RU2646507C2 - Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс - Google Patents
Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс Download PDFInfo
- Publication number
- RU2646507C2 RU2646507C2 RU2013140560A RU2013140560A RU2646507C2 RU 2646507 C2 RU2646507 C2 RU 2646507C2 RU 2013140560 A RU2013140560 A RU 2013140560A RU 2013140560 A RU2013140560 A RU 2013140560A RU 2646507 C2 RU2646507 C2 RU 2646507C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- treatment
- nrg
- damage
- day
- ggf2
- Prior art date
Links
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 115
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 title claims abstract description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 125
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 title description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 24
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 14
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims abstract description 8
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 108050003475 Neuregulin Proteins 0.000 claims description 80
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 28
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 claims description 22
- 102000012545 EGF-like domains Human genes 0.000 claims description 16
- 108050002150 EGF-like domains Proteins 0.000 claims description 16
- 208000016988 Hemorrhagic Stroke Diseases 0.000 claims description 7
- 230000010005 growth-factor like effect Effects 0.000 claims description 7
- 208000020658 intracerebral hemorrhage Diseases 0.000 claims description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 61
- 230000006870 function Effects 0.000 abstract description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 abstract description 9
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 abstract description 9
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 abstract description 6
- 101100118545 Holotrichia diomphalia EGF-like gene Proteins 0.000 abstract 1
- 102000014413 Neuregulin Human genes 0.000 description 71
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 45
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 101000893549 Homo sapiens Growth/differentiation factor 15 Proteins 0.000 description 31
- 101000653754 Rattus norvegicus Sphingosine 1-phosphate receptor 5 Proteins 0.000 description 30
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 29
- 102100040896 Growth/differentiation factor 15 Human genes 0.000 description 27
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 26
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 26
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 26
- 206010008089 Cerebral artery occlusion Diseases 0.000 description 24
- 201000007309 middle cerebral artery infarction Diseases 0.000 description 24
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 22
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 21
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 20
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 20
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 19
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 19
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 19
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 16
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 15
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 15
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 14
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 14
- 101800000675 Neuregulin-2 Proteins 0.000 description 13
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- ZOXZWYWOECCBSH-UHFFFAOYSA-N 4 Methyl N-ethylcathinone Chemical compound CCNC(C)C(=O)C1=CC=C(C)C=C1 ZOXZWYWOECCBSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 102400000057 Neuregulin-2 Human genes 0.000 description 12
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 12
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 11
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 11
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 11
- 102000048238 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 11
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 11
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 11
- 230000034994 death Effects 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 11
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 11
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 11
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 10
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 10
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 10
- 229960000103 thrombolytic agent Drugs 0.000 description 10
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 9
- 238000001584 occupational therapy Methods 0.000 description 9
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 8
- 101710100968 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 8
- 210000000256 facial nerve Anatomy 0.000 description 8
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 8
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 8
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 101800000673 Neuregulin-3 Proteins 0.000 description 7
- 102400000054 Neuregulin-3 Human genes 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 6
- 208000003443 Unconsciousness Diseases 0.000 description 6
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 230000037152 sensory function Effects 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 101800002641 Neuregulin-4 Proteins 0.000 description 5
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 5
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 5
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 5
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 5
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 ErbB1 Proteins 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 4
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 4
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 4
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 4
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011537 solubilization buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 3
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 206010013887 Dysarthria Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101001109800 Homo sapiens Pro-neuregulin-1, membrane-bound isoform Proteins 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 3
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 3
- 201000007201 aphasia Diseases 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 3
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 210000003194 forelimb Anatomy 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 102000055650 human NRG1 Human genes 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 231100000878 neurological injury Toxicity 0.000 description 3
- 230000001067 neuroprotector Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010054196 Affect lability Diseases 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 2
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 208000004929 Facial Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100030173 Muellerian-inhibiting factor Human genes 0.000 description 2
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 2
- 102400000055 Neuregulin-4 Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000012661 PARP inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 229940121906 Poly ADP ribose polymerase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 102100022668 Pro-neuregulin-2, membrane-bound isoform Human genes 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 208000036826 VIIth nerve paralysis Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 2
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000480 calcium channel blocker Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 230000003492 excitotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000009760 functional impairment Effects 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004220 muscle function Effects 0.000 description 2
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 2
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 2
- 230000007658 neurological function Effects 0.000 description 2
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 2
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 238000002638 palliative care Methods 0.000 description 2
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 2
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 2
- 230000009520 penetrating brain damage Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 2
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000000272 proprioceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NOHUXXDTQJPXSB-UHFFFAOYSA-N 2-acetyloxybenzoic acid;2-[[2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-4,8-di(piperidin-1-yl)pyrimido[5,4-d]pyrimidin-6-yl]-(2-hydroxyethyl)amino]ethanol Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O.C=12N=C(N(CCO)CCO)N=C(N3CCCCC3)C2=NC(N(CCO)CCO)=NC=1N1CCCCC1 NOHUXXDTQJPXSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 200000000007 Arterial disease Diseases 0.000 description 1
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000006096 Attention Deficit Disorder with Hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 208000036864 Attention deficit/hyperactivity disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101100168884 Drosophila melanogaster alpha-Cat gene Proteins 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010014498 Embolic stroke Diseases 0.000 description 1
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000044591 ErbB-4 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010015769 Extradural haematoma Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010007979 Glycocholic Acid Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000023329 Gun shot wound Diseases 0.000 description 1
- 102100027618 Heme transporter HRG1 Human genes 0.000 description 1
- 206010019468 Hemiplegia Diseases 0.000 description 1
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 description 1
- 101001081412 Homo sapiens Heme transporter HRG1 Proteins 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101001109792 Homo sapiens Pro-neuregulin-2, membrane-bound isoform Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N Meprobamate Chemical compound NC(=O)OCC(C)(CCC)COC(N)=O NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101150008132 NDE1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 101800000933 Non-structural protein 10 Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000016979 Other receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101001081402 Rattus norvegicus Histidine-rich glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 208000002667 Subdural Hematoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 206010043647 Thrombotic Stroke Diseases 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 229940003558 aggrenox Drugs 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009925 apoptotic mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000028922 artery disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 208000015802 attention deficit-hyperactivity disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003906 autonomic nervous system functioning Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 1
- RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N buprenorphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]11CC[C@]3([C@H](C1)[C@](C)(O)C(C)(C)C)OC)CN2CC1CC1 RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N 0.000 description 1
- 229960001736 buprenorphine Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 229960001139 cefazolin Drugs 0.000 description 1
- MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N cefazolin Chemical compound S1C(C)=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CN3N=NN=C3)[C@H]2SC1 MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000001627 cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004298 cerebral vein Anatomy 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- FDEODCTUSIWGLK-RSAXXLAASA-N clopidogrel sulfate Chemical compound [H+].OS([O-])(=O)=O.C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl FDEODCTUSIWGLK-RSAXXLAASA-N 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000009850 completed effect Effects 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 229940072645 coumadin Drugs 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 229960002768 dipyridamole Drugs 0.000 description 1
- IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N dipyridamole Chemical compound C=12N=C(N(CCO)CCO)N=C(N3CCCCC3)C2=NC(N(CCO)CCO)=NC=1N1CCCCC1 IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 210000000959 ear middle Anatomy 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 231100000318 excitotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000063 excitotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000001097 facial muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 102000013361 fetuin Human genes 0.000 description 1
- 108060002885 fetuin Proteins 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N glycocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000035231 inattentive type attention deficit hyperactivity disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000003447 ipsilateral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 238000001310 location test Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 230000004066 metabolic change Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000004973 motor coordination Effects 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000007959 normoxia Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000002475 olfactory pathway Anatomy 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 235000003784 poor nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 208000028173 post-traumatic stress disease Diseases 0.000 description 1
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 239000011251 protective drug Substances 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000006176 redox buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 108010073863 saruplase Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 108010051423 streptavidin-agarose Proteins 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 108020001568 subdomains Proteins 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 210000000966 temporal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 210000003135 vibrissae Anatomy 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1808—Epidermal growth factor [EGF] urogastrone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1883—Neuregulins, e.g.. p185erbB2 ligands, glial growth factor, heregulin, ARIA, neu differentiation factor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области фармацевтики и медицины и касается способа введения полипептида, содержащего подобный эпидермальному фактору роста (EGF-подобный) домен, млекопитающему, где указанный способ включает: введение полипептида после неврологического повреждения у указанного млекопитающего и начало введения в пределах подострого окна после неврологического повреждения. Изобретение обеспечивает эффективное введение указанного фактора для ограничения повреждения головного мозга, восстановления функций и/или усиления восстановления после неврологического повреждения. 9 з.п. ф-лы, 19 пр., 4 табл., 18 ил.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Область изобретения относится к лечению неврологического повреждения центральной нервной системы. Более конкретно, изобретение относится к введению нейрегулина [например, глиального фактора роста 2 (GGF2)] субъекту во время не острого или хронического периода после травматического неврологического повреждения.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Повреждения центральной нервной системы (ЦНС) представляют собой серьезную проблему здравоохранения. Эта категория повреждений включают такие события, как ишемическое повреждение, геморрагическое повреждение, проникающая травма и не проникающая травма. Повреждения ЦНС, как правило, излечивают не полностью, оставляя субъекта с некоторой степенью стойкой дисфункции в диапазоне от чрезвычайно легкой до смерти. Остаточная дисфункция может включать моторные, сенсорные, когнитивные, эмоциональные и вегетативные аномалии.
Ключевая категория неврологического повреждения ЦНС включает повреждение головного мозга. Повреждение головного мозга представляет собой разрушительное состояние, приводящее к некоторой степени стойкой нетрудоспособности, включая моторную, сенсорную и когнитивную недостаточность и эмоциональную неустойчивость, такую как посттравматическое стрессовое расстройство, синдром нарушения внимания, депрессия и эмоциональная неустойчивость. Широко распространенные причины повреждения головного мозга включают ишемический инсульт, геморрагический инсульт, субдуральную гематому, эпидуральную гематому, закрытую травму черепа (при ускорении/торможении, сотрясении и вращении), проникающее повреждение головного мозга (огнестрельные раны и повреждения другими летящими предметами).
Инсульт является третьей из главных причин смерти и главной причинной инвалидизации в западном мире. Инсульт, таким образом, представляет собой большую социально-экономическую нагрузку. Этиология инсульта может являться либо ишемической, что является причиной большинства инсультов, либо геморрагической. Ишемический инсульт может быть вызван тромбом, который формируется где-нибудь в другом участке организма и продвигается через кровоток к головному мозгу (эмболический инсульт) или сгустком крови, формирующимся внутри артерии головного мозга (тромботический инсульт). После массовой гибели клеток в зоне центра немедленного инфаркта из-за отсутствия глюкозы и кислорода, область инфаркта расширяется в течение нескольких суток, за счет вторичных механизмов, таких как глутаматная эксайтотоксичность, апоптотические механизмы и образование свободных радикалов. После неврологических повреждений (например, ишемического события) у животных и человека функции могут восстанавливаться в течение нескольких суток, недель и месяцев без каких-либо терапевтических средств. Зачастую, однако, это восстановление является только частичным, и животные и люди страдают от стойкой инвалидности, которая может включать моторную, сенсорную и когнитивную недостаточность.
Факторы риска, увеличивающие вероятность того, что у индивидуума разовьется инсульт, хорошо известны. Они включают, и не ограничены ими, факторы риска, которые нельзя изменить: пожилой возраст, наследственность, острая церебральная энцефалопатия, пол, предшествующий инсульт или инфаркт миокарда в анамнезе; и факторы риска, которые можно изменить, излечить или контролировать: высокое кровяное давление, курение сигарет, сахарный диабет, заболевание сонной или другой артерии, фибрилляция предсердий, другое заболевание сердца, серповидноклеточная анемия, высокий уровень холестерина в крови, плохое питание и отсутствие физической активности и ожирение.
До настоящего времени, не паллиативное лечение ишемического инсульта ограничено введением терапевтических средств в острой фазе после инсульта. Острая фаза лежит в диапазоне от времени начала неврологического повреждения (например, инсульта) до приблизительно шести часов после неврологического повреждения. После острой фазы следует подострая фаза, которая лежит в диапазоне от приблизительно шести часов до двух суток после неврологического повреждения. Соответственно, современные не паллиативные лекарственные средства применяют в попытке обращения окклюзии кровотока, восстановления насыщения головного мозга кислородом и ограничения степени потери структур головного мозга. Не существует лекарственных средств для лечения инсульта, отличных от tPA, для применения в острой фазе. У пациентов остается некоторый уровень дисфункции, который в лучшем случае может улучшиться каким-либо эндогенным образом в течение приблизительно 60 суток. Это восстановление можно только дополнять физиотерапией. К сожалению, у многих пациентов остается стойкая нетрудоспособность с небольшой надеждой на улучшение.
К настоящему времени, единственным лекарственным средством, одобренным Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств (FDA) для лечения ишемического инсульта, является тканевой активатор плазминогена (tPA). tPA представляет собой сериновую протеазу, превращающую плазминоген в плазмин. Плазмин затем разрушает фибрин, являющийся компонентом тромбов, которые могут осуществлять окклюзию сосудов головного мозга и вызывать инсульты. Идеально вводить его в пределах трех часов от начала симптомов. Как правило, только 3%-5% индивидуумов, страдающих инсультом, попадают в больницу вовремя, чтобы для них рассматривали возможность этого лечения. В идеале, tPA вводят в пределах первых трех часов после окклюзии, но некоторые врачи-клиницисты могут вводить его настолько поздно, как через шесть часов после окклюзии. К сожалению, подавляющему большинству пациентов, пораженных инсультом, не удается достичь больницы вовремя, чтобы для них рассматривали возможность этого лечения. Тем пациентам, которые прибыли в больницу в пределах эффективного временного окна, tPA вводят в попытке обращения окклюзии кровотока, восстановления насыщения головного мозга кислородом и ограничения степени потери структур головного мозга. Однако, существуют некоторые существенные противопоказания, ограничивающие постоянное применение tPA. После начального периода приблизительно 3-6 часов, чаще всего, tPA может вызывать интрацеребральное кровотечение и геморрагический инсульт. По этим причинам, введение tPA ограничено острой фазой для достижения какой-либо терапевтической эффективности.
До настоящего времени не одобрено другой терапии для лечения инсульта. Другие экспериментальные виды терапии, такие как доставляемая в артерии про-урокиназа, исследуют в качестве потенциальных средств разрушения тромбов и восстановления кровотока. В научной литературе, однако, описано множество средств, как доказано, являющихся благоприятными для защиты вещества головного мозга и восстановления функций в экспериментальных моделях инсульта на животных. Все эти средства сфокусированы на уменьшение в острой фазе гибели клеток, воспаления и апоптоза и должны, таким образом, быть доставлены в течение нескольких часов (некоторые вплоть до 24 часов) после ишемического события. До настоящего времени является общепринятым, что лечение повреждения ЦНС, такого как инсульт, необходимо в острой фазе. (Abe et al., 2008, J Cereb Blood Flow Metab. JuI 23, электронная публикация до печатной, Sun et al., 2008, Stroke JuI 10, электронная публикация до печатной, страницы еще не известны); Dohare et al., 2008, Behav Brain Res. 193(2):289-97; Belayev et al., 2001, Stroke 32(2):553-60).
Однако не показано, что такие средства ограничивают повреждение головного мозга, восстанавливают функции или усиливают восстановление после инсульта при введении после периода задержки нескольких часов, самое большее, в некоторых экспериментальных моделях, через приблизительно одни сутки после инсульта. Единственной терапией, для которой, как известно, показана эффективность в течение нескольких суток и недель после инсульта, является паллиативная или реабилитационная, например трудотерапия или физиотерапия. Действительно, авторам настоящего изобретения неизвестно, что для каких-либо агентов или лекарственных средств показано усиление восстановления в течение нескольких суток или недель после инсульта.
После острой окклюзии, часто присутствует локализованный участок поврежденного вещества головного мозга, окруженный зоной полутени, которая может погибнуть в течение нескольких часов, если не восстановить кровообращение. Время до гибели этой зоны полутени можно продлить на несколько часов в экспериментальных моделях с помощью нейропротекторов, таких как антагонисты NMDA, блокаторы кальциевых каналов, поглотители свободных радикалов и средства-ловушки, антиапоптотические средства, ингибиторы каспазы, ингибиторы parp и т.д. Для этой цели «нейропротектор» представляет собой что-то, что может сохранять нейроны до того, как они погибнут от множества инсультов, воздействующих на них в острой фазе. Однако, после 24-48 часов, мало надежды на защиту клеток от некротической гибели и, в то время как апоптотическая гибель продолжается в течение нескольких суток (См. фигуру 1). Не доказано, что терапевтическое окно для антиапоптотических лекарственных средств намного шире, чем для протективных лекарственных средств в острой фазе [Schulz et al., 1998, Cell Death Differ. 5(10):847-57; Komjati et al., 2004, Int J Mol. Med. 13(3):373-82].
Нейрегулин обладает нейропротекторными свойствами, для которых, подобно другим средствам, описанным выше, показано преимущество для уменьшения нетрудоспособности, наблюдаемое при введении животным в пределах нескольких часов после инсульта. См. патентную заявку Соединенных Штатов с регистрационным номером 09/530884, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Принимая во внимание распространение неврологических повреждений, в частности, в отношении инсульта, существует необходимость в лекарственных средствах, которые можно эффективно вводить субъектам для ограничения повреждения головного мозга, восстановления функций и/или усиления восстановления после неврологического повреждения.
Нейрегулины (NRG) и рецепторы NRG включают систему фактор роста-рецепторная тирозинкиназа для передачи сигнала от клетки к клетке, которая вовлечена в органогенез в нервной, мышечной, эпителиальной, и других тканях (Lemke, Mol. Cell. Neurosci. 7:247-262, 1996 и Burden et al., Neuron 18:847-855, 1997). Семейство NRG состоит из четырех генов, кодирующих многочисленные лиганды, содержащие подобные эпидермальному фактору роста (EGF), иммуноглобулинам (Ig), и другие узнаваемые домены. Многочисленные секретируемые и связанные с мембраной изоформы функционируют как лиганды в этой системе передачи сигнала. Все рецепторы для лигандов NRG являются членами семейства рецепторов EGF (EGFR) и включают EGFR (или ErbBl), ErbB2, ErbB3 и ErbB4, известные также как HER1 - HER4, соответственно, у человека (Meyer et al., Development 124:3575-3586, 1997; Orr- Urtreger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 1867-71, 1993; Marchionni et al., Nature 362:312-8, 1993; Chen et al., J. Comp. Neurol. 349:389-400, 1994; Corfas et al., Neuron 14:103- 115, 1995; Meyer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:1064-1068, 1994; и Pinkas-Kramarski et al., Oncogene 15:2803-2815, 1997).
Четыре гена NRG, NRG-1, NRG-2, NRG-3 и NRG-4, картированы в отдельных хромосомных локусах (Pinkas-Kramarski et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9387-91, 1994; Carraway et al., Nature 387:512-516, 1997; Chang et al., Nature 387:509-511, 1997; и Zhang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:9562-9567, 1997), и в совокупности кодируют разнообразное множество белков NRG. Продукты гена NRG-1, например, включают группу из приблизительно 15 отдельных структурно родственных изоформ (Lemke, Mol. Cell. Neurosci. 7:247-262, 1996 и Peles and Yarden, BioEssays 15:815-824, 1993). Первые идентифицированные изоформы NRG-1 включают фактор дифференцировки Neu (NDF; Peles et al., Cell 69, 205-216, 1992 и Wen et al., Cell 69, 559- 572, 1992), херегулин (HRG; Holmes et al., Science 256:1205-1210, 1992), фактор, индуцирующий активность рецепторов ацетилхолина (ARIA; Falls et al., Cell 72:801-815, 1993), и глиальные факторы роста GGF1, GGF2 и GGF3 (Marchionni et al. Nature 362:312-8, 1993).
Ген NRG-2 идентифицирован клонированием по гомологии (Chang et al., Nature 387:509-512, 1997; Carraway et al., Nature 387:512-516, 1997; и Higashiyama et al., J. Biochem. 122:675-680, 1997) и посредством геномных подходов (Busfield et al., Mol. Cell. Biol. 17:4007-4014, 1997). кДНК NRG-2 известны также как происходящий из нервов и тимуса активатор киназы ErbB (NTAK; Инвентарный № в Genbank AB005060), ответвление нейрегулина (Don-1) и происходящий из мозжечка фактор роста (CDGF; Патентная заявка PCT WO 97/09425). Экспериментальное свидетельство показывает, что клетки, экспрессирующие ErbB4 или комбинацию ErbB2/ErbB4, по-видимому, обладают особенно сильным ответом на NRG-2 (Pinkas-Kramarski et al., Mol. Cell. Biol. 18:6090-6101, 1998). Известно также, что продукт гена NRG-3 (Zhang et al., выше) связывает и активирует рецепторы ErbB4 (Hijazi et al., Int. J. Oncol. 13:1061-1067, 1998).
EGF-подобный домен присутствует в коре всех форм NRG и является необходимым для связывания и активации рецепторов ErbB. Выведенные аминокислотные последовательности EGF-подобных доменов, кодируемых тремя генами, являются приблизительно на 30-40% идентичными (попарные сравнения). Кроме того, по-видимому, существует по меньшей мере две субформы EGF-подобных доменов в NRG-1 и NRG-2, которые могут придавать различные виды биологической активности и тканеспецифической активности.
Ответы клеток на NRG опосредованы через NRG рецепторные тирозинкиназы EGFR, ErbB2, ErbB3 и ErbB4 из семейства рецептора эпидермального фактора роста. Высокоаффинное связывание всех NRG принципиально опосредовано через ErbB3 или ErbB4. Связывание лигандов NRG приводит к димеризации с другими субъединицами ErbB и трансактивации посредством фосфорилирования специфических остатков тирозина. В определенных экспериментальных условиях почти все комбинации рецепторов ErbB, по-видимому, способны формировать димеры в ответ на связывание с изоформами NRG-1. Однако, по-видимому, ErbB2 является предпочтительным партнером для димеризации, который может играть важную роль в стабилизации комплекса лиганд-рецептор. ErbB2 не связывает лиганд самостоятельно, но должен являться гетерологично спаренным с одним из других подтипов рецептора. ErbB3 не обладает тирозинкиназной активностью, но является мишенью для фосфорилирования другими рецепторами. Известно, что экспрессия NRG-1, ErbB2 и ErbB4 является необходимой для образования трабекул миокарда желудочка при развитии мыши.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к новому способу лечения после неврологического повреждения у млекопитающего. Способ основан на наблюдении, что терапевтических преимуществ полипептида, содержащего подобный эпидермальному фактору роста (EGF-подобный) домен, можно достигать введением терапевтически эффективного количества полипептида млекопитающему; в конкретных вариантах осуществления лечение проводят на или через час 1, час 2, час 8, час 12, час 24, час 30, час 36, час 42, сутки 2 или позже после неврологического повреждения. В одном варианте осуществления изобретения лечение начинают после острого окна после повреждения. В одном варианте осуществления изобретения лечение начинают после подострого окна после повреждения. В одном варианте осуществления изобретения лечение начинают во время и еще продолжают после острого окна после повреждения. В одном варианте осуществления изобретения лечение начинают во время и еще продолжают после подострого окна после повреждения.
Соответственно, настоящее изобретение относится к введению полипептида (или кодирующей полипептид нуклеиновой кислоты), содержащего EGF-подобный домен, млекопитающему, начиная на сутки 1, 2 или 3, даже вплоть до суток 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 включительно; неделю или более чем одну неделю, две недели или более двух недель после неврологического повреждения; три недели или более трех недель после неврологического повреждения; четыре недели или более четырех недель после неврологического повреждения; один месяц или более одного месяца после неврологического повреждения; два месяца или более двух месяцев после неврологического повреждения; три месяца или более трех месяцев после неврологического повреждения; четыре месяца или более четырех месяцев после неврологического повреждения; пять месяцев или более пяти месяцев после неврологического повреждения; шесть месяцев или более шести месяцев после неврологического повреждения. В соответствии с настоящим изобретением EGF-подобный домен кодирован геном нейрегулина. Введение по изобретению включает введение пептида, содержащего EGF-подобный домен, или кодирующей его молекулы нуклеиновой кислоты, в количестве, эффективном для лечения в хронической фазе после неврологического повреждения у млекопитающего.
Другой аспект изобретения относится к способу стимуляции неврологического восстановления во время периода, лежащего за пределами острой или подострой фазы после ишемического события у млекопитающего. Лечение по изобретению можно начинать в пределах острого или подострого периода, но оно включает по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять, шесть или более шести обработок за пределами острого или подострого периода, соответственно.
Способ по изобретению включает введение полипептида, содержащего подобный эпидермальному фактору роста (EGF-подобный) домен, указанному млекопитающему, где указанный EGF-подобный домен кодирован геном нейрегулина (NRG)-1, и указанное введение проводят по меньшей мере через двое или трое, или четверо суток после ишемического события, хотя лечение можно начинать в пределах острых или подострых временных рамок, и в терапевтически эффективном количестве, достаточном для стимуляции неврологического восстановления во время хронической фазы после ишемического события у указанного млекопитающего.
В конкретных вариантах осуществления изобретения, ген нейрегулина может представлять собой ген NRG-1, ген NRG-2, ген NRG-3 или ген NRG-4. Полипептид нейрегулина по изобретению может, в свою очередь, являться кодированным одним из этих четырех генов нейрегулинов; полипептид нейрегулина по изобретению может, в свою очередь, являться кодированным вариантом или гомологом любого одного из этих четырех генов нейрегулинов. См. на фиг.6A-6D последовательности аминокислот и нуклеиновой кислоты полноразмерного GGF2 человека, изоформы NRG-1.
В аспекте изобретения, подходящие млекопитающие включают, в качестве неограничивающих примеров, мышей, крыс, кроликов, собак, обезьян или свиней. В более конкретном варианте осуществления изобретения, млекопитающее представляет собой человека.
Определения
Как используется в настоящем документе, термин «приблизительно» включает указанное значение плюс или минус 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15% от указанного значения. В одном варианте осуществления, «приблизительно» обозначает 98-102% от указанного значения. В одном варианте осуществления, «приблизительно» обозначает 95-105% от указанного значения.
После повреждения, «острая фаза» лежит в диапазоне от времени начала неврологического повреждения (например, инсульта) до приблизительно шести часов после неврологического повреждения. За острой фазой следует «подострая фаза», которая лежит в диапазоне от приблизительно шести часов до двух суток после неврологического повреждения. В одном варианте осуществления «подострая фаза» лежит в диапазоне от приблизительно шести часов до трех суток после неврологического повреждения. Период после подострой фазы обозначают как «хроническая фаза» после неврологического повреждения. Пост-острая фаза включает как подострый, так и хронический периоды после повреждения.
Под «подобным эпидермальному фактору роста доменом» или «EGF-подобным доменом» понимают полипептидный мотив, кодируемый геном NRG-1, NRG-2 или NRG-3, который связывает и активирует ErbB2, ErbB3, ErbB4 или их сочетания и обладает структурным сходством со связывающим EGF рецептор доменом, как описано в Holmes et al., Science 256:1205-1210, 1992; Патенте США № 5530109; Патенте США № 5716930; Патенте США № 7037888; Hijazi et al., Int. J. Oncol. 13:1061-1067, 1998; Chang et al., Nature 387:509-512, 1997; Carraway et al., Nature 387:512- 516, 1997; Higashiyama et al., J Biochem. 122:675-680, 1997; и WO 97/09425). См. на фиг.7-12 последовательность нуклеиновой кислоты и аминокислотную последовательность, соответствующие доменам 1-6 EGFL, кодируемого геном NRG-1.
Под «экспрессирующим вектором» понимают сконструированные с помощью генной инженерии плазмиду или вирус, полученные, например, из бактериофага, аденовируса, ретровируса, поксвируса, вируса герпеса, или искусственную хромосому, которые используют для переноса последовательности, кодирующей полипептид (например, нейрегулин), функционально связанный с промотором, в клетку-хозяина, так что кодируемый пептид или полипептид экспрессируется в клетке-хозяине.
Термины «неврологическое повреждение» и «повреждение» в настоящем документе часто используют взаимозаменяемо, «неврологическая травма» представляет собой один вариант «неврологического повреждения», и ее, как правило, можно рассматривать как синоним. «Неврологическое повреждение» представляет собой повреждение, вызывающее некоторое разрушение или гибель нервной ткани. Неврологическое повреждение, как правило, имеет в качестве последствий некоторые потери, например, снижение ментальной, сенсорной или мышечной функции.
«Нейропротектор» представляет собой что-то, что может сохранять нейроны до того, как они погибнут от множества инсультов, воздействующих на них в острой или подострой фазе после повреждения. После острой окклюзии часто присутствует локализованный участок поврежденного вещества головного мозга, окруженный зоной полутени, которая может погибнуть в течение нескольких часов, если не восстановить кровообращение. Время до гибели этой зоны полутени можно продлить на несколько часов в экспериментальных моделях с помощью «нейропротекторов», таких как антагонисты NMDA, блокаторы кальциевых каналов, поглотители свободных радикалов и средства-ловушки, антиапоптотические средства, ингибиторы каспазы, ингибиторы parp и т.д. Для этой цели «нейропротектор» представляет собой что-то, что может сохранять нейроны до того, как они погибнут от множества инсультов, воздействующих на них в острой фазе.
Под «нейрегулином» или «NRG» понимают полипептид, который является кодированным геном или нуклеиновой кислотой (например, кДНК) NRG-1, NRG-2, NRG-3 или NRG-4, и связывает и активирует рецепторы EGFR, ErbB1, ErbB2, ErbB3, или ErbB4, или их комбинации.
Под «нейрегулином-1», «NRG-1», «херегулином», «GGF2» или «лигандом p185erbB2» понимают полипептид, который связывает рецептор ErbB2 и является кодированным геном лиганда p185erbB2, описанным в Патенте США № 5530109; Патенте США № 5716930; и Патенте США № 7037888, полное содержание каждого из которых приведено в настоящем описании в качестве ссылки. Связывание с рецептором erbB2 может являться опосредованным через гетерологичное спаривание рецептора erbB2 с erbB1, erbB3 или erbB4.
Под «подобным нейрегулину полипептидом» понимают полипептид, который обладает EGF-подобным доменом, кодируемым геном нейрегулина, и связывает и активирует EGFR, ErbB1, ErbB-2, ErbB-3, ErbB-4 или их комбинацию. Связывание с рецептором erbB2 может являться опосредованным через гетерологичное спаривание рецептора erbB2 с erbBl, erbB3 или erbB4.
Как применяют в настоящем документе, термин «неврологическое восстановление» используют для обозначения процесса, посредством которого нервная система восстанавливает свое функционирование до нормального состояния после повреждения, заболевания, инфекции или другого нарушения нервной системы, головного мозга, спинного мозга или периферических нервов.
Под «функционально связанным» понимают, что нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид (например, кДНК), и одна или несколько регуляторных последовательностей соединены таким образом, чтобы позволять экспрессию гена, когда соответствующие молекулы (например, белки - активаторы транскрипции) связываются с регуляторными последовательностями.
Как применяют в настоящем документе «пептид» содержит, в основном состоит из, или состоит из пептида приблизительно из: 625, 600, 575, 550, 525, 500, 475, 450, 425, 400, 375, 350, 325, 300, 275, 250, 225, 200, 175, 150, 125, 100, 75, 50 или менее 50 аминокислот.
Под «промотором» понимают минимальную последовательность, достаточную для управления транскрипцией. Изобретение относится также к тем промоторным элементам, которые являются достаточными для осуществления зависимой от промотора экспрессии гена, которую можно контролировать для типа клеток или физиологического статуса (например, состояние гипоксии против состояния нормоксии), или можно индуцировать внешними сигналами или средствами; такие элементы могут быть локализованы в 5'- или 3'-, или внутренних областях нативного гена.
Термин «терапевтически эффективное количество» предназначен для обозначения такого количества лекарственного средства или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или медицинский ответ в ткани, системе, у животного или человека, как считает исследователь, ветеринар, лечащий врач или другой клиницист. Терапевтическое изменение представляет собой изменение поддающихся измерению биохимических характеристик в том направлении, которое, как ожидают, облегчает рассматриваемое заболевание или состояние. Более конкретно, «терапевтически эффективное количество» представляет собой количество, достаточное для уменьшения симптомов, связанных с медицинским состоянием или инвалидностью, для нормализации функций организма при заболевании или нарушениях, приводящих к ухудшению конкретных функций организма, или для обеспечения улучшения одного или нескольких поддающихся измерению в клинических условиях параметров заболевания.
Как применяют в настоящем документе, термин «лечение» означает получение восстановления после неврологического повреждения, где в ином случае его бы не было; увеличение скорости естественного восстановления после неврологического повреждения; или стимуляцию восстановления до более высокого уровня функционирования. Без связи с теорией, не ожидают, что в хроническом окне после повреждения возможно уменьшать какую-либо дальнейшую гибель нервов, т.е., это понимают в том смысле, что нервы погибают ко времени начала хронического окна. Однако, лечение по изобретению включает во время хронического периода, например, уменьшение снижения функций или жизнеспособности ткани (например, мышцы или кости), которые в ином случае могут происходить в ткани, обслуживаемой входящим в ее состав нервом. Кроме того, лечение по изобретению включает во время хронического периода, например, уменьшение атрофии (например, мышцы или кости), которая в ином случае может происходить в ткани, обслуживаемой входящим в ее состав нервом.
Под «трансформированной клеткой» понимают клетку (или потомство клетки), в которую молекула ДНК, кодирующая нейрегулин или полипептид, обладающий EGF-подобным доменом нейрегулина, введена посредством способов рекомбинантной ДНК или известных способов генотерапии.
Если не определено иначе, все технические и научные термины применяемые в настоящем документе, обладают таким же значением, которое является общепринятым для обычного специалиста в области, к которой относится это изобретение.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг.1 показана схема прогрессирующих фаз после инсульта/ишемии. На фигуре «OT» обозначает трудотерапию, и «PT» обозначает физиотерапию.
На фиг.2 показаны баллы поведения передних конечностей после постоянного лигирования средней мозговой артерии. Крыс обрабатывали GGF2, NRG1, FGF или носителем, как указано. Для FGF и GGF2 при 100 мкг/кг показали значимое улучшение на сутки 21 теста поведения теста поведения. (¶, +, ¥, * обозначают значимые отличия от носителя для bFGF, NRG1, GGF2 при 6,5 мкг/кг и GGF2 при 100 мкг/кг по ANOVA и апостериорному тесту Тьюки).
На фиг.3 показаны баллы поведения задних конечностей после постоянного лигирования средней мозговой артерии. Крыс обрабатывали GGF2, NRG1, FGF или носителем, как указано. GGF2 при 6,5 мкг/кг и NRG при 1,0 мкг/кг были значимо лучше носителя на сутки 7 и 14 тестирования поведения, но не в конечной точке исследования на сутки 21. GGF2 при 100 мкг/кг и FGF были значимо лучше носителя во всех моментах времени тестирования поведения после обработки. (¶, +, ¥, * обозначают значимые отличия от носителя для bFGF, NRG1, GGF2 при 6,5 мкг/кг и GGF2 при 100 мкг/кг кг по ANOVA и апостериорному тесту Тьюки).
На фиг.4 показаны баллы поведения поворота тела после постоянного лигирования средней мозговой артерии. Крыс обрабатывали GGF2, NRG1, FGF или носителем, как указано. GGF2 при 100 мкг/кг и FGF были значимо лучше носителя на сутки 21. (¶, +. ¥, * обозначают значимые отличия от носителя для bFGF, NRG1, GGF2 при 6,5 мкг/кг и GGF2 при 100 мкг/кг по ANOVA для повторных измерений и апостериорному тесту Тьюки).
На фиг.5A показаны баллы поведения передних конечностей после постоянного лигирования средней мозговой артерии. Крыс обрабатывали GGF2, начиная на 1, 3 или 7 сутки после лигирования. GGF2 вводили при 0,1 мг/кг, IV ежесуточно в течение 10 суток. Баллы поведения передних конечностей были значимо лучше, чем для носителя, при всех парадигмах обработки во временной точке 21 сутки.(*, ¥, + обозначают значимые отличия от носителя для групп с началом обработки на сутки 1, 3 и 7, соответственно, по ANOVA для повторных измерений и апостериорному тесту Тьюки).
На фиг.5B показаны баллы поведения задних конечностей после постоянного лигирования средней мозговой артерии. Крыс обрабатывали GGF2, начиная на 1, 3 или 7 сутки после лигирования. GGF2 вводили при 0,1 мг/кг, IV ежесуточно в течение 10 суток. Баллы поведения задних конечностей были значимо лучше, чем для носителя, когда обработку начинали на 1 или 7 сутки после лигирования, и были лучше по сравнению с носителем, когда обработку начинали на сутки 3 после лигирования, во временной точке сутки 21. (*, ¥, + обозначают значимые отличия от носителя для групп с началом обработки на сутки 1, 3 и 7, соответственно по ANOVA для повторных измерений и апостериорному тесту Тьюки).
На фиг.5C показаны баллы поведения поворота тела после постоянного лигирования средней мозговой артерии. Крыс обрабатывали GGF2, начиная на 1, 3 или 7 сутки после лигирования. GGF2 вводили при 0,1 мг/кг, IV ежесуточно в течение 10 суток. Баллы поворота тела были значимо лучше, чем для носителя, когда обработку начинали на 1 сутки после лигирования, и были лучше по сравнению с носителем, когда обработку начинали на сутки 3 или 7 после лигирования. (*, ¥, + обозначают значимые отличия от носителя для групп с началом обработки на сутки 1, 3 и 7, соответственно, по ANOVA для повторных измерений и апостериорному тесту Тьюки).
На фиг.6A-D показаны последовательность нуклеиновой кислоты и аминокислотная последовательность полноразмерного GGF2.
На фиг.7-12 показаны последовательности нуклеиновой кислоты и аминокислотные последовательности подобных эпидермальному фактору роста (EGFL) доменов 1-6.
На фиг.13 показаны последовательность нуклеиновой кислоты и аминокислотная последовательность подобного эпидермальному фактору роста пептида для гена NRG-1.
На фиг.14 показаны последовательность нуклеиновой кислоты и аминокислотная последовательность подобного эпидермальному фактору роста (EGFL) бета-фрагмента из NRG-1.
На фиг.15 показаны последовательность нуклеиновой кислоты и аминокислотная последовательность подобного эпидермальному фактору роста (EGFL) альфа-фрагмента из NRG-1.
На фиг.16 показаны последовательность нуклеиновой кислоты и аминокислотная последовательность подобного эпидермальному фактору роста (EGFL) альфа-фрагмента из NRG-2 альфа.
На фиг.17 показаны последовательность нуклеиновой кислоты и аминокислотная последовательность подобного эпидермальному фактору роста (EGFL) альфа-фрагмента из NRG-2 бета.
На фиг.18 показано выравнивание аминокислотных последовательностей различных EGF-подобных пептидов. EGF-подобный домен можно определить как суб-домены NRG, для которых выравнивание последовательности выявляет по меньшей мере 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 % гомологии аминокислотной последовательности по сравнению с молекулой EGF человека (последовательность P01133|971-1023, внизу выравнивания на фигуре). Гомологичные аминокислоты обладают идентичными, консервативными или полуконсервативными физико-химическими и структурными свойствами, как обозначено символами '*', ':' и '.', соответственно.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Как указано в настоящем документе, не паллиативное лечение ишемического инсульта до настоящего времени ограничено терапевтическим введением лекарственных средств в острой фазе после инсульта.
Немедленная гибель клеток обусловлена, по меньшей мере частично, недостатком кислорода, наблюдаемым на протяжении острой фазы. Более того, как показано на фиг.1, окклюзия кровотока приводит к высвобождению внутриклеточных запасов свободных радикалов, глутамата, и кальция и натрия, которые, как считают, разрушают ткани головного мозга и расширяют область повреждения.
Подострая фаза, приблизительно от шести часов до двух суток (или трех суток, по некоторым определениям) после неврологического повреждения, характеризуется продолжающимся высвобождением свободных радикалов, выбросом глутамата, высвобождением кальция и натрия, недостатком кислорода в области окклюзии и немедленной локализованной гибелью клеток. До настоящего времени не существует одобренных для применения в клинике средств для применения у человека во время подострой фазы после инсульта.
Как показано на фиг.1, ограниченное окно для фармацевтической терапии после неврологического повреждения по меньшей мере частично можно объяснить патофизиологией повреждения и его прогрессированием с течением времени. Например в пределах нескольких минут окклюзии, нейроны в центре инфаркта разрушаются. Несколько часов после окклюзии, свободные радикалы, эксайтотоксические и провоспалительные агенты высвобождаются/продуцируются, и эти молекулы продолжают разрушать ткани головного мозга и расширять область повреждения. Степень повреждения можно ограничить, как описано выше, посредством восстановления кровотока (с использованием одобренного для применения в клинике средства для разрушения тромбов, т.е., tPA) и таким образом, достижения восстановления снабжения кислородом пораженной области.
Как указано в научной литературе, различные соединения, по-видимому, обладают эффективностью в остром и подостром периодах. Однако, после отметок 24, 36 или 48 часов после неврологического повреждения ЦНС, потенциальные терапевтические средства прогрессивно теряют способность к лечению повреждения. Фактически, некоторые из терапевтических воздействий, например, tPA, которые оказывали эффект в остром периоде, начинают обладать серьезными, опасными для жизни противопоказаниями с течением времени после повреждения.
Несколько суток, недель или месяцев после ишемического события, во время хронической фазы после инсульта, способы терапии должны быть направлены на стимуляцию неврологического восстановления. Стимуляция неврологического восстановления после травматического события, такого как инсульт в центральной нервной системе, включает совершенно другие физиологические феномены и терапевтические способы, чем действовали в пре-хроническом окне. Пре-хронические способы лечения, как правило, включают средства, целью которых является восстановление кровотока и уменьшение острой гибели клеток. В отличие от этого, лекарственное средство, которое можно эффективно вводить через 48 часов или более, или через 72 часа или более после повреждения, отличается от лекарственных средств для острой фазы по его способности восстанавливать функции без изменения размера ишемического повреждения. В одном варианте осуществления, лечение по изобретению начинают после по существу полной гибели ишемического очага ЦНС после повреждения; под «по существу полной гибелью ишемического очага ЦНС после повреждения» понимают, что произошла гибель клеток ЦНС, являющаяся прямым последствием ишемического события, другая гибель клеток, вызванная возрастом или терапией (независимо от того, разработана ли терапия для нацеливания на ишемию), не входит в объем этого определения.
Как показано в настоящем документе, авторы настоящего изобретения показали, что нейрегулины являются эффективными для восстановления неврологической функции во время хронической фазы травматического неврологического повреждения. В одном варианте осуществления, травматическое неврологическое повреждение представляет собой ишемический инсульт. Как описано в настоящем описании, авторы настоящего изобретения сделали неожиданное открытие, что нейрегулин является эффективным, если дозирование начинают во время хронической фазы после ишемического события. Даже более неожиданным является открытие, что нейрегулин является эффективным, даже если дозирование начинают настолько поздно, как через 7 суток после ишемического события.
Настоящие данные показывают, что полученные благоприятные исходы не происходят по таким же механизмам, которые, как обнаружено, являются эффективными при лечении немедленно после ишемии. Лечение нейрегулином во время хронической фазы после инсульта не изменяет размер ишемического очага (смотри таблицу 1). Это ясно показывает, что острая и подострая фазы патофизиологии завершены в этих фазах, и нейрегулин, вводимый во время хронической фазы, стимулирует неврологическое восстановление, а не создает реперфузию и защиту нейронов.
Таблица 1 | |
Объем инфаркта (%) | |
bFGF | 21,3±3,3 |
NRG 1,0 мкг/кг | 26,8±3,0 |
GGF2 6,5 мкг/кг | 27,1±3,7 |
GGF2 100 мкг/кг | 26,3±3,5 |
Носитель | 25,0±3,5 |
Композиции по изобретению
Как указано выше, нейрегулины представляют собой полипептиды, кодируемые генами NRG-1, NRG-2, NRG-3 или NRG-4 и обладают EGF-подобными доменами, которые позволяют им связывать и активировать рецепторы ErbB. Holmes et al. (Science 256:1205-1210, 1992) показали, что одного EGF-подобного домена достаточно для связывания и активации рецептора p185erbB2. Соответственно, любой полипептидный продукт, кодируемый геном NRG-1, NRG-2, NRG-3 или NRG-4, или любой подобный нейрегулину полипептид, например, полипептид, обладающий EGF-подобным доменом, кодируемым геном или кДНК нейрегулина (например, EGF-подобный домен, содержащий субдомены C-C/D или C-C/D' пептида NRG-1, как описано в USPN 5530109, USPN 5716930, и USPN 7037888; или EGF-подобный домен, как описано в WO 97/09425), можно применять в способах по изобретению. Композиция по изобретению может присутствовать в единичной дозированной форме. Наборы, содержащие композиции по изобретению и/или инструкции по изобретению, также входят в объем настоящего изобретения.
Композиции по изобретению можно вводить пациентам вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем или наполнителем. Общепринятые фармацевтические способы применяют для получения составов или композиций для введения таких композиций пациентам или экспериментальным животным. Хотя внутривенное введение является предпочтительным, можно применять любой подходящий способ введения, например, парентеральное, подкожное, внутримышечное, интракраниальное, интраорбитальное, внутриглазное, интравентрикулярное, интракапсулярное, интраспинальное, интрацистернальное, внутрибрюшинное, интраназальное, аэрозольное, пероральное или чрескожное (например, посредством применения пластыря, несущего состав, способный пересекать дерму и проникать в кровоток) или местное введение.
Терапевтические составы могут присутствовать в форме жидких растворов или суспензий; для перорального введения составы могут присутствовать в форме таблеток или капсул; и для интраназальных составов, в форме порошков, назальных капель или аэрозолей. Способы, хорошо известные в данной области для получения составов, обнаружены, например, в «Remington's Pharmaceutical Sciences». Составы для парентерального введения могут, например, содержать наполнители, стерильную воду или солевой раствор, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения или гидрогенизированные нафталины. Другие потенциально применимые системы парентеральной доставки для введения молекул по изобретению включают частицы сополимера этилена-винилацетата, осмотические насосы, имплантируемые системы для инфузии и липосомы. Составы для ингаляции могут содержать наполнители, например, лактозу, или могут представлять собой водные растворы, содержащие, например, полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир, гликохолат и дезоксихолат, или могут представлять собой масляные растворы для введения в форме назальных капель или в форме геля.
Дополнительный аспект изобретения относится к настоящим соединениям для применения в качестве фармацевтического средства, особенно для лечения или предотвращения вышеупомянутых состояний и заболеваний. Настоящая заявка относится также к применению настоящих соединений в изготовлении лекарственного средства для лечения или предотвращения одного из вышеупомянутых состояний и заболеваний.
Что касается внутривенных инъекций, уровни доз, как правило, лежат в диапазоне от одного значения из следующего списка до наибольшего значения в списке: приблизительно 0,001 мг/кг, приблизительно 0,01 мг/кг, приблизительно 0,1 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг и приблизительно 10 мг/кг. Периодичность дозирования, как правило, лежит в равномерных интервалах времени от приблизительно каждых 24, 48, 72 или 96 часов. В альтернативном варианте осуществления, периодичность дозирования, как правило, лежит в равномерных интервалах времени от приблизительно каждых 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 суток. В альтернативном варианте осуществления, периодичность дозирования, как правило, лежит в равномерных интервалах времени от приблизительно каждых 1, 2, 3, 4 или 5 недель. После периода такого дозирования можно применять менее частое дозирование, например, ежемесячно, каждые три месяца, каждые четыре месяца или ежегодно.
Чрескожные дозы выбирают так, чтобы обеспечивать по существу идентичные, сходные или более низкие физиологические уровни (в плазме, ткани, CSF), по сравнению с теми, которые достигают с использованием инъекционных доз.
Соединения по изобретению можно вводить в качестве единственного активного средства, или их можно вводить в комбинации с другими средствами, включая другие соединения, которые, как можно обнаружить, обладают такой же или сходной терапевтической активностью, и которые, как определили, являются безопасными и эффективными для такого комбинированного введения. Другие такие соединения, рассматриваемые для применения для лечения острого или подострого неврологического повреждения, включают гематопоэтические факторы (например, G-CSF и/или GM-CSF); вещества, обладающие тромболитической активностью, например, tPA, стрептокиназа, урокиназа, и/или Анкрод; антитромбоцитарные средства, такие как ацетилсалициловая кислота (аспирин), клопидогрел (Плавикс), аспирин, комбинированный с дипиридамолом с продленным высвобождением (Аггренокс); антикоагулянты, такие как варфарин (Кумадин) или Гепарин; и/или вещества, мешающие передаче сигналов апоптоза (например, ингибиторы каспаз) или прогестерон. Понятно, однако, что вышеуказанные соединения вводят в профилактических целях до инсульта (например, в случае антитромбоцитарных средств или антикоагулянтов), или во время острой фазы после инсульта (tPA).
Для оценки моторной, сенсорной или когнитивной недостаточности, которые эффективно лечат в соответствии с настоящим изобретением, несколько способов доступно в данной области. Хорошо известные показатели для мониторирования эффективности лечения, включающие краткую шкалу оценки психического статуса (MMSE), модифицированную краткую шкалу оценки психического статуса (3MS), измерение функциональных нарушений (FIM), тест Бартеля, показатель двигательной активности Фугля-Мейера, тест моторных функций Вольфа, тест моторной функции верхней конечности Джебсена-Тейлора, Ноттингемский профиль здоровья, часть 1 и шкалу оценки моторной активности (MAS), шкалу оценки моторной активности Сординга (SMES), шкалу равновесия Берга (BBS) и шкалу повседневной активности Бартеля (ADL), и другие клинические тесты, такие как измерения аффекта, речи, глотания, когнитивности, моторной координации, силы, чувствительности и функций вегетативной нервной системы, так же как показатели выживаемости и госпитализации, можно использовать для оценки прогрессирования заболевания.
После повреждения, заболевания, инфекции или другого разрушения нервной системы, головной мозг, спинной мозг или периферические нервы не функционируют правильно из-за какого-либо сочетания обширного повреждения, апоптоза, нарушенных путей передачи сигнала и синапсов, воспаления, измененной химической среды, изменений метаболизма клеток и изменений транскрипции и трансляции в клетках. Как применяют в настоящем документе, термин «неврологическое восстановление» используют для обозначения процесса, посредством которого нервная система восстанавливает свое функционирование до нормального состояния. Этот процесс может происходить посредством коррекции, обхода, обращения или прекращения любой из упомянутых выше причин.
Более того, в настоящее время считают, что значительное неврологическое восстановление может происходить благодаря процессу, известному как «пластичность», посредством которого в нервной системе формируются новые связи для компенсации других изменений или адаптации к ним. Повреждения ЦНС вызывают нарушения связей локального и отдаленного радиуса действия, приводя к нарушениям функций и нетрудоспособности. Пластичность представляет собой событие, когда новые связи формируются между существующими нейронами. Показано, что пластичность является механизмом неврологического восстановления в системах ЦНС, включая зрительную систему (Pizzorusso et al.,) и спинной мозг (Fawcett JW (2009) Brain 132:1417-1418.). При пластичности новые синапсы формируются или существующие синапсы усиливаются, ослабляются или удаляются, чтобы позволить существующим структурам и системам компенсировать те, которые были разрушены или нарушены при повреждении. Другие формы пластичности могут включать изменение нейрохимии существующих клеток для изменения прямой синаптической передачи сигнала и паракринной передачи сигнала. Пластичность может также принимать форму изменения уровней рецепторов, чтобы сделать нейроны и другие клетки более или менее чувствительными к прямой синаптической или паракринной передаче сигнала. Эти процессы являются общепринятыми в качестве механизма обучения и памяти.
Обсуждение документов, действий, материалов, устройств, изделий и т.п. включено в это описание единственно с целью предоставления контекста для настоящего изобретения. Не предполагают или не представляют, что любой или все из этих объектов составляют часть основания из предшествующей области техники или представляют собой общеизвестные знания в области, относящейся к настоящему изобретению, до даты приоритета каждого пункта формулы этой заявки.
В то время как изобретение описано в связи с конкретными вариантами его осуществления, следует понимать, что возможны дополнительные модификации, и что эта заявка предназначена, чтобы включать любые варианты, применения или адаптации изобретения, в основном следующие принципам изобретения и включающие такие отклонения от настоящего описания, которые лежат в пределах известной или общепринятой практики в области, к которой относится изобретение, и которые можно применять к существенным признакам, указанным в настоящем документе выше, и которые следуют из объема прилагаемой формулы изобретения. Следующие примеры могут помочь специалистам в данной области лучше понять изобретение и его принципы и преимущества. Подразумевают, что эти примеры иллюстрируют изобретение и не ограничивают его объем.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Материалы и методы
Подготовка животных
Пятьдесят (50) взрослых самцов Sprague-Dawley использовали для исследования (заказали 10 дополнительных животных). Всех крыс содержали и держали в руках для оценки поведения в течение семи (7) суток до хирургической операции с целью акклиматизации. В конце периода содержания, крыс случайным образом распределяли и записывали в различные группы. Крысам присваивали уникальный идентификационный номер посредством маркировки хвоста. Десять дополнительных крыс содержали так же.
Хирургическая подготовка
Окклюзия средней мозговой артерии (MCAO), модель Тамура:
Эта модель хирургического повреждения у крыс является общепринятой моделью инсульта в данной области (Tamura et al, 1981, J Cereb Blood Flow Metab. 1(1):53-60; Tamura et al, 1981, J Cereb Blood Flow Metab. 1(1):61-9). Местные инфаркты головного мозга получали постоянной окклюзией проксимального отдела правой средней мозговой артерии (MCA) с использованием модификации способа Tamura et al. Самцов крыс Sprague-Dawley (300-400 г на время хирургической операции) подвергали анестезии 2-3% галотаном в смеси N2O:O2 (2:1), и поддерживали 1-1,5 % галотаном в смеси N2O:O2 (2:1). Височную мышцу разрезали пополам и отгибали через надрез, выполненный посредине между глазом и полостью среднего уха. Проксимальный отдел MCA обнажали посредством подвисочной краниэктомии без удаления челюстной дуги и без разрезания лицевого нерва. Затем артерию подвергали окклюзии микромощной биполярной коагуляцией от отдела, непосредственно проксимального по отношению к обонятельному тракту, до нижней вены головного мозга, и рассекали. Температуру тела поддерживали при 37,5°C±0,5°C на протяжении всей процедуры. Цефазолин (40 мг/кг; Baxter, Партия 06014.1, годный до января 2009), вводили внутрибрюшинно (i.p.) за одни сутки до MCAO и сразу после MCAO для предотвращения инфекций. Бупренорфин (NDC 12496-0757-1, Партия # 700Y02, годный до: 1 января 2010) s.c. (0,05-0,1 мг/кг) вводили перед хирургической операцией MCAO в качестве аналгезии.
Получение и дозирование соединений
GGF2 и NRG-1 (NRG-EGF)
Исходные растворы получали в Acorda Therapeutics и хранили при 0-5° C. Дозы составляли, как описано ниже:
Клонирование, экспрессия и очистка NRG-1 [домен EGF NRG1b2 (156Q)]
ДНК: Домен egf NRG1b2 клонировали из кДНК головного мозга человека и клонировали в вектор pet15b (Novagen кат # 69661-3) с использованием участков рестрикции Ndel и BamHl. Полученный белок составляет 6,92 кДа + His-метка ~3 кДа (=9,35 кДа).
Последовательность ДНК клона egf NRG1b2 в pet15
Подчеркнутые последовательности представляют собой участки клонирования (Nde1 и BamH1)
Конечный белок, транслируемый с вектора pet15b, показан ниже. Домен egf подчеркнут.
Теоретические pI/Mw: 7,69 / 9349,58
Экспрессия белка
Клоном трансформировали клетки B121 для экспрессии белка с использованием Экспресс-системы с автоиндукцей в течение ночи (Novagen) в среде LB при 25°C в течение 24 часов. Экспрессия происходила главным образом в нерастворимые тельца включения.
Повторное сворачивание белка: Адаптировано из набора для повторного сворачивания белка Novagen, 70123-3.
Очистка белка: Белок наносили на анионообменную колонку с DEAE при 2,5 мл/мин. Фрагмент NRG-1 оставался в проскоке, в то время как загрязнения связывались, и их элюировали при более высокой концентрации соли. Буфер для нанесения и промывки представляет собой 50 мМ Трис pH7,9, а буфер для элюции представляет собой 50 мМ Трис pH7,9 с 1М NaCl. Проскок объединяли и концентрировали с помощью Centriprep YM-3 от Millipore.
Вестерн-блоттинг: Экспрессию белка оценивали вестерн-блоттингом. Полученная полоса проходила приблизительно на уровне 10 кДа.
Разделяющий гель 4-20% (Biorad) использовали для разделения белков с последующим переносом на нитроцеллюлозную бумагу Protran (размер пор 0,1 мкм, из Schliecher and Schull). Блот блокировали в 5% молоке в TBS-T (0,1%). Первичное антитело (Поликлональное Ab против EGF NRG1-альфа человека/аффинно очищенное на HRG1-альфа кат # AF-296-NA из R&D systems) использовали в разведении 1:1000 в 5% молоке в TBS-T в течение 1 часа при RT (работает также при 4°C в течение ночи). Вторичное антитело кролика с HRP против антител козы использовали в разведении 1:10000 в 5% молоке в TBS-T в течение 1 часа при RT. Все промывки проводили в TBS-T.
Способ очистки NRG-1
Культуры выращивали при 25°C в Экспресс-системе 1 с автоиндукцей в течение ночи из Novagen (кат# 71300-4). Присутствует очень мало растворимый NRG-1. Культуру осаждали центрифугированием, и осадки выделяли, солюбилизировали и подвергали повторному сворачиванию, чтобы убедиться перед выделением, что NRG-1 может иметь место.
Материалы для экстракции, солюбилизации и повторного сворачивания
10X буфер для промывки: 200 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 100 мМ ЭДТА, 10% Тритон X-100
10X буфер для солюбилизации: 500 мМ CAPS, pH 11,0
50X буфер для диализа: 1М Трис-HCl, pH 8,5
30% N-лаурилсаркозин – добавляли в виде порошка (Sigma 61739-5G)
1М DTT
Восстановленный глутатион (Novagen 3541)
Окисленный глутатион (Novagen 3542)
A. лизис клеток и получение телец включения
Оттаивали и повторно суспендировали осадок клеток в 30 мл 1X буфера для промывки. Перемешивали, как необходимо для полного ресуспендирования.
Добавляли ингибиторы протеаз (25 мкл 10 X на 50 мл), ДНКазу (200 мкл 1 мг/мл на 50 мл) и MgCl2 (500 мкл 1М на 50 мл) в суспензию.
Лизировали клетки обработкой ультразвуком.
a. Охлаждали клетки на льду на протяжении этой стадии.
b. С использованием квадратного наконечника обрабатывали ультразвуком в течение 30 секунд на уровне 6, 10 раз, пока суспензия не стала менее вязкой. Позволяли суспензии охлаждаться на льду в течение 60 секунд между каждыми обработками ультразвуком. Сохраняли объем не более 40 мл в 50 мл конической пробирке при обработке ультразвуком.
По окончании, перенесли каждую суспензию в 250 мл бутыли для центрифугирования с угловым горлом для использования с ротором F-16/250.
Собирали тельца включения центрифугированием при 10000×g в течение 12 минут.
Удаляли супернатант (сохраняли образец для анализа растворимого белка) и тщательно ресуспендировали осадок в 30 мл 1X буфера для промывки.
Повторяли центрифугирование, как на стадии 4, и сохраняли осадок.
Снова тщательно ресуспендировали осадок в 30 мл 1X буфера для промывки.
Собирали тельца включения центрифугированием при 10000 x g в течение 10 минут. Декантировали супернатант и удаляли последние следы жидкости постукиванием перевернутой пробирки по бумажной салфетке.
B. Солюбилизация и повторное сворачивание
По массе во влажном состоянии телец включения, подлежащих переработке, рассчитывали количество 1X буфера для солюбилизации, необходимого для повторного суспендирования телец включения в концентрации 10-15 мг/мл. Если рассчитанный объем превышал 250 мл, использовали 250 мл.
При комнатной температуре подготавливали рассчитанный объем 1X буфера для солюбилизации, дополненного 0,3% N-лаурилсаркозином (вплоть до 2% можно использовать, если необходимо, для дальнейшей оптимизации) (300 мг/100 мл буфера) и 1 мМ DTT.
Добавляли рассчитанное количество 1X буфера для солюбилизации со стадии 2 к тельцам включения и осторожно перемешивали. Большой дебрис можно разрушать повторным пипетированием.
Инкубировали в охлаждаемом встряхивателе при 25°C, 50-100 об./мин в течение 4-5 часов.
Осветляли центрифугированием при 10000×g в течение 10 минут при комнатной температуре.
C. Способ диализа для повторного сворачивания белка
Подготавливали необходимый объем буфера для диализа солюбилизированного белка. Диализ следует проводить по меньшей мере с 2 сменами буфера, более чем в 50 раз превышающими объем образца.
Разводили 50X буфер для диализа до 1X в желаемом объеме и дополнить 0,1 мМ DTT.
Диализовали в течение по меньшей мере 4 часов при 4°C. Сменили буфер и продолжали. Диализовали в течение дополнительных 4 или более часов.
Подготовили дополнительный буфер для диализа, как определено на стадии 1, но без DTT.
Продолжали диализ в течение двух дополнительных смен (минимум 4 час каждая), с буфером для диализа без DTT.
D. Окислительно-восстановительный буфер для стимуляции формирования дисульфидных связей
Подготавливали буфер для диализа, содержащий 1 мМ восстановленный глутатион (1,2 г/4 л) и 0,2 мМ окисленный глутатион (0,48 г/4 л) в 1X буфере для диализа. Объем должен быть в 25 раз больше, чем объем солюбилизированного образца белка. Охлаждали до 4°C.
Диализовали повторно свернутый белок со стадии 1 в течение ночи при 4°C.
Очистка
Все процедуры проводили при 4°C.
Химические вещества:
Гидрохлорид Триса (Sigma T5941-500G)
5M раствор хлорида натрия (Sigma S6546-4L)
Гидроксид натрия 10н (JT Baker 5674-02)
E. Очистка на анионной колонке DEAE HiPrep 16/10–20 мл (GE Healthcare)
Буфер A: 50 мМ Трис-HCL pH8,0
Буфер B: 50 мМ Трис-HCL с 1М NaCl pH 8,0
Уравновешивание колонки: Буфер A - 5CV, Буфер B - 5CV, Буфер A- 10CV
Наносили 50 мл образца на прогон на 20 мл колонку при 2,0 мл/мин (NRG-1 присутствует в проскоке).
Промывали 20 мл колонку 5CV буфера A
Промывали 20 мл колонку 5CV градиента до 100% B. Это элюирует примеси.
Очищали 10CV 100% буфера B.
Уравновешивали 15CV буфера A
Анализировали фракции в SDS-page с окрашиванием серебром
Объединяли фракции с NRG-1 (1OкДа)
F. Концентрация NRG-1
Концентрировали с помощью 15 мл концентратора Millipore Centriprep 3000 MWCO (Ultracel YM-3, 4320)
Использовали модифицированный анализ белка по Лоури для определения концентрации.
G. Удаление His-метки
Удаление His-метки выполняли с помощью набора для связывания после расщепления тромбином из Novagen (Кат# 69022-3). На основании предварительного тестирования, наилучшими условиями являются комнатная температура в течение 4 часов с тромбином при 0,005 ед. фермента на мкл для каждых 10 мкг белка NRG-1. Через четыре часа инкубации, добавляли 16 мкл суспензии стрептавидин-агарозы на единицу фермента тромбина. Поворачивали образец в течение 30 мин при комнатной температуре. Выделяли NRG-1 посредством фильтрации с центрифугированием или стерильной фильтрацией (в зависимости от объема). Полное расщепление определяли с помощью вестерн-блоттинга против EGF и с помощью анти-His.
H. Хранение в конечном буфере
Хранили в 1 X PBS с 0,2% BSA при 4°C.
Экспрессия и очистка GGF2
Клонирование и основную информацию для GGF2 смотри в USPN 5530109. Линия клеток описана в USPN 6051401. Полное содержание каждого из USPN 5530109 и USPN 6051401 приведено в настоящем документе в качестве ссылки.
Линия клеток CHO-(Alρha2HSG)-GGF: Эта линия клеток сконструирована для продукции достаточных количеств фетуина (Alρha2HSG человека), чтобы поддерживать высокие уровни продукции rhGGF2 в бессывороточных условиях.
Клетки Cho (dhfr-) трансфицировали экспрессирующим вектором, показанным ниже (pSV-AHSG). Стабильные клетки выращивали под давлением ампициллина. Линию клеток обозначили (dhfr-/α2HSGP). Затем клетки dhfr-/α2HSGP трансфицировали вектором pCMGGF2, показанным ниже, содержащим кодирующую последовательность GGF2 человека, с использованием катионного липидного реагента DMRIE-C (Life Technologies #10459-014).
Линии клеток со стабильной и высокой экспрессией получали общепринятыми способами с использованием метотрексата (100 нМ, 200 нМ, 400 нМ, 1 мкМ) с интервалами 4-6 недель. Клетки постепенно адаптировали к не содержащей сыворотку среде. Клоны выделяли общепринятым способом лимитирующих разведений. Подробности требований к среде можно найти в вышеупомянутых публикациях.
Для усиления транскрипции кодирующую последовательность GGF2 помещали после интрона EBV BMLF-1 (MIS). См. фигуры ниже.
Последовательность MIS
Кодирующая последовательность GGF2
Последовательность белка GGF2 –
Продукция GGF2: Одну ампулу GGF2 с 2,2×106 клеток/мл оттаивали в 100 мл среды Acorda 1 (смотри таблицу 2) и размножали до достижения достаточного числа для посева в сосуды для продукции. Клетки инокулировали в среду для продукции Acorda 2 (смотри таблицу 3) при 1,0×105 клеток/мл в двухлитровых вентилируемых вращающихся флаконах. Вращающиеся флаконы поддерживали при 37°C в течение 5 суток и затем уменьшали температуру до 27°C на 26 суток. Во вращающихся флаконах мониторировали число клеток и общий внешний вид, но их не подпитывали. При жизнеспособности ниже 10% клетки осаждали центрифугированием и кондиционированную среду собирали и стерильно фильтровали.
Таблица 2 | |||
Среда 1 | |||
Компонент | Поставщик | Каталожный номер | Конечная концентрация |
CD-CHO | Invitrogen | 10743-029 | удалить 50 мл, затем добавить компоненты ниже |
FeSO4·ЭДТА | Sigma | F-0518 | 1× (10 мл/л) |
L-глутамин | Cellgro | 25-005-CI | 4 мМ (20 мл/л) |
Рекомбинантный человеческий инсулин | Sigma | I-9278 | 290 ед./л (1 мл/л) |
Заменимые аминокислоты | Cellgro | 25-025-CI | 1× (10 мл/л) |
Пептон типа 4 Соевые бобы - HySoy |
Sigma | P0521 | Порошок – Приготовить 20× в CD-CHO (50 мл/л) |
Гентамицин | Invitrogen | 15750-078 | 100 мкг (2 мл/л) |
Таблица 3 | |||
Среда 2 | |||
Компонент | Поставщик | Каталожный номер | Конечная концентрация |
CD-CHO | Invitrogen | 10743-029 | 50% (сначала -50 мл) |
HyQ SFX-CHO | HyClone | SH30187.02 | 50% (сначала -50 мл) |
FeSO4·ЭДТА | Sigma | F-0518 | 1× (10 мл/л) |
L-глутамин | Cellgro | 25-005-CI | 4 мМ (20 мл/л) |
Рекомбинантный человеческий инсулин | Sigma | I-9278 | 290 ед./л (1 мл/л) |
Заменимые аминокислоты | Cellgro | 25-025-CI | 1× (10 мл/л) |
Пептон типа 4 Соевые бобы - HySoy |
Sigma | P0521 | Порошок – Приготовить 20× в CD-CHO (50 мл/л) |
Гентамицин | Invitrogen | 15750-078 | 100 мкг (2 мл/л) |
Способ очистки GGF2
Все процедуры проводили при 4°C.
Химические реактивы:
Ацетат натрия
Ледяная уксусная кислота (для доведения pH)
10н NaOH (для доведения pH)
NaCl
Сульфат натрия
L-Аргинин (JT Baker кат #: 2066-06)
Маннит (JT Baker кат #: 2553-01)
Исходный материал: Супернатант кондиционированной среды. Доводили pH до 6,5.
Стадия 1
Связывание - Катионообменная хроматография
HiPrep SP 16/10 (Amersham Biosciences)
Уравновешивание колонки: Буфер A - 5CV, буфер B - 5CV, буфер 15%B - 5CV
Буфер A: 20 мМ ацетат Na, pH 6,0
Буфер B: 20 мМ ацетат Na, pH 6,0, 1М NaCl
Наносили образец при 2 мл/мин с непрерывной загрузкой в течение ночи, если возможно. Связывание лучше при непрерывной загрузке.
Максимальная емкость для исходного образца: 5 мг GGF2/мл среды
Скорость потока: 3 мл/мин
Первая промывка: 15%B, 10CV
Вторая промывка: 35% B, 10CV
Элюция GGF2: 60%B, 8CV
Промывка колонки: 100%B, 8CV
Буферы: | Состав | Проводимость | Применение |
15%B | 20 мМ ацетат Na, pH 6,0, 150 мМ NaCl | Предварительное уравновешивание | |
Первая промывка | |||
35%B | 20 мМ ацетат Na, pH 6,0, 350 мМ NaCl | Вторая промывка | |
60%B | 20 мМ ацетат Na, pH 6,0, 600 мМ NaCl | Элюция GGF2 | |
100%B | 20 мМ ацетат Na, pH 6,0, 1000 мМ NaCl | 88 мСм/см | Промывка колонки |
Стадия 2
Более тонкая очистка - Гельфильтрационная хроматография
Сефакрил S200 26/60
Буфер для элюции: 20 мМ ацетат Na, 100 мм Сульфат натрия, 1% маннит, 10 мМ L-аргинин, pH 6,5
Проводимость буфера.
Образец: Пул элюции SP GGF2, концентрированный вплоть до ~ AU280 1,0
Скорость потока: 1,3 мл/мин
Пик элюции: при ~ 0,36CV от начала инъекции
Стадия 3 Удаление ДНК и эндотоксинов – фильтрация через мембрану Intercept Q.
Буфер для предварительного уравновешивания: 20 мМ ацетат Na, 100 мМ сульфат натрия, 1% Маннит, 10 мМ L-Аргинин, pH 6,5 Собрать супернатант
Стадия 4 Конечный состав и подготовка образца
Добавляли дополнительный 90 мМ L-аргинин к образцу
Концентрировали
Стерильно фильтровали
Носитель/контрольное изделие, применяемое в настоящей заявке, представляет собой 0,2% бычий сывороточный альбумин (BSA), 0,1M фосфат натрия, pH 7,6 или 0,1M фосфат натрия, pH 7,6, как указано.
Основной FGF
bFGF (PeproTech Inc., 100-18B, Партия 1206CY08 G2407) разводили, как указано в PeproTech, до исходного раствора 0,1 мг/мл и хранили при -20°C до использования. На сутки инъекции получали раствор 100 мкг/мл BSA (Roche Diagnostics, партия 12403328 годен до 31 марта 2008) в качестве разбавителя, для получения конечной концентрации bFGF 20 мкг/мл (1 мкг/50 мкл). Этот материал использовали только в исследовании 1.
Случайное распределение и сокрытие информации
Оперировали по пять животных в сутки. Исследователю, выполняющему хирургическую операцию и оценки поведения, не была известна регистрация для обработки каждого животного (за исключением группы с обработкой bFGF) до сбора всех данных.
Тесты поведения
Сенсомоторную функциональную активность оценивали с использованием тестов поведения расположения передних конечностей и задних конечностей, и поворота тела. Эти тесты проводили за одни (1) сутки до хирургической операции, через одни (1) сутки после хирургической операции и на третьи (3), седьмые (7), четырнадцатые (14) и двадцать первые (21) сутки после MCAO.
1. Расположение конечностей
Тесты расположения конечностей разделяли на тесты для передних конечностей и задних конечностей. Для теста расположения передних конечностей, исследователь держал крысу близко к поверхности стола и оценивал способность крысы помещать передние конечности на поверхность стола в ответ на стимуляцию вибрисс, визуальную, тактильную или проприоцептивную стимуляцию. Сходным образом, для теста расположения задних конечностей, исследователь оценивал способность крысы помещать задние конечности на поверхность стола в ответ на тактильную и проприоцептивную стимуляцию. Отдельные вспомогательные баллы получали для каждого способа сенсорного входа (возможны определения до половин баллов), и суммировали для получения общих баллов (для теста расположения передних конечностей: 0 = нормальное, 12 = максимально нарушенное; для теста расположения задних конечностей: 0 = нормальное; 6 = максимально нарушенное).
2. Тест поворота тела
Крысу держали приблизительно в одном дюйме (2,54 см) от основания хвоста. Затем ее поднимали на один дюйм (2,54 см) выше поверхности стола. Крысу держали по вертикальной оси, определенной как не более 10° к правой или левой стороне. Регистрировали поворот во всех случаях, когда крыса двигала головой от вертикальной оси в какую-либо сторону. Крыса должна была вернуться в вертикальное положение для учета следующего поворота. Всего учитывали тридцать (30) поворотов. Нормальная крыса, как правило, имеет равное число поворотов на каждую сторону. После фокальной ишемии крыса проявляет тенденцию поворачиваться на контралатеральную (левую) сторону.
На все сутки тестов поведения, животных тестировали до введения лекарственного средства. Временные точки обозначали с помощью суток хирургической операции (Сутки 0) в качестве точки отсчета.
Умерщвление и объем инфаркта
После оценок поведения на двадцать первые (21) сутки после MCAO крыс подвергали глубокой анестезии смесью Кетамина (50-100 мг/кг) и Ксилазина (5-10 мг/кг), внутрибрюшинно. Животным проводили транскардиальную перфузию нормальным солевым раствором (с гепарином, 2 единицы/мл), затем 10% формалином. Затем удаляли головной мозг и сохраняли в 10% формалине. Затем фиксированный головной мозг погружали в парафин, и получали коронарные срезы по 5 микрон с использованием микротома. Затем срезы окрашивали гематоксилином и эозином (H&E). Семь срезов (+4,7, +2,7, +0,7, -1,3, -3,3, -5,3 и -7,3, по сравнению с брегмой, соответственно) для каждого головного мозга фотографировали цифровой камерой, и площадь инфаркта на каждом срезе определяли посредством NIH Image (Image J) с использованием «непрямого способа» (площадь интактного контралатерального [левого] полушария – площадь интактных областей ипсилатерального [правого] полушария) для поправки на отек мозга. Затем площади инфаркта суммировали для срезов и умножали на толщину среза для получения общего объема инфаркта, который выражали как процент от объема интактного контралатерального полушария.
Пример 2: Эффект GGF2 (NRG-1) для усиления неврологического восстановления в модели постоянной окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) у крыс – Обработка, начатая во время острой фазы и продолженная после
Эффекты GGF2 и NRG-1: Функциональное восстановление после окклюзии MCA (MCAO) у крыс
Исследование 1 Экспериментальные группы (n=10)
NRG-1, 1,0 мкг/кг, 1 мл/кг внутривенно; через 1 час и один раз в сутки (q24) в течение 10 суток после MCAO
GGF2, 6,5 мкг/кг, 1 мл/кг внутривенно; через 1 час и q24 в течение 10 суток после MCAO
GGF2, 100 мкг/кг, 1 мл/кг внутривенно; через 1 час и q24 в течение 10 суток после MCAO
bFGF, интрацистернально, 1 мкг/50 мкл; Сутки 1 и Сутки 3 (положительный контроль) после MCAO
Носитель, 1 мл/кг внутривенно; через 1 час и q24 в течение 10 суток после MCAO (Носитель = 0,2% BSA/0,1 M фосфат натрия pH 7,6)
Все данные выражали как среднее ± S.E.M. Данные поведения и массы тела анализировали по ANOVA для повторных измерений (обработка на время X), если не указано иначе. Положительные F-значения для всех ANOVA, включая все группы, позволяли попарные ANOVA между группами. Данные объема инфаркта анализировали односторонним ANOVA.
Результаты
Тест расположения передних конечностей
Восстановление в группе GGF2, 100 мкг/кг, превосходило восстановление в группе носителя (p<0,001). Восстановление в группе bFGF превосходило восстановление в группе носителя (p<0,05). Не присутствовало значимых различий в восстановлении в группах GGF2, 6,5 мкг/кг или NRG, 1,0 мкг/кг, по сравнению с группой носителя. См. фиг.2.
Тест расположения задних конечностей
Восстановление в группе bFGF и GGF2, 100 мкг/кг, являлось значимо лучшим, чем в группе носителя (p<0,001), на все сутки тестирования поведения. Восстановление в группе GGF2, 6,5 мкг/кг, и NRG, 1,0 мкг/кг, являлось значимо улучшенным по сравнению с носителем на сутки 7 и 14 тестирования поведения, но этот эффект не сохранялся в конечной точке 21 сутки. См. фиг.3.
Тест поворота тела
Восстановление в группе bFGF и GGF2, 100 мкг/кг, являлось значимо улучшенным, по сравнению с носителем (p<0,05) в конечной точке тестирования поведения 21 сутки. Не присутствовало значимых различий в восстановлении в группе NRG, 1,0 мкг/кг, или GGF2, 6,5 мкг/кг, по сравнению с группой носителя. См. фиг.4.
Изменения массы
Не присутствовало значимых различий между группами.
Объем инфаркта: Не присутствовало значимых различий между группами. См. таблицу 1 выше.
Обобщение
Эти результаты показывают, что GGF2 действует зависимым от дозы образом и стимулирует функциональное восстановление в этой модели стойкого инсульта. Данные для задних конечностей с использованием более низкой дозы нейрегулина показывают, что продолжающееся лечение может приводить к продолжающимся улучшениям.
Пример 3: Эффект распределения введения по времени (задержка после повреждения) при дозировании GGF2 на усиление неврологического восстановления при постоянной окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) у крыс, включая дозирование в хроническом периоде
Эффекты GGF2 на функциональное восстановление после MCAO у крыс
Экспериментальные группы (n=10)
GGF2, 0,1 мг/кг, (1 мл/кг) внутривенно; 10 ежесуточных инъекций, начиная на Сутки 1 после MCAO
GGF2, 0,1 мг/кг, (1 мл/кг) внутривенно; 10 ежесуточных инъекций, начиная на Сутки 3 после MCAO
GGF2, 0,1 мг/кг, (1 мл/кг) внутривенно; 10 ежесуточных инъекций, начиная на Сутки 7 после MCAO
Носитель, 1 мл/кг внутривенно; 10 ежесуточных инъекций, начиная на Сутки 1 после MCAO
(Носитель = 0,1M фосфат натрия pH 7,6)
Животным начинали вводить GGF2 или носитель внутривенно на Сутки 1, Сутки 3 или Сутки 7 в течение 10 суток после MCAO. Все свежие растворы готовили каждые сутки.
Результаты
Расположение передних конечностей
Восстановление в группе с началом обработки GGF2 на Сутки 1 являлось значимо улучшенным по сравнению с группой носителя во всех временных точках тестирования после обработки (на Сутки 3 (p<0,0001), на Сутки 7 (p<0,005), на Сутки 14 (p<0,0001) и на Сутки 21 (p<0,0001)). Для группы с началом обработки GGF2 на Сутки 3 показали значимые улучшения по сравнению с носителем на сутки 7 (p<0,05) и сутки 21 (p<0,05) Для группы с началом обработки GGF2 на Сутки 7 показали явное отклонение от угла наклона кривой восстановления по сравнению с носителем от Суток 7 (начало обработки) до Суток 14, где это различие становилось значимым на Сутки 21 (p<0,05). Эти данные показывают, что обработка настолько поздно, как через три и даже 7 суток после повреждения может вызывать значительные улучшения неврологической функции. Более продолжительная обработка может являться преимущественной и приводить к большим и более длительным эффектам. См. фиг.5A.
Расположение задних конечностей
Восстановление в группе с началом обработки GGF2 на Сутки 1 являлось значимо улучшенным по сравнению с группой носителя во всех временных точках тестирования после обработки (на Сутки 3 (p<0,05) и на Сутки 7, 14 и 21 (p<0,0001)). Для группы с началом обработки GGF2 на Сутки 3 показали улучшения, которые являлись значимо лучшими, чем для носителя на сутки тестирования 7 (p<0,001) и Сутки 14 (p<0,05, через сутки после окончания обработки), и проявляли тенденцию к значимости на Сутки 21 (p<0,065). Группа с началом обработки GGF2 на Сутки 7 являлась значимо улучшенной по сравнению с носителем в конечной точке исследования на Сутки тестирования 21 (p<0,05). Фигура 5B.
Поворот тела: Восстановление в группе с началом обработки GGF2 на Сутки 1 было значимо лучшим, чем в группе носителя (p<0,001). Существовала тенденция к восстановлению в группе с началом обработки GGF2 на Сутки 3 и в группе с началом обработки GGF2 на Сутки 7, по сравнению с группой носителя. Фигура 5C.
Не присутствовало значимых различий по массе тела между группами.
Объем инфаркта: Не присутствовало значимых различий между всеми группами, как показано в таблице 4.
Таблица 4 | |
Группа | % объема инфаркта |
Носитель с началом обработки на Сутки 1 | 32,89±2,63 |
GGF2 с началом обработки на Сутки 1 | 27,62±2,48 |
GGF2 с началом обработки на Сутки 3 | 33,31±3,84 |
GGF2 с началом обработки на Сутки 7 | 27,30±2,87 |
Обобщение
В конечной точке исследования на Сутки 21 обнаружили, что обработка, начатая на Сутки 1, Сутки 3 или Сутки 7 после MCAO приводила к значимым улучшениям функции передних конечностей по сравнению с животными, обрабатываемыми носителем. Обработка, начатая на Сутки 1, Сутки 3 или Сутки 7 после MCAO приводила к значимым улучшениям функции задних конечностей по сравнению с обработкой носителем во время конкретных точек тестирования поведения, что коррелировало со временем обработки, указывая на то, что продолжительная обработка может приводить к преимущественному функциональному восстановлению, где воздействия, оказанные в эти поздние временные точки после повреждения, исключают возможность того, что эффект вызван нейропротекцией в острой фазе. Действительно, эти данные в сочетании с отсутствием значимого изменения объема инфаркта показывают, что улучшения обусловлены стимуляцией неврологического восстановления с помощью обработки GGF2. Это показывает, что существует длительное временное окно (пост-острое и пост-полуострое), и на протяжении этого времени можно вводить GGF2 в качестве эффективного терапевтического средства для хронической фазы инсульта.
Примечательно, что значимые (по статистике ANOVA) улучшения, наблюдаемые после введения GGF2 на 3 и 7 сутки после MCAO, представляют существенное расширение терапевтического окна, предлагаемого доступными ранее способами лечения острой фазы инсульта. Впервые в данной области, данные, представленные в настоящем документе, показали, что введение GGF2 является эффективным даже на протяжении хронической фазы инсульта. Кроме того, данные, представленные в настоящем документе, позволяют предполагать, что GGF2 вносит вклад в неврологическое восстановление после неврологического повреждения.
Пример 4: Лечение ишемического инсульта
Пациент поступил в медицинское учреждение с признаками и симптомами ишемического инсульта. Пациенту проводили реваскуляризацию с помощью tPA или другой терапии для восстановления кровотока. Хотя кровоток был восстановлен, возник некоторый уровень повреждения головного мозга. Через трое суток после повреждения проводили неврологическую оценку и показали, что он обладает поддающейся измерению сенсорной и/или моторной недостаточностью. Начиная с четвертых суток, после вторых суток и после суток 3, этого пациента лечили нейрегулином в дозе между 0,01 и 1,0 мг/кг на дозу, внутривенно на протяжении от 10 суток до 3 месяцев. У пациента успешно восстановлены сенсорная и моторная функция без сопутствующего использования трудотерапии или физиотерапии. Это восстановление является лучшим, чем можно было клинически предсказать без терапии нейрегулином. Это восстановление является лучшим, чем можно было клинически предсказать без использования трудотерапии или физиотерапии.
Пример 5: Лечение инсульта и возникшего в результате паралича правой руки
Пациент поступил в отделение неотложной помощи с параличом правой руки. После оценки и получения изображений определили, что пациент страдает ишемическим инсультом. Пациенту вводили tPA согласно одобренным способам, и кровоток посредством тромблизиса восстановился. Однако, спустя неделю после лечения tPA, у пациента присутствовал остаточный паралич правой руки, как измерено посредством общепринятых неврологических измерений моторной активности руки. Этого пациента лечили нейрегулином (0,01-1,0 мг/кг, IV) раз в неделю в течение 4 недель. Улучшение функций руки периодически измерял невролог или другой врач с помощью общепринятого неврологического тестирования, включая тестирование динамометром и другое тестирование силы. У пациента успешно восстановилась сенсорная и моторная функция правой руки без сопутствующего использования трудотерапии или физиотерапии. Это восстановление является лучшим, чем можно было клинически предсказать без терапии нейрегулином. Это восстановление является лучшим, чем можно было клинически предсказать без использования трудотерапии или физиотерапии.
Пример 6: Лечение ишемического инсульта
Пациент поступил в медицинское учреждение с признаками и симптомами ишемического инсульта. Обнаружили, что он страдает левосторонним параличом. Пациент вовремя не получал терапии для реваскуляризации. При клинической оценке обнаружили, что возникло некоторое повреждение головного мозга. Через трое суток после повреждения проводили неврологическую оценку пациента и показали, что он обладает поддающейся измерению сенсорной и моторной недостаточностью. Этого пациента лечили нейрегулином в дозе между 0,01 и 1,0 мг/кг на дозу, внутривенно каждые сутки в течение четырех недель. Он получал также физиотерапию. Улучшение заметили настолько рано, как на второй неделе лечения; восстановление продолжается на протяжении периода терапии нейрегулином. У пациента успешно восстановлены сенсорная и моторная функция левой стороны. Это восстановление рассматривают как отличное; и оно является намного лучшим, чем можно было клинически предсказать без нейрегулина с использованием одной физиотерапии.
Пример 7: Лечение ишемического инсульта
Пациент поступил в отделение неотложной помощи с параличом левой руки. Пациент сообщил, что проблема с его рукой началась «более недели назад». После оценки и получения изображений определили, что пациент страдает ишемическим инсультом. Пациенту не вводили tPA. После неврологического обследования обнаружили, что у пациента присутствует остаточный паралич левой руки, как измерено посредством общепринятых неврологических измерений моторной активности руки; пациент также страдал сенсорной недостаточностью. Пациент отказался подвергаться физиотерапии или трудотерапии. Этого пациента лечили нейрегулином (0,01-1,0 мг/кг, IV) один раз в неделю в течение 12 недель. Улучшение функций руки периодически измерял невролог или другой врач с помощью общепринятого неврологического тестирования, включая тестирование динамометром и другое тестирование силы. Улучшение заметили настолько рано, как на второй неделе лечения; восстановление продолжалось на протяжении периода терапии нейрегулином. У пациента успешно восстановлены сенсорная и моторная функция левой руки без сопутствующего использования трудотерапии или физиотерапии. Это восстановление является лучшим, чем можно было клинически предсказать без терапии нейрегулином. Это восстановление является лучшим, чем можно было клинически предсказать без использования трудотерапии или физиотерапии.
Пример 8: Травматическое повреждение головного мозга
Пациент поступил в медицинское учреждение после травматического события с признаками и симптомами повреждения головы и, как результат, повреждения головного мозга. Возникло некоторое повреждение головного мозга, как оценили посредством получения изображений и неврологического тестирования, включая шкалу комы Глазго и более детальное тестирование. Через пять суток после повреждения проводили неврологическую оценку пациента и показали, что он обладает поддающейся измерению сенсорной и моторной недостаточностью. Этого пациента лечили нейрегулином в дозе между 0,01 и 1,0 мг/кг на дозу, внутривенно в течение 3 месяцев. Первоначально пациент не желал подвергаться физиотерапии. Улучшение функций головного мозга заметили настолько рано, как на первой неделе лечения; восстановление продолжалось на протяжении периода терапии нейрегулином. Это восстановление является лучшим, чем можно было клинически предсказать без терапии нейрегулином. Начиная с трех месяцев пациенту начали вводить нейрегулин один раз в неделю, и его также начали подвергать физиотерапии. Совместная терапия продолжалось вплоть до одного года от суток первоначального повреждения. Через год после повреждения пациента его восстановление является экстраординарным. Клинически оно является намного лучшим, чем можно было предсказать в отсутствие какой-либо терапии, и оно также является лучшим, чем можно было ожидать при использовании физиотерапии.
Пример 9: Лечение церебральной геморрагии
Пациент поступил в медицинское учреждение с признаками и симптомами, соответствующими ишемическому инсульту или церебральной геморрагии. Пациент являлся стабильным. При неврологической оценке обнаружили, что возникло некоторое повреждение головного мозга. Через неделю после повреждения снова проводили неврологическую оценку пациента и показали, что он обладает поддающейся измерению сенсорной и/или моторной недостаточностью. Этого пациента лечили нейрегулином в дозе между 0,01 и 1,0 мг/кг ежесуточно, внутривенно в течение 10 суток, с последующим введением этой дозы один раз в неделю в течение 2 месяцев, и в этой точке все лечение прекратили. Улучшение функций головного мозга заметили настолько рано, как на первой неделе лечения; восстановление продолжалось на протяжении периода терапии нейрегулином. После отмены терапии нейрегулином восстановление пациента считают отличным с клинической точки зрения. Пациент возвращался для обследования через шесть месяцев, и затем через 12 месяцев после даты первоначального повреждения; при каждой оценке восстановление пациента считали отличным с клинической точки зрения.
Пример 10: Лечение повреждения NRG, включая лечение в подостром и хроническом периодах
Для обширного исследования критерии включения включали: взрослые, мужчины и женщины, с клиническим доказательством неврологического повреждения.
Исследуемые показания
Ишемический инсульт с лечением тромболитическими средствами;
Ишемический инсульт без лечения тромболитическими средствами;
Геморрагический инсульт;
Закрытое травматическое повреждение головного мозга;
Проникающее травматическое повреждение головного мозга.
Исследованные диапазоны дозирования
0,001 мг/кг-10,0 мг/кг на дозу
Исследованная частота дозирования
Ежесуточно;
Через сутки;
Каждые четвертые сутки;
Раз в неделю;
Раз в две недели;
Раз в месяц;
Режимы со смешанной периодичностью
Ежесуточно в течение одной или двух недель и затем раз в неделю, раз в две недели, или раз в месяц в течение оставшегося времени исследования;
Через сутки в течение одной или двух недель и затем раз в неделю, раз в две недели, или раз в месяц.
Исследованное начало лечения
Как можно раньше после повреждения;
В пределах 6, 12, 24 и 48 часов после повреждения;
Через 72 часа после повреждения;
Через 7, 14, 30, 60, 90, 120 суток после повреждения.
Исследованная продолжительность лечения
Лечение в течение 1, 2, 4, 10, 30 недель;
Лечение в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев.
Исследованные функции
Моторная функция руки;
Моторная функция лица;
Речь;
Когнитивная функция;
Выживаемость;
Время до возвращения к работе;
Восстановление измеряли посредством общепринятых неврологических измерений.
Неблагоприятные события являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение ментальной, сенсорной или мышечной функции, как измеряли посредством способов, известных в данной области, по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
В альтернативных вариантах осуществления исследовали сочетания менее, чем всех из вышеуказанных параметров.
Пример 11: Лечение NRG ишемического инсульта с односторонней слабостью и/или параличом руки (без тромболизиса)
Критерии включения включали: взрослые, мужчины и женщины, доказательство инсульта основано на потере сознания, дезориентации, затрудненности речи, параличе лицевого нерва или конечностей. Ишемический инсульт подтверждали получением радиографических изображений.
Пациентов выбирали из страдающих односторонней слабостью и/или параличом руки, которые не являлись кандидатами для лечения tPA (или другим тромболитическим средством) или которым ранее не вводили tPA по какой-либо причине. Согласие получали от пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов.
Пациентов регистрировали и случайным образом распределяли для введения нейрегулина или плацебо, начиная, как можно раньше после того, как они поступали в медицинское учреждение, включая больницу или кабинет врача, и для них ставили диагноз и получали изображения.
Для этого исследования лечение начинали между 1 часом и 7 сутками после повреждения.
Лечение продолжали в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем раз в неделю в течение оставшегося периода лечения. Пациентам вводили дозы 0,0001-1,0 мг на кг, IV, IM или SC.
Восстановление измеряли посредством общепринятых неврологических измерений моторной активности руки, раз в две недели в течение продолжительности исследования.
Неблагоприятные события являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение функций руки, как измеряли посредством способов, известных в данной области, по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
Пример 12: Лечение NRG одностороннего паралича лицевого нерва в отсутствие тромболитических средств
Пациентов выбирали из страдающих односторонним параличом лицевого нерва, которым не вводили или не могли вводить тромболитические средства. Функции оценивали посредством способов, известных в данной области, раз в две недели в течение периода дозирования 3 месяца. Согласие получали от пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов.
Пациентов регистрировали и случайным образом распределяли для введения нейрегулина или плацебо.
Лечение начинали между 1 часом и 7 сутками после повреждения. Лечение продолжали в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем раз в неделю в течение оставшегося периода лечения. Пациентам вводили дозы 0,0001-1,0 мг на кг, IV, IM или SC.
Неблагоприятные события являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение движения лицевой мускулатуры по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
Пример 13: Лечение NRG афазии или дизартрии в отсутствие тромболитических средств
Пациентов выбирали из страдающих афазией или дизартрией, которым не вводили или не могли вводить тромболитические средства. Функции оценивали посредством способов, известных в данной области, раз в две недели в течение периода дозирования 3 месяца. Согласие получали от пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов.
Пациентов регистрировали и случайным образом распределяли для введения нейрегулина или плацебо.
Лечение начинали между 1 часом и 7 сутками после повреждения. Лечение продолжали в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем раз в неделю в течение оставшегося периода лечения. Пациентам вводили дозы 0,0001-1,0 мг на кг, IV, IM или SC.
Неблагоприятные события являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение речевых способностей по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
Пример 14: Лечение NRG ишемического инсульта (с тромболизисом)
Критерии включения включали: взрослые, мужчины и женщины, доказательство инсульта основано на потере сознания, дезориентации, затрудненности речи, параличе лицевого нерва или конечностей. Ишемический инсульт подтверждали получением радиографических изображений.
Пациентов выбирали из страдающих односторонней слабостью и/или параличом руки и успешно прошедших лечение tPA или другими тромболитическими средствами. Согласие получали от пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов
Пациентов регистрировали и случайным образом распределяли для введения нейрегулина или плацебо, начиная, как можно раньше после того, как они поступали в медицинское учреждение, после завершения постановки диагноза и получения изображений.
Лечение начинали между 1 часом и 7 сутками после повреждения. Лечение продолжали в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем раз в неделю в течение оставшегося периода лечения. Пациентам вводили дозы 0,0001-1,0 мг на кг, IV, IM или SC.
Восстановление измеряли посредством общепринятых неврологических измерений моторной активности руки, раз в две недели в течение продолжительности исследования.
Неблагоприятные события в основном являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение функций руки, как измеряли посредством способов, известных в данной области, по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
Пример 15: Лечение NRG пациентов с односторонним параличом лицевого нерва (с тромболитическими средствами)
Критерии включения включали: взрослые, мужчины и женщины, доказательство инсульта основано на потере сознания, дезориентации, затрудненности речи, параличе лицевого нерва или конечностей. Ишемический инсульт подтверждали получением радиографических изображений. Пациентов выбирали из страдающих афазией или дизартрией, которым вводили тромболитические средства.
Лечение начинали между 1 часом и 7 сутками после повреждения. Лечение продолжали в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем раз в неделю в течение оставшегося периода лечения. Пациентам вводили дозы 0,0001-1,0 мг на кг, IV, IM или SC.
Функции оценивали посредством способов, известных в данной области, раз в две недели в течение периода дозирования 3 месяца.
Неблагоприятные события являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение речевых способностей по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
Пример 16: Лечение NRG пациентов с травматическим повреждением головного мозга
Критерии включения включали: взрослые, мужчины и женщины, доказательство травматического повреждения головного мозга по потере сознания, дезориентации, затрудненности речи, параличу лицевого нерва или конечностей с доказательством травмы или травмой в анамнезе. Пациентов с доказательством проникающего повреждения исключали. Согласие получали от пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов.
Пациентов регистрировали и случайным образом распределяли для введения нейрегулина или плацебо, начиная, как можно раньше после того, как они поступали в медицинское учреждение, включая больницу или кабинет врача, после постановки диагноза, получения изображений и получения согласия.
Для этого исследования лечение начинали между 1 часом и 7 сутками после повреждения.
Лечение продолжали в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем раз в неделю в течение оставшегося периода лечения. Пациентам вводили дозы 0,0001-1,0 мг на кг, IV, IM или SC.
Функциональное восстановление оценивали посредством способов, известных в данной области.
Неблагоприятные события являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
Пример 17: Лечение NRG пациентов с проникающим повреждением головного мозга
Критерии включения включали: взрослые, мужчины и женщины, доказательство травматического повреждения головного мозга по потере сознания, дезориентации, затрудненности речи, параличу лицевого нерва или конечностей с доказательством травмы или травмой в анамнезе. Согласие получали от пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов.
Пациентов стабилизировали хирургически или посредством других мер. Ставили диагноз и получали изображения.
Пациентов регистрировали и случайным образом распределяли для введения нейрегулина или плацебо, начиная, как можно раньше после того, как они поступали в медицинское учреждение, включая больницу или кабинет врача.
Лечение начинали между 1 часом и 7 сутками после повреждения. Лечение продолжали в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем раз в неделю в течение оставшегося периода лечения. Пациентам вводили дозы 0,0001-1,0 мг на кг, IV, IM или SC.
Функциональное восстановление оценивали посредством способов, известных в данной области.
Неблагоприятные события являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение речевых способностей по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
Пример 18: Лечение NRG пациентов с геморрагическим инсультом
Критерии включения включали: взрослые, мужчины и женщины, доказательство инсульта основано на потере сознания, дезориентации, затрудненности речи, параличе лицевого нерва или конечностей. Геморрагический инсульт подтверждали получением радиографических изображений. Согласие получали от пациентов и/или кого-либо с правом подписи за пациентов.
Пациентов выбирали из страдающих односторонней слабостью руки.
Пациентов регистрировали и случайным образом распределяли для введения нейрегулина или плацебо, начиная, как можно раньше после того, как они поступали в медицинское учреждение, включая больницу или кабинет врача, после постановки диагноза, получения изображений и получении согласия.
Лечение начинали между 1 часом и 7 сутками после повреждения. Лечение продолжали в течение 3 месяцев с дозированием через сутки в течение 1 недели и затем раз в неделю в течение оставшегося периода лечения. Пациентам вводили дозы 0,0001-1,0 мг на кг, IV, IM или SC.
Восстановление измеряли посредством общепринятых неврологических измерений моторной активности руки, раз в две недели в течение продолжительности исследования.
Неблагоприятные события являлись мягкими и хорошо переносимыми.
Результаты: Для пациентов после лечения нейрегулином показали статистически большее улучшение функций руки, как измеряли посредством способов, известных в данной области, по сравнению с пациентами после лечения плацебо.
Пример 19: Наборы
Наборы представляют собой иллюстративный вариант осуществления изобретения. Набор может содержать внешнюю тару или контейнер, сформированную, чтобы вмещать один или несколько видов внутренней тары/контейнеров, инструментов и/или инструкций. Инструмент может включать предмет(ы) для введения лекарственного средства, такой как пластырь, аппарат для ингаляции, шприц или игла. Композиция по изобретению может содержаться внутри тары по изобретению. Тара по изобретению может содержать достаточное количество композиции по изобретению, чтобы использовать для множественного дозирования, или может представлять собой форму для единичного или однократного дозирования. Наборы по изобретению, как правило, содержат инструкции для введения в соответствии с настоящим изобретением. Любой способ введения, указанный или обоснованный в настоящем документе, может составлять некоторую часть инструкций. В одном варианте осуществления в инструкциях указано, что композиция по изобретению предназначена для введения один раз или более одного раза на протяжении подострого периода после повреждения. В одном варианте осуществления в инструкциях указано, что композиция по изобретению предназначена для введения один раз или более одного раза на протяжении хронического периода после повреждения. Инструкции можно прикреплять к любому контейнеру/таре по изобретению. Альтернативно, инструкции можно напечатать или проштамповать на таре или сформировать в виде компонента тары по изобретению.
На несколько публикаций и патентных документов ссылаются в этой заявке для более полного описания уровня техники в области, к которой относится это изобретение. Содержание всех публикаций и патентных заявок, упомянутых в этом описании, приведено в настоящем документе в качестве ссылки в такой степени, как если бы было конкретно и отдельно указано, что содержание каждой независимой публикации или патентной заявки приведено в качестве ссылки.
Claims (12)
1. Способ введения полипептида, содержащего подобный эпидермальному фактору роста (EGF-подобный) домен, млекопитающему, где указанный способ включает:
введение полипептида, содержащего подобный эпидермальному фактору роста (EGF-подобный) домен, после неврологического повреждения у указанного млекопитающего; и
начало введения в пределах подострого окна после неврологического повреждения.
2. Способ по п.1, где указанную начальную стадию начинают по меньшей мере через трое суток после неврологического повреждения.
3. Способ по п.1, где указанную начальную стадию начинают по меньшей мере через семь суток после неврологического повреждения.
4. Способ по п.1, где EGF-подобный домен кодирован геном нейрегулина (NRG)-1, геном (NRG)-2, геном (NRG)-3, геном (NRG)-4.
5. Способ по п.1, где указанный полипептид представляет собой GGF2.
6. Способ по п.1, где указанное млекопитающее представляет собой человека.
7. Способ по п.1, где указанную начальную стадию начинают по меньшей мере через одни сутки после неврологического повреждения.
8. Способ по п.1, где введение продолжают после подострого окна после неврологического повреждения.
9. Способ по п.1, где неврологическое повреждение представляет собой ишемический инсульт или геморрагический инсульт.
10. Способ по п.1, где полипептид вводят в дозе 0,01-1 мг/кг массы тела.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US18919108P | 2008-08-15 | 2008-08-15 | |
US61/189,191 | 2008-08-15 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011109546/15A Division RU2501564C2 (ru) | 2008-08-15 | 2009-08-17 | Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018105688A Division RU2018105688A (ru) | 2008-08-15 | 2018-02-15 | Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013140560A RU2013140560A (ru) | 2015-03-10 |
RU2646507C2 true RU2646507C2 (ru) | 2018-03-05 |
Family
ID=41669539
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011109546/15A RU2501564C2 (ru) | 2008-08-15 | 2009-08-17 | Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс |
RU2013140560A RU2646507C2 (ru) | 2008-08-15 | 2013-09-02 | Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс |
RU2018105688A RU2018105688A (ru) | 2008-08-15 | 2018-02-15 | Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011109546/15A RU2501564C2 (ru) | 2008-08-15 | 2009-08-17 | Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018105688A RU2018105688A (ru) | 2008-08-15 | 2018-02-15 | Композиции и способы для лечения во время не острых периодов после неврологического повреждения цнс |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US9498515B2 (ru) |
EP (3) | EP2328606B1 (ru) |
CN (3) | CN107041949A (ru) |
AU (5) | AU2009282455B2 (ru) |
CA (1) | CA2734766A1 (ru) |
ES (2) | ES2827923T3 (ru) |
RU (3) | RU2501564C2 (ru) |
WO (1) | WO2010019275A2 (ru) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2328606B1 (en) | 2008-08-15 | 2016-10-05 | Acorda Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treatment during non-acute periods following cns neurological injury |
KR20130113962A (ko) * | 2010-05-28 | 2013-10-16 | 마인드-엔알쥐 에스에이 | 뉴레굴린 이소형, 뉴레굴린 폴리펩타이드 및 이의 용도 |
EP2603221A4 (en) * | 2010-08-13 | 2014-02-26 | Univ Georgetown | GGF2 AND METHODS OF USE |
WO2017182500A1 (en) * | 2016-04-19 | 2017-10-26 | Leibniz-Institut Für Alternsforschung - Fritz-Lipmann-Institut E.V. (Fli) | Neuregulin for the treatment and/or prevention of tumors of the nervous system |
AR121035A1 (es) | 2019-04-01 | 2022-04-13 | Lilly Co Eli | Compuestos de neuregulina-4 y métodos de uso |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2005124277A (ru) * | 2002-12-31 | 2006-02-27 | Аксарон Байосайенс Аг (De) | Способы лечения неврологических состояний с применением гематопоэтических факторов роста |
US7094749B1 (en) * | 1991-04-10 | 2006-08-22 | Acorda Therapeutics, Inc. | Glial mitogenic factors, their preparation and use |
US7285531B1 (en) * | 1991-04-10 | 2007-10-23 | Acorda Therapeutics, Inc. | Method for prophylaxis or treatment of a nervous system, pathophysiological condition involving a glial growth factor sensitive cell by administration of a glial growth factor |
US7319019B1 (en) * | 1991-04-10 | 2008-01-15 | Acorda Therapeutics, Inc. | Glial mitogenic factors lacking an N-terminal signal sequence |
Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9107566D0 (en) | 1991-04-10 | 1991-05-29 | Ludwig Inst Cancer Res | Glial mitogenic factors,their preparation and use |
US5530109A (en) | 1991-04-10 | 1996-06-25 | Ludwig Institute For Cancer Research | DNA encoding glial mitogenic factors |
US5716930A (en) | 1991-04-10 | 1998-02-10 | Ludwig Institute For Cancer Research | Glial growth factors |
US7115554B1 (en) | 1993-05-06 | 2006-10-03 | Acorda Therapeutics, Inc. | Methods of increasing myotube formation or survival or muscle cell mitogenesis differentiation or survival using neuregulin GGF III |
US6087323A (en) | 1992-04-03 | 2000-07-11 | Cambridge Neuroscience, Inc. | Use of neuregulins as modulators of cellular communication |
US7037888B1 (en) | 1992-04-03 | 2006-05-02 | Acorda Therapeutics, Inc. | Methods for treating muscle diseases and disorders |
WO1994003644A1 (en) | 1992-08-10 | 1994-02-17 | Cambridge Neuroscience, Inc. | Inhibitors of cell proliferation, their preparation and use |
GB9217316D0 (en) | 1992-08-14 | 1992-09-30 | Ludwig Inst Cancer Res | Schwann cell mitogenic factor,its preparation and use |
US6750196B1 (en) | 1995-03-27 | 2004-06-15 | Acorda Therapeutics | Methods of treating disorders of the eye |
US5912326A (en) | 1995-09-08 | 1999-06-15 | President And Fellows Of Harvard College | Cerebellum-derived growth factors |
AU745324B2 (en) | 1997-10-14 | 2002-03-21 | Cenes Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic methods comprising use of a neuregulin |
US6051401A (en) | 1998-07-28 | 2000-04-18 | Bayer Corporation | Methods and constructs for protein expression |
US6635249B1 (en) | 1999-04-23 | 2003-10-21 | Cenes Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating congestive heart failure |
AU7494701A (en) | 2000-05-23 | 2001-12-03 | Cenes Pharmaceuticals Inc | Nrg-2 nucleic acid molecules, polypeptides, and diagnostic and therapeutic methods |
US20020141946A1 (en) * | 2000-12-29 | 2002-10-03 | Advanced Inhalation Research, Inc. | Particles for inhalation having rapid release properties |
AU2002304965A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-12 | Zensun (Shanghai) Sci-Tech.Ltd | Neuregulin based methods and compositions for treating viral myocarditis and dilated cardiomyopathy |
GB0505510D0 (en) * | 2004-06-09 | 2005-04-27 | Univ Edinburgh | Neural stem cells |
US7776817B2 (en) | 2005-09-02 | 2010-08-17 | Morehouse School Of Medicine | Neuregulins for prevention and treatment of damage from acute assault on vascular and neuronal tissue and as regulators of neuronal stem cell migration |
DK2420565T3 (en) * | 2006-02-23 | 2017-12-04 | Viacyte Inc | APPLICABLE COMPOSITIONS AND METHODS FOR CULTIVATING DIFFERENTIBLE CELLS |
JP5749490B2 (ja) | 2007-05-10 | 2015-07-15 | アコーダ セラピューティクス インコーポレイテッド | 心臓障害を検出するための方法 |
CN102026651B (zh) | 2008-02-29 | 2015-06-03 | 阿索尔达治疗公司 | 达到所需胶质生长因子2血浆水平的方法 |
PL3338791T3 (pl) | 2008-07-17 | 2020-04-30 | Acorda Therapeutics, Inc. | Terapeutyczne dawkowanie neureguliny do leczenia lub zapobiegania niewydolności serca |
EP2328606B1 (en) | 2008-08-15 | 2016-10-05 | Acorda Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treatment during non-acute periods following cns neurological injury |
-
2009
- 2009-08-17 EP EP09806990.9A patent/EP2328606B1/en not_active Not-in-force
- 2009-08-17 ES ES16192090T patent/ES2827923T3/es active Active
- 2009-08-17 RU RU2011109546/15A patent/RU2501564C2/ru active
- 2009-08-17 CN CN201710115521.5A patent/CN107041949A/zh active Pending
- 2009-08-17 CA CA2734766A patent/CA2734766A1/en not_active Abandoned
- 2009-08-17 CN CN201410811890.4A patent/CN104707130A/zh active Pending
- 2009-08-17 EP EP20179893.1A patent/EP3777878A1/en not_active Withdrawn
- 2009-08-17 EP EP16192090.5A patent/EP3173091B1/en active Active
- 2009-08-17 AU AU2009282455A patent/AU2009282455B2/en not_active Ceased
- 2009-08-17 CN CN2009801367123A patent/CN102159237A/zh active Pending
- 2009-08-17 ES ES09806990.9T patent/ES2609927T3/es active Active
- 2009-08-17 WO PCT/US2009/004692 patent/WO2010019275A2/en active Application Filing
- 2009-08-17 US US13/059,206 patent/US9498515B2/en active Active
-
2013
- 2013-09-02 RU RU2013140560A patent/RU2646507C2/ru active
-
2016
- 2016-08-12 AU AU2016213899A patent/AU2016213899B2/en not_active Ceased
- 2016-11-21 US US15/357,586 patent/US10668131B2/en active Active
-
2018
- 2018-02-15 RU RU2018105688A patent/RU2018105688A/ru unknown
- 2018-03-20 AU AU2018201973A patent/AU2018201973A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-12-02 AU AU2019275508A patent/AU2019275508B2/en not_active Ceased
-
2020
- 2020-04-29 US US16/861,330 patent/US20200368318A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-11-01 AU AU2021261848A patent/AU2021261848A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7094749B1 (en) * | 1991-04-10 | 2006-08-22 | Acorda Therapeutics, Inc. | Glial mitogenic factors, their preparation and use |
US7285531B1 (en) * | 1991-04-10 | 2007-10-23 | Acorda Therapeutics, Inc. | Method for prophylaxis or treatment of a nervous system, pathophysiological condition involving a glial growth factor sensitive cell by administration of a glial growth factor |
US7319019B1 (en) * | 1991-04-10 | 2008-01-15 | Acorda Therapeutics, Inc. | Glial mitogenic factors lacking an N-terminal signal sequence |
RU2005124277A (ru) * | 2002-12-31 | 2006-02-27 | Аксарон Байосайенс Аг (De) | Способы лечения неврологических состояний с применением гематопоэтических факторов роста |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2328606B1 (en) | 2016-10-05 |
AU2019275508A1 (en) | 2019-12-19 |
RU2018105688A (ru) | 2019-08-15 |
RU2013140560A (ru) | 2015-03-10 |
CN107041949A (zh) | 2017-08-15 |
RU2011109546A (ru) | 2012-09-20 |
WO2010019275A2 (en) | 2010-02-18 |
AU2018201973A1 (en) | 2018-04-12 |
US20110269682A1 (en) | 2011-11-03 |
AU2019275508B2 (en) | 2021-08-26 |
CA2734766A1 (en) | 2010-02-18 |
US20170252406A1 (en) | 2017-09-07 |
US10668131B2 (en) | 2020-06-02 |
AU2016213899B2 (en) | 2018-04-05 |
EP2328606A4 (en) | 2012-03-14 |
EP3173091B1 (en) | 2020-07-22 |
AU2021261848A1 (en) | 2021-12-02 |
AU2009282455A1 (en) | 2010-02-18 |
US20200368318A1 (en) | 2020-11-26 |
CN104707130A (zh) | 2015-06-17 |
RU2018105688A3 (ru) | 2021-08-05 |
WO2010019275A9 (en) | 2010-05-27 |
EP2328606A1 (en) | 2011-06-08 |
CN102159237A (zh) | 2011-08-17 |
RU2501564C2 (ru) | 2013-12-20 |
EP3777878A1 (en) | 2021-02-17 |
ES2827923T3 (es) | 2021-05-25 |
ES2609927T3 (es) | 2017-04-25 |
EP3173091A1 (en) | 2017-05-31 |
AU2009282455B2 (en) | 2016-05-12 |
AU2016213899A1 (en) | 2016-10-20 |
US9498515B2 (en) | 2016-11-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2019275508B2 (en) | Compositions and methods for treatment during non-acute periods following cns neurological injury | |
US11235031B2 (en) | Therapeutic dosing of a neuregulin or a subsequence thereof for treatment or prophylaxis of heart failure | |
US10328125B2 (en) | Treatments for neurological disorders | |
US20210060128A1 (en) | Method for achieving desired glial growth factor 2 plasma levels | |
JP7503590B2 (ja) | 遺伝子構築物 |