RU2558776C2 - Method of isolating erythrocyte microvesicles - Google Patents

Method of isolating erythrocyte microvesicles Download PDF

Info

Publication number
RU2558776C2
RU2558776C2 RU2013117661/15A RU2013117661A RU2558776C2 RU 2558776 C2 RU2558776 C2 RU 2558776C2 RU 2013117661/15 A RU2013117661/15 A RU 2013117661/15A RU 2013117661 A RU2013117661 A RU 2013117661A RU 2558776 C2 RU2558776 C2 RU 2558776C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
microvesicles
supernatant
erythrocyte
isolating
minutes
Prior art date
Application number
RU2013117661/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2013117661A (en
Inventor
Юрий Александрович Шереметьев
Александр Николаевич Успенский
Елена Александровна Шевченко
Сергей Петрович Ерёмин
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА)
Priority to RU2013117661/15A priority Critical patent/RU2558776C2/en
Publication of RU2013117661A publication Critical patent/RU2013117661A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2558776C2 publication Critical patent/RU2558776C2/en

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.
SUBSTANCE: invention relates to pharmaceutical industry, in particular to method of isolating erythrocyte microvesicles. Method of isolating erythrocyte microvesicles includes blood sampling, washing erythrocytes, their incubation and centrifuging to obtain supernatant, with further addition of lanthanum chloride to obtained supernatant, mixing, centrifuging, with obtaining sediment of microvesicles.
EFFECT: described method makes it possible to accelerate process of obtaining erythrocyte microvesicles.
2 ex

Description

Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине и может использоваться в опытах in vitro для получения и изучения микровезикул эритроцитов с помощью биохимических и морфологических методов исследования.The present invention relates to biology and medicine and can be used in in vitro experiments to obtain and study erythrocyte microvesicles using biochemical and morphological research methods.

Известен способ выделения микровезикул эритроцитов из надосадочной жидкости (супернатант), который включает забор крови, промывание эритроцитов, инкубацию отмытых клеток в присутствии кальция и ионофора А 23187, центрифугирование при 1000 g в течение 10 минут для получения супернатанта, ультрацентрифугирование супернатанта при 100000 g в течение 60 минут, получение осадка, содержащего микровезикулы (Allan D., Thomas P., Limbrick A.R. Biochem.J. - 1980.- Vol. 188. - P.881-887).A known method of isolating erythrocyte microvesicles from a supernatant (supernatant), which includes blood sampling, washing of red blood cells, incubation of washed cells in the presence of calcium and ionophore A 23187, centrifugation at 1000 g for 10 minutes to obtain a supernatant, ultracentrifugation of the supernatant at 100000 g for 60 minutes, obtaining a precipitate containing microvesicles (Allan D., Thomas P., Limbrick AR Biochem. J. - 1980.- Vol. 188. - P.881-887).

В качестве прототипа взят способ выделения микровезикул эритроцитов, включающий забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, к супернатанту добавляют хлористый цинк до конечной концентрации 5-10 мМ, перемешивают, оставляют на 60 минут при комнатной температуре и получают осадок, содержащей микровезикулы (Шереметьев Ю.А., Левин Г.Я., Поповичева А.Н., Егорихина М.Н. Способ выделения микровезикул эритроцитов. Патент 2464563 РФ, 2012).As a prototype, a method for isolating erythrocyte microvesicles was taken, including blood sampling, washing of red blood cells, their incubation and centrifugation to obtain a supernatant, zinc chloride was added to the supernatant to a final concentration of 5-10 mM, stirred, left for 60 minutes at room temperature and a precipitate was obtained, containing microvesicles (Sheremetyev Yu.A., Levin G.Ya., Popovicheva AN, Egorikhina MN A method for isolating red blood microvesicles. Patent 2464563 of the Russian Federation, 2012).

Однако в этом способе используются очень высокие концентрации хлористого цинка (5-10 мМ). Существенным недостатком является длительность выделения микровезикул (60 мин).However, very high concentrations of zinc chloride (5-10 mM) are used in this method. A significant drawback is the duration of the release of microvesicles (60 min).

Задача предлагаемого изобретения - совершенствование способа.The objective of the invention is the improvement of the method.

Технический результат - ускорение процесса получения микровезикул эритроцитов.The technical result is the acceleration of the process of obtaining microvesicles of red blood cells.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, к супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают, центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.The technical result is achieved due to the fact that in a method including blood sampling, washing red blood cells, incubating them and centrifuging to obtain a supernatant, lanthanum chloride is added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, mixed, centrifuged at 1000 g for 5 minutes and get a precipitate with microvesicles.

Способ осуществляется следующим образом. Кровь от здоровых людей забирают в вакуумные пробирки, содержащие цитрат натрия. Эритроциты трижды промывают физиологическим раствором и инкубируют в инкубационной среде. Затем эритроциты центрифугируют при 1000 g в течение 10 минут для получения супернатанта. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.The method is as follows. Blood from healthy people is taken into vacuum tubes containing sodium citrate. Red blood cells are washed three times with physiological saline and incubated in an incubation medium. The red blood cells are then centrifuged at 1000 g for 10 minutes to obtain a supernatant. Lanthanum chloride was added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, stirred and centrifuged at 1000 g for 5 minutes to obtain a precipitate with microvesicles.

Пример 1. Отмытые эритроциты инкубируют в безглюкозной среде при 37°C в течение 24 часов. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.Example 1. Washed red blood cells are incubated in a glucose-free environment at 37 ° C for 24 hours. Lanthanum chloride was added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, stirred and centrifuged at 1000 g for 5 minutes to obtain a precipitate with microvesicles.

Пример 2. Отмытые эритроциты инкубируют в среде, содержащей кальций и ионофор А 23187, в течение 30 минут. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, интенсивно перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.Example 2. Washed red blood cells are incubated in a medium containing calcium and ionophore A 23187 for 30 minutes. Lanthanum chloride is added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, it is intensively mixed and centrifuged at 1000 g for 5 minutes to obtain a precipitate with microvesicles.

Claims (1)

Способ выделения микровезикул эритроцитов, включающий забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, отличающийся тем, что к супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают, центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок, содержащий микровезикулы. A method of isolating erythrocyte microvesicles, including blood sampling, washing of red blood cells, their incubation and centrifugation to obtain a supernatant, characterized in that lanthanum chloride is added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, stirred, centrifuged at 1000 g for 5 minutes and a precipitate is obtained containing microvesicles.
RU2013117661/15A 2013-04-16 2013-04-16 Method of isolating erythrocyte microvesicles RU2558776C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013117661/15A RU2558776C2 (en) 2013-04-16 2013-04-16 Method of isolating erythrocyte microvesicles

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013117661/15A RU2558776C2 (en) 2013-04-16 2013-04-16 Method of isolating erythrocyte microvesicles

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013117661A RU2013117661A (en) 2014-10-27
RU2558776C2 true RU2558776C2 (en) 2015-08-10

Family

ID=53380431

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013117661/15A RU2558776C2 (en) 2013-04-16 2013-04-16 Method of isolating erythrocyte microvesicles

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2558776C2 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2616498C2 (en) * 2015-08-03 2017-04-17 Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВПО НГСХА) Means of erythrocyte apoptosis assessment in vitro
RU2667125C1 (en) * 2017-07-13 2018-09-14 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" Method of estimation of the degree of formation of erythrocyte vesicles

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114591905B (en) * 2022-04-01 2022-09-02 北京大学口腔医学院 Method for preparing apoptotic vesicles from human erythrocytes and application of apoptotic vesicles

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2309754C2 (en) * 2005-05-11 2007-11-10 Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия (НГСХА) Method for production of erythrocyte membranes
RU2464563C1 (en) * 2011-07-08 2012-10-20 Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Method for erythrocyte microvesicle recovery

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2309754C2 (en) * 2005-05-11 2007-11-10 Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия (НГСХА) Method for production of erythrocyte membranes
RU2464563C1 (en) * 2011-07-08 2012-10-20 Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Method for erythrocyte microvesicle recovery

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALLAN DAVID et al. The isolation and characterization of 60 nm vesicles ('nanovesicles') produced during ionophore A23187-induced budding of human erythrocytes. J - 1980 - Vol.188 - P.881-887. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2616498C2 (en) * 2015-08-03 2017-04-17 Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВПО НГСХА) Means of erythrocyte apoptosis assessment in vitro
RU2667125C1 (en) * 2017-07-13 2018-09-14 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" Method of estimation of the degree of formation of erythrocyte vesicles

Also Published As

Publication number Publication date
RU2013117661A (en) 2014-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2832727T3 (en) Extracellular vesicles derived from human platelet lysate for use in medicine
Mallick et al. Selective inhibition of Leishmania donovani by active extracts of wild mushrooms used by the tribal population of India: an in vitro exploration for new leads against parasitic protozoans
RU2558776C2 (en) Method of isolating erythrocyte microvesicles
EP2068913A2 (en) Immune modulators, preparations and compositions including immune modulators, tests for evaluating the activity of immune modulators and preparations and compositions including the same, and methods
Lavrin et al. The neurotropic black yeast Exophiala dermatitidis induces neurocytotoxicity in neuroblastoma cells and progressive cell death
Netanyah et al. Extracellular vesicles released by enterovirus-infected EndoC-βH1 cells mediate non-lytic viral spread
Khilazheva et al. Obtaining a three-cell model of a neurovascular unit in vitro
Liu et al. Curcumin regulates hepatoma cell proliferation and apoptosis through the Notch signaling pathway
Verma et al. Evaluation of cytotoxic and anti-tumor activity of partially purified serine protease isolate from the Indian earthworm Pheretima posthuma
RU2464563C1 (en) Method for erythrocyte microvesicle recovery
RU2606042C1 (en) Method of assessing drug effect on degree of erythrocyte vesiculation
Zhou et al. Myeloid-derived suppressor cells exert immunosuppressive function on the T helper 2 in mice infected with Echinococcus granulosus
CN107502650A (en) A kind of blood in vitro culture antineoplastic susceptibility detection method
RU2667126C1 (en) Method of estimation of the influence of medicinal substances on the degree of destabilization of erythrocyte membranes
Fischer et al. Animal model for cutaneous leishmaniasis
Wright et al. Effect of pre-processing storage condition of cell culture-conditioned medium on extracellular vesicles derived from human umbilical cord-derived mesenchymal stromal cells
RU2657430C2 (en) Method of life-time diagnostics of mycobacteriosis of large cattle
RU2609771C1 (en) Method for obtaining erythrocyte antigen for diagnostics of nectobacteriosis in animals
CN106644903B (en) It is present in brain source property particle in human peripheral venous blood and its separating-purifying identification method and application
RU2012155495A (en) EXPRESS METHOD FOR DETERMINING CHOLESTEROL IN IMMUNE COMPLEXES
ES2662808T3 (en) Peptide obtained from PSF1
RU2557979C2 (en) METHOD FOR CELL IMMUNITY ACTIVATION in vitro WITH HOMEOPATHIC MEDICINES
RU2616498C2 (en) Means of erythrocyte apoptosis assessment in vitro
Mansur et al. The Relative Indirect Anthelmintic Effect of Caprine Milk on Mucins Gene Expression in Vitro Using IL-22 Treated LS174T Cells Model of Helminth Infection
Santiago et al. Isolation of extracellular vesicles using titanium dioxide microspheres

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20160417