RU2603100C1 - Method for assessing effectiveness of antimicrobial action of antiseptic on bacteria in form of biofilm - Google Patents
Method for assessing effectiveness of antimicrobial action of antiseptic on bacteria in form of biofilm Download PDFInfo
- Publication number
- RU2603100C1 RU2603100C1 RU2015146730/10A RU2015146730A RU2603100C1 RU 2603100 C1 RU2603100 C1 RU 2603100C1 RU 2015146730/10 A RU2015146730/10 A RU 2015146730/10A RU 2015146730 A RU2015146730 A RU 2015146730A RU 2603100 C1 RU2603100 C1 RU 2603100C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antiseptic
- biofilm
- bacteria
- effect
- antiseptics
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
Abstract
Description
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к способам испытания материалов на антимикробную активность, и может быть использовано при определении эффективных мер лечения хронических инфекционных заболеваний кожи и слизистых оболочек человека в условиях моделирования в доклинических экспериментах.The invention relates to experimental medicine, namely to methods of testing materials for antimicrobial activity, and can be used to determine effective measures for the treatment of chronic infectious diseases of the skin and mucous membranes of a person under modeling conditions in preclinical experiments.
Одним из вариантов устойчивости бактерий к антибактериальным препаратам является способность микроорганизмов образовывать биопленку - трехмерную упорядоченную структуру, которая препятствует доступу антисептиков к нижним слоям клеток микроорганизмов, снижая эффективность антисептики. Установлено, что большинство стойких раневых бактериальных инфекций характеризуется наличием биопленок. Так, например, результаты электронной микроскопии показали, что 60% биоптатов, взятых из хронических ран, содержали биопленки. Формирование микробных биопленок на поверхности дренажных полимеров (катетерах, дренажных и интубационных трубках и т.д.) является частой причиной бактериальных инфекций у пациентов хирургических отделений. Трудности лечения хронических инфекций сводятся к тому, что бактерии в составе биопленки приобретают качественно новые свойства по сравнению с микроорганизмами, находящимися в планктонной форме. Кроме того, биопленки, как правило, состоят из микроорганизмов разных видов, что осложняет выбор эффективного антисептика и требует разработки методики, способной оценить антибактериальный эффект по отношению к микробным ассоциациям.One of the options for bacterial resistance to antibacterial drugs is the ability of microorganisms to form a biofilm - a three-dimensional ordered structure that prevents the access of antiseptics to the lower layers of microorganism cells, reducing the effectiveness of antiseptics. It has been established that most persistent wound bacterial infections are characterized by the presence of biofilms. For example, electron microscopy results showed that 60% of biopsy specimens taken from chronic wounds contained biofilms. The formation of microbial biofilms on the surface of drainage polymers (catheters, drainage and endotracheal tubes, etc.) is a common cause of bacterial infections in patients of surgical departments. Difficulties in the treatment of chronic infections boil down to the fact that bacteria in the biofilm acquire qualitatively new properties compared with microorganisms in planktonic form. In addition, biofilms, as a rule, consist of microorganisms of different types, which complicates the choice of an effective antiseptic and requires the development of a technique capable of evaluating the antibacterial effect in relation to microbial associations.
Важным требованием к антисептикам является конечный результат противомикробного действия, который может быть бактерицидным и бактериостатическим. При лечении острых инфекций достаточно бактериостатического действия антисептика, при котором антисептик задерживает рост микроорганизмов, а факторы иммунной системы заканчивают работу, начатую антисептиком, то есть тем или иным способом уничтожают поврежденные антисептиком микробные особи. Однако при лечении хронических, катетер ассоциированных и других инфекций, связанных с формированием микробных биопленок, необходимо использовать препараты с бактерицидным действием, так как иммунная система не в состоянии справиться с биопленкой и полностью элиминировать ее с поверхности слизистых оболочек и (или) дренажных полимеров.An important requirement for antiseptics is the end result of antimicrobial action, which can be bactericidal and bacteriostatic. In the treatment of acute infections, the bacteriostatic effect of an antiseptic is sufficient, in which the antiseptic inhibits the growth of microorganisms, and the factors of the immune system finish the work begun by the antiseptic, that is, in one way or another they destroy the microbial individuals damaged by the antiseptic. However, in the treatment of chronic, catheter-associated and other infections associated with the formation of microbial biofilms, it is necessary to use preparations with a bactericidal effect, since the immune system is not able to cope with the biofilm and completely eliminate it from the surface of the mucous membranes and (or) drainage polymers.
Определение эффективности антисептиков необходимо для оптимального индивидуального подбора антисептических средств при лечении и профилактике инфекций.Determining the effectiveness of antiseptics is necessary for the optimal individual selection of antiseptics in the treatment and prevention of infections.
Известен способ оценки эффективности антимикробного воздействия антибиотиков на патогенные бактерии, существующие в форме биопленки, представленный в патенте РФ №2457354, кл. C12Q 1/04, C12N 13/00, заявл. 22.02.2011, опубл. 27.07.2012 г.There is a method of evaluating the effectiveness of the antimicrobial effect of antibiotics on pathogenic bacteria existing in the form of biofilms, presented in the patent of the Russian Federation No. 2457354, class. C12Q 1/04, C12N 13/00, claimed 02/22/2011, publ. 07/27/2012
Известный способ оценки эффективности антимикробного воздействия антибиотиков и ультразвукового излучения на патогенные бактерии, существующие в форме биопленки, заключается в создании модели бактериальной биопленки, подборе доз воздействия антибиотиков и ультразвукового излучения на бактериальную биопленку, регистрации и оценке антимикробного эффекта и отличается тем, что в качестве модели бактериальной биопленки используют биопленку из биолюминесцентных бактерий Vibrio fischeri, при этом регистрацию воздействия антибиотиков и ультразвукового излучения на биопленку проводят путем измерения интенсивности свечения биолюминесцентных бактерий Vibrio fischeri, а антимикробный эффект оценивают по степени подавления интенсивности свечения по сравнению с контролем.A known method for evaluating the effectiveness of the antimicrobial effect of antibiotics and ultrasonic radiation on pathogenic bacteria existing in the form of a biofilm consists in creating a model of a bacterial biofilm, selecting doses of the effect of antibiotics and ultrasonic radiation on a bacterial biofilm, recording and evaluating the antimicrobial effect, and differs in that as a model bacterial biofilms use biofilms from bioluminescent bacteria Vibrio fischeri, while recording the effects of antibiotics and ultra sound radiation on the biofilm is carried out by measuring the intensity of the luminescence of bioluminescent bacteria Vibrio fischeri, and the antimicrobial effect is evaluated by the degree of suppression of the luminous intensity compared with the control.
Недостатком известного способа является использование в качестве модели биопленки из Vibrio fischeri - симбионта головоногих моллюсков и рыб. Эти бактерии обитают в световых органах гавайских кальмаров и глубоководных рыб, обеспечивая им свечение. Инфекции у человека Vibrio fischeri не вызывает, поэтому полученные данные об антимикробной активности препаратов в отношении биопленки из Vibrio fischeri трудно экстраполировать на биопленки из клинических штаммов. Известно, что разные виды микроорганизмов отличаются разной степенью природной и приобретенной устойчивости к антибактериальным препаратам. Так, например, биопленка, сформированная из Pseudomonas aeruginosa, содержит в своем составе клетки - персистеры, обладающие множественной устойчивостью к антибактериальным препаратам. Более того, в одном биотопе (например, в гнойной ране) могут находиться варианты возбудителей, различающиеся по спектру и уровню чувствительности к антибактериальным препаратам. Поэтому важно определять активность антисептиков по отношению к биопленкам, сформированным из тех видов микроорганизмов (или микробных ассоциаций), которые циркулируют в конкретном лечебном учреждении и выделены из клинического материала пациентов, нуждающихся в адекватном подборе активных антисептических средств.The disadvantage of this method is the use as a model of biofilms from Vibrio fischeri - a symbiont of cephalopods and fish. These bacteria live in the light organs of Hawaiian squid and deep-sea fish, providing them with a glow. Vibrio fischeri does not cause infection in humans, therefore, the obtained data on the antimicrobial activity of drugs in relation to biofilms from Vibrio fischeri is difficult to extrapolate to biofilms from clinical strains. It is known that different types of microorganisms differ in different degrees of natural and acquired resistance to antibacterial drugs. So, for example, a biofilm formed from Pseudomonas aeruginosa contains persister cells with multiple resistance to antibacterial drugs. Moreover, in one biotope (for example, in a purulent wound) there may be variants of pathogens that differ in spectrum and level of sensitivity to antibacterial drugs. Therefore, it is important to determine the activity of antiseptics in relation to biofilms formed from those types of microorganisms (or microbial associations) that circulate in a particular medical institution and are isolated from the clinical material of patients who need an adequate selection of active antiseptic agents.
Кроме того, указанный способ усложняет необходимость использования эталонного штамма Vibrio fischeri (который необходимо постоянно поддерживать на специальных питательных средах) и биолюминометра (этим дорогостоящим прибором оснащена далеко не каждая бактериологическая лаборатория). Использование воздействия ультразвука возможно и повышает эффективность воздействия антибиотиков, однако также усложняет сам способ.In addition, this method complicates the need to use a reference strain of Vibrio fischeri (which must be constantly maintained on special nutrient media) and a bioluminometer (not every bacteriological laboratory is equipped with this expensive device). Using the effects of ultrasound is possible and increases the effectiveness of antibiotics, however, it also complicates the method itself.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является способ оценки эффективности средств местного антисептического воздействия, описанный Тепляковой О.В., Соседовой Е.В и др. в материалах 2-й научно-практической школы-семинара молодых ученых по мероприятию «Поддержка развития внутрироссийской мобильности научных и научно-педагогических кадров путем выполнения научных исследований молодыми учеными и преподавателями в научно-образовательных центрах» Тольятти 18-21 декабря 2012 г. и выбранный в качестве прототипа.The closest in technical essence to the claimed one is a method for assessing the effectiveness of local antiseptic agents described by O. Teplyakova, E.V. Sosedova and others in the materials of the 2nd scientific-practical school-seminar for young scientists on the event "Support for the development of domestic Russian mobility scientific and scientific-pedagogical personnel by carrying out scientific research by young scientists and teachers in scientific and educational centers ”Togliatti December 18-21, 2012 and selected as a prototype.
Известный способ оценки эффективности средств местного антисептического воздействия заключается в изучении пленкообразующей способности микроорганизмов, определении чувствительности планктонных и диспергированных ультразвуком биопленочных форм микроорганизмов к антисептикам, смешанных с питательным бульоном в соотношении один к четырем, при этом регистрацию воздействия антисептика на микроорганизмы проводят путем определения наличия роста в опытной и контрольной (без антисептика) пробирках: при наличии роста в контрольной и отсутствии в опытной - культуру относят к клинически чувствительной, при наличии роста в обеих пробирках - к клинически устойчивой к изучаемому антисептику. При этом в качестве модели бактериальной биопленки используют биопленку из любых бактериальных культур и их ассоциаций, выделенных из клинического материала пациентов, которую выращивают на дренажных полимерах.A known method for evaluating the effectiveness of local antiseptic agents is to study the film-forming ability of microorganisms, to determine the sensitivity of planktonic and ultrasound dispersed biofilm forms of microorganisms to antiseptics mixed with nutrient broth in a ratio of one to four, while the effect of antiseptics on microorganisms is recorded by determining the presence of growth in experimental and control (without antiseptic) tubes: if there is growth in the control and from utstvii in the test - culture belongs to the clinical sensitivity in the presence of growth in both test tubes - a clinically studied resistant to antiseptics. Moreover, as a model of a bacterial biofilm, a biofilm from any bacterial cultures and their associations isolated from the clinical material of patients, which is grown on drainage polymers, is used.
Недостатком способа являются его низкая достоверность и не вполне удовлетворительная точность, обусловленные тем, что регистрацию чувствительности бактерий к антисептикам производят только визуально, эффективность препаратов оценивают только в одной концентрации, поэтому способ не позволяет выявить штаммы микроорганизмов, обладающие биологической устойчивостью к препаратам, т.е. устойчивостью к низким концентрациям. Между тем, ценность выявления биологической устойчивости заключается в том, что, обнаружив биологически устойчивые штаммы, можно заранее, до появления клинической устойчивости, ограничить или на какое-то время прекратить использовать в стационаре такой антисептик.The disadvantage of this method is its low reliability and not entirely satisfactory accuracy, due to the fact that registration of the sensitivity of bacteria to antiseptics is carried out only visually, the effectiveness of the drugs is evaluated only in one concentration, so the method does not allow to identify strains of microorganisms with biological resistance to drugs, i.e. . resistant to low concentrations. Meanwhile, the value of detecting biological resistance lies in the fact that, having discovered biologically resistant strains, it is possible to limit or temporarily stop using such an antiseptic in a hospital before the appearance of clinical resistance.
Кроме того, указанный способ не позволяет проводить дифференциацию бактерицидного и бактериостатического типа воздействия антисептика.In addition, this method does not allow the differentiation of the bactericidal and bacteriostatic type of antiseptic exposure.
Задачей заявляемого способа является расширение возможностей оценки эффективности антисептиков за счет обеспечения возможности дифференциации бактерицидного и бактериостатического типа действия, повышение точности и достоверности оценки результатов.The objective of the proposed method is to expand the ability to evaluate the effectiveness of antiseptics by providing the possibility of differentiating the bactericidal and bacteriostatic type of action, increasing the accuracy and reliability of evaluating the results.
Поставленная задача решается тем, что в способе оценки эффективности антимикробного воздействия антисептиков на бактерии, существующие в форме биопленки, заключающемся в создании модели бактериальной биопленки, в качестве которой используют биопленку из любых бактериальных культур и их ассоциаций, выделенных из клинического материала пациентов, которую выращивают на дренажных полимерах, в подборе доз воздействия антисептиков, регистрации и оценке антимикробного эффекта, проводимой по наличию роста микроорганизмов на питательном бульоне, СОГЛАСНО ИЗОБРЕТЕНИЮ регистрацию воздействия антисептиков на биопленку проводят дополнительно по изменению цвета питательной среды, ее помутнению в лунках планшета визуально и с помощью микропланшетного фотометра, дополнительно проводят высев содержимого лунок на питательный агар, по наличию или отсутствию роста на питательном агаре после воздействия антисептика определяют бактериостатический или бактерицидный тип действия на биопленочные формы бактерий, а эффект оценивают по индексу активности антисептика, который рассчитывают как отношение рабочей концентрации антисептика к его минимальной подавляющей концентрации, и при величине индекса 2-4 считают антисептик активным.The problem is solved in that in a method for assessing the effectiveness of the antimicrobial effect of antiseptics on bacteria existing in the form of a biofilm, which consists in creating a model of bacterial biofilm, which is used as a biofilm from any bacterial cultures and their associations isolated from the clinical material of patients grown on drainage polymers, in the selection of doses of antiseptic effects, the registration and evaluation of the antimicrobial effect, carried out by the presence of microbial growth on a nutrient In accordance with the invention, registration of the effect of antiseptics on the biofilm is carried out additionally by changing the color of the nutrient medium, its clouding in the wells of the tablet visually and using a microplate photometer, additionally, the contents of the holes are plated on nutrient agar, the presence or absence of growth on nutrient agar after exposure to antiseptics is determined bacteriostatic or bactericidal type of action on biofilm forms of bacteria, and the effect is evaluated by the antiseptic activity index, which is calculated yvayut as the ratio of the working concentration of the antiseptic to its minimum inhibitory concentration, and when the value of the index of 2-4 is considered an antiseptic active.
Комплексная регистрация воздействия антисептиков с учетом, помимо визуальных признаков наличия роста микроорганизмов, также изменения цвета питательной среды и ее помутнения с помощью микропланшетного фотометра повышает достоверность наличия воздействия, дополнительный высев содержимого лунок на питательный агар позволяет определить бактерицидный или бактериостатический тип действия антисептика на биопленочные формы бактерий, а оценка эффективности по индексу активности антисептика повышает точность оценки результатов.Comprehensive registration of the effect of antiseptics, taking into account, in addition to visual signs of the presence of growth of microorganisms, also a change in the color of the nutrient medium and its clouding using a microplate photometer increases the reliability of the effect, additional seeding of the contents of the wells on nutrient agar allows you to determine the bactericidal or bacteriostatic type of action of the antiseptic on biofilm forms of bacteria , and evaluating the effectiveness of the antiseptic activity index increases the accuracy of evaluating the results.
Технический результат - расширение эксплуатационных возможностей за счет обеспечения дифференциации бактерицидного и бактериостатического действия антисептиков, повышение достоверности и точности оценки воздействия антисептика на бактерии, существующие в форме биопленки.The technical result is the expansion of operational capabilities by ensuring the differentiation of the bactericidal and bacteriostatic effects of antiseptics, increasing the reliability and accuracy of assessing the effects of antiseptics on bacteria existing in the form of biofilms.
Заявляемый способ обладает новизной в сравнении с прототипом, отличаясь от него такими существенными признаками, как проведение не только более полной визуальной, но и колориметрической регистрации воздействия антисептиков на биопленку по изменению цвета питательной среды и ее помутнению в лунках планшета, определением бактерицидного или бактериостатического типа воздействия антисептика, оценкой эффекта по индексу активности антисептика, который рассчитывают как отношение рабочей концентрации антисептика к его минимальной подавляющей концентрации, и при величине индекса 2-4 считают антисептик активным, обеспечивающими в совокупности достижение заданного результата.The inventive method has a novelty in comparison with the prototype, differing from it by such significant features as conducting not only a more complete visual, but also colorimetric registration of the effect of antiseptics on the biofilm by changing the color of the nutrient medium and its turbidity in the wells of the tablet, determining the bactericidal or bacteriostatic type of exposure antiseptic, by evaluating the effect of the antiseptic activity index, which is calculated as the ratio of the working concentration of the antiseptic to its minimum suppression guide concentration, and the index value of 4.2 is considered active antiseptic providing collectively achieve the desired result.
Хотя такие признаки, как регистрация воздействия антисептиков на бактерии по изменению цвета питательной среды, ее помутнению в лунках планшета, сами по себе и известны, однако одновременное их использование в совокупности с определением бактерицидного или бактериостатического типа действия антисептика дает возможность существенно расширить возможности оценки эффективности действия антисептика, повысить достоверность регистрации такого воздействия для проведения последующей оценки эффекта воздействия по индексу активности антисептика, обеспечивающего более высокую точность оценки, поэтому заявитель считает, что заявляемый способ соответствует критерию «изобретательский уровень».Although signs such as registration of the effect of antiseptics on bacteria by changing the color of the nutrient medium, its clouding in the wells of the tablet are known per se, their simultaneous use, together with the determination of the bactericidal or bacteriostatic type of action of the antiseptic, makes it possible to significantly expand the ability to evaluate the effectiveness antiseptic, increase the reliability of registration of such exposure for subsequent assessment of the effect of exposure on the antis activity index a chemist who provides a higher accuracy of the assessment, therefore, the applicant believes that the claimed method meets the criterion of "inventive step".
Заявляемый способ может найти применение в экспериментальной медицине как средство испытания материалов на антимикробную активность и может быть использован при определении эффективных мер лечения хронических инфекционных заболеваний кожи и слизистых оболочек человека в условиях моделирования в доклинических экспериментах, а потому соответствует критерию «промышленная применимость».The inventive method can be used in experimental medicine as a means of testing materials for antimicrobial activity and can be used to determine effective measures for the treatment of chronic infectious diseases of the skin and mucous membranes of a person under modeling conditions in preclinical experiments, and therefore meets the criterion of "industrial applicability".
Изобретение иллюстрируется чертежами, где представлены на:The invention is illustrated by drawings, which are presented in:
фиг. 1 - схема этапов исследования;FIG. 1 is a diagram of the stages of the study;
фиг. 2 - схема титрования антисептика;FIG. 2 - titration scheme of an antiseptic;
фиг. 3 - определение минимальной бактериостатической концентрации и индекса активности антисептика у антисептиков с разной рабочей концентрацией.FIG. 3 - determination of the minimum bacteriostatic concentration and antiseptic activity index in antiseptics with different working concentrations.
Заявляемый способ заключается в следующем.The inventive method is as follows.
Для оценки эффективности антимикробного воздействия антисептиков на бактерии, существующие в форме биопленки, создают модель бактериальной биопленки, в качестве которой используют биопленку из любых бактериальных культур и их ассоциаций, выделенных из клинического материала пациентов, которую выращивают на дренажных полимерах. Затем воздействуют на биопленку различными концентрациями антисептиков. Далее регистрируют воздействие антисептиков на биопленку по наличию роста микроорганизмов в питательном бульоне, по изменению цвета питательной среды, ее помутнению в лунках планшета визуально и с помощью микропланшетного фотометра. Определяют бактерицидный или бактериостатический тип действия антисептика по отсутствию или наличию роста бактерий на питательном агаре. Эффект воздействия оценивают по индексу активности антисептика, который рассчитывают как отношение рабочей концентрации антисептика к его минимальной подавляющей концентрации, и при величине индекса 2-4 считают антисептик активным.To assess the effectiveness of the antimicrobial effect of antiseptics on bacteria existing in the form of a biofilm, a model of a bacterial biofilm is created, using a biofilm from any bacterial cultures and their associations isolated from the clinical material of patients grown on drainage polymers. Then they act on the biofilm with various concentrations of antiseptics. Next, the effect of antiseptics on the biofilm is recorded by the presence of microorganism growth in the nutrient broth, by the color change of the nutrient medium, its clouding in the wells of the tablet visually and using a microplate photometer. The bactericidal or bacteriostatic type of action of an antiseptic is determined by the absence or presence of bacterial growth on nutrient agar. The effect of the effect is evaluated by the antiseptic activity index, which is calculated as the ratio of the working concentration of the antiseptic to its minimum inhibitory concentration, and when the index is 2-4, the antiseptic is considered active.
Ниже описан пример практического осуществления способа с указанием используемых материалов, средств и технологии выполнения необходимых действий.An example of the practical implementation of the method is described below, indicating the materials, means and technology used to carry out the necessary actions.
1. Используемые материалы1. Materials used
1.1. Жидкая цветная питательная среда1.1. Liquid color culture medium
Основой служит питательный бульон из панкреатического гидролизата с добавлением 0,5% глюкозы и 0,002% индикатора бром-крезолового пурпурного. С помощью раствора 1%-ного NaOH pH цветной питательной среды доводят до 7,6-7,7. Среду стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 20 мин. Стерильная питательная среда имеет pH 7,2-7,4, окрашена в яркий сиреневый цвет. При температуре 4-6°С среда сохраняется не менее 3 лет.The basis is a nutrient broth from pancreatic hydrolyzate with the addition of 0.5% glucose and 0.002% indicator of bromine-cresol purple. Using a solution of 1% NaOH, the pH of the colored nutrient medium is adjusted to 7.6-7.7. The medium is sterilized in an autoclave at 120 ° C for 20 minutes. Sterile culture medium has a pH of 7.2-7.4, is painted in a bright lilac color. At a temperature of 4-6 ° C, the environment persists for at least 3 years.
Цветная питательная среда способна поддерживать рост единичных клеток эталонных культур бактерий - Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Bacillus cereus и других видов аэробных бактерий.The colored culture medium is able to support the growth of single cells of the reference bacterial cultures - Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Bacillus cereus and other types of aerobic bacteria.
1.2. Испытуемая культура микроорганизмов1.2. Microorganism test culture
Бактериальную культуру выращивают на питательном агаре 20-24 часа при оптимальной для данного вида бактерий температуре. Микробный урожай снимают с поверхности агара стерильной бактериологической петлей и готовят инокулят в физиологическом растворе, по стандарту мутности соответствующему 0,5 McFarland (1×108 КОЕ/мл).The bacterial culture is grown on nutrient agar for 20-24 hours at the optimum temperature for this type of bacteria. The microbial harvest is removed from the surface of the agar with a sterile bacteriological loop and the inoculum is prepared in physiological saline according to the turbidity standard corresponding to 0.5 McFarland (1 × 10 8 CFU / ml).
2. При этом используют следующие материалы и средства.2. The following materials and means are used.
2.1. Стерильные одноразовые 96-луночные пластиковые планшеты с плоским дном, объем лунок 200 мкл.2.1. Sterile, single-use, 96-well plastic bottom plates with a flat bottom, 200 µl well volume.
2.2. Автоматические восьми- и одноканальные пружинные пипетки объемом от 10 до 200 мкл.2.2. Automatic eight- and single-channel spring pipettes with a volume of 10 to 200 μl.
2.3. Стерильные съемные наконечники.2.3. Sterile removable tips.
2.4. Испытуемые антисептики.2.4. Tested antiseptics.
2.5. Стерильные диски из полимерных носителей.2.5. Sterile discs made of polymer carriers.
Для изготовления дисков используют катетеры «Нелатона» диаметром 14 мм из поливинилхлорида или катетеры Фолея диаметром 30 мм из латекса.For the manufacture of disks, Nelaton catheters with a diameter of 14 mm from polyvinyl chloride or Foley catheters with a diameter of 30 mm from latex are used.
Площадь поверхности каждого кусочка из поливинилхлорида рассчитывают по формуле: S=π(R2-r2). Так как каждый кусочек делят пополам площадь поверхности рассчитывают по формуле S=π(R2-r2)/2. Таким образом, площадь каждого кусочка равна 0,25 см2.The surface area of each piece of polyvinyl chloride is calculated by the formula: S = π (R 2 -r 2 ). Since each piece is divided in half, the surface area is calculated by the formula S = π (R 2 -r 2 ) / 2. Thus, the area of each piece is 0.25 cm 2 .
Дренажные полимеры нарезают в стерильных условиях в ламинарном боксе. После нарезки кусочки помещают под ультрафиолетовую лампу на 30 минут.Drainage polymers are cut under sterile conditions in a laminar box. After cutting, the pieces are placed under an ultraviolet lamp for 30 minutes.
2.6. Стерильные одноразовые пластиковые квадратные (120×120 мм) чашки Петри или круглые чашки Петри (диаметром 140 мм).2.6. Sterile disposable plastic square (120 × 120 mm) Petri dishes or round Petri dishes (140 mm in diameter).
2.7. Прозрачный питательный агар (можно Мюллер Хингтон).2.7. Transparent nutrient agar (can Muller Hington).
2.8. Трафарет на 96 зон.2.8. Stencil for 96 zones.
Трафарет представляет собой кусок плотной белой бумаги, формой и величиной равный дну квадратной или круглой чашки Петри. На трафарете отпечатывают смоченные тушью наконечники, надетые на 8-канальную автоматическую пипетку. Затем места отпечатков на бумаге нумеруют, присваивая буквенный и цифирный код согласно нумерации лунок планшета.A stencil is a piece of thick white paper, the shape and size of which is equal to the bottom of a square or round Petri dish. On the screen, ink tips moistened with ink are put on an 8-channel automatic pipette. Then the places of prints on paper are numbered, assigning a letter and number code according to the numbering of the wells of the tablet.
2.9. Стерильные чашки Петри.2.9. Sterile Petri dishes.
2.10. Мясопептонный бульон (МПБ) для выращивания биопленки на полимерных носителях.2.10. Meat peptone broth (BCH) for growing biofilms on polymer carriers.
2.11. Бактериологические петли, спиртовка.2.11. Bacteriological loops, spirit lamp.
2.12. Дезинфицирующий раствор.2.12. Disinfectant solution.
2.13. Микропланшетный фотометр с длиной волны 450 нм.2.13. Microplate photometer with a wavelength of 450 nm.
3. Этапы исследования3. Stages of the study
Схема этапов исследования представлена на фиг. 1. Для тестирования одного антисептика используют два планшета: один для приготовления разведений антисептика, второй для выращивания биопленки. Число микроорганизмов, включенных в испытание - 8 штук, что соответствует числу горизонтальных рядов планшета.A diagram of the stages of the study is shown in FIG. 1. Two tablets are used to test one antiseptic: one for preparing dilutions of an antiseptic, the second for growing biofilms. The number of microorganisms included in the test is 8 pieces, which corresponds to the number of horizontal rows of the tablet.
3.1. Стерильные диски из полимерных носителей кладут в стерильную чашку Петри.3.1. Sterile disks from polymer carriers are placed in a sterile Petri dish.
3.2. Испытуемую культуру микроорганизмов (108 КОЕ/мл) смешивают с мясопептонным бульоном (МПБ) в соотношении 1:1 (конечная концентрация клеток - 5×107 КОЕ/мл) и разливают в чашки Петри со стерильными полимерными носителями. Количество бульона подбирается опытным путем (уровень жидкости должен полностью скрывать кусочки полимеров). Количество чашек Петри зависит от количества дней исследования: если биопленку выращивают 3 дня, то на каждый вид микроорганизма по 3 чашки (подписать первые сутки, вторые, третьи).3.2. The test microorganism culture (10 8 CFU / ml) is mixed with meat-peptone broth (MPB) in a 1: 1 ratio (final cell concentration is 5 × 10 7 CFU / ml) and poured into Petri dishes with sterile polymer carriers. The amount of broth is selected empirically (the liquid level should completely hide pieces of polymers). The number of Petri dishes depends on the number of study days: if a biofilm is grown for 3 days, then 3 cups for each type of microorganism (sign the first day, second, third).
3.3. Разведения антисептика готовят в стерильном планшете в день окончания инкубации биопленки. Схема титрования антисептика представлена на фиг. 2. Во все лунки планшета 8-канальной автоматической пипеткой со стерильными съемными наконечниками вносят по 100 мкл цветной питательной среды.3.3. Antiseptic dilutions are prepared in a sterile plate on the day the biofilm incubation ends. An antiseptic titration scheme is shown in FIG. 2. 100 μl of colored culture medium is added to all wells of the plate with an 8-channel automatic pipette with sterile removable tips.
3.4. В первые лунки вертикального ряда и в лунку А12 вносят по 100 мкл антисептика в концентрации, рекомендованной для практики.3.4. In the first wells of the vertical row and in well A12, 100 μl of an antiseptic is added at a concentration recommended for practice.
3.5. В лунках горизонтальных рядов методом титрования готовят двукратные убывающие разведения антисептика в цветной питательной среде, последовательно перенося по 100 мкл смеси среды и антисептика с первого по девятый ряд лунок (10, 11 и 12 ряды лунок оставляют для контроля). Из девятой лунки 100 мкл смеси антисептика в питательной среде сливают в дезинфицирующий раствор.3.5. Twice decreasing dilutions of an antiseptic in a colored nutrient medium are prepared by titration in the wells of horizontal rows by transferring 100 μl of a mixture of medium and antiseptic from the first to the ninth row of wells in succession (10, 11 and 12 rows of holes are left for control). From the ninth well, 100 μl of an antiseptic mixture in a nutrient medium is poured into a disinfectant solution.
3.6. В лунках А12-D12 методом титрования готовят двукратные разведения препарата для контроля изменения цвета среды антисептиком.3.6. Twice dilutions of the preparation are prepared by titration in wells A12-D12 to control the color change of the medium with an antiseptic.
3.7. Кусочки дренажных полимеров с биопленкой переносят из чашки Петри в планшет с приготовленными разведениями антисептика. Для каждого вида микроорганизмов 1 горизонтальный ряд лунок (с 1 по 11). 12 ряд остается для контроля.3.7. Pieces of drainage polymers with biofilm are transferred from a Petri dish to a plate with prepared dilutions of an antiseptic. For each type of microorganism, 1 horizontal row of holes (1 to 11). 12 row remains for control.
3.8. Планшет накрывают крышкой и переносят в термостат с температурой, оптимальной для данного вида бактерий (как правило, 37°С) на 24 часа. Следят за тем, чтобы жидкость в лунках не касалась крышки.3.8. The tablet is covered with a lid and transferred to a thermostat with a temperature optimal for this type of bacteria (usually 37 ° C) for 24 hours. Make sure that the liquid in the wells does not touch the lid.
3.9. Разливают питательный агар Мюллер Хингтон в стерильные квадратные или круглые чашки Петри.3.9. Müller Hington nutrient agar is poured into sterile square or round Petri dishes.
3.10. На поверхность чашки накладывают трафарет и маркером наносят зоны, соответствующие каждой лунке планшета.3.10. A stencil is applied to the surface of the cup and the marker is applied to the zones corresponding to each well of the plate.
3.11. После инкубации содержимое всех лунок планшета с помощью восьмиканальной пипетки (по 10 мкл) или бактериологической петли высевают на поверхность агара в соответствии с нанесенной маркировкой.3.11. After incubation, the contents of all wells of the tablet using an eight-channel pipette (10 μl) or bacteriological loop are seeded on the surface of the agar in accordance with the marking.
3.15. Подсушивают капли посевной жидкости на агаре и убирают чашки в термостат 37°С на 24 часа.3.15. Dried drops of inoculum on agar and remove the cups in a 37 ° C thermostat for 24 hours.
4. Учет результатов анализа.4. Accounting for the results of the analysis.
О наличии роста бактерий в лунках с соответствующим разведением антисептика судят по изменению цвета среды с сиреневого на желтый. Некоторые антисептики (например, «Бетадин» и «Йодопирон») могут искажать цвет питательной среды. Поэтому, кроме изменения цвета, учитывают еще один признак - помутнение питательной среды в лунках. Учет результатов дополнительно проводят инструментальным способом: по окончании экспозиции планшет помещают в микропланшетный фотометр с длиной волны 450 нм (например, аппарат типа Multiscan, ридер BIO-RAD Model 680 или любой другой микропланшетный фотометр для иммуноферментного анализа и биохимических исследований с диапазоном длин волн 400-750 нм) и получают в распечатке цифровые интенсивности цвета в лунках.The presence of bacterial growth in the wells with an appropriate dilution of the antiseptic is judged by the color change of the medium from lilac to yellow. Some antiseptics (for example, "Betadine" and "Iodopiron") can distort the color of the nutrient medium. Therefore, in addition to color changes, one more sign is taken into account - turbidity of the nutrient medium in the wells. The results are additionally carried out by instrumental means: at the end of the exposure, the tablet is placed in a microplate photometer with a wavelength of 450 nm (for example, a Multiscan device, a BIO-RAD Model 680 reader, or any other microplate photometer for enzyme immunoassay and biochemical studies with a wavelength range of 400- 750 nm) and the digital intensities of color in the wells are obtained in a printout.
Использование мутности для учета результатов невозможно для тех антисептиков, которые при добавлении к цветной питательной среде образуют выраженную опалесценцию. В таком случае возможна регистрация минимальной бактерицидной концентрации по наличию роста на агаре Мюллер Хингтон после высева содержимого лунок с соответствующим разведением антисептика.The use of turbidity to take into account the results is impossible for those antiseptics that, when added to a colored nutrient medium, form pronounced opalescence. In this case, it is possible to register the minimum bactericidal concentration by the presence of growth on Muller Hington agar after plating the contents of the wells with an appropriate dilution of an antiseptic.
В лунках, где цвет среды не менялся и цифровые интенсивности цвета соответствовали контролю, а высев на чашке давал рост, антисептик проявлял бактериостатическое действие, т.е. задерживал рост бактерий. В лунках, где цвет среды не менялся, цифровые интенсивности цвета соответствовали контролю и высев на чашке не давал рост, антисептик проявлял бактерицидную активность.In the wells, where the color of the medium did not change and the digital intensities of the color corresponded to the control, and seeding on the plate gave growth, the antiseptic showed a bacteriostatic effect, i.e. delayed the growth of bacteria. In the wells where the color of the medium did not change, the digital intensities of the color corresponded to the control and the plating on the plate did not grow, the antiseptic showed bactericidal activity.
4.1. Оценка результата анализа4.1. Evaluation of the analysis result
Для каждого исследованного штамма микроорганизма определяют минимальную бактериостатическую концентрацию препарата (фиг. 3). Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) определяют по отсутствию роста в лунке с максимальным разведением препарата. МПК зависит от начального разведения антисептика, и у антисептиков с различной концентрацией активного вещества эта величина будет отличаться, даже если эти препараты проявляют одинаковую активность. Поэтому для оценки эффективности антисептических средств лучше пользоваться индексом активности антисептика (ИАА).For each studied strain of the microorganism, the minimum bacteriostatic concentration of the drug is determined (Fig. 3). The minimum inhibitory concentration (MIC) is determined by the absence of growth in the well with the maximum dilution of the drug. MPC depends on the initial dilution of the antiseptic, and for antiseptics with different concentrations of the active substance, this value will differ, even if these drugs show the same activity. Therefore, to assess the effectiveness of antiseptic agents, it is better to use the antiseptic activity index (IAA).
Для каждой культуры ИАА рассчитывают как отношение рабочей концентрации антисептика к его МПК. Таким образом, если МПК - это величина, числовые значения которой для каждого антисептика будут различны, то числовые значения ИАА, по сути, отражают кратность разведения антисептика, при которой он способен подавлять рост бактерий. По данным литературы, активность антисептиков в ранах и на слизистых оболочках в результате разбавления, резорбции, инактивации и ингибиции снижается в среднем в 4 раза. Исходя из этого, терапевтическая концентрация составляет 1/4 рабочей, которая и является дифференцирующей бактерии на клинически чувствительные и устойчивые. То есть антисептик можно считать эффективным, если он способен подавлять рост бактерий в четырехкратном разведении (ИАА=4), а микроорганизмы, рост которых подавляется указанным разведением антисептика, следует относить к чувствительным.For each culture, IAA is calculated as the ratio of the working concentration of the antiseptic to its BMD. Thus, if BMD is a quantity whose numerical values for each antiseptic will be different, then the numerical values of IAA, in fact, reflect the multiplicity of dilution of the antiseptic at which it is able to inhibit bacterial growth. According to the literature, the activity of antiseptics in wounds and on mucous membranes as a result of dilution, resorption, inactivation and inhibition decreases by an average of 4 times. Based on this, the therapeutic concentration is 1/4 working, which is a differentiating bacterium for clinically sensitive and resistant. That is, an antiseptic can be considered effective if it is able to suppress the growth of bacteria in four-fold dilution (IAA = 4), and microorganisms whose growth is suppressed by the indicated dilution of the antiseptic should be classified as sensitive.
4.2. Статистическая обработка результатов исследования4.2. Statistical processing of research results
На практике часто возникает ситуация, когда разные антисептики по результатам исследований могут быть признаны активными, но для одних значения ИАА чуть больше или равны 4, а для других ИАА много больше 4. Для сравнительной характеристики активности различных антисептиков очень удобно использовать средние значения ИАА с вычислением 95%-ных доверительных интервалов (95% ДИ). Расчет среднего геометрического значения ИАА с вычислением 95% доверительных интервалов (ДИ) для оценки значимости различий в активности антисептиков можно проводить с использованием программ Past, Microsoft Exel, Statistica или других статистических программ. Оценка значимости различий в активности антисептиков проводится методом оценки гипотез с расчетом уровня p и методом доверительных интервалов (ДИ). Если два доверительных интервала не имеют общих значений и уровень значимости p меньше 0,05, различия между группами признаются статистически значимыми.In practice, a situation often arises where, according to the results of studies, different antiseptics can be considered active, but for some IAA values are slightly greater than or equal to 4, and for others IAA are much greater than 4. For comparative characteristics of the activity of different antiseptics, it is very convenient to use the average values of IAA with the calculation 95% confidence intervals (95% CI). The calculation of the geometric mean value of IAA with the calculation of 95% confidence intervals (CI) to assess the significance of differences in the activity of antiseptics can be performed using Past, Microsoft Exel, Statistica, or other statistical programs. The significance of differences in the activity of antiseptics is assessed by the method of evaluating hypotheses with the calculation of the level p and the method of confidence intervals (CI). If two confidence intervals do not have common values and the significance level p is less than 0.05, the differences between groups are recognized as statistically significant.
Используя программу KyPlot (или другую статистическую программу), строят графики, характеризующие активность антисептиков по отношению к микроорганизмам в составе биопленки.Using the KyPlot program (or another statistical program), build graphs characterizing the activity of antiseptics in relation to microorganisms in the biofilm.
5. Контроль пленкообразующей активности микроорганизмов5. Control of the film-forming activity of microorganisms
Для оценки способности микроорганизмов к образованию биопленок диски с выросшей биопленкой вносят в лунки стерильного планшета 1 горизонтальный ряд - 1 культура (из одной чашки Петри).To assess the ability of microorganisms to form biofilms, discs with grown biofilm bring 1 horizontal row - 1 culture (from one Petri dish) into the wells of a sterile plate.
Производят промывку содержимого лунок (для удаления непрочно связавшихся с полимерным носителем клеток микроорганизмов) физиологическим раствором: внесение в каждую лунку по 100 мкл физраствора с последующим удалением в дезинфицирующий раствор.The contents of the wells are washed (to remove microorganisms cells that have not been firmly bound to the polymer carrier) with physiological saline: 100 μl of saline solution is added to each well, followed by removal into the disinfectant solution.
Проводят окрашивание содержимого лунок планшета 1%-ной метиленовой синью (вносят по 50 мкл красителя и выдерживают 10 минут).The contents of the plate wells are stained with 1% methylene blue (50 μl of dye is added and kept for 10 minutes).
Краситель удаляют из лунок, трехкратно промывают физиологическим раствором (по 100 мкл в лунку).The dye is removed from the wells, washed three times with physiological saline (100 μl per well).
Готовят спиртовую вытяжку красителя закрепившегося в матриксе биопленки. Для этого в каждую лунку добавляют 96% этиловый спирт по 100 мкл. Выдерживают при комнатной температуре в течение десяти минут.An alcohol extract is prepared for the dye fixed in the biofilm matrix. To do this, 96% ethanol of 100 μl is added to each well. It is kept at room temperature for ten minutes.
После приготовления спиртовой вытяжки полимерные носители удаляют из лунок в дезинфицирующий раствор.After preparation of the alcohol extract, polymer carriers are removed from the wells into a disinfectant solution.
Для оценки степени интенсивности биопленкообразования измеряют оптическую плотность спиртовой вытяжки красителя в микропланшетном фотометре при длине волны 450 нм. Интенсивность окрашивания свидетельствует о степени биопленкообразования исследуемых культур: за условную единицу (у.е.) интенсивности биопленкообразования (БПО) принимается соотношение оптической плотности в опыте и контроле (OD питательного бульона). Если интенсивность биопленкообразования OD=0,25, то культура считается способной к биопленкообразованию.To assess the degree of intensity of biofilm formation, the optical density of the alcohol extract of the dye is measured in a microplate photometer at a wavelength of 450 nm. The intensity of staining indicates the degree of biofilm formation of the studied cultures: the ratio of optical density in the experiment and control (OD of nutrient broth) is taken as a unit (cu) of intensity of biofilm formation (BPO). If the intensity of biofilm formation is OD = 0.25, then the culture is considered capable of biofilm formation.
6. Меры предосторожности6. Precautions
Все манипуляции, связанные с определением активности антисептиков, проводят в специальных лотках (кюветах), которые вместе с содержимым переносят в термостат. По окончании анализа все материалы подлежат обеззараживанию посредством погружения в дезинфицирующий раствор. Многократно промытые водой предметы стерилизуют при 120°С в течение 45 мин в автоклаве. Предметы однократного пользования обеззараживают и утилизируют.All manipulations associated with determining the activity of antiseptics are carried out in special trays (ditches), which, together with the contents, are transferred to a thermostat. At the end of the analysis, all materials are subject to disinfection by immersion in a disinfectant solution. Repeatedly washed with water items are sterilized at 120 ° C for 45 minutes in an autoclave. Disposable items are disinfected and disposed of.
В сравнении с прототипом заявляемый способ является более достоверным и точным, позволяя определить бактерицидный или бактериостатический тип действия антисептика, подобрать минимальные дозы использования антисептика, выявить наличие биологической устойчивости к препаратам, что позволяет заранее, до появления клинической устойчивости, ограничить или на какое-то время прекратить использовать в стационаре такой антисептик, вследствие чего имеет более широкие эксплуатационные возможности.Compared with the prototype, the claimed method is more reliable and accurate, allowing you to determine the bactericidal or bacteriostatic type of action of an antiseptic, select the minimum dose of antiseptic, identify the presence of biological resistance to drugs, which allows you to limit, or for some time, in advance of clinical resistance stop using such an antiseptic in a hospital, as a result of which it has wider operational capabilities.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015146730/10A RU2603100C1 (en) | 2015-10-29 | 2015-10-29 | Method for assessing effectiveness of antimicrobial action of antiseptic on bacteria in form of biofilm |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015146730/10A RU2603100C1 (en) | 2015-10-29 | 2015-10-29 | Method for assessing effectiveness of antimicrobial action of antiseptic on bacteria in form of biofilm |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2603100C1 true RU2603100C1 (en) | 2016-11-20 |
Family
ID=57760188
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015146730/10A RU2603100C1 (en) | 2015-10-29 | 2015-10-29 | Method for assessing effectiveness of antimicrobial action of antiseptic on bacteria in form of biofilm |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2603100C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2810760C1 (en) * | 2022-08-08 | 2023-12-28 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова" РАН | Method for evaluating the effectiveness of disinfection of microbial biofilms on various surfaces |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2262533C2 (en) * | 2003-05-20 | 2005-10-20 | Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова | Method for assay of microorganism sensitivity to antibiotic in treatment of suppurative-inflammatory process |
| RU2457254C1 (en) * | 2011-02-22 | 2012-07-27 | Российская Федерация, в лице которой выступает Министерство образования и науки Российской Федерации | Method for estimating effectiveness of antimicrobial action of antibiotics and ultrasound on pathogenic bacteria in form of biofilm |
| RU2505813C1 (en) * | 2012-11-06 | 2014-01-27 | Виктор Вениаминович Тец | Method for determining microorganism sensitivity to antimicrobial substances |
| UA89438U (en) * | 2013-09-19 | 2014-04-25 | Государственное Учреждение Институт Эпидемиологии И Инфекционных Заболеваний Им. Л.В. Громашевского Национальной Академии Медицинских Наук Украины | Method for detection of sensitivity of biofilm microorganisms towards disinfectants of different groups of chemical compounds |
-
2015
- 2015-10-29 RU RU2015146730/10A patent/RU2603100C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2262533C2 (en) * | 2003-05-20 | 2005-10-20 | Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова | Method for assay of microorganism sensitivity to antibiotic in treatment of suppurative-inflammatory process |
| RU2457254C1 (en) * | 2011-02-22 | 2012-07-27 | Российская Федерация, в лице которой выступает Министерство образования и науки Российской Федерации | Method for estimating effectiveness of antimicrobial action of antibiotics and ultrasound on pathogenic bacteria in form of biofilm |
| RU2505813C1 (en) * | 2012-11-06 | 2014-01-27 | Виктор Вениаминович Тец | Method for determining microorganism sensitivity to antimicrobial substances |
| UA89438U (en) * | 2013-09-19 | 2014-04-25 | Государственное Учреждение Институт Эпидемиологии И Инфекционных Заболеваний Им. Л.В. Громашевского Национальной Академии Медицинских Наук Украины | Method for detection of sensitivity of biofilm microorganisms towards disinfectants of different groups of chemical compounds |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Isenberg H.D. Essential procedures for clinical microbiology.// ASM-Press, USA, 1998, p.216-223. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2810760C1 (en) * | 2022-08-08 | 2023-12-28 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова" РАН | Method for evaluating the effectiveness of disinfection of microbial biofilms on various surfaces |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2739905T3 (en) | Method to determine the sensitivity of microorganisms to antimicrobial substances | |
| KR101908411B1 (en) | Novel domestic-type methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains and screening method for inhibiting biofilm formation | |
| Arjyal et al. | Prevalence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in shrines | |
| Biadglegne et al. | Bacterial isolates from wound infection and their antimicrobial susceptibility pattern in Felege Hiwot referral Hospital North West Ethiopia | |
| Kovalchuk et al. | Biofilm forming activity of non-fermenting gram-negative bacteria | |
| Fadl | Antibacterial and antibiofilm effects of bee venom from (Apis mellifera) on multidrug-resistant bacteria (MDRB) | |
| WO2019012321A1 (en) | Test device for determining minimum inhibitory concentration and anti-microbial resistance in pathogenic/ non- pathogenic organisms | |
| RU2603100C1 (en) | Method for assessing effectiveness of antimicrobial action of antiseptic on bacteria in form of biofilm | |
| RU2435864C1 (en) | Method of probiotic cell treatment with contained small non-productive animals in veterinary hospital environment | |
| Anton et al. | Formalin Resistant Fungi Isolated from Cadavers at a Medical School’s Dissection Hall in Malaysia. | |
| Ugochukwu et al. | Antimicrobial Susceptibility Pattern of Microorganisms Isolated from Abattoirs in Awka Metropolis, Anambra State, Nigeria | |
| Mocherniuk et al. | Identification of the bioaerosol microbiota in veterinary clinics as the key to preventing nosocomial infection | |
| RU2628098C2 (en) | Method for assessment of cholera vibrio biofilms sensitivity to antibacterial drugs | |
| Ejimofor et al. | Antimicrobial efficiency of commonly used disinfectants against Escherichia coli and Staphylococcus aureus | |
| Raheem | Isolation and identification of types of biofilms-forming bacteria isolated from environmental samples and their production of beta-Lactamases enzymes | |
| RU2451294C1 (en) | Method of local antiseptic choice during various periods of burn disease | |
| Ahmed et al. | BACTERIOLOGICAL STUDY OF COAGULASE-NEGATIVE Staphylococcus spp ISOLATED FROM URINARY TRACT INFECTION AND THEIR RESISTANCE TO ANTIBIOTICS | |
| Khan et al. | Prevalence and Characterization of Antibiotic Resistant Micro-Organisms Isolated from Laboratories of different Universities | |
| Abdullatef et al. | The Bacterial Contamination of the Operating lounges in Hospitals of Al-Diwaniyah Province with the Two types of Intestinal E. coli and St. aureus Cutaneous. | |
| RU2289812C2 (en) | Method for evaluation of antibacterial effect of ozonized physiological solution (ops) | |
| Abdulsahib et al. | Intestinal Escherichia coliand Cutaneous Staphylococcus aureus Bacterial Contamination of the Operation Lounges in Al-Diwaniyah Province Hospitals | |
| RU2273854C2 (en) | Method for selecting individual effective chemotherapeutic means for treating the cases of inflammatory diseases of microbial etiology | |
| Alwan et al. | The effect of propolis ethanolic extract on negative and positive bacteria in vitro and in vivo | |
| Saiyan et al. | Characterization of acinetobacter baumannii from hospital-adjacent waterbodies in Dhaka city | |
| Isa et al. | Evaluation of Antibacterial Activity of Different Honey samples on Staphylococcus aureus, Klebsilla pneumoniae and Escherichia coli Isolated from Wounds |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171030 |