RU2585381C1 - Способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой - Google Patents
Способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой Download PDFInfo
- Publication number
- RU2585381C1 RU2585381C1 RU2015110874/15A RU2015110874A RU2585381C1 RU 2585381 C1 RU2585381 C1 RU 2585381C1 RU 2015110874/15 A RU2015110874/15 A RU 2015110874/15A RU 2015110874 A RU2015110874 A RU 2015110874A RU 2585381 C1 RU2585381 C1 RU 2585381C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- igf
- patients
- hydrodynamics
- angle glaucoma
- primary open
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицинской диагностики и может быть использовано для прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России. Изобретение включает забор крови, выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизма гена IGF-1 c.-1410T>C. Прогнозируют неблагоприятные показатели гидродинамики при высоком значении истинного ВГД и низком показателе коэффициента легкости оттока внутриглазной жидкости в случае выявления генотипа СС и ТС IGF-1 (rs 35767). Прогнозируют благоприятные показатели гидродинамики в случае выявления генотипа ТТ IGF-1 у больных первичной открытоугольной глаукомой. 3 ил.
Description
Способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой
Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой.
Первичная открытоугольная глаукома (далее ПОУГ) - это хроническое заболевание глаз, которое характеризуется постоянным или периодическим повышением внутриглазного давления (далее ВГД), сопровождается прогрессирующей оптической нейропатией, проявляющейся атрофией зрительного нерва с характерными изменениями поля зрения [Егоров E.А. Глаукома. Национальное руководство /под ред. E.А. Егорова. - М.: ГЭОТАР-Медиа. - 2013. - 824 с.]. В настоящее время по данным ВОЗ в мире около 68 млн человек страдает глаукомой. Число ослепших вследствие глаукомы составляет 5,2 - 9,1 млн человек, и их число неуклонно увеличивается [Pascolini, D. Global estimates of visual impairment: 2010 /Pascolini D., Mariotti S.P. //British Journal of Ophthalmology. - 2012. - Vol.96. - no. 5. - P. 614-618].
ПОУГ является мультифакториальным заболеванием [Banerjee D. Comprehensive analysis of myocilin variants in east Indian POAG patients /Banerjee D., Bhattacharjee А., Ponda А., Ray K. //Molecular Vision. - 2012. Vol.18. - P. 1548-1557], в этиопатогенезе которого важная роль принадлежит факторам роста (далее ФР), регулирующим продукцию внеклеточного матрикса, участвующим в процессах репарации, влияющим на ангиогенез, пролиферацию и апоптоз клеток [Fingert J. Primary open-angle glaucoma genes /Fingert J.H. //Eye. - 2011. Vol.25. - no. 5. - P. 587-595].
Одними из значимых факторов, характеризующих развитие и прогрессирование ПОУГ, являются показатели гидродинамики глаз: истинное ВГД (мм рт. ст.) и коэффициент легкости оттока внутриглазной жидкости (мм3/мин/мм рт. ст.). Статистическая норма истинного ВГД составляет от 10 до 21 мм рт. ст., коэффициент легкости оттока варьирует от 0,16 до 0,48 мм3/мин/мм рт. ст. При прогрессировании глаукомы изменения показателей гидродинамики позволяют установить причину и степень снижения секреции водянистой влаги в глазу, а также определить эффективность проведенного лечения и при необходимости изменить лечебную тактику [Егоров E.А. Национальное руководство по глаукоме (путеводитель) для поликлинических врачей /Под ред. E.А. Егорова, Ю.С. Астахова, А.Г. Щуко.- М., 2008.- 136 с.].
Инсулиноподобный фактор роста-1 IGF-1 - один из важнейших членов семейства инсулиноподобных ФР, осуществляющих регуляцию процессов роста, дифференцировки, развития клеток и тканей. IGF-1 состоит из 70 аминокислот в одной цепочке с тремя внутримолекулярными дисульфидными мостиками. Также этот белок играет активную роль в процессах старения организма. Молекулярная масса IGF-1 7,6 кДа [Cаppolа А. Insulin-like growth factor I and interleukin-6 contribute synergistically to disability and mortality in older women /Cаppolа А., Xue Q., Ferrucci L. et аl. //J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2003. - Vol.88. №5. - P. 2019-2025].
Ген IGF-1 включает шесть экзонов, локализован на длинном плече хромосомы 12 человека [Zhang H. Insulin-like growth factor binding protein-1 (IGFBP-1) inhibit breast cancer cell motility /Zhang H., Yee D. //Cancer Res. - 2002. - Vol.62. - P. 4369-4375].
IGF-1 и его рецептор IGFR-1 регулируют процессы роста и дифференцировки в эпителиоцитах роговицы и хрусталика, стекловидном теле, клетках сетчатки [Ko J. IGF-1 released by corneal epithelial cells induces up-regulation of N-cadherin in corneal fibroblasts. /Ko J., Yanai R., Nishida T. //J. Cell. Physiol. - 2009. - Vol. 221(1). - P. 254-261].
Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2014 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой.
Источники информации: сайты Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.
В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой.
Задачей настоящего исследования является создание способа прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой.
Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой, для индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, на основе данных о генетическом полиморфизме IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767).
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой, включающий:
• выделение ДНК из периферической венозной крови;
• анализ полиморфизма гена IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767);
• прогнозирование в случае выявления генотипов СС и ТС IGF-1 неблагоприятных показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой: высокие значения истинного ВГД и низкие показатели коэффициента легкости оттока внутриглазной жидкости;
• прогнозирование в случае выявления генотипа ТТ IGF-1 благоприятных показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой.
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой по данным о генетических вариантах локуса IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767).
Изобретение охарактеризовано на следующих фигурах.
На фиг. 1 представлена дискриминация аллелей по локусу IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), где 
- СC IGF-1, 
- TТ IGF-1, 
- ТС IGF-1, 
- отрицательный контроль.
На фиг. 2 указан показатель истинного ВГД у больных ПОУГ в зависимости от генетических вариантов локуса IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767).
На фиг. 3 показано значение коэффициента легкости оттока внутриглазной жидкости у больных ПОУГ в зависимости от генетических вариантов локуса IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767).
На фиг. 1 две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием уровня относительной флуоресценции (далее УОФ) для одного флуорофора на оси x, относительно УОФ для другого флуорофора на оси y на диаграмме дискриминации аллелей. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю Т, зонд с красителем FAM - аллелю С.
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (СТ).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю Т (УОФ аллеля Т отложены по оси y).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю С (УОФ аллеля С отложены по оси x).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно: в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль.
Способ осуществляют следующим образом.
ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови индивидуумов в 2 этапа. На первом этапе 4 мл крови смешивают с лизирующим буфером, в котором содержится 320 г сахарозы, 1% тритон Х - 100, 5 мл MgCl2, 10 мл трис - HCl (pH 7,6), центрифугируют 20 минут при температуре 4ºС на 4000 об/мин. Далее добавляют 4 мл ЭДТА - Soline, 400 мкл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют в течение 16 часов при 40ºС.
На втором этапе из уже очищенного лизата производят экстракцию ДНК равными долями фенола, фенол-хлороформа, хлороформа и центрифугируют в течение 10 минут при 4000 об/мин. После центрифугирования водный слой удаляют и добавляют два объема охлажденного этанола 96%. Полученную ДНК растворяют в деионизованной, бидистиллированной воде, хранят при температуре -20ºС и в дальнейшем используют для проведения полимеразной цепной реакции (далее ПЦР).
Анализ генетического полиморфизма IGF-1 c.-1410T>C осуществляют методом ПЦР синтеза ДНК, которую проводят на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad Laboratories, USA) с использованием олигонуклеотидных зондов и праймеров для ПЦР фирмы «Синтол». Генотипирование осуществляют с использованием программного обеспечения «CFX Manager™».
Возможность использования предложенного способа для оценки показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой подтверждает анализ результатов наблюдений 252 больных (450 глаз) ПОУГ и 191 человек (382 глаза) контрольной группы. Формирование выборок больных и контроль осуществлялись на базе офтальмологического отделения Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа и медицинского центра микрохирургии глаза ООО «Ковчег».
Исследуемые группы были сформированы из индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья РФ и не имеющих родства между собой. В группу больных включались пациенты с ранее установленным или впервые выявленным диагнозом ПОУГ, подтвержденным клиническими, инструментальными и лабораторными методами обследования. С целью получения сведений о гидродинамике проводили тонографию - исследования на электронном тонографе. Определяли основные показатели гидродинамики глаза: истинное внутриглазное давление и коэффициент легкости оттока внутриглазной жидкости.
Группа контроля была сформирована из индивидуумов, не имеющих острых и хронических заболеваний глаз, у которых отсутствовали какие-либо признаки глаукомы, а также они не имели тяжелых соматических патологий, в том числе приводящих к поражениям глаз.
Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществлялось в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета.
Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0».
Выявление ассоциаций генетических вариантов анализируемого локуса с показателями гидродинамики проводили с помощью таблиц сопряженности 2х2, на основе вычисления критерия χ2 (хи-квадрат) с поправкой Йетса на непрерывность.
Характер ассоциаций различных аллелей и генотипов с показателями гидродинамики оценивали при помощи показателя отношения шансов (OR) [Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA /О. Ю. Реброва. - [3-е изд.]. - Москва: Медиа Сфера, 2006. - 305 с.]. При проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони - производили перерасчет уровня значимости р для множественных парных сравнений по формуле: рcor=р×n, где р - полученный уровень статистической значимости, n - количество парных сравнений. За статистически значимый уровень принимали рbonf ≤ 0,05.
Распределение показателей гидродинамики ПОУГ в исследуемой выборке не соответствовало закону нормального распределения (критерий Шапиро-Уилка W=0,97 при p<0,05), поэтому для его характеристики использовалась медиана и интерквартильный размах, сравнительная оценка проводилась с помощью непараметрического метода Манна-Уитни [Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA /О.Ю. Реброва. - [3-е изд.]. - Москва: Медиа Сфера, 2006. - 305 с.]. При этом анализе группа гетерозигот присоединялась к той группе гомозигот, у которой отсутствовали различия значений медиан и интерквартильных интервалов от гетерозиготных носителей или они были наименьшими.
Установлено, что индивидуумы с генотипом СС и ТС по локусу IGF-1 (rs 35767) имели повышенное значение истинного ВГД (22,3 мм рт. ст.) в сравнении с индивидуумами с генотипом TТ IGF-1 (rs 35767) - 19,7 мм рт. ст. и низкий показатель коэффициента легкости оттока внутриглазной жидкости 0,15 мм3/мин/мм рт. ст. против 0,20 мм3/мин/мм рт. ст. соответственно (фиг. 2-3). Единицей измерения являлся глаз, данные различия статистически достоверны (p=0,04; p=0,02).
Таким образом, индивидуумы с генотипами СС и ТС IGF-1 (rs 35767) ассоциированы высокими значениями истинного ВГД и низкими показателями коэффициента легкости оттока внутриглазной жидкости и могут служить генетическими маркерами неблагоприятного течения глаукоматозного процесса.
Пример, подтверждающий осуществимость предложенного изобретения.
• Генотипы СС IGF-1 и ТС IGF-1 были обнаружены у пациента А. больного ПОУГ. Исследования подтвердили неблагоприятный прогноз: высокое значение истинного ВГД - 25,3 мм рт. ст. и низкий показатель коэффициента легкости оттока внутриглазной жидкости - 0,09 мм3/мин/мм рт. ст. При дальнейшем динамическом наблюдении этого пациента было определено ухудшение зрительных функций.
• У индивидуума Б., страдающего первичной открытоугольной глаукомой, выявлен генотип ТТ IGF-1. Установлены следующие показатели гидродинамики: показатель истинного ВГД - 18,5 мм рт. ст. и коэффициент легкости оттока внутриглазной жидкости - 0,17 мм3/мин./мм рт. ст. При дальнейшем динамическом наблюдении этого пациента была отмечена стабилизация глаукоматозного процесса.
Использование данного способа позволяет прогнозировать показатели гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, что будет способствовать более эффективной реализации лечебных мероприятий по предупреждению прогрессирования глаукомной оптической нейропатии.
Claims (1)
-
Способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, включающий забор крови, выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизма гена IGF-1 c.-1410T>C и прогноз неблагоприятных показателей гидродинамики: высокого значения истинного ВГД и низких показателей коэффициента легкости оттока внутриглазной жидкости в случае выявления генотипа СС и ТС IGF-1 (rs 35767), прогноз благоприятных показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой в случае выявления генотипа ТТ IGF-1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015110874/15A RU2585381C1 (ru) | 2015-03-27 | 2015-03-27 | Способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015110874/15A RU2585381C1 (ru) | 2015-03-27 | 2015-03-27 | Способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2585381C1 true RU2585381C1 (ru) | 2016-05-27 |
Family
ID=56096077
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015110874/15A RU2585381C1 (ru) | 2015-03-27 | 2015-03-27 | Способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2585381C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2816056C1 (ru) * | 2023-06-06 | 2024-03-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский Государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ перерасчета значений тонометрического внутриглазного давления по данным кератотопографических показателей |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2346655C1 (ru) * | 2007-11-16 | 2009-02-20 | Государственное учреждение "УФИМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЛАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ" Академии наук Республики Башкортостан (УфНИИ ГБ АН РБ) | Способ прогнозирования прогрессирования открытоугольной глаукомы |
| EP2161334A1 (en) * | 2007-04-17 | 2010-03-10 | Santen Pharmaceutical Co., Ltd | Method for determination of progression risk of glaucoma |
-
2015
- 2015-03-27 RU RU2015110874/15A patent/RU2585381C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2161334A1 (en) * | 2007-04-17 | 2010-03-10 | Santen Pharmaceutical Co., Ltd | Method for determination of progression risk of glaucoma |
| RU2346655C1 (ru) * | 2007-11-16 | 2009-02-20 | Государственное учреждение "УФИМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЛАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ" Академии наук Республики Башкортостан (УфНИИ ГБ АН РБ) | Способ прогнозирования прогрессирования открытоугольной глаукомы |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ИОМДИНА Е.Н. и др. Новый алгоритм оценки гидродинамических показателей глаза при глаукоме. Вестник офтальмологии. 2014. N 4. с. 8-13. БИКБОВ М.М., Суркова В.К., Калентьева А.З., Хуснутдинова Э.К., Джемилева Л.У. Молекулярно-генетический анализ и его значение в диагностике первичной открытоугольной глаукомы // Рос. Офтальмол. журн. 2010. 1. С. 4-7. NOURI-MAHDAVI K et al. Prediction of visual field progression in glaucoma. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2004 Dec;45(12):4346-51. Найдено в PubMed, PMID: 15557442 . * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2816056C1 (ru) * | 2023-06-06 | 2024-03-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский Государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ перерасчета значений тонометрического внутриглазного давления по данным кератотопографических показателей |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Khan et al. | Homozygous mutations in PXDN cause congenital cataract, corneal opacity, and developmental glaucoma | |
| Chen et al. | Mutations in FYCO1 cause autosomal-recessive congenital cataracts | |
| van Koolwijk et al. | Genetic contributions to glaucoma: heritability of intraocular pressure, retinal nerve fiber layer thickness, and optic disc morphology | |
| Nosková et al. | Mutations in DNAJC5, encoding cysteine-string protein alpha, cause autosomal-dominant adult-onset neuronal ceroid lipofuscinosis | |
| Riazuddin et al. | Mutations in LOXHD1, a recessive-deafness locus, cause dominant late-onset Fuchs corneal dystrophy | |
| Pasutto et al. | Profiling of WDR36 missense variants in German patients with glaucoma | |
| Mabuchi et al. | The OPA1 gene polymorphism is associated with normal tension and high tension glaucoma | |
| Guo et al. | Detection of clinically relevant genetic variants in Chinese patients with nanophthalmos by trio-based whole-genome sequencing study | |
| Schmid et al. | A new, X-linked endothelial corneal dystrophy | |
| Shetty et al. | Two novel missense substitutions in the VSX1 gene: clinical and genetic analysis of families with Keratoconus from India | |
| Waryah et al. | The novel heterozygous Thr377Arg MYOC mutation causes severe Juvenile Open Angle Glaucoma in a large Pakistani family | |
| Hogewind et al. | Autosomal dominant optic neuropathy and sensorineual hearing loss associated with a novel mutation of WFS1 | |
| Kuznetsova et al. | Exclusion of RPGRIP1 ins44 from primary causal association with early-onset cone–rod dystrophy in dogs | |
| RU2592205C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития поуг с использованием генетических данных | |
| RU2580306C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз | |
| Prokisch et al. | A population-based epidemiological and genetic study of X-linked retinitis pigmentosa | |
| Naz et al. | A novel locus for autosomal recessive retinitis pigmentosa in a consanguineous Pakistani family maps to chromosome 2p | |
| Hu et al. | A novel locus for congenital simple microphthalmia family mapping to 17p12-q12 | |
| Hornan et al. | Novel retinal and cone photoreceptor transcripts revealed by human macular expression profiling | |
| RU2585381C1 (ru) | Способ прогнозирования показателей гидродинамики у больных первичной открытоугольной глаукомой | |
| RU2641254C1 (ru) | Способ дифференциальной и подтверждающей молекулярно-генетической диагностики врожденной аниридии и WAGR-синдрома | |
| Li et al. | Localization of a novel gene for congenital nonsyndromic simple microphthalmia to chromosome 2q11-14 | |
| Zhou et al. | Evaluation of Lipin 2 as a candidate gene for autosomal dominant 1 high-grade myopia | |
| Huang et al. | Genetic, environmental and other risk factors for progression of retinitis pigmentosa | |
| RU2558861C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170328 |