RU2634868C2 - Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки с использованием метода негативных колоний - Google Patents

Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки с использованием метода негативных колоний Download PDF

Info

Publication number
RU2634868C2
RU2634868C2 RU2014153910A RU2014153910A RU2634868C2 RU 2634868 C2 RU2634868 C2 RU 2634868C2 RU 2014153910 A RU2014153910 A RU 2014153910A RU 2014153910 A RU2014153910 A RU 2014153910A RU 2634868 C2 RU2634868 C2 RU 2634868C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
agar
solution
composition
bacto
coating
Prior art date
Application number
RU2014153910A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2014153910A (ru
Inventor
Светлана Ивановна Сыромятникова
Ирина Геннадьевна Румянцева
Владимир Борисович Пантюхов
Сергей Владимирович Борисевич
Михаил Анатольевич Тимофеев
Владимир Викторович Осин
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт" Министерства обороны Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт" Министерства обороны Российской Федерации filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт" Министерства обороны Российской Федерации
Priority to RU2014153910A priority Critical patent/RU2634868C2/ru
Publication of RU2014153910A publication Critical patent/RU2014153910A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2634868C2 publication Critical patent/RU2634868C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области вирусологии. Предложен состав агарового покрытия для выявления вируса Мачупо. Первичное агаровое покрытие содержит: аминокислотный витаминный комплекс (АВК), раствор Эрла, фетальную телячью сыворотку, 5%-ный раствор бикарбоната натрия, деминерализованную воду, 2,9%-ный раствор 1-глутамина, антибиотики, бактоагар «BacteriologCal» или «Bacto™ Agar». Вторичное агаровое покрытие содержит: аминокислотный витаминный комплекс (АВК), раствор Эрла, фетальную телячью сыворотку, бикарбонат натрия, деминерализованную воду, 0,1%-ный раствор нейтрального красного, бактоагар «Bacteriologi Cal» или « Bacto™ Agar». Изобретение обеспечивает увеличение чувствительности метода выявления вируса Мачупо. 3 табл., 4 пр.

Description

Изобретение относится к области микробиологии, а именно вирусологии, и представляет собой оптимизированную пропись состава агарового покрытия и условий культивирования инфицированных клеток для определения концентрации и состава популяции биологически активного вируса Мачупо - возбудителя Боливийской геморрагической лихорадки методом негативных колоний.
Изобретение может быть использовано в вирусологических и иммунологических исследованиях для выявления в исследуемых пробах вируса Мачупо, оценки состава популяции по S-признаку и специфического выявления в сыворотках крови реконвалесцентов антител к данному возбудителю.
Метод негативных колоний на монослойной культуре клеток под агаровым покрытием позволяет с высокой точностью проводить определение концентрации биологически активного вируса и одновременно проводить изучение структуры вирусной популяции по размеру негативных колоний (S-признак). Для ряда возбудителей установлена связь данного генетического маркера с вирулентностью природных штаммов внутри вида вируса.
При использовании чувствительной по отношению к данному возбудителю монослойной культуры клеток чувствительность метода во многом определяется возможностью процесса адсорбции и пенетрации клеток, пограничных с инфицированными, оптимальной концентрацией витального красителя для регистрации эффекта выявления неокрашенных участков монослоя клеток и отсутствием неспецифической дегенерации последнего. Эти условия могут быть оптимизированы путем подбора состава первичного и вторичного агаровых покрытий.
В состав агарового покрытия для определения концентрации различных вирусов входят агар-агар, фетальная телячья сыворотка, бикарбонат натрия, аминокислотно-витаминный комплекс, раствор Эрла, l-глутамин, дистиллированная вода и витальный краситель нейтральный красный (входит в состав вторичного агарового покрытия).
Вирус Мачупо является представителем комплекса Такарибе рода Arenavirus семейства Arenaviridae [6, 12]. Природный очаг расположен в северо-восточной части Боливии (провинции Манора и Итенес). В 1959-1962 гг. небольшие вспышки возникали в сельской местности в период полевых работ, в основном среди взрослых мужчин. С 1962 г. заболевания регистрируются в преимущественно в городах и крупных поселках в разных возрастных группах. Резервуаром и источником вируса Мачупо - возбудителя болезни, являются мышевидные грызуны Calomys callosas, которым свойственна персистирующая инфекция. Заражение человека происходит через загрязненные мочой грызунов пишу, воду. Возможно также заражение при тесном контакте с больным в первые дни болезни, когда вирус выделяется из верхних дыхательных путей [5, 11, 14, 15].
Природные штаммы вируса Мачупо выделены от грызунов и больных людей. Проводимые вирусологические исследования тесно связаны с определением концентрации биологически активного вируса [13].
В зависимости от использованных в ходе данного процесса тест-объектов способы определения концентрации можно условно разделить на альтернативные и количественные [3].
При альтернативных методах информация, получаемая при использовании одного тест-объекта, равна 1 бит (объект может либо погибнуть в результате инфицирования, либо нет).
Метод бляшек (негативных колоний) был внедрен в практику вирусологических исследований в 1952 г. [10]. Он внес решающий вклад в развитие методов количественной оценки вирусов в различных материалах. Изучение генетики вирусов человека и животных показало, что значение метода бляшек не ограничивается его использованием для титрования вируссодержащих культур. Анализ закономерностей распределения размеров негативных колоний, выявление в популяциях различных штаммов вирусов, клонов с генотипически обусловленными различиями по данному показателю, использование определенных культур клеток в качестве модельных тест-объектов сделали метод бляшек одним из основных инструментов вирусологических исследований [1, 2, 4].
Условия образования негативных колоний в соответствии с механизмом «cell to cell» позволяют считать вирусную популяцию, которую можно выделить из одной отдельно взятой бляшки, как потомство одной вирусной частицы. Это обстоятельство делает метод бляшек незаменимым инструментом при изучении генетики вирусов, в частности при выделении полученных с помощью генетических и генно-инженерных манипуляций генетически измененных вариантов вирусов, обладающих комплексом новых свойств [9].
Оптимизацию метода негативных колоний обычно проводят по следующим направлениям:
- использование более чувствительной по отношению к конкретному возбудителю культуры клеток;
- изменение условий сорбции вируса на клетках (время сорбции, продолжительность сорбции, рН среды);
- оптимизация состава агарового покрытия, поддерживающего рост клеток и обеспечивающего образование негативных колоний на чувствительных клетках в соответствии с механизмом «cell to cell».
Возможность проведения оптимизации по первому направлению обычно ограничена либо небольшим набором чувствительных к возбудителю культур клеток (применительно к аренавирусам - это различные постоянные культуры клеток почки африканской зеленой мартышки), либо отсутствием достоверных преимуществ у одной клеточной культуры по отношению к другой. Оптимизация по второму направлению достаточно быстро проводится в ходе предварительных исследований при определении спектра чувствительных к вирусу культур клеток.
На основе анализа молекулярных механизмов взаимодействия вируса с клеткой и формирования негативных колоний на монослое культуры клеток нами проведена оптимизация состава агарового покрытия применительно к конкретному возбудителю (вирус Мачупо) и чувствительной по отношению к нему культуре клеток (постоянная культура клеток почки африканской зеленой мартышки, линия Vero В).
В практике вирусологических исследований при определении биологической активности аренавирусов используют культуру клеток трех - семисуточного возраста, время адсорбции вируса на клетках составляет 60 минут при температуре от 36,5 до 37,5°С; обычно используют агаровые покрытия, пропись которых представлена в таблице 1 [8].
Figure 00000001
Вторичное агаровое покрытие наносят через 120 часов после нанесения первичного покрытия, учет результатов проводят после вторичного инкубирования, продолжительность которого составляет 48 часов, таким образом, общая продолжительность анализа составляет 168 часов. Бляшки под агаром имеют нечеткие очертания, трудно различимы. Размер негативных колоний варьирует от 0,5 до 1,5 мм.
Целью настоящего изобретения является оптимизация состава агарового покрытия и условий культивирования инфицированных клеток для определения концентрации и популяции по S-признаку биологически активного вируса Мачупо - возбудителя Боливийской геморрагической лихорадки.
Сущность изобретения заключается в оптимизации состава первичного и вторичного агаровых покрытий путем изменения концентрации в них АВК, фетальной телячьей сыворотки, деминерализованной воды и антибиотиков (по сравнению с аналогом - первичное и вторичное покрытия), раствора Эрла, l-глутамина, бикарбоната натрия, нейтрального красного (вторичное покрытие), замены бакто-агара «Difco» на бактоагар «Bacteriologi Cal» или «Bacto™ Agar» и условий культивирования инфицированных клеток за счет сокращения времени адсорбции вируса на клетках и инкубирования монослоя клеток под вторичным агаровым покрытием (либо окрашивания клеток 0,1% раствором нейтрального красного вместо нанесения вторичного агарового покрытия) при использовании многофакторного анализа.
Техническим результатом настоящего изобретения является:
- увеличение чувствительности метода в
Figure 00000002
раза;
- достоверное повышение определяемого среднего размера негативных колоний;
- оптимизация процесса клонирования «из бляшки в бляшку» для получения и последующего изучения вариантов исследуемого штамма вируса.
Указанный технический результат достигается за счет оптимизации состава первичного и вторичного агаровых покрытий и условий культивирования инфицированных клеток.
Модифицированная пропись агарового покрытия, рекомендованного для определения концентрации биологически активного вируса Мачупо, представлена в таблице 2.
Figure 00000003
Оптимизация условий культивирования инфицированных вирусом Мачупо клеток Vero В состоит в следующем. Время адсорбции вируса Мачупо на клетках составляет 45 минут вместо 60; инкубирование монослоя клеток под вторичным агаровым покрытием составляет 24 часа вместо 48 часов. Вместо вторичного агарового покрытия возможно окрашивание монослоя клеток внесением в флакон по 0,5-0,6 мл 0,1% раствора нейтрального красного, что позволяет получить экономический эффект без изменения величины концентрации вируса.
Пример 1: Определение концентрации вируса Мачупо в исследуемых пробах
Пластиковые флаконы с площадью рабочей поверхности 25 см2 фирма «Cellstar®», с трехсуточным монослоем клеток Vero В, отобранные для титрования, извлекают из термостата и удаляют из них ростовую среду. Десятикратным шагом готовят разведения исследуемой пробы на солевом растворе Хенкса, содержащем антибиотики в концентрации 100 Ед.мл-1. На каждом флаконе обозначают номер пробы и разведение; на каждое разведение берут не менее четырех флаконов. В каждый из флаконов вносят по 0,5 мл соответствующего разведения и, покачивая флакон, равномерно распределяют инокулят по всему монослою клеток. Затем флаконы укладывают горизонтально, при этом поверхность с монослоем клеток должна находиться внизу, и оставляют при температуре (37,5±0,5)°С. Через 45 минут инокулят из флаконов удаляют пипеткой и в каждый флакон вносят 8,0 мл первичного агарового покрытия (таблица 2). Флаконы укладывают горизонтально, поверхность с инфицированным монослоем клеток должна находиться внизу. Когда агар застывает, флаконы переворачивают монослоем клеток вверх и помещают в термостат при температуре (37,5±0,5)°С. Через 120 часов во флакон вносят 4,0 мл вторичного агарового покрытия (таблица 2) и продолжают инкубирование при тех же условиях. Вместо вторичного агарового покрытия возможно внесение 0,1% раствора нейтрального красного по 0,5-0,6 мл в флакон. Учет негативных колоний проводят через 24 часа после нанесения вторичного агарового покрытия или 0,1% раствора нейтрального красного. Негативные колонии (бляшки) белого цвета, имеют четко очерченные края на розовом фоне живых клеток Vero В. Диаметр бляшек, измеренный с помощью масштабного клина, составляет от 0,8 до 2,6 мм.
Концентрацию вируса Мачупо в исследуемой пробе, выраженную в БОЕ⋅мл-1, рассчитывают по формуле:
Figure 00000004
где
А - количество бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл пробы, БОЕ⋅мл-1;
а - средневзвешенное количество бляшек во флаконе, шт;
bn - кратность наивысшего разведения;
b1 bn - кратность разведения исследуемого материала;
с - объем инокулята, мл.
Пример 2 : Определение среднего размера негативных колоний вируса Мачупо на монослойной культуре клеток Vero В
Определение проводят, как описано в предыдущем примере. Размеры негативных колоний измеряют с помощью масштабного клина с точностью ±0,1 мм. Средний размер негативных колоний определяют по формуле:
Figure 00000005
где
Дср - средний размер негативных колоний;
ni - количество негативных колоний с диаметром di;
N - общее число измеренных негативных колоний.
Пример 3 : Получение клонированного варианта вируса Мачупо
Исследование проводят для определения корреляции размера негативных колоний с биологическими характеристиками. Определение проводят как описано в примере 1, затем отдельные негативные колонии отбирают с помощью пастеровской пипетки, содержимое суспендируют в 2,0 мл солевого раствора Хенкса, содержащего антибиотики в концентрации 100 Ед.мл-1. Полученным материалом (и одновременно исходной культурой вируса) инфицируют монослойную культуру клеток Vero В. Далее определение проводят, как описано в примере 2. Значимым результатом является достоверное различие среднего размера негативных колоний у исходной и клонированной культуры вируса.
Пример 4 : Определение наличия специфических антител к вирусу Мачупо в антителсодержащих субстратах
В работе используют исследуемые иммунные сыворотки, положительный контрольный образец (сыворотку животного того же вида, заведомо содержащую специфические антитела к вирусу Мачупо), отрицательный контрольный образец (сыворотку животного того же вида, заведомо не содержащую специфические антитела к вирусу Мачупо) и культуру штамма Карвалло вируса Мачупо.
Исследование проводят, как описано в примере 1 (до внесения первичного агарового покрытия). Исследуемые иммунные сыворотки добавляют в объеме 0,3 мл на 100 мл покрытия. Далее определение проводят, как описано в примерах 1 и 2. При наличии достоверного снижения размера негативных колоний в вариантах с исследуемой сывороткой и положительном контрольным образцом (по сравнению с отрицательным контрольным образцом) делается заключение о наличии в анализируемой пробе специфических вируснейтрализующих антител к вирусу Мачупо.
Результаты определения концентрации биологически активного вируса Мачупо (штамм Карвалло, депонированного в Государственной коллекции возбудителей геморрагических лихорадок I группы патогенности ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России (№01/17)) при использовании аналогового и разработанного нами состава агарового покрытия (полученные с соблюдением принципа «единственного различия»), представлены в таблице 3.
Figure 00000006
Таким образом, представленные данные показывают достижение технического результата: использование оптимизированного состава агарового покрытия и условий культивирования инфицированных клеток для определения концентрации и состава популяции по S-признаку вируса Мачупо - возбудителя Боливийской геморрагической лихорадки, приводит к:
- увеличению чувствительности метода в
Figure 00000002
раза;
- достоверному повышению определяемого среднего размера негативных колоний;
- оптимизации процесса клонирования «из бляшки в бляшку» для получения и последующего изучения вариантов исследуемого штамма вируса.
Источники информации
1. Гендон Ю.З. Молекулярная генетика вирусов человека и теплокровных животных. - М., Медицина, 1975.
2. Жданов В.М., Ершов Ф.И. Молекулярные основы биологии арбовирусов. - М., Медицина, 1973.
3. Костюкова Н.И. Основы математического моделирования. Оценка биологически активных веществ на основании альтернативных кривых "доза-эффект" Сайт в интернете intuit.ru>department/se/mathmodel/13/3.html.
4. Левкович Е.Н., Карпович Е.Л., Засухина Г.Д. Генетика и эволюция вирусов животных. - М., Медицина, 1971.
5. Маркин В.А., Пантюхов В.Б., Марков В.И., Бондарев В.П. Боливийская геморрагическая лихорадка. - Журн. микробиол., 2013., №3. - С. 118-126.
6. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных / Под ред. академика Д.К. Львова. - М., ООО Изд-во «Мед. информ. агентство». - 2013. - 1200 с.; ил.
7. Сыромятникова С.И., Писцов М.Н., Борисевич С.В., Хамитов Р.А., Марков В.И., Максимов В.П. Состав агарового покрытия для титрования методом негативных колоний коронавируса - возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома / Патент на изобретение №2325436. Зарегистрирован 27.05.2008 г.
8. Сыромятникова С.И., Пантюхов В.Б., Шатохина И.В., Маркин В.А., Пирожков А.П., Тимофеев М.А., Сизикова Т.Е., Румянцева И.Г., Борисевич С.В. Оптимизация условий количественной оценки возбудителя Аргентинской геморрагической лихорадки. - Журн. микробиол., 2013, №2. - С. 51-55.
9. Пшеничнов В.А., Донченко В.В., Мошков А.Е. О некоторых закономерностях изменения структуры вирусных популяций // В кн.: Экология и популяционная генетика микроорганизмов. Свердловск, Изд. АН СССР, 1975. - С. 89-91.
10. Dulbecco R. Production of plaques in monolayer tissue cultures caused by single particles of animal viruses // PNAS USA 1952. - V. 38. - P. 747-752.
11. Peters C.J. Arenaviruses diseases / In: Porterfield J.S., ed. Exotic viral infections. London, N Y 1995. P. 227-246.
12. Peters C.J., Buchmeier M., Rollin P.E., et al. Arenaviruses // Field's Virology Third Edition Vol. 1 / Ed. B.N. Fields, D.M. Knipe, P.M. Powley - Philadelphia, 1996, P. 1521-1551.
13. Peters C.J., Jahrling P.B., Liu C.T. et al. Experimental studies of arenaviral hemorrhagic fevers // Arenaviruses: Biol. and Immunother. Berlin, 1987. - P. 5-61.
14. Peters C.J., Kuehne R.W., Mercado R.R., et al. Hemorrhagic fever in Cochabamba, Bolivia, 1971 // Am. J. Epidemiol. - 1974. - Vol. 99, N 3. - P. 425-433.
15. Webenga N.H. Immunologic Studies of Tacaribe, Junin and Machupo viruses // Amer. J. Trop. Med. Hyg. - 1965. - Vol. 14, №5. - P. 802-808.

Claims (1)

  1. Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса Мачупо - возбудителя Боливийской геморрагической лихорадки, с использованием метода негативных колоний, включающий в себя следующие компоненты в оптимальных концентрациях: в первичном агаровом покрытии - аминокислотный витаминный комплекс (АВК), фетальная телячья сыворотка, 5%-ный раствор бикарбоната натрия, раствор Эрла, деминерализованная вода, 2,9%-ный раствор 1-глутамина, антибиотики, 1,5% бактоагар «Difco»; во вторичном агаровом покрытии - аминокислотный витаминный комплекс (АВК), фетальная телячья сыворотка, 5%-ный раствор бикарбоната натрия, раствор Эрла, деминерализованная вода, 2,9%-ный раствор 1-глутамина, 0,1%-ный раствор нейтрального красного, антибиотики, 1,5% бактоагар «Difco», отличающийся тем, что состав содержит следующие количества представленных компонентов (по объему): в первичном агаровом покрытии - аминокислотный витаминный комплекс (АВК) - 12,1%, раствор Эрла - 10,1%, фетальная телячья сыворотка - 2,1%, 5%-ный раствор бикарбоната натрия - 2,1%, деминерализованная вода - 21,4%, 2,9%-ный раствор 1-глутамина - 2,0%, антибиотики - 0,2%, бактоагар «BacteriologCal» или «Bacto™ Agar» - 50,0%; во вторичном агаровом покрытии - аминокислотный витаминный комплекс (АВК) - 12,0%, раствор Эрла - 10,0%, фетальная телячья сыворотка - 2,0%, бикарбонат натрия - 2,0%, деминерализованная вода - 19,0%, 0,1%-ный раствор нейтрального красного - 5,0%, бактоагар «Bacteriologi Cal» или « Bacto™ Agar» - 50, 0%.
RU2014153910A 2014-12-29 2014-12-29 Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки с использованием метода негативных колоний RU2634868C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014153910A RU2634868C2 (ru) 2014-12-29 2014-12-29 Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки с использованием метода негативных колоний

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014153910A RU2634868C2 (ru) 2014-12-29 2014-12-29 Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки с использованием метода негативных колоний

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2014153910A RU2014153910A (ru) 2016-07-27
RU2634868C2 true RU2634868C2 (ru) 2017-11-07

Family

ID=56556749

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014153910A RU2634868C2 (ru) 2014-12-29 2014-12-29 Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки с использованием метода негативных колоний

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2634868C2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2729052C2 (ru) * 2018-06-26 2020-08-04 Федеральное государственное бюджетное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт" Министерства обороны Российской Федерации Способ определения антигенных различий вирусов рода Arenavirus семейства Arenaviridae

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1694641A1 (ru) * 1988-08-29 1991-11-30 Киевский государственный институт усовершенствования врачей Среда покрыти дл вы влени вирусов по бл шкообразованию
RU2325436C2 (ru) * 2005-11-25 2008-05-27 Вирусологический центр НИИ Микробиологии Министерства обороны Российской Федерации Состав агарового покрытия для титрования методом негативных колоний коронавируса - возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1694641A1 (ru) * 1988-08-29 1991-11-30 Киевский государственный институт усовершенствования врачей Среда покрыти дл вы влени вирусов по бл шкообразованию
RU2325436C2 (ru) * 2005-11-25 2008-05-27 Вирусологический центр НИИ Микробиологии Министерства обороны Российской Федерации Состав агарового покрытия для титрования методом негативных колоний коронавируса - возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
СЫРОМЯТНИКОВА С.И. и др. Оптимизация условий количественной оценки возбудителя аргентинской геморрагической лихорадки. //Журн. микробиол. эпидемиологии и иммунологии, 2013, 2, с.51-55. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2729052C2 (ru) * 2018-06-26 2020-08-04 Федеральное государственное бюджетное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт" Министерства обороны Российской Федерации Способ определения антигенных различий вирусов рода Arenavirus семейства Arenaviridae

Also Published As

Publication number Publication date
RU2014153910A (ru) 2016-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hematian et al. Traditional and modern cell culture in virus diagnosis
Teng et al. Real-time cell analysis–a new method for dynamic, quantitative measurement of infectious viruses and antiserum neutralizing activity
Dilnessa et al. Cell culture, cytopathic effect and immunofluorescence diagnosis of viral infection
Harrison et al. Lithium chloride inhibits the coronavirus infectious bronchitis virus in cell culture
JPS624120B2 (ru)
Dubey et al. Congenital transmission of Neospora caninum in white-tailed deer (Odocoileus virginianus)
Hebert et al. Rapid quantification of vesicular stomatitis virus in Vero cells using Laser Force Cytology
Bullen et al. Quantification of infectious SARS-CoV-2 by the 50% tissue culture infectious dose endpoint dilution assay
Kaur et al. Infectious viral quantification of chikungunya virus—virus plaque assay
Kint et al. Quantification of infectious bronchitis coronavirus by titration in vitro and in ovo
RU2634868C2 (ru) Состав агарового покрытия для определения концентрации и состава популяции вируса мачупо - возбудителя боливийской геморрагической лихорадки с использованием метода негативных колоний
Kitikoon et al. Microneutralization assay for swine influenza virus in swine serum
Karlsson et al. Measuring influenza virus infection using bioluminescent reporter viruses for in vivo imaging and in vitro replication assays
Lercher et al. Antiviral innate immune memory in alveolar macrophages following SARS-CoV-2 infection.
Fisher et al. A high-throughput, high-containment human primary epithelial airway organ-on-chip platform for SARS-CoV-2 Therapeutic Screening
Zhang et al. Calibration of an upconverting phosphor-based quantitative immunochromatographic assay for detecting Yersinia pestis, Brucella spp., and Bacillus anthracis spores
Liu et al. Propagation and assay of the JC virus
RU2729052C2 (ru) Способ определения антигенных различий вирусов рода Arenavirus семейства Arenaviridae
Tyrrell et al. The assay of influenza virus particles by haemagglutination and electron microscopy
CN105651998A (zh) 猪瘟兔化弱毒疫苗病毒效力测定方法
Yin et al. Detecting Z-RNA and Z-DNA in Mammalian Cells
Wöhnke et al. Mass-Spectrometric Evaluation of the African Swine Fever Virus-Induced Host Shutoff Using Dynamic Stable Isotope Labeling with Amino Acids in Cell Culture (SILAC)
Schountz Virology and immunology of bats
Swenson et al. Fluorometric estimation of surface associated microbial abundance
Hare et al. Polyoma virus and L cell relationship. II. A curable carrier system not dependent on interferon

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20171230