RU2630607C1 - Method for determining subpopulation composition of skin cells and obtaining skin cytoimmunogram - Google Patents
Method for determining subpopulation composition of skin cells and obtaining skin cytoimmunogram Download PDFInfo
- Publication number
- RU2630607C1 RU2630607C1 RU2016121997A RU2016121997A RU2630607C1 RU 2630607 C1 RU2630607 C1 RU 2630607C1 RU 2016121997 A RU2016121997 A RU 2016121997A RU 2016121997 A RU2016121997 A RU 2016121997A RU 2630607 C1 RU2630607 C1 RU 2630607C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- skin
- hla
- activated
- cells
- skin cells
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для определения субпопуляционного состава клеток кожи и получения цитоиммунограммы кожи.The invention relates to biology and medicine and can be used to determine the subpopulation composition of skin cells and obtain a cytoimmunogram of the skin.
Наиболее близким к предлагаемому является способ получения жизнеспособной гетерогенной популяции клеток кожи [Патент РФ №2502999, кл. G01N 33/48, C12N 5/071, 2013], включающий забор биоптата кожи на глубину 2 мм, гомогенизацию ткани в 0,9%-ном водном растворе хлорида натрия при температуре +23…+25°С, извлечение гомогената, фильтрование гомогената через инертную фильтровальную перегородку с диаметром пор 20 мкм, центрифугирование гомогената при 400 g в течение 5 минут при температуре +23…+25°С.Closest to the proposed is a method of obtaining a viable heterogeneous population of skin cells [RF Patent No. 2502999, cl. G01N 33/48, C12N 5/071, 2013], including skin biopsy sampling to a depth of 2 mm, tissue homogenization in a 0.9% aqueous solution of sodium chloride at a temperature of + 23 ... + 25 ° С, homogenate extraction, homogenate filtration through an inert filter baffle with a pore diameter of 20 μm, centrifugation of the homogenate at 400 g for 5 minutes at a temperature of + 23 ... + 25 ° C.
Известной причиной, препятствующей достижению технического результата, обеспечиваемого предлагаемым изобретением, является невысокая информативность способа.A known reason that impedes the achievement of the technical result provided by the invention is the low information content of the method.
Задачами, на решение которых направлено предлагаемое изобретение, являются определение субпопуляционного состава клеток кожи и получение цитоиммунограммы кожи.The tasks to which the invention is directed are to determine the subpopulation composition of skin cells and obtain a cytimmunogram of the skin.
При осуществлении изобретения поставленные задачи решаются за счет достижения технического результата, который заключается в определении фенотипа клеток кожи и количества клеток кожи определенного фенотипа.When carrying out the invention, the tasks are solved by achieving a technical result, which consists in determining the phenotype of skin cells and the number of skin cells of a particular phenotype.
Указанный технический результат достигается способом определения субпопуляционного состава клеток кожи и получения цитоиммунограммы кожи, включающим в себя забор биоптата кожи на глубину 2 мм, гомогенизацию ткани в 0,9%-ном водном растворе хлорида натрия при температуре +23…+25°С, извлечение гомогената, фильтрование гомогената через инертную фильтровальную перегородку с диаметром пор 20 мкм, центрифугирование гомогената при 400 g в течение 5 минут при температуре +23…+25°С, определение жизнеспособности клеток кожи, инкубирование в течение 20 минут в защищенном от света месте клеток кожи с моноклональными антителами меченые флюорохромами, фенотипирование клеток кожи, определение количества клеток кожи определенного фенотипа.The specified technical result is achieved by the method of determining the subpopulation composition of skin cells and obtaining a skin cytimmunogram, including skin biopsy sampling to a depth of 2 mm, tissue homogenization in a 0.9% aqueous solution of sodium chloride at a temperature of + 23 ... + 25 ° С, extraction homogenate, filtering the homogenate through an inert filter septum with a pore diameter of 20 μm, centrifuging the homogenate at 400 g for 5 minutes at a temperature of + 23 ... + 25 ° C, determining the viability of skin cells, incubation for 20 mi chickpeas in a dark place of skin cells with monoclonal antibodies labeled with fluorochromes, phenotyping of skin cells, determination of the number of skin cells of a certain phenotype.
Жизнеспособность клеток кожи определяют методом проточной цитометрии с помощью внутриклеточного красителя 7-amino-actinomycin D RUO (7AAD). Идентификацию жизнеспособных клеток выполняют путем регистрации двух параметров: бокового светорассеяния (side scatter) и регистрацией флюоресценции по 3 каналу (FL3). Если не определить жизнеспособность клеток кожи, то полученные результаты окажутся менее точными, т.к. некоторые клетки разрушаются.The viability of skin cells is determined by flow cytometry using the intracellular dye 7-amino-actinomycin D RUO (7AAD). Identification of viable cells is performed by recording two parameters: side scatter and registration of fluorescence on 3 channels (FL3). If you do not determine the viability of skin cells, then the results will be less accurate, because some cells are destroyed.
Инкубирование клеток кожи проводят в течение 20 минут в защищенном от света месте с моноклональными антителами меченые флюорохромами: флюоресцеинизотиоцианатом (FITC), фикоэритрином (РЕ), РЕ - Texasred (ESD), PE/CY5(PC5), PE/CY7(PC7) (Beckman Coulter, USA). Выбор типа и количества флюоресцентных красителей определяется поставленной задачей для данного исследования. Если время инкубирования будет менее 20 минут, то не все антитела свяжутся с рецепторами. Продолжительность инкубирования в 20 минут является оптимальной для данного способа. Попадание света во время инкубирования недопустимо, т.к. приведет к разрушению флюорохромов.Incubation of skin cells is carried out for 20 minutes in a dark place with monoclonal antibodies labeled with fluorochromes: fluorescein isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE), PE - Texasred (ESD), PE / CY5 (PC5), PE / CY7 (PC7) ( Beckman Coulter, USA). The choice of the type and amount of fluorescent dyes is determined by the task for this study. If the incubation time is less than 20 minutes, then not all antibodies will bind to receptors. An incubation time of 20 minutes is optimal for this method. Light entering during incubation is unacceptable, as will lead to the destruction of fluorochromes.
Фенотипирование клеток кожи проводят методом проточной цитометрии с помощью специфических маркеров: CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD19, CD34, CD44, CD45, CD49, CD54, CD63, CD80, CD146, CD203c; CD207, CD249. В процессе дифференцировки клеток на их поверхности появляются специфические мембранные молекулы. Такие молекулы обнаруживают с использованием набора специфических моноклональных антител, с помощью которых идентифицируют субпопуляции клеток и определяют их фенотип.Phenotyping of skin cells is carried out by flow cytometry using specific markers: CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD19, CD34, CD44, CD45, CD49, CD54, CD63, CD80, CD146, CD203c; CD207, CD249. In the process of cell differentiation, specific membrane molecules appear on their surface. Such molecules are detected using a set of specific monoclonal antibodies, which identify cell subpopulations and determine their phenotype.
Методом проточной цитометрии определяют количество клеток кожи определенного фенотипа, используя моноклональные антитела меченые флюорохромами и связывающиеся с определенными рецепторами на мембране клетки.The method of flow cytometry determines the number of skin cells of a certain phenotype using monoclonal antibodies labeled with fluorochromes and binding to specific receptors on the cell membrane.
Пример осуществления предлагаемого способа приведен ниже.An example implementation of the proposed method is given below.
Забор биоптата кожи размером 2×2×2 мм проводили с ягодичной области человека с помощью дракара DERMO-PUNCH (2 мм) (STERYLAB, Италия). Далее биоптат кожи и 1 мл 0,9% водного раствора хлорида натрия помещали в рабочую камеру автоматической системы для механической гомогенизации ткани Medimachine (Becton Dickinson, США). Гомогенизацию ткани проводили в течение 30 секунд при температуре +23…+25°С. Затем извлекали гомогенат стерильным шприцем и трижды вымывали рабочую камеру гомогенизатора 0,9% водным раствором хлорида натрия по 1 мл.A skin biopsy sample 2 × 2 × 2 mm in size was performed from the gluteal region of a person using DERMO-PUNCH drake (2 mm) (STERYLAB, Italy). Next, a skin biopsy sample and 1 ml of a 0.9% aqueous solution of sodium chloride were placed in a working chamber of an automatic system for mechanical homogenization of Medimachine tissue (Becton Dickinson, USA). Homogenization of tissue was carried out for 30 seconds at a temperature of + 23 ... + 25 ° C. Then the homogenate was removed with a sterile syringe and the homogenizer working chamber was washed three times with 0.9% aqueous solution of sodium chloride, 1 ml each.
После чего фильтровали гомогенат через фильтр для клеток Falcon (Becton Dickinson, США) с нейлоновой сетчатой структурой и диаметром пор 20 мкм. Далее центрифугировали гомогенат для удаления надосадочной жидкости при 400 g в течение 5 минут при температуре +23…+25°С.Then the homogenate was filtered through a Falcon cell filter (Becton Dickinson, USA) with a nylon mesh structure and a pore diameter of 20 μm. Then the homogenate was centrifuged to remove the supernatant at 400 g for 5 minutes at a temperature of + 23 ... + 25 ° С.
После этого, определяли жизнеспособность клеток кожи с помощью внутриклеточного красителя 7-amino-actinomycin D RUO (7AAD) (Beckman Coulter, США), анализируя на проточном цитофлюориметре Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США). Идентификацию клеток выполняли путем регистрации двух параметров: бокового светорассеяния (side scatter) и регистрацией флюоресценции по 3 каналу (FL3). Жизнеспособность клеток кожи составила 90,8%.After that, the viability of skin cells was determined using the intracellular dye 7-amino-actinomycin D RUO (7AAD) (Beckman Coulter, USA) by analyzing on a Cytomics FC500 flow cytometer (Beckman Coulter, USA). Cell identification was performed by recording two parameters: side scatter and registration of fluorescence on 3 channels (FL3). The viability of skin cells was 90.8%.
Далее клетки кожи инкубировали в течение 20 минут в защищенном от света месте с моноклональными антителами меченые флюорохромами: флюоресцеинизотиоцианатом (FITC), фикоэритрином (РЕ), РЕ - Texasred (ESD), PE/CY5(PC5), PE/CY7(PC7) (Beckman Coulter, USA).Then, skin cells were incubated for 20 minutes in a dark place with monoclonal antibodies labeled with fluorochromes: fluorescein isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE), PE - Texasred (ESD), PE / CY5 (PC5), PE / CY7 (PC7) ( Beckman Coulter, USA).
Затем методом проточной цитометрии проводили фенотипирование клеточной суспензии на проточном цитофлюориметре Cytomics FC500 (Beckman Coulter, USA) с помощью специфических маркеров: CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD19, CD34, CD44, CD45, CD49, CD54, CD63, CD80, CD146, CD203c; CD207, CD249.Then, by the method of flow cytometry, phenotyping of the cell suspension was carried out on a Cytomics FC500 flow cytometer (Beckman Coulter, USA) using specific markers: CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD19, CD34, CD44, CD45, CD49, CD54, CD63, CD80, CD146, CD203c; CD207, CD249.
После этого, методом проточной цитометрии на Cytomics FC500 (Beckman Coulter, USA) определяли количество клеток кожи определенного фенотипа, используя моноклональные антитела, меченые флюорохромами и связывающиеся с определенными рецепторами на мембране клетки.After that, the number of skin cells of a certain phenotype was determined by flow cytometry on a Cytomics FC500 (Beckman Coulter, USA) using monoclonal antibodies labeled with fluorochromes and binding to specific receptors on the cell membrane.
Результаты осуществления предлагаемого способа приведены в таблице.The results of the proposed method are shown in the table.
Приведенные данные в таблице показывают, что в коже практически отсутствуют В-лимфоциты. Однако в ней присутствует несколько разновидностей Т-лимфоцитов (CD3-лимфоцитов), локализующихся преимущественно в трех наружных слоях эпидермиса. CD4-клетки несколько превалируют численно над CD8-клетками. До 5% Т-клеток кожи лишены корецепторов CD4 и CD8, что рассматривают не как признак незрелости, а как признак особой субпопуляции зрелых Т-лимфоцитов.The data in the table show that in the skin there are practically no B-lymphocytes. However, there are several varieties of T-lymphocytes (CD3-lymphocytes), localized mainly in the three outer layers of the epidermis. CD4 cells somewhat prevail numerically over CD8 cells. Up to 5% of skin T cells lack CD4 and CD8 coreceptors, which is considered not as a sign of immaturity, but as a sign of a special subpopulation of mature T lymphocytes.
Для анализа получаемых результатов и удобства пользования разработан бланк медицинского документа «Цитоиммунограмма кожи». В верхней части документа указаны эмблема медицинского учреждения, знак обслуживания, почтовый адрес, контактные телефоны, сайт медицинского учреждения, а также свободные участки для заполнения лаборантом идентификационного номера цитоиммунограммы кожи с датой проведения анализа, фамилии, имени, отчества пациента и его возраста.To analyze the results and ease of use, a form of the medical document “Skin cytoimmunogram” was developed. The upper part of the document contains the emblem of the medical institution, service mark, mailing address, contact numbers, website of the medical institution, as well as free areas for the laboratory assistant to fill in the skin cytoimmunogram identification number with the date of analysis, last name, first name and patronymic of the patient and his age.
В средней части документа в две колонки представлен состав клеток кожи, с указанием фенотипа каждой популяции: кератиноциты CD49f+, из них активированные CD49f+HLA-DR+; фибробласты (фиброциты) CD45-CD14-CD44+, из них активированные CD45-CD14-CD44+CD80+; тучные клетки CD249+, из них активированные CD249+CD63+; моноциты (макрофаги) CD45+CD14+, из них активированные CD45+CD14+HLA-DR+; внутриэпидермальные макрофаги CD207+, их них активированные CD207+CD80+, CD207+HLA-DR+, CD207+CD80+HLA-DR+; эндотелиальные клетки CD146+, их них активированные CD146+CD34+, CD146+HLA-DR+, CD146+CD54+, CD146+CD54+HLA-DR+; лимфоцитарные популяции: Т-лимфоциты CD45+CD3+, Т-хелперы CD45+CD3+CD4+CD8-, Т-супрессоры CD45+CD3+CD4-CD8+, В-лимфоциты CD45+CD3-CD19+, NK-лимфоциты CD45+CD3-CD16+CD56+. Напротив каждой группы клеток кожи предусмотрены пустые поля в виде сдвоенных прямоугольников для заполнения лаборантом числовых данных в относительных и/или абсолютных единицах по результатам экспериментов. Представленные числовые данные указывают количество клеток кожи определенного фенотипа.In the middle part of the document, the composition of skin cells is presented in two columns, indicating the phenotype of each population: keratinocytes CD49f +, of which activated CD49f + HLA-DR +; fibroblasts (fibrocytes) CD45-CD14-CD44 +, of which activated CD45-CD14-CD44 + CD80 +; mast cells CD249 +, of which activated CD249 + CD63 +; monocytes (macrophages) CD45 + CD14 +, of which activated CD45 + CD14 + HLA-DR +; intraepidermal macrophages of CD207 +, their activated CD207 + CD80 +, CD207 + HLA-DR +, CD207 + CD80 + HLA-DR +; endothelial cells CD146 +, activated CD146 + CD34 +, CD146 + HLA-DR +, CD146 + CD54 +, CD146 + CD54 + HLA-DR +; lymphocyte populations: CD45 + CD3 + T-lymphocytes, CD45 + CD3 + CD4 + CD8- T-helper cells, CD45 + CD3 + CD4-CD8 + T-suppressors, CD45 + CD3-CD19 + B-lymphocytes, CD45 + CD3-CD16 NK lymphocytes + CD56 +. Opposite each group of skin cells, empty fields are provided in the form of double rectangles for filling with the laboratory assistant numerical data in relative and / or absolute units according to the experimental results. The numerical data presented indicate the number of skin cells of a particular phenotype.
В нижней части документа имеются свободные участки, предназначенные для заполнения врачом информации о результатах исследования фенотипа клеток кожи, которые могут свидетельствовать: о динамической оценке течения заболевания, эффективности использования назначенных лекарственных или косметических средств, оценке возрастных изменений кожи, индивидуальном подборе лекарственных препаратов, оценке степени реагирования клеток кожи на те или иные воздействия, а также заполняются лаборантом в свободные участки сведения об исполнителе и враче, направившим на проведение анализа.At the bottom of the document there are free areas intended for the doctor to fill out information on the results of the study of the phenotype of skin cells, which may indicate: a dynamic assessment of the course of the disease, the effectiveness of the use of prescribed drugs or cosmetics, assessment of age-related skin changes, individual selection of drugs, degree assessment the response of skin cells to certain influences, as well as filled by a laboratory assistant in free areas of information about the artist and the doctor who sent for the analysis.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить субпопуляционный состав клеток кожи и получить цитоиммунограмму кожи, тем самым составить подробную количественную и функциональную характеристику всех составляющих элементов кожи, что открывает перспективу его использования в практической медицине и биологии.Thus, the proposed method allows to determine the subpopulation composition of skin cells and to obtain a cytoimmunogram of the skin, thereby making a detailed quantitative and functional characteristic of all the constituent elements of the skin, which opens up the prospect of its use in practical medicine and biology.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016121997A RU2630607C1 (en) | 2016-06-02 | 2016-06-02 | Method for determining subpopulation composition of skin cells and obtaining skin cytoimmunogram |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016121997A RU2630607C1 (en) | 2016-06-02 | 2016-06-02 | Method for determining subpopulation composition of skin cells and obtaining skin cytoimmunogram |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2630607C1 true RU2630607C1 (en) | 2017-09-11 |
Family
ID=59893687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016121997A RU2630607C1 (en) | 2016-06-02 | 2016-06-02 | Method for determining subpopulation composition of skin cells and obtaining skin cytoimmunogram |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2630607C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2502999C1 (en) * | 2012-07-25 | 2013-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-Производственное Объединение "Тюменькриобанк" | Method for producing viable heterogenous skin cell population |
| RU2526180C1 (en) * | 2013-08-14 | 2014-08-20 | Эльмира Фанисовна Гарифуллина | Method of differential morphometric diagnostics of erythrodermal form of mycosis fungoides and syndrome of skin pseudolymphoma by relative volume of epidermis and mitotic index of epidermal cells |
-
2016
- 2016-06-02 RU RU2016121997A patent/RU2630607C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2502999C1 (en) * | 2012-07-25 | 2013-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-Производственное Объединение "Тюменькриобанк" | Method for producing viable heterogenous skin cell population |
| RU2526180C1 (en) * | 2013-08-14 | 2014-08-20 | Эльмира Фанисовна Гарифуллина | Method of differential morphometric diagnostics of erythrodermal form of mycosis fungoides and syndrome of skin pseudolymphoma by relative volume of epidermis and mitotic index of epidermal cells |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Инструкции IOTest 3, Beckman Coulter, 25.02.2013, 21.11.2002 [он-лайн], [найдено 20.03. 2017]. Найдено из Интернет: < URL: https://biochemmack.ru/upload/iblock/3d2/3d2bf270cdb7eac8539b59ac06b28a45.pdf; http://yuvis.com.ua/sites/default/files/field/download%20files/a07737_cd3-fitc_hla_dr-pe_rus.pdf. * |
| ОВСЯННИКОВА Г.В. и др. Метод иммунофенотипирования кожи в диагностике злокачественных лимфом кожи. //Альманах клинической медицины, 2006, N9, стр.96-100, [он-лайн], [найдено 20.03. 2017]. Найдено из Интернет: http://cyberleninka.ru/article/n/metod-immunofenotipirovaniya-kozhi-v-diagnostike-zlokachestvennyh-limfom-kozhi. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lakschevitz et al. | Identification of neutrophil surface marker changes in health and inflammation using high-throughput screening flow cytometry | |
| Darling et al. | High-throughput assessment of cellular mechanical properties | |
| US11833504B2 (en) | Microfluidic label-free isolation and identification of cells using fluorescence lifetime imaging (FLIM) | |
| Tadimety et al. | Liquid biopsy on chip: a paradigm shift towards the understanding of cancer metastasis | |
| Manglani et al. | Leukocyte isolation from brain, spinal cord, and meninges for flow cytometric analysis | |
| CN107850587A (en) | Application of the circulating tumor cell mitotic index in cancer is layered and is diagnosed | |
| Oliver-Vila et al. | Optimisation of a potency assay for the assessment of immunomodulative potential of clinical grade multipotent mesenchymal stromal cells | |
| Wiegmann et al. | Influence of standard laboratory procedures on measures of erythrocyte damage | |
| US20190025282A1 (en) | Method of predicting patient prognosis using rare cells | |
| Piscitelli et al. | Culture and characterization of mammary cancer stem cells in mammospheres | |
| RU2630607C1 (en) | Method for determining subpopulation composition of skin cells and obtaining skin cytoimmunogram | |
| Silva et al. | Stabilization of blood for long-term storage can affect antibody-based recognition of cell surface markers | |
| King et al. | Label-free multi parameter optical interrogation of endothelial activation in single cells using a lab on a disc platform | |
| US8747838B2 (en) | Method for isolating smooth muscle stem cells | |
| US20210172950A1 (en) | Isolating and analyzing rare brain-derived cells and particles | |
| JPWO2015152410A1 (en) | Method for detecting expression of SMN protein | |
| De Biasi et al. | Rare cells: focus on detection and clinical relevance | |
| CN113447334A (en) | Detection method, kit and application of circulating nerve cells | |
| Chitteti et al. | Cell cycle measurement of mouse hematopoietic stem/progenitor cells | |
| LaBelle et al. | Microraft arrays for serial‐killer CD19 chimeric antigen receptor T cells and single cell isolation | |
| Morgado et al. | Identification and immunophenotypic characterization of normal and pathological mast cells | |
| US20040197836A1 (en) | Measurement of F-actin in whole blood cellular subsets | |
| Chatterjee et al. | Flow cytometric detection of minimal residual disease in B-Lineage acute lymphoblastic leukemia by using “MRD lite” panel | |
| WO1999054439A1 (en) | Isolation and purging of cells by means of osmotic pressure | |
| Morgado et al. | Identification and immunophenotypic characterization of normal and pathological mast cells |