RU2624906C2 - Производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты и их противогриппозная активность - Google Patents
Производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты и их противогриппозная активность Download PDFInfo
- Publication number
- RU2624906C2 RU2624906C2 RU2015155006A RU2015155006A RU2624906C2 RU 2624906 C2 RU2624906 C2 RU 2624906C2 RU 2015155006 A RU2015155006 A RU 2015155006A RU 2015155006 A RU2015155006 A RU 2015155006A RU 2624906 C2 RU2624906 C2 RU 2624906C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- qln
- virus
- compounds
- influenza
- apr
- Prior art date
Links
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 title claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 73
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims abstract description 9
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract 2
- OZBDFBJXRJWNAV-UHFFFAOYSA-N Rimantadine hydrochloride Chemical compound Cl.C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 OZBDFBJXRJWNAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 claims description 14
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 4
- VXGGWVBRICYCGO-UHFFFAOYSA-N n-ethyladamantan-1-amine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(NCC)C3 VXGGWVBRICYCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 abstract description 3
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 abstract description 2
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 22
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Natural products CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N adamantane Chemical compound C1C(C2)CC3CC1CC2C3 ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- -1 hydrogen ions Chemical class 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 8
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- SSNSZTQEDDYEPU-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1h-quinoline-2-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2C=CC(C)(C(O)=O)NC2=C1 SSNSZTQEDDYEPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 6
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 6
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 6
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 6
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 6
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 6
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 5
- 101710132653 Protein M2 Proteins 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 229960004376 rimantadine hydrochloride Drugs 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 4
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- SKUFHZAEFGZSQK-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4-dihydroxyphenyl)-1-hexanone Chemical compound CCCCCC(=O)C1=CC=C(O)C=C1O SKUFHZAEFGZSQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 2
- 241000713297 Influenza C virus Species 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 101710199769 Matrix protein 2 Proteins 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- NDBQJIBNNUJNHA-DFWYDOINSA-N methyl (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CO NDBQJIBNNUJNHA-DFWYDOINSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 1
- GQTHLAPBXWRLIA-FYOKJQJXSA-N (4S,5R,6R)-3-acetyl-6-[(1R,2R)-3-acetyloxy-1,2-dihydroxypropyl]-5-amino-2,4-dihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound C(C)(=O)C1C(C(O)=O)(O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1O)N)[C@H](O)[C@H](O)COC(C)=O GQTHLAPBXWRLIA-FYOKJQJXSA-N 0.000 description 1
- GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexen-1-yl)cyclohexan-1-one Chemical compound O=C1CCCCC1C1=CCCCC1 GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPDPFLYDDGYGKP-UHFFFAOYSA-N 2-quinolin-2-ylacetic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(CC(=O)O)=CC=C21 FPDPFLYDDGYGKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 101150065749 Churc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100038239 Protein Churchill Human genes 0.000 description 1
- 241001492409 Retro-transcribing viruses Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001039853 Sonchus yellow net virus Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 101000722167 Thermus virus P23-45 Decoration protein Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- MTEUMURLJRZUKD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;pyridine;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO.C1=CC=NC=C1 MTEUMURLJRZUKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005073 adamantyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)* 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- WOLHOYHSEKDWQH-UHFFFAOYSA-N amantadine hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1C(C2)CC3CC2CC1([NH3+])C3 WOLHOYHSEKDWQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940052761 dopaminergic adamantane derivative Drugs 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 208000037801 influenza A (H1N1) Diseases 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000002183 isoquinolinyl group Chemical class C1(=NC=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- KCUNTYMNJVXYKZ-JTQLQIEISA-N methyl (2s)-2-amino-3-(1h-indol-3-yl)propanoate Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)OC)=CNC2=C1 KCUNTYMNJVXYKZ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- ANSUDRATXSJBLY-VKHMYHEASA-N methyl (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CO ANSUDRATXSJBLY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- LOAUVZALPPNFOQ-UHFFFAOYSA-N quinaldic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C(=O)O)=CC=C21 LOAUVZALPPNFOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMUQFGGVLNAIOZ-UHFFFAOYSA-N quinaldine Chemical class C1=CC=CC2=NC(C)=CC=C21 SMUQFGGVLNAIOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 1
- 102220025556 rs267602805 Human genes 0.000 description 1
- 102220319377 rs769687105 Human genes 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108010015572 sialate O-acetylesterase Proteins 0.000 description 1
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
- C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к противогриппозному средству, обладающему противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа А и действующему на штаммы, резистентные к действию ремантадина и амантадина. Средство представляет собой аминокислотные производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты: 2-хинальдин-серил метиловый эфир (Qln-Ser), 2-хинальдин-триптофанил метиловый эфир (Qln-Trp) и 2-хинальдин-аланил-пролин-1(1-адамантил)этиламид (Qln-APR), и может найти применение при создании новых противовирусных препаратов. Изобретение относится также к новому соединению - 2-хинальдин-аланил-пролин-1(1-адамантил)этиламиду (Qln-APR). 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 табл., 6 пр.
Description
Изобретение относится к вирусологии и медицине, в нем представлены новые синтетические соединения, а именно: 2-хинальдин-серил метиловый эфир (Qln-Ser) и 2-хинальдин-триптофанил метиловый эфир (Qln-Trp) и 2-хинальдин-аланил-пролин-1(1-адамантил)этиламид (Qln-APR), которые могут быть использованы для создания новых противовирусных препаратов в виде индивидуального лекарства и/или в виде композиции.
Серьезную опасность для человечества представляют нетипичные для человека вирусы гриппа птиц: A(H5N1), A(H7N9), A(H7N7), A(H7N3), A(H9N2). В настоящее время большую опасность представляют A(H5N1), A(H7N9) и A(H3N2)v, которые характеризуются высокой летальностью для человека. При определенных условиях вирусы гриппа A(H5N1), A(H7N9) могут приобрести способность передаваться от человека к человеку и вызвать чрезвычайную пандемическую ситуацию.
Существует три основных серотипа вируса гриппа: А, В и С. Мембрана вириона вируса гриппа А содержит большое число равномерно расположенных гликопротеинов: гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA), в соотношении приблизительно четыре к одному, соответственно [1]. Мембрана также содержит матричный белок 2 (М2 или АМ2 для гриппа А), хотя его значительно меньше чем гемагглютинина (1:10-100 М2:НА) [3]. Вирусный нуклеокапсид состоит из восьми отдельных сегментов одноцепочечной (-)РНК замкнутых в кольца. Шесть из этих сегментов РНК (1-6) кодируют по одному вирусному белку, а два сегмента (7 и 8) кодируют по два белка [2]. Белок М2 кодируется седьмым сегментом РНК вместе с матричным белком 1 (M1). Рибонуклеопротеидная (РНП) и липидная оболочки предположительно связаны между собой через взаимодействие с белком M1. В отличие от вириона вируса гриппа А, вирион вируса гриппа В имеет четыре мембранных белка: НА, NA, ВМ2 (белок М2, вируса гриппа В), и NB, а вирион вируса гриппа С содержит только два мембранных «шипа»: СМ2 (белок М2, вируса гриппа С) и гликопротеин gp88, который имеет комбинированную функцию: НА и NA (нейраминат-О-ацетил-эстеразы (гликопептид HEF)) [2]. Соответственно вирус гриппа С распознается другим клеточным рецептором - мукопептидом, содержащим ацетил-9-O-ацетилнейраминовую кислоту. Это обстоятельство обусловливает отсутствие конкуренции на стадии адсорбции между вирусом типа С и вирусами других типов.
Белок М2 образует достаточно специфичные ионные каналы, специализирующиеся на транспорте ионов водорода (протонов). Наиболее важную роль в транспорте протонов через канал в М2, играют аминокислотные остатки гистидина (Н37) и триптофана (W41) в трансмембранном (ТМ) домене. Ранее для канала АМ2 показано, что Н37 выполняет важную роль в протонной избирательности и рН-регуляции [3, 4].
Канал М2 представляет собой мишень, на которую направлено действие известных препаратов против гриппа, таких как Амантадин (1-аминоадамантан гидрохлорид) и Ремантадин (1-(1-адамантил)-этиламин гидрохлорид). В последние годы они в значительной мере потеряли свою противогриппозную активность, что явилось следствием изменения канала М2 на молекулярном уровне, и это делает вирус устойчивым к действию обоих препаратов. В результате секвенирования трансмембранной области белка М2 вируса гриппа А было установлено, что штаммы, резистентные к препаратам адамантана, содержат аминокислотную замену в основном в положении 31 серина на аспарагин (S31N). В настоящее время среди адамантан-резистентных вирусов гриппа А, изолированных в минувшее десятилетие, 98% содержат эту замену. Она стала одним из сигналов к тому, что штамм устойчив к действию амантадина и ремантадина [5].
Один из способов восстановления противовирусных свойств соединений адамантана - это обеспечение их дополнительными функционально активными группами, которые в процессе взаимодействия с трансмембранным доменом были бы способны нарушать процесс транспорта протонов через мембрану вируса. Источником таких функционально активных групп могут являться аминокислотные остатки, а также ряд других физиологически активных соединений, введенных в адамантановый карбоцикл методами пептидного синтеза [6].
Ингибиторы функции белка М2, как правило, состоят из гидрофобной части молекулы, соединенной с полярной функциональной группой, которая, как правило, положительно заряжена. В амантадине или ремантадине гидрофобная часть представлена адамантаном, а заместитель представлен амино- или этил аминогруппой. Адамантильный остаток может быть заменен на другие гидрофобные группы, в том числе сопряженные и спиро-сопряженные мультициклические алканы, разветвленные ациклические алканы и силаны [7, 8]. Эти соединения показали высокую активность в отношении дикого типа, а некоторые были весьма активны в отношении мутантов V27A и L26F [8, 9]. Однако ни одно из этих производных не показало противовирусной активности в отношении мутанта S31N, превосходящей активность амантадина.
Хинолиновые молекулы находят применение в медицине, сельском хозяйстве и фармацевтике. Известно производное изохинолина с аминокислотой аспарагин, которое проявляет ингибирующий эффект на вирусные ферменты. Они ингибируют протеазы вирусного начала, и их можно использовать для профилактики или лечения вирусных инфекций, в частности заболеваний, вызываемых вирусом ВИЧ и ретроидными вирусами [10]. Известно пептидное производное аспарагил-пролина с хинолинкарбоновой кислотой, которое также обладает ингибирующим действием в отношении протез производимых ВИЧ [11].
В качестве гидрофобного компонента предлагаемых соединений была выбрана 2-хинальдинкарбоновая кислота. Эта конденсированная ароматическая система помимо гидрофобных свойств обладает повышенной электронной плотностью, что может быть важно при образовании нековалентных взаимодействий с белками вируса. Использование именно 2-хинольдинкарбоновой кислоты, отчасти обусловлено ее синтетической и экономической доступностью в условиях современного производства, что немаловажно для создания фармацевтической композиции в будущем.
В качестве полярной функциональной группы в конструкцию молекул предлагаемых соединений были выбраны эфиры аминокистот: метиловый эфир серина и метиловый эфир триптофана, а также амид пептида. В структуре дипептидного соединения сложноэфирная группировка заменена на амид 1-адамантилэтиламина.
Сущность изобретения заключается в создании новых синтетических соединений, являющихся производными 2-хинальдинкарбоновой кислоты, а именно: 2-хинальдин-серил метилового эфира (Qln-Ser) и 2-хинальдин-триптофанил метилового эфира (Qln-Trp) и 2-хинальдин-аланил-пролин-1(1-адамантил)этиламида (Qln-APR), которые ингибируют репродукцию патогенных штаммов вируса гриппа A/H1N1pdm2009 и A/H5N1, резистентных к действию ремантадина, а также обладают вирулицидным действием по отношению к штамму вируса гриппа A/H5N1. Более того, предлагаемые соединения обладают меньшим токсическим эффектом на монослой клеток Madin Darby Canine Kidney (MDCK) и Vero-E6, чем римантадина гидрохлорид. Соединения Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR имеют следующие структурные формулы:
Технический результат - получены новые соединения: аминокислотные производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты, малотоксичные, обладающие противогриппозной, в том числе вирулицидной, активностью и действующие на штаммы вируса гриппа А, резистентные к действию препаратов ремантадина и амантадина.
Краткое описание чертежей
Для более ясного понимания сути заявленного изобретения, которое отражено в формуле изобретения, а также для демонстрации ее особенностей и преимуществ далее приводится подробное описание со ссылками на чертежи.
На фиг. 1 представлена схема синтеза соединения Qln-Ser методом смешанных ангидридов.
На фиг. 2а представлены спектральные данные соединения Qln-Ser
На фиг. 2б представлены спектральные данные соединения Qln-Trp
На фиг. 3 представлены спектральные данные соединения Qln-APR
На фиг. 4 в виде таблицы 1 представлены данные влияния различных концентраций соединений Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR на репродукцию пандемического штамма вируса гриппа А/Калифорния/07/2009(H1N1)рdm09 в культуре клеток Madin Darby Canine Kidney (MDCK) при добавлении вещества одномоментно с вирусом. Испытания противовирусной активности соединений Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR проведены в сравнении с ремантадином.
На фиг. 5 в виде таблицы 2 представлены данные противовирусных свойств соединений Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR в отношении инфекции, вызванной высоко патогенным вирусом гриппа A/duck/Novosibirsk/56/05 (H5N1)
На фиг. 6 в виде таблицы 3 представлены данные цитотоксического действия на культуры клеток MDCK и Vero-E6.
На фиг. 7 в виде таблицы 4 представлены данные вирулицидной активности синтезированных соединений в отношении высокопатогенного вируса гриппа A/duck/Novosibirsk/56/05 (H5N1).
Для получения соединений Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR могут быть использованы различные подходы. Один из способов получения соединений Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR - метод смешанных ангидридов (Фиг. 1). Однако предложенный метод синтеза не должен рассматриваться как некое ограничение объема настоящего изобретения во всех отношениях.
Образование пептидной связи между 2-хинольдинкарбоновой кислотой и аминокислотами проводили в одну стадию в эквимолярном соотношении.
При синтезе соединений использовали 2-хинальдинкарбоновую кислоту фирмы Sigma-Aldrich (США), L-аминокислоты фирм Sigma-Aldrich (США) и Nova Biochem (США), рацемический римантадин гидрохлорид фирмы Zhejiang Kangyu Pharmaceutical Со (Китай). Использовали изо-бутилхлорформиат (IBCF) фирмы «Fluka» (Швейцария), N-метилморфолин (NMM) фирмы Sigma-Aldrich (США). Все используемые для конденсации и удаления защитных групп растворители предварительно абсолютировали и перегоняли по стандартным методикам. Идентификация полученных соединений осуществлялась с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинах Silufol (Чехия) в системах: метанол-хлороформ, 13:60 (А), втор-бутанол - 3%-ный аммиак, 100:44 (В), н-бутанол - уксусная кислота - вода - пиридин, 30:3:12:10 (С), позволяющих констатировать полное отсутствие в испытуемых образцах следов римантадина гидрохлорида и 2-хинальдинкарбоновой кислоты. Молекулярный вес был установлен на MALDI-TOF-времяпролетном масс-спектрометре Bruker UltraFlex II с программным обеспечением для сбора и обработки масс-спектров flexControl 1.1. и flexAnalys 2.2. Инфракрасные спектры получены на ИК Фурье спектрометре ИнфраЛЮМ ФТ-10. Температуру плавления полученных соединений измеряли на цифровом приборе для определения точки плавления SMP20 Stuart Scientific.
Настоящее изобретение проиллюстрировано нижеследующими примерами. Однако эти примеры не должны рассматриваться как некое ограничение объема настоящего изобретения во всех отношениях.
Пример 1. Получение Qln-Ser (2-хинальдин-серил метиловый эфир).
Схема синтеза соединения 2-хинальдин-серин метилового эфира (Qln-Ser) представлена на фиг. 1.
Qln-OH (2-хиналъдинкарбоповая кислота) была получена от фирмы Sigma-Aldrich (США). Чистота 98.0%, температура плавления 156-158°С. Коммерческая Qln-OH была использована в синтезе конечного соединения.
В трехгорлую колбу, снабженную механической мешалкой, термометром и хлоркальцевой трубкой, вносят 1,5 г (8,66 мМ) Qln-OH в смеси 7,0 мл СНCH3 с 15,0 мл тетрагидрофурана и прибавляют 1,0 мл (8,66 мМ) N-метилморфолина (NMM). Охлаждают до -25°С и при перемешивании в реакционную массу добавляют 1,3 мл (8,66 мМ) изо-бутилхлорформиата (IBCF). Перемешивают 10 мин. Затем добавляют заранее приготовленный и охлажденный до -20°С раствор 1,35 г (8,66 мМ) хлоргидрата метилового эфира серина в 10 мл СНCl3 с 1,0 мл (8,66 мМ) NMM. Перемешивают 30 мин при -15°С, затем еще 1 час при 0°С и 10 часов при комнатной температуре.
Растворители удаляют на роторном испарителе при 45°С и 15 мм рт. ст. Остаток растворяют в 35,0 мл этилацетата и 10,0 мл Н2О. Раствор переносят в делительную воронку и последовательно промывают 0,5 н серной кислотой (4,0 мл × 1), 0,5 н. KНСО3 (10,0 мл × 2), затем подкисляют 1н. H2SO4 и промывают Н2О (5,0 мл × 1). Органический слой отделяют и сушат безводным Na2SO4. Этилацетат удаляют в вакууме, получают вспененное масло, которое через некоторое время твердеет.
Выход: сероватые кристаллы, 2,07 г (78%), твердый, аморфный, [α]D 20 = +112°, Rf = 0,84(А); Rf = 0,86(B); Rf = 0,75 (С).
Данные ИК-спектра продукта реакции. Образец приготовлен в виде суспензии в CCl4 v(OH) кислоты ~3300 см-1; v(NH) 3364 см-1; v(CH) СН3-группы 2970, 2955, 2890 см-1; v(C=O) 1739, 1653 см-1; v(циклов) 1620-700 см-1.
Об образовании серил метилового эфира исходной хинальдинкарбоновой кислоты свидетельствует наличие в спектре интенсивной узкой полосы валентных колебаний v(NH) при 3364 см-1 на фоне уширенной полосы средней интенсивности v(OH) гидроксогруппы около ~3300 см-1. Наличие эфирной СН3-группы подтверждается проявлением в спектре полос валентных колебаний v(CH) при 2970, 2955, 2890 см-1. В спектре также присутствуют две полосы v(C=O), соответствующие двум типам карбоксилатных групп, при 1739, 1653 см-1.
Масс-спектр: найдено [М+Н]+: 275,10; Mr(C14H14N2O4) 274,27 atomic unit (a.u.).
Соединение Qln-Trp (2-хинальдин-триптофанил метиловый эфир) было получено аналогичным образом с использованием в синтезе метилового эфира триптофана вместо гидрохлорида метилового эфира серина.
Выход: аморфные хлопья, 2,02 г (98%), [α]D 20 = -20°, Rf = 0.95(A); Rf = 0,93(B); Rf = 0,92 (С).
Данные ИК-спектра продукта реакции. Образец приготовлен в виде суспензии в CCl4 v(NH) 3381, 3357 см-1; v(CH) СН3-группы 2958, 2933, 2853 см-1; v(C=O)1711, 1685 см-1; v(циклов) 1620-700 см-1.
Наличию двух типов NH-групп в спектре соответствуют две полосы валентных колебаний v(NH) при 3381, 3357 см-1. Присутствие полос валентных колебаний v(CH) свидетельствует о наличии эфирной СН3-группы. Двум типам карбонильных групп соответствуют в спектре две полосы валентных колебаний v(C=O) при 1711, 1685 см-1.
Масс-спектр: найдено [М+Н]+: 373,40; Mr(C22H19N3O3) 374,15 a.u.
Пример 2. Получение Qln-APR (2-хинальдин-аланил-пролин-1-(1-адамантил)этиламида)
Хлоргидрат этилового эфира дипептида аланил-пролина (НCl* H-Ala-Pro-OEt) был получен классическим методом пептидного синтеза с использованием стратегии трет-бутилоксикарбонильной защиты аминогруппы.
В трехгорлую колбу, снабженную механической мешалкой, термометром и хлоркальцевой трубкой, вносят 0,69 г (3,98 мМ) Qln-OH в смеси 7,0 мл СНСl3 с 15,0 мл тетрагидрофурана и прибавляют 0,44 мл (3,98 мМ) NMM. Охлаждают до -25°С и при перемешивании в реакционную массу добавляют 0,52 мл (3,98 мМ) IBCF. Перемешивают 10 мин. Затем добавляют, заранее приготовленный и охлажденный до -20°С раствор 1,0 г (3,98 мМ) НCl* H-Ala-Pro-OEt в 10,0 мл СНСl3 с 0,44 мл (3,98 мМ) NMM. Перемешивают 30 мин при -15°С, затем еще 1 час при 0°С и 10 часов при комнатной температуре.
Растворители удаляют на роторном испарителе при 50°С и 15 мм рт. ст. Остаток растворяют в 30,0 мл этилацетата и 10,0 мл Н2О. Раствор переносят в делительную воронку и последовательно промывают, 0,5н. серной кислотой (7,0 мл × 1), 0,5н. KНСО3 (10,0 мл × 2), затем подкисляют 1н. H2SO4 и промывают Н2О (5,0 мл × 1). Органический слой отделяют и сушат безводным Na2SO4. Этилацетат удаляют в вакууме, получают вязкое масло.
Выход: прозрачное желтое масло, 1,4 г (~95%), [α]D 20 = +54°, Rf 0,94(А); Rf 0,89(B); Rf 0,86(С).
Полученный таким образом эфир N-хинальдин-дипептида (Qln-Ala-Pro-OEt) впоследствии подвергался омылению в смеси 0,2н. NaOH - Ацетон (1:1).
К раствору 1,4 г (3,79 мМ) Qln-Ala-Pro-OEt в 12,0 мл ацетона прибавляют 16,0 мл (4,0 мМ) 0,25н. NaOH. Выдерживают реакционную смесь при 20°С в течение 45 мин. Ацетон удаляют в вакууме, водную фракцию подкисляют 10% лимонной кислотой до рН 4, выпадает маслянистый осадок. Переносят в делительную воронку и вносят 20,0 мл этилацетата, перемешивают до образования двух прозрачных слоев, водный слой отделяют и промывают водой (2×4 мл). Водный слой вновь отделяют, органический сушат безводным Na2SO4. Этилацетат удаляют в вакууме, выпадают белые кристаллы, которые многократно промывают водой.
Выход: белые кристаллы, 0,52 г (40%), Тпл.=126-128°С, [α]D 20 = +23°, Rf = 0,59(А); Rf = 0,47(B); Rf = 0,59(C).
Омыленный продукт Qln-Ala-Pro-OH участвовал в конденсации с хлоргидратом 1-(1-адамантил)этиламином (НСl *Rem) в условиях реакции смешанных ангидридов.
В трехгорлую колбу, снабженную механической мешалкой, термометром и хлоркальцевой трубкой, вносят 0,5 г (1,47 мМ) Qln-OH в 15,0 мл СНСl3 и прибавляют 0,16 мл (1,47 мМ) NMM. Охлаждают до -25°С и при перемешивании в реакционную массу добавляют 0,19 мл (1,47 мМ) IBCF. Перемешивают 10 мин. Затем добавляют заранее приготовленный и охлажденный до -18°С раствор 0,32 г (1,47 мМ) НСl *Rem в 10,0 мл СНСl3 с 0,16 мл (1,47 мМ) NMM. Перемешивают 30 мин при -15°С, затем еще 1 час при 0°С и 10 часов при комнатной температуре.
Растворители удаляют на роторном испарителе при 50°С и 15 мм рт. ст. Остаток растворяют в 25,0 мл этилацетата и 10,0 мл Н2O. Раствор переносят в делительную воронку и последовательно промывают, 0,5н. серной кислотой (10,0 мл × 1), 0,5н. KНСО3 (10,0 мл × 2), затем промывают Н2O (5,0 мл × 1). Органический слой отделяют и сушат безводным Na2SO4. Этилацетат удаляют в вакууме, получают белые кристаллы
Выход: кристаллический, 0,66 г (90,4%), Тпл.=145-147°С, [α]D 20 = +16°, Rf = 0,81(А); Rf = 0,92(B); Rf = 0,88(С).
Данные ИК-спектра продукта реакции (Qln-APR). Образец приготовлен в виде суспензии в ССl4. v(NH) 3386, 3290 см-1; v(CH) СН3-группы 2974, 2900, 2850 см-1; v(C=O)1675, 1628 см-1; v(циклов) 1620-700 см-1.
В спектре присутствуют две полосы v(NH) при 3386, 3290 см-1, что соответствует наличию двух имино-групп в составе сложного эфира. О замещении ОН-групп исходной кислоты на радикал замещенного амида свидетельствует наличие в спектре полос валентных колебаний v(CH) с максимумами при 2974, 2900, 2850 см-1. Наличию двух типов карбонильных групп соответствует присутствие в спектре двух полос v(C=O) при 1675, 1628 см-1.
Масс-спектр: найдено [М+Н]+: 503,33; Mr(С30Н38N4О3) 502,64 a.u.
Пример 3. Определение противовирусной активности предлагаемых соединений в отношении вируса гриппа А/-Калифорния/07/2009(H1N1)pdm09
Изучение противовирусной активности синтезированных соединений проводили на 96-луночных панелях со сформировавшимся монослоем клеток культуры ткани MDCK.
Одномоментно с инфицированием в монослой клеток вносили ремантадин и изучаемые синтетические соединения в концентрациях 0,05, 0,5 и 5,0 мкг/мл. Панели инкубировали 24 часа при 37°С, а затем останавливали реакцию фиксированием клеток 80% ацетоном на фосфатном буфере. Постановку метода клеточного иммуноферментного анализа (ИФА) проводили согласно методике, описанной ранее [12, 13]. Процент ингибирования вирусной активности соединениями определяли как отношение оптической плотности опытной лунки (с веществом) при 492 н.м. к оптической плотности клеточного контроля.
На фиг. 4 представлены средние значения результатов испытания противовирусной активности синтезированных соединений из параллельных опытов, проводимых в аналогичных условиях.
Результаты эксперимента показывают, что синтезированные соединения Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR защищают клетки монослоя MDCK от цитопатического действия вируса. В условиях in vitro отмечено значительное ингибирование репродукции штамма вируса гриппа А/-Калифорния/07/2009(Н1N1)рdm09, устойчивого к действию ремантадина. Ингибирующая доза (ИД50) для соединения Qln-Ser составила 5,8 мкг/мл, а для Qln-Trp ИД50 составила 4,5 мкг/мл. Хинальдиновое производное дипептида (Qln-APR) не уступает Qln-Trp, ИД50 для Qln-APR составила также 4,5 мкг/мл. Отсутствие ингибирующего эффекта римантадина гидрохлорида косвенно свидетельствует о резистентности данного штамма к препаратам ремантадин и амантадин.
Пример 4. Определение противовирусной активности синтетических соединений в отношении вируса гриппа A/duck/Novosibirsk/56/05 (H5N1)
Изучение противовирусной активности синтезированных соединений проводили на панелях со сформировавшимся монослоем клеток Vero-Е6 (перевиваемая линия почки африканской зеленой мартышки). Противовирусную активность проверяли в трех схемах введения соединений в культуру клеток: за 6 ч до заражения клеток, в момент заражения и через 6 ч после заражения культур клеток. Соединения вносили в концентрациях 50, 25, 12,5, 6,25, 3,15, 1,56, и 0,8 мкг/мл. В качестве контроля (К.в.) использовали инфицированную культуру клеток без добавления соединений. Оценку цитотоксического действия определяли колориметрическим методом после инкубации клеток с синтезированными соединениями (Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR) в течение 72 ч при 37°С.
Противовирусный эффект соединения оценивается по проценту жизнеспособных инфицированных клеток, путем сравнения интенсивности окрашивания раствора в контрольных и опытных лунках при добавлении нейтрального красного на автоматическом спектрофотометре при длине волны 450 нм (Фиг. 5).
Высоковирулентный штамм вируса гриппа A/duck/Novosibirsk/56/05 (H5N1) в большей или меньшей степени был чувствителен ко всем трем соединениям. Из соединений 2-хинальдинкарбоновой кислоты с эфирами аминокислот (Qln-Ser и Qln-Trp) несколько большим противовирусным эффектом обладает производное с остатком серина (Qln-Ser). Из данных таблицы 2 (Фиг. 5) видно, что аминокислотные производные хинальдиновой кислоты (Qln-Ser и Qln-Trp) имеют очень низкий уровень противовирусной активности в условиях профилактической схемы внесения, для соединения Qln-Ser ИД50 составило 12,5 мкг/мл и более, а для Qln-Trp ИД50 составляют еще большие значения. Однако оба соединения (Qln-Ser и Qln-Trp) проявляют значительный противовирусный эффект при внесении после заражения клеток, ИД50<0,08 мкг/мл. Производное 2-хинальдинкарбоновой кислоты с дипептид амидом (Qln-APR) эффективно во всех схемах внесения соединения: ИД50 составило 1,56 мкг/мл для одномоментного введения вещества с вирусом и менее 1,56 мкг/мл для схем до инфицирования и через 6 ч после инфицирования.
Пример 5. Исследование цитотоксического действия соединений Qln-Ser, Qln-Trp и Qln-APR на монослой клеток Vero-Е6 и MDCK
Оценку цитотоксического действия синтезированных соединений для клеток Vero-Е6 проводили по стандартной методике. Клеточную суспензию в ростовой среде (концентрация клеток - 4*105 клеток в 1 мл) вносили в 96-луночные пластиковые панели и через 24 ч после инкубации при 37°С монослой клеток дважды отмывали раствором Хенкса. Добавляли по 20,0 мкл соединений в различных концентрациях в среду поддержки, при этом общий объем жидкости в лунке составлял 200,0 мкл. Обработанные и необработанные таким образом культуры клеток инкубировали в течение 72 ч, после чего клетки, окрашенные метиленовым синим, подсчитывали, используя слайдный цитометр (Cauntess) фирмы Invitrogen (США). Рассчитывали цитотоксическую дозу 50 (ЦД50), которая соответствовала минимальной концентрации соединений, приводящей к гибели 50% клеток монослоя к 72 часам. Оценку цитотоксического действия синтезированных соединений для клеток MDCK проводили по методике, описанной нами ранее [13].
Для соединения Qln-Ser ЦД50 составила более 50 мкг/мл в культуре клеток Vero-E6 более 40 мкг/мл для клеточной культуры MDCK. Таким образом соединение Qln-Ser оказалось менее токсичным для обеих клеточных линий, чем римантадин гидрохлорид. Для соединений Qln-Trp и Qln-APR в культуре клеток Vero-Е6 ЦД50 составила 12,5 мкг/мл, что значительно меньше, чем для клеточной культуры MDCK, для которой этот показатель составил 30 и более 40 мкг/мл соответственно (фиг. 6).
Пример 6. Исследование вирулицидной активности соединений в отношении вируса гриппа A/duck/Novosibirsk/56/05 (H5N1)
Вирулицидная активность соединения связана с прямым инактивирующим действием на вирионы в составе вирусной популяции, в результате чего частично или полностью утрачивается инфекционная активность вируса. Чтобы проверить вирулицидные свойства соединения достаточно провести инкубацию смеси вируса и соединения в течение определенного времени, после чего проверить инфекционные свойства вируса без исследуемого соединения и вируса в смеси с веществом методом титрования в культурах клеток. Достоверное снижение инфекционной активности вируса на 1,0 и более логарифмов (lg) или ее полная утрата по сравнению с вирусом без вещества свидетельствует о проявлении вирулицидной активности исследуемого соединения. В опыте использованы концентрации соединений 10,0 мг/мл, которые смешивали с вирусом следующим образом: 200,0 мкл раствора соединения с добавлением 100,0 мкл вируссодержащего материала в исходной концентрации. Экспозиция с вируссодержащим материалом проведена при комнатной температуре в течение 20 мин, после чего титровали инфекционную активность вируса в каждом варианте опыта в культурах клеток Vero-Е6 при различных разведениях смеси соединений с вирусом. В качестве контроля (К.в.) использовали инфицированную культуру клеток без добавления соединений. По разнице титров вируса в контрольных и опытных экспериментах судили о вирулицидной активности соединения - его способности подавлять инфекционную активность вируса гриппа A/duck/Novosibirsk/56/05 (H5N1). Вирулицидная активность синтетических соединений проиллюстрирована в таблице 4 (Фиг. 7).
В результате была обнаружена умеренная вирулицидная активность для соединения Qln-Ser. Снижение инфекционного титра составило 2,8 логарифма (100-1000 раз) по отношению к вирусному контролю (1gТЦИД50/0,2=8,5). Соединение Qln-Trp практически не проявляло вирулицидных свойств, снижение инфекционного титра составило лишь 1,5 логарифма (10-100 раз) по отношению к вирусному контролю (lgТЦИД50/0,2=8,5). Вирулицидных свойств для соединения Qln-APR обнаружить не удалось, снижение инфекционного титра составило менее одного логарифма. Из полученных данных таблицы 4 (Фиг.7) можно сделать вывод, что дипептидное производное (Qln-APR) действует на вирусную частицу несколько иначе, чем аминокислотные производные (Qln-Ser и Qln-Trp) 2-хинальдинкарбоновой кислоты в силу стерических особенностей более крупной молекулы Qln-APR.
Предложенные соединения ингибируют репродукцию патогенных штаммов вируса гриппа A/H1N1pdm2009 и A/H5N1. Предлагаемые соединения также обладают вирулицидным действием по отношению к вирусным частицам гриппа A/H5N1, что доказывает прямое действие соединений на вирус. Предлагаемые соединения могут быть применены для создания новых противовирусных препаратов, ингибиторов функции протонселективного канала М2 вируса гриппа А с использованием как в виде индивидуального лекарства, так и в составе комплексной терапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Bouvier N.M., Palese P., The biology of influenza viruses, Vaccine 26 (Suppl 4), (2008) D49-D53.
2. Palese P., Shaw M.L., Orthomyxoviridae: the viruses and their replication, in: D.M. Knipe, P.M. Howley (Eds.), Fields virology, Williams & Wilkins, 2007.
3. Wang C., Lamb R.A., Pinto L.H., Activation of the M2 ion channel of influenza virus: a role for the transmembrane domain histidine residue, Biophys. J. 1995, v. 69, p. 1363-1371.
4. Tang Y., Zaitseva F., Lamb R.A., Pinto L.H., The gate of the influenza virus M2 proton channel is formed by a single tryptophan residue, J. Biol. Chem. 2002, v. 277 p. 39880-39886.
5. Chuang G.Y., Kozakov D., Brenke R., Beglov D., Guarnieri F., Vajda S. Binding hot spots and amantadine orientation in the influenza A virus M2 proton channel. Biophys. J. 2009. v. 97(10), p. 2846-2853.
6. Shibnev V.A., Garaev T.M., Finogenova M.P., Shevchenko E.S.; Burtseva E.I. New adamantane derivatives capable of overcoming the resistance of influenza A (H1N1) pdm2009 and A (H3N2) for "rimantadine" Bull. Exp. Biol. Med. 2012, v. 153(2), p. 233-235
7. Hu, W.; Zeng, S.; Li, C; Jie, Y.; Li, Z.; Chen, L. Identification of hits as matrix-2 protein inhibitors through the focused screening of a small primary amine library. J. Med. Chem. 2010, v. 53, p. 3831-3834.
8. Wang, J.; Ma, C; Balannik, V.; Pinto, L.H.; Lamb, R.A.; Degrado, W.F. Exploring the Requirements for the Hydrophobic Scaffold and Polar Amine in inhibitors of M2 from Influenza A Virus. ACS Med. Chem. Lett. 2011, v. 2, p. 307-312.
9. Wang, J.; Ma, C; Fiorin, G.; Carnevale, V.; Wang, Т.; Hu, F.; Lamb, R.A.; Pinto, L.H.; Hong, M.; Klein, M.L.; DeGrado, W.F. Molecular dynamics simulation directed rational design of inhibitors targeting drug-resistant mutants of influenza A virus M2. J. Am. Chem. Soc. 2011, v. 133, p. 12834-12841.
10. Joseph Armstrong Martin, Sally Redshaw. «Amino acid derivatives)) EP 0432695 B1.
11. Susumu Higashida, Mitsuya Sakurai, Yuichiro Yabe, Takashi Nishihgaki, Tomoaki Komai, Limited Handa, С «Peptides capable of inhibiting the activity of HIV protease, their preparation and their therapeutic use» EP 0587311 A1.
12. Бурцева Е.И., Шевченко Е.С., Ленева И.А. и др. Чувствительность к ремантадину и арбидолу вирусов гриппа, вызвавших эпидемические подъемы заболеваемости в России в сезоне 2004-2005 гг. Вопр. вирусол., 2007, №2, с. 24-29.
13. Ленева И.А., Фадеева Н.И., Федякина И.Т. и др. Применение иммуноферментной индикации вирусспецифических антигенов в изучении нового противовирусного препарата. Хим.-фарм. журнал, 1994, №9, с. 4-15.
Claims (10)
1. Противогриппозное средство, обладающее противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа А и действующее на штаммы, резистентные к действию ремантадина и амантадина, представляющее собой аминокислотные производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты:
2-хинальдин-серил метиловый эфир (Qln-Ser)
2-хинальдин-триптофанил метиловый эфир (Qln-Trp)
2-хинальдин-аланил-пролин-1(1-адамантил)этиламид (Qln-APR)
2. Средство по п.1, представляющее собой Qln-Ser и Qln-Trp, обладающее вирулицидной активностью в отношении вирусов гриппа А.
3. Соединение 2-хинальдин-аланил-пролин-1(1-адамантил)этиламид (Qln-APR)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015155006A RU2624906C2 (ru) | 2015-12-22 | 2015-12-22 | Производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты и их противогриппозная активность |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015155006A RU2624906C2 (ru) | 2015-12-22 | 2015-12-22 | Производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты и их противогриппозная активность |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015155006A RU2015155006A (ru) | 2017-06-23 |
| RU2624906C2 true RU2624906C2 (ru) | 2017-07-10 |
Family
ID=59309154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015155006A RU2624906C2 (ru) | 2015-12-22 | 2015-12-22 | Производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты и их противогриппозная активность |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2624906C2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2749006C1 (ru) * | 2020-11-27 | 2021-06-02 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Аминокислотное производное декагидро-клозо-декаборатного аниона и его противовирусная активность в отношении вируса гриппа А |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2170730C2 (ru) * | 1996-05-20 | 2001-07-20 | Дарвин Дискавери Лимитед | Хинолиновые карбоксамиды и фармацевтическая композиция на их основе |
-
2015
- 2015-12-22 RU RU2015155006A patent/RU2624906C2/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2170730C2 (ru) * | 1996-05-20 | 2001-07-20 | Дарвин Дискавери Лимитед | Хинолиновые карбоксамиды и фармацевтическая композиция на их основе |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| M.A. CIUFOLINI ET AL., Synthesis of a model depsipeptide segment of luzopeptins (BBM 928), potent antitumor and antiretroviral antibiotics, TETRAHEDRON LETTERS, 1989, 30(23), pp.3027-3028. C.W. HOLZAPFEL ET AL., Application of aminocarbonylation in the synthesis of a lavendamycin synthon, J. CHEM. RES. (S), 2002, pp.22-24. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2749006C1 (ru) * | 2020-11-27 | 2021-06-02 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Аминокислотное производное декагидро-клозо-декаборатного аниона и его противовирусная активность в отношении вируса гриппа А |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2015155006A (ru) | 2017-06-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hwang et al. | Anti-influenza activities of polyphenols from the medicinal mushroom Phellinus baumii | |
| CN101848719B (zh) | 流感抑制组合物和方法 | |
| Shibnev et al. | Some pathways to overcoming drug resistance of influenza a virus to adamantane derivatives | |
| Shibnev et al. | New adamantane derivatives can overcome resistance of influenza A (H1N1) pdm2009 and A (H3N2) viruses to remantadine | |
| Ju et al. | Discovery of C-1 modified oseltamivir derivatives as potent influenza neuraminidase inhibitors | |
| Hoffmann et al. | A new class of synthetic anti-lipopolysaccharide peptides inhibits influenza A virus replication by blocking cellular attachment | |
| Meng et al. | Design, synthesis and biological evaluation of amino acids-oleanolic acid conjugates as influenza virus inhibitors | |
| Gong et al. | Potential targets and their relevant inhibitors in anti-influenza fields | |
| Wahl et al. | HLA class I molecules reflect an altered host proteome after influenza virus infection | |
| Matusevich et al. | Synthesis and antiviral activity of PB1 component of the influenza A RNA polymerase peptide fragments | |
| Yang et al. | Influenza virus entry inhibitors | |
| RU2624906C2 (ru) | Производные 2-хинальдинкарбоновой кислоты и их противогриппозная активность | |
| Xie et al. | Multivalent peptide dendrimers inhibit the fusion of viral-cellular membranes and the cellular NF-κB signaling pathway | |
| Davis et al. | Emerging antiviral resistant strains of influenza A and the potential therapeutic targets within the viral ribonucleoprotein (vRNP) complex | |
| RU2461544C1 (ru) | Производные 1-(1-адамантил)этиламина и их противовирусная активность | |
| Fayrushina et al. | Synthesis and antiviral activity of novel glycyrrhizic acid conjugates with D-amino acid esters | |
| AU2016359545B2 (en) | Peptides and uses therefor as antiviral agents | |
| RU2572102C1 (ru) | Производные 1-(1-адамантил)этиламин-n-ациламинокислот и их противогриппозная активность | |
| RU2554934C1 (ru) | ИМИНОПРОИЗВОДНЫЕ КАМФОРЫ - ЭФФЕКТИВНЫЕ ИНГИБИТОРЫ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ГРИППА (штамм A/California/07/09 (H1N1)pdm09) | |
| CN113423422A (zh) | 增殖方法 | |
| RU2530554C1 (ru) | Применение 1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиден-аминоэтанола в качестве ингибитора репродукции вируса гриппа | |
| Nishihara et al. | FR198248, a new anti-influenza agent isolated from Aspergillus terreus No. 13830 I. Taxonomy, fermentation, isolation, physico-chemical properties and biological activities | |
| RU2676699C1 (ru) | Аминокислотные производные 2-норборнануксусной кислоты и их противогриппозная активность | |
| Deryabin et al. | Amino acid derivatives of adamantane carbocycle are capable of inhibiting replication of highly virulent avian influenza A/H5N1 virus | |
| RU2118163C1 (ru) | Лекарственное средство для лечения вирусных заболеваний |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |