RU2639448C1 - Method for determination of mycosis fungoides stage - Google Patents
Method for determination of mycosis fungoides stage Download PDFInfo
- Publication number
- RU2639448C1 RU2639448C1 RU2017100668A RU2017100668A RU2639448C1 RU 2639448 C1 RU2639448 C1 RU 2639448C1 RU 2017100668 A RU2017100668 A RU 2017100668A RU 2017100668 A RU2017100668 A RU 2017100668A RU 2639448 C1 RU2639448 C1 RU 2639448C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- stage
- skin
- volume fraction
- positive
- monoclonal antibodies
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 38
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 title abstract 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000012937 correction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 29
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 22
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 16
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 claims description 16
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 7
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 7
- 229940084434 fungoid Drugs 0.000 claims description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 5
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 18
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 11
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 7
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 7
- 208000014660 primary cutaneous lymphoma Diseases 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 6
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 6
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 6
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 6
- 206010033898 parapsoriasis Diseases 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 6
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 5
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 5
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 5
- 238000012549 training Methods 0.000 description 5
- 208000035874 Excoriation Diseases 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 4
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 3
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 3
- 206010068773 Mechanical urticaria Diseases 0.000 description 3
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 3
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 3
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 201000000409 dermatographia Diseases 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 208000020157 familial dermatographia Diseases 0.000 description 3
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 3
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 3
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 3
- 210000004705 lumbosacral region Anatomy 0.000 description 3
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000012886 linear function Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002832 shoulder Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 2
- 206010048768 Dermatosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 238000009193 PUVA therapy Methods 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036002 Rash generalised Diseases 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005312 nonlinear dynamic Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000001020 rhythmical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011521 systemic chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и может быть использовано для определения стадии грибовидного микоза - наиболее часто встречаемой нозологической разновидности первичных кожных лимфом.The invention relates to medicine, namely to dermatovenerology, and can be used to determine the stage of fungal mycosis - the most common nosological variety of primary skin lymphomas.
Грибовидный микоз (ГМ) - форма первичной эпидермотропной Т-клеточной лимфомы кожи, характеризующаяся пролиферацией малых и средних Т-лимфоцитов с наличием церебриформных ядер, сопровождающаяся этапностью клинических проявлений в виде пятен, бляшек и опухолей. Выделяют 3 клинические стадии развития классического варианта течения ГМ: I стадию - пятнисто-эритематозную, II стадию - инфильтративно-бляшечную и III стадию - опухолевую [1, 2, 3].Mushroom mycosis (GM) is a form of primary epidermotropic T-cell lymphoma of the skin, characterized by proliferation of small and medium T-lymphocytes with the presence of cerebriform nuclei, accompanied by a staged clinical manifestations in the form of spots, plaques and tumors. There are 3 clinical stages of development of the classical variant of the course of GM: stage I - spotty-erythematous, stage II - infiltrative-plaque and stage III - tumor [1, 2, 3].
Своевременная диагностика и правильное установление стадии развития ГМ являются приоритетными задачами дерматовенеролога и гематолога (онколога), поскольку имеют решающее значение при выборе оптимальной тактики лечения больного и определяют долгосрочный прогноз заболевания. Так, терапия ранних стадий ГМ (пятнисто-эритематозная и инфильтративно-бляшечная) предусматривает консервативный подход с постепенным наращиванием потенциала лечебных методов и технологий от тактики «наблюдай и жди» и наружной терапии топическими глюкокортикостероидами до применения ретиноидов, интерферона-α, метотрексата, ультрафиолетового облучения спектра В (311 нм), ПУВА-терапии и локальной лучевой терапии, тогда как осуществление специализированной медицинской помощи больным с поздних стадиями ГМ в учреждениях онкогематологического профиля предусматривает уже «агрессивный» подход с применением арсенала системной химиотерапии, биологических препаратов, электронно-лучевой терапии и аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток [1, 2, 4].Timely diagnosis and the correct establishment of the stage of development of GM are priority tasks for a dermatovenerologist and hematologist (oncologist), since they are crucial in choosing the optimal tactics for treating a patient and determine the long-term prognosis of the disease. Thus, therapy of the early stages of GM (spotty-erythematous and infiltrative-plaque) provides for a conservative approach with a gradual increase in the potential of therapeutic methods and technologies from “watch and wait” tactics and topical glucocorticosteroid therapy to the use of retinoids, interferon-α, methotrexate, ultraviolet radiation spectrum B (311 nm), PUVA therapy and local radiation therapy, while specialized medical care for patients with advanced stages of hypertension in oncohematological institutions provides one profile has an "aggressive" approach with the use of systemic chemotherapy arsenal, biologicals, electron beam therapy, and an allogeneic transplantation of hematopoietic stem cells [1, 2, 4].
Диагностический процесс при ГМ предусматривает ряд логически связанных этапов, сочетающих оценку анамнеза и клинических проявлений заболевания, анализ данных морфологических и иммуногистохимических (ИГХ) исследований, фиксирующих наличие злокачественной лимфоидной (клональной) пролиферации в коже. При этом иммуногистохимические исследования биоптата кожи считаются «золотым стандартом» диагностики ГМ, на что указывают клинические рекомендации Европейских стран и России [1, 2, 4].The diagnostic process for GM involves a series of logically related steps, combining the assessment of the anamnesis and clinical manifestations of the disease, analysis of morphological and immunohistochemical (IHC) studies that record the presence of malignant lymphoid (clonal) proliferation in the skin. Moreover, immunohistochemical studies of skin biopsy are considered the “gold standard” for the diagnosis of GM, as indicated by the clinical recommendations of European countries and Russia [1, 2, 4].
Анализ результатов иммуногистохимических исследований биоптата кожи в диагностике ГМ проводится на основании оценки позитивности маркеров опухолевых клеток - антигенов кластеров дифференцировки (CD) на поверхности лимфоцитов. При этом врач - патоморфолог, анализирующий иммуногистохимические реакции, использует описательные и качественные приемы оценки выраженности окрашивания маркеров с применением критериев «отрицательная/положительная реакция».The analysis of the results of immunohistochemical studies of skin biopsy in the diagnosis of GM is based on the assessment of the positivity of tumor cell markers - differentiation cluster antigens (CDs) on the surface of lymphocytes. In this case, the doctor - a pathomorphologist who analyzes immunohistochemical reactions, uses descriptive and qualitative methods for assessing the severity of staining of markers using the criteria of "negative / positive reaction".
Тем не менее, в литературе встречаются и усовершенствованные методики, направленные на объективизацию способа оценки иммуногистохимических маркеров с использованием критериев и балльной шкалы в зависимости от процента окрашивания опухолевых клеток (полуколичественные методы). Методика с использованием критериев предполагает следующие условные (субъективные) оценки: «0» - отсутствие окрашивания или окрашивание менее 10% опухолевых клеток с любой интенсивностью; «1+» - слабое неполное мембранное окрашивание более 10% опухолевых клеток; «2+» - от слабого до умеренного окрашивания всей цитоплазматической мембраны более 10% опухолевых клеток; «3+» - сильное окрашивание всей цитоплазматической мембраны более 10% опухолевых клеток [5].Nevertheless, in the literature there are also improved methods aimed at objectification of the method for evaluating immunohistochemical markers using criteria and a point scale depending on the percentage of staining of tumor cells (semi-quantitative methods). The method using criteria assumes the following conditional (subjective) assessments: “0” - absence of staining or staining of less than 10% of tumor cells with any intensity; “1+” - weak incomplete membrane staining of more than 10% of tumor cells; "2+" - from mild to moderate staining of the entire cytoplasmic membrane of more than 10% of tumor cells; “3+” - strong staining of the entire cytoplasmic membrane of more than 10% of tumor cells [5].
Из числа полуколичественных методов оценки ИГХ-маркеров одним из наиболее широко применяемых в онкомаммологии и гинекологии является расчет диагностических баллов по Allred D.C. Данная методика суммарной бальной оценки состоит из двух разделов, где раздел «а» - доля окрашенных опухолевых клеток от 0 до 5 баллов (0 баллов - отсутствие окрашивания; 1 балл - количество окрашенных клеток >0, но меньше 1/100; 2 балла - от >1/100 до 1/10; 3 балла - от >1/10 до 1/3; 4 балла - от >1/3 до 2/3; 5 баллов - от >2/3 до 1); раздел «б» - оценка интенсивности окраски опухолевых клеток (от 0 до 3 баллов). Далее вычисляется суммарный балл, состоящий из доли и интенсивности окраски изучаемых клеток, однако определение процента и интенсивности окрашивания ИГХ-маркеров также продолжает основываться на субъективной оценке исследователя [6, 7].Of the semi-quantitative methods for assessing IHC markers, one of the most widely used in oncammammology and gynecology is the calculation of diagnostic scores according to Allred D.C. This methodology of the total score consists of two sections, where section “a” - the proportion of stained tumor cells from 0 to 5 points (0 points - no staining; 1 point - the number of stained cells> 0, but less than 1/100; 2 points - from> 1/100 to 1/10; 3 points - from> 1/10 to 1/3; 4 points - from> 1/3 to 2/3; 5 points - from> 2/3 to 1); section “b” - assessment of the intensity of staining of tumor cells (from 0 to 3 points). Next, the total score is calculated, which consists of the proportion and color intensity of the studied cells, however, the determination of the percentage and staining intensity of IHC markers also continues to be based on the subjective assessment of the researcher [6, 7].
В отечественной практике Сыдиковым А.А., Заславским Д.В. и соавторами для анализа результатов иммуногистохимических реакций был использован полуколичественный метод, где экспрессия исследуемого маркера расценивалась как слабая «+» при наличии окрашенных гранул в 1-50-ти клетках, умеренная «++» - в 51-100 клетках и резко выраженная «+++» - в 101 и более клетках, в четырех полях зрения, также основанный на субъективной оценке данных врачом-патоморфологом [8].In domestic practice, Sydikov A.A., Zaslavsky D.V. et al. to analyze the results of immunohistochemical reactions, a semi-quantitative method was used, where the expression of the studied marker was regarded as weak "+" in the presence of colored granules in 1-50 cells, moderate "++" in 51-100 cells and a pronounced "+ ++ ”- in 101 and more cells, in four fields of vision, also based on a subjective assessment of data by a pathomorphologist [8].
Известен патент на изобретение, выполненный Поповым Ю.В., Бурыкиной П.Н. и соавторами в 2015 году, где для оценки результатов иммуногистохимических реакций у пациенток с миомой матки был использован 6-бальный полуколичественный метод: отсутствие иммуноокрашенных клеток - 0 баллов; менее 5% иммуноокрашенных клеток - 0,5 балла, менее 20% иммуноокрашенных клеток - 2 балла; от 20 до 40% окрашенных клеток - 4 балла; и более 40% окрашенных клеток - 6 баллов [9].Known patent for an invention made by Popov Yu.V., Burykina P.N. and co-authors in 2015, where a 6-point semi-quantitative method was used to evaluate the results of immunohistochemical reactions in patients with uterine myoma: absence of immunostained cells - 0 points; less than 5% of immunostained cells - 0.5 points, less than 20% of immunostained cells - 2 points; from 20 to 40% of stained cells - 4 points; and more than 40% of stained cells - 6 points [9].
Описанные качественные и полуколичественные приемы оценки выраженности окрашивания маркеров не лишены субъективной составляющей врача-патоморфолога, в связи с этим, использование методов количественной оценки результатов иммунофенотипирования клеток позволит объективизировать диагностический процесс, что соотносится с современными критериями доказательной медицины, своевременностью и точностью верификации диагноза.The described qualitative and semi-quantitative methods for assessing the severity of staining of markers are not without the subjective component of a pathomorphologist; therefore, the use of methods for quantifying the results of immunophenotyping of cells will make it possible to objectify the diagnostic process, which is consistent with modern criteria of evidence-based medicine, timeliness and accuracy of verification of the diagnosis.
Наиболее близким по существу к рассматриваемой проблеме является метод количественной оценки пролиферативной активности лимфоцитов в коже больных грибовидным микозом, разработанный Жуковым А.С., Белоусовой И.Э., Хайрутдиновым В.Р. и соавторами, с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из светооптического микроскопа, цифровой камеры и персонального компьютера с интегрированным программным обеспечением «Морфология 5.2» [10].The closest in essence to the problem under consideration is the method for quantitative assessment of the proliferative activity of lymphocytes in the skin of patients with fungoid mycosis, developed by A. Zhukov, I. E. Belousova, V. R. Khairutdinov. and co-authors, using a computer analysis system for microscopic images consisting of a light-optical microscope, a digital camera, and a personal computer with integrated Morphology 5.2 software [10].
Указанный метод был использован для оценки пролиферативной активности лимфоцитов в коже у 18 больных ГМ, группу которых составили 9 больных с I стадией, 7 больных - со II стадией и 2 больных - с III стадией заболевания. В каждом случае проводился анализ по 3 полям зрения при увеличении 200, выбранных с учетом наибольшей позитивности исследуемых клеток. Данный метод позволил авторам получить статистически значимые различия в относительной площади экспрессии CD3 и Ki67 клеток в дерме у больных ГМ в зависимости от стадии заболевания (7,16±0,31 и 18,8±0,61 - при ГМ I стадии, 0,39±0,21 и 0,89±0,18 - при ГМ II+III стадии соответственно).The indicated method was used to assess the proliferative activity of lymphocytes in the skin in 18 patients with GM, a group of which consisted of 9 patients with stage I, 7 patients with stage II and 2 patients with stage III disease. In each case, an analysis was performed on 3 fields of view with an increase of 200, selected taking into account the greatest positivity of the studied cells. This method allowed the authors to obtain statistically significant differences in the relative expression area of CD3 and Ki67 cells in the dermis in patients with GM depending on the stage of the disease (7.16 ± 0.31 and 18.8 ± 0.61 for GM stage I, 0, 39 ± 0.21 and 0.89 ± 0.18 - with GM stage II + III, respectively).
Недостатками указанного метода является следующее:The disadvantages of this method are the following:
- в проведенных авторами исследованиях были объединены в одну группу больные со II и III стадиями ГМ, тогда как именно нахождение статистических различий в позитивности лимфоцитов кожи при II и III стадиях развития онкопроцесса имеет принципиальное значение для определения дальнейшей тактики лечения больного и прогноза заболевания;- in the studies conducted by the authors, patients with stage II and stage III GM were combined into one group, whereas the determination of statistical differences in the positiveness of skin lymphocytes during stage II and stage III of the oncological process is of fundamental importance for determining further treatment tactics for the patient and prognosis of the disease;
- в данной работе был использован автоматизированный анализ позитивной окраски лишь двух иммуномаркеров CD3 и Ki67, то есть была проведена оценка только общей популяции всех зрелых Т-лимфоцитов и их пролиферативной активности, тогда как при развитии первичных лимфом кожи патогенетически значимым является изучение дисбаланса между пролиферирующими лимфоцитами и процессами их апоптоза, в чем участвуют CD8 цитотоксические клетки, в том числе с продукцией Granzyme В,- in this work, we used an automated analysis of the positive color of only two immunomarkers CD3 and Ki67, that is, we evaluated only the general population of all mature T-lymphocytes and their proliferative activity, whereas in the development of primary skin lymphomas, the study of the imbalance between proliferating lymphocytes is pathogenetically significant and their apoptosis processes, in which CD8 cytotoxic cells are involved, including those with Granzyme B products,
- не были изучены субпопуляции Т-лимфоцитов в дерме, а именно Т-хелперная субпопуляция лимфоцитов (CD4+), соотношение хелперно-индукторной субпопуляции лимфоцитов и супрессорно-цитотоксической (CD4+/CD8+),- T-lymphocyte subpopulations in the dermis have not been studied, namely the T-helper subpopulation of lymphocytes (CD4 +), the ratio of helper inducer subpopulation of lymphocytes and suppressor-cytotoxic (CD4 + / CD8 +),
- данный метод применим для научного изучения диагностической значимости пролиферативной активности лимфоцитов эпидермиса и дермы у больных грибовидным микозом и бляшечным парапсориазом, тогда как дифференциальная диагностика между стадиями ГМ важна в практическом смысле и определяет подходы к терапии и степень ее «агрессивности».- this method is applicable for the scientific study of the diagnostic significance of the proliferative activity of epidermal and dermal lymphocytes in patients with fungoid mycosis and plaque parapsoriasis, while the differential diagnosis between the stages of GM is important in a practical sense and determines the approaches to therapy and the degree of its “aggressiveness”.
Задачей изобретения является разработка способа определения стадии грибовидного микоза на основании оценки позитивности иммуногистохимических маркеров биоптата кожи.The objective of the invention is to develop a method for determining the stage of fungal mycosis based on the assessment of the positivity of immunohistochemical markers of skin biopsy.
Технический результат, который будет достигнут от использования данного изобретения, заключается в повышении объективности и точности диагностирования стадии грибовидного микоза.The technical result that will be achieved from the use of this invention is to increase the objectivity and accuracy of diagnosing the stage of mushroom mycosis.
Технический результат достигается тем, что в способе определения стадии грибовидного микоза, включающем забор у больного биопсии кожи из очага поражения, проведение иммуногистохимических исследований с использованием моноклональных антител CD3 и Ki67, их количественную оценку и установление на этом основании стадии заболевания, для исследований дополнительно используют моноклональное антитело CD4, определяют значения объемных долей позитивного окрашивания моноклональнми антителами CD3, CD4 и Ki67 путем компьютерной морфометрии, затем усредняют данные показатели и рассчитывают суммарную удельную значимость иммунопозитивности данных антител по формуле:The technical result is achieved by the fact that in the method for determining the stage of fungal mycosis, including taking a skin biopsy from the lesion site from a patient, conducting immunohistochemical studies using monoclonal antibodies CD3 and Ki67, quantifying them and establishing the disease stage on this basis, additionally use monoclonal antibody CD4, determine the values of volume fractions of positive staining with monoclonal antibodies CD3, CD4 and Ki67 by computer morphometry, then averaged yayut these indicators are calculated and total specific immunopositive significance of these antibodies by the formula:
F=1,75*Х1+2,03*Х2+12,81*Х3+0,22,F = 1.75 * X1 + 2.03 * X2 + 12.81 * X3 + 0.22,
где: F - суммарная удельная значимость иммунопозитивности моноклональных антител CD3, CD4 и Ki67;where: F is the total specific significance of the immunopositivity of monoclonal antibodies CD3, CD4 and Ki67;
X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3;X1 - the average value of the volume fraction of positive color CD3;
Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4;X2 - the average value of the volume fraction of positive color CD4;
Х3 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67;X3 - the average value of the volume fraction of positive coloration Ki67;
1,75; 2,03; 12,81 и 0,22 - поправочные коэффициенты.1.75; 2.03; 12.81 and 0.22 are correction factors.
При значении F от 0,220 до 1,535 диагностируют эритематозно-пятнистую стадию, при значении F от 1,536 до 2,888 диагностируют инфильтративно-бляшечную стадию, а при значении F от 2,889 до 4,700 - опухолевую стадию грибовидного микоза.With an F value of 0.220 to 1.535, an erythematous-spotted stage is diagnosed, with an F value of 1.536 to 2.888, an infiltrative-plaque stage is diagnosed, and with an F value of from 2.889 to 4.700, the tumor stage of fungal mycosis is diagnosed.
Сущность изобретения состоит в статистически выверенном и реализованном в формуле подходе к диагностике стадий грибовидного микоза, учитывающем объективизированный вклад каждого из оцениваемых показателей в общую результирующую диагностику.The essence of the invention consists in a statistically verified and implemented in the formula approach to the diagnosis of stages of mushroom mycosis, taking into account the objectified contribution of each of the evaluated indicators to the total resulting diagnosis.
Из анализа научно-технической и патентной литературы заявляемой совокупности используемых моноклональных антител CD3, CD4 и Ki67 для оценки стадии грибовидного микоза по предлагаемой формуле нами не выявлено, что позволяет сделать выводы о соответствии заявляемого технического решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».From an analysis of the scientific, technical and patent literature of the claimed combination of used monoclonal antibodies CD3, CD4 and Ki67 to assess the stage of fungal mycosis according to the proposed formula, we have not identified that allows us to conclude that the claimed technical solution meets the criteria of "novelty" and "inventive step".
В клинике ГБУ СО «УрНИИДВиИ» с целью улучшения процесса диагностики ГМ и объективизации результатов иммуногистохимических исследований были изучены имиджи биоптатов кожи 30 больных ГМ I, II и III стадий. Диагноз ГМ у каждого больного был установлен на основании анамнеза, клинической картины, результатов патоморфологического, иммуногистохимического и морфометрического методов исследования.In the clinic of GBU SB “UrNIIDViII”, in order to improve the process of diagnosis of GM and objectify the results of immunohistochemical studies, the images of skin biopsy samples of 30 patients with GM of I, II and III stages were studied. The diagnosis of GM in each patient was established on the basis of an anamnesis, clinical picture, results of pathomorphological, immunohistochemical and morphometric methods of research.
Иммунофенотипирование объектов исследования проводили в стандартных условиях на аппарате для иммуногистохимии Bond-maX LEICA (Германия) с использованием парафиновых срезов толщиной 4 мкм.Immunophenotyping of the test objects was carried out under standard conditions on a Bond-maX LEICA immunohistochemistry apparatus (Germany) using 4 µm thick paraffin sections.
Патоморфологические и морфометрические исследования выполнены с использованием аппаратно-программного комплекса, состоящего из светового микроскопа для медико-биологических исследований Axio Imager М2, цифровой камеры AxioCam MRc 5 и специальной программы ZEN 2012 для ввода изображений, проведения измерений и документирования (ZEISS, Германия). Также в составе данного комплекса использованы персональный компьютер Intel Core i5-3570 3.4 GHz и автоматизированная система анализа изображений «SIAMS Photolab» (Россия, свидетельство об утверждении типа средства измерений RU.C.31.058.A №40862 от 28.07.2015 г., срок действия до 28.07.2020 г.).Pathomorphological and morphometric studies were performed using a hardware-software complex consisting of a light microscope for biomedical research Axio Imager M2, digital camera AxioCam MRc 5 and a special program ZEN 2012 for image capture, measurement and documentation (ZEISS, Germany). Also, this complex includes the Intel Core i5-3570 3.4 GHz personal computer and the SIAMS Photolab automated image analysis system (Russia, type approval instrument RU.C.31.058.A No. 40862 dated 07.28.2015, valid for valid until July 28, 2020).
Обработка изображений в системе «SIAMS Photolab» производится в цепочке взаимосвязанных ячеек, содержащих исходный имидж, результаты промежуточных этапов обработки, конечное обработанное изображение и результаты измерений в виде чисел, графиков и гистограмм. В системе предусмотрена генерация отчетов формата MS Word и экспорт изображений, числовых и текстовых данных в наиболее распространенные форматы.Image processing in the SIAMS Photolab system is carried out in a chain of interconnected cells containing the original image, the results of the intermediate processing steps, the final processed image and the measurement results in the form of numbers, graphs and histograms. The system provides for the generation of MS Word format reports and the export of images, numerical and textual data to the most common formats.
Использование модуля колорометрической оценки результатов иммуногистохимических реакций системы анализа изображений «SIAMS Photolab» позволило получить квантифицированную оценку площади иммунопозитивности маркеров и объективизировать процесс диагностики ГМ.The use of the colorimetric evaluation module for the results of immunohistochemical reactions of the SIAMS Photolab image analysis system made it possible to obtain a quantified estimate of the immunopositivity area of markers and to objectify the process of diagnosis of GM.
В дерме больных ГМ на стандартной площади срезов кожи нами изучены параметры позитивности моноклональных антител (МКА) CD3, CD4, CD8, Ki67 и Granzyme В. Для данных исследований использованы по 5 имиджей в каждом наблюдении.In the dermis of patients with GM on the standard area of skin sections, we studied the positivity parameters of monoclonal antibodies (MCA) CD3, CD4, CD8, Ki67 and Granzyme B. For these studies, 5 images were used in each observation.
Результаты исследований поясняются следующими фигурами, где:The research results are illustrated by the following figures, where:
на фиг. 1 показаны исходные оцифрованные изображения биоптата кожи больного ГМ с наличием позитивного окрашивания CD3, CD4 и CD8 МКА;in FIG. 1 shows the original digitized image of a biopsy sample of the skin of a patient with GM with the presence of positive staining of CD3, CD4 and CD8 MCA;
на фиг. 2 - изображения иммунофенотипирования биоптата кожи больного ГМ после автоматизированной компьютерной обработки с точным выделением объектов;in FIG. 2 - image immunophenotyping biopsy of the skin of a patient with GM after automated computer processing with accurate selection of objects;
на фиг. 3 - распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD3 у всех групп больных;in FIG. 3 - distribution of the values of the function F from the values of the proportion of the positive color of the CD3 immunomarker in all groups of patients;
на фиг. 4 - распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD4 у всех групп больных;in FIG. 4 - distribution of the values of the function F from the values of the proportion of the positive color of the CD4 immunomarker in all groups of patients;
на фиг. 5 - распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера Ki67 у всех групп больных;in FIG. 5 - distribution of the values of the function F from the values of the proportion of the positive coloration of the Ki67 immunomarker in all groups of patients;
на фиг. 6 - пятна на коже левой подмышечной области;in FIG. 6 - spots on the skin of the left axillary region;
на фиг. 7 - пятна и бляшки на коже туловища;in FIG. 7 - spots and plaques on the skin of the body;
на фиг. 8 - пятна, бляшки и единичные опухоли на коже.in FIG. 8 - spots, plaques and single tumors on the skin.
Примеры исходных оцифрованных изображений биоптата кожи больного ГМ с наличием позитивного окрашивания CD3, CD4 и CD8 МКА (выявляются активированные Т-лимфоциты (коричневый цвет) в дерме, увеличение 400) представлены на фиг. 1.Examples of initial digitized images of a biopsy sample of the skin of a GM patient with the presence of positive staining of CD3, CD4 and CD8 MCA (activated T-lymphocytes (brown) in the dermis, magnification 400 are detected) are presented in FIG. one.
Обработка оцифрованных изображений иммуногистохимических реакций у больных ГМ в системе анализа изображений «SIAMS Photolab» проводилась в несколько этапов: 1 - предобработка и первичное выделение маски, 2 - разделение масок, 3 - пороговая сегментация, 4 - измерение исследуемых объектов.Digitized images of immunohistochemical reactions in GM patients were processed in the SIAMS Photolab image analysis system in several stages: 1 — preprocessing and primary mask isolation, 2 — mask separation, 3 — threshold segmentation, 4 — measurement of the studied objects.
На завершающем этапе обработки изображений предусматривалось их контрастирование и более точное выделение определенным цветом измеряемых иммунопозитивных объектов с помощью функции пороговой сегментации (выделены активированные CD3, CD4 и CD8 Т-лимфоциты (зеленый цвет) в дерме, увеличение 400, фиг. 2).At the final stage of image processing, they were provided for contrasting and more accurate highlighting of the measured immunopositive objects with a certain color using the threshold segmentation function (activated CD3, CD4, and CD8 T-lymphocytes (green color) in the dermis, magnification 400, Fig. 2).
В результате автоматизированных измерений выделенных на изображениях объектов по каждому из 5 исследуемых имиджей определялись следующие параметры (в мкм2):As a result of automated measurements of the objects selected in the images for each of the 5 studied images, the following parameters were determined (in microns 2 ):
1. Проанализированная площадь гистологического среза кожи.1. The analyzed area of the histological section of the skin.
2. Занимаемая площадь позитивного окрашивания иммуномаркером.2. The occupied area of positive staining with an immunomarker.
3. Объемная доля позитивного окрашивания иммуномаркером.3. Volume fraction of positive immunomarker staining.
На основании обработки 5 имиджей формируется заключительный отчет по выполненному исследованию, содержащий гистограмму распределения объемных долей и таблицу формата MS Word с включением следующих данных:Based on the processing of 5 images, a final report is generated on the study, containing a histogram of the distribution of volume fractions and a table of the MS Word format with the following data:
1. Число проанализированных полей.1. The number of fields analyzed.
2. Проанализированная площадь гистологического среза кожи (мкм2).2. The analyzed area of the histological section of the skin (μm 2 ).
3. Занимаемая площадь позитивного окрашивания иммуномаркером (мкм2).3. The occupied area of positive staining with an immunomarker (μm 2 ).
4. Объемная доля позитивного окрашивания иммуномаркером.4. Volume fraction of positive immunomarker staining.
5. Средняя объемная доля позитивного окрашивания иммуномаркером.5. The average volume fraction of positive immunomarker staining.
6. Среднеквадратичное отклонение объемной доли позитивного окрашивания иммуномаркером.6. The standard deviation of the volume fraction of positive staining with an immunomarker.
Предварительный анализ данных показал значительную вариабельность площади позитивной окраски иммуномаркерами в дерме у больных при стадийном развитии ГМ.A preliminary analysis of the data showed significant variability in the area of positive staining with immunomarkers in the dermis in patients with stage-by-stage development of GM.
Для построения модели определения стадии заболевания исходными данными являлись значения площади позитивной окраски иммуномаркерами в дерме у больных ГМ. На основании фактических данных, полученных в результате заполнения стандартизованных карт, была создана электронная база данных в формате таблиц программы Microsoft Excel.To construct a model for determining the stage of the disease, the initial data were the values of the area of positive staining with immunomarkers in the dermis in patients with GM. Based on the actual data obtained as a result of filling in standardized maps, an electronic database was created in the format of tables in the Microsoft Excel program.
Дальнейшая разработка модели определения стадии ГМ осуществлялась в несколько этапов.Further development of the model for determining the stage of GM was carried out in several stages.
На первом этапе методом вероятностного анализа было проведено выявление нетипичных представителей для каждой из групп исследуемых больных ГМ, присутствие которых в выборке могло существенным образом исказить результаты анализа [11].At the first stage, the method of probabilistic analysis was used to identify atypical representatives for each of the groups of studied patients with GM, the presence of which in the sample could significantly distort the results of the analysis [11].
Произведен пересчет полученных фактических данных площади позитивной окраски иммуномаркерами в дерме у больных ГМ в безразмерные величины (доля площади иммуномаркеров xi). Для этого находилось отношение площади иммуномаркера Sим данного вида к общей площади среза Sср по формуле: xi=Sим/Sср.The obtained actual data of the area of positive staining with immunomarkers in the dermis in patients with GM were recalculated into dimensionless quantities (the proportion of the area of immunomarkers x i ). For this, the ratio of the immunomarker area S by him of a given species to the total cut-off area S cf was found by the formula: x i = S im / S cf.
Далее определяли основные статистические характеристики значений доли площади иммуномаркеров: среднее значение 
где: xi - доля площади иммуномаркера в выборке данных данного пациента с определенной стадией заболевания, N - количество срезов одного иммуномаркера у данного пациента, t - коэффициент Стьюдента.where: x i is the fraction of the immunomarker area in the data sample of this patient with a certain stage of the disease, N is the number of slices of one immunomarker in this patient, t is the student coefficient.
Вычисления проводились при уровне значимости р=0,001 и р=0,01.Calculations were carried out at a significance level of p = 0.001 and p = 0.01.
При обобщении полученных данных таблицы 1 было отмечено, что изучение иммуноморфологических характеристик клеток дермального инфильтрата в биоптате кожи у больных ГМ продемонстрировало закономерные изменения их популяционного состава в динамике прогрессирования заболевания. Как видно из представленной таблицы 1, в группе больных с III (опухолевой) стадией ГМ наблюдалось достоверное увеличение количества всех зрелых Т-лимфоцитов (CD3+) и Т-хелперной субпопуляции лимфоцитов (CD4+), хелперно-индукторной субпопуляции лимфоцитов над супрессорно-цитотоксической (CD4+/CD8+) при сопоставлении с аналогичными показателями дермального инфильтрата у больных I (пятнисто-эритематозной) и II (инфильтративно-бляшечной) стадиями заболевания. Кроме этого, было обнаружено, что у больных ГМ в III стадии показатель объемной доли позитивности Ki67 (0,083±0,030), отражающий факт высокой пролиферативной активности исследованных клеток дермального инфильтрата, в 4,8 и в 1,9 раз соответственно, также превышал аналогичные показатели у больных в I и во II стадии заболевания. В исследуемых группах больных отмечалась недостоверная тенденция к увеличению объемной доли позитивности экспрессии Granzyme В+ на клетках инфильтрата и к снижению количества Т-цитотоксической субпопуляции лимфоцитов (CD8+) при развитии последующих стадий заболевания.When summarizing the data obtained in Table 1, it was noted that the study of immunomorphological characteristics of dermal infiltrate cells in skin biopsy in patients with GM showed regular changes in their population composition in the dynamics of disease progression. As can be seen from the table 1, in the group of patients with stage III (tumor) stage of GM there was a significant increase in the number of all mature T-lymphocytes (CD3 +) and T-helper subpopulation of lymphocytes (CD4 +), helper-induction subpopulation of lymphocytes over suppressor-cytotoxic (CD4 + / CD8 +) when compared with similar indicators of dermal infiltrate in patients with stage I (spotty-erythematic) and II (infiltrative-plaque) stages of the disease. In addition, it was found that in patients with GM in stage III, the indicator of the volume fraction of positivity Ki67 (0.083 ± 0.030), reflecting the fact of the high proliferative activity of the studied cells of the dermal infiltrate, was 4.8 and 1.9 times respectively, also exceeding the same indicators in patients in stage I and stage II disease. In the studied groups of patients, an insignificant tendency was observed to increase the volume fraction of positivity of Granzyme B + expression on infiltrate cells and to decrease the amount of T-cytotoxic lymphocyte subpopulation (CD8 +) during the development of subsequent stages of the disease.
На втором этапе нами был проведен расчет коэффициентов корреляций изучаемых клинико-лабораторных показателей у всех больных ГМ для выявления разнонаправленных векторов у пациентов, входящих в одну группу. Были выявлены разнонаправленные векторы значений площади позитивного окрашивания иммуномаркерами у больных ГМ (таблица 2).At the second stage, we calculated the correlation coefficients of the studied clinical and laboratory parameters in all patients with GM in order to identify multidirectional vectors in patients belonging to the same group. Multidirectional vectors of values of the area of positive staining with immunomarkers in patients with GM were identified (table 2).
В соответствии с данными таблицы 2, у больных ГМ обнаружены сильные положительные корреляционные параллели между количеством CD3 и CD4, CD3 и Ki67, CD4 и Ki67. Согласно методам статистической математики обнаружена линейная зависимость между CD4 и Ki67. Обратную зависимость демонстрировали показатели CD3 и CD8, CD4 и CD8, Ki67 и CD8, Granzyme В и CD8. Количество Т-хелперной субпопуляции лимфоцитов (CD4) и показатель пролиферативной активности исследованных клеток дермального инфильтрата (Ki67) не имели существенной корреляционной связи с маркером апоптоза (Granzyme В).In accordance with the data in table 2, in patients with GM found strong positive correlation parallels between the number of CD3 and CD4, CD3 and Ki67, CD4 and Ki67. According to the methods of statistical mathematics, a linear relationship was found between CD4 and Ki67. The inverse relationship was demonstrated by CD3 and CD8, CD4 and CD8, Ki67 and CD8, Granzyme B and CD8. The number of T-helper subpopulations of lymphocytes (CD4) and the proliferative activity index of the studied dermal infiltrate cells (Ki67) did not have a significant correlation with the apoptosis marker (Granzyme B).
Методами нелинейной динамики [12, 13] определялись пороговые значения объемной доли позитивности ИГХ маркеров биоптата кожи у больных ГМ в зависимости от стадии заболевания (таблица 3).Using nonlinear dynamics methods [12, 13], threshold values of the volume fraction of positivity of IHC of skin biopsy markers in patients with GM depending on the stage of the disease were determined (table 3).
На третьем этапе все отобранные информативные признаки приняли участие в выработке «решающих правил» диагностики. При помощи процедуры пошагового отбора переменных удалось снизить размерность «решающего правила» при сохранении максимальной правильности распознавания образов. Согласно таблицам 2 и 3 выделены три базисных показателя (CD3, CD4 и Ki67), которые максимально характеризуют векторную динамику стадийного развития заболевания.At the third stage, all the selected informative signs took part in the development of “decisive rules” for diagnosis. Using the procedure of step-by-step selection of variables, it was possible to reduce the dimension of the “decision rule” while maintaining the maximum accuracy of pattern recognition. According to tables 2 and 3, three basic indicators (CD3, CD4, and Ki67) are selected that characterize the vector dynamics of the stage development of the disease to the maximum.
Методом наименьших квадратов с учетом пороговых значений показателей были построены линейные функции F от объемной доли позитивной окраски иммуномаркерами CD3, CD4 и Ki67 у больных ГМ (фиг. 3-5).Using the least squares method taking into account the threshold values of the indicators, linear functions F were constructed from the volume fraction of positive staining with immunomarkers CD3, CD4 and Ki67 in patients with GM (Fig. 3-5).
На фиг. 3. показано распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD3 у всех групп больных (точками обозначены данные по CD3 из таблицы 1).In FIG. 3. shows the distribution of the values of the function F from the values of the proportion of the positive color of the CD3 immunomarker in all groups of patients (dots indicate the data on CD3 from table 1).
На фиг. 4 показано распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера CD4 у всех групп больных (точками обозначены данные по CD4 из таблицы 1).In FIG. Figure 4 shows the distribution of the values of the function F from the values of the proportion of the positive color of the CD4 immunomarker in all groups of patients (points indicate the data on CD4 from table 1).
На фиг. 5 показано распределение значений функции F от значений доли позитивной окраски иммуномаркера Ki67 у всех групп больных (точками обозначены данные по Ki67 из таблицы 1).In FIG. Figure 5 shows the distribution of the values of the function F from the values of the proportion of the positive coloration of the Ki67 immunomarker in all groups of patients (points indicate Ki67 data from table 1).
Регрессионным анализом и методом наименьших квадратов с учетом пороговых значений показателей была построена результирующая линейная функция F от объемной доли позитивной окраски иммуномаркерами (моноклональными антителами) CD3, CD4 и Ki67 у больных ГМ для определения стадии заболевания:Regression analysis and the least squares method, taking into account the threshold values of the indicators, we constructed the resulting linear function F of the volume fraction of positive staining with CD3, CD4, and Ki67 immunomarkers (monoclonal antibodies) in patients with GM to determine the stage of the disease:
F=1,75*Х1+2,03*Х2+12,81*Х3+0,22,F = 1.75 * X1 + 2.03 * X2 + 12.81 * X3 + 0.22,
гдеWhere
F - суммарная удельная значимость иммунопозитивности указанных моноклональных антител;F is the total specific significance of the immunopositivity of these monoclonal antibodies;
X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3,X1 - the average value of the volume fraction of positive color CD3,
Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4,X2 - the average value of the volume fraction of positive color CD4,
Х3 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67,X3 - the average value of the volume fraction of positive coloration Ki67,
1,75; 2,03; 12,81 и 0,22 - поправочные коэффициенты.1.75; 2.03; 12.81 and 0.22 are correction factors.
Поправочные коэффициенты удельной значимости перед переменными X1, Х2 и Х3 и коэффициент 0,22 в функции F были подобраны экспериментальным путем.Correction coefficients of specific significance in front of variables X1, X2 and X3 and a coefficient of 0.22 in function F were selected experimentally.
В результате для каждой стадии ГМ были получены следующие значения функции F:As a result, for each stage of the GM, the following values of the function F were obtained:
ГМ I (эритематозно-пятнистая стадия): 0,220≤F≤1,535;GM I (erythematous-spotted stage): 0.220≤F≤1.535;
ГМ II (инфильтративно-бляшечная стадия): 1,536≤F≤2,888;GM II (infiltrative-plaque stage): 1,536≤F≤2,888;
ГМ III (опухолевая стадия): 2,889≤F≤4,700.GM III (tumor stage): 2,889≤F≤4,700.
Данные значения интервалов были получены с уровнем значимости р<0,05.These interval values were obtained with a significance level of p <0.05.
Способ осуществляется следующим образом:The method is as follows:
1. После подписания больным информированного согласия на исследование проводится инцизионная биопсия кожи на участке с наиболее выраженными клиническими проявлениями дерматоза.1. After signing the patient informed consent to the study, an incisional skin biopsy is performed on the site with the most pronounced clinical manifestations of dermatosis.
2. По стандартным методикам изготавливаются парафиновые блоки и гистопрепараты кожи, выполняется ИФТ с использованием панели МКА, рекомендованной для диагностики ГМ [1].2. By standard methods, paraffin blocks and histopathological preparations of the skin are made, IPT is performed using the MCA panel recommended for the diagnosis of GM [1].
3. Выполняется оцифровка изображений и отбор 5 имиджей для количественных исследований по критерию максимального содержания в них иммунопозитивных лимфоцитов.3. Images are digitized and 5 images are selected for quantitative studies according to the criterion of the maximum content of immunopositive lymphocytes in them.
4. Проводится автоматизированная обработка каждого из 5 исследуемых изображений в системе «SIAMS Photolab» с вычислением значений средних объемных долей позитивного окрашивания моноклональных антител CD3, CD4 и Ki67.4. Automated processing of each of the 5 studied images is carried out in the SIAMS Photolab system with calculation of the values of the average volume fractions of positive staining of monoclonal antibodies CD3, CD4 and Ki67.
5. Для определения стадии ГМ у больного рассчитывается суммарная удельная значимость и значение каждого из исследуемых иммуномаркеров, подставив в уравнение значения соответствующих признаков по формуле:5. To determine the stage of GM in a patient, the total specific significance and value of each of the studied immunomarkers is calculated, substituting in the equation the values of the corresponding signs according to the formula:
F=1,75*Х1+2,03*Х2+12,81*Х3+0,22,F = 1.75 * X1 + 2.03 * X2 + 12.81 * X3 + 0.22,
где X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3, Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4, Х3 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67.where X1 is the average value of the volume fraction of positive color CD3, X2 is the average value of the volume fraction of positive color CD4, X3 is the average value of the volume fraction of positive color Ki67.
6. Сравнив между собой полученное значение переменной F у конкретного больного и пороговые значения обучающей выборки, делается заключение о наличии у больного соответствующей стадии ГМ.6. Comparing the obtained value of the variable F for a particular patient and the threshold values of the training sample, the conclusion is made that the patient has the corresponding stage of GM.
Клинико-диагностическая апробация заявленного способа определения стадии ГМ:Clinical diagnostic testing of the claimed method for determining the stage of GM:
Описываемый способ определения стадии ГМ нами был применен в клинике ГБУ СО «УрНИИДВиИ» у 30 больных. В таблице 4 приведены данные сопоставления правильности определения стадии заболевания у больных ГМ заявленным способом с экспертной оценкой и патоморфологической верификацией.The described method for determining the stage of GM was used by us in the clinic of GBU SB "UrNIIDViI" in 30 patients. Table 4 shows data comparing the correctness of determining the stage of the disease in patients with GM by the claimed method with expert evaluation and pathomorphological verification.
Как следует из представленной таблицы 4, совпадение результатов проведенных тестов на обучающей выборке с экспертной оценкой и патоморфологической верификацией диагноза у больных свидетельствует о специфичности разработанного нами способа определения стадии ГМ.As follows from the presented table 4, the coincidence of the results of tests on the training sample with expert assessment and pathomorphological verification of the diagnosis in patients indicates the specificity of the method we developed for determining the stage of GM.
Достоверность подобного разделения больных ГМ на стадии заболевания составила в среднем 94,58%, причем наибольшая достоверность была зафиксирована у больных с опухолевой стадией, наименьшая - в начальной стадии заболевания.The reliability of such a separation of patients with GM at the stage of the disease averaged 94.58%, with the highest reliability recorded in patients with a tumor stage, the lowest - at the initial stage of the disease.
В качестве иллюстрации применения способа определения стадии ГМ у больных приводим собственные клинические наблюдения.As an illustration of the application of the method for determining the stage of GM in patients, we present our own clinical observations.
Больная З., 1959 года рождения, поступила в отделение хронических дерматозов ГБУ СО «УрНИИДВиИ» с жалобами на распространенные пятна и бляшки на коже верхних конечностей, груди, живота и спины, сопровождающиеся периодическим зудом, покалыванием, стягиванием и шелушением кожи.Patient Z., born in 1959, was admitted to the Department of Chronic Dermatoses of GBU SB “UrNIIDViI” with complaints of common spots and plaques on the skin of the upper extremities, chest, abdomen and back, accompanied by periodic itching, tingling, tightening and peeling of the skin.
Считает себя больной в течение 10-11 лет, когда без видимой причины на коже левой подмышечной области, груди и паховой области появились единичные пятна, без зуда и шелушения. На протяжении последующих нескольких лет на фоне инсоляции в летний период года отмечала исчезновение пятен на коже, и только в 2012 г. при появлении кожного зуда и увеличении размеров и цвета очагов поражения кожи пациентка была вынуждена впервые обратиться к дерматовенерологу. За период с 2012 по 2015 гг. с целью верификации диагноза дважды проводились диагностические биопсии кожи, больная ежегодно находилась на стационарном лечении с диагнозом парапсориаз, где ей назначались Н1-антигистаминные средства, десенсибилизирующая терапия, селективное УФО, ПУВА-ванны с 0,3% р-ром аммифурина, наружно - топические глюкокортикостероиды. В результате проводимой терапии достигались умеренные периоды клинической ремиссии.Considers herself a patient for 10-11 years, when, for no apparent reason, single spots appeared on the skin of the left axillary region, chest and inguinal region, without itching and peeling. Over the next few years, against the background of insolation in the summer season, the disappearance of spots on the skin was noted, and only in 2012 with the appearance of skin itching and an increase in the size and color of the foci of skin lesions, the patient was forced to consult a dermatovenerologist for the first time. For the period from 2012 to 2015. in order to verify the diagnosis, diagnostic skin biopsies were performed twice, the patient was hospitalized annually with a diagnosis of parapsoriasis, where she was prescribed H1 antihistamines, desensitizing therapy, selective ultraviolet radiation, PUVA baths with 0.3% ammifurine solution, externally topical glucocorticosteroids. As a result of the therapy, moderate periods of clinical remission were achieved.
За предыдущие 6-7 месяцев отметила ухудшение течения заболевания - усиление кожного зуда и появление новых пятен, в связи с чем была госпитализирована в отделение хронических дерматозов ГБУ СО «УрНИИДВиИ».Over the previous 6-7 months, she noted a worsening of the course of the disease - increased skin itching and the appearance of new spots, in connection with which she was hospitalized in the Department of Chronic Dermatoses, GBU SB "UrNIIDViII".
Анамнез жизни, аллергоанамнез и профессиональный маршрут у больной без особенностей. Наследственность по кожным заболеваниям и онкопатологии не отягощена.An anamnesis of life, an allergy history and a professional route in a patient without features. Heredity for skin diseases and oncopathology is not burdened.
Объективно: больная среднего роста, правильного телосложения, удовлетворительного питания. В легких дыхание везикулярное, хрипы не выслушиваются. Тоны сердца ясные, ритмичные, АД 120/80 мм рт.ст., ЧСС 76 в минуту. Живот мягкий, безболезненный при пальпации, печень и селезенка не увеличены. Лимфатические узлы мягкие, безболезненные и подвижные при пальпации. Физиологические отправления в норме.Objectively: a patient of average height, proper physique, satisfactory nutrition. In the lungs, vesicular breathing, wheezing is not heard. Heart sounds are clear, rhythmic, blood pressure 120/80 mm Hg, heart rate 76 per minute. The abdomen is soft, painless on palpation, the liver and spleen are not enlarged. Lymph nodes are soft, painless and mobile on palpation. Physiological administration is normal.
Локальный статус: непораженные участки кожных покровов физиологической окраски, нормальной влажности и тургора. Видимые слизистые влажные, физиологической окраски. Кожный процесс имеет распространенный и симметричный характер, поражены боковые поверхности шеи, грудь, плечи, подмышечные области, предплечья и боковые поверхности живота. Представлен буровато-розовыми пятнами, диаметром до 5,5 см, с четкими границами и шероховатой поверхностью. На коже живота и подмышечных областей присутствуют единичные пятна буроватого цвета, диаметром до 3,5 см, с умеренной инфильтацией и незначительным шелушением в центральной части. На поверхности пятен отсутствует рост волос, имеются единичные экскориации с точечными геморрагическими корочками, дермографизм белый (фиг. 6).Local status: unaffected areas of the skin of physiological color, normal humidity and turgor. Visible mucous membranes are moist, physiological in color. The skin process is widespread and symmetrical, the lateral surfaces of the neck, chest, shoulders, axillary areas, forearms and lateral surfaces of the abdomen are affected. It is represented by brownish-pink spots, with a diameter of up to 5.5 cm, with clear boundaries and a rough surface. On the skin of the abdomen and axillary areas there are single spots of brownish color, with a diameter of up to 3.5 cm, with moderate infiltration and slight peeling in the central part. There is no hair growth on the surface of the spots, there are single excoriations with punctate hemorrhagic crusts, white dermographism (Fig. 6).
Лабораторные данные. Общий анализ крови: Hb - 130 г/л, эр. - 4,2×1012/л, лейк. - 5,1×109/л, нейтр. - 2,9×109/л, эоз. - 0,1×109/л, лимф. - 1,7×109/л, мон. - 0,4×109/л, СОЭ - 10 мм/ч. В общем анализе мочи и биохимической гепатограмме отклонений не выявлено. Комплекс серологических реакций к Treponema pallidum отрицательный. Антитела к ВИЧ, гепатитам В и С не обнаружены.Laboratory data. Complete blood count: Hb - 130 g / l, er. - 4.2 × 10 12 / l, lake. - 5.1 × 10 9 / l, neutr. - 2.9 × 10 9 / l, eos. - 0.1 × 10 9 / l, lymph. - 1.7 × 10 9 / l, mon. - 0.4 × 10 9 / l, ESR - 10 mm / h. In the general analysis of urine and biochemical hepatogram deviations were not detected. The complex of serological reactions to Treponema pallidum is negative. Antibodies to HIV, hepatitis B and C were not found.
Проведенное гистологическое исследование биоптата кожи выявило наличие в верхних отделах дермы умеренно выраженного очагового лимфоцитарного инфильтрата с признаками эпидермотропизма.A histological study of skin biopsy revealed the presence in the upper parts of the dermis of a moderately expressed focal lymphocytic infiltrate with signs of epidermotropism.
Иммуногистохимические препараты кожи больной нами были подвергнуты автоматизированной морфометрии с использованием компьютерной программы «SIAMS-Photolab», вычисленные показатели составили: среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3=0,21188, среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4=0,1014447, среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67=0,02525.The immunohistochemical preparations of the patient’s skin were subjected to automated morphometry using the SIAMS-Photolab computer program, the calculated parameters were: the average value of the volume fraction of positive color CD3 = 0.21188, the average value of the volume fraction of positive color CD4 = 0.1014447, the average value of volume shares of positive coloration Ki67 = 0.02525.
Для определения стадии ГМ указанным способом в уравнение были подставлены значения соответствующих признаков:To determine the stage of GM in this way, the values of the corresponding attributes were substituted into the equation:
F=1,75*0,21188+2,03*0,1014447+12,81*0,02525+0,22F = 1.75 * 0.21188 + 2.03 * 0.1014447 + 12.81 * 0.02525 + 0.22
При сравнении с обучающей выборкой полученное значение F=1,13246 у данной больной имело числовые параметры, характерные для I стадии ГМ (0,220≤F≤1,535). На основании результатов патоморфологического, иммуногистохимического исследования биоптата кожи с использованием способа определения стадии заболевания у больной был установлен диагноз: первичная кожная лимфома: грибовидный микоз, эритематозно-пятнистая стадия.When compared with the training sample, the obtained value F = 1.13246 in this patient had numerical parameters characteristic of stage I of the GM (0.220≤F≤1.535). Based on the results of a pathomorphological, immunohistochemical study of skin biopsy using a method for determining the stage of the disease, the patient was diagnosed with primary cutaneous lymphoma: fungal mycosis, erythematous-spotted stage.
Больной Р., 1980 г. рождения, поступил в клинику ГБУ СО «УрНИИДВиИ» для уточнения диагноза. Болен в течение 6 лет, когда впервые заметил появление пятна на коже левой лопаточной области. Сезонности обострений не отмечал, наблюдал усиление окраски пятна и появление кратковременного зуда на фоне инсоляции. При появлении пятен на других участках кожного покрова в ноябре 2014 г. впервые обратился к дерматологу по месту жительства. Лечение у дерматолога с диагнозом парапсориаз? и использованием Н1-антигистаминных препаратов, топических глюкокортикостероидов давало лишь кратковременный эффект.Patient R., born in 1980, was admitted to the clinic of GBU SB “UrNIIDViI” to clarify the diagnosis. Sick for 6 years, when he first noticed the appearance of a spot on the skin of the left scapular region. I did not note the seasonality of exacerbations; I observed an increase in the color of the spot and the appearance of short-term itching against the background of insolation. When spots appeared on other areas of the skin in November 2014, he first turned to a dermatologist at the place of residence. Treatment with a dermatologist diagnosed with parapsoriasis? and the use of H1 antihistamines, topical glucocorticosteroids gave only a short-term effect.
За предыдущие 2-3 месяца отметил прогрессирование заболевания, усиление окраски пятен и появление новых элементов на коже, сопровождающихся интенсивным зудом.Over the previous 2-3 months, he noted the progression of the disease, increased staining of the spots and the appearance of new elements on the skin, accompanied by intense itching.
Анамнез жизни, аллергоанамнез и профессиональный маршрут у больного без особенностей. Наследственность по кожным заболеваниям и онкопатологии не отягощена. При общем осмотре патологических отклонений по системам и органам не выявлено. Лимфатические узлы мягкие, безболезненные и подвижные при пальпации. Физиологические отправления в норме.Anamnesis of life, allergoamnesis and professional route in a patient without features. Heredity for skin diseases and oncopathology is not burdened. A general examination of pathological abnormalities in systems and organs was not detected. Lymph nodes are soft, painless and mobile on palpation. Physiological administration is normal.
Локальный статус: кожный процесс имеет распространенный характер. На коже левой лопаточной области, левой половины груди, левой подмышечной области и правого бедра присутствуют буровато-розовые пятна и умеренно инфильтрированные бляшки диаметром до 7 см, овальной формы, с четкими границами и шероховатой поверхностью. На поверхности пятен и бляшек отсутствует рост волос, имеются экскориации с геморрагическими корочками, дермографизм белый (фиг 7).Local status: the skin process is common. On the skin of the left scapular region, the left half of the chest, the left axillary region and the right thigh, there are brownish-pink spots and moderately infiltrated plaques up to 7 cm in diameter, oval in shape, with clear borders and a rough surface. On the surface of spots and plaques there is no hair growth, there are excoriations with hemorrhagic crusts, white dermographism (Fig. 7).
Лабораторные данные. Общий анализ крови: Hb - 156 г/л, эр. - 5,16×1012/л, лейк. - 7,6×109/л, нейтр. - 5,4×109/л, эоз. - 0,3×109/л, лимф. - 1,5×109/л, мон. - 0,3×109/л, СОЭ - 2 мм/ч. В общем анализе мочи и иммунограмме отклонений не выявлено. В биохимической гепатограмме - повышение общего билирубина до 23,0 мкмоль/л. Комплекс серологических реакций к Treponema pallidum отрицательный. Антитела к ВИЧ, гепатитам В и С не обнаружены.Laboratory data. Complete blood count: Hb - 156 g / l, er. - 5.16 × 10 12 / l, lake. - 7.6 × 10 9 / l, neutr. - 5.4 × 10 9 / l, eos. - 0.3 × 10 9 / l, lymph. - 1.5 × 10 9 / l, mon. - 0.3 × 10 9 / l, ESR - 2 mm / h. In the general analysis of urine and the immunogram, deviations were not detected. In the biochemical hepatogram - an increase in total bilirubin to 23.0 μmol / L. The complex of serological reactions to Treponema pallidum is negative. Antibodies to HIV, hepatitis B and C were not found.
Патоморфологическое исследование биоптата кожи больного: в верхних отделах дермы присутствует неравномерно выраженный, диффузно-очаговый, эпидермотропный инфильтрат из лимфоидных клеток малого и среднего размера, местами «размывающий» дермо-эпидермальную границу с формированием в эпидермисе небольших скоплений типа микроабсцессов Потрие.Pathomorphological study of the biopsy specimen of the patient’s skin: in the upper parts of the dermis there is an uneven, diffuse-focal, epidermotropic infiltrate from small and medium sized lymphoid cells, sometimes “eroding” the dermo-epidermal border with the formation of small clusters in the epidermis such as Potrier microabscesses.
Иммуногистохимическое исследование биоптата кожи больного: опухолевые клетки экспрессируют CD3, CD4 и CD8; В-лимфоциты (CD20) в виде единичных скоплений среди опухолевых клеток; определяются единичные Т-лимфоциты, экспрессирующие CD7, CD8 и Granzyme В.Immunohistochemical study of a biopsy of the patient’s skin: tumor cells express CD3, CD4 and CD8; B-lymphocytes (CD20) in the form of single clusters among tumor cells; single T cells expressing CD7, CD8 and Granzyme B are detected.
Иммуногистохимические препараты биоптата кожи больного были подвергнуты морфометрии с использованием компьютерной программы «SIAMS-Photolab», вычисленные показатели составили: среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3=0,51, среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4=0,131, среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67=0,059437.Immunohistochemical biopsy samples of the patient’s skin were subjected to morphometry using the SIAMS-Photolab computer program, the calculated values were: average volume fraction of positive color CD3 = 0.51, average volume fraction of positive color CD4 = 0.131, average volume fraction of positive color Ki67 = 0.059437.
Для определения у данного больного стадии ГМ указанным способом в уравнение были подставлены значения соответствующих признаков:To determine the stage of GM in this patient in this way, the values of the corresponding signs were substituted into the equation:
F=1,75*0,51+2,03*0,131+12,81*0,059437+0,22F = 1.75 * 0.51 + 2.03 * 0.131 + 12.81 * 0.059437 + 0.22
При сравнении с обучающей выборкой полученное значение F=2,13981 у данного больного имело числовые параметры, характерные для II стадии ГМ (1,536≤F≤2,888).When compared with the training sample, the obtained value F = 2.13981 in this patient had numerical parameters characteristic of stage II GM (1.536≤F≤2.888).
На основании данных гистологического и иммуногистохимического методов исследования биоптата кожи и результатов, полученных заявленным способом, больному был установлен диагноз: первичная лимфома кожи, грибовидный микоз, инфильтративно-бляшечная стадия.Based on the data of histological and immunohistochemical methods for studying skin biopsy and the results obtained by the claimed method, the patient was diagnosed with primary skin lymphoma, fungoid mycosis, infiltrative plaque stage.
Больной В., 1955 г. рождения, поступил в клинику ГБУ СО «УрНИИДВиИ» с жалобами на распространенные высыпания на коже туловища и верхних конечностей, сопровождающиеся периодическим интенсивным зудом, шелушением и стягиванием кожи. Болеет в течение 4 лет, когда впервые возникло пятно на коже тыльной поверхности правой кисти. В течение последующих нескольких месяцев обратил внимание на появление аналогичных пятен на коже туловища. Наблюдался у дерматовенеролога по месту жительства (г. Тюмень) с диагнозом крупнобляшечный парапсориаз, на фоне наружного применения топических глюкокортикостероидов отмечалось кратковременное улучшение.Patient V., born in 1955, was admitted to the clinic of GBU SB “UrNIIDViI” with complaints of widespread rashes on the skin of the trunk and upper limbs, accompanied by periodic intense itching, peeling and tightening of the skin. Sick for 4 years, when a spot first appeared on the skin of the back surface of the right hand. Over the next few months, he drew attention to the appearance of similar spots on the skin of the body. It was observed by a dermatovenerologist at the place of residence (Tyumen) with a diagnosis of large plaque parapsoriasis, with a topical application of topical glucocorticosteroids, a short-term improvement was noted.
Анамнез жизни, аллергоанамнез и профессиональный маршрут у больного без особенностей. Наследственность по кожным заболеваниям и онкопатологии не отягощена. При общем осмотре патологических отклонений по системам и органам не выявлено. Лимфатические узлы мягкие, безболезненные и подвижные при пальпации. Физиологические отправления в норме.Anamnesis of life, allergoamnesis and professional route in a patient without features. Heredity for skin diseases and oncopathology is not burdened. A general examination of pathological abnormalities in systems and organs was not detected. Lymph nodes are soft, painless and mobile on palpation. Physiological administration is normal.
Локальный статус: непораженные участки кожных покровов физиологической окраски, нормальной влажности и тургора. Видимые слизистые влажные, физиологической окраски. Кожный процесс имеет распространенный характер, поражены - грудь, живот, поясничная область, плечи, предплечья и тыльные поверхности кистей, представлен пятнами, бляшками и единичными опухолевыми элементами. На коже груди, живота, предплечий и поясничной области имеются многочисленные пятна розового и бледно-красного цвета, диаметром до 8-9 см, с четкими границами, без шелушения и экскориаций. На коже правой подлопаточной области, разгибательной поверхности левого предплечья и поясничной области присутствуют округлые бляшки, кирпично-красного цвета, диаметром до 7 см, с точечными геморрагическими корочками в местах экскориаций. На поверхности пятен и бляшек отсутствует рост волос, имеются единичные трещинки в местах физиологических складок кожи, незначительное мелкопластинчатое шелушение. На коже правой подмышечной области отмечены 2 опухолевидных элемента, округлой формы, диаметром 0,8 см и 1,5 см, ярко-красного цвета, с гладкой поверхностью, дермографизм белый (фиг. 8).Local status: unaffected areas of the skin of physiological color, normal humidity and turgor. Visible mucous membranes are moist, physiological in color. The skin process is common, the chest, abdomen, lumbar region, shoulders, forearms and back surfaces of the hands are affected, it is represented by spots, plaques and single tumor elements. On the skin of the chest, abdomen, forearms and lumbar region there are numerous spots of pink and pale red in diameter, up to 8-9 cm in diameter, with clear boundaries, without peeling and excoriation. On the skin of the right subscapular region, the extensor surface of the left forearm and lumbar region there are rounded plaques, brick-red in diameter, up to 7 cm in diameter, with punctate hemorrhagic crusts in the places of excoriation. There is no hair growth on the surface of the spots and plaques, there are single cracks in the places of physiological folds of the skin, a slight fine plate peeling. On the skin of the right axillary region 2 tumor-like elements were marked, round in shape, 0.8 cm and 1.5 cm in diameter, bright red in color, with a smooth surface, white dermographism (Fig. 8).
Лабораторные данные. Общий анализ крови: Hb - 137 г/л, эр. - 4,89×1012/л, лейк. - 5,1×109/л, нейтр. - 2,8×109/л, эоз. - 0,4×109/л, лимф. - 1,3×109/л, мон. - 0,5×109/л, СОЭ - 4 мм/ч. В общем анализе мочи и иммунограмме отклонений не выявлено. В биохимической гепатограмме - повышение холестерина до 5,77 ммоль/л. Комплекс серологических реакций к Treponema pallidum отрицательный. Антитела к ВИЧ, гепатитам В и С не обнаружены.Laboratory data. Complete blood count: Hb - 137 g / l, er. - 4.89 × 10 12 / l, lake. - 5.1 × 10 9 / l, neutr. - 2.8 × 10 9 / l, eos. - 0.4 × 10 9 / l, lymph. - 1.3 × 10 9 / l, mon. - 0.5 × 10 9 / l, ESR - 4 mm / h. In the general analysis of urine and the immunogram, deviations were not detected. In the biochemical hepatogram - an increase in cholesterol to 5.77 mmol / L. The complex of serological reactions to Treponema pallidum is negative. Antibodies to HIV, hepatitis B and C were not found.
Патоморфологическое исследование биоптата кожи больного: в верхних и средних отделах дермы присутствует плотный, полосовидный, эпидермотропный инфильтрат из лимфоидных клеток разных размеров, «размывающий» дермо-эпидермальную границу и проникающий в эпидермис, в котором прослеживается очаговая деструкция. Определяются множественные микроабсцессы Потрие. Митотическая активность достаточно высокая.A pathomorphological study of the patient’s skin biopsy: in the upper and middle parts of the dermis, there is a dense, strip-like, epidermotropic infiltrate from lymphoid cells of different sizes, “eroding” the dermo-epidermal border and penetrating the epidermis, in which focal destruction is traced. Multiple Potassium microabscesses are determined. Mitotic activity is quite high.
Иммуногистохимические препараты биоптата кожи больного были подвергнуты морфометрии с использованием компьютерной программы «SIAMS-Photolab», вычисленные показатели составили: среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3=0,713, среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4=0,581, среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67=0,0487.Immunohistochemical preparations of the patient’s skin biopsy were subjected to morphometry using the SIAMS-Photolab computer program, the calculated indices were: average volume fraction of positive color CD3 = 0.713, average volume fraction of positive color CD4 = 0.581, average volume fraction of positive color Ki67 = 0.0487.
Для определения у данного больного стадии ГМ указанным способом в уравнение были подставлены значения соответствующих признаков:To determine the stage of GM in this patient in this way, the values of the corresponding signs were substituted into the equation:
F=1,75*0,781+2,03*0,476+12,81*0,117+0,22F = 1.75 * 0.781 + 2.03 * 0.476 + 12.81 * 0.117 + 0.22
При сравнении с обучающей выборкой полученное значение F=4,05 у данного больного имело числовые параметры, характерные для III стадии ГМ (2,889≤F≤4,700).When compared with the training sample, the obtained value F = 4.05 in this patient had numerical parameters characteristic of stage III GM (2,889≤F≤4,700).
На основании результатов патоморфологического, иммуногистохимического и морфометрического методов исследования биоптата кожи и данных, полученных заявленным способом, больному В. был установлен диагноз: первичная лимфома кожи, грибовидный микоз, опухолевая стадия.Based on the results of pathomorphological, immunohistochemical and morphometric methods for studying skin biopsy and the data obtained by the claimed method, patient B. was diagnosed with primary skin lymphoma, fungoid mycosis, tumor stage.
Использованная литератураReferences
1. Федеральные клинические рекомендации. Дерматовенерология 2015: Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. - 5-е изд., перераб. и доп. - М. Деловой экспресс, 2016. - 768 с.1. Federal clinical guidelines. Dermatovenerology 2015: Diseases of the skin. Sexually transmitted infections. - 5th ed., Revised. and add. - M. Business Express, 2016 .-- 768 p.
2. Малишевская Н.П., Кохан М.М., Соколова А.В., Куклин И.А. и соавт. Дерматоонкология (злокачественные новообразования кожи, первичные лимфомы кожи): Атлас / Под общ. ред. Н.В. Кунгурова. - Екатеринбург: Изд-во Урал. Ун-та, 2016. - 168 с.2. Malishevskaya N.P., Kokhan M.M., Sokolova A.V., Kuklin I.A. et al. Dermato-oncology (malignant neoplasms of the skin, primary lymphomas of the skin): Atlas / Under total. ed. N.V. Kungurova. - Yekaterinburg: Publishing House Ural. University, 2016 .-- 168 p.
3. Вольф К., Голдсмит Л.А., Кац С.И. Дерматология Фицпатрика в клинической практике. Пер. с англ. М.: Изд. Панфилова. БИНОМ; 2012.-Т. 2. - С. 1514-1531.3. Wolf K., Goldsmith L.A., Katz S.I. Dermatology Fitzpatrick in clinical practice. Per. from English M .: Publishing. Panfilova. BINOMIAL; 2012.-T. 2. - S. 1514-1531.
4. Willemze R. Primary cutaneous lymphoma: ESMO Clinical Recommendations for diagnosis, treatment and follow-up / R. Willemze, M. Dreyling // Annals of Oncology. - 2009. - Vol. 20. - P. 115-118.4. Willemze R. Primary cutaneous lymphoma: ESMO Clinical Recommendations for diagnosis, treatment and follow-up / R. Willemze, M. Dreyling // Annals of Oncology. - 2009. - Vol. 20. - P. 115-118.
5. Сафонова Г.Д. Оптимизация диагностики и перспективы патогенетических исследований первичных лимфом кожи (обзор литературы) / Г.Д. Сафонова, М.М. Кохан, Н.В. Зильберберг, О.Г. Римар, И.А. Куклин // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2014. - №12. - С. 264-268.5. Safonova G.D. Optimization of diagnostics and prospects of pathogenetic studies of primary skin lymphomas (literature review) / G.D. Safonova, M.M. Kokhan, N.V. Silberberg, O.G. Rimar, I.A. Kuklin // International Journal of Applied and Basic Research. - 2014. - No. 12. - S. 264-268.
6. Qureshi A. Allred scoring for ER reporting and it's impact in clearly distinguishing ER negative from ER positive breast cancers / A. Qureshi, S. Pervez // Journal Pakistan Medical Association. - 2010. - Vol. 60 (5). - P. 350-353.6. Qureshi A. Allred scoring for ER reporting and it's impact in clearly distinguishing ER negative from ER positive breast cancers / A. Qureshi, S. Pervez // Journal Pakistan Medical Association. - 2010 .-- Vol. 60 (5). - P. 350-353.
7. Allred D.C. Assessment of prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemistry // Connection. - 2005. - Vol. 9. - P. 4-5.7. Allred D.C. Assessment of prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemistry // Connection. - 2005. - Vol. 9. - P. 4-5.
8. Сыдиков А.А. Иммуногистохимические критерии диагностики мелкобляшечного парапсориаза, крупнобляшечного парапсориаза и грибовидного микоза / А.А. Сыдиков, Д.В. Заславский, B.C. Зайцев, Р.А. Насыров // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - №6. - С. 568-575.8. Sydikov A.A. Immunohistochemical criteria for the diagnosis of small plaque parapsoriasis, large plaque parapsoriasis and fungoid mycosis / A.A. Sydikov, D.V. Zaslavsky, B.C. Zaitsev, R.A. Nasyrov // Modern problems of science and education. - 2013. - No. 6. - S. 568-575.
9. http://www.findpatent.ru/patent/255/2553340.html.9. http://www.findpatent.ru/patent/255/2553340.html.
10. Жуков А.С. Уровень пролиферативной активности лимфоцитов при грибовидном микозе и бляшечном псориазе / Жуков А.С., Белоусова И.Э., Хайрутдинов В.Р. и соавт.// Вестник дерматологии и венерологии. - 2014. - №1. - С. 30-36.10. Zhukov A.S. The level of proliferative activity of lymphocytes with fungal mycosis and plaque psoriasis / Zhukov A.S., Belousova I.E., Khayrutdinov V.R. et al. // Bulletin of Dermatology and Venereology. - 2014. - No. 1. - S. 30-36.
11. Арнольд В.И. Математические методы классической механики. - 5-е изд., стереот. - М.: Едиториал УРСС, 2003. - 416 с.11. Arnold V.I. Mathematical methods of classical mechanics. - 5th ed., Stereo. - M .: URSS editorial, 2003 .-- 416 p.
12. Самарский А.А., Курдюмов С.П., Ахромеева Т.С., Малинецкий Г.Г. // Информатика и научно-технический прогресс.- М.: Наука, 1987. - С. 69-91.12. Samarsky A.A., Kurdyumov S.P., Akhromeeva T.S., Malinetskiy G.G. // Computer science and scientific and technological progress.- M .: Nauka, 1987. - P. 69-91.
13. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. // Математическая статистика в клинических исследованиях. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 256 с.13. Sergienko V.I., Bondareva I.B. // Mathematical statistics in clinical studies. - M.: GEOTAR-MED, 2001 .-- 256 p.
Claims (8)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017100668A RU2639448C1 (en) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | Method for determination of mycosis fungoides stage |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017100668A RU2639448C1 (en) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | Method for determination of mycosis fungoides stage |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2639448C1 true RU2639448C1 (en) | 2017-12-21 |
Family
ID=63857321
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017100668A RU2639448C1 (en) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | Method for determination of mycosis fungoides stage |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2639448C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2732700C1 (en) * | 2019-11-19 | 2020-09-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing metastatic involvement of signalling lymph node in early forms of squamous cell carcinoma of oral cavity |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1715319A1 (en) * | 1987-03-20 | 1992-02-28 | Институт биологической физики АН СССР | Method of diagnosing gravity of fungiform mycosis |
| RU2526180C1 (en) * | 2013-08-14 | 2014-08-20 | Эльмира Фанисовна Гарифуллина | Method of differential morphometric diagnostics of erythrodermal form of mycosis fungoides and syndrome of skin pseudolymphoma by relative volume of epidermis and mitotic index of epidermal cells |
-
2017
- 2017-01-10 RU RU2017100668A patent/RU2639448C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1715319A1 (en) * | 1987-03-20 | 1992-02-28 | Институт биологической физики АН СССР | Method of diagnosing gravity of fungiform mycosis |
| RU2526180C1 (en) * | 2013-08-14 | 2014-08-20 | Эльмира Фанисовна Гарифуллина | Method of differential morphometric diagnostics of erythrodermal form of mycosis fungoides and syndrome of skin pseudolymphoma by relative volume of epidermis and mitotic index of epidermal cells |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| LIRA M. et al. Diagnostic value of combining immunostaining for CD3 and nuclear morphometry in mycosis fungoides. // J Clin Pathol. 2008. F.b. V. 61(2). P. 209-12. * |
| ЖУКОВ А.С. Уровень пролиферативной активности лимфоцитов при грибовидном микозе и бляшечном псориазе / Жуков А.С., Белоусова И.Э., Хайрутдинов В.Р. и соавт.// Вестник дерматологии и венерологии. 2014. N 1. С. 30-36. * |
| М. CLARKE et al. Combined proliferating cell nuclear antigen and morphometric analysis in the diagnosis of cutaneous lymphoid infiltrates. // J Clin Pathol. 1993б February. V. 46(2). P.1 29-134. * |
| М. CLARKE et al. Combined proliferating cell nuclear antigen and morphometric analysis in the diagnosis of cutaneous lymphoid infiltrates. // J Clin Pathol. 1993б February. V. 46(2). P.1 29-134. LIRA M. et al. Diagnostic value of combining immunostaining for CD3 and nuclear morphometry in mycosis fungoides. // J Clin Pathol. 2008. F.b. V. 61(2). P. 209-12. СЫДИКОВ А. А. Клинико-морфологическая характеристика крупнобляшечного и межобляшечного парапсориаза. Автореф. дисс. к.м.н. Санкт-Петербург, 2013, 20 с. * |
| СЫДИКОВ А. А. Клинико-морфологическая характеристика крупнобляшечного и межобляшечного парапсориаза. Автореф. дисс. к.м.н. Санкт-Петербург, 2013, 20 с. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2732700C1 (en) * | 2019-11-19 | 2020-09-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing metastatic involvement of signalling lymph node in early forms of squamous cell carcinoma of oral cavity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Valli et al. | Classification of canine malignant lymphomas according to the World Health Organization criteria | |
| Jawed et al. | Primary cutaneous T-cell lymphoma (mycosis fungoides and Sézary syndrome): part I. Diagnosis: clinical and histopathologic features and new molecular and biologic markers | |
| Alekseyenko et al. | Community differentiation of the cutaneous microbiota in psoriasis | |
| Prieto Bohórquez et al. | Diagnosis of cervical cells based on fractal and Euclidian geometrical measurements: Intrinsic Geometric Cellular Organization | |
| Fortino et al. | Machine-learning–driven biomarker discovery for the discrimination between allergic and irritant contact dermatitis | |
| Stoter et al. | Multivariate analysis of prognostic factors in patients with disseminated nonseminomatous testicular cancer: results from a European Organization for Research on Treatment of Cancer Multiinstitutional Phase III Study | |
| Soyer et al. | Three-point checklist of dermoscopya new screening method for early detection of melanoma | |
| Okobia et al. | Knowledge, attitude and practice of Nigerian women towards breast cancer: a cross-sectional study | |
| Janssens et al. | Mast cell distribution in normal adult skin | |
| Kelati et al. | Defining the mimics and clinico-histological diagnosis criteria for mycosis fungoides to minimize misdiagnosis | |
| Esin et al. | Beliefs about cervical cancer screening among Turkish married women | |
| Lee et al. | Development and validation of the Korean version of the Female Sexual Function Index-6 (FSFI-6K) | |
| Willmann et al. | Proposed diagnostic criteria and classification of canine mast cell neoplasms: a consensus proposal | |
| Ahn et al. | RNA-seq and flow-cytometry of conventional, scalp, and palmoplantar psoriasis reveal shared and distinct molecular pathways | |
| KR102664228B1 (en) | How to Predict Response to Immunotherapy | |
| RU2660542C1 (en) | Method for definition of the stage of mycosis fungoidea | |
| Patel et al. | Multiparametric in situ imaging of NPM1-mutated acute myeloid leukemia reveals prognostically-relevant features of the marrow microenvironment | |
| de Chadarevian | Chromosome surveys of human populations: between epidemiology and anthropology | |
| RU2639448C1 (en) | Method for determination of mycosis fungoides stage | |
| RU2466398C2 (en) | Differential diagnostic technique for skin diseases | |
| Tadesse et al. | Dynamics of Base Excision Repair at the Maternal–Fetal Interface in Pregnancies Complicated by Preeclampsia | |
| Hermann Ayekoue et al. | The asthenozoospermia as a major sperm abnormality in males assessed for semen analysis in Institut Pasteur of Côte d’Ivoire | |
| Liu et al. | Clinical significance of GRHL3 expression in diffuse large B cell lymphoma | |
| RU2286570C2 (en) | Differential diagnosis method for diagnosing erythrodermic malignant t-cell skin lymphoma and other erythrodermatitis cases | |
| RU2687274C1 (en) | Method for differential diagnosis of fungous mycosis from chronic dermatoses |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190111 |