RU2567047C1 - Method of obtaining of biological referential material for production of standard urine composition samples containing toxic metal and material obtained by this method - Google Patents
Method of obtaining of biological referential material for production of standard urine composition samples containing toxic metal and material obtained by this method Download PDFInfo
- Publication number
- RU2567047C1 RU2567047C1 RU2014145669/15A RU2014145669A RU2567047C1 RU 2567047 C1 RU2567047 C1 RU 2567047C1 RU 2014145669/15 A RU2014145669/15 A RU 2014145669/15A RU 2014145669 A RU2014145669 A RU 2014145669A RU 2567047 C1 RU2567047 C1 RU 2567047C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- urine
- water
- rats
- mercury
- toxic metal
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к способу получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, содержащих ртуть, кадмий, свинец, а также к материалу, полученному предлагаемым способом, и может быть использовано в токсикологии, медицине, ветеринарии при определении содержания указанных токсичных металлов в моче.The group of inventions relates to biotechnology, and in particular to a method for producing a biological reference material for the production of standard samples of urine containing mercury, cadmium, lead, as well as to the material obtained by the proposed method, and can be used in toxicology, medicine, veterinary medicine in determining the content specified toxic metals in urine.
В изобретении используется следующая терминология.The following terminology is used in the invention.
Биоматериал - часть органов, тканей, клеточных или субклеточных структур организма.Biomaterial - a part of organs, tissues, cellular or subcellular structures of the body.
Затравка - введение токсичного металла тем или иным способом в организм животного.Seeding - the introduction of a toxic metal in one way or another into the body of an animal.
Парентерально - введение вещества в организм, при котором оно минует желудочно-кишечный тракт.Parenteral - the introduction of a substance into the body, in which it bypasses the gastrointestinal tract.
Референтный материал - «в качестве материала (вещества) стандартного образца может быть использован референтный материал, т.е. материал (вещество) достаточно однородный и стабильный по отношению к одному или нескольким определенным свойствам, применяемый в соответствии с назначением в измерительном процессе [Р.50.2.056-2007. ГСИ. Образцы материалов и веществ стандартные. Термины и определения; ISO VIM: 1993»].Reference material - “the reference material may be used as the material (substance) of the standard sample, i.e. material (substance) is quite homogeneous and stable with respect to one or several specific properties, used in accordance with the purpose in the measuring process [R.50.2.056-2007. GSI. Samples of materials and substances are standard. Terms and Definitions; ISO VIM: 1993 ”].
Стандартный образец (состава) - [термин указан с учетом его определений, приведенных в ГОСТ 8.315-97, а также в международных нормативных документах] образец вещества или материала, химический состав или физические свойства которых:Standard sample (composition) - [the term is specified taking into account its definitions given in GOST 8.315-97, as well as in international regulatory documents] a sample of a substance or material whose chemical composition or physical properties are:
- типичны для конкретной группы веществ или материалов;- typical for a specific group of substances or materials;
- определены с необходимой точностью;- identified with the necessary accuracy;
- отличаются высоким постоянством;- differ in high constancy;
- удостоверены сертификатом.- certified by a certificate.
Токсичный - ядовитый, вызывающий негативные изменения в структурах и/или функциях молекулярных, надмолекулярных, клеточных образований, тканях, органах и организме в целом.Toxic - poisonous, causing negative changes in the structures and / or functions of molecular, supramolecular, cellular formations, tissues, organs and the body as a whole.
Токсичные металлы (далее - ТМ) - условная группа металлов, не несущих биологической функции в организме, но склонных к бионакоплению, токсичные даже в небольших количествах [Загрязнение Арктики 2002. Программа по мониторингу и оценке окружающей среды Арктики. АМАП. Осло. - 2002-110 с.], к которым относят свинец, ртуть, кадмий, мышьяк, таллий, ванадий, никель, хром, уран и иногда другие металлы.Toxic metals (hereinafter referred to as HM) are a conditional group of metals that do not have a biological function in the body, but are prone to bioaccumulation, toxic even in small quantities [Pollution of the Arctic 2002. Program for monitoring and evaluating the environment of the Arctic. AMAP. Oslo. - 2002-110 S.], which include lead, mercury, cadmium, arsenic, thallium, vanadium, nickel, chromium, uranium and sometimes other metals.
Для определения содержания ТМ в различного вида материалах используются методы анализа, в частности, такие как нейтронно-активационный, атомно-эмисионный с дугой постоянного тока, атомно-эмисионный с индуктивно-связанной плазмой, масс-спектрометрический с индуктивно-связанной плазмой, атомно-абсорбционный с электротермической атомизацией, атомно-абсорбционный с атомизацией в пламени, инверсионный вольтамперометрический, которые требуют применения соответствующих материалов сравнения - стандартных образцов, содержащих анализируемый ТМ (аналит) в определенных количествах.To determine the content of HM in various types of materials, analysis methods are used, in particular, neutron activation, atomic emission with a direct current arc, atomic emission with inductively coupled plasma, mass spectrometric with inductively coupled plasma, atomic absorption with electrothermal atomization, atomic absorption with flame atomization, inversion voltammetric, which require the use of appropriate comparison materials - standard samples containing th TM (analyte) in the specified amounts.
Для определения содержания ТМ известны стандартные образцы (далее СО), изготовленные на основе растворов солей ТМ.To determine the content of HM, standard samples (hereinafter referred to as CO) based on solutions of salts of HM are known.
Так, в частности, известен СО [см. Стандартный Образец Состава Раствора Ионов Ртути (II) - ГСО РР) 7343-96], который представляет собой раствор ионов ртути (II) в водном растворе азотной кислоты с концентрацией 1 моль/дм3.So, in particular, CO is known [see The Standard Sample Composition of the Mercury (II) Ion Solution - GSO PP) 7343-96], which is a solution of mercury (II) ions in an aqueous solution of nitric acid with a concentration of 1 mol / dm 3 .
Рассматриваемый стандартный образец может обеспечить надежность результатов анализа в тех случаях, когда исследуемый материал также представляет собой водный раствор ТМ или близок к таковому по своим свойствам.The standard sample under consideration can ensure the reliability of the analysis results in those cases when the test material also represents an aqueous solution of TM or is close to that in its properties.
Однако указанные стандартные образцы мало пригодны для анализа биоматериалов таких, как моча, которые далеки по свойствам от водных растворов и имеют характерную молекулярную структуру (матрицу).However, these standard samples are of little use for the analysis of biomaterials such as urine, which are far from the properties of aqueous solutions and have a characteristic molecular structure (matrix).
Крайне важным для получения точных результатов анализа является обеспечение максимально возможного подобия матрицы стандартного образца и исследуемого биоматериала, за счет чего достигается сходство условий (химические связи, валентности, молекулярные структуры и пр.), в которых находится ТМ (аналит) в стандартном образце и в исследуемом биоматериале.It is extremely important to obtain accurate analysis results that the maximum possible similarity of the matrix of the standard sample and the studied biomaterial is achieved, due to which the similarity of conditions (chemical bonds, valencies, molecular structures, etc.) in which the TM (analyte) is located in the standard sample and in investigated biomaterial.
С этой точки зрения более надежными и перспективными являются референтные материалы для производства СО состава мочи, содержащих ТМ, изготовленные на основе мочи животного или человека.From this point of view, reference materials for the production of CO of urine composition containing HM made on the basis of animal or human urine are more reliable and promising.
Известен референтный материал на основе мочи человека, производства США, содержащий ртуть, и способ получения указанного материала, которые выбраны в качестве ближайших аналогов заявляемых изобретений [см. http:nist.gov/srm - SRM 3668 NIST].Known reference material based on human urine, manufactured in the USA, containing mercury, and a method for producing said material, which are selected as the closest analogues of the claimed inventions [see http: nist.gov/srm - SRM 3668 NIST].
Рассматриваемый референтный материал представляет замороженную мочу человека с заданным содержанием в ней ртути.The reference material under consideration is frozen human urine with a given mercury content.
Способ получения данного материала (in vitro) включает добавление необходимого количества водорастворимой неорганической соли ртути в мочу человека с последующим ее замораживанием.A method of producing this material (in vitro) involves adding the required amount of a water-soluble inorganic salt of mercury to human urine, followed by freezing it.
В ходе приготовления референтного материала исходная моча подвергается центрифугированию, при этом из нее удаляют часть естественных компонентов матрицы. Кроме того, в исходную мочу добавляют несвойственные этому биоматериалу компоненты, например азотную кислоту.During the preparation of the reference material, the initial urine is centrifuged, while part of the natural components of the matrix is removed from it. In addition, components unusual for this biomaterial, for example nitric acid, are added to the initial urine.
Таким образом, хотя рассматриваемый референтный материал изготавливают на основе человеческой мочи, вышеуказанные факторы не позволяют добиться высокой степени адекватности матрицы референтного материала и исследуемых образцов мочи, что может негативно сказаться на результатах определения содержания ТМ в моче. При этом нужно учесть, что по российским нормативам моча человека, донора, является условно инфицированным материалом, что налагает значительные ограничения на работу с ней так же как на импорт биологических материалов [Письмо Центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора в Санкт-Петербурге от 05.01.2001. №13-10-3-1].Thus, although the reference material under consideration is made on the basis of human urine, the above factors do not allow to achieve a high degree of adequacy of the matrix of the reference material and the urine samples studied, which may adversely affect the results of determining the content of TM in urine. It should be noted that, according to Russian standards, human urine, a donor, is conditionally infected material, which imposes significant restrictions on working with it as well as on the import of biological materials [Letter of the Center for State Sanitary and Epidemiological Surveillance in St. Petersburg dated 01/05/2001 . No. 13-10-3-1].
Задачей заявляемых изобретений является разработка референтного материала для производства СО состава мочи и способа его получения, обеспечивающих повышение надежности и точности результатов определения содержания ТМ в моче.The task of the claimed invention is the development of a reference material for the production of CO composition of urine and a method for its production, providing increased reliability and accuracy of the results of determining the content of HM in urine.
Сущность изобретения заключается в том, что в способе получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, включающем использование мочи донора, содержащей токсичный металл, согласно изобретению используют мочу крыс, при этом осуществляют парентеральное введение в организм крыс токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, сбор мочи после анализа на содержание в ней токсичного металла, замораживание собранной мочи и ее лиофилизацию.The essence of the invention lies in the fact that in the method of obtaining a biological reference material for the production of standard samples of the composition of urine, including the use of donor urine containing toxic metal, rat urine is used according to the invention, and the toxic metal is administered parenterally to rats in the form of its water-soluble salt by injecting rats with an aqueous solution containing a water-soluble salt of mercury, or a water-soluble salt of cadmium, or a water-soluble salt of lead, urine collection e assay for its content of toxic metal, freeze the collected urine and its lyophilization.
В частном случае реализации способа парентеральное введение в организм крыс токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, осуществляют до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 13 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3.In the particular case of the method, the parenteral administration of toxic metal in the form of a water-soluble salt to rats by injecting the rats with an aqueous solution containing a water-soluble salt of mercury, or a water-soluble salt of cadmium, or a water-soluble lead salt, is carried out until the urine content of 10 μg / dm is reached 3 to 50 μg / dm 3 , or cadmium from 3 μg / dm 3 to 13 μg / dm 3 , or lead from 150 μg / dm 3 to 600 μg / dm 3 .
Сущность изобретения в отношении биологического референтного материала заключается в том, что он получен заявляемым способом.The invention with respect to the biological reference material is that it is obtained by the claimed method.
В частном случае реализации изобретения биологический референтный материал получен из мочи крыс, в организм которых парентеральное введение токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, осуществляют до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 30 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3, при этом содержание ртути, или кадмия, или свинца в референтном материале составляет соответственно от 0,33 мкг до 1,67 мкг, от 0,10 мкг до 1,0 мкг и от 5,0 мкг до 20,0 мкг на один грамм лиофилизата.In the particular case of the invention, the biological reference material is obtained from the urine of rats, into the body of which parenteral administration of a toxic metal in the form of its water-soluble salt by injection into rats an aqueous solution containing a water-soluble salt of mercury, or a water-soluble cadmium salt, or a water-soluble lead salt, is carried out until the content of lead in urine, mercury from 10 μg / dm 3 to 50 μg / dm 3 , or cadmium from 3 μg / dm 3 to 30 μg / dm 3 , or lead from 150 μg / dm 3 to 600 μg / dm 3 , while the mercury content , or cadmium, or lead in re erentnom material is suitably from 0.33 .mu.g to 1.67 .mu.g, 0.10 .mu.g to 1.0 .mu.g and 5.0 .mu.g to about 20.0 micrograms per gram of freeze-dried product.
Принципиально важным в заявляемом способе является то, что для получения референтного материала используют мочу крыс, содержащую токсичный металл, внедренный в матрицу мочи в результате его естественной ассимиляции организмом крыс (in vivo).Essentially important in the claimed method is that to obtain the reference material, rat urine is used containing toxic metal embedded in the urine matrix as a result of its natural assimilation by the rat organism (in vivo).
Тем самым обеспечивается высокая степень адекватности матрицы получаемого референтного материала и матрицы исследуемых образцов мочи, при этом внедренный в матрицу референтного материала ТМ, в частности ртуть, приобретает естественное многообразие форм, в которых ТМ может находиться в живом организме.This ensures a high degree of adequacy of the matrix of the obtained reference material and the matrix of the studied urine samples, while TM, in particular mercury, introduced into the matrix of the reference material, acquires a natural variety of forms in which TM can be in a living organism.
Согласно заявляемому способу введение ТМ в организм крыс осуществляют парентерально путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или кадмия, или свинца.According to the claimed method, the introduction of TM into rats is carried out parenterally by injecting the rats with an aqueous solution containing a water-soluble salt of mercury, or cadmium, or lead.
Как показали исследования динамики бионакопления ТМ в моче крыс, при инъекционном методе введения ртути, или кадмия, или свинца в организм крыс происходит достаточно быстрое (в течение 5-8 дней) накопление указанных ТМ в моче крыс с выходом на необходимый уровень концентраций.Studies of the dynamics of bioaccumulation of HM in rat urine have shown that with the injection method of introducing mercury, or cadmium, or lead into the rats, a fairly rapid (within 5-8 days) accumulation of the indicated HM in the urine of rats occurs, reaching the required concentration level.
Парентеральное введение указанного инъекционного раствора может осуществляться, в частности, с помощью внутримышечных или внутрибрюшинных инъекций.Parenteral administration of the indicated injection solution can be carried out, in particular, by intramuscular or intraperitoneal injection.
Конкретное требуемое содержание ТМ в референтном материале обеспечивается дозированным введением животному инъекционного раствора, содержащего определенное количество ТМ, и отбором мочи по достижении содержания в ней ТМ, обеспечивающего требуемую концентрацию ТМ в референтном материале. Содержание ТМ в моче крыс определяют путем анализа собираемой мочи.The specific required content of HM in the reference material is provided by dosing an animal with an injection solution containing a certain amount of HM and taking urine to achieve the content of HM in it, providing the required concentration of HM in the reference material. The content of TM in rat urine is determined by analysis of the collected urine.
Операция замораживания собранной мочи с последующей ее лиофилизацией обеспечивает получение референтного материала в форме, удобной для хранения, транспортировки и для производства получаемых из референтного материала СО.The operation of freezing the collected urine with its subsequent lyophilization provides a reference material in a form convenient for storage, transportation and for the production of CO obtained from the reference material.
Таким образом, техническим результатом, достигаемым при реализации изобретения в отношении заявляемого способа, является получение референтного материала, содержащего ТМ в формах, соответствующих естественному спектру его форм в живом организме, и имеющего матрицу, близкую по свойствам к матрице исследуемых нативных образцов мочи.Thus, the technical result achieved during the implementation of the invention in relation to the proposed method is to obtain a reference material containing TM in forms corresponding to the natural spectrum of its forms in a living organism, and having a matrix similar in properties to the matrix of the studied native urine samples.
Это позволяет при использовании СО, изготавливаемых из референтого материала, получаемого по заявляемому способу, обеспечить надежность и точность результатов определения содержания ТМ в моче.This allows using CO, made from the reference material obtained by the present method, to ensure the reliability and accuracy of the results of determining the content of HM in urine.
В случае введения в организм крыс инъекционного водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 13 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3, заявляемый способ обеспечивает получение референтного материала с содержанием в нем указанных ТМ, пригодного для изготовления СО состава мочи, используемых при диагностике отравлений ртутью, кадмием или свинцом.If an injectable aqueous solution containing a water-soluble salt of mercury, or a water-soluble salt of cadmium, or a water-soluble salt of lead is introduced into the body of rats, until the content in the urine of mercury is from 10 μg / dm 3 to 50 μg / dm 3 , or cadmium from 3 μg / dm 3 to 13 μg / dm 3 , or lead from 150 μg / dm 3 to 600 μg / dm 3 , the inventive method provides a reference material with the content of these TM, suitable for the manufacture of the composition of urine used in the diagnosis of mercury poisoning, cadmium or lead.
Заявляемый биологический референтный материал представляет собой органо-минеральную матрицу (лиофилизат) мочи в виде пористой массы серого цвета с внедренными в нее ртутью, или кадмием, или свинцом и характеризуется тем, что он получен в соответствии с заявляемым способом.The claimed biological reference material is an organo-mineral matrix (lyophilisate) of urine in the form of a porous mass of gray color with mercury or cadmium or lead embedded in it and is characterized in that it is obtained in accordance with the claimed method.
Заявляемый референтный материал может иметь различное содержание ТМ, которое обеспечивает изготовление СО состава мочи с требуемой концентрацией ТМ.The inventive reference material may have a different content of HM, which provides the production of CO composition of urine with the desired concentration of HM.
Техническим результатом, достигаемым при реализации заявляемого изобретения в отношении материала, является получение предназначенного для приготовления СО состава мочи референтного материала, содержащего ртуть, или кадмий, или свинец в формах, соответствующих естественному спектру форм ТМ в живом организме, имеющего матрицу, близкую по свойствам к матрице исследуемых образцов мочи.The technical result achieved by the implementation of the claimed invention in relation to the material is to obtain a reference material containing urine or cadmium or lead in a form corresponding to the natural spectrum of TM forms in a living organism having a matrix similar in properties to urine sample matrix.
В случае, когда биологический референтный материал получен из мочи крыс, в организм которых парентеральное введение токсичного металла осуществляют до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 30 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3, обеспечивается содержание ртути, или кадмия, или свинца в референтном материале соответственно от 0,33 мкг до 1,67 мкг, от 0,10 мкг до 1,0 мкг и от 5,0 мкг до 20,0 мкг на один грамм лиофилизата.In the case when the biological reference material is obtained from the urine of rats into which parenteral administration of a toxic metal is carried out until the content in the urine of mercury is from 10 μg / dm 3 to 50 μg / dm 3 , or cadmium from 3 μg / dm 3 to 30 μg / dm 3 , or lead from 150 μg / dm 3 to 600 μg / dm 3 , the content of mercury, or cadmium, or lead in the reference material is provided, respectively, from 0.33 μg to 1.67 μg, from 0.10 μg to 1 , 0 μg and from 5.0 μg to 20.0 μg per gram of lyophilisate.
Это позволяет использовать такой референтный материал для производства СО состава мочи, используемых при проведении анализа мочи для диагностики интоксикаций указанными ТМ.This allows the use of such reference material for the production of CO of the composition of urine used in the analysis of urine to diagnose intoxication with the indicated TM.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом.The inventive method is as follows.
Проводят подготовку крыс к процессу получения биологического референтного материала, выдерживая крыс в виварии в течение времени, необходимого для их адаптации к условиям содержания.The rats are prepared for the process of obtaining the biological reference material, keeping the rats in the vivarium for the time necessary for their adaptation to the conditions of detention.
Осуществляют дезинфекцию и промывку клеток, поилок, весов, емкостей для сбора мочи.Disinfect and rinse cells, drinking bowls, scales, and urine collection containers.
Выбирают суточную затравочную дозу - количество вводимого в течение суток ТМ на 1 кг массы животного. При этом величина затравочной дозы должна обеспечить требуемое содержание ТМ в референтном материале и определяется на основании опытных данных по изучению влияния величины дозы на содержание ТМ в моче экспериментального животного.Choose a daily seed dose - the amount of TM administered per day per 1 kg of animal weight. At the same time, the seed dose should provide the required TM content in the reference material and is determined on the basis of experimental data on the influence of the dose on the TM content in the urine of an experimental animal.
Готовят инъекционный раствор, содержащий водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца.An injection solution is prepared containing a water-soluble salt of mercury, or a water-soluble salt of cadmium, or a water-soluble salt of lead.
В качестве водорастворимых солей ртути, кадмия, свинца могут быть использованы, в частности, ацетаты или нитраты указанных ТМ, характеризующиеся достаточно высокой стойкостью и растворимостью в воде.As water-soluble salts of mercury, cadmium, lead can be used, in particular, acetates or nitrates of the indicated TM, characterized by a sufficiently high resistance and solubility in water.
Чтобы избежать инфильтрации тканей при инъекции, в качестве основы для инъекционного раствора используют физиологический раствор, в частности,раствор, полученный из расчета растворения одной таблетки реактива Рингера-Локка в 100 см3 теплой дистиллированной воды (физиологический раствор Рингера-Локка).In order to avoid tissue infiltration during injection, physiological saline is used as the basis for the injection solution, in particular, a solution obtained by dissolving one tablet of the Ringer-Locke reagent in 100 cm 3 of warm distilled water (Ringer-Locke physiological solution).
Концентрацию водорастворимой соли ТМ в инъекционном растворе выбирают, исходя из величины суточной затравочной дозы с учетом обеспечения физиологически приемлемого объема инъекционного раствора для одной инъекции. Указанный объем для крыс составляет 0,1 см3 на 1 кг массы животного.The concentration of the water-soluble salt of TM in the injection solution is selected based on the value of the daily seed dose, taking into account the physiologically acceptable volume of the injection solution for one injection. The indicated volume for rats is 0.1 cm 3 per 1 kg of animal weight.
Осуществляют парентеральное введение в организм крыс ТМ путем внутримышечных инъекций водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца.Parenteral administration of TM to the body is carried out by intramuscular injection of an aqueous solution containing a water-soluble salt of mercury, or a water-soluble salt of cadmium, or a water-soluble salt of lead.
Проводят анализ проб мочи на содержание в ней токсичного металла.Urine samples are analyzed for toxic metal content.
По достижении требуемого содержания ТМ в моче отсаживают крыс в обменные клетки и осуществляют сбор мочи в течение 24 часов.Upon reaching the required TM content in the urine, rats are precipitated into metabolic cells and urine is collected within 24 hours.
Собранную мочу расфасовывают по 5,0 см3 во флаконы и добавляют в каждый флакон по 0,1 см3 пеногасителя, в качестве которого используют, в частности, изопропанол.The collected urine is packaged in 5.0 cm 3 vials and 0.1 cm 3 defoamer is added to each vial, in particular isopropanol is used.
Замораживают мочу с последующей ее лиофилизацией при режимах, обычно применяемых для указанных операций.Urine is frozen with its subsequent lyophilization under the conditions usually used for these operations.
В частности, замораживают мочу в течение не менее 4-х часов при температуре не выше -15°С, а затем осуществляют ее лиофилизацию при температуре ниже -50°С в условиях вакуума при давлении менее 0,20 mBar до постоянного веса.In particular, urine is frozen for at least 4 hours at a temperature of no higher than -15 ° C, and then lyophilized at a temperature below -50 ° C under vacuum at a pressure of less than 0.20 mBar to a constant weight.
В результате осуществления способа получают биологический референтный материал, представляющий собой лиофилизат мочи крыс в виде пористой массы серого цвета с требуемым содержанием ртути, или кадмия, или свинца.As a result of the method, a biological reference material is obtained, which is a rat urine lyophilisate in the form of a porous mass of gray color with the required content of mercury, or cadmium, or lead.
Материал хранят и транспортируют в укупоренной стеклянной таре при температуре +4±2°С.The material is stored and transported in a sealed glass container at a temperature of + 4 ± 2 ° C.
Ниже приведены примеры осуществления группы изобретений.The following are examples of the implementation of the group of inventions.
Пример 1Example 1
Получали биологический референтный материал для приготовления стандартных образцов состава мочи, содержащих ртуть.Received biological reference material for the preparation of standard samples of the composition of urine containing mercury.
Использовали беспородных белых крыс линии Vistar в количестве 32 особей. Средняя масса крыс составляла 237±32 г. Used outbred white rats of the Vistar line in the amount of 32 individuals. The average rat weight was 237 ± 32 g.
Для парентерального введения готовили инъекционный раствор на основе физиологического раствора Рингера-Локка, для чего к 100 см3 теплого (40-50°С) физиологического раствора добавляли 0,10 см3 уксусной кислоты и навеску ацетата ртути.For parenteral administration, an injection solution was prepared on the basis of Ringer-Locke physiological solution, for which 0.10 cm 3 of acetic acid and a weighed portion of mercury were added to 100 cm 3 of warm (40-50 ° C) physiological solution.
Концентрация ртути в инъекционном растворе соответствовала затравочной дозе 0,5 мг/кг при введении 0,1 см3 инъекционного раствора на 1 кг массы крысы.The concentration of mercury in the injection solution corresponded to a starting dose of 0.5 mg / kg with the introduction of 0.1 cm 3 injection solution per 1 kg of rat weight.
В течение 3-х дней осуществляли ежесуточное парентеральное внутримышечное введение в мышцы задних лап крысы инъекционного раствора из расчета 0,1 см3 на 1 кг массы крысы.For 3 days, a daily parenteral intramuscular injection of injection solution into the muscles of the rat hind legs was carried out at the rate of 0.1 cm 3 per 1 kg of rat weight.
На 8-е сутки крыс отсаживали в обменные клетки и в течение 24 часов собирали мочу, при этом получали по 14,7±6,1 см3 мочи от каждой крысы.On the 8th day, rats were precipitated into metabolic cells and urine was collected within 24 hours, while 14.7 ± 6.1 cm 3 urine was obtained from each rat.
Моча крыс была подвергнута анализу на содержание ртути, которое составляло около 50 мкг/дм3. Вся моча крыс была объединена, таким образом был получен банк крысиной мочи. В этой моче были выявлены три формы ртути - органическая (73%), неорганическая (25%) и металлическая (2%).The urine of rats was analyzed for mercury, which was about 50 μg / DM 3 . All rat urine was pooled, so a rat urine bank was obtained. Three forms of mercury were detected in this urine - organic (73%), inorganic (25%) and metallic (2%).
Собранную мочу по 5,0 см3 расфасовывали во флаконы и в каждый флакон добавляли по 0,1 см3 пеногасителя - изопропанола.The collected urine of 5.0 cm 3 was packaged in vials and 0.1 cm 3 of antifoam - isopropanol - was added to each vial.
Замораживали мочу в течение не менее 4-х часов при температуре -20°С, а затем осуществляли ее лиофилизацию при температуре -50°С при давлении 0,20 mBar в течение 10 часов (до постоянного веса).Urine was frozen for at least 4 hours at a temperature of -20 ° C, and then it was lyophilized at a temperature of -50 ° C at a pressure of 0.20 mBar for 10 hours (to constant weight).
Получили биологический референтный материал, представляющий собой лиофилизат мочи крыс в виде пористой массы серого цвета с содержанием ртути 1,67 мкг на один грамм лиофилизата.Received a biological reference material, which is a rat urine lyophilisate in the form of a gray porous mass with a mercury content of 1.67 μg per gram of lyophilisate.
Пример 2Example 2
Получали биологический референтный материал для приготовления стандартных образцов состава мочи, содержащих кадмий.Received biological reference material for the preparation of standard samples of the composition of urine containing cadmium.
Использовали беспородных белых крыс линии Vistar в количестве 25 особей. Средняя масса крыс составляла 223±26 г. Used outbred white rats of the Vistar line in the amount of 25 individuals. The average rat weight was 223 ± 26 g.
Для парентерального введения готовили инъекционный раствор на основе физиологического раствора Рингера-Локка, для чего к 100 см3 теплого (40-50°С) физиологического раствора добавляли 0,10 см3 уксусной кислоты и навеску ацетата кадмия.For parenteral administration, an injection solution was prepared based on Ringer-Locke physiological saline, for which 0.10 cm 3 of acetic acid and a weighed portion of cadmium acetate were added to 100 cm 3 of warm (40-50 ° C) saline.
Концентрация кадмия в инъекционном растворе соответствовала затравочной дозе 0,5 мг/кг при введении 0,1 см3 инъекционного раствора на 1 кг массы крысы.The concentration of cadmium in the injection solution corresponded to a starting dose of 0.5 mg / kg with the introduction of 0.1 cm 3 injection solution per 1 kg of rat weight.
В течение 3-х дней осуществляли ежесуточное парентеральное внутримышечное введение в мышцы задних лап крысы инъекционного раствора из расчета из расчета 0,1 см3 на 1 кг массы крысыFor 3 days, a daily parenteral intramuscular injection of injection solution into the muscles of the hind legs of the rat was carried out at the rate of 0.1 cm 3 per 1 kg of rat weight
На 8-е сутки крыс отсаживали в обменные клетки и в течение 24 часов собирали мочу. Было получено по 15,3±10,3 см3 мочи от каждой крысы.On the 8th day, rats were precipitated into metabolic cells and urine was collected within 24 hours. Received 15.3 ± 10.3 cm 3 urine from each rat.
Моча крыс была подвергнута анализу на содержание кадмия, которое составляло около 13 мкг/дм3. Вся моча крыс была объединена, таким образом был получен банк крысиной мочи.The urine of rats was analyzed for cadmium content, which was about 13 μg / DM 3 . All rat urine was pooled, so a rat urine bank was obtained.
Собранную мочу по 5,0 см3 расфасовывали во флаконы и в каждый флакон добавляли по 0,1 см3 пеногасителя - изопропанола.The collected urine of 5.0 cm 3 was packaged in vials and 0.1 cm 3 of antifoam - isopropanol - was added to each vial.
Замораживали мочу в течение не менее 4-х часов при температуре -20°С, а затем осуществляли ее лиофилизацию при температуре -50°С при давлении 0,20 mBar в течение 10 часов (до постоянного веса).Urine was frozen for at least 4 hours at a temperature of -20 ° C, and then it was lyophilized at a temperature of -50 ° C at a pressure of 0.20 mBar for 10 hours (to constant weight).
Получили биологический референтный материал, представляющий собой лиофилизат мочи крыс в виде пористой массы серого цвета с содержанием кадмия 0,43 мкг на один грамм лиофилизата.Received a biological reference material, which is a rat urine lyophilisate in the form of a gray porous mass with a cadmium content of 0.43 μg per gram of lyophilisate.
Пример 3Example 3
Получали биологический референтный материал для приготовления стандартных образцов состава мочи, содержащих свинец.Received biological reference material for the preparation of standard samples of the composition of urine containing lead.
Использовали беспородных белых крыс линии Vistar в количестве 16 особей. Средняя масса крыс составляла 205±15 г. Used outbred white rats of the Vistar line in the amount of 16 individuals. The average rat weight was 205 ± 15 g.
Для парентерального введения готовили инъекционный раствор на основе физиологического раствора Рингера-Локка, для чего к 100 см3 теплого (40-50°С) физиологического раствора добавляли 0,1 см3 уксусной кислоты и навеску ацетата свинца.For parenteral administration, an injection solution was prepared on the basis of Ringer-Locke physiological solution, for which 0.1 cm 3 of acetic acid and a weight of lead acetate were added to 100 cm 3 of warm (40-50 ° C) physiological solution.
В течение 3-х дней осуществляли ежесуточное парентеральное внутримышечное введение в мышцы задних лап крысы инъекционного раствора в дозе 45 мг/кг из расчета 0,1 см3 на 1 кг массы крысы.For 3 days, a daily parenteral intramuscular injection of an injection solution of 45 mg / kg into the muscles of the hind legs of the rat was carried out at a dose of 0.1 cm 3 per 1 kg of rat weight.
На 8-е сутки крыс отсаживали в обменные клетки и в течение 24 часов собирали мочу. Было получено по 12,6±3,2 см3 мочи от каждой крысы.On the 8th day, rats were precipitated into metabolic cells and urine was collected within 24 hours. 12.6 ± 3.2 cm 3 urine was obtained from each rat.
Моча крыс была подвергнута анализу на содержание свинца, которое составляло около 315 мкг/дм3. Вся моча крыс была объединена, таким образом был получен банк крысиной мочи.The urine of rats was analyzed for lead content, which was about 315 μg / DM 3 . All rat urine was pooled, so a rat urine bank was obtained.
Собранную мочу по 5,0 см3 расфасовывали во флаконы и в каждый флакон добавляли по 0,1 см3 пеногасителя - изопропанола.The collected urine of 5.0 cm 3 was packaged in vials and 0.1 cm 3 of antifoam - isopropanol - was added to each vial.
Замораживали мочу в течение не менее 4-х часов при температуре -20°С, а затем осуществляли ее лиофилизацию при температуре -50°С при давлении 0,20 mBar в течение 10 часов (до постоянного веса).Urine was frozen for at least 4 hours at a temperature of -20 ° C, and then it was lyophilized at a temperature of -50 ° C at a pressure of 0.20 mBar for 10 hours (to constant weight).
Получили биологический референтный материал, представляющий собой лиофилизат мочи крыс в виде пористой массы серого цвета с содержанием свинца 10,5 мкг на один грамм лиофилизата.Received a biological reference material, which is a rat urine lyophilisate in the form of a gray porous mass with a lead content of 10.5 μg per gram of lyophilisate.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014145669/15A RU2567047C1 (en) | 2014-11-13 | 2014-11-13 | Method of obtaining of biological referential material for production of standard urine composition samples containing toxic metal and material obtained by this method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014145669/15A RU2567047C1 (en) | 2014-11-13 | 2014-11-13 | Method of obtaining of biological referential material for production of standard urine composition samples containing toxic metal and material obtained by this method |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2567047C1 true RU2567047C1 (en) | 2015-10-27 |
Family
ID=54362479
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014145669/15A RU2567047C1 (en) | 2014-11-13 | 2014-11-13 | Method of obtaining of biological referential material for production of standard urine composition samples containing toxic metal and material obtained by this method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2567047C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2646161C1 (en) * | 2016-12-12 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУН ИТ ФМБА России) | Method of obtaining biological reference material for producing standard samples of composition of liquid biological medium and material obtained using said method |
| CN112379005A (en) * | 2020-09-11 | 2021-02-19 | 司法鉴定科学研究院 | Freeze-dried quality control product for analyzing organic poison in human blood/urine and preparation method thereof |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2431665C2 (en) * | 2009-11-18 | 2011-10-20 | Федеральное государственное учреждение науки "ИНСТИТУТ ТОКСИКОЛОГИИ" Федерального медико-биологического агентства (ФГУН ИТ ФМБА России) | Method for preparing biological referent materials for producing material standards of compositions of these materials containing toxic metals and biological material produced by this method (versions) |
| RU2500198C1 (en) * | 2012-08-21 | 2013-12-10 | Владимир Хачатурович Хачатрян | Biologically active biomaterial production method and biomaterial produced by said method |
-
2014
- 2014-11-13 RU RU2014145669/15A patent/RU2567047C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2431665C2 (en) * | 2009-11-18 | 2011-10-20 | Федеральное государственное учреждение науки "ИНСТИТУТ ТОКСИКОЛОГИИ" Федерального медико-биологического агентства (ФГУН ИТ ФМБА России) | Method for preparing biological referent materials for producing material standards of compositions of these materials containing toxic metals and biological material produced by this method (versions) |
| RU2500198C1 (en) * | 2012-08-21 | 2013-12-10 | Владимир Хачатурович Хачатрян | Biologically active biomaterial production method and biomaterial produced by said method |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2646161C1 (en) * | 2016-12-12 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУН ИТ ФМБА России) | Method of obtaining biological reference material for producing standard samples of composition of liquid biological medium and material obtained using said method |
| CN112379005A (en) * | 2020-09-11 | 2021-02-19 | 司法鉴定科学研究院 | Freeze-dried quality control product for analyzing organic poison in human blood/urine and preparation method thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hilberg et al. | Postmortem drug redistribution—human cases related to results in experimental animals | |
| Pozebon et al. | Review of the applications of laser ablation inductively coupled plasma mass spectrometry (LA-ICP-MS) to the analysis of biological samples | |
| CN102288464B (en) | Preparation method for standard sample of chloramphenicol residual lyophiled powder in muscle of carp | |
| RU2567047C1 (en) | Method of obtaining of biological referential material for production of standard urine composition samples containing toxic metal and material obtained by this method | |
| Jard et al. | Actions of vasotocin and some of its analogues on salt and water excretion by the frog | |
| CN104364260A (en) | Insulin formulations | |
| RU2015150203A (en) | METHOD FOR SCREENING OF MEDICINES ON THE BASIS OF CELLS AND ITS APPLICATION | |
| LaFleur | Retention of mercury when freeze-drying biological materials | |
| RU2567046C1 (en) | Method for producing biological reference material for producing standard blood composition samples containing toxic metal, and material prepared with using this method | |
| CN109932512A (en) | A kind of fibrinogen detection reagent/freeze-drying detection reagent and preparation method thereof completely inhibiting platelet function | |
| CN104360052B (en) | A kind of Clenbuterol detection Quality Control animals urine dry powder and preparation method and application | |
| RU2431665C2 (en) | Method for preparing biological referent materials for producing material standards of compositions of these materials containing toxic metals and biological material produced by this method (versions) | |
| Bakker et al. | Effect of hypothalamic lesions on water metabolism of the toad Bufo marinus | |
| RU2646161C1 (en) | Method of obtaining biological reference material for producing standard samples of composition of liquid biological medium and material obtained using said method | |
| RU2803803C1 (en) | Method for obtaining multi-element reference material for manufacture of standard sample of composition of liquid biological media and material made by this method | |
| CN108279307B (en) | Blood collection tube for protecting and stabilizing gastrin releasing peptide precursor in serum or plasma | |
| Gao et al. | Evaluating the Degradation Process of Collagen Sponge and Acellular Matrix Implants In Vivo Using the Standardized HPLC-MS/MS Method | |
| Priestly et al. | Protein binding and the excretion of some azo dyes in rat bile | |
| JP5435797B2 (en) | Blood collection tube and pharmaceutical composition for measuring blood glucose level and / or hemoglobin A1c level | |
| CN113416540B (en) | Carbon spot applied to detection of drug-induced deafness reagent and preparation method thereof | |
| CN108387416A (en) | Methyl mercury residue detection standard sample and preparation method thereof in shark meat | |
| Cary et al. | Identification and characterization of a drug‐sensitive strain enables puromycin‐based translational assays in Saccharomyces cerevisiae | |
| CN102998436A (en) | Diganosis of a renal disease by oxygen and hydrogen isotopes in a biological sample | |
| EP3708191A1 (en) | Composite particles for imaging, method for producing composite particles, cells, cell structure, and mixed dispersion | |
| ES2542732T3 (en) | Pharmaceutical composition comprising rimeporide to treat diseases associated with beta cell dysfunction. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181114 |