RU2583304C1 - Способ отбора in vitro кислотоустойчивых форм клевера лугового - Google Patents
Способ отбора in vitro кислотоустойчивых форм клевера лугового Download PDFInfo
- Publication number
- RU2583304C1 RU2583304C1 RU2014151553/10A RU2014151553A RU2583304C1 RU 2583304 C1 RU2583304 C1 RU 2583304C1 RU 2014151553/10 A RU2014151553/10 A RU 2014151553/10A RU 2014151553 A RU2014151553 A RU 2014151553A RU 2583304 C1 RU2583304 C1 RU 2583304C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- clover
- medium
- acid
- plants
- meadow
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области сельского хозяйства. Изобретение представляет собой способ отбора in vitro кислотоустойчивых генотипов клевера лугового, включающий культивирование морфогенной культуры клевера лугового на питательной среде Гамборга В5, где морфогенную культуру получают путем проращивания семян и культивированием полученных проростков на питательной агаризованной среде Гамборга В5 с 2,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 100 мг/л Al3+ при субкультивировании на среду того же состава, но без добавления Al3+ эпикотилей проростков, образовавших корешки не менее 4-5 мм на селективной среде с 100 мг/л Al3+, при этом в качестве кислотоустойчивых растений клевера лугового отбирают растения с длиной корней не менее 50 мм. Изобретение может быть использовано в селекции растений для создания исходного материала клевера лугового с повышенной устойчивостью к кислотности почв, в исследованиях по физиологии и генетике растений. 1 ил., 3 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в селекции растений для создания исходного материала клевера лугового с повышенной устойчивостью к кислотности почв, в исследованиях по физиологии и генетике растений.
Известен способ отбора кислотоустойчивых форм клевера лугового методом рулонной культуры [1].
К недостаткам данного способа можно отнести следующее. Способ ограничен отбором кислотоустойчивых форм, но не содержит сведений о вегетативном размножении полученных форм и не обеспечивает длительное сохранение ценных кислотоустойчивых форм, что снижает воспроизводимость контролируемых скрещиваний и проведение генетических исследований признака кислотоустойчивости у такого строгого перекрестноопыляемого растения, как клевер луговой.
В литературе имеются сведения о способе отбора кислотоустойчивых форм клевера лугового по рН клеточного сока [2].
К недостаткам данного способа следует отнести то, что он не содержит сведения о микроразмножении ценных кислотоустойчивых генотипов клевера лугового. Это не позволяет длительно сохранять отобранные формы.
В литературе имеются сведения о способе регенерации морфогенной ткани клевера лугового из эпикотилей на селективной среде Гамборга В5 с канамицином в процессе генетической трансформации [3].
К недостаткам этого способа можно отнести следующее. Канамицин, используемый в качестве селективного фактора, не пригоден для отбора кислотоустойчивых форм. Для регенерации при генетической трансформации используют только генотипы с высокой регенерационной способностью.
Цель изобретения - разработка метода отбора in vitro кислотоустойчивых генотипов клевера лугового.
В предлагаемом способе поставленная цель достигается тем, что морфогенную культуру клевера лугового получают путем проращивания семян и культивирования полученных проростков на питательной агаризованной среде Гамборга В5 с 2,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 100 мг/л Al3+ при субкультивировании на среду того же состава, но без Al3+ эпикотилей проростков, образовавших корешки не менее 4-5 мм на селективной среде с 100 мг/л Аl3+, а оценку кислотоустойчивости проводят по длине образовавшихся через 3-4 недели корней.
На фиг. 1 изображены растения клевера лугового в вегетационном опыте на почвах с нормальной и повышенной кислотностью.
Способ осуществляется следующим образом: из сортообразцов клевера лугового с низкой устойчивостью к почвенной кислотности проводили отбор in vitro генотипов, выдерживающих концентрацию 100 мг/л Аl3+ в питательной среде Гамборга В5 с селективным фактором Аl3+ в концентрации 100 мг/л. Среду и соль алюминия стерилизовали раздельно автоклавированием в течение 30 минут при 1,25 атм., а затем смешивали в стерильных условиях до застывания среды.
Эпикотили проростков клевера лугового, образовавшие через 7-10 дней в селективных условиях корешки длиной не менее 4-5 мм, пересаживали на свежую агаризованную питательную среду того же состава, но без ионов алюминия. При этом в качестве кислотоустойчивых растений клевера лугового отбирали растения с длиной корней не менее 50 мм.
Пример 1.
Проводили отбор in vitro из F3 потомства 4-х клонов клевера лугового на селективной среде со 100 мг Аl3+ на 1 литр агаризованной среды Гамборга В5. Для отбора in vitro использовали сортообразцы клевера лугового с низкой (30 - ВИК7, Т2 - Трио, К7 - Кретуновский) и повышенной (Топ - Топаз) устойчивостью к почвенной кислотности (табл. 1). Для чего скарифицированные асептические семена после их набухания помещали на селективную среду со 100 мг Аl3+ на 1 л среды и на среду того же состава без Аl3+ (контроль).
В табл. 1 представлены результаты изучения кислотоустойчивости in vitro F3 потомства четырех клонов клевера лугового, различающихся по степени полевой кислотоустойчивости на почвах с 10-15 мг подвижного алюминия в 100 г воздушно-сухой почвы и рН 3,6-4,0. В условиях in vitro устойчивость к Аl3+ по отношению к контролю (вариант без алюминия) составляла у Топ - 87,2%; К7 - 56,5%; Т2 - 37,5%; 30-23,9% и к стандарту Топ (st) - 100%; К7 - 71,3%; Т2 - 43,8%; 30-18,0%.
Среди вариантов К7, Т2 и 30 были отобраны проростки клевера лугового, контрастные по корнеобразовательной способности (с корешками длиной не менее 4-5 мм, менее 4-5 мм и без них) после 7-10 дней культивирования на селективной среде. Эпикотили отобранных проростков субкультивированы на свежую агаризованную среду Гамборга В5 того же состава, но без добавления Аl3+ (в связи с токсическим последействием трехвалентного алюминия при последующем пассаже).
Через 3-4 недели культивирования оценку кислотоустойчивости проводили по длине образовавшихся корней (табл. 2). При этом в качестве кислотоустойчивых растений клевера лугового отбирали растения с длиной корней не менее 50 мм.
Пример 2.
Проводили сравнительную оценку в вегетационном опыте кислотоустойчивости растений исходного клона клевера лугового (Кретуновский) и растений-регенерантов клона (К7) на почвах с нормальной и повышенной кислотностью (табл. 3). Наибольшее токсическое действие ион алюминия (Аl3+) оказывал на корневую систему. При этом масса корней более чем в 3 раза у прошедших отбор in vitro растений-регенерантов клона К7 превышали таковую у исходных растений (Кретуновский). Тогда как длина корней снижалась на почвах с повышенной кислотностью в среднем не более чем на 10%. По длине и массе побегов отобранные растения-регенеранты превосходили контрольные в среднем на 20%.
1. Отбор in vitro кислотоустойчивого F3 потомства различных образцов клевера лугового
2. Регенерационная способность in vitro F3 потомства различных образцов клевера лугового
3. Кислотоустойчивость растений клевера лугового в вегетационном опыте на почвах с нормальной и повышенной кислотностью
На фиг. 1 представлены: 1 - исходное растение клевера лугового сортоообразца Кретуновский, выращенное на почве с нормальной кислотностью; 2 - растение-регенерант клевера лугового (К7), выращенное на почве с нормальной кислотностью после отбора in vitro; 3 - растение-регенерант клевера лугового (К7), выращенное на почве с повышенной кислотностью (рН 3,6-3,8); 4 - исходное растение клевера лугового сортоообразца Кретуновский, выращенное на почве с повышенной кислотностью (рН 3,6-3,8).
Растения-регенеранты (К7), прошедшие отбор in vitro, имеют хорошо развитую корневую систему как при выращивании на почвах с нормальной кислотностью (2), так и на почвах с повышенной кислотностью (3), тогда как корневая система у исходного растения сортоообразца Кретуновский (4) значительно меньше развита на почве с повышенной кислотностью, чем у исходного растения (1), выращенного на почве с нормальной кислотностью.
Таким образом, предлагаемый способ отбора in vitro кислотоустойчивых форм клевера лугового позволяет получать кислотоустойчивые генотипы. Проводить их микроразмножение до необходимого количества, создавать длительно сохраняемые in vitro коллекции ценных генотипов, на их основе проводить скрещивания в различных комбинациях и получать селекционные образцы с повышенной устойчивостью к кислотности на почвах с 10-15 мг Аl3+ в 100 г воздушно-сухой почвы и рН 3,6-3,8.
Источники информации
1. Онучина О.Л., Тумасова М.И. Методы и результаты селекции клевера лугового на повышенную кислотоустойчивость // Кормопроизводство. - 2007. - №4. - с. 27-28.
2. Пат. 2138154 РФ, МПК А01Н 1/04. Способ отбора кислотоустойчивых форм клевера лугового / Новоселов М.Ю., Пайвин С.Г. (РФ) - №9810620/13; заявлено 15.01.1998; опубл. 27.09.1999. - Бюл. №27. - 5 с.
3. Пат. 2305931 РФ, МПК А01Н 4/00, А01Н 5/00, A01G 7/00. Способ регенерации растений клевера лугового при генетической трансформации / Солодкая Л.А., Агафодорова М.Н., Куренина Л.В., Лапотышкина Л.И. (РФ) - №2005117826/13; заявлено 09.06.2005; опубл. 20.09.2007. - Бюл. №26. - 6 с.
Claims (1)
- Способ отбора in vitro кислотоустойчивых генотипов клевера лугового, включающий культивирование морфогенной культуры клевера лугового на питательной среде Гамборга В5, отличающийся тем, что морфогенную культуру получают путем проращивания семян и культивированием полученных проростков на питательной агаризованной среде Гамборга В5 с 2,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 100 мг/л Al3+ при субкультивировании на среду того же состава, но без добавления Al3+ эпикотилей проростков, образовавших корешки не менее 4-5 мм на селективной среде с 100 мг/л Al3+, при этом в качестве кислотоустойчивых растений клевера лугового отбирают растения с длиной корней не менее 50 мм.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014151553/10A RU2583304C1 (ru) | 2014-12-19 | 2014-12-19 | Способ отбора in vitro кислотоустойчивых форм клевера лугового |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014151553/10A RU2583304C1 (ru) | 2014-12-19 | 2014-12-19 | Способ отбора in vitro кислотоустойчивых форм клевера лугового |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2583304C1 true RU2583304C1 (ru) | 2016-05-10 |
Family
ID=55959884
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014151553/10A RU2583304C1 (ru) | 2014-12-19 | 2014-12-19 | Способ отбора in vitro кислотоустойчивых форм клевера лугового |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2583304C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2711781C1 (ru) * | 2019-02-01 | 2020-01-22 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр кормопроизводства и агроэкологии имени В.Р. Вильямса" | Способ отбора in vitro кислотовыносливых форм клевера лугового (trifolium pratense l.) |
| RU2812353C1 (ru) * | 2023-03-20 | 2024-01-30 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр кормопроизводства и агроэкологии имени В.Р. Вильямса" | Способ оценки и отбора in vitro образцов клевера лугового с повышенной устойчивостью к кислотности среды с использованием молекулярно-генетических технологий |
-
2014
- 2014-12-19 RU RU2014151553/10A patent/RU2583304C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ОНУЧИНА О.Л., Селекция клевера лугового (Trifolium pratense L.) на устойчивость к комплексу стрессовых факторов кислых почв на северо-востоке европейской части России, диссертация, Киров, 2007, с. 49-52. КУРЕНИНА Л.В., и др., Разработка способа быстрой регенерации клевера лугового Trifolium pratense L., Биотехнология, N 6, 2001, с.19-24. ОНУЧИНА О.Л., Методы и результаты селекции клевера лугового на повышенную кислотоустойчивость, Кормопроизводство, N 4, 2007, с.27-28. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2711781C1 (ru) * | 2019-02-01 | 2020-01-22 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр кормопроизводства и агроэкологии имени В.Р. Вильямса" | Способ отбора in vitro кислотовыносливых форм клевера лугового (trifolium pratense l.) |
| RU2812353C1 (ru) * | 2023-03-20 | 2024-01-30 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр кормопроизводства и агроэкологии имени В.Р. Вильямса" | Способ оценки и отбора in vitro образцов клевера лугового с повышенной устойчивостью к кислотности среды с использованием молекулярно-генетических технологий |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Batukaev et al. | Use of growth regulators in grapes grinding by in vitro method | |
| Häggman et al. | Somatic embryogenesis of Scots pine: cold treatment and characteristics of explants affecting induction | |
| Romadanova et al. | In vitro collection methods for Malus shoot cultures used for developing a cryogenic bank in Kazakhstan | |
| CN108575740B (zh) | 一种杨树体胚发生与植株建成的方法 | |
| CN110946050A (zh) | 一种利用长春花富集枣疯病植原体的方法 | |
| Kazi et al. | Comparative evaluation of bio-effectors on survival and regeneration in Gracilaria dura (Rhodophyta) | |
| Jiang et al. | Establishment of an in vitro plant regeneration protocol for Casuarina cunninghamiana Miq. via indirect organogenesis | |
| RU2583304C1 (ru) | Способ отбора in vitro кислотоустойчивых форм клевера лугового | |
| RU2619052C1 (ru) | Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro | |
| Fennell et al. | Micropropagation of the river lily, Crinum variabile (Amaryllidaceae) | |
| CN110663551A (zh) | 一种抗逆性花椰菜新品种的培育方法 | |
| Masanga et al. | An optimized protocol for high frequency regeneration of selected groundnut (Arachis hypogaea L) varieties from East Africa using cotyledons | |
| Wang et al. | Studies on factors affecting the microshoot grafting survival of walnut | |
| RU2617944C1 (ru) | Способ размножения трансгенных растений клевера лугового методом культуры почек in vitro | |
| RU2264706C2 (ru) | Способ оптимизации клонального микроразмножения винограда in vitro | |
| Malaeva et al. | Regeneration peculiarities of in vitro berry cultures | |
| RU2711781C1 (ru) | Способ отбора in vitro кислотовыносливых форм клевера лугового (trifolium pratense l.) | |
| Gjuleva et al. | Micropropagation of Platanus acerifolia in vitro | |
| RU2815450C1 (ru) | Способ клонального микроразмножения секвойи вечнозеленой (Sequoia sempervirens L.) | |
| Gorgorov et al. | In vitro cultivation of some endemic and rare Alchemilla species in Bulgaria | |
| ¿ edivá et al. | Micropropagation of common ash clones resistant to fungus Hymenoscyphus fraxineus | |
| Sharma et al. | Cost effective in vitro propagation of Gisela 5 cherry rootstock | |
| CN114375839B (zh) | 一种基于叶片诱导的银杏再生的方法 | |
| Melosik et al. | In vitro propagation of selected Sphagnum species (section Subsecunda) | |
| RU2732450C1 (ru) | Способ клонального микроразмножения сортов ирги ольхолистной (Amelanchier alnifolia (Nutt.) Nutt. Ex M.Roem.) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171220 |