RU2617042C2

RU2617042C2 - Method of induction of superovulation in cows-donors embryones with prolongation of activity of hypophysical gonadotropins

Info

Publication number: RU2617042C2
Application number: RU2016124629A
Authority: RU
Inventors: Глеб Юрьевич Косовский; Дмитрий Владимирович Попов; Артём Владимирович Бригида
Priority date: 2016-06-21
Filing date: 2016-06-21
Publication date: 2017-04-19
Also published as: RU2016124629A

Abstract

FIELD: veterinary medicine.

SUBSTANCE: method comprises a single administration of donor cows in the luteal phase of the sexual cycle of the drug, containing pituitary gonadotropins Follicle stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH), combined with prolongatory. After 48 hours, prostaglandin F2α is injected. Additionally, 0.25-1% novocaine solution in an amount of 3-15 ml is injected. This novocaine solution is injected simultaneously in combination with a preparation containing hypophyseal gonadotropins FSH and LH is combined with prolongatory, wherein prolongator is used as a biodegradable polymer is polyethylene glycol (PEG) with a mass of 6,000 to 70,000 Da in an amount of 0.5-7 g. The preparation, containing hypophyseal gonadotropins FSH and LH, is injeted in a total dose recommended by instructions of this drug to induce superovulation.

EFFECT: method allows to increase the number of quality embryos obtained from donor cows as a result of induction of superovulation.

1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к области репродуктивных биотехнологий в животноводстве, в частности, к методам получения и трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (далее - КРС).The invention relates to the field of reproductive biotechnology in animal husbandry, in particular, to methods for producing and transplanting cattle embryos (hereinafter - cattle).

Максимально возможная воспроизводственная продуктивность коровы заключается в рождении, как правило, одного теленка в год, что не позволяет проводить в короткие сроки селекционную работу, создавать и формировать высокопродуктивные племенные стада с заданными хозяйственно-полезными признаками.The maximum possible reproductive productivity of a cow consists in the birth of, as a rule, one calf per year, which does not allow for short breeding, to create and form highly productive breeding herds with specified economically useful traits.

Одной из технологий ускоренного воспроизводства и тиражирования племенного потомства КРС является получение от животных-доноров эмбрионов с последующей их трансплантацией животным-реципиентам (далее - технология трансплантации эмбрионов). Такая технология позволяет более эффективно использовать генетический потенциал животных при значительном сокращении интервала между поколениями, и включает в себя следующие основные этапы: отбор животных-доноров эмбрионов, в качестве которых используют телок и коров с высокими хозяйственными и племенными характеристиками (далее - доноры), и отбор животных-реципиентов (далее - реципиенты); индукция суперовуляции (полиовуляции) у доноров; синхронизация половых циклов у доноров и реципиентов; искусственное осеменение доноров; извлечение (вымывание) эмбрионов у доноров; оценка по морфологии и жизнеспособности полученных эмбрионов; пересадка эмбрионов реципиентам; криоконсервация извлеченных эмбрионов. Благодаря данной технологии существует возможность ежегодно получать от одного донора до 80 эмбрионов и за счет последующей их пересадки реципиентам достигать выхода около 40 генетически ценных телят (при средней приживляемости, в среднем, 50%).One of the technologies for accelerated reproduction and replication of pedigree cattle offspring is to obtain embryos from animal donors and then transplant them into recipient animals (hereinafter - embryo transplant technology). This technology allows more efficient use of the genetic potential of animals with a significant reduction in the interval between generations, and includes the following main steps: selection of animal donor embryos, which are used as heifers and cows with high economic and breeding characteristics (hereinafter referred to as donors), and selection of animal recipients (hereinafter referred to as recipients); induction of superovulation (poliovulation) in donors; synchronization of reproductive cycles in donors and recipients; artificial insemination of donors; extraction (leaching) of embryos from donors; assessment of the morphology and viability of the resulting embryos; embryo transfer to recipients; cryopreservation of recovered embryos. Thanks to this technology, it is possible to annually receive from one donor up to 80 embryos and, due to their subsequent transplantation, to recipients achieve the yield of about 40 genetically valuable calves (with an average survival rate, on average, 50%).

Биологически определено, что в яичниках коров содержатся сотни тысяч незрелых половых клеток (ооцитов), но, несмотря на такой огромный репродуктивный резерв, у данного вида млекопитающих в условиях физиологической нормы в течение одного полового цикла созревает, как правило, один фолликул (остальные подвергаются атрезии), и, как следствие, может быть оплодотворена одна яйцеклетка, что обуславливает рождение одного теленка. Поэтому для максимального использования биологического репродуктивного потенциала яичников у самок КРС существует необходимость индуцировать синхронный рост множества фолликулов, их созревание с последующей овуляцией. В этой связи, метод индукции суперовуляции (полиовуляции) является одним из важнейших этапов в технологии трансплантации эмбрионов.It is biologically determined that the ovaries of cows contain hundreds of thousands of immature germ cells (oocytes), but despite such a huge reproductive reserve, in this species of mammals, under the physiological norm, usually one follicle matures during one sexual cycle (the rest undergo atresia ), and, as a result, one egg can be fertilized, which leads to the birth of one calf. Therefore, to maximize the use of the biological reproductive potential of the ovaries in female cattle, there is a need to induce the synchronous growth of many follicles, their maturation with subsequent ovulation. In this regard, the method of induction of superovulation (poliovulation) is one of the most important stages in the technology of embryo transplantation.

Проведение процедуры индукции суперовуляции у доноров включает в себя введение одного из гонадотропных препаратов, содержащих фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ), внутримышечно либо подкожно в зависимости от схемы гормональной стимуляции, введение препаратов клопростенола (препараты эстрофан, магэстрофан, броэстрофан и т.п.), являющихся синтетическими аналогами природного простагландина F2α. Наиболее используемыми на практике по эффективности индукции суперовуляции являются препараты, содержащие гонадотропины гипофизарного происхождения. В настоящее время производят препараты, содержащие ФСГ и ЛГ, полученные из гипофиза животных (свиней, овец) или рекомбинантным способом, например, промышленно выпускаемые препараты «ФСГ-супер», «Плюсет», «Follitropin-V», «R-Follitropin» и т.д. В отличие от гонадотропных препаратов, полученных, например, из сыворотки крови жеребых кобыл, гипофизарные гонадотропины имеют короткий период полураспада, не нарушают воспроизводительную функцию коров после проведения процедуры индукции суперовуляции, сохраняют чувствительность яичников к вводимым гонадотропинам, не вызывают аллергических реакций. ФСГ вызывает и стимулирует рост и созревание фолликулов в яичниках, а ЛГ инициирует, в последующем, их овуляцию, поэтому для достижения успеха при проведении индукции суперовуляции одномоментное присутствие экзогенных ФСГ и ЛГ необходимо в организме животного для полноценного протекания интроовариальных процессов. Соотношение ФСГ/ЛГ имеет большое значение для проведения качественной индукции суперовуляции. При этом, возможным диапазоном их соотношений, необходимых для индукции успешной суперовуляции у доноров, является соотношение ФСГ/ЛГ в известных коммерческих препаратах, которое составляет 1/0,001-1/1 (Инструкция к препарату «ФСГ-супер», сайт Интернет http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/, 2016 г.; В.В. Мадисон, В.Л. Мадисон. Трансплантация эмбрионов в практике разведения молочного скота. - М: ВО «Агропромиздат", 1988 г., стр. 58).The procedure for inducing superovulation in donors includes the introduction of one of the gonadotropic drugs containing follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH), intramuscularly or subcutaneously, depending on the hormonal stimulation scheme, administration of cloprostenol preparations (estrofan, magestrofan, broestrofan, etc. .p.), which are synthetic analogues of the natural prostaglandin F2α. The most used in practice for the effectiveness of induction of superovulation are drugs containing gonadotropins of pituitary origin. Currently producing preparations containing FSH and LH obtained from the pituitary gland of animals (pigs, sheep) or by recombinant methods, for example, the industrially produced preparations “FSH-super”, “Pluset”, “Follitropin-V”, “R-Follitropin” etc. Unlike gonadotropic drugs obtained, for example, from blood serum of mares, pituitary gonadotropins have a short half-life, do not violate the reproductive function of cows after the superovulation induction procedure, maintain the sensitivity of the ovaries to the administered gonadotropins, and do not cause allergic reactions. FSH causes and stimulates the growth and maturation of follicles in the ovaries, and LH initiates, subsequently, their ovulation, therefore, to achieve success during the induction of superovulation, the simultaneous presence of exogenous FSH and LH is necessary in the animal body for the full course of introovarial processes. The FSH / LH ratio is of great importance for the qualitative induction of superovulation. At the same time, a possible range of their ratios necessary for the induction of successful superovulation in donors is the FSH / LH ratio in known commercial preparations, which is 1 / 0.001-1 / 1 (Instruction for the preparation “FSH-super”, Internet site http: / /www.vettorg.net/pharmacy/62/81/, 2016; VV Madison, VL Madison. Transplantation of embryos in the practice of breeding dairy cattle. - M: IN "Agropromizdat", 1988, p. 58).

Общепринятым является способ гормональной обработки животного для индукции суперовуляции у доноров, включающий 8-10-кратное введение препарата, содержащего ФСГ и ЛГ, каждые 12 часов в течение 4-5 дней (4-х или 5-ти дневная схема введения гонадотропных препаратов) в связи с тем, что ФСГ имеет короткий период полураспада, и, как следствие, короткий период его инактивации в организме животного. Данный промежуток времени (4-5 дней) является достаточным для полного созревания множества фолликулов с образованием полноценных качественных яйцеклеток.A generally accepted method is the hormonal treatment of an animal to induce superovulation in donors, including an 8-10-fold administration of a drug containing FSH and LH every 12 hours for 4-5 days (4 or 5-day regimen for the administration of gonadotropic drugs) due to the fact that FSH has a short half-life, and, as a result, a short period of its inactivation in the animal’s body. This period of time (4-5 days) is sufficient for the complete maturation of many follicles with the formation of full-fledged high-quality eggs.

При этом, одним из серьезных недостатков ФСГ, используемого при проведении индукции суперовуляции в качестве вещества, вызывающего рост и созревание большого количества фолликулов, является короткий период его инактивации, что определяет необходимость его многократного введения в организм животного для постоянного поддержания эффективного уровня гормона в крови, необходимого для роста и созревания такого количества фолликулов.At the same time, one of the serious drawbacks of FSH used in the induction of superovulation as a substance that causes the growth and maturation of a large number of follicles is the short period of its inactivation, which determines the need for its repeated introduction into the animal's body to constantly maintain an effective level of the hormone in the blood, necessary for the growth and maturation of such a number of follicles.

Недостатком многократного введения является трудоемкий процесс, так как на постоянной основе в строго определенное время необходимо привлекать обслуживающий персонал для отбивки животного от общего стада, фиксировать животное и инъецировать ему препарат. При этом появляются условия для колебания концентрации вводимых гонадотропинов в сыворотке крови животного, которые создают стрессы, негативно влияющие на физиологические и метаболические процессы в организме доноров эмбрионов (телок и коров), и, как следствие, возникают предпосылки к получению низкого результата суперовуляции. В связи с этим возникает целесообразность однократного введения препарата, содержащего гипофизарные гонадотропины. Возможность отказаться от многократного введения такого препарата появляется в случае пролонгирования действия ФСГ с помощью различных вспомогательных веществ (пролонгаторов), увеличивающих время нахождения этого экзогенного гонадотропина в организме и обеспечивающих равномерное его высвобождение, приводящее к поддержанию необходимого уровня этого гормона в крови.The disadvantage of repeated administration is a time-consuming process, since on an ongoing basis at a strictly defined time it is necessary to involve service personnel to beat the animal from the general herd, fix the animal and inject the drug with it. At the same time, conditions appear for fluctuations in the concentration of gonadotropins administered in the blood serum of the animal, which create stresses that negatively affect the physiological and metabolic processes in the body of embryo donors (heifers and cows), and, as a result, prerequisites arise for obtaining a low result of superovulation. In this regard, the feasibility of a single injection of a drug containing pituitary gonadotropins. The ability to refuse multiple administration of such a drug appears in the case of prolonging the action of FSH with the help of various auxiliary substances (prolongators), which increase the residence time of this exogenous gonadotropin in the body and ensure its uniform release, leading to the maintenance of the necessary level of this hormone in the blood.

Проблема повышения эффективности результата суперовуляции с предпочтительным однократным введением гонадотропинов в настоящее время остается актуальной и решается в разных направлениях: совершенствуются протоколы индукции суперовуляции с использованием различных схем введения гонадотропинов в сочетании с известными и апробированными на практике вспомогательными веществами (пролонгаторами), ведется поиск новых, более эффективных вспомогательных веществ или их композиций, имеющих различную природу происхождения.The problem of increasing the effectiveness of the result of superovulation with the preferred single administration of gonadotropins currently remains relevant and is being addressed in different directions: the protocols for the induction of superovulation using various schemes for administering gonadotropins in combination with known and tested excipients (prolongators) are being improved, and new, more effective excipients or their compositions having different nature of origin.

Известен способ продления действия однократной инъекции ФСГ с использованием в качестве пролонгаторов карбокси-метил-целлюлозы и поливинилпирролидона, 3,2%-го раствора желатина (Smith L.E., Sitton G.D., Vincent C.K. Limited inqection of follicle stimulating hormone for multiple births in beef cattle. // J. Anim. Sci., 1973, 37, 523-527). Известен пролонгатор пролонгон, позволяющий при однократной инъекции ФСГ вызывать суперовуляцию у 75% животных при числе овуляций от 9,9 до 10,7 (при использовании различных препаратов ФСГ) и выходе качественных эмбрионов от 2,9 до 3,5 на донора. При этом был отмечен более высокий уровень приживляемости эмбрионов, полученных от коров, обработанных ФСГ с пролонгоном. (Довгопол В.Ф., Осташко Ф.И., Исаченко И.И. Совершенствование нехирургического метода трансплантации эмбрионов. // Зоотехния, 1992, 2, 14-17). Однако вышеуказанные пролонгаторы не обеспечивают оптимального времени эффективного действия фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), необходимого для вызывания множественного роста фолликулов, либо обеспечивают высокое число овуляций, но при этом количество полученных пригодных эмбрионов ниже на 50% от среднестатистического, либо вызывают поликистоз яичников, который может привести к вынужденной выбраковке животного.A known method of prolonging the action of a single injection of FSH using carboxy methyl cellulose and polyvinylpyrrolidone, a 3.2% gelatin solution (Smith LE, Sitton GD, Vincent CK Limited inqection of follicle stimulating hormone for multiple births in beef cattle as prolongators). // J. Anim. Sci., 1973, 37, 523-527). A known prolongator is a prolongon, which allows for a single injection of FSH to cause superovulation in 75% of animals with an ovulation number of 9.9 to 10.7 (using various FSH preparations) and high-quality embryos from 2.9 to 3.5 per donor. At the same time, a higher level of engraftment of embryos obtained from cows treated with FSH with prolongon was noted. (Dovgopol V.F., Ostashko F.I., Isachenko I.I. Improvement of the non-surgical method of embryo transplantation. // Zootechny, 1992, 2, 14-17). However, the aforementioned prolongators do not provide the optimal time for the effective action of follicle-stimulating hormone (FSH), necessary to induce multiple growth of follicles, or provide a high number of ovulations, but the number of suitable embryos obtained is lower by 50% of the average, or cause polycystic ovaries, which can lead to forced culling of the animal.

Известен способ стимулирования пролонгации ФСГ для индукции суперовуляции у коров-доноров (прототип - патент BY12490), включающий однократное введение коровам-донорам в лютеиновую фазу полового цикла препарата «ФСГ-супер», содержащего гипофизарные гонадотропины фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ), сочетанно с пролонгатором, с последующим введением через 48 часов простогландина двухкратно с интервалом в 12 часов в дозах 500 и 250 мкг/голову по клопростенолу, который является синтетическим аналогом природного простагландина F2α. Животных двукратно искусственно осеменяют спермой проверенного быка-производителя через 48 и 60 часов после первой инъекции простагландина F2α. Извлечение эмбрионов осуществляют на 7-й день полового цикла. Полученные эмбрионы подвергают подсчету, оценке их жизнеспособности и пригодности к эмбриопересадкам. Согласно патенту BY12490, в качестве пролонгатора используют порошкообразный полимер поливинилового спирта (ПВС), который разводят в физиологическом растворе с температурой 50-60°С до концентрации 12-процентной суспензии, которую охлаждают до 40-42 градусов и в количестве 5-7 мл смешивают с 50 мг натурального ФСГ. Полученный рабочий раствор однократно вводят подкожно коровам-донорам в область лопатки по 5-7 мл/голову. Все животные-доноры были обработаны натуральным гормональным препаратом российского производства торговой марки «ФСГ-супер» согласно его инструкции (Сайт Интернет: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/, 2016 г.). Данный препарат представляет собой гипофизарные гонадотропины, содержащие ФСГ и ЛГ, полученные из передней части гипофиза свиней, и имеет оптимальное для животных соотношение ФСГ к ЛГ - 1000-1500 ед. ФСГ/1 ед. ЛГ. Согласно инструкции производителя, препарат действует пролонгировано, сохраняясь в крови в течение 48-72-х часов, и обладает высокой физиологической активностью при малых дозах и однократном введении, благодаря высокой степени хроматографической очистки.There is a method of stimulating FSH prolongation for inducing superovulation in donor cows (prototype - patent BY12490), which includes a single administration of the FSH-super preparation containing pituitary gonadotropins follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (FSH) into the luteal phase of the sexual cycle ), combined with a prolongator, followed by the administration of prostoglandin after 48 hours twice with an interval of 12 hours at doses of 500 and 250 μg / head for cloprostenol, which is a synthetic analogue of natural prost Glandin F2α. Animals are artificially inseminated twice with sperm from a proven bull 48 and 60 hours after the first injection of prostaglandin F2α. The extraction of embryos is carried out on the 7th day of the genital cycle. The resulting embryos are counted, assessed for their viability and suitability for embryo transfer. According to patent BY12490, a polyvinyl alcohol (PVA) powder polymer is used as a prolongator, which is diluted in physiological saline at a temperature of 50-60 ° C to a concentration of 12 percent suspension, which is cooled to 40-42 degrees and mixed in an amount of 5-7 ml with 50 mg of natural FSH. The resulting working solution is once administered subcutaneously to donor cows in the scapula region at 5-7 ml / head. All animal donors were treated with natural hormone preparation of the Russian production of the FSH-Super trademark according to its instructions (Internet site: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/, 2016). This preparation is pituitary gonadotropins containing FSH and LH, obtained from the front of the pituitary gland of pigs, and has an optimal ratio of FSH to LH for animals - 1000-1500 units. FSH / 1 unit LH. According to the manufacturer’s instructions, the drug acts prolongedly, remaining in the blood for 48-72 hours, and has high physiological activity at low doses and a single administration, due to the high degree of chromatographic purification.

Недостатком прототипа является низкая эффективность пролонгирующего действия поливинилового спирта на ФСГ, используемый в соответствии со способом-прототипом при индукции суперовуляции у коров-доноров в виде препарата торговой марки «ФСГ-супер». В этой связи, недостаточно индуцируется синхронный рост, созревание и овуляция множества фолликулов, что приводит к получению большого количества эмбрионов с дегенерированными формами развития на разных стадиях, неоплодотворенных яйцеклеток, и, как следствие, к недополучению качественных эмбрионов.The disadvantage of the prototype is the low effectiveness of the prolonged action of polyvinyl alcohol on FSH, used in accordance with the prototype method for the induction of superovulation in donor cows in the form of a drug brand "FSH-super." In this regard, synchronous growth, maturation and ovulation of many follicles is not sufficiently induced, which leads to the production of a large number of embryos with degenerated forms of development at different stages, unfertilized eggs, and, as a result, to the loss of quality embryos.

Кроме того, недостатком является сложность приготовления рабочего раствора, содержащего препарат «ФСГ-супер» с пролонгатором, из-за многоэтапности его приготовления, необходимости контроля температуры растворителя (физраствор), охлаждения полученной суспензии, в результате чего образуется гелеобразный, трудноинъекцируемый рабочий раствор.In addition, the disadvantage is the difficulty in preparing a working solution containing an FSH-super preparation with a prolongator, due to its multi-stage preparation, the need to control the temperature of the solvent (saline solution), and cooling the resulting suspension, which results in the formation of a gel-like, hard-injectable working solution.

Задачей изобретения является создание способа индукции суперовуляции у коров-доноров эмбрионов с пролонгированием действия гипофизарных гонадотропинов, позволяющего повысить количество синхронно созревших фолликулов с последующей их овуляцией и выходом качественных зрелых яйцеклеток, пригодных для оплодотворения, а после их оплодотворения - к повышению количества получаемых качественных эмбрионов, так как этот показатель является главным показателем эффективности проведения индукции суперовуляции у коров-доноров эмбрионов.The objective of the invention is to provide a method of inducing superovulation in donor cows of embryos with prolonging the action of pituitary gonadotropins, which allows to increase the number of synchronously ripened follicles with subsequent ovulation and the release of high-quality mature eggs suitable for fertilization, and after their fertilization - to increase the number of quality embryos obtained, since this indicator is the main indicator of the effectiveness of superovulation induction in embryo donor cows.

Техническим результатом изобретения является повышение количества качественных эмбрионов, полученных от коров-доноров в результате проведения индукции суперовуляции.The technical result of the invention is to increase the number of quality embryos obtained from donor cows as a result of superovulation induction.

Технический результат достигается тем, что способ индукции суперовуляции у коров-доноров эмбрионов с пролонгированием действия гипофизарных гонадотропинов включает однократное введение коровам-донорам в лютеиновую фазу полового цикла препарата, содержащего гипофизарные гонадотропины фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ), сочетанно с пролонгатором, с последующим введением через 48 часов простогландина F2α, в котором согласно изобретению, дополнительно вводят 0,25-1% раствор новокаина в количестве 3-15 мл, причем данный раствор новокаина вводят одномоментно в сочетании с препаратом, содержащим гипофизарные гонадотропины ФСГ и ЛГ, сочетанным с пролонгатором, при этом в качестве пролонгатора используют биологически деградируемый полимер полиэтиленгликоль (ПЭГ) с массой от 6000 до 70000 Да в количестве 0,5-7 г, а препарат, содержащий гипофизарные гонадотропины ФСГ и ЛГ, вводят в общей дозе, рекомендуемой инструкцией этого препарата для индукции суперовуляции.The technical result is achieved by the fact that the method of inducing superovulation in donor cows of embryos with prolonging the action of pituitary gonadotropins includes a single injection of a preparation containing pituitary gonadotropins follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) in the luteal phase of the sexual cycle of the drug, combined , followed by the introduction after 48 hours of prostaglandin F2α, in which according to the invention, an additional 0.25-1% solution of novocaine is added in an amount of 3-15 ml, moreover this novocaine solution is administered simultaneously in combination with a preparation containing pituitary gonadotropins FSH and LH combined with a prolongator, while the biologically degradable polymer polyethylene glycol (PEG) with a weight of from 6,000 to 70,000 Da in an amount of 0.5-7 g is used as a prolongator, and a drug containing pituitary gonadotropins FSH and LH is administered in a total dose recommended by the instructions for this drug to induce superovulation.

Патентуемый способ применяют как один из этапов при проведении технологии трансплантации эмбрионов у коров-доноров эмбрионов. У телки или коровы, отобранной в качестве донора эмбрионов, выявляют признаки половой охоты, которая может быть как естественной, так и вызванной искусственно посредством введения животному гормональных препаратов. Факт выявления признаков половой охоты, которая длится у самок крупного рогатого скота, в среднем, 12-24 часа (примечание: в данный период времени животное не подлежит осеменению), регистрируют как условно нулевой день полового цикла у донора, с которого начинают отсчет дней этого полового цикла. С 9-го по 12-й день полового цикла (в лютеиновую фазу), предпочтительно, на 10-й день, проводят индукцию суперовуляции у доноров согласно патентуемому способу.The patented method is used as one of the stages in carrying out the technology of embryo transplantation in embryo donor cows. In a heifer or a cow selected as an embryo donor, signs of sexual hunting are revealed, which can be either natural or artificially induced by administering hormonal preparations to the animal. The fact of revealing signs of sexual hunting, which lasts in female cattle, is on average 12-24 hours (note: an animal is not subject to insemination in a given period of time), is recorded as a conditionally zero day of the sexual cycle at the donor, from which the days of this sexual cycle. From the 9th to the 12th day of the sexual cycle (in the luteal phase), preferably on the 10th day, superovulation is induced in donors according to the patented method.

Однократное введение препарата, содержащего гипофизарные гонадотропины ФСГ и ЛГ (активные вещества), в сочетании с пролонгатором и с раствором новокаина, являющимися вспомогательными веществами, производят донору следующим образом. Непосредственно перед данным введением при комнатной температуре готовят рабочую смесь из указанных компонентов с учетом ветеринарно-санитарных требований и с учетом доз в соответствии с изобретением, при этом последовательность смешивания ингредиентов не принципиальна:A single administration of a drug containing pituitary gonadotropins FSH and LH (active substances), in combination with a prolongator and with a solution of novocaine, which are auxiliary substances, is carried out to the donor as follows. Immediately prior to this introduction at room temperature, a working mixture is prepared from these components taking into account veterinary and sanitary requirements and taking into account the doses in accordance with the invention, while the sequence of mixing the ingredients is not critical:

- препарат, содержащий гипофизарные гонадотропины фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ) в общей дозе, рекомендуемой инструкцией к применяемому препарату гипофизарных гонадотропинов, необходимой для индукции суперовуляции;- a preparation containing pituitary gonadotropins follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) in a total dose recommended by the instructions for the pituitary gonadotropin preparation used, necessary for the induction of superovulation;

- пролонгатор: биологически деградируемый полимер полиэтиленгликоль (ПЭГ) с высокомолекулярной массой от 6000 до 70000 Да - 0,5-7 г;- prolongator: biologically degradable polymer polyethylene glycol (PEG) with a high molecular weight of from 6000 to 70,000 Da - 0.5-7 g;

- 0,25-1% раствор новокаина - 3-15 мл.- 0.25-1% solution of novocaine - 3-15 ml.

В патентуемом способе применяют препараты, содержащие гипофизарные гонадотропины ФСГ и ЛГ, представленные на рынке ветеринарной Фарминдустрии, например, препарат российского производства «ФСГ-супер» (сайт Интернет: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/ 2016 г.), препарат Плюсет (Испания) (сайт Интернет: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/1568/, 2016 г.). В инструкциях по применению к данным препаратам для стимуляции полиовуляции у коров-доноров эмбрионов регламентированы дозы для многократного ежедневного введения с интервалом в 12 часов в течение 4-5 дней. Суммированное количество всех этих доз, указанных в инструкциях по применению для каждого из используемых препаратов, является, так называемой, «общей дозой» препарата, которую включают в вышеуказанную рабочую смесь. При этом, совокупность «общей дозы» препарата, содержащего гипофизарные гонадотропины ФСГ и ЛГ, и остальных компонентов рабочей смеси, которая подлежит однократному введению, способствует индуцированному физиологическому процессу роста и созреванию множества фолликулов в течение необходимого периода времени (4-5 дней).In the patented method, drugs containing pituitary gonadotropins FSH and LH are used, which are presented on the market of the veterinary Pharmaceutical industry, for example, a drug made in Russia, FSH-super (Internet site: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/ 2016 g.), the drug Pluset (Spain) (website: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/1568/, 2016). The instructions for use for these drugs to stimulate poliovulation in donor cows of embryos regulate the dose for repeated daily administration with an interval of 12 hours for 4-5 days. The cumulative amount of all these doses indicated in the instructions for use for each of the preparations used is the so-called “total dose” of the drug, which is included in the above working mixture. At the same time, the combination of the “total dose” of the drug containing pituitary gonadotropins FSH and LH, and the remaining components of the working mixture, which is to be administered once, contributes to the induced physiological process of growth and maturation of many follicles over the necessary period of time (4-5 days).

Полученную рабочую смесь в полном объеме однократно инъецируют животному либо в подкожную клетчатку, либо внутримышечно (в область лопатки, шеи, тазобедренной части и т.д.). Через 48 часов вводят один из препаратов-аналогов простогландина F2α (эстрофан, магэстрофан, броэстрофан и т.п.) в соответствии с инструкцией по применению. Простогландин F2α способствует рассасыванию желтого тела и индукции половой охоты, которая наступает через 48-72 часов после введения простогландина F2α. На этом процедура проведения индукции суперовуляции согласно патентуемому способу является завершенной. В итоге, биологическая доступность и терапевтический эффект активных веществ ФСГ и ЛГ сохраняется в течение периода времени, который составляет 4-5 дней (96-120 часов) и соответствует общепринятым временным параметрам, достаточным для синхронного созревания полноценных яйцеклеток, которые в последующем способны оплодотвориться и развиться до качественных эмбрионов.The resulting working mixture in full is injected once into the animal either into the subcutaneous tissue or intramuscularly (in the area of the scapula, neck, hip, etc.). After 48 hours, one of the analogues of prostoglandin F2α (estrofan, magestrofan, broestrofan, etc.) is administered in accordance with the instructions for use. Prostoglandin F2α promotes resorption of the corpus luteum and induction of sexual hunting, which occurs 48-72 hours after administration of prostaglandin F2α. On this, the procedure for inducing superovulation according to the patented method is completed. As a result, the bioavailability and therapeutic effect of the active substances FSH and LH is maintained for a period of time that is 4-5 days (96-120 hours) and corresponds to generally accepted time parameters sufficient for the simultaneous maturation of full-fledged eggs, which subsequently are able to fertilize and evolve to quality embryos.

Для того, чтобы получить качественные эмбрионы, через 48-72 часов после введения простогландина F2α, т.е. после завершения патентуемого способа, проводят следующий этап при выполнении технологии трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота, который заключается в проведении процедур по осеменению коров-доноров эмбрионов. Осеменение проводят согласно общепринятым технологиям искусственного либо естественного осеменения коров-доноров эмбрионов. На 7-й день после осеменения у донора проводят ректальное либо ультразвуковое обследование яичников на наличие и количество желтых тел, что условно считается идентичным числу созревших и овулировавших фолликулов. При положительной реакции яичников, т.е. при наличии от 3-х и более желтых тел на одном или двух яичниках проводят извлечение (вымывание) эмбрионов. Полученные в процессе вымывания эмбрионы подвергают подсчету, оценке их жизнеспособности и пригодности к эмбриопересадкам, при этом, количество качественных эмбрионов является основным показателем эффективности патентуемого способа индукции суперовуляции у коров-доноров эмбрионов.In order to obtain high-quality embryos, 48-72 hours after the administration of prostoglandin F2α, i.e. after completion of the patented method, the next step is carried out when performing technology of transplantation of embryos in cattle, which consists in carrying out procedures for insemination of donor cows of embryos. Insemination is carried out according to generally accepted technologies for artificial or natural insemination of embryo donor cows. On the 7th day after insemination, a rectal or ultrasound examination of the ovaries for the presence and number of corpus luteum is performed at the donor, which is conditionally considered identical to the number of mature and ovulated follicles. With a positive reaction of the ovaries, i.e. in the presence of 3 or more yellow bodies on one or two ovaries, the embryos are extracted (washed out). The embryos obtained during leaching are counted, assessed for their viability and suitability for embryo transfer, while the number of high-quality embryos is the main indicator of the effectiveness of the patented method of inducing superovulation in embryo donor cows.

В таблице приведены показатели эффективности применения патентуемого способа по сравнению с прототипом. При этом, были сформированы 5 групп животных, состоящих из коров и телок молочного направления продуктивности. Все группы формировались по принципу пар-аналогов. Первая группа животных была обработана в соответствии со способом-прототипом (контрольная), а в группах 2-5 была проведена индукция суперовуляции в соответствии с патентуемым способом. В группах 2 и 3 применяли препарат российского производства «ФСГ-супер» (сайт Интернет: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/ 2016 г.), а в группах 4 и 5 - препарат Плюсет (Испания) (сайт Интернет: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/1568/, 2016 г.). При этом, для объективного выявления эффективности пролонгатора ПЭГ, доноры в группах 2 и 4 были обработаны рабочей смесью без новокаина, а в группах - 3 и 5 рабочая смесь использовалась с новокаином.The table shows the performance indicators of the patented method in comparison with the prototype. At the same time, 5 groups of animals were formed, consisting of cows and heifers of the milk direction of productivity. All groups were formed on the basis of pairs-analogues. The first group of animals was processed in accordance with the prototype method (control), and in groups 2-5, superovulation was induced in accordance with the patented method. In groups 2 and 3, the drug was used in Russia, produced by FSH-super (website: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/ 2016), and in groups 4 and 5, the drug was used Plus (Spain ) (Internet site: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/1568/, 2016). Moreover, to objectively identify the effectiveness of the PEG prolongator, donors in groups 2 and 4 were treated with the working mixture without novocaine, and in groups 3 and 5 the working mixture was used with novocaine.

Как видно из таблицы, на основании полученных нами результатов исследований можно сделать вывод о том, что введение препарата, содержащего гипофизарные гонадотропины ФСГ и ЛГ, пролонгатора ПЭГ с молекулярной массой от 6000 до 70000 Да и 0,25-1% раствора новокаина, используемых в рабочей смеси с однократным введением донорам в лютеиновую фазу полового цикла, обеспечивает синергический эффект, приводящий к повышению количества качественных эмбрионов.As can be seen from the table, based on our research results, we can conclude that the introduction of a drug containing pituitary gonadotropins FSH and LH, a PEG prolongator with a molecular weight of from 6000 to 70,000 Da and 0.25-1% novocaine solution used in working mixture with a single introduction to donors in the luteal phase of the reproductive cycle, provides a synergistic effect, leading to an increase in the number of quality embryos.

ПЭГ с молекулярной массой от 6000 до 70000 Да в дозе 0,5-7 г способствует наиболее эффективному достижению технического результата - повышению количества качественных эмбрионов. Нами была исследована эффективность пролонгирующего действия ПЭГ с молекулярной массой от 6000 до 70000 Да, оказываемого на ФСГ в организме животного, при введении этого полиэтиленгликоля в смеси с препаратом, содержащим ФСГ и ЛГ, в соответствии с патентуемым способом, но без использования раствора новокаина во 2-й и 4-й группах, в которых численность животных составляла по 20 голов (см. таблицу). Было выявлено, что ПЭГ с молекулярной массой от 6000 до 70000 Да как пролонгатор ФСГ, демонстрирует хорошие результаты по количеству полученных качественных эмбрионов, в среднем, на одного донора, по сравнению с прототипом (см. таблицу, столбцы 2, 3 и 5).PEG with a molecular weight of 6000 to 70,000 Da in a dose of 0.5-7 g contributes to the most effective achievement of the technical result - an increase in the number of quality embryos. We have studied the effectiveness of the prolonged action of PEG with a molecular weight of from 6,000 to 70,000 Da, exerted on FSH in the animal’s body, with the introduction of this polyethylene glycol in a mixture with a drug containing FSH and LH, in accordance with the patented method, but without the use of novocaine solution in 2 groups 4 and 4, in which the number of animals was 20 animals each (see table). It was found that PEG with a molecular weight of from 6,000 to 70,000 Da as an FSH prolongator shows good results in the number of high-quality embryos obtained, on average, per donor, compared with the prototype (see table, columns 2, 3 and 5).

Полиэтиленгликоль с молекулярной массой менее 6000 Да при его использовании в качестве пролонгатора ФСГ, в организме животного не оказывает необходимого пролонгирующего действия не только у коров крупных пород (голштинская, айрширская, аббердин-ангусская, герефордская и т.д.), но и у коров мелких пород (джерсейская и т.д.). Молекулярная масса ПЭГ более 70000 Да приводит к очень долгому высвобождению ФСГ, при этом, введенное количество ФСГ не успевает высвободиться в течение того промежутка времени, который необходим для полного созревания фолликулов с образованием полноценных качественных яйцеклеток (4-5 дней), и, кроме того, не достигается уровень концентрации ФСГ в организме животного, достаточный для стимулирования яичников при проведении индукции суперовуляции. Даже у высокопродуктивных животных с завышенной скоростью метаболизма введение ПЭГ с молекулярной массой более 70000 Да приводит к морфо-функциональным нарушениям яичников со снижением их активности, и, как следствие, к нарушению воспроизводительной функции у животного с образованием различного рода патологий в репродуктивных органах, приводящих к вынужденной выбраковке животных.Polyethylene glycol with a molecular weight of less than 6000 Da when used as a FSH prolongator, in the animal’s body does not have the necessary prolonging effect not only in large breed cows (Holstein, Ayrshire, Abberdeen-Angus, Hereford, etc.), but also in cows small breeds (Jersey, etc.). A PEG molecular weight of more than 70,000 Da leads to a very long release of FSH, while the amount of FSH administered does not have time to be released during the period of time necessary for the complete maturation of follicles with the formation of full-fledged high-quality eggs (4-5 days), and, in addition , the level of FSH concentration in the animal organism is not reached, sufficient to stimulate the ovaries during the induction of superovulation. Even in highly productive animals with an overestimated metabolic rate, the introduction of PEG with a molecular weight of more than 70,000 Da leads to morpho-functional disorders of the ovaries with a decrease in their activity, and, as a result, to a violation of the reproductive function in the animal with the formation of various pathologies in the reproductive organs, leading to forced culling of animals.

Количество вводимого ПЭГ с молекулярной массой от 6000 до 70000 Да в дозе 0,5-7 г способствует наиболее эффективному достижению технического результата - повышению количества качественных эмбрионов. Это объясняется тем, что введение указанного ПЭГ в количестве менее 0,5 г приводит к снижению активности и пролонгирующего свойства ПЭГ, при этом он не удерживает необходимый уровень ФСГ в тот период времени, в течение которого проводится индукция суперовуляции в соответствии с патентуемым способом. Данное снижение эффективности действия ПЭГ приводит к преждевременному высвобождению ФСГ в организме животного и к дегенерации и атрезии образовавшихся фолликулов. Введение указанного полиэтиленгликоля в количестве более 7 г приводит к превышению времени, необходимого для высвобождения ФСГ, к отсутствию овуляции образовавшихся фолликулов и их последующему росту с образованием поликистозов яичников в тот период времени, в течение которого проводится индукция суперовуляции в соответствии с патентуемым способом.The amount of introduced PEG with a molecular weight of from 6000 to 70,000 Da in a dose of 0.5-7 g contributes to the most effective achievement of the technical result - to increase the number of quality embryos. This is because the introduction of the indicated PEG in an amount of less than 0.5 g leads to a decrease in the activity and prolonging properties of PEG, while it does not retain the required level of FSH during the period of time during which superovulation is induced in accordance with the patented method. This decrease in the effectiveness of PEG leads to premature release of FSH in the animal body and to degeneration and atresia of the formed follicles. The introduction of the specified polyethylene glycol in an amount of more than 7 g leads to an excess of the time required for the release of FSH, to the absence of ovulation of the formed follicles and their subsequent growth with the formation of polycystic ovaries in the period during which superovulation is induced in accordance with the patented method.

Раствор новокаина, согласно патентуемому способу, дополнительно введенный в организм коровы-донора одномоментно в сочетании с препаратом, содержащим ФСГ и ЛГ, и с пролонгатором ПЭГ с молекулярной массой от 6000 до 70000 Да, в свою очередь, также способствует достижению технического результата - повышению количества качественных эмбрионов. Результаты исследований показали, что в количественном и процентном соотношении показатели полученных качественных эмбрионов, в среднем, на одного донора, в группах 3 и 5 (таблица, столбцы 4 и 6) превышают аналогичные показатели по сравнению с группой 1 (прототип) (таблица, столбец 2), а также по сравнению с группами животных 2 и 4 (таблица, столбцы 3 и 5). Холинолитические свойства новокаина позволяют купировать негативные явления, которые возникают вследствие инъекции экзогенных веществ (в патентуемом способе - инъецирование смеси, состоящей из новокаина, препарата, содержащего ФСГ и ЛГ, и ПЭГ) и выражаются в виде спазма гладкой мускулатуры и периферических сосудов, возникающего в месте инъецирования и ограничивающего биодоступность введеной смеси веществ. Новокаин позволяет улучшить кровоснабжение в месте инъецирования, оказывая дилятационное действие как на артериолы и венулы, так и на лимфатические капилляры. В этой связи, элиминация возможных вазоспазмов периферических сосудов и спазма гладкой мускулатуры в месте инъекции позволяет осуществить непрерывную доставку гонадотропинов из интерсициального пространства подкожной клетчатки, обеспечивая биодоступность и терапевтический эффект гонадотропинов. Таким образом, новокаин, воздействуя не только на кровеносную систему, но и на лимфатическую, оказывает триггерное влияние, позволяющее одномоментно побудить и усилить синхронный физиологический рост множества фолликулов, для которых первые 5-12 часов от момента введения смеси являются «подготовительным периодом» для последующего воздействия на них более высоких доз ФСГ и ЛГ, концентрация которых в крови увеличивается с уменьшением действия новокаина. В результате этого, уровень концентрации ФСГ и ЛГ, достаточный для синхронного созревания «подготовленных ранее» (в первые 5-12 часов от момента введения смеси) множества фолликулов достигается через 36-48 часов от момента введения смеси, и удерживается примерно на том же уровне до 96 часов от момента введения смеси.The solution of novocaine, according to the patented method, additionally introduced into the body of the donor cow simultaneously in combination with a preparation containing FSH and LH, and with a PEG prolongator with a molecular weight of from 6,000 to 70,000 Da, in turn, also helps to achieve a technical result - an increase in the number quality embryos. The results of the studies showed that in the quantitative and percentage ratio the indicators of the obtained quality embryos, on average, per donor, in groups 3 and 5 (table, columns 4 and 6) exceed the same indicators as compared to group 1 (prototype) (table, column 2), as well as compared with animal groups 2 and 4 (table, columns 3 and 5). The anticholinergic properties of novocaine make it possible to stop the negative effects that arise as a result of injection of exogenous substances (in the patented method, injection of a mixture consisting of novocaine, a preparation containing FSH and LH, and PEG) and are expressed as a spasm of smooth muscles and peripheral vessels arising in place injection and restricting the bioavailability of the introduced mixture of substances. Novocaine can improve blood circulation at the injection site, exerting a dilatational effect on both arterioles and venules, and on lymphatic capillaries. In this regard, the elimination of possible vasospasms of peripheral vessels and spasm of smooth muscles at the injection site allows for the continuous delivery of gonadotropins from the intercial space of the subcutaneous tissue, providing bioavailability and therapeutic effect of gonadotropins. Thus, novocaine, acting not only on the circulatory system, but also on the lymphatic system, exerts a trigger effect, which allows to simultaneously induce and enhance the synchronous physiological growth of many follicles, for which the first 5-12 hours from the moment of the mixture is the “preparatory period” for the subsequent exposure to higher doses of FSH and LH, the concentration of which in the blood increases with a decrease in the effects of novocaine. As a result of this, the level of FSH and LH concentration sufficient for the simultaneous maturation of the “prepared earlier” (in the first 5-12 hours from the moment of mixture injection) many follicles is reached after 36-48 hours from the moment of mixture injection and remains at approximately the same level up to 96 hours from the moment of introduction of the mixture.

Введение раствора новокаина в процентном выражении в диапазоне 0,25-1% обеспечивает наиболее эффективную нарастающую волну высвобождения ФСГ/ЛГ/ПЭГ в организме животного. При введении раствора новокаина в концентрации менее 0,25%, новокаин выполняет функцию обычного растворителя и не оказывает замедляющего свойства высвобождения сочетанных с ним ФСГ/ЛГ/ПЭГ. При введении раствора новокаина в концентрации более 1% замедляется местное кровоснабжение в точке инъецирования, снижается степень всасываемости ФСГ/ЛГ/ПЭГ, при этом новокаин выполняет функцию только анестетика, и не позволяет в полной мере высвобождать ФСГ/ЛГ/ПЭГ, что приводит к недостатку уровня фолликулостимулирующего гормона в сыворотке крови и прерыванию роста фолликулов. При смешивании 0,25-1% раствора новокаина в дозе менее 5 мл с ФСГ/ЛГ/ПЭГ происходит частичная связка между указанными ингредиентами, и после введения в организм животного распределение ФСГ/ЛГ/ПЭГ будет непропорциональным, и уровень ФСГ будет колебаться. Это приводит к нестабильной реакции яичников с низким выходом качественных яйцеклеток при овуляции. При смешивании 0,25-1% раствора новокаина в дозе более 15 мл с ФСГ/ЛГ/ПЭГ консистенция смеси становится настолько жидкой, что после введения смеси она распределяется в месте инъецирования, увеличивая площадь всасываемости, и дает обратный результат, снижая эффективность пролонгирующего действия ПЭГ, и ФСГ и ЛГ всасываются гораздо быстрее (в течение 2-3 суток) от необходимого времени, достаточного для полноценного процесса суперовуляции (4-5 дней).The introduction of a solution of novocaine in percentage terms in the range of 0.25-1% provides the most effective growing wave of FSH / LH / PEG release in the animal's body. With the introduction of a solution of novocaine in a concentration of less than 0.25%, novocaine performs the function of a conventional solvent and does not have a retarding effect on the release of FSH / LH / PEG combined with it. With the introduction of a novocaine solution in a concentration of more than 1%, local blood supply at the injection point slows down, the degree of absorption of FSH / LH / PEG decreases, while novocaine acts only as an anesthetic, and it does not fully release FSH / LH / PEG, which leads to a lack of serum follicle-stimulating hormone levels and interruption of follicular growth. When a 0.25-1% solution of novocaine in a dose of less than 5 ml is mixed with FSH / LH / PEG, a partial ligament occurs between these ingredients, and after administration to the animal, the distribution of FSH / LH / PEG will be disproportionate and the level of FSH will fluctuate. This leads to an unstable ovarian reaction with a low yield of quality eggs during ovulation. When mixing a 0.25-1% solution of novocaine in a dose of more than 15 ml with FSH / LH / PEG, the consistency of the mixture becomes so liquid that after the mixture is introduced, it is distributed at the injection site, increasing the absorption area, and gives the opposite result, reducing the effectiveness of the prolonged action PEG, and FSH and LH are absorbed much faster (within 2-3 days) from the necessary time, sufficient for a full process of superovulation (4-5 days).

Пример 1. Телке-донору эмбрионов джерсейской породы №14573, возраст 13 месяцев, провели индукцию суперовуляции в соответствии с патентуемым способом, при этом на 10-й день полового цикла (в лютеиновую фазу) однократно подкожно вводили смесь, которая была приготовлена непосредственно перед введением путем смешивания следующих ингредиентов и их соотношений: препарат «ФСГ-супер» в общей дозе, рекомендуемой инструкцией этого препарата для индукции суперовуляци, полиэтиленгликоль (ПЭГ) с молекулярной массой 6000 Да - 0,5 г, 0,25% раствор новокаина - 3 мл. На 7-й день после процедуры искусственного осеменения провели извлечение эмбрионов. Было получено 13 зародышей, из которых 9 штук были качественными и пригодными к трансплантации или к криоконсервации, при этом 7 из них находились на стадии развития бластоцисты и 2 - на стадии морулы. Также были вымыты 4 неоплодотворенные яйцеклетки.Example 1. The donor calf of the Jersey breed embryos No. 14573, 13 months old, superovulation was induced in accordance with the patented method, and on the 10th day of the sexual cycle (luteal phase), the mixture was prepared subcutaneously, which was prepared immediately before administration by mixing the following ingredients and their ratios: FSH-super preparation in the total dose recommended by the instructions for this drug for inducing superovulation, polyethylene glycol (PEG) with a molecular weight of 6000 Da - 0.5 g, 0.25% novocaine solution - 3 ml . On the 7th day after the artificial insemination procedure, embryos were extracted. 13 embryos were obtained, of which 9 were qualitative and suitable for transplantation or cryopreservation, while 7 of them were at the blastocyst development stage and 2 at the morula stage. 4 unfertilized eggs were also washed.

Пример 2. Корове-донору эмбрионов черно-пестрой породы №85343, возраст 5 лет, провели индукцию суперовуляции в соответствии с патентуемым способом, при этом на 10-й день полового цикла (в лютеиновую фазу) однократно подкожно вводили смесь, которая была приготовлена непосредственно перед введением путем смешивания следующих ингредиентов и их соотношений: препарат «ФСГ-супер» в общей дозе, рекомендуемой инструкцией этого препарата для индукции суперовуляции, ПЭГ с молекулярной массой 40000 Да - 4,5 г, 0,5%, раствор новокаина - 10 мл. На 7-й день после процедуры искусственного осеменения провели извлечение эмбрионов. При этом, было получено 19 зародышей, из которых 13 штук были качественными и пригодными к трансплантации или к криоконсервации, при этом, 1 эмбрион находился на стадии развития экспондированной бластоцисты, 7 находились на стадии развития бластоцисты и 5 - на стадии морулы. Также были вымыты 3 непригодных эмбриона с остановкой развития и 2 неоплодотворенные яйцеклетки.Example 2. To a donor cow of black and white embryo breed No. 85343, age 5 years old, superovulation was induced in accordance with the patented method, and on the 10th day of the reproductive cycle (into the luteal phase) a mixture was injected subcutaneously, which was prepared directly before administration by mixing the following ingredients and their ratios: FSH-super preparation in the total dose recommended by the instructions for this drug to induce superovulation, PEG with a molecular weight of 40,000 Da - 4.5 g, 0.5%, novocaine solution - 10 ml . On the 7th day after the artificial insemination procedure, embryos were extracted. At the same time, 19 embryos were obtained, 13 of which were of high quality and suitable for transplantation or cryopreservation, while 1 embryo was at the developmental stage of the expended blastocyst, 7 were at the developmental stage of the blastocyst and 5 were at the morula stage. Also, 3 unusable embryos with developmental arrest and 2 unfertilized eggs were washed.

Пример 3. Корове-донору эмбрионов айрширской породы №1714, возраст 7 лет, провели индукцию суперовуляции в соответствии с патентуемым способом, при этом на 10-й день полового цикла (в лютеиновую фазу) однократно подкожно вводили смесь, которая была приготовлена непосредственно перед введением путем смешивания следующих ингредиентов и их соотношений: препарат «Плюсет» в общей дозе, рекомендуемой инструкцией этого препарата для индукции суперовуляции, ПЭГ с молекулярной массой 70000 Да - 7 г, 1%, раствор новокаина - 15 мл. На 7-й день после процедуры искусственного осеменения провели извлечение эмбрионов. При этом, было получено 21 зародышей, из которых 15 штук были качественными и пригодными к трансплантации или к криоконсервации, при этом, 3 эмбриона находились на стадии развития экспондированной бластоцисты, 9 - на стадии развития бластоциста и 3 - на стадии морулы. Также были вымыты 5 непригодных эмбрионов с остановкой развития на стадии 4-16 бластомеров и 1 неоплодотворенная яйцеклетка.Example 3. The donor cow of the Ayrshire breed embryos No. 1714, age 7 years old, induced superovulation in accordance with the patented method, while on the 10th day of the reproductive cycle (into the luteal phase), the mixture was prepared subcutaneously, which was prepared immediately before administration by mixing the following ingredients and their ratios: the drug "Pluset" in the total dose recommended by the instruction of this drug for the induction of superovulation, PEG with a molecular weight of 70,000 Da - 7 g, 1%, novocaine solution - 15 ml. On the 7th day after the artificial insemination procedure, embryos were extracted. At the same time, 21 embryos were obtained, of which 15 were of high quality and suitable for transplantation or cryopreservation, while 3 embryos were at the developmental stage of the expended blastocyst, 9 at the developmental stage of the blastocyst and 3 at the morula stage. Also, 5 unusable embryos with developmental arrest at the stage of 4–16 blastomeres and 1 unfertilized egg were washed.

Claims

A method of inducing superovulation in donor cows of embryos with prolonging the action of pituitary gonadotropins, including a single administration of a preparation containing pituitary gonadotropins follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH), combined with a prolongator, to the luteal phase of the sexual cycle of the drug 48 hours of prostoglandin F2α, characterized in that an additional 0.25-1% solution of novocaine is added in an amount of 3-15 ml, and this novocaine solution is administered simultaneously in etany with a drug containing pituitary gonadotropins FSH and LH combined with a prolongator, while the biologically degradable polymer polyethylene glycol (PEG) with a weight of 6,000 to 70,000 Da in an amount of 0.5-7 g is used as a prolongator, and a drug containing pituitary gonadotropins FSH and LH are administered in the total dose recommended by the instructions for this drug to induce superovulation.