RU2559537C2 - Hyr1 в качестве мишени для активной и пассивной иммунизации против candida - Google Patents
Hyr1 в качестве мишени для активной и пассивной иммунизации против candida Download PDFInfo
- Publication number
- RU2559537C2 RU2559537C2 RU2012103502/10A RU2012103502A RU2559537C2 RU 2559537 C2 RU2559537 C2 RU 2559537C2 RU 2012103502/10 A RU2012103502/10 A RU 2012103502/10A RU 2012103502 A RU2012103502 A RU 2012103502A RU 2559537 C2 RU2559537 C2 RU 2559537C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hyr1
- albicans
- candida
- expression
- vaccine
- Prior art date
Links
- 238000002649 immunization Methods 0.000 title claims description 7
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 title description 27
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims abstract description 83
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 24
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims abstract description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 claims 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 abstract description 36
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 abstract 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- 101150102882 HYR1 gene Proteins 0.000 description 131
- 101100208518 Arabidopsis thaliana UGT71B2 gene Proteins 0.000 description 125
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 59
- 101150032598 hisG gene Proteins 0.000 description 52
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 45
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 44
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 38
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 36
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 35
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 35
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 31
- 101100451087 Acetobacter pasteurianus hisC gene Proteins 0.000 description 30
- 101150118121 hisC1 gene Proteins 0.000 description 30
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 28
- 206010042938 Systemic candida Diseases 0.000 description 25
- 208000019164 disseminated candidiasis Diseases 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 22
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 22
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 19
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 19
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 19
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 14
- 101100010928 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) tuf gene Proteins 0.000 description 13
- 101150001810 TEAD1 gene Proteins 0.000 description 13
- 101150074253 TEF1 gene Proteins 0.000 description 13
- 102100029898 Transcriptional enhancer factor TEF-1 Human genes 0.000 description 13
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 244000197813 Camelina sativa Species 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 101150005709 ARG4 gene Proteins 0.000 description 9
- 101100004044 Vigna radiata var. radiata AUX22B gene Proteins 0.000 description 9
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 101150020386 EFB1 gene Proteins 0.000 description 8
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 8
- 101100500655 Methanopyrus kandleri (strain AV19 / DSM 6324 / JCM 9639 / NBRC 100938) ef1b gene Proteins 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 208000013210 hematogenous Diseases 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 7
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 7
- 102100038910 Alpha-enolase Human genes 0.000 description 6
- 101000882335 Homo sapiens Alpha-enolase Proteins 0.000 description 6
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 6
- VLMZMRDOMOGGFA-WDBKCZKBSA-N festuclavine Chemical compound C1=CC([C@H]2C[C@H](CN(C)[C@@H]2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 VLMZMRDOMOGGFA-WDBKCZKBSA-N 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 description 5
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- -1 asparaginine Chemical compound 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 3
- 102100026008 Breakpoint cluster region protein Human genes 0.000 description 3
- 101100125349 Candida albicans HYR1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 description 3
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 101150112014 Gapdh gene Proteins 0.000 description 3
- 101000933320 Homo sapiens Breakpoint cluster region protein Proteins 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 3
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229940055022 candida parapsilosis Drugs 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108700000045 Candida albicans HYR1 Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102100030483 Histatin-1 Human genes 0.000 description 2
- 101001082500 Homo sapiens Histatin-1 Proteins 0.000 description 2
- 101001021281 Homo sapiens Protein HEXIM1 Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000246 Allatostatin-1 Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036608 Aspartate aminotransferase, cytoplasmic Human genes 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101150117721 Cht2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100029112 Endothelin-converting enzyme 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- 102000002702 GPI-Linked Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010043685 GPI-Linked Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000841259 Homo sapiens Endothelin-converting enzyme 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000037026 Invasive Fungal Infections Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000012480 LAL reagent Substances 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101100113376 Oryza sativa subsp. japonica Cht8 gene Proteins 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010042220 Stress ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000025845 adhesion to host Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 210000002769 b effector cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000008846 dynamic interplay Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000003804 extraction from natural source Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007762 localization of cell Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008722 morphological abnormality Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007110 pathogen host interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 238000012514 protein characterization Methods 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/39—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts
- C07K14/40—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts from Candida
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0002—Fungal antigens, e.g. Trichophyton, Aspergillus, Candida
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Passenger Equipment (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантным вакцинам против Candida albicans, и может быть использовано в медицине. Вакцина для лечения или предупреждения кандидозной инфекции содержит выделенный полипептид с SEQ ID NO: 2 в эффективном количестве, который может быть слит с партнером слияния. Вакцина также может содержать адъювант. Изобретение позволяет повысить эффективность лечения или предупреждения кандидозной инфекции. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл., 2 пр.
Description
Сведения относительно финансирования исследования государством
Данное изобретение было создано при поддержке государством грантами Министерства Здравоохранения R21 AI066010, R01 AI067703, R01 AI063503, и R03 AI083251. Правительство США имеет права на данное изобретение.
Область техники
Настоящее изобретение относится к белкам клеточной оболочки гифа Candida, к антителам, полученным в результате иммунного ответа на вакцинацию с белками клеточной оболочки гифа Candida, и к способам профилактики и/или лечения кандидоза и других бактериальных инфекций с белками клеточной оболочки гифа Candida.
Уровень техники
Все документы, указанные в настоящем изобретении, или указанные части, включены в настоящем изобретении посредством ссылок, включая предварительную заявку США с порядковым номером 61/223,005, поданную 3 июля 2009. Никакой документ, однако, не признан известным уровнем техники для заявленного изобретения.
Приблизительно 60,000 случаев диссеминированного кандидоза происходит ежегодно в Соединенных Штатах Америки [1], в результате чего затрачиваются миллиарды долларов на медицинскую помощь. С учетом 40% смертности от подобных инфекций, существует необходимость выявления новых профилактических средств или терапевтических мишеней для воздействия.
Основным иммунологическим защитным механизмом против диссеминированного кандидоза является фагоцитарный киллинг организма [2.3]. Только фагоцитарные клетки способны на непосредственный киллинг Candida in vitro [4]. Кроме того, в течение тридцати минут внутривенного введения Candida мышам, кроликам, собакам или людям, дрожжевые грибки сохраняются внутри ретикулоэндотелиальной системы, особенно в печени. Печень, с высоким содержанием макрофагов Купффера, способна очистить 99,9% дрожжевых грибков в системе воротной вены в течение одного прохода [5], что подчеркивает эффективность фагоцитарного защитного механизма против грибов. Таким образом, резистентность С. albicans к фагоцитарному киллингу является важнейшей вирулентной функцией организма.
Гликозилфосфатидилинизитол (GPI)-закрепленные белки клеточной поверхности, находятся на главной границе раздела между патогеном и хозяином, что делает эти белки возможными участниками во взаимодействии хозяин-патоген [6].
Идентификация эффекторов в регуляторном пути организма, которые участвуют в вирулентности, обеспечивает возможность для терапевтического воздействия с помощью способов или композиций, которые превосходят существующие противогрибковые средства. Идентификация белков клеточной поверхности или белков, относящихся к гифам, которые влияют на регуляторный путь, связанный с вирулентностью, является особенно перспективным потому, что характеристика белка позволяет осуществлять иммунотерапевтические методы, которые с большой вероятностью превосходят или оказывают синергическое действие с существующими противогрибковыми средствами при борьбе с кандидозной инфекцией.
Вирулентность С. albicans регулируется несколькими предполагаемыми вирулентными факторами, среди которых прилипание к компонентам хозяина и способность превращаться из дрожжевых грибков в гифы являются наиболее важными при определении патогенности. Несмотря на то, что эффективные противогрибковые средства существуют, которые являются бактерицидными по отношению к Candida, смертность, вызываемая кандидемией составляет приблизительно 38%, даже при лечении сильными противогрибковыми веществами, таким как амфотерицин В. Также, существующие вещества, такие как амфотерицин В, обычно проявляют нежелательную токсичность. Хотя дополнительные противогрибковые препараты, которые могут быть разработаны, являются менее токсичными, чем амфотерицин В, маловероятно, что эти вещества будут более эффективными. Поэтому, любая пассивная или активная иммунотерапия для лечения или профилактики диссеминированного кандидоза является преспективной альтернативой стандартной противогрибковой терапии.
Таким образом, существует необходимость в эффективных иммуногенах, которые обеспечат хозяину иммунную защиту и пассивную иммунологическую защиту против Candida и других иммуногенных подобных патогенов. Настоящее изобретение отвечает этим требованиям и также имеет соответствующие преимущества.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к полипептидным антигенам HYR1 Candida и терапевтическому применению подобных антигенов. Полипептидные антигены HYR1 настоящего изобретения могут быть использованы для лечения или профилактики инфекции Candida у субъекта.
При помощи скрининга новых систем условной гиперэкспрессии/супрессии, направленного на GPI - закрепленные белки на C. albicans, авторы изобретения идентифицировали HYR1 как вирулентный фактор. HYR1 является ко-экспрессирующим геном гифа, нулевой мутантный штамм которого не отображает каких- либо морфологических нарушений in vitro [7]. Ниже авторы приводят результаты, наглядно показывающие, что HYR1 является посредником резистентности к фагоцитарному киллингу in vitro, модулирует тканевую грибковую нагрузку in vivo и является, таким образом, мишенью вакцины для облегчения тяжести диссеминированного кандидоза.
Определения
Термин «HYR1» полипептид означает полипептид, который по существу идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1. Желательно, чтобы полипептид HYR1 имел, по меньшей мере, 70, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или даже 100% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1.
Термин «фрагмент полипептида HYR1» или «фрагмент HYR1» означает фрагмент полипептида HYR1, содержащий менее, чем 937, 936 или 935 аминокислот. Преимущественно, фрагменты HYR1 составляют от 300 до 350 или от 250 до 500 аминокислот в длину. Желательно, чтобы фрагмент был менее чем 937, 936, 935, 934, 933, 932, 931 или 930, 920, 910, 900, 890, 880, 870, 860, 850, 840, 830, 820, 810, 800, 790, 780, 770, 760, 750, 740, 730, 720, 710, 700, 690, 680, 670, 660, 650, 640, 630, 620, 610, 600, 590, 580, 570, 560, 550, 540, 530, 520, 510, 500, 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 400, 390, 380, 370, 360, 350, 340, 330, 320, 310, 300, 290, 280, 270, 260, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 15, или 10 аминокислот и, желательно, являлся иммуногенным. Фрагмент HYR1, например, может содержать одну или более консервативных аминокислотных замен в последовательности SEQ ID NO:2. Дополнительные желательные фрагменты HYR1 содержат одну или более консервативных аминокислотных замен в последовательности SEQ ID NO:2 и/или, по меньшей мере, одну фланкирующую аминокислоту (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 фланкирующих аминокислот) на N- и/или С- конце последовательности SEQ ID No:2. Другие предпочтительные фрагменты HYR1 содержат семь и более последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO:2.
Неограничивающие примеры фрагмента HYR1 включают аминокислоты 1-40, 10-50, 20-60, 30-70, 40-80, 50-90, 60-100, 70-110, 80-120, 90-130, 100-140, 110-150, 120-160, 130-170, 140-180, 150-190, 160-200, 170-210, 180-220, 190-230, 200-240, 210-250, 220-260, 230-270, 240-280, 250-290 и 260-300, 270-310, 280-320, и 290-331 последовательности SEQ ID NO:2; и эти фрагменты имеют одну или более следующих особенностей: одну или более консервативных аминокислотных замен (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 консервативные аминокислотные замены) в последовательности SEQ ID NO:2; одну или более аминокислот (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 аминокислот) усеченных на N- и/или С-конце последовательности SEQ ID NO:2; и, по меньшей мере, одну фланкирующую аминокислоту (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 фланкирующих аминокислот) на N- и/или С-конце последовательности SEQ ID NO:2.
Термин «практически идентичный» означает полипептид, проявляющий, по меньшей мере, 50%, желательно 60%, 70%, 75% или 80%, более желательно 85%, 90% или 95%, и наиболее желательно 99% идентичности аминокислотной последовательности к указанной аминокислотной последовательности. Длина сравниваемых последовательностей, как правило, по меньшей мере, 10 аминокислот, желательно, по меньшей мере, 15 заменимых аминокислот, более желательно, по меньшей мере, 20, 25, 50, 75, 90, 100, 150, 200, 250, 275, 300, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345 или 350 заменимых аминокислот, и наиболее желательно, полная длина аминокислотной последовательности.
Идентичность последовательности может быть измерена при использовании компьютерной программы анализа последовательности по умолчанию (например, Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, WI 53705). Такая компьютерная программа может противопоставлять похожие последовательности, устанавливая степень гомологии различных замен, делеций и других модификаций. Множественные последовательности могут быть также выравнены с использованием программы Clustal W(1.4) (производство Julie D. Thompson и Toby Gibson of the European Molecular Biology Laboratory, Germany и Desmond Higgins of European Bioinformatics Institute, Cambridge, UK), путем ввода парного выравнивания режимом «медленно», параметры парного выравнивания включают штраф на внесение делеции в выравнивание 10.0 и штраф на продолжение выравнивания 0.1, а также задают сходную матрицу «blosum». Дополнительно, параметры множественного выравнивания могут включать штраф на внесение делеции в выравнивание 10.0, штраф на продолжение выравнивания 0.1, а также задают сходную матрицу «blosum», замедляют расхождения до 40% и протяженность разрыва до 8.
Термин «консервативная аминокислотная замена», используемый в данной заявке, означает замену в аминокислотной последовательности аминокислоты на другую в пределах семейства аминокислот, а именно родственных по химическим свойствам их боковых цепей.
Генетически закодированные аминокислоты можно подразделить на четыре семейства: кислые (аспартат, глутамат), основные (лизин, аргинин, гистидин), неполярные (аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан) и полярные незаряженные (глицин, аспарагин, глутамин, цистеин, серии, треонин, тирозин). Фенилаланин, триптофан и тирозин иногда группируют как ароматические аминокислоты. Аналогично, аминокислоты могут также разделять на следующие группы: кислые (аспартат, глутамат), основные (лизин, аргинин, гистидин), алифатические (глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, треонин), с серином и треонином не обязательно группируют отдельно как алифатическую гидроксильную; ароматические (фенилаланин, тирозин, триптофан); амиды (аспарагин, глутамин); и серосодержащие (цистен, метионин).
Любое изменение в аминокислотной последовательности, приводящее к функциональным гомологам, может быть определено путем оценки способности различных пептидов функционировать некоторым образом подобно белку дикого вида, используя стандартные способы, такие как исследования, описанные здесь.
Желательное осуществление настоящего изобретения включает, по меньшей мере, одну консервативную аминокислотную замену в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 или 2; и, более желательно, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 консервативных аминокислотных замен в последовательности SEQ ID NO:1 или 2.
Термин «фланкирующая аминокислота» означает аминокислоту в полипептидной последовательности, которая непосредственно прилегающую на N-или С-конце той или иной определенной последовательности. Желательно, фланкирующая аминокислота находится на N- и/или С-конце аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 или 2 или их фрагмента; и более предпочтительно, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 фланкирующие аминокислоты находятся на N- и/или С-конце аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 или 2, или их фрагмента.
Используемый в данной заявке термин «белок слияния» относится к полипептиду, состоящему из (1) полипептида HYR1, фрагмента HYR1; и (2) партнера слияния.
Используемый в данной заявке термин «партнер слияния» относится к гетерологичной последовательности, которая может сливаться с полипептидом HYR1 или фрагментом HYR1. Примеры партнеров слияния описаны в данной заявке и включают определение маркеров, стабилизацию доменов или последовательностей, которые способствуют производству или очистке белков.
Используемый в данной заявке термин «иммунный ответ» относится к активации иммунной системы организма в ответ на антиген или возбудитель инфекции. У позвоночных он может включать, но не ограничиваться ими, одну или более следующих: мутация нативных В-клеток в В-клетках памяти; производство антител клетками плазмы (эффекторные В-клетки); индукция клеточного иммунитета; активация и освобождение цитокина CD4+ Т-клетками; активация и освобождение цитокина CD4+ Т-клетками; пополнение цитокинов и активация фагоцитарных клеток (например, макрофагов, нейтрофилов, эозинофилов); и/или активация комплемента.
Термин «иммуногенный» означает любую субстанцию, способную индуцировать иммунный ответ у субъекта.
Термин «фармацевтически приемлемая соль» означает любую нетоксичную кислотно-аддитивную соль или металлокомплекс, используемые в фармацевтической индустрии. Примеры кислотно-аддитивных солей включают органические кислоты, такие как уксусная, молочная, памовая, малеиновая, лимонная, яблочная, аскорбиновая, янтарная, бензойная, пальмитиновая, пробковая, салициловая, винная, матансульфоновая, толуолсульфокислая или трифторуксусная кислоты или в этом роде; полимерные кислоты, такие как дубильная кислота, карбоксиметилцеллюлоза или в этом роде; и неорганические кислоты, такие как солярная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота или в этом роде. Металлокомплексы включают цинк, железо и тому подобное.
Термин «фармацевтически приемлемый носитель» означает любой раствор, используемый для растворения и доставки вещества субъекту. Предпочтительно, фармацевтически приемлемым носителем является солевой раствор. В предпочтительном осуществлении, фармацевтически приемлемый носитель включает адъювант. Примеры адъювантов описаны в данной заявке. Другие физиологически приемлемые носители и композиции на их основе известны специалисту в данной области техники и описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, (20th edition), ed. A. Gennaro, 2003, Lippincott Williams & Wilkins.
Термин «выделенный» означает белок (или его фрагмент), выделенный из компонентов, которые естественным образом сопровождают его. Как правило, полипептид является по сути выделенным, когда он составляет, по меньшей мере на 60% по весу, свободный от белков и естественных органических молекул, с которыми он естественным образом связывается. Определение также распростроняется и на полипептид, отделенный от его фланкирующих аминокислот (например, для аминокислотной последовательности, выделение относится к последовательности, которая свободна от фланкирующих аминокислот, с которыми последовательность естественным образом связывается в полипептиде). Предпочтительно, полипептид, по меньшей мере, на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере, на 90% и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, на 99% по весу выделен. Выделенный полипептид может быть получен стандартными способами, например, путем экстракции из естественных источников (например, очистка клеток, инфицированных Candida), путем экпрессии рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих фрагмент HYR1; или слиянием его белков путем химического синтеза полипептида. Степень чистоты может быть измерена любым подходящим способом, например, колоночной хроматографией, электрофорезом в полиакриламидном геле или HPLC анализом.
Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество иммуногенного соединения (например, полипептида, фрагмента, белка слияния или вакцины), необходимого для получения у субъекта одного или более следующих эффектов: иммунного ответа; снижения уровня инфекции Candida (например, уменьшение, по меньшей мере, на 5%, 10%, 20% или 30%; более желательно, на 40%, 50%, 60% или 70%; и наиболее желательно на 80% или 90%); ослабление (например, по меньшей мере, на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или даже 100% снижение) одного или более симптомов инфекции Candida у пациента; или повышение устойчивости к новой инфекции Candida (например, увеличение, по меньшей мере, на 5%, 10%, 20%, 30%, 40% или 50%; более желательно, на 60%, 70%, 80%, or 90%; или, наиболее желательно, на 100%, 200% или 300%).
Другие признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего Подробного Описания, чертежей и формулы изобретения.
Краткое описание чертежей
Фигура 1. Условная экспрессия HYR1 усиливает опосредованный киллинг C. albicans нейтрофилами и макрофагами. (А) Подтверждение условной сверхэкспрессии/супрессии HYR1 штамма СААН-31. Результаты RT-ПЦР демонстрируют сверхэкспрессию HYR1 гена в -DOX среде и недостаток экспрессии в+DOX среде. Фрагмент EFB1 был ко- амплифицирован и служил в качестве контроля. Отсутствие загрязнения геномной ДНК при приготовлении кДНК проверяли отсутствием 919 bp полоски, содержащейся в интроне EFB1. ТНЕ31 был контрольным штаммом дикого типа. (Б) Штаммы C. albicans выращивали в YPD с DOX (супрессия HYR1) и без DOX (сверхэкспрессия HYR1) при 30°С всю ночь и затем совместно культивировали с нейтрофилами человека; (В) C.albicans совместно культивировали с HL-60 производными нейтрофилов; (Г) с HL-60 производными макрофагов.
Фигура 2. Экспрессия HYR1 Candida albicans увеличивает резистентность к киллингу нейтрофилами человека в bcr1 нулевых-мутантах или штамме С. glabrata. (A и Б) Автономная экспрессия HYR1 в штамме С albicans, лишенном bcr1, полностью комплементарна повышенной восприимчивости родительского штамма к резистентности нейтрофильного киллинга. Штаммы С. albicans DAY 18 5 (дикий тип), CJN702 (bcr1 нулевой мутант) и CJN698 (BCR1 комплементарный) CJN114, CJN1153, CJN1222, CJN1259, CJN1276, CJN1281 и CJN1288 (автономно экспрессируют ALS1, ALS3, HWP1, HYR1, RBT5, СНТ2 и ЕСЕ1 в bcr1 с теневым фенотипом нулевого мутанта, соответственно) выращивают в YPD всю ночь при 30°С. Данные отображаются в виде среднего значения ± вероятность. *Р<0.04 по сравнению с диким типом и BCR1-дополненным. (В) Гетерологичная экспрессия гена HYR1 С. albicans повышает резистентность С. glabrata к HL-60 производными нейтрофилов опосредованному киллингу. *Р<0.0001.
Фигура 3. Обнаружение экспрессии HYR1 при диссеминированном кандидозе, хотя эта экспрессия была изначально ингибирована нейтрофилами in vitro. (А) Почки, печень, легкие, селезенка и мозги были собраны через 6 или 24 часа после внутривенного инфицирования С. albicans. Гнездовая RT- ПЦР была использована для определения экспрессии HYR1. EFB1 С. albicans и конструктивный ген мыши G3PDH были использованы в качестве контроля. + означает инфицированные мыши, в то время как - означает неинфицированные мыши. (Б) HL-60 производные нейтрофилов ингибируют экспрессию HYR1 С. albicans. Дикий тип С. albicans культивировали в RPMI 1640 с добавлением 10% объединенной сывороткой человека. Без нейтрофилов экпрессия HYR1 была определена после получасовой индукции. С нейтрофилами, экпрессия HYR1 ингибировалась два часа.
Фигура 4. Экпрессия HYR1 in vivo и его действие на грибковую нагрузку. Для определения экпрессии HYR1 в процессе диссеминированного кандидоза, почки, печень, легкие, селезенка и мозги были собраны через 6 или 24 часа после внутривенного инфицирования С. albicans. Гнездовая RT-ПЦР была использована для определения экспрессии HYR1. EFB1 С. albicans и конструктивный ген мыши G3PDH были использованы в качестве контроля. + означает инфицированные мыши, в то время как - означает неинфицированные мыши (А). Условная экспрессия HYR1 повышает грибковую нагрузку в органах с распространением тканевых фагоцитов. Нагрузка С. albicans в печени и селезенке иммунокомпетентных мышей (n=8 в группе), инфицированных HYR1 С. albicans или контрольным штаммом, выращенных в условиях условной экпресии (-DOX) или супрессии (+DOX) (А) и экпресия HYR1 in vivo (Б). Печень и селезенку собрали в тот же день после инфицирования. На оси Y отображены нижние пределы обнаружения исследования. Данные отображаются в виде среднего значения ± вероятность. *Р<0.0001 по сравнению с не экспрессирующим HYR1 штаммом (HYR1-DOX) или контрольным штаммом.
Фигура 5. Непрямая иммунофлюоресценция с анти-Hyr1p сывороткой показывает проявление экспрессии Hyr1p в гифах С, albicans. Формирование гифа было вызвано инкубацией С. albicans в RPMI 1640 в течении 90 минут. Клетки окрашивали с либо предварительно абсорбированной анти-HYR1 сывороткой hyr1 нулевого мутанта (1:1000) или анти-белком, приготовленным из сыворотки пустого плазмидного клона (отрицательный контроль) с последующей окраской Alex меченных анти-мышиных Ab.
Фигура 6. Рекомбинантный N- концевой Hyr1p (rHyr1p-N) отличается защищенностью от мышинного гематогенного диссеминированного кандидоза. (А) Выживаемость мышей (8 мышей в группе), вакцинированных rHyr1p-N, смешанного с полным или неполным адъювантом Фрейда и инфицированные в хвостовую вену с 2.2×105 бластоспор SC5314 Candida albicans. (Б) Выживаемость мышей (8 мышей в группе, исключая контрольную группу, в которой 17 мышей), вакцинированных rHyr1p-N или нейтрализованным rHyr1p-N, смешанным с 0.1% гидрокисью алюминия, и инфицированных с 7×105 бластоспорами 15563 Candida albicans. *Р<0.001 логарифмический ранговый критерий. (В) Эффективность вакцинации или контроля F(ab)'2 на блокирование нейтрофильного киллинга мыши С. albicans, условно экспрессирующей или супрессирующей Hyr1. Контроль показывает исследование, выполненное при отсутствии любого F(ab)'2. Данные отображаются в виде среднего значения±вероятный диапазон. *Р=0.001 по тесту Манна-Уитни.
Подробное описание изобретения
Candida albicans является распространненным патогеном у людей. Так например, С. albicans, хотя в повседневной жизни безобидный условно-патогенный микроорганизм, в различных условиях может стать причиной целого ряда заболеваний от поверхностной кожно-слизистой инфекции, такой как вагинальный и/или орофарингиальный кандидоз, до глубокого органного поражения диссеминированным кандидозом. До вызывания болезни, грибы колонизируются в желудочно-кишечном тракте и иногда поражают кожные и слизистые оболочки. Соединение с слизистой поверхностью хозяина является ключевым требованием для этого первоначального шага. После колонизации, С. albicans попадает в кровоток путем инфицирования внутрисосудистой системы или перемещается через слизистую желудочно-кишечного тракта, поврежденную химиотерапией или стресс-язвой. Микроорганизмы затем распространяются по кровотоку, связываются и проникают внутрь васкулярного эндотелия, чтобы выйти из сосудистой сети, и попадают вглубь органов, таких как печень, селезенка и почки.
Определение и функциональная характеристика фрагмента HYR1, описанная здесь, позволяет этому полипептиду эффективно применяться в лечении кандидоза.
Природа патогенеза С. albicans, за счет присоединения к эндотельным клеткам, рассмотрена в патенте США No.5,578,309, который специально включен здесь в качестве ссылки в полном объеме. Для описания гена HYR1 и его характеристики, включая характеристику продукции гена, см. Bailey et al. (Journal of Bacteriology 178:5353-5360,1996).
Изобретение относится к вакцине, содержащей выделенный фрагмент HYR1 и, необязательно, адъювант в фармацевтически приемлемой среде. Вакцина может содержать фрагмент HYR1, полученный из вида Candida, такого как Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida glabrata или Candida parapsilosis.
В изобретении применяют продукт последовательности гена HYR1 С. albicans в качестве вакцины для лечения, предупреждения или облегчения диссеминированного кандидоза. Вакцина является эффективной против различных штаммов С. albicans, a также против различных видов Candida.
Таким образом, согласно одному аспекту, изобретение относится к фрагменту HYR1 эффективному, разработанному в виде фармацевтической композиции и вводимому как вакцина с содержанием или без адъюванта. Фрагмент HYR1 может быть кандидозного происхождения и может быть получен, например, из видов, принадлежащих к классу Candida, например, Candida parapsilosis, Candida krusei, Candida glabrata и Candida tropicalis. Фрагмент HYR1 может быть получен в выделенной или очищенной форме и, таким образом, согласно одному из вариантов изобретения, фрагмент HYR1, разработанный в виде вакцины, вызывает иммунный ответ у пациента на вызванный иммунный ответ против Candida.
Изобретение также относится к способу лечения или предупреждения диссеминированного кандидоза. Способ включает введение иммуногенного количества вакцины HYR1 фрагмента. Вакцину можно вводить с содержанием или без адъюванта. Фрагмент HYR1 может быть получен из различных штаммов Candida, a также из различных видов Candida, таких как Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida glabrata и Candida parapsilosis.
Эффективность вакцины заявленного изобретения против различных штаммов Candida, различных видов Candida, других бактериальных и инфекционных возбудителей и их разнообразной иммунной активности оценивают в соответствии со стандартными способами такими, как описано ниже.
Учитывая сведения и методологические руководства, приводимые в данном документе, специалисту в данной области техники очевидно, что иммуннотерапевтические способы, известные из уровня техники, могут применяться с одним или более фрагментами HYR1 в фармацевтически приемлемой композиции, вводимой в качестве вакцины с содержанием или без адъюванта. При осуществлении настоящего изобретения, термины «фармацевтическая» или «фармацевтически приемлемая» означают композиции, разработанные известными нетоксичными способами и, при необходимости, используются с носителями или добавками, которые безопасны для введения людям. Введение может производиться с использованием хорошо известных способов применения, включая, например, внутривенное, внутримышечное, внутрибрюшинное или подкожной инъекции. Указанные вакцины настоящего изобретения также могут содержать буферы, соли и другие растворители, известные специалисту в данной области техники, для сохранения активности вакцины в растворе. Аналогично, любые из большого числа адъювантов, известных из уровня техники, могут быть использованы в вакцине настоящего изобретения для выявления, активации или усиления терапевтически эффективного иммунного ответа, способного ослаблять или блокировать связывание, проникновение и/или инфицирование Candida с восприимчивой клеткой хозяина.
При этом, модификации, которые по существу не влияют на осуществление вариантов настоящего изобретения, также включены в формулу изобретения. Таким образом, следующие примеры предназначены для иллюстрации, но не ограничивающие настоящее изобретение.
Пример 1
Hyr1p Candida albicans придает резистентность к нейтрофильному киллингу и является мишенью вакцины.
Как описано выше, Candida albicans является наиболее частой причиной инвазивной грибковой инфекции у людей. Неясно, как С. albicans избегает фагоцитарной атаки и выживает в неблагоприятной кровенной среде в течение опасной для жизни системной инфекции. Применяя генетическую стратегию условной сверхэкспрессии/супрессии, авторы изобретения обнаружили, что ген HYR1 снижает фагоцитарный киллинг С. albicans in vitro и повышает тканевую грибковую нагрузку in vivo. Согласно с позитивной регуляцией транскрипционного фактора Bcr1p, HYR1 комплементарен гипервосприимчивости к фагоцитарному опосредованному киллингу bcr1 нулевого мутанта С. albicans in vitro. Кроме того, гетерологичная экспрессия HYR1 в Candida glabrata приводит организм к большей резистентности к нейтрофильному киллингу. В заключении, вакцинация рекомбинантным Hyr1p значительно защищает мышей против гематогенного диссеминированного кандидоза. Таким образом, Hyr1 является важным вирулентным фактором для С. albicans, служащим посредником резистентности к фагоцитарному киллингу. Hyr1 является, соответственно, мишенью для вакцины или других иммунологических или низкомолекулярных вмешательств для улучшения последствий диссеминированного кандидоза.
Результаты
Условная экспрессия HYR1 в бластоспорах значительно усиливает резистентность С. albicans к фагоцит- опосредованному киллингу in vitro.
Изучая функции HYR1, авторы изобретения создали условно сверхэкспрессирующий/супрессирующий штамм С. albicans, СААН-31. В СААН-31 одна аллель HYR1 контролировалась тетрациклиновым регулятором (ТК)-промотера, а другая аллель была нарушена. Полуколичественным RT-ПЦР авторы изобретения подтвердили, что HYR1 в большом количестве экспрессировался, когда бластоспоры СААН-31 росли в среде без DOX, и не определялся в присутствии DOX (Фиг.1А). Как и предполагалось, HYR1 не был обнаружен в бластоспорах дикого типа (ТНЕ31), потому что HYR1 является ко-экспрессирующим геном гиф (Фиг.1А).
Штамм СААН-31, условно сверхэкспрессирующий HYR1, и контрольный ТНЕ31 дикого типа имеют одинаковые темпы роста, независимо от присутствия или отсутствия DOX (время удвоения для контрольного штамма дикого типа без DOX=1.51±0.29 ч и с DOX=1.51±0.38 ч; время удвоения для штамма СААН-31 без DOX=1.39±0.30 ч и с DOX=1.35±0.19 ч). Авторы изобретения также определили влияние сверхэкспрессии HYR1 на нормальное накопление других GPI-закрепленных белков на клеточной поверхности. Прямой иммунофлюоресценцией авторы изобретения подтвердили, что сверхэкспрессия HYR1 не вляет на накопление GPI- закрепленных белков Alsip (данные не представлены) [8].
В продолжении многократного скрининга на вирулентно-ассоциированные фенотипы, авторы изобретения определили влияние условной сверхэкспрессии HYR1 на киллинг кандидоза фагоцитами человека. HYR1- эпрессирующий С. albicans (СААН-31-DOX) был значительно более резистентен к нейтрофил - опосредованному киллингу человека, чем дикий тип С. albicans (который не экпрессирует HYR1 в фазе бластоспор) и HYUR1-супрессорный С. albicans (СААН-31+DOX) (Фиг.1Б). Этот фенотип был не связан с DOX, в то время как киллинг не значительно различался между контрольным диким типом и HYR1-супрессорным С. albicans (+DOX).
Авторы также выполнили исследование киллинга кандидоза с использованием HL-60 клеточной линии, которая может быть дифференцирована в либо нейтрофил-подобные или макрофаг-подобные клетки [9, 10]. Как и только что собранные человеческие нейтрофилы, условная сверхэкспрессия HYR1 уменьшает киллинг бластоспор С. albicans обоими HL-60 нейтрофил-подобными (Фиг.1В) и макрофаг-подобными (Фиг.1Г) клетками in vitro.
Гипер-восприимчивость к нейтрофильному киллингу bcr1 нулевого мутанта С. albicans была дополнена экспрессией HYR1 in vitro.
Поскольку, HYR1 является геном, регулирующим последующие звенья сигнальных каскадов положительного транскрипционного регулятора Bcrip [17], авторы и изобретения предположили, что разрушение bcr1 усилит восприимчивость к нейтрофильному киллингу, при условии стимуляции дикого типа С. albicans экспрессировать HYR1 (т.е. в процессе формирования гиф). Поэтому, авторы индуцировали С. albicans в форме зародышевой трубки, инкубируя клетки в RPMI с добавлением 10% FBS при 37°С в течение 40 минут. Эти условия, как известно, индуцируют экспрессию HYR1 [18] и, в результате чего, зародышевая трубка становится достаточно короткой, что бы не формировались обширные гифы, таким образом, представляется возможность количественно описать колониеобразующие единицы (CFUs) в нашем киллинговом исследовании. Авторы изобретения сравнили нейтрофильный киллинг штамма bcr1 нулевого мутанта (CJN702), BCR1 комплементарного штамма в bcr1 теневом фенотипе нулевого мутанта (CJN698) и дикого типа штамма С. albicans (DAY185). Bcr1 нулевой мутант был гипервосприимчивым к нейтрофил-опосредованному киллингу по сравнению с BCR1-комплементарным и контрольным штаммом дикого типа (Фиг.2А). Кроме того, гипервосприимчивый к киллингу bcr1-лишенный С. albicans был полностью комплементарен автономной экспрессии HYR1 в bcr1 теневом фенотипе мутанта, но не другими клеточно-поверхностными кодирующими генами, регулирующими Bcrip [17] (Фиг.2А и 2Б).
Резистентность сверхэспресиирующего HYR1 С. albicans к фагоцитарному киллингу может быть воспроизведена гетероэкспрессией HYR1 в С. glabrata
Далее, определяя вирулентность фенотипа, опосредованного HYR1, авторы изобретения экспрессировали гетерологичный ген в BG14 С. glabrata [19], используя плазмиду pGRB2.2, несущую основной промотер PGK.1 [11]. Авторы также произвели трансформацию BG14 С. glabrata с пустой плазмидой в качестве отрицательного контроля. Экспрессия HYR1 в С. glabrata привела к 75% снижению к киллингу HL-60-производными нейтрофилов in vitro, по сравнению с С. glabrata, трансформированной с пустой плазмидой (Фиг.2В).
Нейтрофилы подавляют кандидозную экспрессию HYR1
Поскольку, условная сверхэкспрессия HYR1 присваивает Candida резистентность к нейтрофил-опосредованному киллингу, авторы изобретения применяли RT-ПЦР для исследования экспрессии HYR1 дикого типа С. albicans (SC5314) в ответ на HL-60-производные нейтрофилов in vitro. HYR1 экспрессировался в ближайшие 30 минут после воздействия среды, содержащей сыворотку, и непрерывно интенсивно экспрессировался в течение 2.5 часов в процессе культивирования (Фиг.3А). Однако, когда С. albicans подвергается воздействию HL-60-производных нейтрофилов при культивировании, даже в присутствии сыворотки, экспрессия HYR1 ингибировалась в течение 2 часов при совместном культивировании.
Дикий тип С. albicans экспрессирует HYR1 в процессе гематогенного диссеминированного кандидоза, в результате чего увеличивается тканевая грибковая нагрузка в органах с высоким содержанием фагоцитов.
Для определения экспрессии HYR1 в процессе гематогенного диссеминированного кандидоза, 5 главных органов - мозг, печень, легкое, селезенка и почки были собраны у мыши, инфицированной диким штаммом С. albicans, после 6 и 24 часов инфицирования. Улучшенное гнездовое RT-ПЦР исследование [20] применяли для оценки экспрессии HYR1 in vivo. Экспрессия HYR1 была определена во всех пяти органах (Фиг.3Б).
Сверхэкспрессия HYR1 увеличивала, а супрессия HYR1 снижала грибковую нагрузку в печени и селезенке (Фиг.4А). Кроме того, авторы изобретения подтвердили, что сверхэкспрессирующий штамм имеет значительно выше уровень HYR1, чем штамм дикого типа в печени; супрессированный штамм показывал тенденцию к снижению уровня (Фиг.4Б). В отличии от этого, экспрессия HYR1 не значительно изменяет грибковую нагрузку в почках (данные не показаны), орган без постоянных фагоцитов.
rHyr1p-N в качестве возможной вакцины
На основе анализа последовательности, Hyr1p является, предположительно, клеточно-поверхностным белком [7]. Для подтверждения этого, авторы изобретения получили рекомбинантный N- концевой Hyr1p в E.coli, трансформированных с экспрессирующим клоном, который включает 25-350 аминокислот, кодирующих последовательность (rHyr1p-N). Сыворотка от мышей, иммунизированных rHyr1p-N, была предварительно абсорбирована против hyr1 нулевого мутанта С. albicans [7], с последующим непрямым иммуно-окрашиванием гиф дикого типа. Авторы обнаружили, что клеточная оболочка гиф дикого типа С. albicans была сильно окрашена (Фиг.5), подтверждая, что их клеточная поверхность экспрессирует и, следовательно, подвергает воздействию иммунную систему.
Поскольку Hyr1p является клеточно-поверхностным белком, который придает резистентность к фагоцитарному киллингу киндидоза, авторы изобретения стремились определить его способность в качестве возможной вакцины. Мышей вакцинировали rHyr1p с добавлением адъюванта или только адъювантом. Две недели спустя после повторной иммунизации, мышей инфицировали через хвостовую вену высоко вирулентным SC5314 С. albicans. Вакцинация rHyr1p-N заметно улучшает выживаемость мышей по сравнению с вакцинированными только адъювантом (62.5 и 0% выживаемости за 35 дней, соответственно) (Фиг.6А).
Вакцинация rHyr1p-N, смешанного с полным или неполным адъювантом Фрейда или алюминием, заметно улучшает выживаемость мышей по сравнению с вакцинированными одним любым адъювантом (Фигура 6А и 6Б).
Сыворотка анти-rHyr1p усиливает нейтрофильный киллинг у мышей, непосредственно ингибируя функцию Hyr1p резистентности нейтрофилов.
Защитный эффект вакцины rHyr1p-N показывает, что сыворотка анти-rHyr1p возможно может нейтролизовать защитную функцию Hyr1p в С. albicans. Для определения могут ли антитела анти-rHyr1p непосредственно ингибировать функцию Hyr1p, авторы изобретения выделили и приготовили фрагменты F(ab)'2 из общих IgG мыши, иммунизированной rHyr1p-N или контролем (приготавливается производством из клеток E.coli, транформированных с пустой плазмидой). Авторы обнаружили, что F(ab)'2 из иммунной, но не контрольной, сыворотки способны к восстановлению нейтрофильного киллинга штамма с условной сверхэкспрессией HYR1 до уровня, приравненному к супрессированному штамму (Фигура 6В).
Заключение
В данном исследовании авторы изобретения показали, что HYR1 ко-экспрессирующий ген гиф [7, 21], кодирующий кандидозный фагоцитарный резистентный фактор. Условная экспрессия HYR1 в бластоспорах Candida является причиной грибов, более резистентных к фагоцитарному киллингу, по сравнению с бластоспорами дикого типа С. albicans. Кроме того, функция HYR1 в С. albicans повторяется в гетерологичной экспрессии гена С. glabrata in vitro. Авторы также обнаружили, что штамм, лишенный Bcr1p, транскрипционный фактор которого позитивно регулирует экспрессию HYR1 [17], проявляет усиление восприимчивости к фагоцит-опосредованному киллингу. Гипер- восприимчивость к фагоцитарному киллингу bcr1 пулевого мутанта была полностью дополнена автономной экспрессией HYR1, но не другими генами, которые кодируют GPI-белки, позитивно регулирующиеся Bcr1. Следовательно, HYR1 является геном, регулирующим последующие звенья сигнальных каскадов BCR1 в резистентном пути к фагоцитарному киллингу.
Любопытно, что HL-60 производные нейтрофилов в состоянии ингибировать экспрессию HYR1 в диком типе С. albicans в течение первоначального контакта между фагоцитами и Candida. Таким образом, динамическое взаимодействие происходит между фагоцитами хозяина и С. albicans, с помощью которого фагоциты являются посредниками задержки в экспрессии фагоцит-резистентного гена в грибах дикого типа. Это соответствует предыдущим обнаружениям того, что нейтрофилы человека задерживают формирование гифа С. albicans и экспрессию ко-экспрессирующих генов гифа[18].
Резистентность к фагоцитарному киллингу является совокупностью фенотипа, вероятно связанного с множественными факторами. Фагоциты могут убивать Candida внеклеточно или внутриклеточно. В последнее время, супероксиддисмутазу поверхности клеток С. albicans характеризуют как вирулентный фактор, который помогает грибам избежать киллинга, путем снижения высоко реактивных форм кислорода, полученных от хозяина [22]. Нейтрофилы обычно прикрепляются и распространяются по поверхности гифовых форм грибов, с учетом расширения, гифы слишком большие для полного захвата фагоцитами. Так как, С. albicans экспрессирует HYR1 в форме гифа, не исключено, что Hyr1p участвует в резистентности к фагоцитарному киллингу, предотвращая поверхностный контакт с фагоцитом. В ином случае, Hyr1p может препятствовать окислительному или неокислительному механизму фагоцитарного киллинга.
Фенотип сверхэкспрессии HYR1 in vitro был повторен in vivo. В процессе мышиной диссеминированной инфекции, сверхэкспрессия HYR1 приводила к значительному увеличению, а супрессия HYR1 приводила к значительному уменьшению тканевой грибковой нагрузки по сравнению с штаммом дикого типа в органах при наличии фагоцитов. Отсутствие фенотипа в почках вероятно отражает тот факт, что почки не имею в наличии фагоцитов и, что поступление нейтрофилов в почки в процессе летального диссеминированного кандидоза не начинается до >24 часов инфекции [15]. Однако, вакцинация rHyr1p-N приводит к значительной защите от гематогенного диссеминированного кандидоза. Эффективность, увиденная от вакцины rHyr1p-N, была больше, чем прежде увиденная у мышей, вакцинированных rAlsp-N и rAls3p-N вакцинами. Таким образом, rHyr1p-N является многообещающим кандидатом на вакцину для диссеминированного кандидоза.
Данные, полученные авторами, также демонстрируют преимущество применения условной сверхэкспрессии/супрессии, подводящей к изучению потенциальных вирулентных функций данного гена. Крупномасштабные генетические подходы к изучению вирулентности генов in vitro нуждаются в функциональном скрининговом исследовании и ограничиваются скринингом для генов, а именно экспрессирующих во время проведения исследования. Когда ген не экспрессирует значительно в штамме дикого типа при условиях использования для скринингового исследования in vitro, принудительная сверхэкспрессия гена по-прежнему предусматривает определение феномена получение - функция в исследовании, как и в случае HYR1 в процессе роста бластоспор Candida. Когда ген сильно экспрессирует, условная супрессия приводит к потери функции фенотипа в том же исследовании. Кроме того, когда сверхэкспрессия и супрессия используются одновременно, фенотип может быть усилен, как в случае с воздействия HYR1 на грибковую нагрузку печени и селезенки in vivo. Способность обнаруживать фенотип путем сравнения сверхэкспрессии и супрессии гена, позволяет условной экспрессии гена ослабить ограниченную функциональную избыточность, которая особенно досаждает передовым генетическим методикам, когда исследуются члены генетического семейства.
В заключение, авторы применяли методику условной экспрессии гена для идентификации Hyr1p как экспрессируемого поверхностью вирулентного фактора для С. albicans. Экспрессия HYR1 опосредует нейтрофильный киллинг in vitro и увеличивает тканевую грибковую нагрузку in vivo. В конечном итоге, авторы показали, что HYR1 является многообещающей мишенью вакцины, которая заслужила дальнейшей разработки, как профилактическая стратегия для диссеминированного кандидоза.
Материалы и методы
Описываемые выше результаты получают, используя следующие материалы и методы.
Штаммы и условия культивирования
Все использованные штаммы перечислены в Таблице 1, и выращивались, как описано ранее [8].
Условная сверхэкспрессия/супрессия HYR1 конструкции мутанта
Для образования условной экспрессии HYR1 штаммом, промотерную кассету HIS1-TR [8] встраивали перед одной аллелью гена HYR1 штамма ТНЕ4, получая в результате штамм СААН. URA3 локуса HIS1 в штамме СААН выпетливали с образованием СААН-1. Вторая аллель HYR1 в СААН-1 была разрушена повторным использованием кассеты URA3, образовывая штамм СААН-2, за которым следует повторение URA3, получая в результате штамм СААН-3. Фрагмент Nhe I-Pst 3.9 кб, содержащий ген URA3-IRO1, был встроен в исходный локус на геноме СААН-3, получая в результате СААН-31. Используемые праймеры описаны в Таблице 1.
Полуколичественный RT-ПЦР
Полуколичественный RT-ПЦР определяет экспрессию генов in vitro, как описано ранее. Праймеры, используемые для детекции экспрессии EFB1 EFBIa и EFBIb; праймеры, использованные для амплификации HYR1 HYR1 specific 1 и HYR1 specific 2 (Таблица 1). Для исследования воздействия нейтрофилов на экспрессию HYR1 С. albicans, 1×106 клеток SC5314 всю ночь выращивали в YPD либо совместно культивируя с 1×107 HL-60 производными нейтрофилов или, культивируя только в RPMI 1640 с добавлением 10% объединенной сывороткой человека. Образцы были взяты с 30 минутными интервалами в течение 3 часов пока извлекали РНК и производили полуколичественный RT-ПЦР.
Исследование фагоцитарного киллинга
Нейтрофилы человека были выделены, HL-60 клетки дифференцировались на нейтрофилы и макрофаги и исследование фагоцитарного киллинга производили, как описывалось ранее [8-Ю]. Вкратце, фагоциты инкубировали с грибами в течение 1 часа и затем обрабатывали ультразвуком и количественно культивировали. Процент киллинга рассчитывали путем деления количества колоний грибов после совместной инкубации с фагоцитами на количество колоний грибов, инкубированных в среде без фагоцитов. Нейтрофилы человека и HL-60 производные нейтрофилов или макрофагов исследовали в 2:1 и 20:1 соотношении фагоциты:грибы, соответственно. Для bcr1 и других мутантов, бластоспоры предварительно проращивали в течение 40 минут в RPMI 1640 с добавлением 10% FBS при 37°С перед проведением исследования.
Гетерологичная экспрессия HYR1 в BG14 С glabrata
BG14 С. glabrata была. трансформирована с любым из pGRB2.2-HYR1 экспрессионным вектором HYR1 или pGRB2.2 пустой контрольной плазмидой [11]. Кодирующая последовательность HYR1 была усилена CG-Hyr1-a и CG-Hyr1-b (Таблица 1) и клонирована в Xba I, Xho I сайты pGRB2.2 с использованием In-Fusion™ 2.0 Dry-Down PCR Cloning Kit, согласно инструкции изготовителя (Clontech Laboratories, Mountain View, CA).
Экспрессия HYR1 С. albicans в процессе гематогенной инфекции
Экспрессия HYR1 диким типом SC5314 С. albicans была исследована в процессе гематогенного диссеминированного кандидоза, как описывалось. Мозги, печень, легкие, почки и селезенка мышей BALB/C были собраны 6 и 24 часа после заражения. Использовали праймеры, перечисленные в Таблице 1. Обратная транскрипция осуществлялась с RETROscript (Ambion, Texas). Для амплификации конститутивного гена G3PDH мыши, были использованы праймеры G3PDHF и G3PDHR. Для определения HYR1 и EFB1 С. albicans, проводили два раунда ПЦР. В первом раунде использовали пару внешних праймеров (EFB1F и EFB1R для EFB1, или Р2 и Р5 для HYR1)', во втором раунде использовали определенное количество (1 мкл) продукта первого раунда ПЦР в качестве матрицы. Внутренние пары праймеров были следующие: EFB1nF и EFB1nR (для EFB1), или Р2 и Р4 (для HYR1). Все условия ПЦР были следующие: денатурация при 95°С, 2 минуты и амплификация в течение 35 циклов при 94°С, 30 с (денатурирование), 55°С, 30 с (отжиг), и 72°С, 90 с (элонгация). Для qRT-ПЦР кДНК была приготовлена, как указано выше. Оптимизация эффективности амплификации и SYBR green исследование реал-тайм RT-ПЦР проводили, как описано [12]. Конструктивно экспрессирующийся АСТ1 был использован в качестве контроля для всех реакций. Расчеты и статистические исследования проводили, как описано в ABI PRISM 7000 Sequence Detection System User Bulletin 2 (Applied Biosystems, USA).
Тканевая грибковая нагрузка
Мышам давали воду с содержанием или без DOX (2 мг/мл), разведенную с 5% раствором сахарозы, на протяжении периода исследования, исходя из: день - 3 относительно инфекции [13], и давали еду и воду без ограничения. Тканевая грибковая нагрузка производилась, как описывалось ранее [8], за исключением органов, удаленных после 1 дня заражения. Все процедуры, проводимые с мышами, были одобрены институтом использования животных и охранным комитетом, соблюдая NIH принципы.
Производство rHyr1p-N
rHyr1p-N (от 25-350 аминокислот Hyr1p) был произведен в экспрессионной системе pQE-32 Escherichia coli (Qiagen), a 6XHis меченный белок очищали, как описано в работе [14], за исключением использования HisPur Cobalt смолы (Thermo Scientific) хроматографической колонки. Эндотоксин удаляли из rHyr1p-N путем использования Detoxi-Gel Endotoxm Removing Columns (Thermo Scientific), и уровень эндотоксина определяли с Limulus Amebocyte Lysate endochrome (Charles River), согласно инструкции производителя. Используя эту процедуру, эндотоксин снижают до <0.28 EU на дозу, используемую для вакцинации.
Иммунофлюоресцентное определение клеточной локализации Hyr1p
Непрямая иммунофлюоресценция производится с применением поликлональной анти-Hyr1p антисывороки, полученной от иммунизированных rHyr1p-N мышей (от 25-350 аминокислот). Инокулят 1×107 бластоспор hyr1 нулевого штамма инкубировали в RPMI 1640 в течение 90 минут при 37°С и осаждали дважды для абсорбирования сыворотки.
Бластоспоры С. albicans (1×105) были предварительно пророщены в RPMI в течение 90 минут при 37°С и перенесены на 4-луночное предметное стекло (Nalge Nunc International Corp, IL, USA). После инкубации при 4 С в течение 30 минут, клетки блокировали 300 мкл 1,5% козьей сыворотки, окрашивали с поликлональной сывороткой в 1:100 разведении или PBS в качестве отрицательного контроля, и затем флуоресцинизотиоцианатом метили козьи анти-мышиные IgG 1:200. Клетки отображались с помощью конфокальной сканирующей лазерной микроскопии [15].
Протокол иммунизации
Все вакцинировались подкожно, в основании шеи. Восемь молодых особей (10-12 недель) C57BL/6 мышей вакцинировали с 20 мкг аффинно очищенных rHyr1p-N с полным адъювантом Фрейда и повторяли иммунизацию неполным адъювантом Фрейда (IFA) через 3 недели. Дополнительно восемь молодых особей мышей принимали только адъювант, смешанный с продуктом, полученным от трансформированных клеток Е. coli с пустой плазмидой. Четырнадцать дней после повторной иммунизации, мышей инфицировали через хвостовую вену с 5×105 клеток дикого типа SC5314 С. albicans [16].
Эффективность rHyr1p-N в защите против гематогенного диссеминированного кандидоза была также установлена с использованием алюминия (2% гидрата алюминия; Brenntag Biosector), адъюванта, утвержденного Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств (FDA) для использования в организме человека. Также, для определения того, что rHyr1p-N защищает против других штаммов С. albicans, авторы применяли другой клинический штамм 15563. Для этих экспериментов, 33 мкг аффинно очищенные rHyr1p-N смешивали с 0.1% гидрата алюминия и вводили в BALB/c мышам как указано выше в день 0, после повторно иммунизировали на день 21, и затем инфицировали на день 35 с С. albicans путем инъекции в хвостовую вену. Для всех экспериментальных вакцинаций выживаемость мышей в течение 35 дней после инфицирования была использована в качестве конечной точки.
Исследование F(ab)'2 блокирования. Объединенные анти-Hyr1p или контрольная сыворотка были собраны от 5 мышей, которые вакцинировались либо rHyr1p-N или продуктом, полученным от трансформированных клеток Е. coli с пустой плазмидой. Все IgG из обоих сывороток выделяли с использованием Nab Spin Kit (Thermo Scientific). Фрагменты F(ab)'2 очищали с Pierce F(ab)'2 Preparation Kit, согласно инструкции производителя. Клетки Candida опсонизировали на льду в течение 45 минут с 5% нормальной мышиной сывороткой (Santa Cruz Biotechnology) или 5% нормальной мышиной сывороткой с добавлением 5% F(ab)'2, полученных от любой вакцинированной rHyr1p-N или контрольной IgG мыши, предварительно смешанных с нейтрофилами мыши. Исследование мышиного нейтрофильного киллинга было описано выше.
Статистический анализ
Фагоцит-опосредованный киллинг и тканевую грибковую нагрузку между различными группами сравнивали с помощью критерия U Манна-Уитни для непарного сравнения, по необходимости. Непараметрический логарифмический ранговый критерий использовался для определения различий во времени выживаемости. Значение Р<0.05 считается важным.
Таблица 1 | ||
Штаммы и олигонуклеотиды, используемые в этом исследовании | ||
Штаммы | ||
Candida albicans Штаммы | Генотип | Источник |
TНЕ31 | ade2::hisG/ade2::hisG | [8] |
HIS1/his1::dpl200 |
ura3-iro1::imm434/ura3-irol::imm434::URA3-IRO1 | ||
ENO1/ENO1-tetR-ScHAP4AD-3XHA-ADE2 | ||
СААН | ade2::hisG/ade2::hisG | [8] |
his1::URA3-dpl200/his1::dpl200 | ||
ura3-irol::imm434/ura3-irol::imm434 | ||
ENO1/ENO1-tetR-ScHAP4AD-3XHA-ADE2 | ||
HYR1/HIS1-pTR-HYR1 | ||
СААН-1 | ade2::hisG/ade2::hisG | Это |
his1::dpl200/his1::dpl200 | исследование | |
ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | ||
ENO1/ENO1-tetR-ScHAP4AD-3XHA-ADE2 | ||
HYR1/HIS1-pTR-HYR1 | ||
СААН-2 | ade2::hisG/ade2::hisG | Это |
his1::dpl200/his1::dpl200 | исследование | |
ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | ||
ENO1/ENO1-tetR-ScHAP4AD-3XHA-ADE2 | ||
hyr1::URA3-dpl200/HIS1-pTR-HYR1 | ||
СААН-3 | ade2::hisG/ade2::hisG | Это |
his1::dpl200/his1::dpl200 | исследование | |
ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | ||
ENO1/ENO1-tetR-ScHAP4AD-3XHA-ADE2 | ||
hyr1::dpl200/HIS1-pTR-HYR1 | ||
СААН-31 | ade2::hisG/ade2::hisG | Это |
his1::dpl200/his1::dpl200 | исследование | |
ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434::URA3-IRO1 | ||
ENO1/ENO1-tetR-ScHAP4AD-3XHA-ADE2 | ||
hyr1::dpl200/HIS1-pTR-HYR1 | ||
DAY185 | ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1/his1::hisG | ||
arg4::hisG::ARG4-URA3/arg4::hisG | ||
CJN702 | ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1/his1::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG | ||
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 | ||
CJN698 | ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHISl-Bcr1/hisl::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG | ||
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 | ||
CJN1144 | ura3-irol::imm434/ura3-irol::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1-PTEF1-ALSl-tTEF1/his1::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG | ||
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 | ||
CJN1153 | ura3-irol::imm434/ura3-irol::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1-PTEF1-ALS3-tTEF1/his1::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG | ||
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 | ||
CJN1222 | ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1-PTEF1-HWP1-tTEF1/his1::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG |
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 | ||
CJN1259 | ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1-PTEF1-HYR1-tTEF1/his1::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG | ||
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 | ||
CJN1276 | ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1-PTEF1-RBT51-tTEF1/his1::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG | ||
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 | ||
CJN1281 | ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1-PTEF1-CHT2-tTEF1/his1::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG | ||
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 | ||
CJN1288 | ura3-iro1::imm434/ura3-iro1::imm434 | [17] |
his1::hisG::pHIS1-PTEF1-ECE1-tTEF1/his1::hisG | ||
arg4::hisG/arg4::hisG | ||
bcr1::ARG4/bcr1::URA3 |
Candida glabrata штамм BG14 | ura3Δ(-85+932)::Tn903NeoR | [17] |
Олигонуклеотиды
Олигонуклеотиды, используемые для изготовления и подтверждения условной сверхэкспрессии/супрессии HYRl штаммом | |
Р1 | 5'-ACTTGGCACCAGGAACAAC |
Р2 | 5'-ACAGCTTTATCTCAGAAAAACTAGTAATAACAACATGAAAGTGGTATCA |
Р3 | 5'-CGACAAACACAACGGCACATTCTGGTTTCAACAAACTGGAATACTTTG |
Р4 | 5'-AGCAGTAACACAACCAGTACCT |
РН1 | 5'-GTCGTCGCTGTGTTTGTC |
РН2 | 5'-CGTTGGAGAAGGTAATTGTGA |
Р5 | 5'-CAGCATGAACAATCAAAGACGA |
Р6 | 5'-CAAAGTATTCCAGTTTGTTGAAACC |
Олигонуклеотиды, используемые для определения экспрессии in vitro | |
HYR1 specific 1 | 5'-CGTCAACCTGACTGTTACATC |
HYR1 specific2 | 5'-TCTACGGTGGTATGTGGAAC |
EFB1a | 5'-ATTGAACGAATTCTTGGCTGAC |
EFB1b | 5'-CATCTTCTTCAACAGCAGCTTG |
Олигонуклеотиды, используемые для экспрессии in vivo | |
EFB1F | 5'-CACAAACCAATACATAATG |
EFB1R | 5'-GTAGACAGTGACATCAGC |
EFB1nF | 5'-TCAGATTTCTCTAAAGTCG |
EFB1nR | 5'-TGACATCAGCTTGAGTGG |
G3PDHF | 5'-GTCTTCACCACCATGGAGAAGG |
G3PDHR | 5'-TCGCTGTTGAAGTCAGAGGAGA |
Олигонуклеотиды, используемые для подтверждения URA3-IRO1 в своем первоначальном локусе | |
URA3 Conf1 | 5'-TGCTGGTTGGAATGCTTATTTG |
URA3 Conf2 | 5'-TGCAAATTCTGCTACTGGAGTT |
Олигонуклеотиды, используемые для экспрессионной конструкции HYR1 в С. glabrata | |
CG-Hyr1-a | 5'-ATATAAAACATCTAGATGAAAGTGGTATCAAACTTTATATTC |
CG-Hyr1-b | S'-GGGTTGTGTTCTCGATCACATGAATAAAACAACCATG |
ПРИМЕР II
rHyr1p-N является вакциной против диссеминированного кандидоза
Уровень техники: Авторы изобретения обнаружили, что сверхэкспрессия HYR1 Candida albicans опосредует резистентность к нейтрофильному киллингу in vitro. Авторы изобретения стремились определить воздействие сверхэкспрессии HYR1 на тканевую грибковую нагрузку in vivo в процессе инфекции и установить возможность вакцинации rHyr1p-N для защиты против диссеминированного кандидоза у мышей.
Методы: Мышей инфицировали через хвостовую вену сверхэкспрессирущим/супрессированным HYR1 или диким типом С. albicans. Печень и селезенку собирали 1 день после инфицирования, уровень экспрессии HYR1 и тканевую грибковую нагрузку определяли путем qRT-ПЦР и количественным культивированием, соответственно. Для вакцинации, rHyr1p-N получали в экспрессионной системе Е. coli pQE-32 и очищали, согласно инструкции производителя (Qiagen). Мышей вакцинировали с 20 мкг rHyr1p-N в полном адъюванте Фрейда (CFA), повторно иммунизировали с неполным адъювантом Фрейда (IFA) через 3 недели и инфицировали с штаммом SC5314 С.albcians через две недели после повторной иммунизации. Контрольные мыши получали адъювант с добавлением клеток, полученных из трансформированных Е. Coli с пустой плазмидой. Результаты: Сверхэкспрессия HYR1 значительно увеличивает грибковую нагрузку и в печени, и в селезенке по сравнению с контрольным штаммом. Супрессия HYR1 значительно снижает грибковую нагрузку и в печени, и в селезенке по сравнению с контрольным штаммом. Относительный уровень экспрессии HYR1 был 2.8 и 0.8 в печени, инфицированной с сверхэкспрессирующим и супрессированным штаммом по сравнению с контролем, соответственно. Вакцина rHyr1p-N приводит к 62.5% длительному выживанию инфицированных мышей, и, наоборот, 0% выживаемости у контрольных мышей.
Заключение: Экспрессия HYR1 влияет на способность С. albicans инфицировать ткани in vivo. Кроме того, вакцинация rHyr1p-N заметно защищает мышей от диссеминированного кандидоза. Вакцина rHyr1p-N полезна для предупреждения диссеминированного кандидоза.
Ссылки
1. Spellberg BJ, Filler SG, and Edwards JE, Jr. Current treatment strategies for disseminated candidiasis. Clin Infect Dis. 2006; 42:244-251.
2. Del Poeta M. Role of Phagocytosis in the Virulence of Cryptococcus neoformans. Eukaryot Cell 2004; 3:1067-1075.
3. Koh AY, Kohler JR, Coggshall KT, Van Rooijen N and Pier GB. Mucosal damage and neutropenia are required for Candida albicans dissemination. PLoS Pathog. 2008; 4:DOI:10.1371/joumal.ppat.0040035.
4. Gulay Z, Imir T. Anti-candidial activity of natural killer (NK) and lymphokine activated killer (LAK) lymphocytes in vitro. Immunobiology 1996; 195:220-230.
5. Stone HH. Studies in the pathogenesis, diagnosis, and treatment of Candida sepsis in children. J Pediatr Surg. 1974; 9:127-133.
6. Richard M, Ibata-Ombetta S, Dromer F, Bordon-Pallier F, Jouault T and Gaillardin C. Complete glycosylphosphatidylinositol anchors are required in Candida albicans for full morphogenesis, virulence and resistance to macrophages. Mol. Microbiol. 2002; 44.
7. Bailey DA, Feldmann PJ, Bovey M, Gow NA and Brown AJ. The Candida albicans HYR1 gene, which is activated in response to hyphal development, belongs to a gene family encoding yeast cell wall proteins. J Bacteriol. 1996; 178:5353-5360.
8. Fu Y, Luo G., Spellberg BJ, Edwards JE, Jr, and Ibrahim AS. Gene overexpression/suppression analysis of candidate virulence factors of Candida albicans. Eukaryot Cell. 2008;7:483-492.
9. Nusing R, Goerig M, Habenicht AJ and Ullrich V. Selective eicosanoid formation during HL-60 macrophage differentiation. Regulation of thromboxane synthase. Eur J Biochem 1993; 212:371-376.
10. Spellberg BJ, Collins M, French SW, Edwards JE, Jr., Fu Y and Ibrahim AS. A phagocytic cell line markedly improves survival of infected neutropenic mice. J Leukoc Biol 2005; 78:338-344.
11. Eiden-Plach A, Zagorc T, Heintel T, Carius Y, Breinig F. Viral preprotoxin signal sequence allows efficient secretion of green fluorescent protein by Candida glabrata, Pichia pastoris, Saccharomyces cerevsiae, and Schizosaccharomyces pombe. Appl. Environ. Microbiol 2004; 70:961-966.
12. Avrova АО, Venter E, Birch PR and Whisson SC. Profiling and quantifying differential gene transcription in Phytophthora infestans prior to and during the early stages of potato infection. Fungal Genetics & Biology 2003; 40:4-14.
13. Saville SP, Lazzell AL, Monteagudo С and Lopez-Ribot JL. Engineered control of cell morphology in vivo reveals distinct roles for yeast and filamentous forms of Candida albicans during infection. Eukaryot Cell 2003; 2:1053-1060.
14. Spellberg В, Ibrahim AS, Yeaman MR, et al. The antifungal vaccine derived from the recombinant N terminus of Als3p protects mice against the bacterium Staphylococcus aureus. Infect Immun. 2008; 76:4574-4580.
15. Fu Y, Ibrahim AS, Sheppard DC, Chen YC, French SW and Cutler JEea. Candida albicans Alsip: an adhesin that is a downstream effector of the EFG1 filamentation pathway. Mol Microbiol 2002; 44:61-72.
16. Ibrahim AS, Spellberg BJ, Avenissian V, Fu Y, Filler SG and Edwards JEJ. Vaccination with rAls1p-N improves survival during murine disseminated candidiasis by enhancing cell-mediated, not humoral, immunity. Infect Immun 2005; 73:999-1005.
17. Nobile CJ, Andes DR, Nett JE, et al. Critical role of Bcr1-dependent adhesins in С albicans biofilm formation in vitro and in vivo. PLoS Pathog. 2006; 2:e63.
18. Fradin C, De Groot P, MacCallum D, et al. Granulocytes govern the transcriptional response, morphology and proliferation of Candida abicans in human blood. Molecular Microbiology 2005; 56:397-415.
19. Castano I, Pan SJ, Zupancic M, Hennequin C, Dujon В and Cormack BP. Telomere length control and transcriptional regulation of subtelomeric adhesins in Candida glabrata. Mol Microbiol 2005; 55:1246-1258.
20. Schofield DA, Westwater C, Wamer T, Nicholas PJ, Paulling ЕЕ and Balish E. Hydrolytic gene expression during oroesophageal and gastric candidiasis in immunocompetent and immunodeficient gnotobiotic mice. J Infect Dis 2003; 188:591-599.
21. Kumamoto CA, Vinces MD. Contributions of hyphae and hypha-co-regulated genes to Candida albicans virulence. Cell Microbiol. 2005; 7:1546-1554.
22. Frohner IE, Bourgeois C, Yatsyk K, Majer O and Kuchler K. Candida albicans cell surface superoxide dismutases degrade host-derived reactive oxygen species to escape innate immune surveillance. Mol Microbiol 2009; 71:240-252.
Claims (11)
1. Вакцина для лечения или предупреждения кандидозной инфекции, содержащая выделенный полипептид в эффективном количестве, необязательно слитый с партнером слияния, и необязательно содержащая адъювант, отличающаяся тем, что аминокислотная последовательность указанного полипептида состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
2. Вакцина по п. 1, дополнительно содержащая адъювант.
3. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что указанный полипептид слит с указанным партнером слияния.
4. Вакцина по п. 3, отличающаяся тем, что указанный партнер слияния содержит гетерологичную лидерную последовательность.
5. Вакцина по п. 3, отличающаяся тем, что указанный партнер слияния содержит метку или линкерную последовательность.
6. Вакцина по п. 5, отличающаяся тем, что указанная метка представляет собой гистидиновую метку.
7. Вакцина по п. 4 или 5, отличающаяся тем, что указанный полипептид получают из трансформированной клетки.
8. Вакцина по п. 7, отличающаяся тем, что указанная трансформированная клетка представляет собой трансформированную клетку Saccharomyces cerevisae.
9. Вакцина по п. 4 или 5, отличающаяся тем, что является вакциной для иммунизации против Candida albicans, и тем, что указанный полипептид очищен.
10. Способ лечения или предупреждения кандидозной инфекции у млекопитающих, включающий введение иммуногенного количества вакцины по п. 9.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что указанная вакцина дополнительно содержит адъювант.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US22300509P | 2009-07-03 | 2009-07-03 | |
US61/223,005 | 2009-07-03 | ||
PCT/US2010/040949 WO2011003085A1 (en) | 2009-07-03 | 2010-07-02 | Hyr1 as a target for active and passive immunization against candida |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015122387/10A Division RU2015122387A (ru) | 2009-07-03 | 2010-07-02 | Hyr1 в качестве мишени для активной и пассивной иммунизации против candida |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012103502A RU2012103502A (ru) | 2013-08-10 |
RU2559537C2 true RU2559537C2 (ru) | 2015-08-10 |
Family
ID=43411487
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015122387/10A RU2015122387A (ru) | 2009-07-03 | 2010-07-02 | Hyr1 в качестве мишени для активной и пассивной иммунизации против candida |
RU2012103502/10A RU2559537C2 (ru) | 2009-07-03 | 2010-07-02 | Hyr1 в качестве мишени для активной и пассивной иммунизации против candida |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015122387/10A RU2015122387A (ru) | 2009-07-03 | 2010-07-02 | Hyr1 в качестве мишени для активной и пассивной иммунизации против candida |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8709446B2 (ru) |
EP (1) | EP2448959B1 (ru) |
JP (2) | JP5690822B2 (ru) |
KR (1) | KR20120085234A (ru) |
CN (1) | CN102574895B (ru) |
AU (2) | AU2010266114B2 (ru) |
BR (1) | BR112012000036A2 (ru) |
CA (1) | CA2766805A1 (ru) |
ES (1) | ES2606555T3 (ru) |
IL (1) | IL217261A0 (ru) |
MX (1) | MX2012000018A (ru) |
NZ (1) | NZ597442A (ru) |
RU (2) | RU2015122387A (ru) |
SG (1) | SG177456A1 (ru) |
WO (1) | WO2011003085A1 (ru) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070077256A1 (en) | 1999-11-19 | 2007-04-05 | Los Angeles Biomedical Research Institute | Pharmaceutical compositions and methods to vaccinate against disseminated candidiasis and other infectious agents |
CN102574895B (zh) | 2009-07-03 | 2014-06-11 | 加州大学洛杉矶海滨分校医学中心的洛杉矶生物医学研究所 | 作为针对念珠菌的主动和被动免疫接种的靶标的hyr1 |
CN103998056B (zh) | 2011-07-22 | 2017-09-12 | 诺瓦蒂格姆疗法有限公司 | 用于接种抗金黄色葡萄球菌疫苗的方法和组合物 |
GEP20197052B (en) * | 2011-09-14 | 2019-12-25 | Angeles Biomedical Research Center Los | Hyr1-derived compositions and methods of treatment using same |
AU2014227748B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-02-14 | Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center | Compositions and methods for treating fungal and bacterial pathogens |
WO2014144024A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center | Hyr1 compositions and methods for treating fungal and bacterial pathogens |
GB201306588D0 (en) | 2013-04-11 | 2013-05-29 | King S College London | Peptides and Binding Partners Therefor |
EP3426287A4 (en) | 2016-03-09 | 2020-03-11 | Los Angeles Biomedical Research Institute at Harbor-UCLA Medical Center | METHODS AND KITS FOR USE IN THE PREVENTION AND TREATMENT OF VULVO-VAGINAL CANDIDOSIS |
WO2020174366A1 (en) | 2019-02-28 | 2020-09-03 | Universidade Do Minho | Antisense oligomers for controlling candida albicans infections |
CN110229221B (zh) * | 2019-06-27 | 2022-04-12 | 上海交通大学医学院附属仁济医院 | 一种用于检测侵袭性白色念珠菌病的抗原及其用途 |
US20220354935A1 (en) * | 2021-04-21 | 2022-11-10 | Lundquist Institute For Biomedical Innovation At Harbor-Ucla Medical Center | Vaccination against fungal epitopes to prevent inflammatory bowel diseases |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2291694C2 (ru) * | 2001-11-08 | 2007-01-20 | ТЕВА Фармасьютикал Воркс ПЛС | Фармацевтическая композиция, содержащая фунгицид, бактериостатический сульфонамид и антибактериальное соединение для местного применения |
US7241613B1 (en) * | 2002-06-05 | 2007-07-10 | Oscient Pharmaceuticals Corporation | Identification of Candida cell surface proteins and their uses |
RU2316595C1 (ru) * | 2006-06-16 | 2008-02-10 | Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук | Способ получения антимикробного пептида ареницина |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2657495A (en) | 1994-05-23 | 1995-12-18 | Research And Development Institute, Inc. | Candida albicans adhesin as a vaccine |
US6747137B1 (en) * | 1998-02-13 | 2004-06-08 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid sequences relating to Candida albicans for diagnostics and therapeutics |
US20070077256A1 (en) * | 1999-11-19 | 2007-04-05 | Los Angeles Biomedical Research Institute | Pharmaceutical compositions and methods to vaccinate against disseminated candidiasis and other infectious agents |
US20060083750A1 (en) * | 1999-11-19 | 2006-04-20 | Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center | Pharmaceutical compositions and methods to vaccinate against disseminated candidiasis |
CA2325774C (en) * | 1999-12-10 | 2011-02-08 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food | Coniothyrium minitans .beta.-(1,3) exoglucanase gene cbeg1 |
CN102574895B (zh) | 2009-07-03 | 2014-06-11 | 加州大学洛杉矶海滨分校医学中心的洛杉矶生物医学研究所 | 作为针对念珠菌的主动和被动免疫接种的靶标的hyr1 |
-
2010
- 2010-07-02 CN CN201080039446.5A patent/CN102574895B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-07-02 SG SG2011097680A patent/SG177456A1/en unknown
- 2010-07-02 AU AU2010266114A patent/AU2010266114B2/en not_active Ceased
- 2010-07-02 CA CA2766805A patent/CA2766805A1/en not_active Abandoned
- 2010-07-02 BR BR112012000036A patent/BR112012000036A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2010-07-02 RU RU2015122387/10A patent/RU2015122387A/ru not_active Application Discontinuation
- 2010-07-02 EP EP10794828.3A patent/EP2448959B1/en active Active
- 2010-07-02 US US13/382,088 patent/US8709446B2/en active Active
- 2010-07-02 KR KR1020127002540A patent/KR20120085234A/ko not_active Application Discontinuation
- 2010-07-02 NZ NZ597442A patent/NZ597442A/en not_active IP Right Cessation
- 2010-07-02 WO PCT/US2010/040949 patent/WO2011003085A1/en active Application Filing
- 2010-07-02 ES ES10794828.3T patent/ES2606555T3/es active Active
- 2010-07-02 MX MX2012000018A patent/MX2012000018A/es not_active Application Discontinuation
- 2010-07-02 JP JP2012517920A patent/JP5690822B2/ja active Active
- 2010-07-02 RU RU2012103502/10A patent/RU2559537C2/ru active IP Right Revival
-
2011
- 2011-12-28 IL IL217261A patent/IL217261A0/en unknown
-
2014
- 2014-04-17 US US14/255,072 patent/US20140335114A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-02-02 JP JP2015018131A patent/JP2015120722A/ja active Pending
-
2016
- 2016-10-12 AU AU2016244238A patent/AU2016244238A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2291694C2 (ru) * | 2001-11-08 | 2007-01-20 | ТЕВА Фармасьютикал Воркс ПЛС | Фармацевтическая композиция, содержащая фунгицид, бактериостатический сульфонамид и антибактериальное соединение для местного применения |
US7241613B1 (en) * | 2002-06-05 | 2007-07-10 | Oscient Pharmaceuticals Corporation | Identification of Candida cell surface proteins and their uses |
RU2316595C1 (ru) * | 2006-06-16 | 2008-02-10 | Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук | Способ получения антимикробного пептида ареницина |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
BATES et al., Candida albicans lff11, a secreted protein required for cell wall structure and virulence. Infection & Immunity, 2007, v. 75, p. 29922-29928 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2448959A4 (en) | 2013-01-02 |
RU2012103502A (ru) | 2013-08-10 |
NZ597442A (en) | 2014-01-31 |
RU2015122387A (ru) | 2015-10-27 |
RU2015122387A3 (ru) | 2019-01-28 |
AU2010266114A1 (en) | 2012-02-02 |
WO2011003085A9 (en) | 2011-07-28 |
CA2766805A1 (en) | 2011-01-06 |
MX2012000018A (es) | 2012-03-29 |
KR20120085234A (ko) | 2012-07-31 |
AU2016244238A1 (en) | 2016-10-27 |
US20140335114A1 (en) | 2014-11-13 |
EP2448959B1 (en) | 2016-09-07 |
CN102574895A (zh) | 2012-07-11 |
BR112012000036A2 (pt) | 2018-04-03 |
JP2015120722A (ja) | 2015-07-02 |
ES2606555T3 (es) | 2017-03-24 |
US8709446B2 (en) | 2014-04-29 |
WO2011003085A1 (en) | 2011-01-06 |
US20120237534A1 (en) | 2012-09-20 |
JP5690822B2 (ja) | 2015-03-25 |
EP2448959A1 (en) | 2012-05-09 |
CN102574895B (zh) | 2014-06-11 |
SG177456A1 (en) | 2012-02-28 |
IL217261A0 (en) | 2012-02-29 |
AU2010266114B2 (en) | 2016-07-14 |
JP2012532114A (ja) | 2012-12-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2559537C2 (ru) | Hyr1 в качестве мишени для активной и пассивной иммунизации против candida | |
Luo et al. | Candida albicans Hyr1p confers resistance to neutrophil killing and is a potential vaccine target | |
Parente-Rocha et al. | Antifungal resistance, metabolic routes as drug targets, and new antifungal agents: an overview about endemic dimorphic fungi | |
US9333246B2 (en) | Compositions and methods to elicit immune responses against pathogenic organisms using yeast-based vaccines | |
EP2428800B1 (en) | Pharmaceutical compositions and methods to vaccinate against mucosal candidiasis | |
US20060083750A1 (en) | Pharmaceutical compositions and methods to vaccinate against disseminated candidiasis | |
KR102169664B1 (ko) | 열대열말라리아원충 유래의 EF-1α 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 말라리아 예방용 백신 조성물 | |
Wang et al. | Vaccination with recombinant non-transmembrane domain of protein Mannosyltransferase 4 improves survival during murine disseminated candidiasis | |
AU2013203750A1 (en) | Pharmaceutical compositions and methods to vaccinate against disseminated candidiasis and other infectious agents |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HE9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE Effective date: 20151118 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160703 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20180719 |