RU2576814C1 - Agent for treatment and prophylaxis of natural infectious diseases in cats - Google Patents

Agent for treatment and prophylaxis of natural infectious diseases in cats Download PDF

Info

Publication number
RU2576814C1
RU2576814C1 RU2014140975/15A RU2014140975A RU2576814C1 RU 2576814 C1 RU2576814 C1 RU 2576814C1 RU 2014140975/15 A RU2014140975/15 A RU 2014140975/15A RU 2014140975 A RU2014140975 A RU 2014140975A RU 2576814 C1 RU2576814 C1 RU 2576814C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
treatment
interferon
cats
omega
interferons
Prior art date
Application number
RU2014140975/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Дмитрий Алексеевич Гончарук
Елена Николаевна Ткач
Орхан Ахмед оглы Зейналов
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Научно-Технологический Центр "БиоИнвест"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Научно-Технологический Центр "БиоИнвест" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Научно-Технологический Центр "БиоИнвест"
Priority to RU2014140975/15A priority Critical patent/RU2576814C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2576814C1 publication Critical patent/RU2576814C1/en

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

FIELD: veterinary medicine.
SUBSTANCE: for treatment and prophylaxis of natural infections in a cat the composition is used, comprising a recombinant feline interferon in a therapeutically active concentration. Interferon used as the active component relates to a family of nonglycosylated interferons of omega type. The proposed composition provides a pronounced therapeutic effect with respect to natural common diseases of cats, such as panleukopenia, feline calicivirosis, herpesvirus rhinotracheitis, chlamydiosis, mycoplasmosis, presented in the form of mono- and in the form of mixed infections.
EFFECT: reduction of term of treatment of the animal.
6 cl, 5 tbl, 8 ex

Description

Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано в ветеринарии для лечения и профилактики природных заболеваний кошек вирусного, бактериального или смешанного происхождения. Предлагается ветеринарная композиция для лечения заболеваний кошек вирусной и/или бактериальной природы, содержащая в качестве активного начала рекомбинантный интерферон, представляющий собой один из субтипов негликозилированного омега-интерферона кошки, и фармацевтически приемлемые носители и/или добавки.The invention relates to the field of pharmaceuticals and can be used in veterinary medicine for the treatment and prevention of natural diseases of cats of viral, bacterial or mixed origin. A veterinary composition for treating diseases of cats of a viral and / or bacterial nature is proposed, containing as an active principle a recombinant interferon, which is one of the subtypes of non-glycosylated omega-interferon of a cat, and pharmaceutically acceptable carriers and / or additives.

Вирусные инфекции широко распространены у домашних животных. К наиболее часто встречающимся у кошек относятся такие природные заболевания, как панлейкопения, вирусная лейкемия, инфекционный энтерит и перитонит, инфекционный ринотрахеит, стоматит и кератоконъюнктивит различной этиологии. Многие из перечисленных выше заболеваний тяжело переносятся животными и нередко приводят к летальному исходу. Так, например, коронавирусный перитонит легален в подавляющем большинстве случаев. Летальность при заболевании панлейкопенией в отсутствие надлежащего лечения у кошек достигает 25-75% (Р. Гаскел, М. Бенет, 1996), у котят достигает 90% (В.Н. Сюрин, Н.В. Фомина, 1979; С.В. Старченков, 2001). При ринотрахеите, исходно вызываемом вирусом герпеса и осложненном в последующем калицивирусной инфекцией, летальный исход может составлять до 80% (Санин А.В., «Ветеринарная клиника», 2002, №3-4).Viral infections are common in domestic animals. The most common in cats include such natural diseases as panleukopenia, viral leukemia, infectious enteritis and peritonitis, infectious rhinotracheitis, stomatitis and keratoconjunctivitis of various etiologies. Many of the above diseases are heavily tolerated by animals and often lead to death. So, for example, coronavirus peritonitis is legal in the vast majority of cases. Mortality in patients with panleukopenia in the absence of proper treatment in cats reaches 25-75% (R. Gaskell, M. Benet, 1996), in kittens reaches 90% (V.N.Syurin, N.V. Fomina, 1979; S.V. . Starchenkov, 2001). With rhinotracheitis, originally caused by the herpes virus and complicated in the subsequent calicivirus infection, the fatal outcome can be up to 80% (Sanin A.V., Veterinary Clinic, 2002, No. 3-4).

Лечение вирусных заболеваний у кошек вплоть до недавнего времени было весьма трудоемко и при этом недостаточно эффективно, т.к. в арсенале ветеринарных врачей не было препаратов (за исключением сывороток), обладающих специфической противовирусной активностью, и лечение фактически сводилось к борьбе с симптоматическими проявлениями таких инфекций. Сегодня в отечественной ветеринарии достаточно активно используются препараты с антивирусным эффектом, среди которых наиболее популярными являются такие, как ронколейкин, иммунофан, риботан, фоспренил, анандин, сальмозан, максидин.Until recently, the treatment of viral diseases in cats was very laborious and at the same time insufficiently effective, because in the arsenal of veterinarians there were no drugs (with the exception of sera) that had specific antiviral activity, and treatment actually amounted to combating the symptomatic manifestations of such infections. Today, domestic veterinary medicine is quite actively using drugs with an antiviral effect, among which the most popular are roncoleukin, immunofan, ribotan, fosprenil, anandine, salmosan, maxidine.

Наиболее распространёнными бактериальными заболеваниями кошек являются хламидиоз, микоплазмоз, бронхосептический бордетеллез, токсоплазмоз и стафилококкоз. Бактериальные инфекции возникают как первичные, а также как сопутствующие инфекции на фоне снижения общего иммунного статуса организма в результате, например, вирусного заражения. Это явление играет важную роль в развитии патогенеза, вызывая быстрое прогрессирование инфекционного процесса и яркое клиническое проявление заболевания в острой форме. Постинфекционный и поствакцинальный иммунитет к большинству бактериальных заболеваний обычно весьма слаб и имеет кратковременный характер. Современные вакцины неспособны обеспечить надлежащую защиту также и по причине большого антигенного разнообразия возбудителей. В связи с этим, особое значение при комплексном лечении многих природных инфекционных заболеваний кошек приобретают антивирусные препараты, обладающие иммуностимулирующим действием и способные подавлять развитие вторичной вирусной или бактериальной инфекции.The most common bacterial diseases in cats are chlamydia, mycoplasmosis, bronchoseptic bordetellosis, toxoplasmosis and staphylococcosis. Bacterial infections occur as primary, as well as concomitant infections against the background of a decrease in the overall immune status of the body as a result of, for example, viral infection. This phenomenon plays an important role in the development of pathogenesis, causing a rapid progression of the infectious process and a vivid clinical manifestation of the disease in acute form. Post-infectious and post-vaccination immunity to most bacterial diseases is usually very weak and has a short-term character. Modern vaccines are not able to provide adequate protection also because of the large antigenic diversity of pathogens. In this regard, antiviral drugs that have an immunostimulating effect and are able to inhibit the development of a secondary viral or bacterial infection are of particular importance in the complex treatment of many natural infectious diseases of cats.

В последнее время при лечении природных инфекций кошек все большее внимание уделяется вопросу о перспективах использования «интерфероновых» препаратов. Следует отметить, однако, что применение таких препаратов имеет целый ряд особенностей, среди которых важное место занимает необходимость учета их видоспецифичности. Хорошо известно, что бета- и гамма-интерфероны, обнаруженные у всех видов млекопитающих, представляют собой белки, характеризующиеся в плане проявления биологической активности строгой видоспецифичностью (Gibbs V. et al., Mol. Cell Biol., 1991,11 (12), 5860-5866; Hemmi S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1992, 89, 2737-2741; Qin X. et al., Mol. Ther., 2001, 4(4), 356-364; www.ienabioscience.com/images/PDF/ABD-082.pdf). Альфа-, тау- и омега-интерфероны обычно кодируются несколькими генами, продукты экспрессии которых образуют «семейства», состоящие из субтипов - полипептидов с высоким уровнем сходства аминокислотных последовательностей (95-99%). При испытании на культурах клеток разных видов животных альфа-, тау- и омега-интерфероны часто демонстрируют межвидовое действие. Однако экспериментально установлено, что попытки «межвидового» применения на уровне организма (даже в случае проявления активности in vivo) не оправдывают себя в условиях длительного лечения или использования высоких доз препарата вследствие образования значительных количеств антител к таким препаратам. На этом основании большинством исследователей делается однозначный вывод о предпочтительном использовании для лечения животных видоспецифичных «интерфероновых» препаратов.Recently, in the treatment of natural infections of cats, more attention has been paid to the issue of the prospects for the use of "interferon" drugs. It should be noted, however, that the use of such drugs has a number of features, among which an important place is occupied by the need to take into account their species-specificity. It is well known that beta and gamma interferons found in all mammalian species are proteins characterized by strict species specificity in terms of biological activity (Gibbs V. et al., Mol. Cell Biol., 1991, 11 (12), 5860-5866; Hemmi S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1992, 89, 2737-2741; Qin X. et al., Mol. Ther., 2001, 4 (4), 356-364 ; www.ienabioscience.com/images/PDF/ABD-082.pdf). Alpha, tau, and omega-interferons are usually encoded by several genes, the expression products of which form "families" consisting of subtypes - polypeptides with a high level of similarity of amino acid sequences (95-99%). When tested on cell cultures of different animal species, alpha, tau, and omega interferons often exhibit interspecific effects. However, it has been experimentally established that attempts at “interspecific” use at the organism level (even in the case of in vivo activity) do not justify themselves under long-term treatment or the use of high doses of the drug due to the formation of significant amounts of antibodies to such drugs. On this basis, most researchers make an unambiguous conclusion about the preferred use of species-specific "interferon" drugs for the treatment of animals.

К сожалению, несмотря на то что в лабораториях мира получено большое число различных типов интерферонов животного происхождения, в том числе интерферонов кошки (альфа-, бета-, гамма-, омега-), широкое внедрение их в ветеринарную практику крайне ограничено. Фактически на сегодняшний день для лечения кошек в мире используется всего два видоспецифичных коммерческих препарата, Intercat (фирма Тоrау Industrial Inc., Япония) и Virbagen (фирма Virbac, Франция), которые позиционируются как эффективные средства для борьбы с некоторыми наиболее распространенными вирусными инфекциями.Unfortunately, despite the fact that a large number of different types of interferons of animal origin have been obtained in the laboratories of the world, including cat interferons (alpha, beta, gamma, omega), their widespread use in veterinary practice is extremely limited. In fact, to date, there are only two species-specific commercial drugs used for treating cats in the world, Intercat (Taura Industrial Inc., Japan) and Virbagen (Virbac, France), which are positioned as effective means to fight some of the most common viral infections.

В связи с вышеизложенным, очевидной является актуальность разработки новых ветеринарных композиций, предназначенных для лечения вирусных и/или бактериальных инфекций у кошек, на основе видоспецифичных интерферонов. Эта задача, прежде всего, предусматривает решение вопроса о выборе наиболее подходящих для указанной цели активных компонентов композиции.In connection with the foregoing, the relevance of the development of new veterinary compositions intended for the treatment of viral and / or bacterial infections in cats based on species-specific interferons is obvious. This task, first of all, provides a solution to the question of choosing the most suitable active components of the composition for this purpose.

Уровень техникиState of the art

В 1988 году японскими исследователями у кошек был обнаружен и в последующие годы детально исследован первый полипептид с характерной структурой и свойствами интерферона (Nakamura et al., Biosci. Biotech. Biochem., 56(2), 211-214). Этот белок вследствие сравнительно низкого уровня гомологии последовательности (около 60%) с известными на тот момент альфа-интерферонами человека и наличия ряда некоторых других признаков, отличающих его от известных к тому времени альфа-форм, в частности наличия углеводного остатка (гликозилирования), был отнесен авторами к новому типу IFN, а именно омега-типу (Ueda et al., 1993, J.Vet. Med. Sci., 55(1), 1-6), до этого включавшему лишь один полипептид человеческого происхождения (Hauptmann et al., Nucl. AcidsRes., 1985, 13, 4739-4749). Сегодня гликозилированный рекомбинантный аналог первого кошачьего интерферона, определенного авторами как омега-интерферон и сохраняющего исходно присвоенное ему наименование (rFeIFN-omega), используется на практике либо в составе препарата фирмы Тоrеу (Япония) INTERCAT (например, патенты CIIIA(US) 5508291; US 5714382; US 6194381); либо в составе лицензионного препарата, выпускаемого фирмой Virbac (Франция), под названием Virbagen omega (Southerden P., 2007, J Small Anim Pract. 2007, 48(2): 104-6; Gutzwiller M. et al. Vet. Dermatol., 2007, 18(1), 50-54;Gil S, Res. Vet. Sci., 2013, 94, 753-763, и др.).In 1988, the first polypeptide with the characteristic structure and properties of interferon was discovered in cats by Japanese researchers in cats and in subsequent years (Nakamura et al., Biosci. Biotech. Biochem. 56 (2), 211-214). This protein, due to the relatively low level of sequence homology (about 60%) with human alpha-interferons known at that time and the presence of several other features that distinguish it from the alpha forms known at that time, in particular the presence of a carbohydrate residue (glycosylation), was attributed by the authors to a new type of IFN, namely the omega-type (Ueda et al., 1993, J. Vet. Med. Sci., 55 (1), 1-6), which previously included only one polypeptide of human origin (Hauptmann et al., Nucl. Acids Res., 1985, 13, 4739-4749). Today, a glycosylated recombinant analogue of the first feline interferon, defined by the authors as omega-interferon and retaining its original name (rFeIFN-omega), is used in practice or as part of the drug manufactured by Toreu (Japan) INTERCAT (for example, CIIIA (US) patents 5508291; US 5714382; US 6194381); or as part of a licensed drug manufactured by Virbac (France), called Virbagen omega (Southerden P., 2007, J Small Anim Pract. 2007, 48 (2): 104-6; Gutzwiller M. et al. Vet. Dermatol. , 2007, 18 (1), 50-54; Gil S, Res. Vet. Sci., 2013, 94, 753-763, etc.).

В 2004 г. группой японских авторов были опубликованы данные о получении ими 14 белков кошки, обладающих между собой 95-99%-ной гомологией последовательностей и характерными для альфа-интерферонов структурными признаками, а также проявляющих присущие интерферонам этого типа высокую противовирусную и антипролиферативную активности, что позволило определить их как субтипы, образующие «семейство» альфа-интерферонов кошки. При этом все представители этой группы кошачьих интерферонов, в отличие от IFN-альфа человека, содержали углеводные остатки, связанные в типичном для гликозилирования сайте (Nagai et al., 2004, J.Vet. Med. Sci., 66 (б), 725-728). Спустя 2 года у кошки было обнаружено другое «семейство» интерферонов, включающее 13 белков (YangL.-W. et al., 2007, J. Interf. Cytokine Res., 27, 119-127), также обладавших высокой степенью структурной гомологии (96-99%), и при этом имеющих общие отличия от открытой ранее группы субтипов кошачьего IFN-альфа, состоящие в наличии 6 дополнительных аминокислотных остатков на С-конце молекулы, отсутствии сайта N-гликозилирования, числе и расположении консервативных остатков цистеина и пролина. На основании сопоставления особенностей этой группы белков с известными к тому времени типами интерферонов других животных было однозначно установлено их отношение к омега-типу. Кроме того, известно, что субтипы IFN-омега и субтипы IFN-альфа а) действуют на различные участки рецептора и, соответственно, направляют в клетку различные сигналы (Cutrone Е. and Langer J., 1997, FEBS Lett., 404, 197-202; Xue Q. et al., 2010, J. Inter. Cytokine Res., 30(2), 81-88) и б) генерируют образование различных антител, т.е. активность омега-интерферонов не подавляется антителами к альфа-интерферонам (Adolf G. Et al., J. Gen. ViroL, 1987, 68, 1669-1676).In 2004, a group of Japanese authors published data on their receipt of 14 cat proteins that have between themselves 95-99% sequence homology and structural characteristics characteristic of alpha interferons, as well as exhibiting high antiviral and antiproliferative activities inherent to interferons of this type, which allowed us to define them as subtypes that form the "family" of alpha cat interferons. Moreover, all representatives of this group of feline interferons, in contrast to human IFN-alpha, contained carbohydrate residues bound in a site typical for glycosylation (Nagai et al., 2004, J. Vet. Med. Sci., 66 (b), 725 -728). After 2 years, another “family” of interferons was discovered in the cat, including 13 proteins (YangL.-W. Et al., 2007, J. Interf. Cytokine Res., 27, 119-127), which also had a high degree of structural homology ( 96-99%), while having common differences from the previously discovered group of feline IFN alpha subtypes, consisting of 6 additional amino acid residues at the C-terminus of the molecule, the absence of an N-glycosylation site, the number and location of conserved cysteine and proline residues. Based on a comparison of the characteristics of this group of proteins with the types of interferons of other animals known at that time, their relation to the omega type was unambiguously established. In addition, it is known that IFN-omega subtypes and IFN-alpha subtypes a) act on different parts of the receptor and, accordingly, send different signals to the cell (Cutrone E. and Langer J., 1997, FEBS Lett., 404, 197- 202; Xue Q. et al., 2010, J. Inter. Cytokine Res., 30 (2), 81-88) and b) generate the formation of various antibodies, i.e. the activity of omega-interferons is not suppressed by antibodies to alpha-interferons (Adolf G. Et al., J. Gen. ViroL, 1987, 68, 1669-1676).

Следует отметить, что сравнение семейства омега-интерферонов кошки с семейством альфа-интерферонов кошки дает все основания для заключения, что первый «кошачий» интерферон (Nakamura et al., 1992), входящий в состав препаратов INTERCAT и Virbagen, скорее всего, относится не к омега-, а к альфа-типу. В пользу этого свидетельствует, что а) указанный белок гликозилирован (по сайту N-гликозилирования); б) степень гомологии аминокислотных последовательностей зрелого полипептида с любым интерфероном из кошачьего «семейства» омега составляет не более 60%, тогда как сходство той же последовательности с любым из 14 альфа-интерферонов кошки составляет 95-98%, и в) число и расположение консервативных аминокислотных остатков в структуре молекулы совпадает с таковым для кошачьих альфа-интерферонов. Сегодня многие авторы либо называют первый кошачий интерферон омега-«подобным» (″FeIFN-omega-like″), либо непосредственно рассматривают его в одной группе с альфа-интерферонами кошки (Yang et al., 2007; Taira О. Et al., 2005, J.Vet. Med. Sci., 67(5), 543-545), а последние версии его в базах данных приводятся либо без указания типа (GenBank, AAB27160), либо прямо определяются как относящиеся к альфа-интерферону (см. GenPeptP35849.1; gi 547724).It should be noted that a comparison of the cat omega-interferon family with the cat interferon-alpha family provides all grounds for concluding that the first “feline” interferon (Nakamura et al., 1992), which is part of the INTERCAT and Virbagen preparations, most likely does not apply to omega, and to alpha. In favor of this, it is evidenced that a) said protein is glycosylated (at the N-glycosylation site); b) the degree of homology of the amino acid sequences of the mature polypeptide with any interferon from the omega feline “family” is not more than 60%, while the similarity of the same sequence to any of the cat’s 14 alpha interferons is 95-98%, and c) the number and location of conservative amino acid residues in the structure of the molecule coincides with that for feline alpha interferons. Today, many authors either call the first feline interferon omega “similar” (″ FeIFN-omega-like ″), or directly consider it in the same group as feline alpha interferons (Yang et al., 2007; Taira O. Et al., 2005, J. Vet. Med. Sci., 67 (5), 543-545), and the latest versions of it in the databases are given either without specifying the type (GenBank, AAB27160), or are directly defined as referring to alpha interferon (see GenPeptP35849.1; gi 547724).

В отсутствие в уровне техники информации о разработке и применении для лечения природных заболеваний ветеринарных препаратов, которые содержали бы «истинные» (негликозилированные) омега-интерфероны кошки, наиболее близким аналогом изобретения должно быть признано средство для лечения вирусных инфекций у кошек на основе первого «кошачьего» интерферона, полученного японскими исследователями и по косвенным признакам определенного ими как IFN-омега (rFeIFN-omega), в частности любой из двух известных препаратов, INTERCAT или Virbagen.In the absence of information in the prior art on the development and use of veterinary drugs for the treatment of natural diseases that would contain “true” (non-glycosylated) omega-interferons in cats, the closest analogue of the invention should be recognized as a means for treating viral infections in cats based on the first “feline” "Interferon obtained by Japanese researchers and by indirect signs defined by them as IFN-omega (rFeIFN-omega), in particular any of the two known drugs, INTERCAT or Virbagen.

Так, например, в US 6194381 (прототип) раскрывается успешное применение препарата INTERCAT, содержащего, помимо кошачьего интерферона, открытого в 1992 г., желатин, D-сорбитол и стабилизатор, для лечения инфекций, характеризующихся иммунодифицитом, включая анемию и хронический стоматит, а также атопического дерматита у кошек. Используемый в известном лечебном препарате вид рекомбинантного интерферона получен в шелковичных червях, трансформированных рекомбинантным бакуловирусом, и представляет собой гликопептид с мол. массой 25000, который характеризуется аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности зрелого белка в предшественнике с номером доступа GenPept Р 35849.1.For example, US 6194381 (prototype) discloses the successful use of the INTERCAT preparation, which, in addition to cat interferon, discovered in 1992, contains gelatin, D-sorbitol and a stabilizer for the treatment of infections characterized by immunodeficiency, including anemia and chronic stomatitis, and also atopic dermatitis in cats. The type of recombinant interferon used in the well-known medicinal preparation was obtained in silkworms transformed with recombinant baculovirus, and is a glycopeptide with mol. mass of 25,000, which is characterized by the amino acid sequence corresponding to the sequence of the mature protein in the precursor with access number GenPept P 35849.1.

К числу недостатков прототипа, помимо указанной выше неопределенности с вопросом классификации входящего в состав препарата интерферона следует, отнести то, что а) получение гликозилированного рекомбинантного продукта с «правильной» (нативной) структурой и, соответственно, полноценными биологическими функциями нуждается в использовании экспрессионных систем, в частности культур клеток животных, мало пригодных для масштабирования процесса и получения высоких выходов целевого продукта; б) как и для любого получаемого рекомбинантным методом гликопептида, могут иметь место проблемы, связанные с недостаточной гомогенностью продукта, который часто представляет собой смесь гликозилированных и негликозилированных молекул; в) в практике лечения альфа-интерферонами, с которыми, как установлено, сходен активный компонент прототипа, достаточно часто наблюдаются случаи проявления организмом исходной или приобретенной резистентности (US 7727519; 01.06.2010). Кроме того, в уровне техники нет достоверной информации о результатах использования прототипа применительно к инфекционным заболеваниям кошек бактериального происхождения.Among the disadvantages of the prototype, in addition to the above uncertainty regarding the classification of the interferon component, it should be noted that a) the preparation of a glycosylated recombinant product with the “correct” (native) structure and, accordingly, full biological functions requires the use of expression systems, in particular, animal cell cultures, not very suitable for scaling the process and obtaining high yields of the target product; b) as for any glycopeptide obtained by the recombinant method, problems may occur due to insufficient homogeneity of the product, which is often a mixture of glycosylated and non-glycosylated molecules; c) in the practice of treatment with alpha interferons, with which, as it has been established, the active component of the prototype is similar, cases of manifestation by the body of the initial or acquired resistance are quite often observed (US 7727519; 06/01/2010). In addition, in the prior art there is no reliable information about the results of using the prototype in relation to infectious diseases of cats of bacterial origin.

В связи с этим, при осуществлении настоящего изобретения ставилась задача предложить новое средство для лечения природных инфекционных заболеваний кошек, основанное на действии видоспецифичного интерферона и при этом лишенное указанных выше недостатков прототипа.In this regard, in the implementation of the present invention the task was to propose a new tool for the treatment of natural infectious diseases of cats, based on the action of species-specific interferon and at the same time devoid of the above disadvantages of the prototype.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Поставленная задача была решена путем разработки фармацевтической ветеринарной композиции, включающей в качестве активного ингредиента один из субтипов негликозилированного интерферона кошки омега-типа (по Yang et al., 2007) в качестве активного ингредиента, а также добавки и стабилизаторы из числа традиционно используемых в данной области.The problem was solved by developing a pharmaceutical veterinary composition, including as an active ingredient one of the subtypes of non-glycosylated omega-type cat interferon (according to Yang et al., 2007) as an active ingredient, as well as additives and stabilizers that are traditionally used in this field .

Схема разработки настоящего изобретения предусматривала проведение следующих этапов:The development scheme of the present invention included the following steps:

а) анализ информации, представленной в уровне техники, с определением интерферонов-кандидатов для использования в качестве активного начала;a) analysis of information presented in the prior art, with the identification of interferon candidates for use as an active principle;

б) получение и очистку отобранных по результатам изучения литературных данных рекомбинантных продуктов;b) obtaining and purification of recombinant products selected according to the results of a literature study;

в) предварительный анализ общего антивирусного эффекта очищенных белков на клеточных культурах с использованием различных типов вирусов;c) a preliminary analysis of the general antiviral effect of purified proteins on cell cultures using various types of viruses;

г) приготовление составов с последующей проверкой их на сохранность активности и стабильность и отбором предпочтительных вариантов;g) the preparation of compositions with subsequent verification of their activity and stability and the selection of preferred options;

д) проверка токсичности отобранных составов композиций;d) verification of the toxicity of the selected compositions;

е) исследование лечебного действия полученных композиций in vivo на кошках с различными природными инфекциями;f) study of the therapeutic effect of the obtained compositions in vivo on cats with various natural infections;

ж) оценка результатов.g) evaluation of the results.

а) В результате анализа литературных данных были сделаны следующие выводы.a) As a result of the analysis of literature data, the following conclusions were made.

Кошачьи интерфероны бета и гамма редко применяются в качестве активного начала композиций противовирусного назначения, что представляется закономерным в свете имеющейся информации об их относительно слабом антивирусном эффекте, в частности, в силу преобладания иммуномодулирующего действия (Tanabe T. et al., 2001; Gil et al., 2013). В противовес этому, семейство IFN-альфа характеризуют высокие уровни противовирусной и антипролиферативной активности. Однако все представители этой группы кошачьих интерферонов в природе гликозилированы, что является определенным техническим препятствием для получения качественных и при этом сравнительно дешевых рекомбинантных продуктов (см. раздел «Уровень техники»).Feline interferons beta and gamma are rarely used as the active principle of antiviral prescription compositions, which seems logical in light of the available information about their relatively weak antiviral effect, in particular, due to the predominance of immunomodulating action (Tanabe T. et al., 2001; Gil et al ., 2013). In contrast, the IFN-alpha family is characterized by high levels of antiviral and antiproliferative activity. However, all representatives of this group of feline interferons in nature are glycosylated, which is a certain technical obstacle to obtaining high-quality and at the same time relatively cheap recombinant products (see the section "Prior Art").

Омега-интерфероны кошки, имеющие большое структурное и функциональное сходство с семейством кошачьих альфа-интерферонов и обычно демонстрирующие тот же, а иногда и больший (в зависимости от вида вируса), уровень общей противовирусной активности (Wang H., Sheng Wu, Gong Cheng, Xue Bao, 2008;24(9):1556-60),обладают рядом очевидных преимуществ перед альфа-интерферонами, главным из которых является то, что они представляют собой негликозилированные белки и, соответственно, могут быть получены в виде полностью гомогенного препарата достаточно простым и легко масштабируемым методом, а также обладают собственными иммуногенными характеристиками, благодаря чему не утрачивают своей активности под действием не специфичных для них антител (см. разд. «Уровень техники»).Omega-cat interferons, which have a great structural and functional similarity to the feline alpha-interferon family and usually exhibit the same, and sometimes greater (depending on the type of virus), level of total antiviral activity (Wang H., Sheng Wu, Gong Cheng, Xue Bao, 2008; 24 (9): 1556-60), have a number of obvious advantages over alpha interferons, the main of which is that they are non-glycosylated proteins and, accordingly, can be obtained as a completely homogeneous preparation quite simple and easy to scale method, and also have their own immunogenic characteristics, due to which they do not lose their activity under the influence of antibodies not specific to them (see the section "Prior Art").

Исходя из этого, в качестве кандидата для реализации настоящего изобретения нами был предварительно избран омега-тип кошачьего интерферона, а именно семейство из 13 полипептидов с последовательностями, представленными в GenBank под номерами DQ 420220 - DQ 420232. При этом было сочтено целесообразным в доказательной части использовать субтипы, которые, по литературным данным (Yang et al., 2007), обладают минимальной и максимальной в рамках данной группы противовирусной активностью in vitro, а именно IFN-омега 1 (GenBank DQ 420220, ABD78704; NCBLNPJ 082772) и IFN-OMera 2 (GenBank DQ 420221, ABD78705; NPJ095910).Based on this, as a candidate for the implementation of the present invention, we pre-selected the omega type of feline interferon, namely a family of 13 polypeptides with the sequences presented in GenBank under the numbers DQ 420220 - DQ 420232. In this case, it was considered expedient to use in the evidence part subtypes that, according to published data (Yang et al., 2007), have the minimum and maximum in vitro antiviral activity within this group, namely IFN-omega 1 (GenBank DQ 420220, ABD78704; NCBLNPJ 082772) and IFN-OMera 2 (GenBank DQ 420221, ABD78705; NPJ095910 )

Несмотря на то что для научных целей китайскими авторами был использован рекомбинантный белок, экспрессированный в клетках Е. coli, попыток включения его в состав лекарственного средства и применения для лечения природных заболеваний кошек ни авторами данной работы, ни другими исследователями в последующем предпринято не было. Между тем, специалистам в данной области хорошо известно, что многие эффекты, наблюдаемые in vitro, не воспроизводятся in vivo, т.к. на уровне организма в действие вступают дополнительные и при этом не до конца изученные механизмы. Так, достаточно часто пропадает имевшее место при тестировании на клеточных культурах «перекрестное действие» (межвидовая активность) (Rodriguez М. et al., J Biotechnol. 1998; 60(1-2):3-14), во многих случаях при лечении природных заболеваний животных, в том числе и кошек, вообще не обнаруживается положительного эффекта интерферона, демонстрировавшего в испытаниях in vitro противовирусную активность (Slack J., Am J Vet Res., 2013;74(2):281-289; Ritz S., J Vet Intern Med. 2007;21(6):1193-7). В полном соответствии с представлением о том, что результат от применения для лечения вирусных инфекций интерферонов, для которых показана противовирусная активность в тест-системах in vitro, не является очевидным, находится тот факт, что для ранее предложенных (RU 2482871 С2, 27.05.2013) в качестве активных ингредиентов смеси альфа- и омега-интерферонов нам не удалось подтвердить установленного в экспериментах in vitro синергизма действия на больных животных, без чего их применение в составе лекарств утрачивает экономическую целесообразность.Despite the fact that the Chinese authors used a recombinant protein expressed in E. coli cells for scientific purposes, attempts to incorporate it into the drug and to use it for treating natural diseases of cats were neither undertaken by the authors of this work, nor by other researchers. Meanwhile, specialists in this field are well aware that many effects observed in vitro are not reproduced in vivo, because at the level of the organism, additional and not yet fully understood mechanisms come into effect. So, quite often the “cross action” (interspecific activity) that occurs when testing on cell cultures disappears (Rodriguez M. et al., J Biotechnol. 1998; 60 (1-2): 3-14), in many cases with treatment natural diseases of animals, including cats, there is no positive effect of interferon, which showed antiviral activity in vitro tests (Slack J., Am J Vet Res., 2013; 74 (2): 281-289; Ritz S., J Vet Intern Med. 2007; 21 (6): 1193-7). In full accordance with the idea that the result from the use of interferons for the treatment of viral infections, for which antiviral activity is shown in in vitro test systems, is not obvious, the fact is found that for the previously proposed (RU 2482871 C2, 05.27.2013 ) as the active ingredients of the mixture of alpha and omega interferons, we were not able to confirm the synergism established in in vitro experiments on the synergism of action on sick animals, without which their use in the composition of drugs loses economic feasibility.

Существенным моментом для выбора именно негликозилированного интерферона-омега было отсутствие литературных данных о его применении в качестве основного активного компонента ветеринарных композиций, применяемых для лечения у кошек заболеваний бактериального происхождения.An essential point for choosing the non-glycosylated interferon-omega was the lack of published data on its use as the main active component of veterinary compositions used to treat diseases of bacterial origin in cats.

б) Рекомбинантные негликозилированные кошачьи интерфероны-омега в настоящей работе были получены путем экспрессии соответствующих генов в штамме E. coli в виде телец включения с последующей реактивацией и хроматографической очисткой. Очищенные белки хранились в виде лиофилизата (при +4°С) или в виде замороженного раствора (при минус 20°С). Молекулярные массы полученных продуктов полностью соответствовали рассчитываемым из аминокислотных последовательностей зрелых форм (для IFN-омега 1 - 19,3 кДа; для IFN-омeгa 2 - 19,9 кДа), что являлось прямым подтверждением отсутствия углеводных остатков.b) Recombinant non-glycosylated feline omega interferons in this work were obtained by expression of the corresponding genes in the E. coli strain as inclusion bodies, followed by reactivation and chromatographic purification. The purified proteins were stored as a lyophilisate (at + 4 ° C) or as a frozen solution (at minus 20 ° C). The molecular weights of the obtained products fully corresponded to those calculated from the amino acid sequences of the mature forms (for IFN-omega 1 - 19.3 kDa; for IFN-omega 2 - 19.9 kDa), which was a direct confirmation of the absence of carbohydrate residues.

в) Анализ противовирусного действия оценивали по ингибированию цитопатического действия вируса везикулярного стоматита или вируса кошачьего калицивироза на клеточных линиях CRFK или fCWF-4 известным методом (Armstrong, Methods in Enzymol., 1981, v. 78 (PtA), pp.381-387). В результате было установлено, что определяемая в данной системе удельная активность IFN-омeгa 2 была для большей части препаратов достоверно выше, чем IFN-омега 1. Общий интервал удельной активности для всех полученных препаратов обоих видов составлял от 0,5×108 до 5,0×108 МЕ/мг, что соответствует лучшим показателям для используемого в прототипе rFeIFN (см. формулу в US 5508291).c) An analysis of the antiviral effect was evaluated by inhibition of the cytopathic effect of the vesicular stomatitis virus or feline calicivirosis virus on CRFK or fCWF-4 cell lines by a known method (Armstrong, Methods in Enzymol., 1981, v. 78 (PtA), pp. 381-387) . As a result, it was found that the specific activity of IFN-omega 2 determined in this system was significantly higher for most of the preparations than IFN-omega 1. The total interval of specific activity for all preparations of both types ranged from 0.5 × 10 8 to 5 , 0 × 10 8 IU / mg, which corresponds to the best performance for the rFeIFN used in the prototype (see the formula in US 5508291).

г) Перед началом экспериментов на животных произвели подбор состава лекарственных композиций, обеспечивающего наилучшую растворимость интерферона и стабильность препарата при хранении. В качестве буферной системы использовались ацетатный, цитратный и фосфатный буфер. Проверяемый диапазон рН составил от 3,5 до 8,0. Для повышения стабильности препарата и придания раствору физиологичности в состав дополнительно включали ЭДТА-Na, NaCl и один или два нейтральных носителя, выбранных из сорбитола, маннитола, полисорбата, поливинилпирролидона, декстрана, твина и др., традиционно применяемых в данной области.d) Before starting experiments on animals, the composition of the medicinal compositions was selected to ensure the best solubility of interferon and the stability of the drug during storage. Acetate, citrate, and phosphate buffers were used as the buffer system. The tested pH range was from 3.5 to 8.0. To increase the stability of the drug and make the solution physiological, the composition additionally included EDTA-Na, NaCl and one or two neutral carriers selected from sorbitol, mannitol, polysorbate, polyvinylpyrrolidone, dextran, tween, etc., traditionally used in this field.

Для проверки стабильности препарата во время его хранения через определенные интервалы времени в тесте in vitro на культуре клеток проводилось определение специфической активности, а также при помощи метода ИФА определялось количественное содержание интерферона в образце. За стабильностью интерферонов в различных составах наблюдали в условиях хранения при температуре 4°С и в режиме ускоренного хранения при температуре 25°С. Наблюдение за стабильностью продолжали по крайней мере 1 год при 4°С и 3 месяца при 25°С. Полученные данные показали наличие различных приемлемых составов, дающих схожую картину по растворимости IFN и стабильности препаратов, однако наилучшими были признаны результаты, полученные для композиций на основе ацетатного буфера с рН 4,5-5,0, с добавлением декстрана.To check the stability of the drug during storage at specific intervals in an in vitro test on a cell culture, specific activity was determined, and the quantitative content of interferon in the sample was determined using the ELISA method. The stability of interferons in various compositions was observed under storage at 4 ° C and in accelerated storage at 25 ° C. Stability monitoring was continued for at least 1 year at 4 ° C and 3 months at 25 ° C. The data obtained showed the presence of various acceptable compositions giving a similar picture for the solubility of IFN and the stability of the preparations, however, the results obtained for the compositions based on acetate buffer with a pH of 4.5-5.0 with the addition of dextran were recognized as the best.

д) Исследование на токсичность отобранных композиций проводили на мышах и крысах. Для проведения экспериментов лиофилизированные или замороженные субстанции интерферонов кошки разбавляли в выбранном составе до получения концентрации интерферона кошки 2 мкг/мл. Препарат вводили мышам и крысам внутрижелудочно или внутримышечно в количестве 50 мл/кг веса и оценивали общее состояние и поведение животных, прирост массы тела, а также результаты микроскопического исследования тканей (печень, легкие, почки, сердце, мышцы). По совокупности полученных данных полученные рекомбинантные продукты (композиции с IFN-омега 1 и IFN-омeгa 2) были признаны малотоксичными соединениями, соответствующими 4 классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76.e) A toxicity study of the selected compositions was performed in mice and rats. For experiments, lyophilized or frozen substances of cat interferon were diluted in the selected composition to obtain a cat interferon concentration of 2 μg / ml. The drug was administered to mice and rats intragastrically or intramuscularly in an amount of 50 ml / kg of body weight and the general condition and behavior of animals, weight gain, and the results of microscopic examination of tissues (liver, lungs, kidneys, heart, muscles) were evaluated. Based on the totality of the data obtained, the recombinant products obtained (compositions with IFN-omega 1 and IFN-omega 2) were recognized as low-toxic compounds corresponding to hazard class 4 according to GOST 12.1.007-76.

е) Проверка лечебного эффекта предлагаемых препаратов проводилась на базе нескольких ветеринарных клиник Москвы по общей схеме, в соответствии с которой в эксперимент во всех случаях включали не менее 20 кошек обоих полов в возрасте от 1 до 7 лет, имеющих вес от 3,5 до 5,5 кг, с достоверно установленным диагнозом; препараты опытным животным вводили внутримышечно один раз в день в объеме 0,5 или 1,0 мл (примерно 200000 и 400000 ME, соответственно) на одно животное в течение 5-7 дней в зависимости от заболевания (герпесвирусный ринотрахеит; калицивироз; панлекопения; калицивироз + панлейкопения, микоплазмоз, хламидиоз, микоплазмоз + хламидиоз); наблюдение за состоянием животных вели в течение всего периода лечения, отмечая сроки появления первых признаков улучшения состояния, исчезновения основных клинических признаков заболевания и клинического выздоровления (данные в каждой группе усредняли и округляли до суток). До начала исследований была определена переносимость препарата, для чего препарат в дозе, в 1,5-3 раза превышающей лечебную, вводили однократно здоровым животным и проводили их осмотр на 3-й и 7-й дни. При этом ни в одном случае неблагоприятных реакций зарегистрировано не было.f) Checking the therapeutic effect of the proposed drugs was carried out on the basis of several veterinary clinics in Moscow according to the general scheme, according to which the experiment in all cases included at least 20 cats of both sexes aged 1 to 7 years old, weighing from 3.5 to 5 , 5 kg, with a reliable diagnosis; preparations were administered to experimental animals intramuscularly once a day in a volume of 0.5 or 1.0 ml (approximately 200,000 and 400,000 IU, respectively) per animal for 5-7 days depending on the disease (herpesvirus rhinotracheitis; calicivirusosis; pancopenia; calicivirusosis + panleukopenia, mycoplasmosis, chlamydia, mycoplasmosis + chlamydia); observation of the condition of the animals was carried out during the entire period of treatment, noting the timing of the appearance of the first signs of improvement, the disappearance of the main clinical signs of the disease and clinical recovery (data in each group were averaged and rounded up to a day). Prior to the studies, the tolerance of the drug was determined, for which the drug was administered once to healthy animals at a dose 1.5-3 times higher than the therapeutic one and examined on the 3rd and 7th days. However, in no case of adverse reactions were recorded.

ж) При оценке лечебного эффекта препарата учитывали динамику улучшения общего клинического состояния и продолжительность лечения до клинического выздоровления, а также результаты клинического и, в некоторых случаях, биохимического анализов крови.g) In assessing the therapeutic effect of the drug, the dynamics of improving the overall clinical condition and the duration of treatment until clinical recovery, as well as the results of clinical and, in some cases, biochemical blood tests, were taken into account.

Полученные данные позволили сделать вывод о том, что предлагаемые в настоящем изобретении средства, представляющие собой содержащие негликозилированный кошачий интерферон-омега ветеринарные композиции, демонстрируют ярко выраженный лечебный эффект в отношении распространенных природных заболеваний кошек, таких как панлейкопения, калицивироз, герпесвирусный ринотрахеит, хламидиоз, микоплазмоз, представленных как в виде моно-, так и в виде микст-инфекций, и, в среднем, примерно на 30 % сокращают срок, необходимый для полного выздоровления животного. При этом во все случаях, за исключением герпесвирусного ринотрахеита, достаточной была меньшая (200000 ME) из двух применявшихся суточных доз. За все время наблюдения ни у одного из подвергавшихся лечению животных не было обнаружено каких-либо побочных действий и осложнений.The data obtained allowed us to conclude that the agents of the present invention, which comprise non-glycosylated feline interferon-omega veterinary compositions, exhibit a pronounced therapeutic effect in relation to common natural diseases of cats, such as panleukopenia, calicivirus, herpes virus rhinotracheitis, chlamydia, mycoplasmosis , presented both in the form of mono-and in the form of mixed infections, and, on average, reduce the time required for a full recovery by about 30% I am an animal. Moreover, in all cases, with the exception of herpes virus rhinotracheitis, the smaller (200,000 ME) of the two daily doses used was sufficient. Over the entire observation period, none of the treated animals showed any side effects and complications.

Важным результатом является то, что между данными, полученными для препаратов с IFN-омега 1 (с минимальной активностью in vitro) и IFN-омега 2 (с максимальной активностью in vitro), существенных различий выявлено не было. Это позволяет заключить, что в качестве активного ингредиента в предлагаемом средстве с таким же успехом может быть использован любой из субтипов кошачьего интерферона-омега с «промежуточным» уровнем противовирусной активности in vitro.An important result is that there were no significant differences between the data obtained for preparations with IFN-omega 1 (with minimal activity in vitro) and IFN-omega 2 (with maximum activity in vitro). This allows us to conclude that any of the subtypes of feline interferon-omega with an "intermediate" level of antiviral activity in vitro can be used as an active ingredient in the proposed tool with the same success.

Таким образом, применение в качестве активного начала композиции для лечения инфекционных заболеваний у кошек одного из представителей семейства кошачьих негликозилированных омега-интерферонов (вместо гликозилированного кошачьего интерферона в прототипе) обеспечивает получение нового эффективного лекарственного средства, которое отличается от прототипа дешевизной и простой получения основного компонента в необходимых количествах, а также более широким спектром действия (основные технические результаты). Кроме того, предлагаемая ветеринарная композиция может быть использована как самостоятельное лекарство, так и в качестве замены для широко применяемых в ветеринарной практике препаратов с альфа-интерфероном, в том числе и препарата INTERCAT (прототипа), в случаях возникновения резистентности к последним (дополнительный технический результат).Thus, the use as an active principle of the composition for the treatment of infectious diseases in cats of one of the representatives of the feline non-glycosylated omega-interferon family (instead of the glycosylated feline interferon in the prototype) provides a new effective drug that differs from the prototype in terms of low cost and simple preparation of the main component in required quantities, as well as a wider spectrum of action (main technical results). In addition, the proposed veterinary composition can be used as a stand-alone medicine, or as a substitute for drugs with alpha-interferon widely used in veterinary practice, including INTERCAT (prototype), in cases of resistance to the latter (additional technical result )

Сведения о лечении конкретных заболеваний и его результатах представлены ниже в виде примеров осуществления, которые не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения.Information about the treatment of specific diseases and its results are presented below in the form of examples of implementation, which should not be construed as limiting the scope of the invention.

ПримерыExamples

Пример 1. Получение композиций для испытаний in vivo.Example 1. Obtaining compositions for testing in vivo.

Композиция №1. Готовили раствор следующего состава:Composition number 1. Prepared a solution of the following composition:

Натрия хлорид - 5,86 г/л;Sodium chloride - 5.86 g / l;

Натрия ацетат - 2,71 г/л;Sodium acetate - 2.71 g / l;

Декстран - 40-50 г/л;Dextran - 40-50 g / l;

ЭДТА-Na - 0,058г/л;EDTA-Na - 0.058 g / l;

Ледяная уксусная кислота до рН - 4,5-5,0;Glacial acetic acid to a pH of 4.5-5.0;

Вода для инъекций - до 1 л.Water for injection - up to 1 liter.

В буферный раствор добавляли субстанцию интерферона кошки IFN-омега 1 таким образом, чтобы результирующая активность составила 400000 МЕ/мл. Затем раствор в асептических условиях фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм и разливали в стерильные флаконы на 3 мл по 2,5 мл. Флаконы укупоривали резиновыми пробками и обжимали алюминиевыми колпачками. Готовые флаконы хранили при температуре от 2 до 8°С. Композицию №2 готовили аналогично композиции 1, за исключением того, что в качестве активного компонента использовали IFN-омега 2.The IFN-omega 1 cat interferon substance was added to the buffer solution so that the resulting activity was 400,000 IU / ml. Then, the solution under aseptic conditions was filtered through a filter with a pore diameter of 0.22 μm and poured into sterile 3 ml 2.5 ml vials. The vials were corked with rubber stoppers and crimped with aluminum caps. Ready vials were stored at a temperature of 2 to 8 ° C. Composition No. 2 was prepared similarly to composition 1, except that IFN-omega 2 was used as the active component.

Пример 2. Лечение герпесвирусного ринотрахеита.Example 2. Treatment of herpes virus rhinotracheitis.

Опыт проводился на 27 кошках с диагнозом герпесвирусный ринотрахеит. Животные были разделены на три группы: контрольную (n=9), первую опытную (n=9) и вторую опытную (n=9). Животным первой опытной группы раз в день в течение 5 дней вводили 200000 ME интерферона-омега 1(0,5 мл композиции №1), животным второй опытной группы по той же схеме - 400000 ME (1 мл композиции №1). Кошки контрольной группы получали лечение без включения в схему средств этиотропной терапии. Оценивали динамику лечения заболевания и сроки выздоровления (в днях после начала введения опытным животным интерферона). Полученные результаты приведены в табл. 1The experiment was conducted on 27 cats with a diagnosis of herpes virus rhinotracheitis. Animals were divided into three groups: control (n = 9), the first experimental (n = 9) and the second experimental (n = 9). The animals of the first experimental group were injected 200,000 ME of interferon-omega 1 (0.5 ml of composition No. 1) once a day for 5 days, the animals of the second experimental group according to the same scheme - 400000 ME (1 ml of composition No. 1). Cats in the control group received treatment without the inclusion of etiotropic therapy in the regimen. The dynamics of the treatment of the disease and the timing of recovery were evaluated (in days after the start of the administration of interferon to experimental animals). The results are shown in table. one

Figure 00000001
Figure 00000001

Из полученных данных с очевидностью следует улучшение динамики лечения и сокращение сроков до полного выздоровления, которые в данном случае более выражены во второй опытной группе.From the data obtained, it is obvious that there is an improvement in the dynamics of treatment and a reduction in the time to complete recovery, which in this case is more pronounced in the second experimental group.

Пример 3. Лечение калицивироза.Example 3. The treatment of calicivirus.

Исследование лечебного действия предлагаемой композиции осуществлялось по той же схеме, что и в примере 1, за исключением того, что обеим опытным группам препараты вводились по 0,5 мл (200000 МЕ), но первая опытная группа животных получала композицию №1 (с IFN-омега 1), а вторая - композицию №2, представляющую тот же состав, но с IFN-омега 2. B связи с тем что калицивирусная инфекция в большинстве случаев сопровождалась анорексией, стоматитом, конъюнктивитом и нарушением дыхательной функции, при изучении динамики улучшения состояния следили за динамикой указанных симптомов (табл. 2)The study of the therapeutic effect of the proposed composition was carried out according to the same scheme as in example 1, except that both experimental groups were injected with 0.5 ml (200,000 IU), but the first experimental group of animals received composition No. 1 (with IFN- omega 1), and the second - composition No. 2, representing the same composition, but with IFN-omega 2. Due to the fact that in most cases calicivirus infection was accompanied by anorexia, stomatitis, conjunctivitis and impaired respiratory function, the dynamics of improvement were monitored per speaker nd these symptoms (Table. 2)

Figure 00000002
Figure 00000002

Установлено, что улучшение состояния животных ускоряется в обеих экспериментальных группах, демонстрируя при этом сходную динамику. Оба препарата сокращают срок лечения в среднем на 2 дня.It was found that the improvement in the condition of animals is accelerated in both experimental groups, while demonstrating similar dynamics. Both drugs shorten treatment time by an average of 2 days.

Пример 4. Лечение панлейкопении.Example 4. The treatment of panleukopenia.

При исследовании лечебного действия предлагаемых препаратов пользовались той же схемой, что и в примере 1, используя композицию №2 в двух различных разовых дозах (200000 МЕ и 400000 ME). Каждая из трех групп (контрольная и две опытных) включала в данном эксперименте по 8 животных. До начала и после курса лечения дополнительно проводился клинический анализ крови. В таблице 3 приведены результаты исследования.In the study of the therapeutic effect of the proposed drugs used the same scheme as in example 1, using composition No. 2 in two different single doses (200,000 IU and 400,000 ME). Each of the three groups (control and two experimental) included 8 animals in this experiment. Before and after the course of treatment, a clinical blood test was additionally performed. Table 3 shows the results of the study.

Figure 00000003
Figure 00000003

Как следует из приведенных данных, улучшение динамики заболевания и сокращение сроков клинического выздоровления составляло как при максимальной, так и при минимальной разовых дозах примерно 30%.As follows from the above data, an improvement in the dynamics of the disease and a reduction in the time of clinical recovery was approximately 30% at both maximum and minimum single doses.

При клиническом анализе крови после завершения лечения были выявлены небольшие остаточные отклонения, выражавшиеся в некотором повышении СОЭ и числа лейкоцитов и нейтрофилов, незначительно выходящие за пределы референсных значений, которые в течение последующих 1-2 дней возвращались к норме.A clinical analysis of blood after the completion of treatment revealed small residual deviations, expressed in a slight increase in ESR and the number of leukocytes and neutrophils, slightly beyond the reference values, which returned to normal over the next 1-2 days.

Пример 5. Лечение панлейкопении, отягощенной калицивирозом.Example 5. The treatment of panleukopenia, weighed by calicivirosis.

При лечении животных с панлейкопенией, осложненной калицивирусной инфекцией, опыт проводился на 30 животных, которые были разбиты на 3 группы, по 10 животных в каждой. Первая опытная группа получала 200000 ME композиции №1, вторая опытная группа получала внутримышечно 400000 ME композиции №1, один раз в день в течение 5 дней. По результатам проведенных испытаний было установлено практически полное совпадение динамики улучшения состояния и сроков клинического выздоровления с описанными в примере 3 результатами лечения панлейкопении, протекающей как моновирусная инфекция. В ходе применения интерферон-содержащих препаратов у опытных животных проводились биохимические исследования крови, в результате которых было выявлено временное повышение активности ферментов АСТ, АлАТ и ЛДГ, а также содержания общего белка, которые после клинического выздоровления животных возвращались к норме.In the treatment of animals with panleukopenia complicated by a calicivirus infection, the experiment was conducted on 30 animals, which were divided into 3 groups, 10 animals each. The first experimental group received 200,000 ME compositions No. 1, the second experimental group received intramuscularly 400,000 ME compositions No. 1, once a day for 5 days. According to the results of the tests, it was found that the dynamics of the improvement and the terms of clinical recovery were almost completely consistent with the treatment results for panleukopenia, which proceeds as a monovirus infection, described in Example 3. During the use of interferon-containing preparations in experimental animals, biochemical blood tests were performed, as a result of which a temporary increase in the activity of the enzymes AST, ALAT and LDH, as well as the total protein content, which returned to normal after the clinical recovery of the animals, was revealed.

Пример 6. Лечение микоплазмоза.Example 6. The treatment of mycoplasmosis.

При определении лечебного эффекта омега-интерферонов кошки при добавлении их в схему лечения микоплазмоза в качестве средства этиотропной терапии исследовались кошки с достоверно установленным диагнозом микоплазмоза (33 животных). Лечебный эффект композиции № 1 определяли на двух экспериментальных группах кошек (n=11), с использованием разных доз, 200000 ME (0,5 мл композиции №1) и 400000 МЕ (1,0 мл композиции №1), соответственно, в первой и второй опытной группах. Результаты исследования показали более раннее клиническое выздоровление кошек, в сравнении с животными, не получавшими интерферон, в среднем на 20%. Применение интерферона позволило на 2-4 дня сократить общий курс антибиотикотерапии, длительность которого в контрольной группе составляла 12-14 дней, а в опытных - 10.When determining the therapeutic effect of omega-interferon cats when adding them to the treatment regimen of mycoplasmosis, cats with a reliable diagnosis of mycoplasmosis (33 animals) were studied as a means of etiotropic therapy. The therapeutic effect of composition No. 1 was determined on two experimental groups of cats (n = 11), using different doses, 200,000 ME (0.5 ml of composition No. 1) and 400,000 IU (1.0 ml of composition No. 1), respectively, in the first and the second experimental groups. The results of the study showed an earlier clinical recovery in cats, compared with animals not receiving interferon, an average of 20%. The use of interferon allowed to reduce the general course of antibiotic therapy by 2-4 days, the duration of which in the control group was 12-14 days, and in the experimental group - 10.

Figure 00000004
Figure 00000004

Пример 7. Лечение хламидиоза.Example 7. The treatment of chlamydia.

Эффективность лечения хламидиоза кошек по схеме с применением композиции №2 исследовали на двух экспериментальных группах кошек (n=10), с использованием разных доз интерферона: 200000 ME (0,5 мл композиции №2) и 400000 МЕ (1,0 мл композиции №2). В результате лечения было установлено, что достаточной является меньшая доза препарата (200000 ME). Отмечалось более раннее исчезновение характерных клинических признаков в сравнении с животными, не получавшими препарат.The effectiveness of treatment of chlamydia in cats according to the scheme using composition No. 2 was studied in two experimental groups of cats (n = 10), using different doses of interferon: 200000 ME (0.5 ml of composition No. 2) and 400000 ME (1.0 ml of composition No. 2). As a result of treatment, it was found that a lower dose of the drug (200,000 ME) is sufficient. An earlier disappearance of characteristic clinical signs was noted in comparison with animals not receiving the drug.

Figure 00000005
Figure 00000005

Пример 8. Лечение ринотрахеита смешанной этиологии (герпесвирус кошки, бронхисептический бордетеллез).Example 8. The treatment of rhinotracheitis of mixed etiology (herpesvirus cat, bronchiseptic bordetellosis).

В экспериментах исследовалась эффективность применения интерферона в схеме терапии инфекционного (герпесвирусного) ринотрахеита кошек, осложненного бактериальной инфекцией, вызванной Bordetella bronchiseptica. В эксперименте использовались две композиции препарата: композиция №1 и композиция №2, обе в разовой дозе 200000 ME. Результаты показали, что при добавлении в схему лечения препарата, содержащего омега интерферон кошки, на второй день терапии наступало облегчение клинических симптомов (гипертермия, синдром катарального воспаления верхних дыхательных путей), в то время как у животных, не получавших омега-интерферона, облегчение клинических симптомов наступало в среднем на сутки позже. Полное клиническое выздоровление при использовании омега-интерферона отмечалось на 4-5 день, что на 20% быстрее в сравнении с контролем (6-7 день).In the experiments, the effectiveness of the use of interferon in the treatment regimen of infectious (herpes virus) rhinotracheitis of cats complicated by a bacterial infection caused by Bordetella bronchiseptica was studied. Two compositions of the preparation were used in the experiment: composition No. 1 and composition No. 2, both in a single dose of 200,000 ME. The results showed that when a drug containing omega-interferon cat was added to the treatment regimen, on the second day of therapy, clinical symptoms were relieved (hyperthermia, catarrhal inflammation of the upper respiratory tract), while in animals that did not receive omega-interferon, clinical relief Symptoms occurred on average a day later. Complete clinical recovery with the use of omega-interferon was observed on days 4-5, which is 20% faster compared to control (6-7 days).

Claims (6)

1. Ветеринарная композиция для лечения и профилактики природных инфекционных заболеваний у кошек, содержащая эффективное количество рекомбинантного интерферона, являющегося представителем семейства негликозилированных омега-интерферонов кошки, в качестве активного начала и фармацевтически приемлемые наполнители и/или добавки.1. Veterinary composition for the treatment and prevention of natural infectious diseases in cats, containing an effective amount of recombinant interferon, which is a member of the family of non-glycosylated omega-interferon cats, as an active principle and pharmaceutically acceptable excipients and / or additives. 2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что природное заболевание представляет моновирусную инфекцию.2. The composition according to p. 1, characterized in that the natural disease is a monoviral infection. 3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что природное заболевание представляет собой смешанную вирусную инфекцию.3. The composition according to p. 1, characterized in that the natural disease is a mixed viral infection. 4. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что природное заболевание представляет бактериальную инфекцию.4. The composition according to p. 1, characterized in that the natural disease is a bacterial infection. 5. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что заболевание представляет смешанную вирусно-бактериальную инфекцию.5. The composition according to p. 1, characterized in that the disease is a mixed viral-bacterial infection. 6. Композиция по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что применяется в комплексном лечении заболевания. 6. The composition according to any one of paragraphs. 1-5, characterized in that it is used in the complex treatment of the disease.
RU2014140975/15A 2014-10-10 2014-10-10 Agent for treatment and prophylaxis of natural infectious diseases in cats RU2576814C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014140975/15A RU2576814C1 (en) 2014-10-10 2014-10-10 Agent for treatment and prophylaxis of natural infectious diseases in cats

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014140975/15A RU2576814C1 (en) 2014-10-10 2014-10-10 Agent for treatment and prophylaxis of natural infectious diseases in cats

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2576814C1 true RU2576814C1 (en) 2016-03-10

Family

ID=55654157

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014140975/15A RU2576814C1 (en) 2014-10-10 2014-10-10 Agent for treatment and prophylaxis of natural infectious diseases in cats

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2576814C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2326694C1 (en) * 2007-02-02 2008-06-20 Олег Ильич Эпштейн Medicinal agent used for treatment of various infectious diseases of domestic animals
RU2010122954A (en) * 2010-06-07 2011-12-20 Общество с ограниченной ответственностью "Биофарм" (RU) COMPOSITION FOR TREATMENT OF VIRAL AND ONCOLOGICAL ANIMAL DISEASES

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2326694C1 (en) * 2007-02-02 2008-06-20 Олег Ильич Эпштейн Medicinal agent used for treatment of various infectious diseases of domestic animals
RU2010122954A (en) * 2010-06-07 2011-12-20 Общество с ограниченной ответственностью "Биофарм" (RU) COMPOSITION FOR TREATMENT OF VIRAL AND ONCOLOGICAL ANIMAL DISEASES

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TOMPKINS W.A. et al, Immunomodulation and Therapeutic Effects of the Oral Use of Interferon-alpha: Mechanism of Action, Journal of Interferon & Cytokine Research, 1999, 19(8), pp 817-828, найдено 17.06.2015 в Интернете на сайте http://search.proquest.com/openview/43d6527ab5da15bfd65ba8c8663e9413/1?pq-origsite=gscholar. De MARI K. et al, Therapeutics effect of recombinant feline interferon-omega on Feline leukemia virus (FeLV)-infected and Feline immunodeficience virus (FIV)-coinfected sympthomatic cats, J. Vet. Int. Med., 2004, 18, pp.477-482, найдено 17.06.2015 в Интернете на сайте http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1939-1676.2004.tb02570.x/pdf. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6982081B2 (en) Composition for treatment of and method of monitoring hepatitis C virus using interferon-TAU
US20160175390A1 (en) Antiviral agent comprising recombinant mistletoe lectins
RU2576814C1 (en) Agent for treatment and prophylaxis of natural infectious diseases in cats
KR102597757B1 (en) Compound derived from natural product and antiviral agent containing the same as an active ingredient
US9872895B2 (en) TLR5 ligands, therapeutic methods, and compositions related thereto
CN114796193B (en) Traditional Chinese medicine monomer for resisting bovine viral diarrhea virus
AU2004216485B2 (en) Combined use of ribavirin and interferon beta in demyelinating diseases
JP3072489B2 (en) Pharmaceutical compositions that induce immunostimulatory effects
RU2694210C1 (en) Recombinant interferon-alpha dog preparation for use in therapy of natural viral infections of dogs
TW200407159A (en) Treatment of hepatitis C in the asian population
WO2021175250A1 (en) Compounds and methods for treating diseases and/or conditions caused by coronavirus
WO2021232041A1 (en) N-acetylcysteine and glycine for treatment of covid-19 and post covid-19 symptoms
AU729514B2 (en) Stimulation of host defense mechanisms against viral challenges
US20200023033A1 (en) Composition for treating pulmonary fibrosis comprising alloferon
WO2020134682A1 (en) Pharmaceutical preparation for treating hepatitis b, preparation method therefor and use thereof
RU2721282C2 (en) Method for treating multiple sclerosis (versions)
CA1336491C (en) Antiviral pharmaceutical composition
EA008766B1 (en) Interferon beta in severe acute resperatory syndrome (sars)
EP3710025A1 (en) Use of cyanobacterial biomass in treating hepatitis b virus infection
RU2346698C1 (en) Method of cattle leucosis prevention
RU2678981C2 (en) Rabies composition containing pika adjuvant
US11578111B2 (en) Porcine G-CSF variants and their uses
RU2482871C2 (en) Composition for treating viral diseases in animals
Gillespie et al. The Prophylactic Effects of E. coli‐Derived Bovine Interferon AlphaI1 on Bovine Virus Diarrhoea Virus Disease in Calves after Intramuscular Administration
US20230173028A1 (en) Application of TFF2 Protein and IFN-k Protein Combination in Treatment of a Novel Coronavirus Infection

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20170413

QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE

Effective date: 20170531