RU2607381C1 - Кассетная генетическая конструкция, экспрессирующая две биологически активные siPHK, эффективно атакующие мишени в мРНК обратной транскриптазы ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, и одну siPHK, направленную на мРНК гена CCR5 - Google Patents

Кассетная генетическая конструкция, экспрессирующая две биологически активные siPHK, эффективно атакующие мишени в мРНК обратной транскриптазы ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, и одну siPHK, направленную на мРНК гена CCR5 Download PDF

Info

Publication number
RU2607381C1
RU2607381C1 RU2015123843A RU2015123843A RU2607381C1 RU 2607381 C1 RU2607381 C1 RU 2607381C1 RU 2015123843 A RU2015123843 A RU 2015123843A RU 2015123843 A RU2015123843 A RU 2015123843A RU 2607381 C1 RU2607381 C1 RU 2607381C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hiv
subtype
mrna
genetic construct
reverse transcriptase
Prior art date
Application number
RU2015123843A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2015123843A (ru
Inventor
Николай Андреевич Чуриков
Ольга Валерьевна Кретова
Дарья Михайловна Федосеева
Original Assignee
Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) filed Critical Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран)
Priority to RU2015123843A priority Critical patent/RU2607381C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2607381C1 publication Critical patent/RU2607381C1/ru
Publication of RU2015123843A publication Critical patent/RU2015123843A/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к областям медицинской и молекулярной генетики и касается кассетной генетической конструкции. Представленная кассетная конструкция anti-HIV-1R-anti-HIV-2R-anti-CCR5-8 получена на основе вектора GeneClip-U1-neo и содержит вставку, экспрессирующую три шпильки РНК, кодирующие siPHK - ингибиторы репродукции вируса иммунодефицита человека 1 типа субтипа А и экспрессии гена CCR5 человека - и два фрагмента генома ВИЧ-1 субтипа А, выявленного у больных в России, и соответствующие двум консервативным районам домена обратной транскриптазы (приведены в первой и второй строках соответственно), а также 19-bp область, соответствующую гену CCR5 (приведена в третьей строке):
Figure 00000005
где строчными буквами показаны области петель между частями палиндромов, способными образовать двуспиральные дуплексы. Изобретение может быть использовано для подавления продукции вариантов вируса у больных России. 3 ил., 3 табл., 2 пр.

Description

Изобретение относится к областям медицинской и молекулярной генетики, а также к генотерапии, и связано с использованием ранее выявленных нами мишеней для РНК-интерференции в вирусе иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1) субтипа А для создания кассетной генетической конструкции. На основе детального анализа последовательности нуклеотидов в двух мишенях домена обратной транскриптазы с помощью глубокого секвенирования генома ВИЧ-1 субтипа А у больных в России предложены последовательности соответствующих siPHК, предназначенные для эффективного подавления продукции данных клинических вариантов ВИЧ-1 в клетках человека.
Данная кассета экспрессирует две биологически активные анти-ВИЧ-1 siPHК, что приводит к атаке двух мишеней в транскриптах вируса, кодирующих обратную транскриптазу, и мощному ингибированию его репродукции в клетках человека. Указанная кассетная генетическая конструкция экспрессирует шпильки РНК, которые in vivo процессируются в биологически активные siPHК. Последние эффективно доставляются в белковые комплексы, осуществляющие разрезание транскриптов вируса, чем и достигается ингибирование его репродукции. Кроме того, данная кассета экспрессирует и биологически активную siPHК, атакующую мРНК гена CCR5 человека. Указанный ген кодирует ко-рецептор, облегчающий проникновение вируса в Т-лимфоциты человека. Такая генетическая конструкция может быть использована в медицине для генотерапии СПИДа и ВИЧ-инфекции, а также в научных исследованиях для мощного подавления продукции ВИЧ-1 субтипа А.
В настоящее время основным подходом лечения СПИДа и ВИЧ-инфекции является назначение пациентам противовирусной химиотерапии, включающей препараты, действующие на ключевые ферменты ВИЧ-1 - обратную транскриптазу, интегразу, протеазу. Однако, несмотря на большое количество разработанных препаратов, существует проблема эффективности применяемой противовирусной терапии. Основная причина, объясняющая неэффективность лечения, - адаптивный мутагенез вируса, приводящий к появлению вариантов вируса, обладающих устойчивостью к противовирусным препаратам. Серьезными проблемами являются также токсичность и высокая стоимость применяемых лекарственных средств.
Известно применение рибозимов и антисмысловых РНК для терапии ВИЧ-инфекции [Dorman N. and Lever A.M. (2001) RNA-based gene therapy for HIV infection. HIV Med., 2, 114-122; Michienzi A., Conti L., Varano В., Prislei S., Gessani S. and Bozzoni I. (1998) Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication by nuclear chimeric anti-HIVribozymes in a human T lymphoblastoid cell line. Hum. Gene Ther., 9., 621-628; Veres G., Junker U., Baker J., Barske C., Kalfoglou C., Ilves H., Escaich S., Kaneshima H. and Bohnlein E. (1998). Comparative analysis of intracellularly expressed antisense RNAs as inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 replication. J. Virol., 72, 1894-1901], которые блокируют несколько генов ВИЧ, что снижает его активность.
Наиболее близкой к данному изобретению является генетическая конструкция, обеспечивающая экспрессию siPHК внутри ВИЧ-инфицированных клеток организма (патент РФ №2425150, опубл. 23 ноября 2009 г.).
Настоящее изобретение отличается тем, что в настоящей генетической конструкции в первой и второй позициях находятся шпильки, кодирующие две siPHК, направленные на мРНК, кодирующие обратную транскриптазу, которые содержат пять нуклеотидных замен, которые характерны вариантам данных мишеней у больных в России (Таблица 1). Т.о., предлагаемая конструкция экспрессирует две siPHК, которые нацелены на две мишени в мРНК, кодирующей обратную транскриптазу в вариантах ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, а одна siPHК - на мРНК гена CCR5 человека, кодирующего клеточный ко-рецептор, вовлеченный в проникновение вируса в Т-лимфоциты. Данные о мишенях РНК-интерференции ВИЧ-1 субтипа А в клинических вариантах вируса, выделенных у больных в России, получены с помощью капиллярного и глубокого секвенирования и депонированы в GenBank (accession numbers: KC681847-KC681888).
Техническим результатом предлагаемого изобретения является использование двух ранее выявленных мишеней РНК-интерференции в геноме ВИЧ-1 (патент РФ 2385939, опубл. 29 августа 2008 г.) и одной мишени в мРНК CCR5 (патент РФ 2425150, опубл. 23 ноября 2009 г.) для подавления продукции вариантов вируса у больных в России. Данная кассетная генетическая конструкция содержит три палиндрома, предназначенные для образования "шпилек РНК". Экспрессия такой конструкции в клетках человека приводит к образованию трех интерферирующих РНК (siPHК). Предлагаемая генетическая конструкция кодирует биологически активные siPHК, которые были отобраны с помощью невирусной тест-системы с использованием культур клеток человека.
Представленный технический результат достигается путем создания кассетной генетической конструкции на базе вектора GeneClip™U1 Neomycin (Ac. number AY745746), http://www.promega.com/pnotes/89/12416_21/12416_21.pdf.
Созданная генетическая конструкция anti-HIV-1R-anti-HIV-2R-anti-CCR5-8 длиной 202 bp содержит вставку ДНК, указанную в Таблице 1:
Figure 00000001
В таблице 1 указаны 19-30-bp последовательности, соответствующие транскриптам вируса или мРНК CCR5. Строчными буквами жирным шрифтом в следующем порядке указаны области, соответствующие двум шпилькам, которые содержат последовательности смысловой цепи мРНК обратной транскриптазы вируса, а также смысловой цепи мРНК гена CCR5. Последовательности ДНК представлены в ориентации 5'-3'. Строчными буквами показаны тексты петель и спейсеров, содержащих искусственные сайты для рестриктаз EcoRI или BamHI (жирные строчные буквы). Петли образуются в транскрипте после отжига комплементарных областей палиндромов. Тексты генетической конструкции соответствуют мишеням в штаммах ВИЧ-1 субтипа А, выделенных у больных в России. Нумерация области гена CCR5 указана по последовательности GenBank - U54994. Указанная конструкция предназначена для поражения двух областей мРНК, кодирующих консервативные области обратной транскриптазы (RT) вируса и 5' области мРНК гена CCR5 человека в области первых кодонов. Затенены пять нуклеотидных замен в мишенях RT, характерные для ВИЧ-1 субтипа А у больных в России.
В Таблице 2 представлены отличия в мишенях вируса из базы данных - HIV-1 subtype А, номер последовательности в GenBank - AF316544, изолят 1997 года ВИЧ-1 субтипа А из Конго; и в клинических вариантах вируса субтипа А, выделенных у больных в России.
Figure 00000002
В мишенях направленной на мРНК обратной транскриптазы и интегразы выявлены отличия, характерные для генома вируса у больных в России (затенением указаны пять позиций нуклеотидных замен, характерных для вариантов вируса субтипа А в России). Известно, что даже единичные отличия между мишенью и siPHК могут существенно ослабить эффективность РНК-интерференции. Следовательно, знание последовательности нуклеотидов в мишенях клинических вариантов ВИЧ-1 субтипа А позволяет создать генетические конструкции, эффективно поражающие транскрипты вируса и его продукцию у больных.
Указанную генетическую конструкцию тестировали с помощью невирусной системы. Данная система предназначена для количественной оценки биологической активности siPHК, которые образуются in vivo при экспрессии генетических конструкций. Она создана на базе вектора psiCHECK™-2 (Promega, номер последовательности в GenBank AY535007). Вектор содержит ген люциферазы светлячка и ген люциферазы коралла (Renilla). Указанные люцифезазы вызывают свечение разной длины волны и их экспрессию можно измерять с помощью люминометра. В 3' концевую некодирующую область гена Renilla вставляли короткие области генома вируса (домены), соответствующие выбранным мишеням РНК-интерференции в транскриптах вируса. Домены получали с помощью химического синтеза олигонуклеотидов ДНК. В таблице 2 представлены тексты доменов, которые клонировали в векторе psiCHECK™-2 по сайтам рестриктаз XhoI и NotI.
Figure 00000003
В Таблице 3 строчными буквами показаны области, содержащие сайты рестрикции эндонуклеаз XhoI и NotI, а также два спейсера между фрагментами генома HIV-1 (мишени HIV-1R и HIV-2R) и кДНК CCR5. Жирным шрифтом показаны области генома клинических вариантов вируса в России и кДНК CCR5, которые соответствуют мишеням РНК-интерференции.
Тестирование биологической активности кассеты проводят в экспериментах по ко-трансфекции культуральных клеток человека. При этом используют два препарата ДНК: кассетной генетической конструкции, содержащей промотор U1 РНК полимеразы II и кодирующую кодирующей три siPHК, а также ДНК - плазмиды, созданной на базе вектора psi-CHECK-2, содержащей три клонированных домена, соответствующих данным siPHК (мишеням РНК-интерференции) (Таблица 3). В клетках человека на генетических конструкциях экспрессируется вставка, содержащая палиндромы. Синтезированная РНК образует шпильки, которые являются природным субстратом Дайсера, фермента, вырезающего 21-нуклеотидные дуплексы РНК из шпильки. Если Дайсер работает на дуплексе РНК длиной более 19 пар нуклеотидов (природный субстрат), то далее он, оставаясь связанным с двуспиральной siPHК, активно участвует также и в ее "загрузке" в белковый комплекс RISC. В данном комплексе происходит "раскручивание" цепей siPHК и освобождение его от одной из них (от так называемой "passenger"-цепи). Если в комплексе остается антисмысловая siPHК, то она используется как "наводчик", узнающий комплементарную мишень в транскриптах клетки. После связывания комплекса с соответствующей мРНК происходит ее разрезание одним из его белков, что приводит к выключению экспрессии соответствующего гена вируса и нарушает его размножение в клетке-хозяине. В трансфецированных клетках мРНК Renilla, содержащая в 3'-некодирующей области испытываемую мишень РНК-интерференции, разрезается, что приводит к резкому снижению голубого свечения, вызываемого данной люциферазой (478 нм). Желто-зеленое свечение, вызываемое люциферазой светлячка Photinus pyralis (557 нм), кодируемой той же ДНК psiCHECK-2, служит внутренним контролем.
В настоящем исследовании использовали одиннадцать критериев для отбора последовательностей мишеней РНК-интерференции в мРНК гена CCR5. Они важны для того, чтобы именно антисмысловая цепь siPHК оставалась в комплексе RISC. Каждая из приведенных в Таблице 1 вставок в генетических конструкциях соответствует, по крайней мере, десяти из одиннадцати нижеперечисленных критериев, которые использовались для отбора коровых 19-нуклеотидних последовательностей siPHК:
- состав G/C 30-52%,
- не менее 3 A/U в позициях 15-19 смысловой цепи,
- отсутствие внутренних повторов,
- А в позиции 19 смысловой цепи,
- А в позиции 3 смысловой цепи,
- U в позиции 10 смысловой цепи,
- отсутствие G/C в позиции 19 смысловой цепи,
- отсутствие G в позиции 13 смысловой цепи,
- отсутствие гомополимерных трактов (А)4-5 или (Т)4-5 в смысловой цепи,
- локализация мишени в консервативном районе генома вируса,
- отсутствие гомологии с известными транскриптами генома человека.
Часть вышеперечисленных критериев отбора биологически активных siPHК опубликована [Reynolds A., Leake D., Boese Q., Scaringe S., Marshall W.S., Khvorova A. (2004). Rational siRNA design for RNA interference. Nature Biotechnol. 22, 326-330] и представлена на сайте http://www.dharmacon.com.
Приведенная в Таблице 1 кассетная генетическая конструкция обеспечивает целенаправленное воздействие на мРНК вариантов вируса в России с помощью соответствующих двух siPHК, а также на мРНК CCR5. Терапевтическим результатом такого воздействия является подавление репродукции вариантов ВИЧ-1 субтипа А у больных в России.
Для вируса иммунодефицита человека первого типа характерно быстрое возникновение и отбор мутантных вариантов, обладающих резистентностью к различным противовирусным препаратам. Для решения проблемы вирусной изменчивости получена кассетная генетическая конструкция, атакующая разные мишени и поэтому в значительной степени не зависящая от изменчивости вируса.
На рис. 1 приведена физическая карта вектора GeneClipU1-neo.
На рис. 2 приведена физическая карта вектора psiCHECK-2.
На рис. 3 представлены результаты проверки эффективности РНК-интерференции, вызываемой созданной кассетной генетической конструкцией на невирусной тест-системе.
Пример 1. Описание генетической конструкции и способа ее получения
Вектор GeneClipU1-neo зарегистрирован в GenBank (Accession # AC AY745746), имеет размер 4,758 kb (kilobases - тысяча пар оснований) и характеризуется тем, что содержит:
старт-сайт РНК полимеразы Т7: 1
U1 промотор РНК полимеразы II человека: 46-438
10 bp спейсер: 439-448
U1 терминатор: 449-465
промотор РНК полимеразы SP6: 527-546
ранний энхансер/промотор вируса SV40: 798-1216
сигнал начала репликации вируса SV40: 1114-1179
ген neo: 1251-2045
синтетический поли(А): 2080-2128
ген β-лактамазы: 3080-3940
промотор РНК полимеразы Т7: 4742-3.
В данный вектор, который поставляется Promega в линейной форме, вставляют химически синтезированные олигонуклеотиды ДНК, которые соответствуют генетическим конструкциям, продуцирующим шпильки РНК (Таблица 1).
Вектор psiCHECK-2 зарегистрирован в GenBank (Accession # AY535007), имеет размер 6,27 kb и характеризуется тем, что содержит:
ранний энхансер/промотор вируса SV40: 7-425
химерный интрон: 489-621
промотор РНК полимеразы Т7: 666-684
ген люциферазы Relilla: 694-1629
полилинкер: 1636-1680
синтетический поли(А): 1688-1736
промотор HSK-TK: 1744-2496
ген люциферазы светлячка: 2532-4184
поздний сигнал поли(А) SV40: 4219-4440
ген β-лактамазы: 4587-5447.
В данном векторе в сайты XhoI и NotI полилинкера вставляют химически синтезированные олигонуклеотиды ДНК, которые соответствуют выбранным мишеням РНК-интерференции (Таблица 2).
Пример 2. Оценка эффективности РНК-интерференции, вызываемой созданными генетическими конструкциями в невирусной системе
Накануне проведения ко-трансфекции (за 18-20 ч) клетки HEK293 рассевают в лунки 24-луночного планшета Nunc - по 50 тыс. клеток в 500 мкл культуральной среды DMEM (ПанЭко), содержащей глютамин и сыворотку (полная среда), на лунку. В день эксперимента готовят пробы ДНК для ко-трансфекции при комнатной температуре следующим образом (на одну экспериментальную точку). В 200 мкл среды DMEM, не содержащей сыворотки (SFM), добавляют 100 нг ДНК генетической конструкции в векторе GeneClip-U1-neo (см. Таблицу 1) и 10 нг ДНК плазмиды, содержащей соответствующие клонированные домены в векторе psiCHECK-2 (см. Таблицу 2). После перемешивания добавляют 1 мкл свежеразмороженного реагента TransFast (Promega), встряхивают смесь и инкубируют ее 15 мин. Затем отсасывают среду из лунок с "сидящими" клетками, встряхивают пробирку со смесью ДНК-TransFast и сразу добавляют смесь в лунки с клетками. После инкубации 1 ч при 37°С в СО2-инкубаторе добавляют в лунки по 600 мкл среды с сывороткой, перемешивают и инкубируют планшет 48-72 ч.
Для измерения экспрессии люцифераз среду над клетками в лунках планшета отсасывают, добавляют 100 мкл раствора трипсина-ЭДТА (ПанЭко) на лунку, после 10 мин инкубации при 37°С в CO2-инкубаторе добавляют по 100 мкл полной среды, переносят полностью суспензию клеток в пробирку эппендорф на 0.5 мл, осаждают центрифугированием при комнатной температуре в центрифуге Eppendorf (5 мин - 2000 rpm), надосадочную жидкость отсасывают, суспендируют клетки в 70 мкл 1×PBS и проводят измерение свечения люцифераз светлячка и Renilla согласно рекомендациям к набору Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega) на люминометре Reporter Microplate Luminometer (Turner BioSystems). На рис. 3 показаны результаты испытания генетических конструкций на невирусной системе. Видно, что генетические конструкции специфически подавляют экспрессию мишеней на 70-90%.

Claims (3)

  1. Кассетная генетическая конструкция anti-HIV-1R-anti-HIV-2R-anti-CCR5-8 на основе вектора GeneClip-U1-neo, содержащая вставку, экспрессирующую три шпильки РНК, кодирующие siPHK - ингибиторы репродукции вируса иммунодефицита человека 1 типа субтипа А и экспрессии гена CCR5 человека - и содержащая два фрагмента генома ВИЧ-1 субтипа А, выявленного у больных в России, и соответствующие двум консервативным районам домена обратной транскриптазы (приведены в первой и второй строках соответственно), а также 19-bp область, соответствующую гену CCR5 (приведена в третьей строке):
  2. Figure 00000004
  3. где строчными буквами показаны области петель между частями палиндромов, способными образовать двуспиральные дуплексы.
RU2015123843A 2015-06-22 2015-06-22 Кассетная генетическая конструкция, экспрессирующая две биологически активные siPHK, эффективно атакующие мишени в мРНК обратной транскриптазы ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, и одну siPHK, направленную на мРНК гена CCR5 RU2607381C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015123843A RU2607381C1 (ru) 2015-06-22 2015-06-22 Кассетная генетическая конструкция, экспрессирующая две биологически активные siPHK, эффективно атакующие мишени в мРНК обратной транскриптазы ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, и одну siPHK, направленную на мРНК гена CCR5

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015123843A RU2607381C1 (ru) 2015-06-22 2015-06-22 Кассетная генетическая конструкция, экспрессирующая две биологически активные siPHK, эффективно атакующие мишени в мРНК обратной транскриптазы ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, и одну siPHK, направленную на мРНК гена CCR5

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2607381C1 true RU2607381C1 (ru) 2017-01-10
RU2015123843A RU2015123843A (ru) 2017-01-10

Family

ID=57955481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015123843A RU2607381C1 (ru) 2015-06-22 2015-06-22 Кассетная генетическая конструкция, экспрессирующая две биологически активные siPHK, эффективно атакующие мишени в мРНК обратной транскриптазы ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, и одну siPHK, направленную на мРНК гена CCR5

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2607381C1 (ru)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060269518A1 (en) * 2003-01-17 2006-11-30 University Of Florida Research Foundation, Inc. Small interference rna gene therapy
US20080003658A1 (en) * 2001-09-13 2008-01-03 Xiao-Feng Qin Method for expression of small antiviral rna molecules within a cell
RU2324738C2 (ru) * 2006-06-16 2008-05-20 Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ НА ОСНОВЕ ВЕКТОРНОЙ ПЛАЗМИДЫ pEGFP-N1, ПРОДУЦИРУЮЩАЯ siPHK-ИНГИБИТОРЫ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1 ТИПА (ЕЕ ВАРИАНТЫ)
RU2385939C1 (ru) * 2008-08-29 2010-04-10 Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН Генетические конструкции, атакующие шесть новых мишеней рнк-интерференции в транскриптах вируса иммунодефицита человека 1 типа и подавляющие репродукцию вируса в клетках человека
RU2425150C1 (ru) * 2009-11-23 2011-07-27 Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН КАССЕТНАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ ТРИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ siPHK, ЭФФЕКТИВНО АТАКУЮЩИЕ ТРАНСКРИПТЫ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА И ГЕНА CCR5 С ПОМОЩЬЮ PHK-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080003658A1 (en) * 2001-09-13 2008-01-03 Xiao-Feng Qin Method for expression of small antiviral rna molecules within a cell
US20060269518A1 (en) * 2003-01-17 2006-11-30 University Of Florida Research Foundation, Inc. Small interference rna gene therapy
RU2324738C2 (ru) * 2006-06-16 2008-05-20 Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ НА ОСНОВЕ ВЕКТОРНОЙ ПЛАЗМИДЫ pEGFP-N1, ПРОДУЦИРУЮЩАЯ siPHK-ИНГИБИТОРЫ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1 ТИПА (ЕЕ ВАРИАНТЫ)
RU2385939C1 (ru) * 2008-08-29 2010-04-10 Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН Генетические конструкции, атакующие шесть новых мишеней рнк-интерференции в транскриптах вируса иммунодефицита человека 1 типа и подавляющие репродукцию вируса в клетках человека
RU2425150C1 (ru) * 2009-11-23 2011-07-27 Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН КАССЕТНАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ ТРИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ siPHK, ЭФФЕКТИВНО АТАКУЮЩИЕ ТРАНСКРИПТЫ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА И ГЕНА CCR5 С ПОМОЩЬЮ PHK-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ

Also Published As

Publication number Publication date
RU2015123843A (ru) 2017-01-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Nishitsuji et al. Effective suppression of human immunodeficiency virus type 1 through a combination of short-or long-hairpin RNAs targeting essential sequences for retroviral integration
US9163241B2 (en) Cell-type specific aptamer-siRNA delivery system for HIV-1 therapy
CN105960459A (zh) 抑制neat1用于治疗实体肿瘤
Park et al. Specific HIV-1 env gene silencing by small interfering RNAs in human peripheral blood mononuclear cells
US20130323838A1 (en) TRIGGERED RNAi
KR20060029597A (ko) Ｒｎａ 간섭에 기반한 ｈｂｖ 유전자 발현의 억제 방법 및조성물
WO2006041290A2 (en) Nucleic acids against viruses , in particular hiv
WO2008106658A2 (en) TRIGGERED RNAi
US20170283802A1 (en) Design of nucleic acid binding molecules with non-watson crick and non-canonical pairing based on artificial mutation consensus sequences to counter escape mutations
US9222090B2 (en) RNA interference target for treating AIDS
RU2425150C1 (ru) КАССЕТНАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ ТРИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ siPHK, ЭФФЕКТИВНО АТАКУЮЩИЕ ТРАНСКРИПТЫ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА И ГЕНА CCR5 С ПОМОЩЬЮ PHK-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ
JP4545091B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルスの働きを阻害するオリゴリボヌクレオチドまたはペプチド核酸
JP2009528840A (ja) ランダムＲＮＡｉライブラリ、その生成方法、及びそれを使用したスクリーニング方法
RU2385939C1 (ru) Генетические конструкции, атакующие шесть новых мишеней рнк-интерференции в транскриптах вируса иммунодефицита человека 1 типа и подавляющие репродукцию вируса в клетках человека
RU2630644C1 (ru) Кассетная генетическая конструкция, экспрессирующая две биологически активные siPHK, эффективно атакующие мишени в мРНК генов vpu и env ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, и одну siPHK, направленную на мРНК гена CCR5
Moelling et al. Silencing of HIV by hairpin-loop-structured DNA oligonucleotide
RU2552607C2 (ru) КАССЕТНАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ ДВЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ siPHK, ЭФФЕКТИВНО АТАКУЮЩИЕ ТРАНСКРИПТЫ ВИЧ-1 СУБТИПА А У БОЛЬНЫХ В РОССИИ, И ОДНУ siPHK, НАПРАВЛЕННУЮ НА мРНК ГЕНА CCR5
US8114982B2 (en) Multi-microRNA methods and compositions
RU2552486C2 (ru) КАССЕТНАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ ДВЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ siPHK, ЭФФЕКТИВНО АТАКУЮЩИЕ ТРАНСКРИПТЫ ВИЧ-1 СУБТИПА А У БОЛЬНЫХ В РОССИИ, НАПРАВЛЕННЫЕ НА мPHK ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИТАЗЫ И ИНТЕГРАЗЫ, И ОДНУ siPHK, НАПРАВЛЕННУЮ НА мPHK ГЕНА CCR5
RU2607381C1 (ru) Кассетная генетическая конструкция, экспрессирующая две биологически активные siPHK, эффективно атакующие мишени в мРНК обратной транскриптазы ВИЧ-1 субтипа А у больных в России, и одну siPHK, направленную на мРНК гена CCR5
US20110008885A1 (en) Linear double-stranded rna molecule interfering with different target genes
CA2494116A1 (en) Adenoviral va1 pol iii expression system for rna expression
RU2650774C1 (ru) Эффективные мишени РНК-интерференции в геноме ВИЧ-1 и субстраты Дайсера, предназначенные для их поражения
Ren et al. Construction, modification and evaluation of apolipoprotein AI promoter-driven shRNA expression vectors against hTERT
JP4228071B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルスのタンパク質合成及び／又はｃ型肝炎ウイルスの複製を抑制することができる二本鎖オリゴヌクレオチド