RU2605630C1 - Способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы - Google Patents

Способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы Download PDF

Info

Publication number
RU2605630C1
RU2605630C1 RU2015148450/14A RU2015148450A RU2605630C1 RU 2605630 C1 RU2605630 C1 RU 2605630C1 RU 2015148450/14 A RU2015148450/14 A RU 2015148450/14A RU 2015148450 A RU2015148450 A RU 2015148450A RU 2605630 C1 RU2605630 C1 RU 2605630C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
tooth
pulp
teeth
autotransplantation
donor
Prior art date
Application number
RU2015148450/14A
Other languages
English (en)
Inventor
Сергей Владимирович Сирак
Евгений Вячеславович Щетинин
Анна Борисовна Ходжаян
Лиана Аршаковна Паразян
Алла Григорьевна Сирак
Юрий Юрьевич Гатило
Татьяна Леонидовна Кобылкина
Марина Юрьевна Вафиади
Original Assignee
Сергей Владимирович Сирак
Евгений Вячеславович Щетинин
Анна Борисовна Ходжаян
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный медицинский университет" (ФГБОУ ВО Ставропольский государственный медицинский университет) Минздрава РФ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сергей Владимирович Сирак, Евгений Вячеславович Щетинин, Анна Борисовна Ходжаян, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный медицинский университет" (ФГБОУ ВО Ставропольский государственный медицинский университет) Минздрава РФ filed Critical Сергей Владимирович Сирак
Priority to RU2015148450/14A priority Critical patent/RU2605630C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2605630C1 publication Critical patent/RU2605630C1/ru

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61CDENTISTRY; APPARATUS OR METHODS FOR ORAL OR DENTAL HYGIENE
    • A61C8/00Means to be fixed to the jaw-bone for consolidating natural teeth or for fixing dental prostheses thereon; Dental implants; Implanting tools
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургической стоматологии, и может быть использовано для восстановления целостности зубных рядов. Для этого способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы включает удаление зуба-донора, формирование лунки-реципиента, аутотрансплантацию зуба-донора, покрытие его стерильными марлевыми тампонами, шинирование зуба композиционным пломбировочным материалом без выведения из контакта с зубами антагонистами. При этом до аутотрансплантации в лунку-реципиент на 2/3 ее объема вводят тканеинженерную конструкцию, состоящую из предварительно культивированных мезенхимальных клеток, полученных из пульпы зуба-донора, и гидрогеля PuraMatrix/3DM. Способ обеспечивает высокий терапевтический эффект аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы, что позволяет эффективно использовать способ, например, при наличии сверхкомплектных, ретинированных, дистопированных зубов в ортодонтии и при хирургическом удалении опухолей челюстей. 2 пр., 3 ил.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургической стоматологии, и может быть использовано для восстановления целостности зубных рядов.
Аутотрансплантацией зуба называют удаление зуба из одной области и его реплантацию в другую область у одного и того же человека. Новое место может быть свежей лункой после удаления зуба, который невозможно реставрировать, или искусственно высверленная лунка на беззубом альвеолярном гребне. Это определение включает в себя хирургическую репозицию зуба в ту же самую лунку.
Основное преимущество данного способа - экономическая эффективность, реализуемая за счет возможности использования зуба, ранее не функционировавшего (обычно это - третий моляр, сверхкомплектные, ретинированные или дистопированные моляры, премоляры, резцы или клыки), путем переноса в функциональное положение для замещения утраченного зуба у одного и того же человека.
Основные недостатки способа - дополнительное хирургическое вмешательство, относительно низкая адаптивность в практике (например, несоответствие зуба и размера пространства), и, что более важно - низкая предсказуемость результата по сравнению с обычным ортопедическим лечением (имплантаты, мостовидные протезы, съемные протезы).
Неизбежно сравнение аутотрансплантации и имплантации (например, с помощью дентальных имплантатов) как методов лечения при замещении отсутствующих зубов, ряд авторов обоснованно считают реплантацию и аутотрансплантацию зубов альтернативой имплантации в современных экологических условиях [1].
Одно из основных преимуществ трансплантации над имплантацией - это возможность ее применения у пациентов до завершения пубертатного периода. Имплантаты не растут вместе с растущими пациентами и в результате оказываются в инфраокклюзии. Красота аутотрансплантированных зубов заключается в том, что они натуральны и могут прорезываться в гармонии с соседними зубами и растущими челюстями.
Существующие способы аутотрансплантации достаточно однотипны и включают несколько этапов: удаление зуба-донора, подготовка лунки-реципиента, удаление пульпы зуба-донора, установка зуба-донора в лунку-реципиент, фиксация (шинирование) зуба-донора к окружающим зубам (обычно - проволокой, пломбировочным материалом, полиамидными нитями).
Основные недостатки существующих способов - удаление пульпы из коронковой и корневой частей зуба-донора, что делает невозможным ее регенерацию и лишает ткани (дентин, эмаль, цемент) зуба-донора полноценной иннервации и кровоснабжения. Сроки службы таких зубов небольшие, поскольку только жизнеспособная пульпа дает гарантию максимально длительного функционирования зуба.
Вместе с тем, крайне важно не только сохранить пульпу аутотрансплантированного зуба, но и минимизировать воспалительную реакцию, чтобы донорский зуб обладал возможностью для регенерации пульпы и имел открытое апикальное отверстие, шириной более 1 мм.
Известен способ аутотрансплантации зуба, описанный в статье Ckyau Е. [2]. Сущность способа-прототипа заключается в том, что автор использует остеоиндуктивный потенциал клеток пародонтальной связки зуба (PDL), в результате приводящий к регенерации кости в промежутке между стенками лунки и трансплантированным зубом. По мнению автора, генетически клетки PDL могут дифференцироваться в фибробласты, цементобласты и остеобласты, что объясняет этот остеоиндуктивный феномен. Представляет интерес идея использовать в будущем такие полезные PDL клетки для улучшения разработанной автором методики аутотрансплантации. Новое прикрепление происходит примерно в течение 2 недель после аутотрансплантации между PDL соединительной тканью на поверхности донорского зуба и стенкой лунки реципиента. Положительный эффект автор подтверждает клиническими наблюдениями на рентгенограммах у детей и подростков.
Преимущества метода - автор использует потенциал собственных мезенхимальных клеток пародонтальной связки зуба, которые могут дифференцироваться в фибробласты, цементобласты и остеобласты, что обеспечивает остеоиндуктивный эффект аутотрансплантации и хорошее приживление.
Недостатки - отсутствуют объективные данные о сохранении жизнеспособности пульпы аутотрансплантированного зуба, которыми служат показатели электровозбудимости пульпы.
Известен способ посттравматической аутореплантации зубов, выбранный в качестве прототипа, направленный на повышение эффективности операции за счет сокращения сроков приживления зуба-донора и оптимизации процессов регенерации [3].
Способ осуществляют следующим образом. Удаленный зуб помещают в физиологический раствор. Лунку покрывают стерильным марлевым тампоном и больному предлагают сомкнуть челюсти. Далее приступают к обработке реплантата: пломбируют кариозные полости, если они не были запломбированы ранее, производят резекцию верхушки корня и расширяют каналы при помощи эндодонтического инструмента. Реплантант захватывают стерильным тампоном, смоченным физиологическим раствором. Орошение зуба и эндодонтического инструмента производят непрерывно через каждые 2-3 с. Расширенные каналы обрабатывают гипохлоридом натрия. Канал культи корня в области его окончания (4-5 мм) расширяют до границ цемента и он, таким образом, принимает вид конуса с вершиной, обращенной в сторону коронковой части зуба. Затем, при помощи каналонаполнителя, канал пломбируют цементом; лишь конусовидно расширенную часть заполняют амальгамой. Шейку зуба осторожно, чтобы не повредить надкостницу корня, очищают от обрывков слизистой оболочки, от зубных отложений, и подготовленный таким образом реплантат погружают в физиологический раствор, где он находится до помещения его в лунку.
Следующим этапом операции является обработка лунки реплантата: удаляют тампон, лунку промывают физиологическим раствором и вводят в нее в смеси Цефазолин натрия, Виферон и Дексаметазон в соотношении 1:1:0,1 в дозе 0,5-1 г, при этом лекарственную смесь размещают в лунке реплантируемого зуба.
Далее обработанный зуб помещают в лунку. Его покрывают двумя-тремя стерильными марлевыми тампонами и больному предлагают сомкнуть челюсти. Тампоны пациент удерживает 15-20 минут. Реплантированный зуб не выводят из контакта с зубами антагонистами, тем самым он не выключается из артикуляции.
Затем в проекции верхушки корня реплантируемого зуба делают дренажный канал круглого сечения диаметром 3-4 мм, проходящий от поверхности слизистой до дна лунки, в который устанавливают эластичный упругий дренаж в форме спирали. В целях закрепления реплантированного зуба в послеоперационном периоде применяют шинирование с помощью GlasSpan®. Шины можно снимать через 3-4 недели.
Преимущества метода - обеспечивается технический результат в виде надежной фиксации и приживления реплантированного зуба.
Недостатки: способ не предусматривает аутотрансплантации зуба, а направлен на его реплантацию, т.е. помещение обратно в его же лунку, пульпа зуба не сохраняется, в описании отсутствует методика стимулирования процесса регенерации.
Поставлена задача разработать способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы.
Поставленная задача достигается за счет использования при аутотрансплантации тканеинженерной конструкции, состоящей из предварительно культивированных мезенхимальных клеток пульпы зуба-донора и матрицы-носителя для этих клеток - гидрогеля PuraMatrix/3DM.
Способ осуществляется следующим образом.
Под местной анестезией Sol. Ultracaini 4% с адреналином 1:100000 удаляют зуб-донор. Бором расширяют апикальное отверстие корня до 1 мм, через которое вводят пульпоэкстрактор на 3 мм длины корня и эвакуируют часть корневой пульпы зуба. Зуб-донор помещают до следующего этапа в стерильный физиологический раствор и хранят при температуре 4°С.
Следующим этапом является получение клеточной культуры из пульпы зуба-донора.
Полученный фрагмент пульпы зуба-донора отмывают раствором Хэнкса с цефазолином (1 г/л). Полученную клеточную суспензию центрифугируют в режиме 1,500×g, 10 минут и ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина. Суспензию клеток высевают на пластиковые чашки Петри с диаметром 100 мм. Плотность посева первичной клеточной суспензии составляет 15 миллионов мононуклеарных клеток на 1 см2. Через 1 сутки не прикрепившиеся клетки удаляют, ростовую среду заменяют, если ее рН менее 6,0 или более 8,0, на ростовую среду, рН которой лежит в пределах от 6,0 до 8,0, при этом элиминируют клетки, не относящиеся к популяции мезенхимальных стволовых клеток. Культуры инкубируют при 37°С в атмосфере 5% CO2. По достижении культурой 50% конфлуентности монослой трипсинизируют и пересевают на новые чашки с плотностью 10-30 клеток на 1 см в ростовой среде, дополнительно содержащей 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 ЕД/мл гепарина.
Через 3 дня отбирают плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов. Отобранные колонии рассевают в новые чашки с плотностью 20 клеток/см и выращивают до состояния преконфлуентности. Последующие пассажи (если планируется аутотрансплантация нескольких зубов) производят в том же режиме. Таким образом, продолжительность получения клеточной культуры из пульпы зуба-донора составляет до 5 суток.
В полученную таким образом культуру плюрипотентных мезенхимальных клеток по каплям добавляют гидрогель PuraMatrix/3DM до загустевания смеси.
Следующим этапом операции является формирование лунки-реципиента (если ее нет в челюсти), которую готовят по стандартной методике, аналогичной методу подготовки принимающего ложа для дентального имплантата: производят разрез слизистой оболочки, хирургическими сверлами необходимого диаметра просверливают кортикальную кость и формируют лунку-реципиент. После сверления лунку промывают физиологическим раствором и вводят в нее подготовленную тканеинженерную конструкцию на 2/3 объема лунки-реципиента.
Затем зуб-донор извлекают из стерильного физиологического раствора и помещают в лунку-реципиент.
Его покрывают двумя-тремя стерильными марлевыми тампонами и предлагают больному сомкнуть челюсти. Тампоны пациент удерживает 20-30 минут.
Аутотрансплантированный зуб не выводят из контакта с зубами антагонистами, тем самым он не выключается из артикуляции. В целях закрепления аутотрансплантированного зуба в послеоперационном периоде применяют шинирование с помощью композиционного пломбировочного материала. Шины снимают через 4 недели.
Послеоперационная терапия включает антибактериальные и десенсибилизирующие средства, например азитромицин и цетрин, которые рекомендуют принимать в течение 4-5 дней.
Контроль за жизнеспособностью пульпы аутотрансплантированного зуба осуществляется путем регистрации порога ее электровозбудимости. Значения электродиагностики (ЭОД) от 20 до 45 мкА в раннем послеоперационном периоде (3-30 суток) и от 6 до 15 мкА в позднем периоде (от 1 до 3 месяцев) являются подтверждением ее функциональной состоятельности.
Для объективной оценки эффективности разработанного метода авторами-заявителями проведено экспериментальное исследование на животных.
Цель эксперимента - оценить эффективность использования разработанной тканеинженерной конструкции в восстановительной клеточной терапии пульпы аутотрансплантированных зубов барана in vivo.
Материалы и методы экспериментального исследования. Объектом для исследования служили 14 взрослых баранов в возрасте от 3 до 5 лет. Животных разделили на 2 группы - основную и контрольную. В обеих группах животных оперировали под общим внутривенным наркозом (Zoletil 50) по одинаковой методике. Для аутотрансплантации использовали резцы (зацепы) нижней челюсти. Десневой край у зубов, подлежавших пересадке, отслаивали, зубы постепенно расшатывали с помощью прямого элеватора и удаляли щипцами (фиг. 1). После экстракции зубы помещали в стерильный физиологический раствор и хранили при температуре 4°С.
И в контрольной, и в основной группах каждый удаленный зуб пересаживали в освободившуюся лунку с противоположной стороны той же челюсти, т.е. меняли зубы местами. В контрольной группе трансплантировали зуб в лунку, заполненную сгустком крови.
В основной группе перед аутотрансплантацией принимающее ложе (лунку) на 2/3 заполняли индуктором регенерации, гидрогелем PuraMatrix/3DM с мезенхимальными клетками. Данная тканеинженерная конструкция представляет собой синтетический биодеградируемый матрикс-гель на основе олигопептидных фрагментов, формирующий нанонити и предварительно культивированные мезенхимальные клетки барана, обработанные 5-азацитидином. Готовый тканеинженерный продукт получали путем добавления геля к предварительно культивированным мезенхиальным клеткм in situ.
Все трансплантированные зубы в обеих группах шинировали между собой с помощью композитного пломбировочного материала.
Всего животным пересажено 112 зубов. Через 2-3 часа после операции животные становились активными, а через 6-12 часов начинали принимать пищу. В последующие 2-3 суток у них наблюдалась повышенная саливация. В период от 3 месяцев до 1 года вследствие рассасывания корней в контрольной и основной группах выпало 9 зубов (4 и 5 соответственно) - потеря обусловлена явным несоответствием трансплантируемого корня и воспринимающего ложа.
Через 3, 15 и 30 суток, 3, 6 и 12 месяцев от начала эксперимента под общим наркозом аутотрансплантированные зубы выпиливали блоком с окружающими мягкими тканями и альвеолярным отростком, рану ушивали. Операцию проводили без умерщвления животных, поскольку объем нанесенной операционной травмы не представлял критической угрозы для их жизни. Изъятые блоки с аутотрансплантированными зубами фиксировали в 10% нейтральном формалине, после чего проводили декальцинацию блоков в трилоне-Б. Далее материал заливали в гистологическую среду «Гистомикс» с использованием гистологического процессора замкнутого типа Tissue-Tek VIP™ 5 Jr и станции парафиновой заливки Tissue-Tek® ТЕС™ 5 фирмы Sakura (Япония). Из полученных блоков делали гистологические срезы толщиной 5-7 мкм и окрашивали гематоксилином и эозином, по Маллори красителями (Bio-Optica, Италия и Биовитрум, Россия) на автоматическом мультистейнере Prisma™. Для иммуногистохимических реакций использовали моноклональные антитела к β-галактозидазе (Diagnostic BioSystems, Нидерланды 1:25 - 1:50), моноклональные мышиные антитела к фактору Виллебранда (Diagnostic BioSystems, Нидерланды 1:25 - 1:50) и поликлональные кроличьи антитела к α-SMA (SpringBioScience, США). Негативным контролем служили реакции с заменой первых антител раствором для разведения (SpringBioScience, США).
Микроскопию срезов проводили на цифровом микроскопе со встроенным фотоаппаратом Olympus ВХ45.
С каждого препарата окрашенного позитивно на β-галактозидазу, фактор Виллебранда и a-SMA, выполняли по 10 цифровых снимков (в формате jpg, размером 3136×2352 пикселей в палитре 24 бит) случайно выбранных полей зрения при увеличении x100, x200, x400 и x1000. Морфометрические исследования проводили с использованием программы Видео-Тест Морфология 5.1 для Windows. Полученные цифровые данные были анализированы с применением статистического метода t-критерия Стьюдента в программе Primer of Biostatistics 4.03 для Windows. Достоверными считали различия при p<0,05.
Научно-исследовательская работа проведена в рамках Государственного задания Министерства здравоохранения Российской федерации совместно с Центральным НИИ овцеводства и козоводства РФ и Ставропольским государственным аграрным университетом.
Результаты исследования. Дистрофические изменения пульпы в контрольной группе появляются к концу 3-х суток после аутотрансплантации зубов. Сетчатая дистрофия захватывает в первую очередь слой одонтобластов и, постепенно распространяясь на все слои пульпы, приводит ее к гибели уже к 15-м суткам (фиг. 2-а, б, в, г).
Иммуногистохимический метод контроля жизнедеятельности мезенхимальных клеток в основной группе показал, что после аутотрансплантации зуба с использованием тканеинженерной конструкции все прекультивированные клетки, равно как и трансплантируемые клетки, сохраняют свою жизнеспособность, а значит, и способность продуцировать факторы, ускоряющие процесс регенерации пульпы зуба и тканей пародонта. Данное явление выражалось в ускорении смены фаз регенераторного процесса: по сравнению с контрольной группой сокращались сроки периода клеточной инфильтрации, ускорялся темп неоангиогенеза и разрастания сосудистой сети пульпы (фиг. 3-а, б, в, г). На наш взгляд, данное явление связано с более высокой функциональной активностью мезенхимальных клеток в составе тканеинженерной конструкции в сочетании с материцей-носителем и индуктором регенерации, гидрогелем PuraMatrix/3DM, а также обусловлено создавшимися межклеточными взаимодействиями.
Полученные экспериментальные данные исследования позволяют рекомендовать разработанную тканеинженерную конструкцию в качестве носителя предварительно культивированных мезенхимальных клеток пульпы и гидрогеля PuraMatrix/3DM для эффективной доставки жизнеспособных клеток в патологический очаг, удержания их там и оптимизации условий их лечебного воздействия в местах повреждения тканей.
Таким образом, предложен новый способ лечения, характеризующийся тем, что, используя стандартные хирургические протоколы (удаление зуба-донора, формирование лунки-реципиента, шинирование зуба проволокой или композиционным пломбировочным материалом) и тканеинженерную конструкцию, состоящую из предварительно культивированных клеток пульпы зуба-донора и матрицы-носителя для этих клеток - гидрогеля PuraMatrix/3DM, получен технический результат, ранее не известный, имеющий высокий терапевтический эффект.
Хорошая совместимость указанных компонентов тканеинженерной конструкции обеспечивает синергизм их действия, приводящий к возникновению новых свойств и широкому спектру терапевтических эффектов: ускорении регенерации пульпы зуба-донора, приживления зуба-донора в лунке-реципиенте, восстановлению целостности зубного ряда.
Высокая эффективность разработанного способа аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы позволяют эффективно его использовать ее при лечении различных патологических состояний, в том числе при наличии сверхкомплектных, ретинированных, дистопированных зубов, что подтверждено конкретными клиническими примерами.
Исследования проведены на базе кафедры стоматологии Ставропольского государственного медицинского университета и Ставропольской краевой стоматологической поликлиники.
Всем больным выполнялось рентгенологическое исследование до и после выполнения аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы по вышеописанному способу.
Клинический пример 1.
Пациентка В., 17 лет, направлена из школьного стоматологического кабинета с кальцифицированным образованием в левой половине нижней челюсти. В анамнезе выявлены периодически повторяющиеся появления припухлости и болезненности в области нижней челюсти слева.
Объективно: слизистая оболочка полости рта нижней челюсти слева гиперемирована, отечна, в области 34-38 зубов определяются точечные кровоизлияния. Индекс гигиены (ИГ) (OHI-S) составил 2,5 балла (неудовлетворительная гигиена полости рта).
Рентгенологически: выявлен рентгеноконтрастный очаг поражения, расположенный в области от 35-38 зуба. Поверхность очага извитая, окружена рентгенопрозрачным ободом. 36 зуб смещен к нижней границе челюсти и располагается в нижнечелюстном канале. Рентгенологическая плотность образования составила 1500 ед по шкале Хаунсфилда. ЭОД 36, 37 зуба составляет 6-12 мкА, 38 зуба - 60 мкА.
Диагноз - одонтома нижней челюсти слева.
Лечение. Под инфильтрационной анестезией Sol. Ultracaini 4% с адреналином 1:100000 произведено хирургическое удаление одонтомы. Нижнечелюстной нерв сохранен без потери чувствительности. В ходе формирования доступа к одонтоме 36, 37, и 38 зубы удалены.
По показаниям ЭОД, проведенным до операции, принято решение произвести аутотрансплантацию 36 и 37 зуба с сохранением жизнеспособности пульпы по заявляемому способу.
Шаровидным бором расширены апикальные отверстия корней 36 и 37 зубов до 1 мм, куда введен пульпоэкстрактор на 3 мм длины корней и эвакуирована часть корневой пульпы. Зубы-доноры помещены до следующего этапа в стерильный физиологический раствор, где они хранятся при температуре 4°С.
Полученные фрагменты пульпы зубов-доноров отмыты раствором Хэнкса с цефазолином (1 г/л). Полученную клеточную суспензию центрифугировали в режиме 1,500×g, 10 минут и ресуспендировали в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина. Суспензию клеток высеяна на пластиковые чашки Петри с диаметром 100 мм. Плотность посева первичной клеточной суспензии составила 15 миллионов мононуклеарных клеток на 1 см. Через 1 сутки не прикрепившиеся клетки удалены, ростовая среда заменена (поскольку ее рН была менее 6,0) на ростовую среду, рН которой составила 8,0, элиминированы клетки, не относящиеся к популяции мезенхимальных стволовых клеток. Культуры инкубированы при 37°С в атмосфере 5% СО2. По достижении культурой 50% конфлуентности монослой трипсинизирован и пересеян на новые чашки с плотностью 10-30 клеток на 1 см в ростовой среде, дополнительно содержащей 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 ЕД/мл гепарина.
Через 3 дня отобраны плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов. Отобранные колонии рассеяли в новые чашки с плотностью 20 клеток/см и выращивали до состояния преконфлуентности. Последующие пассажи (поскольку запланирована аутотрансплантация нескольких зубов) произведены в том же режиме. Таким образом, продолжительность получения клеточной культуры из пульпы зубов-доноров составила 5 суток. В полученную таким образом культуру плюрипотентных мезенхимальных клеток по каплям добавили гидрогель PuraMatrix/3DM до загустевания смеси.
Через 4 месяца после операции по удалению одонтомы произведено формирование 4 лунок-реципиентов (по числу корней зубов), которые подготовили по стандартной методике, аналогичной методу подготовки принимающего ложа для дентального имплантата: произвели разрез слизистой оболочки, хирургическими сверлами необходимого диаметра просверлили кортикальную кость и сформировали 4 лунки-реципиента. После сверления лунки промыты физиологическим раствором, в них введена подготовленная тканеинженерная конструкция на 2/3 их объема.
Зубы-доноры (36 и 37) извлечены из стерильного физиологического раствора и помещены в подготовленные лунки-реципиенты.
Аутотрансплантированные 36 и 37 зубы покрыты двумя стерильными марлевыми тампонами, которые удерживались пациенткой 30 минут.
Аутотрансплантированные зубы не выводили из контакта с зубами антагонистами, тем самым они не выключались из артикуляции. В целях закрепления аутотрансплантированных зубов в послеоперационном периоде использовали шинирование с помощью композиционного пломбировочного материала Филтек. Шины сняты через 4 недели после операции аутотрансплантации.
Послеоперационная терапия включала антибактериальные и десенсибилизирующие средства, азитромицин (по 500 мг 1 раз в сутки 5 суток) и цетрин (по 200 мг 2 раза в сутки 5 суток).
На контрольной рентгенограмме - полноценная интеграция корней аутотрансплантированных зубов-доноров в лунках-реципиентах. При повторном осмотре через 3, 7 и 30 суток больная жалоб не предъявляет. Результаты рентгенологического исследования, проведенные через 1 год, показали отсутствие признаков рассасывания костной ткани в области корней аутотрансплантированных зубов и отсутствие деструктивных изменений в окружающих периапикальных тканях.
Контроль за жизнеспособностью пульпы аутотрансплантированных зубов осуществляли на протяжении 1 года. Значения электродиагностики (ЭОД) 36 и 37 зубов через 3 суток после операции составили 20 и 22 мкА соответственно, через 1 месяц - 16 и 12 мкА соответственно, через 3 месяца - 6 и 8 мкА соответственно, через 1 год - 4 и 6 мкА соответственно.
Полученные данные являются подтверждением жизнеспособности и функциональной состоятельности пульпы аутотрансплантированных 36 и 37 зубов. Данный клинический пример продемонстрировал, что аутотрансплантированные зубы могут хорошо прижиться в искусственно просверленной полости лунки-реципиента во вторично регенерировавшейся кости после удаления патологического очага челюсти (одонтомы).
Клинический пример 2.
Пациент В., 14 лет, направлен на кафедру стоматологии с непрорезавшимся верхним правым боковым резцом и клыком (12 и 13 зубы).
На обзорной рентгенограмме выявлено, что расположенный горизонтально в теле альвеолярного отростка верхней челюсти 12 зуб блокировал прорезывание 13 зуба, который в свою очередь, смещенный лабиально, упирался в центральный резец слева - 11 зуб. Диагноз: ретенция и дистопия 12 и 13 зубов.
Лечение. Под инфильтрационной анестезией sol. Ultracaini 4% с адреналином 1:100000 12 зуб удален по частям (сохранить его целым не представлялось возможным), 13 зуб выведен от контакта с 11 зубом, извлечен из лунки и через 5 суток аутотрансплантирован по вышеописанной методике в позицию 12 зуба (интра-альвеолярная аутотрансплантация). Клык зафиксирован шиной из композиционного пломбировочного материала Филтек на 3 недели. В послеоперационном периоде 13 зуб занял вертикальное положение в функциональной окклюзии на месте 12 зуба.
На контрольной рентгенограмме - полноценная интеграция корня аутотрансплантированного 13 зуба. При повторных осмотрах через 3, 7 и 30 суток больной жалоб не предъявляет. Результаты рентгенологического исследования, проведенные через 1 год, указали на отсутствие признаков рассасывания костной ткани в области корня аутотрансплантированного клыка, отсутствие деструктивных изменений в окружающих периапикальных тканях, отсутствие признаков облитерации корневого канала, а также пульпарной камеры 13 зуба.
Контроль за жизнеспособностью пульпы аутотрансплантированного клыка осуществлялся на протяжении 2 лет. Значение ЭОД 13 зуба через 3 суток после операции составило 16 мкА, через 1 месяц - 12 мкА, через 3 месяца - 10 мкА, через 1 год - 6 мкА.
Всего таким образом трансплантировано 48 зубов человека. Аутотрансплантированные зубы не изменялись в цвете, сохраняли прежний блеск, видимые воспалительные явления мягких тканей вокруг аутотрансплантированных зубов, как правило, исчезали через 5-7 суток. В период от 3 месяцев до 1 года вследствие рассасывания корней выпало 2 (4,2%) из 48 аутотрансплантированных зубов - потери обусловлены явным несоответствием аутотрансплантируемого корня зуба-донора и воспринимающего ложа лунки-реципиента, эффективность заявляемого способа составила 95,8%.
Таким образом, полученные данные в экспериментальных условиях и в клинике свидетельствуют о высоком терапевтическом эффекте разработанного способа аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы, что позволяет эффективно использовать его в стоматологической практике, например, при наличии сверхкомплектных, ретинированных, дистопированных зубов в ортодонтии и при хирургическом удалении опухолей челюстей.
Figure 00000001

Claims (1)

  1. Способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы, включающий удаление зуба-донора, формирование лунки-реципиента, аутотрансплантацию зуба-донора, покрытие его стерильными марлевыми тампонами, которые удерживают 20-30 минут при сомкнутых челюстях пациента, шинирование зуба композиционным пломбировочным материалом без выведения из контакта с зубами антагонистами, отличающийся тем, что в лунку-реципиент на 2/3 ее объема вводят тканеинженерную конструкцию, состоящую из предварительно культивированных мезенхимальных клеток, полученных из пульпы зуба-донора, и гидрогеля PuraMatrix/3DM.
RU2015148450/14A 2015-11-10 2015-11-10 Способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы RU2605630C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015148450/14A RU2605630C1 (ru) 2015-11-10 2015-11-10 Способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015148450/14A RU2605630C1 (ru) 2015-11-10 2015-11-10 Способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2605630C1 true RU2605630C1 (ru) 2016-12-27

Family

ID=57793633

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015148450/14A RU2605630C1 (ru) 2015-11-10 2015-11-10 Способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2605630C1 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2649452C1 (ru) * 2017-06-07 2018-04-03 Дмитрий Андреевич Журавлёв Способ имплантации искусственного зуба
RU2738668C1 (ru) * 2019-11-14 2020-12-15 Николай Игоревич Васильев Способ реплантации корня для профилактики атрофии альвеолы
RU2788381C1 (ru) * 2021-11-01 2023-01-18 Общество с ограниченной ответственностью "Сентябрь" Способ пластики перфорации верхнечелюстного синуса с использованием аутотрансплантации третьего моляра

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2320285C2 (ru) * 2006-05-10 2008-03-27 Марина Дмитриевна Перова Способ восстановления кости альвеолярного гребня челюсти и тканей пародонта с редуцированным регенераторным потенциалом
US20110002895A1 (en) * 2007-12-05 2011-01-06 Minoru Ueda Composition for autotransplantation or allotransplantation using dental pulp stem cell, and use of the composition
EP2119769B1 (en) * 2007-02-06 2013-03-27 Matsumoto Dental University Method for production of hair and biomaterial
RU2523559C2 (ru) * 2009-01-28 2014-07-20 Орган Текнолоджиз, Инк. Способ создания зуба

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2320285C2 (ru) * 2006-05-10 2008-03-27 Марина Дмитриевна Перова Способ восстановления кости альвеолярного гребня челюсти и тканей пародонта с редуцированным регенераторным потенциалом
EP2119769B1 (en) * 2007-02-06 2013-03-27 Matsumoto Dental University Method for production of hair and biomaterial
US20110002895A1 (en) * 2007-12-05 2011-01-06 Minoru Ueda Composition for autotransplantation or allotransplantation using dental pulp stem cell, and use of the composition
RU2523559C2 (ru) * 2009-01-28 2014-07-20 Орган Текнолоджиз, Инк. Способ создания зуба

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
СКОГЛАНД А. Изменения в тканях незрелых собачьих зубов, аллотрансплантированные в хирургически приготовленные лунки. Сборник статей научно-практической конференции стоматологов Республики Башкортостан, 1996, C. 50-52. NAKAHARA T Potential feasibility of dental stem cells for regenerative therapies: stem cell transplantation and whole-tooth engineering. Odontology. 2011 Jul;99(2):105-11 abstr. CHAI Y et al. Prospects for tooth regeneration in the 21st century: a perspective. Microsc Res Tech. 2003 Apr 1;60(5):469-79 abstr. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2649452C1 (ru) * 2017-06-07 2018-04-03 Дмитрий Андреевич Журавлёв Способ имплантации искусственного зуба
RU2738668C1 (ru) * 2019-11-14 2020-12-15 Николай Игоревич Васильев Способ реплантации корня для профилактики атрофии альвеолы
RU2788381C1 (ru) * 2021-11-01 2023-01-18 Общество с ограниченной ответственностью "Сентябрь" Способ пластики перфорации верхнечелюстного синуса с использованием аутотрансплантации третьего моляра

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Anwandter et al. Dimensional changes of the post extraction alveolar ridge, preserved with Leukocyte-and Platelet Rich Fibrin: A clinical pilot study
Peck et al. Alveolar ridge preservation using leukocyte and platelet‐rich fibrin: a report of a case
Aimetti et al. Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report.
TWI607086B (zh) 牙科用植體及其製造方法
d’Aquino et al. Periosteum-derived micro-grafts for tissue regeneration of human maxillary bone
US20100203481A1 (en) Method and kit for delivering endodontic regenerative treatment
EP2268254A1 (en) Method and kit for delivering regenerative endodontic treatment
Natarajan Bone grafts in periodontal regeneration
Zanwar et al. Comparative evaluation of efficacy of stem cells in combination with PLA/PGA membrane versus sub-epithelial connective tissue for the treatment of multiple gingival recession defects: a clinical study
Mitrea et al. The Sinus Lift Procedure Applied in Cases Where the Thickness of the Alveolar Bone Is Insufficient Using Double Prf as Well as in the Case of an Intrasinus Mucocele
RU2605630C1 (ru) Способ аутотрансплантации зуба с сохранением жизнеспособности его пульпы
Żurek et al. Multiple gingival recession coverage with an allogeneic biostatic fascia lata graft using the tunnel technique—A histological assessment
Karpyuk et al. Innovation-based approach in reconstruction of reduced jaw alveolar ridge bone using cell regeneration technologies
Guerrero et al. Lateral Wall Sinus Floor Elevation: Revisiting Fundamentals and the Surgical Technique
RU2320285C2 (ru) Способ восстановления кости альвеолярного гребня челюсти и тканей пародонта с редуцированным регенераторным потенциалом
RU2368338C1 (ru) Способ восстановления тканей пародонта
Oortgiesen et al. Animal models for the evaluation of tissue engineering constructs
RU2377998C2 (ru) Способ лечения периимплантита в стоматологии
RU2286112C1 (ru) Способ реплантации зубов при пародонтите тяжелой степени
Gupta et al. Socket preservation at molar site using platelet rich fibrin and bioceramics for implant site development
RU2277423C1 (ru) Способ коррекции структурно-функциональных изменений соединительной ткани
Mansour et al. Evaluation of Mineralized Plasmatic Matrix as a grafting material around immediate dental implant in mandibular posterior teeth
Mizuno et al. Efficacy of membranous cultured periosteum for the treatment of patients with severe periodontitis: a proof-of-concept study
RU2344772C1 (ru) Способ лечения деструктивных форм хронического генерализованного пародонтита
Kwon et al. A novel technique for guided bone regeneration using platelet-rich plasma and osteogenic progenitor cells: Literature-based rationale and case report

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20181111