RU2620004C1 - Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации - Google Patents
Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации Download PDFInfo
- Publication number
- RU2620004C1 RU2620004C1 RU2016110306A RU2016110306A RU2620004C1 RU 2620004 C1 RU2620004 C1 RU 2620004C1 RU 2016110306 A RU2016110306 A RU 2016110306A RU 2016110306 A RU2016110306 A RU 2016110306A RU 2620004 C1 RU2620004 C1 RU 2620004C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- spermium
- bulls
- survival
- hours
- cryoconservation
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61D—VETERINARY INSTRUMENTS, IMPLEMENTS, TOOLS, OR METHODS
- A61D19/00—Instruments or methods for reproduction or fertilisation
- A61D19/02—Instruments or methods for reproduction or fertilisation for artificial insemination
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к воспроизводству крупного рогатого скота. Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации предусматривает выдерживание сперматозоидов в течение 4 часов при температуре 38,5°С в среде, содержащей индукторы капацитации. Затем охлаждают до 18-22°С, проводят окончательное разбавление и фасовку, выдерживают при 4°С в течение 3-4 часов, охлаждают в течение 7,5 мин до -145°С и помещают в жидкий азот. Предлагаемый способ обеспечивает резкое увеличение выживаемости сперматозоидов.
Description
Относится к сельскохозяйственному производству, в частности к воспроизводству крупного рогатого скота, и может использоваться при искусственном осеменении коров криоконсервированной спермой, а также для создания криобанков спермы быков.
В настоящее время для криоконсервации сперматозоидов чаще всего используется следующая методика. Сперму смешивают с разбавителем в отношении 1:1 при 27°С, охлаждают до 18-22°С, производят окончательное разбавление, фасовку и эквилибрацию (выдержка при 4°С в течение 3-4 часов). Потом проводят программное охлаждение в течение 7,5 минут до температуры -145°С и для длительного хранения контейнер с образцами помещают в жидкий азот, имеющий температуру -196°С [1]. Описанный способ и был выбран в качестве прототипа.
Все разбавители спермы содержат криопротекторы, предназначенные для защиты сперматозоидов от разрушения при замораживании, обеспечивая максимально возможное выживание после оттаивания. Однако практика показывает, что какие бы криопротекторы ни применялись, выживает примерно половина.
Задачей настоящего изобретения была разработка способа замораживания спермы быков, позволяющая существенно поднять выживаемость при криоконсервации.
В результате многочисленных экспериментов было обнаружено, что значительному увеличению выживаемости спермы способствует ее капацитация перед замораживанием. Суть предлагаемого способа состоит в следующем. Сперматозоиды быков помещают в среду, содержащую индукторы капацитации, такие как гепарин, теофиллин, дбцАМФ, где выдерживают в течение 4 часов при 38,5°С, затем охлаждают до 18-22°С, производят окончательное разбавление и фасовку, потом выдерживают при 4°С в течение 3-4 часов, охлаждают в течение 7,5 минут до -145°С и помещают в жидкий азот.
Эксперименты проводили во Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных. Сперму быков Голштинской породы получали на племенном предприятии «Невское», где впоследствии проводилась криоконсервация.
Сперматозоиды отмывали от семенной плазмы двухкратным центрифугированием при 300 g в течение 10 мин в среде Sp-TALP, состоящей из: 100 мМ NaCl, 3.1 мМ KCl, 25 мМ NaHCO3, 0.3 мМ NaH2PO4, 21.6 мМ Lactate (sodium salt), 0.5 мМ CaCl2, 0.4 мМ MgCl2, 10 мМ HEPES, 1 мМ пирувата и 0,1% поливинилалкоголя.
Капацитацию спермиев проводили в течение 4 часов при 38,5°С в такой же среде, где вместо поливинилалкоголя брали BSA в концентрации 6 мг/мл. В качестве индукторов капацитации применяли гепарин и пару соединений теофиллин/дбцАМФ. Подготовка к криоконсервации проводилась по методике, описанной выше.
В опытах участвовали девять быков, имеющих разные показатели продуктивности. Сперму каждого быка разделяли на три части. Первую готовили к замораживанию по обычной методике, вторую - по заявленному способу с использованием гепарина в качестве индуктора капацитации, третью - с применением пары теофиллин/дбцАМФ. Результаты первой группы попадали в контроль, второй - вариант 1, третьей - вариант 2.
Для исследования эффекта заявленного способа после криоконсервации образцы размораживали на водяной бане при 38,5°С в течение 10-12 секунд. Затем сперматозоиды отмывали от криопротектора двухкратным центрифугированием со средой Sp-TALP.
Соотношение погибших и выживших клеток определяли по стандартной методике путем окрашивания 0,06% раствором PropidiumIodid и подсчетом под микроскопом. Сперматозоиды, показывающие яркую флуоресценцию по всей головке, оценивались как мертвые, со слабо окрашенной головкой - как живые.
Общие усредненные показатели по выжившим сперматозоидам получились такими: контроль - 54%, вариант 1 - 73%, вариант 2 - 71%. Среднестатистическая погрешность не превысила 1%.
Технический результат изобретения состоит в резком увеличении выживаемости спермы быков при криоконсервации.
Источники информации
1. В.И. Фисинин и др. Национальная технология замораживания и использования спермы племенных быков-производителей// Москва, 2008, с. 64-74.
Claims (1)
- Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации, согласно которому спермотазоиды выдерживают в течение 4 часов при 38,5°С в среде, содержащей индукторы капацитации, охлаждают до 18-22°С, проводят окончательное разбавление и фасовку, выдерживают при 4°С в течение 3-4 часов, охлаждают в течение 7,5 минут до -145°С и помещают в жидкий азот.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016110306A RU2620004C1 (ru) | 2016-03-21 | 2016-03-21 | Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016110306A RU2620004C1 (ru) | 2016-03-21 | 2016-03-21 | Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2620004C1 true RU2620004C1 (ru) | 2017-05-22 |
Family
ID=58881256
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016110306A RU2620004C1 (ru) | 2016-03-21 | 2016-03-21 | Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2620004C1 (ru) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070072166A1 (en) * | 2003-11-06 | 2007-03-29 | Anthony Michael | Semen preservation |
EA009409B1 (ru) * | 2003-09-09 | 2007-12-28 | Крио-Инновейшен Кфт. | Способ улучшения выживаемости после размораживания криоконсервированного биологического материала посредством стимуляции гидростатическим сжатием |
RU2323701C2 (ru) * | 2006-07-05 | 2008-05-10 | ФГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела (ВНИИплем) | Синтетическая среда для замораживания спермы быков |
RU2399201C1 (ru) * | 2009-04-20 | 2010-09-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Астраханский государственный технический университет (ФГОУ ВПО АГТУ) | Способ повышения выживаемости половых клеток осетровых рыб при криоконсервации |
-
2016
- 2016-03-21 RU RU2016110306A patent/RU2620004C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA009409B1 (ru) * | 2003-09-09 | 2007-12-28 | Крио-Инновейшен Кфт. | Способ улучшения выживаемости после размораживания криоконсервированного биологического материала посредством стимуляции гидростатическим сжатием |
US20070072166A1 (en) * | 2003-11-06 | 2007-03-29 | Anthony Michael | Semen preservation |
RU2323701C2 (ru) * | 2006-07-05 | 2008-05-10 | ФГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела (ВНИИплем) | Синтетическая среда для замораживания спермы быков |
RU2399201C1 (ru) * | 2009-04-20 | 2010-09-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Астраханский государственный технический университет (ФГОУ ВПО АГТУ) | Способ повышения выживаемости половых клеток осетровых рыб при криоконсервации |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Zaniboni et al. | Pellet cryopreservation for chicken semen: Effects of sperm working concentration, cryoprotectant concentration, and equilibration time during in vitro processing | |
Prien et al. | Cryoprotectants & cryopreservation of equine semen: A review of industry cryoprotectants and the effects of cryopreservation on equine semen membranes | |
Parnpai et al. | Vitrification of buffalo oocytes and embryos | |
Vilela et al. | Cryopreservation of bison epididymal sperm: A strategy for improving post-thaw quality when collecting sperm in field conditions | |
Kopeika et al. | Cryopreservation of reproductive cells and embryos of laboratory, agricultural and wild animals | |
Kuzlu et al. | The effect of different extenders on the sperm motility and viability of frozen Turkey semen | |
Kim et al. | Rapid freezing without cooling equilibration in canine sperm | |
Nicacio et al. | Effects of different cryopreservation methods on post-thaw culture conditions of in vitro produced bovine embryos | |
Chuawongboon et al. | Effects of supplementation of iodixanol to semen extender on quality and fertilization ability of frozen–thawed Thai native bull sperm | |
Büyükleblebici et al. | The comparison of three different cryoprotectants in cryopreservation of angora goat semen | |
Rodenas et al. | Quality of chilled and cold-stored (5 C) canine spermatozoa submitted to different rapid cooling rates | |
RU2620004C1 (ru) | Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации | |
Ullah et al. | Enhancement of extender excellence of frozen bull semen using α-Tocopherol as an antioxidant | |
KR20150101498A (ko) | 아스타잔틴 또는 커큐민을 포함하는 돼지 정자 동결보존용 조성물 | |
Saragusty et al. | Controlled ice nucleation—Is it really needed for large-volume sperm cryopreservation? | |
Dorado et al. | Cryopreservation of Andalusian donkey (Equus asinus) spermatozoa: Use of alternative energy sources in the freezing extender affects post-thaw sperm motility patterns but not DNA stability | |
Varisli et al. | Short-term storage of rat sperm in the presence of various extenders | |
Stănescu et al. | Freezing of dog’s sperm: a review | |
KR101546487B1 (ko) | 저밀도 지질단백질과 항산화제를 포함하는 정자 동결보존용 조성물 및 이의 용도 | |
Hori et al. | Influence of the time between removal and cooling of the canine epididymis on post-thaw caudal epididymal sperm quality | |
KR101439231B1 (ko) | 항동결 단백질을 이용하여 난소를 동결보존하는 방법 | |
Kusumawati et al. | The Quality of Fresh Semen of Bulls at 50C and 240C With or Without Diluent | |
Pappa et al. | Effect of fructose on thawed bull semen’s viability obtained by post-mortem collection | |
Ba-Awadh et al. | Comparison between rapid and slow cryopreservation protocols for ram semen. | |
Gerzilov | Influence of various cryoprotectants on the sperm mobility of Muscovy semen before and after cryopreservation. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190322 |