RU2558776C2 - Method of isolating erythrocyte microvesicles - Google Patents
Method of isolating erythrocyte microvesicles Download PDFInfo
- Publication number
- RU2558776C2 RU2558776C2 RU2013117661/15A RU2013117661A RU2558776C2 RU 2558776 C2 RU2558776 C2 RU 2558776C2 RU 2013117661/15 A RU2013117661/15 A RU 2013117661/15A RU 2013117661 A RU2013117661 A RU 2013117661A RU 2558776 C2 RU2558776 C2 RU 2558776C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microvesicles
- supernatant
- erythrocyte
- isolating
- minutes
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине и может использоваться в опытах in vitro для получения и изучения микровезикул эритроцитов с помощью биохимических и морфологических методов исследования.The present invention relates to biology and medicine and can be used in in vitro experiments to obtain and study erythrocyte microvesicles using biochemical and morphological research methods.
Известен способ выделения микровезикул эритроцитов из надосадочной жидкости (супернатант), который включает забор крови, промывание эритроцитов, инкубацию отмытых клеток в присутствии кальция и ионофора А 23187, центрифугирование при 1000 g в течение 10 минут для получения супернатанта, ультрацентрифугирование супернатанта при 100000 g в течение 60 минут, получение осадка, содержащего микровезикулы (Allan D., Thomas P., Limbrick A.R. Biochem.J. - 1980.- Vol. 188. - P.881-887).A known method of isolating erythrocyte microvesicles from a supernatant (supernatant), which includes blood sampling, washing of red blood cells, incubation of washed cells in the presence of calcium and ionophore A 23187, centrifugation at 1000 g for 10 minutes to obtain a supernatant, ultracentrifugation of the supernatant at 100000 g for 60 minutes, obtaining a precipitate containing microvesicles (Allan D., Thomas P., Limbrick AR Biochem. J. - 1980.- Vol. 188. - P.881-887).
В качестве прототипа взят способ выделения микровезикул эритроцитов, включающий забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, к супернатанту добавляют хлористый цинк до конечной концентрации 5-10 мМ, перемешивают, оставляют на 60 минут при комнатной температуре и получают осадок, содержащей микровезикулы (Шереметьев Ю.А., Левин Г.Я., Поповичева А.Н., Егорихина М.Н. Способ выделения микровезикул эритроцитов. Патент 2464563 РФ, 2012).As a prototype, a method for isolating erythrocyte microvesicles was taken, including blood sampling, washing of red blood cells, their incubation and centrifugation to obtain a supernatant, zinc chloride was added to the supernatant to a final concentration of 5-10 mM, stirred, left for 60 minutes at room temperature and a precipitate was obtained, containing microvesicles (Sheremetyev Yu.A., Levin G.Ya., Popovicheva AN, Egorikhina MN A method for isolating red blood microvesicles. Patent 2464563 of the Russian Federation, 2012).
Однако в этом способе используются очень высокие концентрации хлористого цинка (5-10 мМ). Существенным недостатком является длительность выделения микровезикул (60 мин).However, very high concentrations of zinc chloride (5-10 mM) are used in this method. A significant drawback is the duration of the release of microvesicles (60 min).
Задача предлагаемого изобретения - совершенствование способа.The objective of the invention is the improvement of the method.
Технический результат - ускорение процесса получения микровезикул эритроцитов.The technical result is the acceleration of the process of obtaining microvesicles of red blood cells.
Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, к супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают, центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.The technical result is achieved due to the fact that in a method including blood sampling, washing red blood cells, incubating them and centrifuging to obtain a supernatant, lanthanum chloride is added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, mixed, centrifuged at 1000 g for 5 minutes and get a precipitate with microvesicles.
Способ осуществляется следующим образом. Кровь от здоровых людей забирают в вакуумные пробирки, содержащие цитрат натрия. Эритроциты трижды промывают физиологическим раствором и инкубируют в инкубационной среде. Затем эритроциты центрифугируют при 1000 g в течение 10 минут для получения супернатанта. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.The method is as follows. Blood from healthy people is taken into vacuum tubes containing sodium citrate. Red blood cells are washed three times with physiological saline and incubated in an incubation medium. The red blood cells are then centrifuged at 1000 g for 10 minutes to obtain a supernatant. Lanthanum chloride was added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, stirred and centrifuged at 1000 g for 5 minutes to obtain a precipitate with microvesicles.
Пример 1. Отмытые эритроциты инкубируют в безглюкозной среде при 37°C в течение 24 часов. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.Example 1. Washed red blood cells are incubated in a glucose-free environment at 37 ° C for 24 hours. Lanthanum chloride was added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, stirred and centrifuged at 1000 g for 5 minutes to obtain a precipitate with microvesicles.
Пример 2. Отмытые эритроциты инкубируют в среде, содержащей кальций и ионофор А 23187, в течение 30 минут. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, интенсивно перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.Example 2. Washed red blood cells are incubated in a medium containing calcium and ionophore A 23187 for 30 minutes. Lanthanum chloride is added to the supernatant to a final concentration of 300-500 μM, it is intensively mixed and centrifuged at 1000 g for 5 minutes to obtain a precipitate with microvesicles.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013117661/15A RU2558776C2 (en) | 2013-04-16 | 2013-04-16 | Method of isolating erythrocyte microvesicles |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013117661/15A RU2558776C2 (en) | 2013-04-16 | 2013-04-16 | Method of isolating erythrocyte microvesicles |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013117661A RU2013117661A (en) | 2014-10-27 |
RU2558776C2 true RU2558776C2 (en) | 2015-08-10 |
Family
ID=53380431
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013117661/15A RU2558776C2 (en) | 2013-04-16 | 2013-04-16 | Method of isolating erythrocyte microvesicles |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2558776C2 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2616498C2 (en) * | 2015-08-03 | 2017-04-17 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Means of erythrocyte apoptosis assessment in vitro |
RU2667125C1 (en) * | 2017-07-13 | 2018-09-14 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" | Method of estimation of the degree of formation of erythrocyte vesicles |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114591905B (en) * | 2022-04-01 | 2022-09-02 | 北京大学口腔医学院 | Method for preparing apoptotic vesicles from human erythrocytes and application of apoptotic vesicles |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2309754C2 (en) * | 2005-05-11 | 2007-11-10 | Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия (НГСХА) | Method for production of erythrocyte membranes |
RU2464563C1 (en) * | 2011-07-08 | 2012-10-20 | Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Method for erythrocyte microvesicle recovery |
-
2013
- 2013-04-16 RU RU2013117661/15A patent/RU2558776C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2309754C2 (en) * | 2005-05-11 | 2007-11-10 | Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия (НГСХА) | Method for production of erythrocyte membranes |
RU2464563C1 (en) * | 2011-07-08 | 2012-10-20 | Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Method for erythrocyte microvesicle recovery |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ALLAN DAVID et al. The isolation and characterization of 60 nm vesicles ('nanovesicles') produced during ionophore A23187-induced budding of human erythrocytes. J - 1980 - Vol.188 - P.881-887. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2616498C2 (en) * | 2015-08-03 | 2017-04-17 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Means of erythrocyte apoptosis assessment in vitro |
RU2667125C1 (en) * | 2017-07-13 | 2018-09-14 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" | Method of estimation of the degree of formation of erythrocyte vesicles |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2013117661A (en) | 2014-10-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2832727T3 (en) | Extracellular vesicles derived from human platelet lysate for use in medicine | |
Mallick et al. | Selective inhibition of Leishmania donovani by active extracts of wild mushrooms used by the tribal population of India: an in vitro exploration for new leads against parasitic protozoans | |
RU2558776C2 (en) | Method of isolating erythrocyte microvesicles | |
EP2068913A2 (en) | Immune modulators, preparations and compositions including immune modulators, tests for evaluating the activity of immune modulators and preparations and compositions including the same, and methods | |
Lavrin et al. | The neurotropic black yeast Exophiala dermatitidis induces neurocytotoxicity in neuroblastoma cells and progressive cell death | |
Netanyah et al. | Extracellular vesicles released by enterovirus-infected EndoC-βH1 cells mediate non-lytic viral spread | |
Khilazheva et al. | Obtaining a three-cell model of a neurovascular unit in vitro | |
Liu et al. | Curcumin regulates hepatoma cell proliferation and apoptosis through the Notch signaling pathway | |
Verma et al. | Evaluation of cytotoxic and anti-tumor activity of partially purified serine protease isolate from the Indian earthworm Pheretima posthuma | |
RU2464563C1 (en) | Method for erythrocyte microvesicle recovery | |
RU2606042C1 (en) | Method of assessing drug effect on degree of erythrocyte vesiculation | |
Zhou et al. | Myeloid-derived suppressor cells exert immunosuppressive function on the T helper 2 in mice infected with Echinococcus granulosus | |
CN107502650A (en) | A kind of blood in vitro culture antineoplastic susceptibility detection method | |
RU2667126C1 (en) | Method of estimation of the influence of medicinal substances on the degree of destabilization of erythrocyte membranes | |
Fischer et al. | Animal model for cutaneous leishmaniasis | |
Wright et al. | Effect of pre-processing storage condition of cell culture-conditioned medium on extracellular vesicles derived from human umbilical cord-derived mesenchymal stromal cells | |
RU2657430C2 (en) | Method of life-time diagnostics of mycobacteriosis of large cattle | |
RU2609771C1 (en) | Method for obtaining erythrocyte antigen for diagnostics of nectobacteriosis in animals | |
CN106644903B (en) | It is present in brain source property particle in human peripheral venous blood and its separating-purifying identification method and application | |
RU2012155495A (en) | EXPRESS METHOD FOR DETERMINING CHOLESTEROL IN IMMUNE COMPLEXES | |
ES2662808T3 (en) | Peptide obtained from PSF1 | |
RU2557979C2 (en) | METHOD FOR CELL IMMUNITY ACTIVATION in vitro WITH HOMEOPATHIC MEDICINES | |
RU2616498C2 (en) | Means of erythrocyte apoptosis assessment in vitro | |
Mansur et al. | The Relative Indirect Anthelmintic Effect of Caprine Milk on Mucins Gene Expression in Vitro Using IL-22 Treated LS174T Cells Model of Helminth Infection | |
Santiago et al. | Isolation of extracellular vesicles using titanium dioxide microspheres |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160417 |