RU2600860C2 - Method for prediction of predisposition to course of posttraumatic osteoarthrosis of knee joint - Google Patents

Method for prediction of predisposition to course of posttraumatic osteoarthrosis of knee joint Download PDF

Info

Publication number
RU2600860C2
RU2600860C2 RU2014153254/15A RU2014153254A RU2600860C2 RU 2600860 C2 RU2600860 C2 RU 2600860C2 RU 2014153254/15 A RU2014153254/15 A RU 2014153254/15A RU 2014153254 A RU2014153254 A RU 2014153254A RU 2600860 C2 RU2600860 C2 RU 2600860C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
gene
knee joint
predisposition
osteoarthritis
knee
Prior art date
Application number
RU2014153254/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2014153254A (en
Inventor
Валерий Валентинович Внуков
Светлана Борисовна Панина
Игорь Владимирович Кролевец
Наталья Петровна Милютина
Анжелика Аршаковна Ананян
Михаил Алексеевич Забродин
Original Assignee
федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Южный федеральный университет"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Южный федеральный университет" filed Critical федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Южный федеральный университет"
Priority to RU2014153254/15A priority Critical patent/RU2600860C2/en
Publication of RU2014153254A publication Critical patent/RU2014153254A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2600860C2 publication Critical patent/RU2600860C2/en

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
    • C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
    • C12Q2531/113—PCR
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2565/00—Nucleic acid analysis characterised by mode or means of detection
    • C12Q2565/10—Detection mode being characterised by the assay principle
    • C12Q2565/125—Electrophoretic separation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
    • G01N2800/105—Osteoarthritis, e.g. cartilage alteration, hypertrophy of bone

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention refers to medicine, and it is aimed at diagnosing a predisposition to posttraumatic osteoarthrosis of the knee. In the patients pleomorphism genotyping rs2276109 (A-82G) of the MMP-12 gene is performed. When revealing the GG genotype, genetic predisposition to course of posttraumatic osteoarthrosis of the knee is diagnosed.
EFFECT: invention provides an increase of detection reliability of genetic individual's predisposition to course of osteoarthrosis of the knee after traumatic injury by determining the polymorphism in gene of 12 matrix metalloproteinase.
1 cl, 3 ex

Description

Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION

Изобретение относится к медицине, в частности к молекулярно-генетическим исследованиям, а именно к области диагностики генетической предрасположенности к развитию остеоартроза коленного сустава после травматического повреждения, что может быть использовано в спортивной и предиктивной медицине, а также в целях коррекции образа жизни пациентов в валеологической практике.The invention relates to medicine, in particular to molecular genetic studies, and in particular to the field of diagnosing a genetic predisposition to the development of osteoarthritis of the knee joint after traumatic injury, which can be used in sports and predictive medicine, as well as in order to correct the lifestyle of patients in valeological practice .

Уровень техникиState of the art

Гонартроз - остеоартроз (OA) коленного сустава, одна из причин хронической нетрудоспособности, от симптомов которого в мире страдают около 13% женщин и 10% мужчин старше 60 лет (Heidari В., 2011) /1/. Основными факторами, способствующими развитию остеоартроза коленного сустава, являются физические нагрузки и травмы. Травматические воздействия являются причиной истончения суставного хряща, что приводит к развитию посттравматического гонартроза (Капустина Н.В., Кобракова Т.Д., 2013) /2/. После травмы сустава содержание провоспалительных маркеров (интерлейкин-1-бета IL-1β, фактор некроза опухоли TNFα) увеличивается в синовиальной среде, что стимулирует ангиогенез (рост новых кровеносных сосудов), а также экспрессию катаболических ферментов, таких как матриксные металлопротеиназы, ММР (Anderson D.D., Chubinskaya S. et al, 2011) /3/.Gonarthrosis is osteoarthrosis (OA) of the knee joint, one of the causes of chronic disability, the symptoms of which affect about 13% of women and 10% of men over 60 in the world (Heidari V., 2011) / 1 /. The main factors contributing to the development of osteoarthritis of the knee joint are physical activity and trauma. Traumatic effects are the cause of the thinning of articular cartilage, which leads to the development of post-traumatic gonarthrosis (Kapustina N.V., Kobrakova T.D., 2013) / 2 /. After a joint injury, the content of pro-inflammatory markers (interleukin-1-beta IL-1β, tumor necrosis factor TNFα) increases in the synovial medium, which stimulates angiogenesis (growth of new blood vessels), as well as the expression of catabolic enzymes such as matrix metalloproteinases, MMPs (Anderson DD, Chubinskaya S. et al, 2011) / 3 /.

Показано, что остеоартроз характеризуется множеством генетических факторов риска, и исследования ассоциаций кандидатных генов уже обнаружили несколько локусов восприимчивости к OA (Chapman K., Valdes А.М., 2012) /4/. Несмотря на то, что различные группы исследователей рассматривали более 80 потенциальных кандидатных генов, ассоциированных с развитием OA, удалось выявить один повсеместный и надежный аллель чувствительности к остеоартрозу, а именно точечный полиморфизм С/Т (rs143383), который локализуется в 3′-нетранслируемом регионе гена фактора роста и дифференциации 5 GDF5 (Reynard L.N., Louhlin J., 2012) /5/. Полногеномные исследования полиморфизмов (GWAS - genome-wide association study), например, британское исследование arcOGEN, выявили несколько общих локусов предрасположенности к OA, в т.ч. коленного сустава, у различных рас мира, например, блок неравновесного сцепления на участке хромосомы 7q22 (Gonzalez А., 2013) /6/. Патологическая активность любого из генов региона 7q22 может привести к развитию OA коленного сустава, поскольку в данном регионе наблюдается сильное неравновесное сцепление (Evangelou Е., Valdes A.M., Kerkhof H.J.M., 2011) /7/. Последняя работа содержит самый большой на момент публикации объем изученных образцов по исследованию OA коленного сустава, а именно почти 8000 случаев. Блок неравновесного сцепления на участке 7q22 включает 6 генов: PRKAR2B, HPB, COG5, GPR22, DUS4L и BCAP29.It has been shown that osteoarthrosis is characterized by many genetic risk factors, and studies of candidate gene associations have already found several loci of susceptibility to OA (Chapman K., Valdes A.M., 2012) / 4 /. Despite the fact that various research groups examined more than 80 potential candidate genes associated with the development of OA, it was possible to identify one ubiquitous and reliable allele of sensitivity to osteoarthritis, namely, point C / T polymorphism (rs143383), which is localized in a 3′-untranslated region gene for growth factor and differentiation 5 GDF5 (Reynard LN, Louhlin J., 2012) / 5 /. Full genome studies of polymorphisms (GWAS - genome-wide association study), for example, the British study arcOGEN, revealed several common loci of predisposition to OA, including of the knee joint, in different races of the world, for example, a block of disequilibrium adhesion on the chromosome 7q22 (Gonzalez A., 2013) / 6 /. The pathological activity of any of the genes in the 7q22 region can lead to the development of OA of the knee joint, since strong non-equilibrium adhesion is observed in this region (Evangelou E., Valdes A.M., Kerkhof H.J.M., 2011) / 7 /. The latest work contains the largest at the time of publication volume of the studied samples for the study of OA of the knee joint, namely almost 8,000 cases. The non-equilibrium linkage block in the 7q22 region includes 6 genes: PRKAR2B, HPB, COG5, GPR22, DUS4L and BCAP29.

Как было показано, локусы многих генов ассоциированы с OA коленного сустава и без «полногеномной» значимости: SMAD3, BMP5, 2 (костный морфогенетический белок 5, 2), FTO (ген, ассоциированный с жировой массой), TRPV1 (ваниллоидный рецептор 1) (Gonzalez А., 2013) /6/. Были показаны значимые ассоциации полиморфизмов таких генов, как ADAM12, COX2 (циклооксигеназа 2), TNA (тетранектин, который является плазминоген-связывающим пептидом), с тремя характерными признаками OA коленного сустава - сужение суставной щели, остеофиты, радиографические признаки (Valdes A.M., Hart D.J., Jones K.A. et al., 2004 /8/, Kerna I., Kisand K., Tamm A.E. et al., 2009 /9/). Гены, экспрессия которых связана с воспалительным процессом и деградацией хряща, также оказались вовлеченными в явление генетической предрасположенности к OA: например, гены интерлейкина-1 и его модуляторов (Prieto-Montana J.R., Riancho J.A., 2009) /10/. Группа (Smith A.J.P., Keen L.J. et al., 2004) /11/ установила сцепление между девятью полиморфными локусами в промоторе гена IL1R1, восемью локусами в генном комплексе IL1A-IL1B-IL1RN, и их ассоциацию с остеоартрозом коленного сустава. Исследование британских популяций показало, что один из распространенных гаплотипов кластера IL1A-IL1B-IL1RN в 2-4 раза повышает риск развития OA (2C-CTG-1TT); другой (протективный) - в 4-5 раз его снижает (CCA-1ТТ). С другой стороны, мета-анализ результатов нескольких исследований, проведенный группой (Moxley G., Meulenbelt I. et al., 2009) /12/, не показал влияния различных гаплотипов кластера IL-1 на риск развития гонартроза (остеоартроза коленного сустава). Кроме того, обширный мета-анализ группы (Kerkhof H.J.M., Doherty М. et al., 2011) /13/ показал отсутствие ассоциации гаплотипов IL-1B-IL1B-IL1RN (rs1143634/rs16944/rs419598) с риском развития гонартроза, однако ген IL1RN (антагонист рецептора IL-1) может влиять на тяжесть патологии.It has been shown that the loci of many genes are associated with OA of the knee joint without “genome-wide” significance: SMAD3, BMP5, 2 (bone morphogenetic protein 5, 2), FTO (gene associated with fat mass), TRPV1 (vanilloid receptor 1) ( Gonzalez A., 2013) / 6 /. Significant associations of polymorphisms of genes such as ADAM12, COX2 (cyclooxygenase 2), TNA (tetranectin, which is a plasminogen binding peptide), with three characteristic features of OA of the knee joint - narrowing of the joint gap, osteophytes, radiographic signs (Valdes AM, Hart, were shown) DJ, Jones KA et al., 2004/8 /, Kerna I., Kisand K., Tamm AE et al., 2009/9 /). Genes whose expression is associated with inflammatory process and cartilage degradation have also been involved in the phenomenon of genetic predisposition to OA: for example, the genes for interleukin-1 and its modulators (Prieto-Montana J.R., Riancho J.A., 2009) / 10 /. The group (Smith A.J.P., Keen L.J. et al., 2004) / 11 / established linkage between nine polymorphic loci in the IL1R1 gene promoter, eight loci in the IL1A-IL1B-IL1RN gene complex, and their association with knee osteoarthritis. A study of British populations showed that one of the common haplotypes of the IL1A-IL1B-IL1RN cluster increases the risk of OA (2C-CTG-1TT) by 2–4 times; another (protective) - reduces it 4-5 times (CCA-1TT). On the other hand, a meta-analysis of the results of several studies conducted by the group (Moxley G., Meulenbelt I. et al., 2009) / 12 / did not show the effect of various haplotypes of the IL-1 cluster on the risk of developing gonarthrosis (knee osteoarthritis). In addition, an extensive meta-analysis of the group (Kerkhof HJM, Doherty M. et al., 2011) / 13 / showed a lack of association of the IL-1B-IL1B-IL1RN haplotypes (rs1143634 / rs16944 / rs419598) with a risk of gonarthrosis, however, the IL1RN gene (IL-1 receptor antagonist) may affect the severity of the pathology.

Противоречивые результаты получены относительно ассоциации полиморфных локусов генов Wnt-сигнального пути, который регулирует развитие кости и сустава, и восприимчивостью к OA коленного сустава (Valdes A.M., Spector T.D., 2010) /14/. Для передачи сигнала внутрь клетки белки семейства Wnt должны связать соответствующий рецептор на поверхности клетки (например, из семейства Frizzled); другие белки также способны акцептировать лиганды Wnt (корецепторы LRP5/6). Сигнальный путь Wnt задействован в контроле пролиферации и дифференциации клеток, в организации цитоскелета и клеточной подвижности (Куликова К.В., Кибардин А.В. и др., 2012) /15/. Так, замены в гене FRZB (frizzled-связанный белок 3) rs7775 и rs28836 могут быть связаны с риском развития гонартроза. С другой стороны, группа (Kerkhof J.M., Uitterlinden A.G., et al., 2008) /16/ изучала полиморфизмы нескольких ключевых участников Wnt-сигнального пути, а именно генов FRZB, LRP5, LRP6 (LRP - белки, связанные с рецептором липопротеина низкой плотности), и не обнаружила ассоциации полиморфизмов данных генов с частотой OA в двух популяциях.Contradictory results were obtained regarding the association of polymorphic loci of Wnt-signaling gene genes that regulates bone and joint development, and susceptibility to OA of the knee joint (Valdes A.M., Spector T.D., 2010) / 14 /. To transmit the signal inside the cell, the Wnt family proteins must bind an appropriate receptor on the cell surface (for example, from the Frizzled family); other proteins are also capable of accepting Wnt ligands (LRP5 / 6 coreceptors). The Wnt signaling pathway is involved in the control of cell proliferation and differentiation, in the organization of the cytoskeleton and cell motility (Kulikova K.V., Kibardin A.V. et al., 2012) / 15 /. Thus, substitutions in the FRZB gene (frizzled-bound protein 3) rs7775 and rs28836 may be associated with a risk of developing gonarthrosis. On the other hand, the group (Kerkhof JM, Uitterlinden AG, et al., 2008) / 16 / studied the polymorphisms of several key participants of the Wnt signaling pathway, namely the FRZB, LRP5, LRP6 genes (LRP are proteins associated with the low density lipoprotein receptor ), and did not find the association of polymorphisms of these genes with the frequency of OA in two populations.

Из противоречивости перечисленных данных очевидно, что поиск надежных и значимых генетических маркеров предрасположенности к остеоартрозу коленного сустава в популяциях русского населения является актуальной проблемой ранней диагностики и предиктивной медицины.From the inconsistency of the data listed, it is obvious that the search for reliable and significant genetic markers of predisposition to osteoarthritis of the knee joint in populations of the Russian population is an urgent problem of early diagnosis and predictive medicine.

Наиболее близким к настоящему изобретению является молекулярно-генетический способ прогнозирования предрасположенности к развитию тяжелой формы деформирующего OA коленного сустава у взрослых с помощью выявления генотипа, гомозиготного по функционально неполноценному аллелю t гена рецептора 1,25-дигидроксивитамина D3, VDR (патент RU №2249210, 27.03.2005) /17/. Данный способ осуществляется путем смешивания компонентов реакционной смеси и добавления олигопраймеров, путем полимеразной цепной реакции с последующей рестрикцией полученного продукта и визуализацией электрофореграммы в вертикальном полиакриламидном геле. В данном способе генетическую предрасположенность определяют путем анализа полиморфизма Taq I гена VDR методом полимеразной цепной реакции с использованием следующих праймеров: 5′-GATGATCCAGAAGCTAGCCGACCT-3′ и 5′-GCAACTCCTCATGGCTGAGGTCT-3′. На основании результата анализа электрофореграммы составляют клиническую интерпретацию, при этом наличие функционально неполноценного генотипа tt по полиморфизму Taq I гена VDR интерпретируют как предрасположенность к высокому риску развития тяжелой формы деформирующего остеоартроза коленного сустава (в популяции Северо-Западного региона Российской Федерации).Closest to the present invention is a molecular genetic method for predicting a predisposition to develop a severe form of deforming OA of the knee joint in adults by identifying a genotype homozygous for the functionally defective t allele of the 1,25-dihydroxyvitamin D3 receptor gene, VDR (patent RU No. 22429210, 27.03 .2005) / 17 /. This method is carried out by mixing the components of the reaction mixture and adding oligoprimers, by polymerase chain reaction, followed by restriction of the resulting product and visualization of the electrophoregram in a vertical polyacrylamide gel. In this method, a genetic predisposition is determined by analysis of Taq I polymorphism of the VDR gene by polymerase chain reaction using the following primers: 5′-GATGATCCAGAAGCTAGCCGACCT-3 ′ and 5′-GCAACTCCTCATGGCTGAGGTCT-3 ′. Based on the result of the analysis, the electrophoregrams make up a clinical interpretation, while the presence of a functionally inferior tt genotype for Taq I polymorphism of the VDR gene is interpreted as a predisposition to a high risk of developing severe form of deforming osteoarthritis of the knee joint (in a population of the North-West region of the Russian Federation).

Однако обширный мета-анализ, касающийся роли различных полиморфизмов гена VDR, в том числе и полиморфизма Taq I, учитывающий данные 3372 пациентов, не обнаружил статистически значимой ассоциации с предрасположенностью к OA, даже после стратификации по европейским и азиатским когортам (Lee Y.H., Woo J.H. et al., 2009) /18/.However, an extensive meta-analysis regarding the role of various VDR gene polymorphisms, including Taq I polymorphism, taking into account data from 3372 patients, did not reveal a statistically significant association with a predisposition to OA, even after stratification by European and Asian cohorts (Lee YH, Woo JH et al., 2009) / 18 /.

В вышеупомянутом способе пациенты с предшествовавшими травмами коленного сустава (внутрисуставные и околосуставные переломы, вывихи, повреждения менисков и связок коленного сустава) не были включены в исследование, поскольку это могло быть причиной вторичного OA. Задачей настоящего изобретения является установление предрасположенности к развитию OA именно после травматического воздействия на коленный сустав. Вторичный OA вследствие травмы может диагностироваться в достаточно раннем возрасте и прогрессировать быстро; посттравматический OA составляет 12% случаев об общего количества больных OA коленного сустава (Stiebel М., Miller L.E., Block J.E., 2014) /19/. Более того, как показано в работе (Valdes A.M., Doherty S.A., Muir K.R., 2013) /20/, посттравматические тяжелые формы OA, ведущие к необходимости полной замены сустава, характеризуются по крайней мере такой же генетической предрасположенностью, как и в случае первичного OA.In the aforementioned method, patients with previous injuries of the knee joint (intraarticular and periarticular fractures, dislocations, injuries of the menisci and ligaments of the knee joint) were not included in the study, as this could be the cause of secondary OA. The objective of the present invention is to establish a predisposition to the development of OA precisely after a traumatic effect on the knee joint. Secondary OA due to trauma can be diagnosed at a fairly early age and progress quickly; post-traumatic OA accounts for 12% of the total number of patients with OA of the knee joint (Stiebel M., Miller L.E., Block J.E., 2014) / 19 /. Moreover, as shown in (Valdes AM, Doherty SA, Muir KR, 2013) / 20 /, post-traumatic severe forms of OA leading to the need for a complete joint replacement are characterized by at least the same genetic predisposition as in the case of primary OA .

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Техническим результатом настоящего изобретения является увеличение достоверности выявления генетической предрасположенности человека к развитию остеоартроза коленного сустава после травматического повреждения за счет определения полиморфизма rs2276109 (A-82G) гена ММР-12 (матриксная металлопротеиназа 12, макрофагальная металлоэластаза). При выявлении генотипа GG диагностируют высокую генетическую предрасположенность к развитию посттравматического OA коленного сустава.The technical result of the present invention is to increase the reliability of identifying a person’s genetic predisposition to the development of osteoarthritis of the knee joint after traumatic injury by determining the polymorphism rs2276109 (A-82G) of the MMP-12 gene (matrix metalloproteinase 12, macrophage metalloelastase). When the GG genotype is identified, a high genetic predisposition to the development of post-traumatic OA of the knee joint is diagnosed.

Предлагаемый способ технически прост, обеспечивает существенное снижение времени и материальных затрат на проведение анализа. Интерпретация полученных результатов может быть использована в области спортивной и предиктивной медицины, валеологии.The proposed method is technically simple, provides a significant reduction in time and material costs for analysis. The interpretation of the results can be used in the field of sports and predictive medicine, valeology.

Матриксная металлопротеиназа 12 (ММР-12) входит в отдельную подгруппу ММР, и как все матриксные металлопротеиназы синтезируется в виде профермента, имеет ионы Zn2+ в активном центре и консервативные последовательности, а также C-гемопексиноподобный домен, отвечающий за субстратную специфичность (Ганусевич И.И., 2010) /21/.Matrix metalloproteinase 12 (MMP-12) is a separate subgroup of MMP, and as all matrix metalloproteinases are synthesized as proenzyme, it has Zn 2+ ions in the active center and conservative sequences, as well as a C-hemopexin-like domain responsible for substrate specificity (Ganusevich I .I., 2010) / 21 /.

Известна роль ММР-12 в воспалении и ангиогенезе (Jormsjo S., Ye S., Moritz J. et al., 2000) /22/, а эти процессы особенно характерны для посттравматического остеоартроза. Матриксная металлопротеиназа-12 секретируется активированными макрофагами, среди ее субстратов можно назвать эластин, фибронектин, ламинин, коллаген IV типа, плазминоген (Rodriguez D., Morrison C.J., Overall С.М., 2010) /23/. Ген ММР-12 картирован в области 11q22.2-22.3 и включает 10 экзонов и 9 интронов; промотор гена имеет сайты взаимодействия с такими факторами транскрипции, как TCF-4, LBP-сайт, сайт АР-1, TATA бокс (Yamana K., Bilim V. et al., 2005) /24/. В промоторе гена ММР-12 несколько полиморфных локусов, влияющих на экспрессию: A-82G; -1079Т ins/del; C-1839G (Johnson М., Toms S., 2005) /25/.The known role of MMP-12 in inflammation and angiogenesis (Jormsjo S., Ye S., Moritz J. et al., 2000) / 22 /, and these processes are especially characteristic for post-traumatic osteoarthritis. Matrix metalloproteinase-12 is secreted by activated macrophages, among its substrates are elastin, fibronectin, laminin, type IV collagen, plasminogen (Rodriguez D., Morrison C.J., Overall S.M., 2010) / 23 /. The MMP-12 gene is mapped in the region 11q22.2-22.3 and includes 10 exons and 9 introns; the gene promoter has interaction sites with transcription factors such as TCF-4, LBP site, AP-1 site, TATA box (Yamana K., Bilim V. et al., 2005) / 24 /. In the promoter of the MMP-12 gene, several polymorphic loci affecting expression: A-82G; -1079T ins / del; C-1839G (Johnson M., Toms S., 2005) / 25 /.

Показано, что в хряще и субхондральной кости пациентов с OA наблюдается экспрессия гена ММР-12, которая в норме отсутствует (Kaspiris А., Papadimitriou Е. et al., 2012) /26/, а экспрессия ММР-12 в культивированных хондроцитах индуцируется в присутствии провоспалительного цитокина IL-1β (Oh H., Yang S. et al., 2008) /27/.It was shown that in the cartilage and subchondral bone of patients with OA, MMP-12 gene expression is observed, which is normally absent (Kaspiris A., E. Papadimitriou et al., 2012) / 26 /, and MMP-12 expression is induced in cultured chondrocytes in the presence of the pro-inflammatory cytokine IL-1β (Oh H., Yang S. et al., 2008) / 27 /.

Полиморфная замена A→G в позиции -82 промотора гена ММР-12 (аллель А более распространен) влияет на аффинность транскрипционного фактора АР-1 и, следовательно, транскрипционную активность промотора этого гена (Ye S., 2000) /28/. Аллель А обладает большим сродством к АР-1 и большей транскрипционной активностью в различных макрофагальных клеточных линиях. Аллель А ассоциирован с такими патологиями, как сужение коронарных артерий при сердечной недостаточности, диабете (Jormsjo S., Ye S., Moritz J. et al., 2000) /22/. Обсуждалась роль этого полиморфизма в связи с риском новообразований (Shin A., Cai Q., Shu Х.-О. et al., 2005) /29/ и легочных заболеваний (Van Diemen С.С., Postma D.S. et al., 2011) /30/.The polymorphic substitution A → G at the position -82 of the promoter of the MMP-12 gene (allele A is more common) affects the affinity of the transcription factor AP-1 and, therefore, the transcriptional activity of the promoter of this gene (Ye S., 2000) / 28 /. Allele A has a high affinity for AP-1 and greater transcriptional activity in various macrophage cell lines. Allele A is associated with pathologies such as narrowing of the coronary arteries in heart failure and diabetes (Jormsjo S., Ye S., Moritz J. et al., 2000) / 22 /. The role of this polymorphism in connection with the risk of neoplasms (Shin A., Cai Q., Shu H.-O. et al., 2005) / 29 / and pulmonary diseases (Van Diemen S.S., Postma DS et al., 2011) / 30 /.

Авторами настоящего изобретения в результате анализа распределения генотипов по ММР12 среди пациентов с посттравматическим OA коленного сустава и их сравнении с контрольной группой неожиданно было обнаружено наличие достоверной ассоциации между полиморфным аллелем G и, в частности, генотипом GG по полиморфизму A-82G гена ММР12 и развитием посттравматического остеоартроза.The authors of the present invention, as a result of analysis of the distribution of MMP12 genotypes among patients with post-traumatic OA of the knee joint and their comparison with the control group, unexpectedly there was a reliable association between the polymorphic G allele and, in particular, the GG genotype for A-82G polymorphism of the MMP12 gene and the development of post-traumatic osteoarthrosis.

Осуществление изобретенияThe implementation of the invention

Использование способа прогнозирования предрасположенности человека к посттравматическому OA коленного сустава на основе анализа полиморфизма A-82G гена ММР-12 включает проведение следующих исследований.Using a method for predicting a person’s predisposition to post-traumatic OA of the knee joint based on the analysis of A-82G polymorphism of the MMP-12 gene includes the following studies.

Выделение ДНК из периферической кровиIsolation of DNA from peripheral blood

Для выделения ДНК из периферической крови используют коммерческий набор реагентов «ДНК-экспресс-кровь» (Литех, Москва).To isolate DNA from peripheral blood, a commercial set of DNA-express-blood reagents is used (Litekh, Moscow).

Основные этапы выделения ДНК:The main stages of DNA extraction:

1. В пробирку типа «Эппендорф» с замком внести 800 мкл цельной крови. Перед внесением кровь необходимо перемешать до однородности. В качестве антикоагулянта при заборе венозной крови используется ЭДТА.1. Add 800 μl of whole blood to the Eppendorf test tube with a lock. Before applying the blood must be mixed until smooth. EDTA is used as an anticoagulant for venous blood sampling.

2. Закрыть пробирку и центрифугировать со скоростью 3000 оборотов в минуту при комнатной температуре в течение 5 минут, после центрифугирования кровь разделится на плазму и форменные элементы. На поверхности осадка форменных элементов расположен тонкий слой лейкоцитов.2. Close the tube and centrifuge at a speed of 3000 rpm at room temperature for 5 minutes, after centrifugation, the blood will separate into plasma and shaped elements. A thin layer of leukocytes is located on the surface of the sediment of the formed elements.

3. Аккуратно удалить пипеткой плазму, не захватив при этом лейкоциты.3. Carefully remove the plasma with a pipette, without capturing the white blood cells.

4. Закрыть пробирку и выдержать ее при -20°C (в морозильной камере) до полного замораживания форменных элементов (в течение 1 часа).4. Close the tube and keep it at -20 ° C (in the freezer) until the formed elements are completely frozen (within 1 hour).

5. Полностью разморозить содержимое пробирки при комнатной температуре.5. Thaw the contents of the tube completely at room temperature.

6. Внести в пробирку реактив «ДНК-экспресс-кровь». Его объем должен быть равен объему оставшихся в пробирке форменных элементов и плазмы (в опыте в пробирке находилось 500 мкл форменных элементов, соответственно прибавляли 500 мкл реагента «ДНК-экспресс-кровь»). Закрыть пробирку.6. Add DNA Express Blood Reagent to the tube. Its volume should be equal to the volume of the formed elements and plasma remaining in the test tube (500 μl of uniform elements were in the test tube experiment, 500 μl of DNA-express-blood reagent was added accordingly). Close the tube.

7. Содержимое пробирки в течение 10 секунд тщательно перемешать на вортексе.7. Thoroughly mix the contents of the tube for 10 seconds on a vortex.

8. Установить пробирку в предварительно прогретый до 98°C термостат, выдержать 15 минут, затем центрифугировать со скоростью 12000 оборотов в минуту при комнатной температуре в течение 60 секунд.8. Place the tube in a thermostat preheated to 98 ° C, hold for 15 minutes, then centrifuge at 12,000 rpm at room temperature for 60 seconds.

Полученный таким образом супернатант используют в качестве исследуемого образца ДНК.The supernatant thus obtained is used as a test sample of DNA.

Анализ полиморфизма гена. Проведение амплификацииGene polymorphism analysis. Amplification

Для выявления полиморфных аллелей гена матриксной металлопротеиназы 12 (ММР-12, A-82G) используют наборы реагентов SNP-экспресс (Литех, Москва). Анализ основан на одновременном проведении двух реакций амплификации с двумя парами аллель-специфичных праймеров. Одна пара праймеров комплементарна нормальному (более распространенному) аллелю, вторая комплементарна полиморфному аллелю. Данный анализ позволяет выявлять как гетерозиготное носительство полиморфных аллелей, так и гомозиготное состояние.To identify polymorphic alleles of the matrix metalloproteinase 12 gene (MMP-12, A-82G), SNP-express reagent kits are used (Litech, Moscow). The analysis is based on the simultaneous conduct of two amplification reactions with two pairs of allele-specific primers. One pair of primers is complementary to the normal (more common) allele, the second is complementary to the polymorphic allele. This analysis reveals both the heterozygous carriage of polymorphic alleles and the homozygous state.

Ход работы:Working process:

1. Приготовить и пронумеровать пробирки для проведения амплификации. Для каждой пробы необходимы две пробирки - N (норма) и P (патология).1. Prepare and number tubes for amplification. For each sample, two tubes are needed - N (normal) and P (pathology).

2. Приготовить рабочие смеси реагентов для амплификации из расчета на 1 пробу: 17 мкл разбавителя; 2.5 мкл реакционной смеси; 0.2 мкл Taq-полимеразы. Готовятся две рабочие смеси: с реакционной смесью «норма» и с реакционной смесью «патология».2. Prepare working mixtures of reagents for amplification based on 1 sample: 17 μl of diluent; 2.5 μl of the reaction mixture; 0.2 μl of Taq polymerase. Two working mixtures are prepared: with the “normal” reaction mixture and with the “pathology” reaction mixture.

3. После добавления Taq-полимеразы, которое производится в последнюю очередь, необходимо тщательно перемешать смесь пипетированием.3. After adding the Taq polymerase, which is the last to be produced, it is necessary to thoroughly mix the mixture by pipetting.

4. Добавить по 20 мкл соответствующей рабочей амплификационной смеси во все соответствующие пробирки для амплификации.4. Add 20 μl of the appropriate working amplification mixture to all appropriate amplification tubes.

5. Добавить во все пробирки по 1 капле минерального масла.5. Add 1 drop of mineral oil to all tubes.

6. Внести по 5 мкл образца ДНК в пробирку с рабочей амплификационной смесью «норма» и в пробирку с рабочей амплификационной смесью «патология». В пробирке отрицательного контроля содержится равное количество рабочей амплификационной смеси, минерального масла, а также 5 мкл разбавителя.6. Pipette 5 µl of the DNA sample into the test tube with the normal amplification mixture and into the test tube with the pathology active amplification mixture. The negative control tube contains an equal amount of a working amplification mixture, mineral oil, and 5 μl of diluent.

7. Пробирки закрыть и центрифугировать в течение 3-5 секунд при 3000 оборотах в минуту.7. Close the tubes and centrifuge for 3-5 seconds at 3000 rpm.

8. Перенести пробирки в амплификатор для проведения реакции амплификации. Используется «горячий старт», то есть пробирки вносятся в прогретый до 94°C амплификатор.8. Transfer the tubes to the amplifier for the amplification reaction. A “hot start” is used, that is, the tubes are introduced into a thermocycler heated to 94 ° C.

Режим амплификации:Amplification Mode:

93°C - 1 минута93 ° C - 1 minute

1 цикл1 cycle

93°C - 10 секунд93 ° C - 10 seconds

64°C - 10 секунд64 ° C - 10 seconds

72°C - 20 секунд72 ° C - 20 seconds

35 циклов35 cycles

72°C - 1 минута72 ° C - 1 minute

1 цикл1 cycle

10°C - хранение10 ° C - storage

Детекция продуктов амплификацииAmplification Products Detection

Разделение продуктов амплификации проводят методом горизонтального электрофореза в агарозном геле.The separation of amplification products is carried out by horizontal agarose gel electrophoresis.

Ход работы:Working process:

1. Залить в аппарат для электрофореза TAE - буфер, приготовленный на дистиллированной воде разбавлением 50хТАЕ: в 50 раз (pH=8.3).1. Pour into a TAE electrophoresis apparatus - buffer prepared on distilled water with 50xTAE dilution: 50 times (pH = 8.3).

2. Приготовить 3% агарозный гель. Добавить к 100 мл расплавленной агарозы 10 мкл 1% раствора бромистого этидия.2. Prepare a 3% agarose gel. Add 10 μl of a 1% solution of ethidium bromide to 100 ml of molten agarose.

3. Охладить расплавленную агарозу до температуры 50-60°C и залить в планшет для заливки геля. Для получения карманов в агарозном геле установить гребенку. Объем карманов должен быть не менее 20-25 мкл. После застывания агарозы перенести планшет с гелем в камеру для проведения электрофореза.3. Cool molten agarose to a temperature of 50-60 ° C and pour into a gel pad. To obtain pockets on an agarose gel, set a comb. The volume of pockets should be at least 20-25 μl. After solidification of the agarose, transfer the gel plate to the chamber for electrophoresis.

4. Нанести в карманы геля по 10-15 мкл амплификата4. Put 10-15 μl of the amplification into the gel pockets

5. Подключить камеру для электрофореза к источнику питания и задать напряжение 10-15 В/см геля. Оптимальное время проведения электрофореза 15-20 минут.5. Connect the electrophoresis chamber to a power source and set the voltage of 10-15 V / cm of the gel. The optimal time for electrophoresis is 15-20 minutes.

Анализ электрофореграмм осуществляют под ультрафиолетом (УФ) на трансиллюминаторе BioRad (длина волны УФ света 310 нм).Electrophoregram analysis is carried out under ultraviolet (UV) on a BioRad transilluminator (wavelength of UV light 310 nm).

Далее приводятся конкретные примеры осуществления заявленного способа.The following are specific examples of the implementation of the claimed method.

Пример 1Example 1

Пациент М., мужчина, 25 лет, находился в отделении ортопедии с 05.12.2013 по 16.12.2013. После спортивной травмы левого коленного сустава (25.11.2013 г.) появились боли, ограничение функции сустава. Был поставлен следующий диагноз: левосторонний гонартроз II стадии по Kellgren-Lawrence, закрытая травма левого коленного сустава, травматический разрыв медиального мениска левого коленного сустава. Был госпитализирован для оперативного лечения.Patient M., male, 25 years old, was in the orthopedics department from 12/05/2013 to 12/16/2013. After a sports injury to the left knee joint (11/25/2013), pain appeared, limiting the function of the joint. The following diagnosis was made: left-sided gonarthrosis of the II stage according to Kellgren-Lawrence, closed trauma of the left knee joint, traumatic rupture of the medial meniscus of the left knee joint. He was hospitalized for surgical treatment.

Проведено молекулярно-генетическое типирование и выявлен генотип GG (rs2276109), данный генотип предрасполагает к развитию OA коленного сустава после травмы.Molecular genetic typing was performed and the GG genotype (rs2276109) was identified; this genotype predisposes to the development of OA of the knee joint after injury.

Пример 2Example 2

Пациент Г., мужчина, 34 года, находился в отделении ортопедии с 20.06.2013 по 30.06.2013. Жалобы на боль в левом коленном суставе, нарушение функции. Был поставлен диагноз: посттравматический левосторонний гонартроз II стадии по Kellgren-Lawrence, состояние после пластики подколенного сухожилия левого коленного сустава. Был госпитализирован для оперативного лечения.Patient G., male, 34 years old, was in the orthopedics department from 06/20/2013 to 06/30/2013. Complaints of pain in the left knee joint, impaired function. The diagnosis was made: post-traumatic left-sided gonarthrosis of the II stage according to Kellgren-Lawrence, the condition after plastic surgery of the hamstring of the left knee joint. He was hospitalized for surgical treatment.

Проведено молекулярно-генетическое типирование и выявлен генотип GG (rs2276109), данный генотип предрасполагает к развитию OA коленного сустава после травмы.Molecular genetic typing was performed and the GG genotype (rs2276109) was identified; this genotype predisposes to the development of OA of the knee joint after injury.

Пример 3Example 3

В качестве объекта исследования были использованы образцы периферической крови 93 неродственных пациентов с диагнозом посттравматический остеоартроз коленного сустава в возрасте 46.6 (SD 14.7) лет, 37 мужчин и 56 женщин, русской национальности, проживающие на территории Ростовской области, проходившие лечение в Центральной городской больнице №1 им. Н.А. Семашко. Контрольную группу составили 85 пациентов отделения травматологии и ортопедии ЦГБ, без признаков сужения суставной щели, наличия остеофитов, жалоб на боли или ограниченность функций, в возрасте 43.4 (SD 15.5) лет, 33 мужчины и 52 женщины, из Ростовской области.As the object of the study, peripheral blood samples of 93 unrelated patients with a diagnosis of post-traumatic osteoarthritis of the knee at the age of 46.6 (SD 14.7) years, 37 men and 56 women of Russian nationality living in the Rostov region who were treated in the Central City Hospital No. 1 were used them. ON. Semashko. The control group consisted of 85 patients from the Department of Traumatology and Orthopedics of the Central City Hospital, without signs of narrowing of the joint gap, the presence of osteophytes, complaints of pain or limited function, aged 43.4 (SD 15.5) years, 33 men and 52 women, from the Rostov Region.

Частоты генотипов и аллелей в группе пациентов с OA коленного сустава составили: AA - 64.8%, AG - 25.3%, GG - 9.9%, частота аллеля A - 77.5%, G - 22.5%, в контрольной группе: AA - 76.1%, AG - 23.9%, GG - 0.0%, частота аллеля A - 88.0%, G - 12.0%. Гетерозигот в группе пациентов с OA было на 5.9% больше, чем в контрольной группе. Важно отметить, что генотип GG, обладатели которого, согласно гипотезе авторов настоящего изобретения, имеют сниженный уровень продукции ММР-12, не встречается в контрольной группе. Обнаружены достоверные различия в частотах генотипов (X2=7.77, p=0.02) и аллелей (X2=6.05, p=0.01) по полиморфизму A-82G между группой пациентов с OA коленного сустава и контрольной группой, следовательно, полученные результаты позволяют утверждать о наличии достоверных ассоциаций полиморфного маркера A-82G гена ММР-12 с предрасположенностью к развитию посттравматического остеоартроза коленного сустава.The frequencies of genotypes and alleles in the group of patients with knee OA were: AA - 64.8%, AG - 25.3%, GG - 9.9%, allele frequency A - 77.5%, G - 22.5%, in the control group: AA - 76.1%, AG - 23.9%, GG - 0.0%, allele frequency A - 88.0%, G - 12.0%. The heterozygotes in the group of patients with OA were 5.9% higher than in the control group. It is important to note that the GG genotype, the owners of which, according to the hypothesis of the authors of the present invention, have a reduced level of MMP-12 production, does not occur in the control group. Significant differences were found in the frequencies of genotypes (X 2 = 7.77, p = 0.02) and alleles (X 2 = 6.05, p = 0.01) in A-82G polymorphism between the group of patients with OA of the knee joint and the control group, therefore, the obtained results allow us to confirm the presence of reliable associations of the polymorphic marker A-82G of the MMP-12 gene with a predisposition to the development of post-traumatic osteoarthritis of the knee joint.

При оценке соответствия данных исследуемых выборок применяли критерий X2:When assessing the compliance of the data of the studied samples, the criterion X 2 was used :

X2=Σ(П-Е)2/Е,X 2 = Σ (P-E) 2 / E,

где П - показатель в исследуемой группе;where P is the indicator in the study group;

Е - данные контрольной группы.E - data of the control group.

Если вычисленный критерий не превышает табличного для уровня значимости 0.05, то данные о частоте генотипов, полученные нами, соответствуют контрольным.If the calculated criterion does not exceed the tabular one for the significance level of 0.05, then the data on the genotype frequency obtained by us correspond to the control.

Вышеприведенные примеры свидетельствуют о возможности использовать заявленный способ для выявления генетической предрасположенности человека к развитию осложнений после травматического повреждения, а именно к развитию посттравматического остеоартроза коленного сустава. Способ можно использовать при отборе для разных сфер деятельности человека с повышенной двигательной активностью (травмоопасные профессии, спорт).The above examples indicate the possibility of using the claimed method to identify a person’s genetic predisposition to the development of complications after traumatic injury, namely the development of post-traumatic osteoarthritis of the knee joint. The method can be used in the selection for different fields of activity of a person with increased motor activity (traumatic professions, sports).

Источники информацииInformation sources

1. Heidari В. Knee osteoarthritis prevalence, risk factors, pathogenesis and features // Caspian J. Intern. Med. - 2011. - Vol. 2, No. 2. - P. 205-12.1. Heidari B. Knee osteoarthritis prevalence, risk factors, pathogenesis and features // Caspian J. Intern. Med. - 2011 .-- Vol. 2, No. 2. - P. 205-12.

2. Капустина H.B., Кобракова Т.Д. Применение артрадола в восстановительном лечении больных посттравматическим остеоартрозом коленных суставов // Спортивная медицина: наука и практика. - 2013. - №3. - С. 12-15.2. Kapustina H.B., Kobrakova TD The use of artradol in the rehabilitation treatment of patients with post-traumatic osteoarthritis of the knee // Sports Medicine: Science and Practice. - 2013. - No. 3. - S. 12-15.

3. Anderson D.D., Chubinskaya S., Guilak F., Martin J.A., Oegema T.R., Olson S.A. et al. Post-traumatic osteoarthritis: improved understanding and opportunities for early intervention // J. Orthop. Res. - 2011. - Vol. 29. - P. 802-9.3. Anderson D.D., Chubinskaya S., Guilak F., Martin J.A., Oegema T.R., Olson S.A. et al. Post-traumatic osteoarthritis: improved understanding and opportunities for early intervention // J. Orthop. Res. - 2011 .-- Vol. 29. - P. 802-9.

4. Chapman K., Valdes A.M. Genetic factors in OA pathogenesis // Bone. - 2012. - Vol. 51. - P. 258-64.4. Chapman K., Valdes A.M. Genetic factors in OA pathogenesis // Bone. - 2012. - Vol. 51. - P. 258-64.

5. Reynard L.N., Louhlin J. Genetics and epigenetics of osteoarthritis // Maturitas. - 2012. - Vol. 71, No. 3. - P. 200-4.5. Reynard L.N., Louhlin J. Genetics and epigenetics of osteoarthritis // Maturitas. - 2012. - Vol. 71, No. 3. - P. 200-4.

6. Gonzalez A. Osteoarthritis year 2013 in review: genetics and genomics // Osteoarthritis and Cartilage (2013).6. Gonzalez A. Osteoarthritis year 2013 in review: genetics and genomics // Osteoarthritis and Cartilage (2013).

7. Evangelou E., Valdes A.M., Kerkhof H.J.M. Meta-analyses of genome-wide association studies confirms a susceptibility locus for knee osteoarthritis on chromosome 7q22 // Ann. Rheum. Dis. - 2011. - Vol. 70. - P. 349-55.7. Evangelou E., Valdes A.M., Kerkhof H.J.M. Meta-analyses of genome-wide association studies confirms a susceptibility locus for knee osteoarthritis on chromosome 7q22 // Ann. Rheum. Dis. - 2011 .-- Vol. 70. - P. 349-55.

8. Valdes A.M., Hart D.J., Jones K.A., Surdulescu G., Swarbrick P., Doyle D.V. et al. Association study of candidate genes for the prevalence and progression of knee osteoarthritis // Arthritis Rheum. - 2004. - Vol. 50, No. 8. - P. 2497-2507.8. Valdes A.M., Hart D.J., Jones K.A., Surdulescu G., Swarbrick P., Doyle D.V. et al. Association study of candidate genes for the prevalence and progression of knee osteoarthritis // Arthritis Rheum. - 2004. - Vol. 50, No. 8. - P. 2497-2507.

9. Kerna I., Kisand K., Tamm A.E., Lintrop M., Veske K., Tamm A.O. Missense single nucleotide polymorphism of the ADAM12 gene is associated with radiographic knee osteoarthritis in middle-aged Estonian cohort // Osteoarthritis and Cartilage. - 2009. - Vol. 17. - P. 1093-8.9. Kerna I., Kisand K., Tamm A.E., Lintrop M., Veske K., Tamm A.O. Missense single nucleotide polymorphism of the ADAM12 gene is associated with radiographic knee osteoarthritis in middle-aged Estonian cohort // Osteoarthritis and Cartilage. - 2009. - Vol. 17. - P. 1093-8.

10. Prieto-Montana J.R., Riancho J.A. Osteoarthritis as a genetic condition // Rev esp. cir. ortop. traumatol. - 2009. - Vol. 53, No. 4. - P. 271-7.10. Prieto-Montana J.R., Riancho J.A. Osteoarthritis as a genetic condition // Rev esp. cir. ortop. traumatol. - 2009. - Vol. 53, No. 4. - P. 271-7.

11. Smith A.J.P., Keen L.J., Billingham M.J., Perry M.J., Elson C.J., Kirwan J.R. et al. Extended haplotypes and linkage disequilibrium in the IL1R1-IL-1A-IL-1B-IL-1RN gene cluster // Genes Immun. - 2004. - Vol. 5. - P. 451-460.11. Smith A.J.P., Keen L.J., Billingham M.J., Perry M.J., Elson C.J., Kirwan J.R. et al. Extended haplotypes and linkage disequilibrium in the IL1R1-IL-1A-IL-1B-IL-1RN gene cluster // Genes Immun. - 2004. - Vol. 5. - P. 451-460.

12. Moxley G., Meulenbelt I., Chapman K., van Diujn С.М., Slagboom P.E., Neale M.C. et al. lnterleukin-1 region meta-analysis with osteoarthritis phenotypes // Osteoarthritis and Cartilage. - 2009. - Vol. 18. - P. 200-207.12. Moxley G., Meulenbelt I., Chapman K., van Diujn S.M., Slagboom P.E., Neale M.C. et al. lnterleukin-1 region meta-analysis with osteoarthritis phenotypes // Osteoarthritis and Cartilage. - 2009. - Vol. 18. - P. 200-207.

13. Kerkhof H.J.M., Doherty M., Arden N.K., Abramson S.B., Attur M., Bos S.D. et al. Large-scale meta-analyses of interleukin-1 beta and interleukin-1 receptor antagonist polymorphisms on risk of radiographic hip and knee osteoarthritis and severity of knee osteoarthritis // Osteoarthritis and Cartilage. - 2011. - Vol. 19. - P. 265-71.13. Kerkhof H.J.M., Doherty M., Arden N.K., Abramson S.B., Attur M., Bos S.D. et al. Large-scale meta-analyses of interleukin-1 beta and interleukin-1 receptor antagonist polymorphisms on risk of radiographic hip and knee osteoarthritis and severity of knee osteoarthritis // Osteoarthritis and Cartilage. - 2011 .-- Vol. 19. - P. 265-71.

14. Valdes A.M., Spector T.D. The clinical relevance of genetic susceptibility to osteoarthritis // Best Pract. Res. Cl. Rh. - 2010. - Vol. 24. - P. 3-14.14. Valdes A.M., Spector T.D. The clinical relevance of genetic susceptibility to osteoarthritis // Best Pract. Res. Cl. Rh. - 2010 .-- Vol. 24. - P. 3-14.

15. Куликова K.B., Кибардин A.B., Гнучев H.B., Георгиев Г.П., Ларин С.С. Сигнальный путь Wnt и его значение для развития меланомы // СТМ. - 2012. - №3. - С. 107-112.15. Kulikova K.B., Kibardin A.B., Gnuchev H.B., Georgiev G.P., Larin S.S. The Wnt signaling pathway and its significance for the development of melanoma // STM. - 2012. - No. 3. - S. 107-112.

16. Kerkhof J.M., Uitterlinden A.G., Valdes A.M., Hart D.J., Rivadeneira F., Jhamai M. et al. Radiographic osteoarthritis at three joint sites and FRZB, LRP5 and LRP6 polymorphisms in two population-based cohorts // Osteoarthritis and Cartilage. - 2008. - Vol. 16. - P. 1141-9.16. Kerkhof J.M., Uitterlinden A.G., Valdes A.M., Hart D.J., Rivadeneira F., Jhamai M. et al. Radiographic osteoarthritis at three joint sites and FRZB, LRP5 and LRP6 polymorphisms in two population-based cohorts // Osteoarthritis and Cartilage. - 2008. - Vol. 16. - P. 1141-9.

17. RU 2249210, 27.03.2005.17. RU 2249210, 03/27/2005.

18. Lee Y.H., Woo J.H., Choi S.J., Ji J.D., Song G.G. Vitamin D receptor Taql, Bsml and Apal polymorphisms and osteoarthritis susceptibility: A meta-analysis // Joint Bone Spine. - 2009. - Vol. 76. - P. 156-161.18. Lee Y.H., Woo J.H., Choi S.J., Ji J.D., Song G.G. Vitamin D receptor Taql, Bsml and Apal polymorphisms and osteoarthritis susceptibility: A meta-analysis // Joint Bone Spine. - 2009. - Vol. 76. - P. 156-161.

19. Stiebel M., Miller L.E., Block J.E. Post-traumatic knee osteoarthritis in the young patient: therapeutic dilemmas and emerging technologies // Open Access J. Sports Med. - 2014. - Vol. 5. - P. 73-9.19. Stiebel M., Miller L.E., Block J.E. Post-traumatic knee osteoarthritis in the young patient: therapeutic dilemmas and emerging technologies // Open Access J. Sports Med. - 2014 .-- Vol. 5. - P. 73-9.

20. Valdes A.M., Doherty S.A., Muir K.R., Wheeler M., Maciewicz R.A., Zhang W. et al. The genetic contribution to severe post-traumatic osteoarthritis // Ann. Rheum. Dis. - 2013. - Vol. 72. - P. 1687-90.20. Valdes A.M., Doherty S.A., Muir K.R., Wheeler M., Maciewicz R.A., Zhang W. et al. The genetic contribution to severe post-traumatic osteoarthritis // Ann. Rheum. Dis. - 2013 .-- Vol. 72. - P. 1687-90.

21. Ганусевич И.И. Роль матриксных металлопротеиназ (ММП) при злокачественных новообразованиях. I. Характеристика ММП, регуляция их активности, прогностическое значение // Онкология. - 2010. - Т. 12, №. - С. 10-6.21. Ganusevich I.I. The role of matrix metalloproteinases (MMP) in malignant neoplasms. I. Characterization of MMP, regulation of their activity, prognostic value // Oncology. - 2010. - T. 12, No. - S. 10-6.

22. Jormsjo S., Ye S., Moritz J., Walter D.H., Dimmeler S., Zeiher A.M. et al. Allele-specific regulation of matrix metalloproteinase-12 gene activity is associated with coronary artery luminal dimensions in diabetic patients with manifest coronary artery disease // Circ. Res. - 2000. - Vol. 86. - P. 998-1003.22. Jormsjo S., Ye S., Moritz J., Walter D.H., Dimmeler S., Zeiher A.M. et al. Allele-specific regulation of matrix metalloproteinase-12 gene activity is associated with coronary artery luminal dimensions in diabetic patients with manifest coronary artery disease // Circ. Res. - 2000. - Vol. 86. - P. 998-1003.

23. Rodriguez D., Morrison C.J., Overall C.M. Matrix metalloproteinases: What do they not do? New substrates and biological roles identified by murine models and proteomics // Biochim Biophys Acta. - 2010. - Vol. 1803. - P. 39-54.23. Rodriguez D., Morrison C.J., Overall C.M. Matrix metalloproteinases: What do they not do? New substrates and biological roles identified by murine models and proteomics // Biochim Biophys Acta. - 2010 .-- Vol. 1803. - P. 39-54.

24. Yamana K., Bilim V., Hara N., Kasahara I., Itoi T. et al. Prognostic impact of FAS/CD95/APO-1 in urothelial cancers: decreased expression of Fas is associated with disease progression // Br. J. Cancer. - 2005. - Vol. 93. - P. 544-51.24. Yamana K., Bilim V., Hara N., Kasahara I., Itoi T. et al. Prognostic impact of FAS / CD95 / APO-1 in urothelial cancers: decreased expression of Fas is associated with disease progression // Br. J. Cancer. - 2005. - Vol. 93. - P. 544-51.

25. Johnson M., Toms S. Mitogenic signal transduction pathways in meningiomas: novel targets for meningioma chemotherapy? // J. Neuropathol. Exp. Neurol. - 2005. - Vol. 64. - P. 1029-36.25. Johnson M., Toms S. Mitogenic signal transduction pathways in meningiomas: novel targets for meningioma chemotherapy? // J. Neuropathol. Exp. Neurol. - 2005. - Vol. 64. - P. 1029-36.

26. Kaspiris A., Papadimitriou E., Chronopoulos E., Vasiliadis E., Khaldi L., Kouvaras I. et al. Immunolocalization of the human metalloelactase MMP-12 in the cartilage and subchondral bone in osteoarthritis // Bone. - 2012. - Vol. 50, Supple. 1. - S185.26. Kaspiris A., Papadimitriou E., Chronopoulos E., Vasiliadis E., Khaldi L., Kouvaras I. et al. Immunolocalization of the human metalloelactase MMP-12 in the cartilage and subchondral bone in osteoarthritis // Bone. - 2012. - Vol. 50, Supple. 1.- S185.

27. Oh H., Yang S., Park M., Chun J.-S. Matrix metalloproteinase MMP-12 regulates MMP-9 expression in interleukin-1-treated articular chondrocytes // J. Cell Biochem. - 2008. - Vol. 105. - P. 1443-50.27. Oh H., Yang S., Park M., Chun J.-S. Matrix metalloproteinase MMP-12 regulates MMP-9 expression in interleukin-1-treated articular chondrocytes // J. Cell Biochem. - 2008. - Vol. 105. - P. 1443-50.

28. Ye S. Polymorphism in matrix metalloproteinase gene promoters: implication in regulation of gene expression and susceptibility of various diseases // Matrix Biol. - 2000. - Vol. 19. - P. 623-9.28. Ye S. Polymorphism in matrix metalloproteinase gene promoters: implication in regulation of gene expression and susceptibility of various diseases // Matrix Biol. - 2000. - Vol. 19. - P. 623-9.

29. Shin A., Cai Q., Shu X.-O., Gao Y.-T., Zheng W. Genetic polymorphisms in the matrix metalloproteinase 12 gene (MMP12) and breast cancer risk and survival: the Shanghai Breast Cancer Study // Breast Cancer Res. - 2005. - Vol. 7, No. 4. - R506-512.29. Shin A., Cai Q., Shu X.-O., Gao Y.-T., Zheng W. Genetic polymorphisms in the matrix metalloproteinase 12 gene (MMP12) and breast cancer risk and survival: the Shanghai Breast Cancer Study // Breast Cancer Res. - 2005. - Vol. 7, No. 4. - R506-512.

30. Van Diemen C.C., Postma D.S., Siedlinski M., Blokstra A., Smit H.A., Boezen H.M. Genetic variation in TIMP1 but not MMPs predict excess FEV1 decline in two general population-based cohorts // Respiratory Res. - 2011. - Vol. 12:57. - P. 1-8.30. Van Diemen CC, Postma DS, Siedlinski M., Blokstra A., Smit HA, Boezen HM Genetic variation in TIMP1 but not MMPs predict excess FEV 1 decline in two general population-based cohorts // Respiratory Res. - 2011 .-- Vol. 12:57. - P. 1-8.

31. Kader K.A., Liu J., Shao L., Dinney C.P., Lin J., Wang Y. et al. Matrix metalloproteinase polymorphisms are associated with bladder cancer invasiveness // Clin. Cancer Res. - 2007. - Vol. 13. - P. 2614-20.31. Kader K.A., Liu J., Shao L., Dinney C.P., Lin J., Wang Y. et al. Matrix metalloproteinase polymorphisms are associated with bladder cancer invasiveness // Clin. Cancer Res. - 2007. - Vol. 13. - P. 2614-20.

32. Cornelius L.A., Nehring L.C., Harding E., Bolanowski M., Welgus H.G., Kobayashi D.K. et al. Matrix metalloproteinases generate angiostatin: effects on neovascularization // J. Immunol. - 1998. - Vol. 161. - P. 6845-52.32. Cornelius L.A., Nehring L.C., Harding E., Bolanowski M., Welgus H.G., Kobayashi D.K. et al. Matrix metalloproteinases generate angiostatin: effects on neovascularization // J. Immunol. - 1998. - Vol. 161. - P. 6845-52.

Claims (2)

1. Способ диагностики предрасположенности к посттравматическому остеоартрозу коленного сустава, включающий генотипирование полиморфизма гена, отличающийся тем, что у исследуемых пациентов проводят генотипирование полиморфизма rs2276109 (A-82G) гена ММР-12, при этом при выявлении генотипа GG диагностируют генетическую предрасположенность к развитию посттравматического остеоартроза коленного сустава.1. A method for diagnosing a predisposition to post-traumatic osteoarthritis of the knee joint, including genotyping of a polymorphism of a gene, characterized in that the studied patients carry out genotyping of the rs2276109 (A-82G) polymorphism of the MMP-12 gene, while in identifying the GG genotype, a genetic predisposition to the development of post-traumatic osteoarthritis is diagnosed knee joint. 2. Способ по п. 1, в котором генотипирование проводят с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). 2. The method according to p. 1, in which genotyping is carried out using polymerase chain reaction (PCR).
RU2014153254/15A 2014-12-25 2014-12-25 Method for prediction of predisposition to course of posttraumatic osteoarthrosis of knee joint RU2600860C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014153254/15A RU2600860C2 (en) 2014-12-25 2014-12-25 Method for prediction of predisposition to course of posttraumatic osteoarthrosis of knee joint

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014153254/15A RU2600860C2 (en) 2014-12-25 2014-12-25 Method for prediction of predisposition to course of posttraumatic osteoarthrosis of knee joint

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2014153254A RU2014153254A (en) 2016-07-20
RU2600860C2 true RU2600860C2 (en) 2016-10-27

Family

ID=56413251

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014153254/15A RU2600860C2 (en) 2014-12-25 2014-12-25 Method for prediction of predisposition to course of posttraumatic osteoarthrosis of knee joint

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2600860C2 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2646456C1 (en) * 2017-01-19 2018-03-05 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Читинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения российской федерации Method for prediction of self-existing coxarthrosis development

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005031003A1 (en) * 2003-09-22 2005-04-07 The Regents Of The University Of California Mutations in wnt-frizzled signaling pathways associated with osteoarthritis
US20110065102A1 (en) * 2007-07-27 2011-03-17 Riken Osteoarthritis-sensitive gene
RU2436500C1 (en) * 2010-06-21 2011-12-20 Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" Method of early diagnostics of posttraumatic osteoarthrosis

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005031003A1 (en) * 2003-09-22 2005-04-07 The Regents Of The University Of California Mutations in wnt-frizzled signaling pathways associated with osteoarthritis
US20110065102A1 (en) * 2007-07-27 2011-03-17 Riken Osteoarthritis-sensitive gene
RU2436500C1 (en) * 2010-06-21 2011-12-20 Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" Method of early diagnostics of posttraumatic osteoarthrosis

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
POSTHUMUS M. et al. Matrix metalloproteinase genes on chromosome 11q22 and the risk of anterior cruciate ligament (ACL) rupture. Scand J Med Sci Sports. 2012 Aug; 22(4): 523-533. Epub 2011 Mar 16 [Найдено 12.07.2016] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21410539. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2646456C1 (en) * 2017-01-19 2018-03-05 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Читинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения российской федерации Method for prediction of self-existing coxarthrosis development

Also Published As

Publication number Publication date
RU2014153254A (en) 2016-07-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yao et al. The long noncoding RNA TTTY15, which is located on the Y chromosome, promotes prostate cancer progression by sponging let-7
Kubiczkova et al. Circulating serum microRNAs as novel diagnostic and prognostic biomarkers for multiple myeloma and monoclonal gammopathy of undetermined significance
Hashemi et al. Association of pre-miRNA-146a rs2910164 and pre‑miRNA-499 rs3746444 polymorphisms and susceptibility to rheumatoid arthritis
Ratneswaran et al. Osteoarthritis year in review: genetics, genomics, epigenetics
Aminuddin et al. Mitochondrial DNA alterations may influence the cisplatin responsiveness of oral squamous cell carcinoma
Toraih et al. Precursor miR-499a variant but not miR-196a2 is associated with rheumatoid arthritis susceptibility in an Egyptian population
Tornero-Esteban et al. Signature of microRNA expression during osteogenic differentiation of bone marrow MSCs reveals a putative role of miR-335-5p in osteoarthritis
KR20170120124A (en) Biomarker panel for cancer detection
Sáenz-López et al. VEGF polymorphisms are not associated with an increased risk of developing renal cell carcinoma in Spanish population
EP2692871A1 (en) Classification of cancers
Cui et al. An ADAM10 promoter polymorphism is a functional variant in severe sepsis patients and confers susceptibility to the development of sepsis
WO2015153808A1 (en) Tert and braf mutations in human cancer
Skiriutė et al. Glioma malignancy-dependent NDRG2 gene methylation and downregulation correlates with poor patient outcome
Zhang et al. Long non-coding RNAs genes polymorphisms and their expression levels in patients with rheumatoid arthritis
US11319592B2 (en) TERT and BRAF mutations in human cancer
Lepetsos et al. Association of MMP‐1‐1607 1G/2G (rs1799750) polymorphism with primary knee osteoarthritis in the Greek population
Bafrani et al. Association analysis of the common varieties of IL17A and IL17F genes with the risk of knee osteoarthritis
Nivet et al. Transcriptional characteristics of different sized follicles in relation to embryo transferability: potential role of hepatocyte growth factor signalling
Heng et al. Integrated analysis of promoter methylation and expression of telomere related genes in breast cancer
Peng et al. Pan-cancer analysis combined with experiments predicts CTHRC1 as a therapeutic target for human cancers
Kõks et al. Psoriasis-specific RNA isoforms identified by RNA-seq analysis of 173,446 transcripts
El Khachibi et al. Screening of exon 11 of BRCA1 gene using the high resolution melting approach for diagnosis in Moroccan breast cancer patients
Yu et al. Identification of differential splicing genes in gliomas using exon expression profiling
Chen et al. Survival prognosis, tumor immune landscape, and immune responses of ADAMTS14 in clear cell renal cell carcinoma and its potential mechanisms
CA2877400A1 (en) Risk stratification in influenza

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20201226