RU2612024C1 - Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре гестации - Google Patents
Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре гестации Download PDFInfo
- Publication number
- RU2612024C1 RU2612024C1 RU2015157071A RU2015157071A RU2612024C1 RU 2612024 C1 RU2612024 C1 RU 2612024C1 RU 2015157071 A RU2015157071 A RU 2015157071A RU 2015157071 A RU2015157071 A RU 2015157071A RU 2612024 C1 RU2612024 C1 RU 2612024C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dehydrocholesterol
- content
- syncytiotrophoblast
- trimester
- gestation
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования фетоплацентарной недостаточности при оценке индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидроксихолестерина на третьем триместре гестации. Для этого при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, выполняют гистохимическую реакцию на 7-дегидроксихолестериндегидрогеназу, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, уменьшении содержания 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты до 29,3±2,79 пикселей/мкм2 создается угроза формирования фетоплацентарной недостаточности. Способ позволяет оценить угрозу формирования фетоплацентарной недостаточности при простоте его исполнения. 2 ил.
Description
1. Цель изобретения - оценить характер влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре гестации, что приводит к угрозе формирования фетоплацентарной недостаточности.
2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа определения содержания 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре беременности.
3. Раскрытие изобретения
В период беременности синцитиотрофобласт плаценты становится источником синтеза холестерина, из которого образуются стероидные гормоны, оказывающие незаменимое влияние на формирование тканевого гистогенеза плода и в случае их недостатка возникают нарушения в фетоплацентарной системе [1, 5]. Ключевыми этапами синтеза холестерина принято считать образование мевалоната, сквалена и 7-дегидрохолестерина. 7-дегидрохолестерин является прямым предшественником холестерина [4]. Уменьшение количества прекурсоров на этапах образования стероида прогнозируемо приводит к снижению содержания стероидных гормонов, оказывающих влияние на формирование фетоплацентарной системы [3, 5].
4. В доступной литературе исследователи не касались изучения синтеза холестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты и роли в этом процессе 7-дегидрохолестерина, а также влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидрохолестерина в плаценте. Содержание 7-дегидрохолестерина выявляют методом газовой хроматографии с применением пламенно-ионизационного детектора в плазме крови [6]; методом с использованием в качестве меченого стабильного индикатора - дейтерия и проведением высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием масс-спектрометрии в различных тканях человека [7, 8]. Недостатком вышеупомянутых методов является длительное время анализа, необходимость дорогостоящей специальной аппаратуры и реактивов, а также трудоемкость выполнения исследования. Кроме этого, биохимические методы не дают представления о месте локализации искомого вещества.
В отличие от вышеприведенных прототипов в данной работе имеются существенные отличия: 1. Анализ содержания 7-дегидрохолестерина проводится с помощью гистохимической реакции с последующим цитофотометрическим измерением, позволяющим определять содержание продукта реакции в синцитиотрофобласте в пикселях/мкм2. 2. Изменения содержания 7-дегидрохолестерина в плаценте происходят под влиянием обострения цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности.
5. Новая техническая задача
Разработать гистохимический метод определения содержания 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты и показать влияние обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации на его синтез.
6. Осуществление изобретения
6.1. Обследованы 37 беременных женщин 18-25 лет с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, контрольную группу составили 30 беременных женщин с хронической цитомегаловирусной инфекцией в латентной стадии. У беременных женщин симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз (обострение хронической цитомегаловирусной инфекции) устанавливается по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), JgM или увеличение титра антител JgG в парных сыворотках (в 4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводят с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.
6.2. Верификацию ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществляют методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), ДНК ЦМВ выявляют методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
6.3. Содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты определяли путем реакции на 7-дегидрохолестериндегидрогеназу на криостатных срезах свежезамороженной нефиксированной ткани следующим методом. Метод основан на восстановлении соли тетразолия в формазан электронами, акцептируемыми от субстрата через кофермент НАДФ [2]. Субстратом служит 2 мМ раствор 7-дегидрохолестерина «SERVA» (Германия). Для его приготовления 6 мг 7-дегидрохолестерина растворяют в 10 мл N,N-диметилформамида. Инкубационный раствор готовится на основе 0,1М фосфатного буфера рН 7,2-7,4 с добавлением нитросинего тетразолия фирмы «ICN Biomedicals)) (США) в конечной концентрации 5 мМ, НАДФ+ фирмы «Applichem» (Германия) - 1 мМ.
Состав инкубационной среды:
| 0,1 М фосфатный буфер рН 7,2-7,4 | 1 мл |
| нитросиний тетразолий | 1 мг |
| НАДФ+ | 1 мг |
| 2 мМ раствор 7-дегидрохолестерина | 0,1 мл |
В 1 мл инкубационного раствора помещают свежеприготовленные срезы ткани. Инкубацию проводят при 37°С в течение 30 мин. По окончании инкубации срезы промывают дистиллированной водой, фиксируют в 10%-ном нейтральном формалине при комнатной температуре, вновь промывают дистиллированной водой, подсушивают и заключают в глицерин-желатин. Контрольные срезы инкубировали в среде, содержащей вместо раствора 7-дегидрохолестерина адекватное количество фосфатного буфера. Полученные гистологические препараты изучают цитофотометрическим компьютерным методом с помощью программы Scion (США) на цифровом микроскопе (Япония).
6.4. Статистический анализ и обработка данных проводится с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений М±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном уровне 95% и числе степеней свободы F=n1+n2-2. Для определения достоверности различий используется непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимаются во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений - непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни.
7. Полученные данные
В процессе исследования получены следующие результаты. На гистохимически выполненных препаратах плаценты беременных, перенесших обострение хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, при регистрации роста титра антител класса G к цитомегаловирусу до 1:1600 отмечается снижение активности реакции, отражающей содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты до 29,3±2,79 пикселей/мкм2 (фиг. 1). В контроле интенсивность гистохимической реакции на 7-дегидрохолестериндегидрогеназу составила 41,2±3,12 пикселей/мкм2 (фиг. 2).
Таким образом, обострение цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации при нарастании титра антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600 приводит к уменьшению содержания 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, что снижает синтез плацентарных стероидных гормонов и создает угрозу формирования фетоплацентарной недостаточности.
8. Литература
1. Баграмян Э.Р., Голубев В.П., Соколова З.П. Значение гормональных исследований в диагностике фето-плацентарной недостаточности // Акушерство и гинекология. 1984. №10. С. 3-6.
2. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы: пер. с англ. - М.: Мир, 1982. 272 с.
3. Пустотина О.А. Плацентарная недостаточность и угроза прерывания беременности - обоснование применения препаратов прогестерона // Российский вестник акушера-гинеколога. 2006. №2. С. 51-54.
4. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. и др. Основы биохимии: В 3 т. - М.: Мир, 1981. Т. 2. 617 с.
5. Albrecht E.D., Рере G.J. Central integrative role of oestrogen in modulating the communication between the placenta and fetus that results in primate fetal-placental development // Placenta. 1999. Vol. 20, Is. 2. P. 129-139.
6. Gelzo M., Clericuzio S., Barone R., D’Apolito O., Dello Russo A., Corso G. A routine method for cholesterol and 7-dehydrocholesterol analysis in dried blood spot by GC-FID to diagnose the Smith-Lemli-Opitz syndrome // J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 2012. Vol. 907 / P. 154-158.
7. Liu W., Xu L., Lamberson C., Haas D., Korade Z., Porter N.A. A highly sensitive method for analysis of 7-dehydrocholesterol for the study of Smith-Lemli-Opitz syndrome. J Lipid Res. // 2014. Vol. 55, №2. P. 329-337.
8. Liu W., Xu L., Lamberson C.R., Merkens L.S., Steiner R.D., Elias E.R., Haas D., Porter N.A. Assays of plasma dehydrocholesteryl esters and oxysterols from Smith-Lemli-Opitz syndrome patients // J. Lipid. Res. 2013. Vol. 54, №1. P. 244-253.
Claims (1)
- Способ оценки угрозы формирования фетоплацентарной недостаточности при оценке индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидроксихолестерина на третьем триместре гестации, включающий определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, выполнение гистохимической реакции на 7-дегидрохолестериндегидрогеназу, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, уменьшении содержания 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты до 29,3±2,79 пикселей/мкм2 создается угроза формирования фетоплацентарной недостаточности.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015157071A RU2612024C1 (ru) | 2015-12-29 | 2015-12-29 | Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре гестации |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015157071A RU2612024C1 (ru) | 2015-12-29 | 2015-12-29 | Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре гестации |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2612024C1 true RU2612024C1 (ru) | 2017-03-01 |
Family
ID=58459168
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015157071A RU2612024C1 (ru) | 2015-12-29 | 2015-12-29 | Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре гестации |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2612024C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112691094A (zh) * | 2019-10-22 | 2021-04-23 | 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心 | 防治病毒的新型化合物及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2306564C1 (ru) * | 2006-05-10 | 2007-09-20 | ГОУ ВПО "Красноярская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ диагностики хронической фетоплацентарной недостаточности |
| US20080096795A1 (en) * | 1997-05-13 | 2008-04-24 | The Regents Of The University Of California | Novel Antiangiogenic Peptide Agents and Their Therapeutic and Diagnostic Use |
-
2015
- 2015-12-29 RU RU2015157071A patent/RU2612024C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080096795A1 (en) * | 1997-05-13 | 2008-04-24 | The Regents Of The University Of California | Novel Antiangiogenic Peptide Agents and Their Therapeutic and Diagnostic Use |
| RU2306564C1 (ru) * | 2006-05-10 | 2007-09-20 | ГОУ ВПО "Красноярская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ диагностики хронической фетоплацентарной недостаточности |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| КAMILOVA N et al. Diagnostic indices of fetoplacental complex in pregnancy assessment of women with genital infections// Georgian Med News. 2008 Nov;(164):23-7. * |
| ЛУЦЕНКО М.Т. "Цитомегаловирусная инфекция"// Бюллетень физиологии и патологии дыхания, выпуск 44, 2012, с.131-136. * |
| ЛУЦЕНКО М.Т. "Цитомегаловирусная инфекция"// Бюллетень физиологии и патологии дыхания, выпуск 44, 2012, с.131-136. КAMILOVA N et al. Diagnostic indices of fetoplacental complex in pregnancy assessment of women with genital infections// Georgian Med News. 2008 Nov;(164):23-7. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112691094A (zh) * | 2019-10-22 | 2021-04-23 | 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心 | 防治病毒的新型化合物及其应用 |
| CN112691094B (zh) * | 2019-10-22 | 2022-09-23 | 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心 | 防治病毒的新型化合物及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cosma et al. | Coronavirus disease 2019 and first-trimester spontaneous abortion: a case-control study of 225 pregnant patients | |
| Sathyanarayana et al. | Phthalate exposure and reproductive hormone concentrations in pregnancy | |
| Mandò et al. | Placental mitochondrial content and function in intrauterine growth restriction and preeclampsia | |
| Masumoto et al. | Comparison of serum cortisol concentrations in preterm infants with or without late-onset circulatory collapse due to adrenal insufficiency of prematurity | |
| Schuster et al. | Down-regulation of progesterone receptor membrane component 1 (PGRMC1) in peripheral nucleated blood cells associated with premature ovarian failure (POF) and polycystic ovary syndrome (PCOS) | |
| Velthut et al. | Elevated blood plasma antioxidant status is favourable for achieving IVF/ICSI pregnancy | |
| McKINNON et al. | Comparison of ovarian cancer markers in endometriosis favours HE4 over CA125 | |
| Kolanska et al. | Mild COVID-19 infection does not alter the ovarian reserve in women treated with ART | |
| Shao et al. | Effect of histone deacetylase HDAC3 on cytokines IL-18, IL-12 and TNF-α in patients with intrahepatic cholestasis of pregnancy | |
| Chen et al. | Increased expression of the adult stem cell marker Musashi-1 in the ectopic endometrium of adenomyosis does not correlate with serum estradiol and progesterone levels | |
| Saftlas et al. | Influence of a loop electrosurgical excision procedure (LEEP) on levels of cytokines in cervical secretions | |
| Liu et al. | The application of a novel nanovolume capillary electrophoresis-based protein analysis system in personalized & translational medicine research | |
| RU2612024C1 (ru) | Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре гестации | |
| Fatih et al. | Histopathological examination of the placenta after delivery in pregnant women with COVID-19 | |
| Bergström et al. | Variations in biomarkers of dyslipidemia and dysbiosis during the menstrual cycle: a pilot study in healthy volunteers | |
| Matson et al. | Elevated levels of adrenomedullin in eutopic endometrium and plasma from women with endometriosis | |
| To et al. | Osteoprotegerin in sputum is a potential biomarker in COPD | |
| Rapacz-Leonard et al. | The oxytocin-prostaglandins pathways in the horse (Equus caballus) placenta during pregnancy, physiological parturition, and parturition with fetal membrane retention | |
| Zhang et al. | Oxidatively generated DNA damage mediates the associations of exposure to phthalates with uterine fibroids and endometriosis: Findings from TREE cohort | |
| RU2657429C2 (ru) | Способ прогнозирования задержки формирования плаценты и развития эмбриона при обострении цитомегаловирусной инфекции, подавляющей активность сосудисто-эндотелиального фактора и развития эмбриона | |
| Begnel et al. | Cervical cytomegalovirus reactivation, cytokines and spontaneous preterm birth in Kenyan women | |
| Ogawa et al. | Is neonatal uterine bleeding responsible for early-onset endometriosis? | |
| RU2592243C1 (ru) | Способ оценки содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации | |
| RU2532391C1 (ru) | Способ оценки угрозы самопроизвольного выкидыша при обострении цитомегаловирусной инфекции на ранних этапах гестации, приводящей к снижению содержания прогестерона в периферической крови | |
| Omeljaniuk et al. | Bisphenol A: Potential factor of miscarriage in women in the context of the phenomenon of neutrophil extracellular traps |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171230 |