быстро распространяются через диких мигрирующих птиц в Азии и Европе и вызывают гибель как домашних, так и диких птиц (3). Вовлечение промышленных птицеводческих предприятий закрытого типа в эпизоотию высокопатогенного гриппа птиц ведет к огромным экономическим потерям, связанным с необходимостью уничтожения всего восприимчивого поголовья и с утилизацией птицеводческой продукции. Возникновение заболевания среди ценной племенной птицы может повлечь резкое сокращение генофонда, потерю кросса. По данным Всемирной организации здравоохранения животных (OIE), наибольшее количество вспышек среди диких и домашних птиц, вызванных вирусом H5N8, зарегистрировано в Венгрии, Германии и Франции. Вспышки гриппа птиц подтипа H5N8 в конце 2016 г. зарегистрированы и на территории Российской Федерации в Р. Калмыкия, Астраханской, Ростовской, Воронежской, Московской областях, Краснодарском крае. В эпизоотию вовлечены крупные птицеводческие предприятия Ростовской, Астраханской и Московской областей (4).The highly pathogenic H5N8 virus (genetic clade 2.3.4.4.) Caused tremendous economic damage to the poultry industry in many countries in 2016-2017. Influenza A (H5N8) viruses spread rapidly through wild migratory birds in Asia and Europe and cause the death of both domestic and wild birds (3). The involvement of closed industrial poultry enterprises in the epizootic of highly pathogenic avian influenza leads to enormous economic losses associated with the need to destroy the entire susceptible livestock and the disposal of poultry products. The occurrence of the disease among a valuable breeding bird can lead to a sharp reduction in the gene pool, loss of cross. According to the World Organization for Animal Health (OIE), the largest number of outbreaks among wild and domestic birds caused by the H5N8 virus have been reported in Hungary, Germany and France. H5N8 subtype outbreaks at the end of 2016 were also recorded in the Russian Federation in R. Kalmykia, Astrakhan, Rostov, Voronezh, Moscow Regions, Krasnodar Territory. Large poultry enterprises of the Rostov, Astrakhan and Moscow regions are involved in the epizootic (4).
Известен ряд отечественных и зарубежных штаммов вируса ГП, используемых для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (6-13).A number of domestic and foreign strains of the GP virus are known that are used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (6-13).
Известен штамм №125-ДЕП «Новосибирский» для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц (5).Known strain No. 125-DEP "Novosibirsk" to control the immunogenic and antigenic activity of vaccines and the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of bird flu (5).
Известен штамм А / duck / Hokkaido / Vac-3/2007 (H5N1) вируса ГП, используемый для изготовления вакцины (6).A known strain A / duck / Hokkaido / Vac-3/2007 (H5N1) of the GP virus used for the manufacture of a vaccine (6).
Известен штамм A/Chicken/Mexico/232/94/CPA (H5N2), используемый для производства вакцинных препаратов (7).A known strain A / Chicken / Mexico / 232/94 / CPA (H5N2) used for the production of vaccines (7).
Известен штамм А/Turkey/Wisconsin/68 (H5N9), используемый для производства вакцинных препаратов (8).A known strain A / Turkey / Wisconsin / 68 (H5N9) used for the production of vaccines (8).
Известен штамм A/chicken/Italy/22A/98 (H5N9), используемый для производства вакцинных и диагностических препаратов (9).A known strain A / chicken / Italy / 22A / 98 (H5N9) used for the production of vaccines and diagnostic products (9).
Известен штамм A/CK/Italy/22A/H5N9/1998, используемый для производства вакцинных препаратов (10).A known strain A / CK / Italy / 22A / H5N9 / 1998, used for the production of vaccine preparations (10).
Известен штамм A /turkey/Ontario/7732/66 (H5N9) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (11).A known strain A / turkey / Ontario / 7732/66 (H5N9) of the GP virus is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (11).
Известен штамм A /chicken /Queretaro/14588-19/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).A known strain A / chicken / Queretaro / 14588-19 / 95 (H5N2) of the GP virus used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм A /mallard/Ohio/556/87 (H5N9) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).A known strain A / mallard / Ohio / 556/87 (H5N9) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм А /chicken/Mexico/31381-7/94 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).The known strain A / chicken / Mexico / 31381-7 / 94 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм A /chicken/Mexico/26654-1374/94 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).A known strain A / chicken / Mexico / 26654-1374 / 94 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм A /turkey/Minnesota/10734-5/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / turkey / Minnesota / 10734-5 / 95 (H5N2) of the GP virus used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /chicken/Jalisco/14589-660/94 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).A known strain A / chicken / Jalisco / 14589-660 / 94 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм A /chicken/Veracruz/28159-398/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).A known strain A / chicken / Veracruz / 28159-398 / 95 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм A /chicken/Puebla/28159-474/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).A known strain A / chicken / Puebla / 28159-474 / 95 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм A /chicken/Chiapas/28159-488/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).The known strain A / chicken / Chiapas / 28159-488 / 95 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм A /turkey/Minnesota/3689-1551/81 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / turkey / Minnesota / 3689-1551 / 81 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /duck/Singapore/F119/97 (H5N3) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / duck / Singapore / F119 / 97 (H5N3) of the GP virus is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /Hong Kong/156/97 (H5N1) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / Hong Kong / 156/97 (H5N1) of the GP virus used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /Hong Kong/483/97 (H5N1) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / Hong Kong / 483/97 (H5N1) of the GP virus used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /duck/Potsdam/1402/86 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / duck / Potsdam / 1402/86 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Техническая проблема, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в расширении арсенала штаммов вируса гриппа птиц типа А подтипа Н5, обладающих высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью, сохраняющих иммуногенные свойства после инактивации, обеспечивая тем самым получение чувствительных и высокоспецифичных диагностикумов и вакцинных препаратов, создающих эффективную защиту домашней птицы против гомологичного вируса.The technical problem to which the present invention is directed is to expand the arsenal of avian influenza virus strains of type A subtype H5, which have high infectious, antigenic and immunogenic activity, preserving immunogenic properties after inactivation, thereby providing sensitive and highly specific diagnostic kits and vaccines, creating effective protection of poultry against a homologous virus.
Указанная проблема решена получением штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа типа А подтипа Н5, используемого для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ГП подтипа Н5.This problem was solved by obtaining strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of type A influenza virus subtype H5, used to control the immunogenic and antigenic activity of vaccines and the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prophylaxis of GP subtype H5.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8, был выделен в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в ноябре 2016 г. из проб, поступивших их личного подворного хозяйства с. Октябрьское Яшалтинского р-на Р. Калмыкия. Вследствие вирусвыделения из гомогената внутренних органов от домашнего гуся (Anser anser) был получен штамм вируса гриппа птиц A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8.The viral isolate, which served as the source for the strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8, was isolated in November 2016 from the samples received from their personal farmstead s. October Yashalta district R. Kalmykia. Due to the virus isolation from the internal organ homogenate from the domestic goose (Anser anser), the strain of avian influenza virus A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 was obtained.
Штамм прошел 3 пассажа в 10-суточных эмбрионах СПФ-кур. Способен вызывать гибель эмбрионов кур в течение 24-48 ч инкубации.The strain passed 3 passages in 10-day-old embryos of SPF hens. It can cause the death of chicken embryos during 24-48 hours of incubation.
Подтип H5N8 идентифицирован методами ПЦР, нуклеотидного секвенирования, РТГА (реакция торможения гемагглютинации) и РТНА (реакция торможения нейраминидазной активности).The H5N8 subtype was identified by PCR, nucleotide sequencing, RTGA (hemagglutination inhibition reaction) and PTNA (neuraminidase activity inhibition).
При проведении сравнительного анализа нуклеотидной последовательности фрагмента гена Н длиной 258 н.о. было установлено, что исследуемый изолят принадлежит к азиатской генетической линии вируса высокопатогенного гриппа птиц (линия A/Gs/Guangdong/96, клада 2.3.4.4).When conducting a comparative analysis of the nucleotide sequence of a fragment of the gene H with a length of 258 N.O. it was found that the studied isolate belongs to the Asian genetic line of the highly pathogenic avian influenza virus (line A / Gs / Guangdong / 96, clade 2.3.4.4).
По фрагменту гена Н наиболее генетически близкими оказались последовательности вирусов гриппа А птиц подтипа Н5, выделенные в Р. Тыва в 2016 г. (98,8-99,2% совпадений), а также последовательности вирусов гриппа А птиц подтипов H5N2, H5N6 и H5N8, выделенные на территории стран Юго-Восточной Азии в 2013-2014 гг. (98-99% совпадений).According to the H gene fragment, the sequences of avian influenza A viruses of subtype H5 isolated in R. Tuva in 2016 (98.8-99.2% matches), as well as the sequences of avian influenza A viruses of subtypes H5N2, H5N6 and H5N8 turned out to be the most genetically close allocated in the countries of Southeast Asia in 2013-2014 (98-99% matches).
Сайт расщепления гемагглютинина содержит основные аминокислоты и имеет структуру REКRRKR (Arg Glu Lys Arg Arg Lys Arg), что позволяет охарактеризовать вирус как потенциально высоковирулентный для птиц.The hemagglutinin cleavage site contains basic amino acids and has the structure REKRRKR (Arg Glu Lys Arg Arg Lys Arg), which makes it possible to characterize the virus as potentially highly virulent for birds.
Штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса ГП типа А, подтипа H5N8, депонирован 24 апреля 2017 г. в Коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» под регистрационным номером Штамм ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 (диагностический).The strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of the type A virus, subtype H5N8, was deposited on April 24, 2017 in the Collection of microorganism strains of the Federal Center for Animal Health under the registration number ATP strain A / goose / Kalmykia / 813 / 16 H5N8 (diagnostic).
Экспериментально подтверждена возможность использования штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и для приготовления биопрепаратов для специфической профилактики и диагностики ГП.The possibility of using the A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 strain to control the immunogenic and antigenic activity of vaccines and to prepare biologics for specific prophylaxis and diagnosis of GP has been experimentally confirmed.
Сущность изобретения пояснена на графическом изображении. Представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма вируса A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса гриппа птиц типа А подтипа Н5. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей участка гена гемагглютинина.The invention is illustrated in the graphic image. A dendrogram is presented that reflects the phylogenetic relationships of the A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 virus strain with epizootic and vaccine strains of avian influenza virus type A subtype H5. The dendrogram is based on a comparison of the complete nucleotide sequences of the hemagglutinin gene region.
Показано, что исследуемый штамм высокопатогенного гриппа (ВГП) A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 принадлежит к обширной линии штаммов A/goose/Guangdong/96 клада 2.3.4.4, впервые выявленных на территории Юго-Восточной Азии в 1996 г.It was shown that the studied strain of highly pathogenic influenza (AHP) A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 belongs to an extensive line of strains A / goose / Guangdong / 96 of clade 2.3.4.4, first detected in Southeast Asia in 1996.
Сущность изобретения пояснена следующим перечнем последовательностей:The invention is illustrated by the following list of sequences:
SEQ ID №1: представляет последовательность нуклеотидов фрагмента гена гемагглютинина штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса ГП типа А;SEQ ID No. 1: represents the nucleotide sequence of the hemagglutinin gene fragment of strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of type A virus GP;
SEQ ID №2: представляет последовательность аминокислот фрагмента гемагглютинина штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса ГП типа А.SEQ ID No. 2: represents the amino acid sequence of the hemagglutinin fragment of strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of type A virus A.
Исследования основывались на определении первичной структуры фрагмента гена Н испытуемого образца штамма ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 с последующим анализом филогенетического родства с другими штаммами и изолятами ВГП подтипа H5N8. В результате секвенирования была определена нуклеотидная (258 н.о.) и аминокислотная (86 а.о.) последовательности фрагмента гена Н штамма ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8. Сайт расщепления гемагглютинина штамма ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 содержит основные аминокислоты и имеет структуру REКRRKR, что позволяет охарактеризовать вирус как потенциально высоковирулентный.The studies were based on the determination of the primary structure of the H gene fragment of the test sample of AHP strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8, followed by analysis of phylogenetic relationship with other AHP strains and isolates of subtype H5N8. As a result of sequencing, the nucleotide (258 n.a.) and amino acid (86 a.a.) sequences of the H gene fragment of the AHP strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 were determined. The hemagglutinin cleavage site of the AH strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 contains basic amino acids and has the structure REKRRKR, which makes it possible to characterize the virus as potentially highly virulent.
Штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса ГП характеризуется следующими признаками и свойствами.The strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of the GP virus is characterized by the following features and properties.
Морфологическая характеристикаMorphological characteristics
Штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса ГП относится к семейству Orthomyxoviridae, серотипу А, подтипу H5N8 и обладает морфологическими признаками, характерными для вируса гриппа типа А.The strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of the GP virus belongs to the family Orthomyxoviridae, serotype A, subtype H5N8 and has morphological characteristics characteristic of type A influenza virus.
Вирионы вируса гриппа - оболочечные, плеоморфные. Диаметр сфероподобных частиц около 100 нм; нитевидные частицы около 17 нм в диаметре, длиной 250 нм и более. На поверхности вириона находятся шипообразные выступы (до 14 нм), образованные гомотримерами НА. В промежутках между кластерами НА у вирусов типа А размещаются молекулы NA.Influenza virus virions are membranous, pleomorphic. The diameter of the sphere-like particles is about 100 nm; filamentary particles about 17 nm in diameter, 250 nm in length or more. On the surface of the virion are spike-like protrusions (up to 14 nm) formed by HA homotrimers. In the intervals between HA clusters in type A viruses, NA molecules are located.
Липидная мембрана окружает петлеобразные филаменты нуклеокапсидов с восемью фрагментами вирусного генома, каждый из которых представлен линейной одноцепочечной антисмысловой РНК.The lipid membrane surrounds loop-like filaments of nucleocapsids with eight fragments of the viral genome, each of which is represented by a linear single-stranded antisense RNA.
Общая длина генома составляет около 13600 нуклеотидов (нт). Наиболее крупный фрагмент (№1) содержит около 2350 н.о.; №2 - чуть менее 2350 н.о.; №3, как правило, - 2250 н.о.; №4 - 1780 н.о.; №5 - 1575 н.о.; №6 - 1420 н.о.; №7 - 1050 н.о.; №8 - 900 н.о.The total genome length is about 13,600 nucleotides (nt). The largest fragment (No. 1) contains about 2350 n.a .; No. 2 - a little less than 2350 n.o .; No. 3, as a rule, - 2250 n.o .; No. 4 - 1780 n.a .; No. 5 - 1575 n.a .; No. 6 - 1420 n.a .; No. 7 - 1050 n.a .; No. 8 - 900 n.a.
На обоих концах каждой геномной цепи РНК содержатсяBoth ends of each genomic RNA chain contain
повторяющиеся отрезки, причем повторы 5'- концевого участка (у вирусов типа А они имеют вид 5'-AGUAGAAACAAGG) комплементарны инвертированным повторам, расположенным на 3' - конце. Кроме того, 3' - концевые участки некоторых фрагментов генома содержат консервативные отрезки, типичные для вирусных штаммов, поражающих субъектов определенного биологического вида [ICTV-International Committee on Taxonomy of Viruses].repeating segments, and repeats of the 5'-terminal region (for type A viruses they look like 5'-AGUAGAAACAAGG) are complementary to inverted repeats located at the 3 'end. In addition, the 3 '- terminal sections of some fragments of the genome contain conservative segments typical of viral strains that infect subjects of a certain biological species [ICTV-International Committee on Taxonomy of Viruses].
Антигенные свойстваAntigenic properties
По своим антигенным свойствам штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса ГП относится к семейству Orthomyxoviridae, роду Influenzavirus, виду Avian influenza virus, типу А, подтипу H5N8.According to its antigenic properties, the A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 strain of the GP virus belongs to the Orthomyxoviridae family, the genus Influenzavirus, type Avian influenza virus, type A, subtype H5N8.
Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Гемагглютинирующая активность штамма составляет 1:32 и подавляется специфической сывороткой к ВГП подтипа H5N1 (ФГБУ «ВНИИЗЖ»).The virus is stably neutralized by homologous antiserum. The hemagglutinating activity of the strain is 1:32 and is inhibited by specific serum to HHV subtype H5N1 (FSBI ARRIAH).
Нейраминидазная активность штамма подавляется специфической сывороткой к ВГП подтипа H4N8 («IZSVe», Италия).The neuraminidase activity of the strain is inhibited by specific serum to hepatitis A virus subtype H4N8 ("IZSVe", Italy).
Биотехнологические свойстваBiotechnological properties
Инактивированный вирус индуцирует антитела, выявляемые методами РТГА и ИФА. Так, через 14 дней и 21 день после однократной иммунизации цыплят инактивированной вакциной из штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса ГП в прививном объеме 0,5 см3/гол средний титр антител по группе к НА, обеспечивающих реакцию торможения гемагглютинации, составил 2,3 и 4,7 log2 соответственно; титр антител, определяемых методом ИФА, составил 3263 и 7036 соответственно (таблицы 5, 6).Inactivated virus induces antibodies detected by RTGA and ELISA. So, 14 days and 21 days after a single immunization of chickens with an inactivated vaccine from the A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 strain of the GP virus in a graft volume of 0.5 cm 3 / goal, the average titer of antibodies for the HA group providing the hemagglutination inhibition response , amounted to 2.3 and 4.7 log 2, respectively; the titer of antibodies determined by ELISA was 3263 and 7036, respectively (tables 5, 6).
Гено- и хемотаксономическая характеристикиGeno and chemotaxonomic characteristics
Штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц типа А подтипа Н5 является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 250×106 Д.The strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of type A avian influenza virus subtype H5 is an RNA-containing virus with a molecular weight of 250 × 10 6 D.
Геном вируса гриппа представлен однонитевой РНК негативной полярности в виде 8 нитей(сегментов) в комплексе с белком нуклеопротеина (NP).The genome of the influenza virus is represented by single-stranded RNA of negative polarity in the form of 8 strands (segments) in combination with a protein of nucleoprotein (NP).
Вирионы вируса гриппа имеют наружную липопротеиновую оболочку, чаще сферической формы. Диаметр сферических форм около 100 нм. Вирусные частицы содержат РНК - 1%, белки - 70%, жиры - 20%, углеводы - до 8%.Influenza virus virions have an external lipoprotein membrane, usually spherical. The diameter of the spherical shapes is about 100 nm. Viral particles contain RNA - 1%, proteins - 70%, fats - 20%, carbohydrates - up to 8%.
Антигенная вариабельность и таксономическая классификация вируса основана на идентификации двух основных поверхностных белков -гемагглютинина и нейраминидазы.Antigenic variability and taxonomic classification of the virus is based on the identification of two major surface proteins, hemagglutinin and neuraminidase.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса ГП чувствителен к детергентам, формальдегиду, бета-пропиолактону, производным азиридина, быстро инактивируется при прогревании (56°С), ультрафиолетовом облучении и при рН ниже 5,0.The strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of the GP virus is sensitive to detergents, formaldehyde, beta-propiolactone, derivatives of aziridine, is rapidly inactivated by heating (56 ° C), ultraviolet irradiation and at pH below 5.0.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.Immunogenic activity - immunogen in the composition of an inactivated vaccine.
Реактогенность - реактогенными свойства не обладает.Иммунизация цыплят дозой, в два раза превышающей прививную, не вызывает видимых клинических изменений в общем состоянии птицы, а также локальных поражений ткани в месте введения.Reactogenicity - does not have reactogenic properties. Immunization of chickens with a dose twice the vaccination dose does not cause visible clinical changes in the general condition of the bird, as well as local tissue lesions at the injection site.
Патогенные свойстваPathogenic properties
Вирулентность - высокая (вызывает 100%-ную гибель зараженной птицы в дозе 106,0 ЭЛД50).Virulence is high (causes 100% death of the infected bird at a dose of 10 6.0 ELD 50 ).
Контагиозность - контагиозен. Неиммунные цыплята заражаются при совместном содержании с зараженными.Contagiousness is contagious. Non-immune chickens become infected when kept together with infected ones.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения:The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention:
Пример 1Example 1
Определение подтиповой антигенной характеристики штамма проводили с помощью перекрестной реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции торможения нейраминидазной активности (РТНА) с референтными гипериммунными сыворотками к антителам 16 Н-типов вируса ГП и с референтными сыворотками против гриппа птиц подтипов N1-N2 по нейраминидазе. Образцы вирусной суспензии исследовали предварительно в реакции гемагглютинации (РГА) для определения гемагглютинирующей активности вируса. Активность штамма ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 (Д) в РГА составила 1:32. В качестве отрицательного контроля использовали нормальную сыворотку крови кур производства ФГБУ «ВНИИЗЖ». Результаты представлены в таблице 1 и таблице 2.The determination of the subtype antigenic characteristics of the strain was carried out using a cross-reaction of inhibition of hemagglutination (RTHA) and a reaction of inhibition of neuraminidase activity (RTNA) with reference hyperimmune sera to antibodies of 16 H-types of the GP virus and with reference serums against avian influenza of subtypes N1-N2 for neuraminide. Samples of the viral suspension were previously investigated in a hemagglutination reaction (RGA) to determine the hemagglutinating activity of the virus. The activity of the AHP strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 (D) in the RGA was 1:32. As a negative control, normal chicken blood serum produced by FSBI ARRIAH was used. The results are presented in table 1 and table 2.
В РТГА гемагглютинирующая активность испытуемого образца подавлялась специфической сывороткой к ВГП подтипа H5N1 (ФГБУ "ВНИИЗЖ»). Титр сыворотки составил 1:128 (7 log2). В РИНА нейраминидазная активность испытуемого образца подавлялась специфической сывороткой к ВГП подтипа H4N8 («IZSVe», Италия).In rtga, the hemagglutinating activity of the test sample was inhibited by specific serum to hepatitis A virus subtype H5N1 (FSBI “ARRIAH”). The titer of serum was 1: 128 (7 log 2 ). Italy).
Согласно проведенным исследованиям штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 был отнесен к вирусу гриппа птиц подтипа H5N8.According to studies, strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 was assigned to the avian influenza virus subtype H5N8.
Для выявления генома вируса ГП из проб тканей птиц и экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ) зараженных эмбрионов кур выделяли общую РНК, которую использовали для реакций ОТ и ПЦР. Первичную индикацию гена М проводили, используя праймеры AIVM49F и AIVM941R. После амплификации ДНК, полученной с применением указанных праймеров, в результате секвенирования была определена нуклеотидная (258 н.о.) и аминокислотная (86 а.о.) последовательности фрагмента гена Н штамма ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8. Было установлено, что по фрагменту гена Н к штамму ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 наиболее близкими оказались последовательности вирусов гриппа А птиц подтипа Н5, выделенные в Республике Тыва в 2016 г. (98,8-99,2% совпадений), а также последовательности вирусов гриппа А птиц подтипов H5N2, H5N6 и H5N8, выделенные на территории стран Юго-Восточной Азии в 2013-2014 гг. (98-99% совпадений). Сайт расщепления гемагглютинина штамма ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 (Д) содержит основные аминокислоты и имеет структуру REKRRKR, что позволяет охарактеризовать вирус как потенциально высоковирулентный.To identify the genome of the GP virus, total RNA was isolated from samples of bird tissues and extraembryonic fluid (EEG) of infected chicken embryos, which was used for RT and PCR reactions. The primary indication of the M gene was carried out using primers AIVM49F and AIVM941R. After amplification of the DNA obtained using these primers, the nucleotide (258 n.a.) and amino acid (86 a.o.) sequences of the H gene fragment of the AH goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 strain were determined as a result of sequencing. It was found that for the H gene fragment to the AH strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8, the sequences of avian influenza A viruses of subtype H5 isolated in the Republic of Tyva in 2016 were the closest (98.8-99.2% of matches ), as well as the sequences of avian influenza A viruses of subtypes H5N2, H5N6 and H5N8 isolated in the countries of Southeast Asia in 2013-2014. (98-99% matches). The hemagglutinin cleavage site of the AHP strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 (D) contains basic amino acids and has the REKRRKR structure, which makes it possible to characterize the virus as potentially highly virulent.
Таким образом, на основании серологических и молекулярно-биологических исследований, установлена принадлежность штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 семейству Orthomyxoviridae, вирусам гриппа А, подтипу H5N8.Thus, on the basis of serological and molecular biological studies, the strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 belongs to the family Orthomyxoviridae, influenza A viruses, subtype H5N8.
Пример 2Example 2
Для использования штаммов вируса в качестве контрольных штаммов при заражении в целях контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, а также для использования в качестве диагностического и производственного необходимо получить штамм вируса с высокой инфекционной активностью. Для определения инфекционной активности из вирусного материала готовили ряд десятикратных последовательных разведений (от 10-1 до 10-10). Каждое разведение вируса инокулировали в аллантоисную полость четырем 9-11-суточным СПФ-КЭ в объеме 0,2 см3. Четырем эмбрионам контрольной группы вводили ФБР тем же способом в объеме 0,2 см3. Специфичность гибели подтверждали в РГА исследованием ЭЭЖ от каждого зараженного эмбриона. Титр вируса в депонируемом образце определяли по методу Кербера и выражали в единицах ЭИД50/см3 (табл. 3).To use virus strains as control strains during infection in order to control the antigenic and immunogenic activity of vaccines, as well as for use as a diagnostic and production strain, it is necessary to obtain a virus strain with high infectious activity. To determine the infectious activity, a series of ten-fold sequential dilutions (from 10 -1 to 10 -10 ) were prepared from the viral material. Each dilution of the virus was inoculated into the allantoic cavity with four 9-11-day SPF-CE in a volume of 0.2 cm 3 . Four embryos of the control group were injected with the FBI in the same way in a volume of 0.2 cm 3 . The specificity of the death was confirmed in the RGA by examining the EEG from each infected embryo. The virus titer in the deposited sample was determined by the method of Kerber and expressed in units of EID 50 / cm 3 (table. 3).
Таким образом, инфекционная (in vivo) активность штаммаThus, the infectious (in vivo) activity of the strain
A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц при титровании в СПФ-КЭ составила 8,2 lg ЭИД50/см3.A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 avian influenza virus when titrated in SPF-CE was 8.2 lg EID 50 / cm 3 .
Пример 3Example 3
При изучении стабильности штамма установлено, что штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц в течение 3 последних последовательных пассажей в 9-11-суточных СПФ-КЭ оставался стабильным, т.е. не снижал инфекционную активность при титре около 8,25 lg ЭИД50/см3.When studying the stability of the strain, it was found that the strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of the avian influenza virus for the last 3 consecutive passages in 9-11-day-old SPF-CE remained stable, i.e. did not reduce infectious activity at a titer of about 8.25 lg EID 50 / cm 3 .
Результаты представлены в таблице 4.The results are presented in table 4.
Пример 4Example 4
Для использования штамма для контроля антигенной и иммуногенной активности, а также для приготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа подтипа Н5 необходимо получить штамм, свободный от контаминации чужеродными вирусами, бактериями и грибами. Подтверждение отсутствия контаминации бактериальной, грибной микрофлорой и микоплазмами проводили в соответствии с ГОСТ 28085-89 «Препараты биологические. Метод контроля стерильности».To use the strain to control antigenic and immunogenic activity, as well as to prepare biological products for the diagnosis and specific prophylaxis of influenza subtype H5, it is necessary to obtain a strain that is free from contamination with foreign viruses, bacteria and fungi. Confirmation of the absence of contamination with bacterial, fungal microflora and mycoplasmas was carried out in accordance with GOST 28085-89 “Biological preparations. Sterility Control Method. ”
В результате исследований установлено, что штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц не контаминирован бактериями, грибами и микоплазмами. В результате испытаний с применением методов полимеразной цепной реакции (ПНР) и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) было установлено, что штамм ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 не контаминирован вирусами ньюкаслской болезни (НБ), инфекционного бронхита кур (ИБК), инфекционной бурсальной болезни (ИББ), синдрома снижения яйценоскости (ССЯ-76), инфекционного ларинготрахеита птиц (ИЛТ), реовирусом птиц, а также микоплазмой синовиа и микоплазмой галлисептикум, и содержит в своем составе только геном вируса ГП типа А подтипа H5N8.As a result of studies, it was found that the strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 of the avian influenza virus is not contaminated by bacteria, fungi and mycoplasmas. As a result of tests using the methods of polymerase chain reaction (PNR) and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), it was found that the AHP strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 is not contaminated with Newcastle disease (NB) viruses, infectious chicken bronchitis (IBS), infectious bursal disease (IBD), egg production syndrome (SSJ-76), infectious bird laryngotracheitis (ILT), bird reovirus, as well as synovia mycoplasma and gallisepticum mycoplasma, and contains only the GP virus genome A subtype of H5N8.
Пример 5Example 5
Изучали патогенные свойства штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц на цыплятах 30-суточного возраста. В опыте использовали птицу яичного кросса. Вирус штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вводили цыплятам внутримышечно в объеме 0,5 см3 с инфекционной активностью 106 ЭИД50/см3. В результате эксперимента первые признаки высокопатогенного гриппа птиц отмечали через 48 часов после заражения в виде угнетения и взъерошенности оперения. Через 72 часа все зараженные птицы погибли, при этом характерных признаков цианоза бесперьевых участков тела, как при гриппе H5N1 не отмечали.The pathogenic properties of the A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 strain of avian influenza virus were studied in 30-day-old chickens. In the experiment, an egg cross was used. The virus of strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 was administered intramuscularly to chickens in a volume of 0.5 cm 3 with an infectious activity of 10 6 EID 50 / cm 3 . As a result of the experiment, the first signs of highly pathogenic avian influenza were observed 48 hours after infection in the form of oppression and ruffled plumage. After 72 hours, all infected birds died, while the characteristic signs of cyanosis of non-feather sections of the body, as in the case of H5N1 flu, were not observed.
Таким образом, штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц является высоковирулентным и вызывает сверхострое течение высокопатогенного гриппа птиц.Thus, the A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8 strain of the avian influenza virus is highly virulent and causes an over-acute course of highly pathogenic avian influenza.
Пример 6Example 6
Для получения иммунных сывороток крови к штамму A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 приготовили вакцину. Для изготовления вакцины использовали адъювант Montanide ISA 70 (SEPPIC, Франция). Для приготовления антигена использовали экстраэмбриональную жидкость зараженных СПФ КЭ с инфекционной активностью 8,2 ЭИД50/см3, при этом гемагглютинирующая активность составляла значение 4 log2. Для инактивации инфекционных свойств вируса гриппа птиц использовали бета-пропиолактон (БПЛ). Для этого из исходного раствора БПЛ готовили рабочий 10%-ный раствор на стерильной деминерализованной воде. В сосуд с вирусосодержащей жидкостью вносили рабочий раствор БПЛ до конечной концентрации 0,05%. Сосуд с содержимым инкубировали при комнатной температуре (25°С) в течение 24 ч при постоянном перемешивании на шейкере. После окончания процесса инактивации вирусный материал помещали в бытовой холодильник (4°С), предварительно из сосуда отбирали пробу материала в объеме 5,0 см3 для проведения исследований по определению полноты инактивации вируса и стерильности материала. После подтверждения полноты инактивации готовили серию лабораторного образца вакцины. Для этого смешивали 30 частей антигена с заданными характеристиками и 70 частей адъюванта. Эмульсию получали на гомогенизаторе 3000 об/мин. Провели иммунизацию цыплят 30-суточного возраста внутримышечно в прививном объеме 0,5 см3 на голову. На 14 и 21 сутки после вакцинации у иммунизированных птиц отбирали кровь и исследовали на наличие специфических антител к вирусу гриппа птиц типа А подтипа Н5 в ИФА и РТГА (таблица 5, 6).To obtain immune serum to strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8, a vaccine was prepared. Montanide ISA 70 adjuvant (SEPPIC, France) was used to make the vaccine. To prepare the antigen, the extraembryonic fluid of infected SPF KE with an infectious activity of 8.2 EID 50 / cm 3 was used , while the hemagglutinating activity was 4 log 2 . Beta-propiolactone (BPL) was used to inactivate the infectious properties of avian influenza virus. For this, a working 10% solution in sterile demineralized water was prepared from the initial BPL solution. A BPL working solution was added to the vessel with the virus-containing liquid to a final concentration of 0.05%. The vessel with the contents was incubated at room temperature (25 ° C) for 24 hours with constant stirring on a shaker. After the end of the inactivation process, the viral material was placed in a household refrigerator (4 ° C); previously, a sample of material in a volume of 5.0 cm 3 was taken from the vessel to conduct studies to determine the completeness of virus inactivation and sterility of the material. After confirming the completeness of inactivation, a series of laboratory vaccine samples was prepared. For this, 30 parts of the antigen with the desired characteristics and 70 parts of the adjuvant were mixed. The emulsion was obtained on a homogenizer of 3000 rpm. The chickens of 30 days of age were immunized intramuscularly in a vaccination volume of 0.5 cm 3 per head. On days 14 and 21 after vaccination, blood was taken from the immunized birds and examined for the presence of specific antibodies to type A avian influenza virus subtype H5 in ELISA and RTGA (table 5, 6).
Результаты исследований свидетельствуют о выраженной антигенной активности лабораторного образца вакцины на основе штамма A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8, т.к. установлено наличие специфических антител к вирусу гриппа типа А в ИФА и антигемагглютининов к вирусу гриппа подтипа H5N8.The research results indicate a pronounced antigenic activity of the laboratory vaccine sample based on strain A / goose / Kalmykia / 813/16 H5N8, because the presence of specific antibodies to type A influenza virus in ELISA and anti-hemagglutinins to influenza virus subtype H5N8.
Источники информации Information sources
1. Каверин Н.В., Львов Д.К., Щелканов М.Ю. / Ортомиксовирусы. Руководство по вирусологии. - М.: МИА, 2013, С. 307-313.1. Kaverin N.V., Lvov D.K., Shchelkanov M.Yu. Orthomyxoviruses. Virology Guide. - M.: MIA, 2013, S. 307-313.
2. Tong SX, Li Y, Rivailler P, Conrardy C, Castillo DAA, et al. (2012) A distinct lineage of influenza A virus from bats. Proc Natl Acad Sci USA 109: 4269-4274. doi: 10.1073/pnas.1116200109.2. Tong SX, Li Y, Rivailler P, Conrardy C, Castillo DAA, et al. (2012) A distinct lineage of influenza A virus from bats. Proc Natl Acad Sci USA 109: 4269-4274. doi: 10.1073 / pnas. 116200109.
3. Assessment of risk associated with influenza A(H5N8) virus /http://www.who.int/influenza/human animal interface/avian influenza/riskassessment AH5N8 201611/en.3. Assessment of risk associated with influenza A (H5N8) virus / http://www.who.int/influenza/human animal interface / avian influenza / riskassessment AH5N8 201611 / en.
4. Всемирная организация здравоохранения животных (МЭБ) / http://www.oie.int/wahis.4. World Organization for Animal Health (OIE) / http://www.oie.int/wahis.
5. Пат. РФ №2323740 A61K 39/145, C12N 7/00 Штамм "Новосибирский" вируса гриппа птиц Influenzae virus avicum для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц, 10.05.2008.5. Pat. RF №2323740 A61K 39/145, C12N 7/00 Strain "Novosibirsk" of the bird flu virus Influenzae virus avicum to control the immunogenic and antigenic activity of vaccines and the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of bird flu, 05/10/2008.
6. Shintaro Shichinohe, Masatoshi Okamatsu, Naoki Yamamoto, Yu Noda, Yuka Nomoto, Takashi Honda, Noriyasu Takikawa, Yoshihiro Sakoda, Hiroshi Kida /Potency of an inactivated influenza vaccine prepared from a non-pathogenic H5N1 virus against a challenge with antigenically drifted highly pathogenic avian influenza viruses in chickens //Veterinary Microbiology 164 (2013) 39-45.6. Shintaro Shichinohe, Masatoshi Okamatsu, Naoki Yamamoto, Yu Noda, Yuka Nomoto, Takashi Honda, Noriyasu Takikawa, Yoshihiro Sakoda, Hiroshi Kida / Potency of an inactivated influenza vaccine prepared from a non-pathogenic H5N1 virus against a challenge with antigenically pathogenic avian influenza viruses in chickens // Veterinary Microbiology 164 (2013) 39-45.
7. Van der Goot JA, van Boven M, de Jong MC, Koch G. / Effect of vaccination on transmission of HPAI H5N1: the effect of a single vaccination dose on transmission of highly pathogenic avian influenza H5N1 in Peking ducks // Avian Dis. 2007 Mar; 51 (1 Suppl):323-4.7. Van der Goot JA, van Boven M, de Jong MC, Koch G. / Effect of vaccination on transmission of HPAI H5N1: the effect of a single vaccination dose on transmission of highly pathogenic avian influenza H5N1 in Peking ducks // Avian Dis . 2007 Mar; 51 (1 Suppl): 323-4.
8. Toro H, Tang DC / Protection of chickens against avian influenza with nonreplicating adenovirus-vectored vaccine // Poult Sci. 2009 Apr; 88(4):867-71.8. Toro H, Tang DC / Protection of chickens against avian influenza with nonreplicating adenovirus-vectored vaccine // Poult Sci. 2009 Apr; 88 (4): 867-71.
9. Bublot M, Le Gros FX, Nieddu D, Pritchard N, Mickle TR, Swayne DE. / Efficacy of two H5N9-inactivated vaccines against challenge with a recent H5N1 highly pathogenic avian influenza isolate from a chicken in Thailand // Avian Dis. 2007 Mar; 51(1 Suppl):332-7.9. Bublot M, Le Gros FX, Nieddu D, Pritchard N, Mickle TR, Swayne DE. / Efficacy of two H5N9-inactivated vaccines against challenge with a recent H5N1 highly pathogenic avian influenza isolate from a chicken in Thailand // Avian Dis. 2007 Mar; 51 (1 Suppl): 332-7.
10. Пат. CA №2581355 A61K 39/145; A61K 39/295; A61K 39/39 Multivalent avian influenza vaccines, 20.04.2006.10. Pat. CA No. 2581355 A61K 39/145; A61K 39/295; A61K 39/39 Multivalent avian influenza vaccines, 04/20/2006.
11. Narayan G., Rouse B.T., Lang G. A virus infection in turkeys. VI Artificial immunization against the Malignant virus strain Turkey/Ontario/7732/66/ - Gen. J. Сотр. Med., 1970. 34, 1, 72-79.11. Narayan G., Rouse B.T., Lang G. A virus infection in turkeys. VI Artificial immunization against the Malignant virus strain Turkey / Ontario / 7732/66 / - Gen. J. Sotr. Med., 1970. 34, 1, 72-79.
12. Swayne D.E., Beck J.R., Garcia M. et. al. Influents of virus strain and antigen mass on efficacy of H5 avian influenza inactivated vaccines. - Avian Pathol, 1999, 28, 245-255.12. Swayne D.E., Beck J.R., Garcia M. et. al. Influents of virus strain and antigen mass on efficacy of H5 avian influenza inactivated vaccines. - Avian Pathol, 1999, 28, 245-255.
13. Swayne D.E., Beck J.R., Perdue M.L. et. al. Efficacy of vaccines in Chickens against Highly Pathogenic Hong Kong H5N1 Avian Influenza. - Avian Dis., 2001, 45, N2, 355-365.13. Swayne D.E., Beck J.R., Perdue M.L. et. al. Efficacy of vaccines in Chickens against Highly Pathogenic Hong Kong H5N1 Avian Influenza. - Avian Dis., 2001, 45, N2, 355-365.
Примечание: * - проба окрашена в розовый цвет;Note: * - the sample is colored pink;
** - окрашивание пробы отсутствует.** - no staining of the sample.
Примечание: «+» - положительная проба, выявленная в РГА;Note: "+" - a positive sample detected in the RGA;
«-» - проба, отрицательная в РГА.“-” - sample negative in the RSA.
Примечание: «+» - положительная проба, выявленная в РГА;Note: "+" - a positive sample detected in the RGA;
«-» - проба, отрицательная в РГА.“-” - sample negative in the RSA.
СГТ - средний геометрический титрSGT - geometric mean titer
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017119735A RU2647566C1 (en) | 2017-06-06 | 2017-06-06 | Strain a/goose/kalmykia/813/16 h5n8 virus avicum bird influenza virus avicum influenza type a and substitute h5 for control of antigen and immunizing activity of vaccine against avian influenza and for the manufacture of biopreparations for diagnostics and specific prevention of influenza birds of type a of substitute h5 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017119735A RU2647566C1 (en) | 2017-06-06 | 2017-06-06 | Strain a/goose/kalmykia/813/16 h5n8 virus avicum bird influenza virus avicum influenza type a and substitute h5 for control of antigen and immunizing activity of vaccine against avian influenza and for the manufacture of biopreparations for diagnostics and specific prevention of influenza birds of type a of substitute h5 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2647566C1 true RU2647566C1 (en) | 2018-03-16 |
Family
ID=61629340
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017119735A RU2647566C1 (en) | 2017-06-06 | 2017-06-06 | Strain a/goose/kalmykia/813/16 h5n8 virus avicum bird influenza virus avicum influenza type a and substitute h5 for control of antigen and immunizing activity of vaccine against avian influenza and for the manufacture of biopreparations for diagnostics and specific prevention of influenza birds of type a of substitute h5 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2647566C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113480643A (en) * | 2021-04-14 | 2021-10-08 | 聊城大学 | Preparation method of H5N8 subtype avian influenza virus HA polyclonal antibody |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2323740C1 (en) * | 2006-08-21 | 2008-05-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") | "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE |
-
2017
- 2017-06-06 RU RU2017119735A patent/RU2647566C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2323740C1 (en) * | 2006-08-21 | 2008-05-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") | "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ВАРКЕНТИН А.В. и др. Анализ эпизоотической ситуации по нотифицируемому гриппу птиц в мире за 2014 г. и первый квартал 2015 г. НОВЫЕ УГРОЗЫ. ВЕТЕРИНАРИЯ СЕГОДНЯ. 2015 (декабрь), No.4, C.11-15. * |
| МАРЧЕНКО В.Ю. и др. Выделение высокопатогенного вируса гриппа А субтипа H5N8 на территории республики Саха (Якутия). Дальневосточный Журнал Инфекционной Патологии. 2015, No.28, C.38-43. * |
| МАРЧЕНКО В.Ю. и др. Выделение высокопатогенного вируса гриппа А субтипа H5N8 на территории республики Саха (Якутия). Дальневосточный Журнал Инфекционной Патологии. 2015, No.28, C.38-43. ВАРКЕНТИН А.В. и др. Анализ эпизоотической ситуации по нотифицируемому гриппу птиц в мире за 2014 г. и первый квартал 2015 г. НОВЫЕ УГРОЗЫ. ВЕТЕРИНАРИЯ СЕГОДНЯ. 2015 (декабрь), No.4, C.11-15. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113480643A (en) * | 2021-04-14 | 2021-10-08 | 聊城大学 | Preparation method of H5N8 subtype avian influenza virus HA polyclonal antibody |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6352974B2 (en) | High titer recombinant influenza virus for vaccine | |
| Ganar et al. | Newcastle disease virus: current status and our understanding | |
| Crawford et al. | Baculovirus-derived hemagglutinin vaccines protect against lethal influenza infections by avian H5 and H7 subtypes | |
| KR101272487B1 (en) | Rescue of influenza virus | |
| Horimoto et al. | The development and characterization of H5 influenza virus vaccines derived from a 2003 human isolate | |
| Kilany et al. | Protective efficacy of H5 inactivated vaccines in meat turkey poults after challenge with Egyptian variant highly pathogenic avian influenza H5N1 virus | |
| NO341506B1 (en) | High titers of recombinant influenza viruses for vaccines and gene therapy | |
| JP7297832B2 (en) | Generation of infectious influenza viruses from virus-like particles | |
| KR20110113615A (en) | Production of viral vaccine | |
| Cornelissen et al. | Protective efficacy of Newcastle disease virus expressing soluble trimeric hemagglutinin against highly pathogenic H5N1 influenza in chickens and mice | |
| WO2007118284A1 (en) | Influenza virus vaccine | |
| EP4093415A1 (en) | Recombinant influenza viruses with stabilized na | |
| US11607448B2 (en) | Whole avian-origin reverse genetic system and its use in producing H7N9 subtype avian influenza vaccine | |
| US11512117B1 (en) | Whole avian-origin reverse genetic system and recombinant H5N2 subtype avian influenza virus, vaccine and uses thereof | |
| CN104611299B (en) | H9N2 avian flus strain, preparation method, vaccine combination and its application of a kind of artificial recombination | |
| RU2734118C2 (en) | Recombinant virus-like particles (vlp) using bovine immunodeficiency virus group-specific antigen (gag) protein | |
| RU2647566C1 (en) | Strain a/goose/kalmykia/813/16 h5n8 virus avicum bird influenza virus avicum influenza type a and substitute h5 for control of antigen and immunizing activity of vaccine against avian influenza and for the manufacture of biopreparations for diagnostics and specific prevention of influenza birds of type a of substitute h5 | |
| US20120107354A1 (en) | Viral vaccine and process for preparing the same | |
| KR101908905B1 (en) | Recombinant influenza virus to form cross-protection against multiple subtypes h9 and h5 of influenza viruses and vaccine comprising the same | |
| RU2736788C1 (en) | Strain a/chiken/kostroma/3175/17 h5n2 of avian influenza virus subtype h5n2 infuenza a virus of genus alphainfluenzavirus to control antigenic and immunogenic activity of avian influenza vaccines and for making antigen-containing diagnosticums | |
| WO2018013704A1 (en) | Engineered influenza polynucleotides, viruses, vaccines and methods of making and using the same | |
| US11547754B2 (en) | H5 avian influenza vaccine strain which differentiates infected from vaccinated animals, preparation method therefor, and application | |
| CN109593136A (en) | Avian paramyxoviruses fusion protein and preparation method thereof, the APMV vaccine using and for pigeon | |
| CN117511969B (en) | mRNA, preparation method, application and vaccine | |
| EP4210740A1 (en) | Ha stem vaccine for ha antibody-positive targets |