RU2639125C1 - Method for biological visualization - Google Patents

Method for biological visualization Download PDF

Info

Publication number
RU2639125C1
RU2639125C1 RU2016149211A RU2016149211A RU2639125C1 RU 2639125 C1 RU2639125 C1 RU 2639125C1 RU 2016149211 A RU2016149211 A RU 2016149211A RU 2016149211 A RU2016149211 A RU 2016149211A RU 2639125 C1 RU2639125 C1 RU 2639125C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
fluorescent
biological
recognition molecules
biological recognition
fluorescence
Prior art date
Application number
RU2016149211A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Павел Михайлович СОКОЛОВ
Алена Владимировна Суханова
Светлана Викторовна Бозрова
Игорь Руфаилович Набиев
Original Assignee
федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский ядерный университет МИФИ" (НИЯУ МИФИ)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский ядерный университет МИФИ" (НИЯУ МИФИ) filed Critical федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский ядерный университет МИФИ" (НИЯУ МИФИ)
Priority to RU2016149211A priority Critical patent/RU2639125C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2639125C1 publication Critical patent/RU2639125C1/en

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y15/00—Nanotechnology for interacting, sensing or actuating, e.g. quantum dots as markers in protein assays or molecular motors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: analyzed cell components, cells, tissues or organs are labelled with fluorescent probes. The probes consist of biological recognition molecules and fluorescent dyes emitting in the infrared region of the optical spectrum. Then, the dyes fluorescence is excited by infrared radiation and their fluorescence is recorded. As fluorescent dyes, semiconductor nanocrystals (PbS/CdS/ZnS, CuInS2/ZnS, Ag2S), fluorescing in the infrared spectral range are used. In this case, a fluorescent signal from semiconductor nanocrystals is recorded 5-50 nanoseconds after excitation of their fluorescent signal.
EFFECT: invention allows the target to be visualized within the biological sample or living organism being studied by increasing the contrast of the resulting image and increasing the detection sensitivity of targets labelled by fluorescent probes.
12 cl, 2 dwg

Description

Изобретение относится к области медицинских исследований и служит для визуализации мишеней, находящихся в глубине организма, в его органах, тканях и клетках. Способ направлен на визуализацию мишеней, маркированных с помощью аффинных меток на основе полупроводниковых нанокристаллов, флуоресцирующих в инфракрасной области спектра и обеспечивает высокую чувствительность и контрастность изображения. Способ может использоваться для визуализации биологических объектов, таких как ДНК, белки, компоненты клеточного метаболизма, онкологические маркеры и клетки, для целей диагностики или изучения изменений в органах и тканях, а также для мониторинга распределения лекарств и биологически активных компонент в исследуемом организме.The invention relates to the field of medical research and serves to visualize targets located deep in the body, in its organs, tissues and cells. The method is aimed at visualizing targets labeled with affinity tags based on semiconductor nanocrystals that fluoresce in the infrared region of the spectrum and provides high sensitivity and image contrast. The method can be used to visualize biological objects, such as DNA, proteins, components of cellular metabolism, oncological markers and cells, for the purpose of diagnosing or studying changes in organs and tissues, as well as for monitoring the distribution of drugs and biologically active components in the studied organism.

Известен способ визуализации аналитов внутри биологических образцов с помощью зондов, содержащих частицы, флуоресцирующие в инфракрасной области спектра, и функциональные группы, способные связываться с мишенями [1]. Применяемые частицы возбуждаются и флуоресцируют в инфракрасной области спектра. Благодаря высокой проникающей способности инфракрасного излучения в биологические объекты применение инфракрасных флуоресцентных частиц позволяет снизить люминесценцию, поглощение и рассеивание света окружающими биологическими молекулами. Иммобилизованные на поверхности частиц узнающие молекулы могут представлять собой лиганды, рецепторы, антитела, белки, нуклеиновые кислоты и полисахариды, которые обеспечивают специфическое маркирование определенных мишеней в тканях организма, микроорганизма или клетках. Флуоресцентные частицы состоят из оксида редкоземельного металла и содержат неодим, иттербий, а также могут содержать иттрий, лютеций и лантан. Недостатком данного способа является отсутствие механизма увеличения контрастности и чувствительности детекции и визуализации аналитов.There is a method of visualizing analytes inside biological samples using probes containing particles that fluoresce in the infrared region of the spectrum, and functional groups that can bind to targets [1]. The particles used are excited and fluoresce in the infrared region of the spectrum. Due to the high penetration of infrared radiation into biological objects, the use of infrared fluorescent particles can reduce the luminescence, absorption and scattering of light by surrounding biological molecules. Recognizing molecules immobilized on the surface of the particles can be ligands, receptors, antibodies, proteins, nucleic acids and polysaccharides, which provide specific labeling of specific targets in body tissues, microorganisms or cells. Fluorescent particles are composed of rare earth metal oxide and contain neodymium, ytterbium, and may also contain yttrium, lutetium and lanthanum. The disadvantage of this method is the lack of a mechanism for increasing the contrast and sensitivity of detection and visualization of analytes.

Способ, включающий введение инфракрасных флуоресцентных меток на основе наночастиц, их возбуждение и детектирование флуоресцентного сигнала, описанный в патенте [2], был выбран в качестве прототипа. Флуоресцентные наночастицы получены легированием керамических наночастиц с редкоземельными элементами, такими как уран, титан, хром, никель, молибден и другими. Связывание флуоресцентных меток с исследуемыми мишенями обеспечивается иммобилизованными на их поверхности узнающими молекулами, способными связываться с ДНК, белками, клетками и другими компонентами тканей животных. Возбуждение инфракрасных флуоресцентных меток происходит при длине волны от 780 до 1700 нм, а флуоресцентный сигнал детектируется в диапазоне длин волн от 1000 до 1700 нм. Таким образом, способ направлен на детекцию и визуализацию специфических маркеров внутри организма человека и млекопитающих для целей диагностики заболеваний и изучения их патогенеза. Применение инфракрасных меток позволяет проводить визуализацию исследуемых мишеней в глубине тканей и органов, благодаря тому, что инфракрасное излучение существенно меньше поглощается и вызывает меньшую фоновую флуоресценцию биологических объектов по сравнению с излучением видимого диапазона. К недостаткам описанного способа стоит отнести отсутствие процедур, направленных на повышение контрастности и чувствительности визуализации мишеней.The method, including the introduction of infrared fluorescent labels based on nanoparticles, their excitation and detection of the fluorescent signal described in the patent [2], was chosen as a prototype. Fluorescent nanoparticles are obtained by alloying ceramic nanoparticles with rare earth elements such as uranium, titanium, chromium, nickel, molybdenum and others. The binding of fluorescence labels to the studied targets is provided by recognition molecules immobilized on their surface, capable of binding to DNA, proteins, cells, and other components of animal tissues. The excitation of infrared fluorescent labels occurs at a wavelength of from 780 to 1700 nm, and a fluorescent signal is detected in the wavelength range from 1000 to 1700 nm. Thus, the method is aimed at the detection and visualization of specific markers within the human body and mammals for the purpose of diagnosing diseases and studying their pathogenesis. The use of infrared tags allows visualization of the studied targets in the depths of tissues and organs, due to the fact that infrared radiation is much less absorbed and causes less background fluorescence of biological objects in comparison with radiation of the visible range. The disadvantages of the described method include the lack of procedures aimed at increasing the contrast and sensitivity of target visualization.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является способ биологической визуализации анализируемых мишеней внутри исследуемого биологического образца или живого организма, позволяющий улучшить контрастность получаемого изображения, а также увеличить чувствительность детекции и визуализации мишеней, маркированных флуоресцентными зондами.The technical result of the present invention is a method for biological visualization of the analyzed targets inside the studied biological sample or living organism, which allows to improve the contrast of the resulting image, as well as to increase the sensitivity of detection and visualization of targets marked with fluorescent probes.

Технический результат достигается тем, что в известном способе биологической визуализации, включающем мечение анализируемых клеточных компонент, клеток, тканей или органов флуоресцентными зондами, состоящими из биологических распознающих молекул и флуоресцентных красителей, излучающих в инфракрасной области оптического спектра, возбуждение флуоресценции красителей с помощью инфракрасного излучения, и последующую регистрацию флуоресценции красителей, в качестве флуоресцентных красителей применяют полупроводниковые нанокристаллы, флуоресцирующие в инфракрасном диапазоне спектра, при этом регистрацию флуоресцентного сигнала от полупроводниковых нанокристаллов проводят через 5-50 наносекунд после возбуждения их флуоресцентного сигнала.The technical result is achieved by the fact that in the known method of biological imaging, including the labeling of the analyzed cellular components, cells, tissues or organs with fluorescent probes, consisting of biological recognition molecules and fluorescent dyes emitting in the infrared region of the optical spectrum, the excitation of dye fluorescence using infrared radiation, and subsequent registration of dye fluorescence, semiconductor nanocrystals are used as fluorescent dyes s, fluorescent in the infrared range of the spectrum, while the registration of the fluorescent signal from semiconductor nanocrystals is carried out 5-50 nanoseconds after the excitation of their fluorescent signal.

Особенностью полупроводниковых нанокристаллов, в том числе флуоресцирующих в инфракрасной области спектра, является большое время сохранения флуоресценции после возбуждения, так называемое время жизни флуоресценции (ВЖФ). Так, для полупроводниковых нанокристаллов (ППНК) среднее ВЖФ составляет порядка 30 наносекунд, а в отдельных случаях оно может достигать и сотен наносекунд, в то время как для эндогенных органических соединений ВЖФ редко превышает нескольких наносекунд [3]. Экспериментально было установлено, что осуществление регистрации флуоресцентного сигнала через 5 нс после проведения возбуждения позволяет повысить контрастность получаемого изображения и повысить чувствительность детекции, благодаря значительному снижению фоновой флуоресценции окружающих органических соединений, при сохранении интенсивности флуоресценции ППНК. Больший перерыв, между моментом возбуждения и регистрации флуоресценции, позволяет с высокой чувствительностью детектировать малые количества анализируемых клеточных компонент, меченных ППНК, т.к. за это время флуоресценция окружающих органических соединений уменьшается в несколько десятков раз, а флуоресценция ППНК всего в 2-3 раза. Также экспериментально было установлено, что перерыв более 50 нс, между моментом возбуждения и регистрации флуоресценции, приводит к уменьшению контрастности и чувствительности за счет постепенного угасания флуоресценции ППНК.A feature of semiconductor nanocrystals, including those fluorescent in the infrared region of the spectrum, is the long time that fluorescence is retained after excitation, the so-called fluorescence lifetime (HLF). So, for semiconductor nanocrystals (PPCA), the average HF is about 30 nanoseconds, and in some cases it can reach hundreds of nanoseconds, while for endogenous organic compounds, HF rarely exceeds several nanoseconds [3]. It was experimentally established that the registration of a fluorescent signal 5 ns after the excitation allows to increase the contrast of the resulting image and increase the sensitivity of detection due to a significant decrease in the background fluorescence of surrounding organic compounds, while maintaining the intensity of the fluorescence of PPCA. A longer interval between the moment of excitation and registration of fluorescence allows one to detect with high sensitivity small amounts of the analyzed cellular components labeled with PPC, because during this time, the fluorescence of surrounding organic compounds decreases by several tens of times, and the fluorescence of PPCA is only 2-3 times. It was also experimentally established that a break of more than 50 ns, between the moment of excitation and registration of fluorescence, leads to a decrease in contrast and sensitivity due to the gradual extinction of PPNK fluorescence.

Существует частный случай, когда в качестве полупроводниковых нанокристаллов, флуоресцирующих в инфракрасном диапазоне оптического спектра, используют нанокристаллы состава PbS/CdS/ZnS, CuInS2/ZnS, Ag2S, флуоресцирующие в инфракрасной области оптического спектра.There is a special case when PbS / CdS / ZnS, CuInS 2 / ZnS, Ag 2 S nanocrystals fluorescent in the infrared region of the optical spectrum are used as semiconductor nanocrystals that fluoresce in the infrared range of the optical spectrum.

Возможны частные случаи, когда в качестве биологических распознающих молекул применены:Particular cases are possible when the following are used as biological recognition molecules:

- нативные белки;- native proteins;

- модифицированные белки;- modified proteins;

- поликлональные антитела;- polyclonal antibodies;

- моноклональные антитела;- monoclonal antibodies;

- однодоменные антитела;- single domain antibodies;

- высокоаффинные биологические компоненты;- high affinity biological components;

- стрептавидин;- streptavidin;

- биотин;- biotin;

- пептиды;- peptides;

- нуклеиновые кислоты.- nucleic acids.

Пример конкретной реализации способа поясняется на примере визуализации раковых клеток, экспрессирующих онкомаркер рака поджелудочной железы СА 19-9. Для этого суспензию флуоресцентных зондов, состоящих из антител, связывающих участок белка СА 19-9 и полупроводниковых нанокристаллов состава CuInS2/ZnS (ВЖФ 20 нс), вводят внутривенно лабораторному животному. Через 1 час (конкретное время зависит от размеров и активности лабораторного животного) флуоресцентные зонды с током крови попадают в поджелудочную железу и связываются с белком СА 19-9, локализованным в раковых клетках. Затем проводят облучение места локализации раковых клеток инфракрасным излучением в течение 2 нс для возбуждения флуоресценции ППНК, после чего проводят регистрацию флуоресцентного сигнала. Технический результат предлагаемого способа, наглядно поясняется графиком зависимости интенсивности флуоресценции от времени, представленным на фиг. 1. Показана зависимость интенсивности флуоресценции биологических молекул (средний максимум ВЖФ 4,7 нс) - 1 и полупроводникового нанокристалла состава CuInS2/ZnS (ВЖФ 20 нс) - 2. Также цифрами на фиг. 1 обозначены: момент времени возбуждения флуоресцентного сигнала, принятый за начало отсчета времени - 3; среднее время жизни флуоресценции для биологических молекул - 4; среднее время жизни флуоресценции для полупроводникового нанокристалла - 5. Из графика видно, что при снятии флуоресцентного сигнала через 3 нс после возбуждения флуоресценции отношение интенсивности флуоресцентного сигнала от полупроводниковых нанокристаллов к интенсивности флуоресцентного сигнала от биологических молекул равно приблизительно 3:2, в то время как при снятии флуоресцентного сигнала через 15 нс это соотношение увеличивается до 4:1. Из этого примера видно, что смещение времени снятия флуоресцентного сигнала в более позднее время после возбуждения флуоресценции позволяет увеличить контрастность изображения более чем в 2,5 раза.An example of a specific implementation of the method is illustrated by the example of visualization of cancer cells expressing a pancreatic cancer tumor marker CA 19-9. For this, a suspension of fluorescent probes consisting of antibodies that bind a portion of CA 19-9 protein and CuInS 2 / ZnS semiconductor nanocrystals (HFL 20 ns) is administered intravenously to a laboratory animal. After 1 hour (the specific time depends on the size and activity of the laboratory animal), fluorescence probes with blood flow enter the pancreas and bind to the CA 19-9 protein localized in cancer cells. Then, the cancer cell localization site is irradiated with infrared radiation for 2 ns to excite the PPCA fluorescence, after which the fluorescence signal is recorded. The technical result of the proposed method is clearly illustrated by the graph of the dependence of the fluorescence intensity on time, shown in FIG. 1. The dependence of the fluorescence intensity of biological molecules (average maximum of HF 4.7 ns) -1 and of a semiconductor nanocrystal of the composition CuInS 2 / ZnS (HF 20 ns) - 2 is shown. Also, the numbers in FIG. 1 marked: the time point of excitation of the fluorescent signal, taken as the time reference - 3; the average fluorescence lifetime for biological molecules is 4; the average fluorescence lifetime for a semiconductor nanocrystal is 5. It can be seen from the graph that when a fluorescence signal is taken 3 ns after the excitation of fluorescence, the ratio of the fluorescence signal intensity from semiconductor nanocrystals to the fluorescence signal intensity from biological molecules is approximately 3: 2, while at removal of the fluorescent signal after 15 ns, this ratio increases to 4: 1. From this example, it is seen that a shift in the time of taking the fluorescent signal at a later time after the excitation of fluorescence can increase the image contrast by more than 2.5 times.

Пример повышения чувствительности иллюстрируется графиком, представленным на фиг. 2. Так, если количество детектируемого аналита мало и уровень начального флуоресцентного сигнала от связанного с ним флуоресцентного зонда ниже уровня флуоресценции от окружающих биологических молекул, то при детекции флуоресцентного сигнала через 3 нс детектировать целевой сигнал невозможно. В то время как при детекции через 30 нс, когда интенсивность флуоресценции биологических молекул сильно снижается, детектируется флуоресцентный сигнал от полупроводниковых нанокристаллов, которыми помечен детектируемый аналит.An example of sensitivity enhancement is illustrated in the graph of FIG. 2. So, if the amount of analyte detected is small and the level of the initial fluorescent signal from the associated fluorescent probe is lower than the level of fluorescence from surrounding biological molecules, then when the fluorescent signal is detected after 3 ns, the target signal cannot be detected. While during detection after 30 ns, when the fluorescence intensity of biological molecules is greatly reduced, a fluorescent signal from semiconductor nanocrystals with which the detected analyte is labeled is detected.

Таким образом, предложенный способ биологической визуализации клеток и клеточных компонент, меченных флуоресцентными зондами, позволяет в несколько раз улучшить контрастность изображений получаемых при визуализации мишеней, локализованных в глубине органов и тканей организма. Это также приводит к увеличению чувствительности и позволяет определять меньшие количества детектируемых аналитов, что особенно важно для ранней диагностики заболеваний и обнаружения изменений в органах и тканях. Кроме того, подобная система может применяться для визуализации областей опухолевого роста при проведении или планировании медицинских операций.Thus, the proposed method for the biological visualization of cells and cellular components labeled with fluorescent probes allows several times to improve the contrast of images obtained by visualizing targets located deep in the organs and tissues of the body. This also leads to an increase in sensitivity and allows the determination of smaller amounts of detectable analytes, which is especially important for the early diagnosis of diseases and the detection of changes in organs and tissues. In addition, a similar system can be used to visualize areas of tumor growth during or planning medical operations.

Источники информацииInformation sources

1. Masakazu Mitsunaga et al. Functional infrared flourescent particle. Патент США US 20080265208 A1.1. Masakazu Mitsunaga et al. Functional infrared flourescent particle. U.S. Patent No. 2,0080,265,208 A1.

2. Tamotsu Zako et al. Bioimaging method using near-infrared (nir) fluorescent material. Патент США US 20110237942 A1.2. Tamotsu Zako et al. Bioimaging method using near-infrared (nir) fluorescent material. U.S. Patent No. 20110237942 A1.

3. Berezin M. and Achilefu S. Fluorescence Lifetime Measurements and Biological Imaging. Chemical reviews // 2010 //110(5) 2641-2684.3. Berezin M. and Achilefu S. Fluorescence Lifetime Measurements and Biological Imaging. Chemical reviews // 2010 // 110 (5) 2641-2684.

Claims (12)

1. Способ биологической визуализации, включающий мечение анализируемых клеточных компонент, клеток, тканей или органов флуоресцентными зондами, состоящими из биологических распознающих молекул и флуоресцентных красителей, излучающих в инфракрасной области оптического спектра, возбуждение флуоресценции красителей с помощью инфракрасного излучения и последующую регистрацию флуоресценции красителей, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентных красителей применяют полупроводниковые нанокристаллы, флуоресцирующие в инфракрасном диапазоне спектра, при этом регистрацию флуоресцентного сигнала от полупроводниковых нанокристаллов проводят через 5-50 наносекунд после возбуждения их флуоресцентного сигнала.1. The method of biological imaging, including the labeling of the analyzed cellular components, cells, tissues or organs with fluorescent probes, consisting of biological recognition molecules and fluorescent dyes emitting in the infrared region of the optical spectrum, excitation of dye fluorescence using infrared radiation and subsequent registration of dye fluorescence, characterized in that semiconductor nanocrystals fluorescent in infrared are used as fluorescent dyes spectral range, while the registration of the fluorescent signal from semiconductor nanocrystals is carried out 5-50 nanoseconds after the excitation of their fluorescent signal. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве полупроводниковых нанокристаллов, флуоресцирующих в инфракрасном диапазоне оптического спектра, используют нанокристаллы состава PbS/CdS/ZnS, CuInS2/ZnS, Ag2S, флуоресцирующие в инфракрасной области оптического спектра.2. The method according to p. 1, characterized in that as semiconductor nanocrystals fluorescent in the infrared range of the optical spectrum, nanocrystals of the composition PbS / CdS / ZnS, CuInS 2 / ZnS, Ag 2 S fluorescent in the infrared region of the optical spectrum are used. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют нативные белки.3. The method according to p. 1, characterized in that the native proteins are used as biological recognition molecules. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют модифицированные белки.4. The method according to p. 1, characterized in that the modified biological proteins are used as biological recognition molecules. 5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют поликлональные антитела.5. The method according to p. 1, characterized in that polyclonal antibodies are used as biological recognition molecules. 6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют моноклональные антитела.6. The method according to p. 1, characterized in that monoclonal antibodies are used as biological recognition molecules. 7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют однодоменные антитела.7. The method according to p. 1, characterized in that single-domain antibodies are used as biological recognition molecules. 8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют высокоаффинные биологические компоненты.8. The method according to p. 1, characterized in that high-affinity biological components are used as biological recognition molecules. 9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют стрептавидин.9. The method according to p. 1, characterized in that streptavidin is used as biological recognition molecules. 10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют биотин.10. The method according to p. 1, characterized in that biotin is used as biological recognition molecules. 11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют пептиды.11. The method according to p. 1, characterized in that peptides are used as biological recognition molecules. 12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве биологических распознающих молекул используют нуклеиновые кислоты.12. The method according to p. 1, characterized in that the nucleic acids are used as biological recognition molecules.
RU2016149211A 2016-12-14 2016-12-14 Method for biological visualization RU2639125C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016149211A RU2639125C1 (en) 2016-12-14 2016-12-14 Method for biological visualization

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016149211A RU2639125C1 (en) 2016-12-14 2016-12-14 Method for biological visualization

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2639125C1 true RU2639125C1 (en) 2017-12-19

Family

ID=60718904

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016149211A RU2639125C1 (en) 2016-12-14 2016-12-14 Method for biological visualization

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2639125C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2755401C1 (en) * 2021-01-22 2021-09-15 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии твердого тела Уральского отделения Российской академии наук Method for assessing state of a biocell

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110237942A1 (en) * 2010-03-25 2011-09-29 Tamotsu Zako Bioimaging method using near-infrared (nir) fluorescent material
RU2487169C2 (en) * 2006-01-19 2013-07-10 Зе Рисерч Фаундейшн Оф Стейт Юниверсити Оф Нью Йорк Methods and devices for detection and identification of encoded granules and biological molecules

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2487169C2 (en) * 2006-01-19 2013-07-10 Зе Рисерч Фаундейшн Оф Стейт Юниверсити Оф Нью Йорк Methods and devices for detection and identification of encoded granules and biological molecules
US20110237942A1 (en) * 2010-03-25 2011-09-29 Tamotsu Zako Bioimaging method using near-infrared (nir) fluorescent material

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Найдено в Интернете [он-лайн] 21.08.2017 на сайте http://dornsifecms.usc.edu/assets/sites/112/docs/Publications/Optics_letter_2001.pdf. *
Найдено в Интернете [он-лайн] 21.08.2017 на сайте http://www.rusnanonet.ru/download/nano/file/21_oleynikov.pdf. DAHAN M. et al. Time-gated biological imaging by use of colloidal quantum dots, Optics letters, 2001, June 1,vol. 26, No. 11, p.825-827. *
ОЛЕЙНИКОВ В.А. и др. Флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллы в биологии и медицине, Российские нанотехнологии, 2007, т.2, N 1-2, с.160-173. *
ОЛЕЙНИКОВ В.А. и др. Флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллы в биологии и медицине, Российские нанотехнологии, 2007, т.2, N 1-2, с.160-173. Найдено в Интернете [он-лайн] 21.08.2017 на сайте http://www.rusnanonet.ru/download/nano/file/21_oleynikov.pdf. DAHAN M. et al. Time-gated biological imaging by use of colloidal quantum dots, Optics letters, 2001, June 1,vol. 26, No. 11, p.825-827. Найдено в Интернете [он-лайн] 21.08.2017 на сайте http://dornsifecms.usc.edu/assets/sites/112/docs/Publications/Optics_letter_2001.pdf. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2755401C1 (en) * 2021-01-22 2021-09-15 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии твердого тела Уральского отделения Российской академии наук Method for assessing state of a biocell

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gorris et al. Perspectives and challenges of photon-upconversion nanoparticles-Part II: bioanalytical applications
Chen et al. Quantum dots-based immunofluorescence technology for the quantitative determination of HER2 expression in breast cancer
Jain Role of nanobiotechnology in developing personalized medicine for cancer
CN105891170B (en) Living animal two-photon excitation delay detection fluorescence imaging analysis method and apparatus
CN110998277A (en) Method for marking, transparentizing and imaging large tissues
JP2020519852A (en) Target molecule density determination in fluorescence images
Warram et al. Fluorescence imaging to localize head and neck squamous cell carcinoma for enhanced pathological assessment
JP5289064B2 (en) Apparatus and method for imaging and modification of biological samples
Trautmann et al. Fluorescence lifetime imaging (FLIM) in confocal microscopy applications: an overview
Ruedas-Rama et al. FLIM Strategies for Intracellular Sensing: Fluorescence Lifetime Imaging as a Tool to Quantify Analytes of Interest
RU2639125C1 (en) Method for biological visualization
Lin et al. In vivo detection of single-walled carbon nanotubes: progress and challenges
WO2015038967A1 (en) Universal bio diagnostic, drug delivery device and marker for correlated optical and electron microscopy
JP5863057B2 (en) Organization evaluation method
US11499967B2 (en) Specific protein marker and method for identifying the statistic distribution of protein stoichiometry
JP2014520275A (en) Microscope apparatus for detecting or imaging protein using iFRET probe and protein detection or imaging method using the same
US20240210409A1 (en) Method for detecting substance to be detected within sample
US12019074B2 (en) Method of analysing a sample for at least one analyte
Bertolini et al. In vivo cancer imaging with semiconductor quantum dots
Ciarlo et al. Use of the semiconductor nanotechnologies “quantum dots” for in vivo cancer imaging
CN104345048B (en) A kind of based on the up-conversion luminescence material detection method of biomolecule and the detecting system implementing it
WO2022059508A1 (en) Biological information acquisition method and biological information acquisition system
CN102435592B (en) Method for determining Nevirapine by utilizing ZnS nano fluorescence probe
Mansfield et al. Distinguished photons: The Maestro™ in-vivo Fluorescence Imaging System
Ramachandran et al. Immunofluorescence as a diagnostic tool