RU2556606C1 - Способ лечения хронической ишемии конечности в эксперименте - Google Patents
Способ лечения хронической ишемии конечности в эксперименте Download PDFInfo
- Publication number
- RU2556606C1 RU2556606C1 RU2014113802/14A RU2014113802A RU2556606C1 RU 2556606 C1 RU2556606 C1 RU 2556606C1 RU 2014113802/14 A RU2014113802/14 A RU 2014113802/14A RU 2014113802 A RU2014113802 A RU 2014113802A RU 2556606 C1 RU2556606 C1 RU 2556606C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- limb
- level
- bone marrow
- dose
- limb ischemia
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и может быть использовано при разработке способов лечения хронических облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей. Для этого моделируют ишемию конечности у крысы-самца породы Вистар путем иссечения бедренной, подколенной артерий и начальных отделов артерий голени под наркозом хлоралгидратом в дозе 250-300 мг/кг. Затем вводят предварительно полученную мононуклеарную фракцию аутологичного костного мозга в дозе 4×106 клеток в объеме 200 мкл. Введение осуществляют в ишемизированную конечность из двух точек, в каждую по 100 мкл. Одна точка - это непосредственно под паховой связкой паравазально в зоне анатомического расположения коллатералей внутренней подвздошной артерии и ее ветвей. Другая точка - в икроножной мышце переднелатеральной поверхности средней трети голени. Способ обеспечивает повышение эффективности лечения в эксперименте за счет стимуляции развития коллатерального кровотока в ишемизированной конечности и улучшения артериального притока крови из проксимальных отделов конечности в дистальные. 1 пр., 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и может быть использовано при лечении хронических облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей.
Наиболее близким к заявленному решению является способ имплантации аутологичных костномозговых клеток, заключающийся во введении в точки, расположенные на ишемической мышце бедра пораженной конечности (Takafumi Ueno, Toyoaki Murohara, Keith Allen Robinson et all. ″Therapeutic angiogenesis by bone marrow-derived cell transplantation in myocardial ischemic tissue and skeletal muscle ischemic tissue″, US 7799349 B2). В известной методике костномозговые клетки приготовлены с удалением эритроцитов. Результаты исследования после проведенной процедуры имплантации костномозговых клеток показали, что ангиогенез был индуцирован в ишемизированной мышце бедра. Лазерный допплер показал возрастание кровотока. Однако данный метод все-таки не обеспечивает достаточной эффективности лечения, так как костномозговые клетки имплантируются в пораженную мышцу бедра инфильтрационно из шести различных точек, что без достаточного коллатерального кровотока на уровне бедренной и подколенной артерий не нивелирует экспериментальную ишемию конечности, но даже усугубляет ее за счет повышения внутритканевого давления.
Техническим результатом изобретения является повышение эффективности лечения экспериментальной ишемии конечности за счет стимуляции развития коллатерального кровотока в ишемизированной конечности и улучшение таким образом артериального притока крови из проксимальных отделов конечности в дистальные.
Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования ишемии конечности в эксперименте у крысы-самца породы Вистар путем иссечения магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерий голени под наркозом хлоралгидратом в дозе 250-300 мг/кг проводится коррекция патологии введением мононуклеарной фракции аутологичного костного мозга 4×106 клеток в объеме 200 мкл в ишемизированную конечность из двух точек, в каждую из которых по 100 мкл: 1) забрюшинно непосредственно под паховую связку в ее средней трети паравазально в зону анатомического расположения коллатералей внутренней подвздошной артерии и ее ветвей; 2) интрамускулярно в икроножную мышцу переднелатеральной поверхности средней трети голени. Это приводит к выраженной коррекции нарушений микроциркуляции в ишемизированной конечности, что подтверждается методом лазерной допплеровской флоуметрии.
Способ осуществляется следующим образом.
Опыты проводят на 100 крысах-самцах линии Вистар массой тела 300-350 г. Животные были разделены на две серии: контрольную и опытную. В контрольную серию было включено 40 крыс, которые были разделены на четыре группы, в каждую из групп вошло по 10 животных, в том числе интактную группу составили 10 крыс, у которых оценен нормальный уровень микроциркуляции. Опытная серия была разделена на 2 группы по 30 животных в каждой. 1 группу составили крысы, которым мононуклеары костного мозга имплантировали в пораженную мышцу бедра инфильтрационно из шести различных точек, как представлено в известном способе. 2 группу составили животные, которым мононуклеары костного мозга имплантировали в пораженную ишемизированную конечность из двух точек: забрюшинно непосредственно под паховую связку в ее средней трети паравазально в зону анатомического расположения коллатералей внутренней подвздошной артерии и ее ветвей и интрамускулярно в икроножную мышцу переднелатеральной поверхности средней трети голени Каждую из групп опытной серии разделили на 3 подгруппы по 10 крыс в каждой.
У животных обеих серий изучали динамику уровня микроциркуляции в ишемизированной конечности без и на фоне лечения экспериментальной ишемии мононуклеарами костного мозга на сроках 10, 21 и 28 сутки. Хроническую ишемию задней конечности моделировали по методике М. Sugano et al. (2004), S. Takeshita et al. (1998) путем иссечения магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерий голени.
Оценка уровня микроциркуляции в мышцах бедра и голени крыс выполнялась методом лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ). Исследование осуществляли при помощи аппарата - лазер-допплеровского флоуметра «Biopac-systems MP-100» и датчика «TSD-144». Запись и обработка данных производилась при помощи программы AcqKnowledge 38. Исследование выполняли под наркозом хлоралгидратом в дозе 250-300 мг/кг, который вводили внутрибрюшинно в виде водного раствора. После наступления наркотического сна иссекали участок кожи на переднелатеральной поверхности правого бедра и голени задней конечности. Животное укладывали на противоположную сторону. Датчик вплотную приставляли к мышце бедра, затем голени и проводили флоуметрию. Уровень микроциркуляции регистрировали в пяти точках: 1) середина длины мышцы; точки на 3-4 мм 2) выше, 3) ниже, 4) латеральнее и 5) медиальнее от первой (патент №2353977 от 27.04.2009). Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 сек в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах бедра и голени у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.
У животных контрольной серии первой группы - интактных - оценивали уровень микроциркуляции в мышцах бедра и голени правой задней конечности методом ЛДФ. Полученные средние значения уровня микроциркуляции в этой группе животных были приняты за «норму» и составили 588,74±19,28 п.е. (перфузионных единиц) в мышце бедра и 535,22±17,53 п.е. в мышце голени.
Животные контрольной серии лечения не получали. У крыс опытной серии лечение начинали на седьмые сутки после операции. Для этого, непосредственно перед введением, суспензию костного мозга выделяли из бедренных костей животных следующим образом. У крысы, перенесшей операцию моделирования ишемии правой задней конечности, под наркозом хлоралгидратом в дозе 250-300 мг/кг, на противоположной конечности пальпировали бедренно-большеберцовый сустав, образованный латеральными и медиальными мыщелками бедренной и большеберцовой костей, фиксировали его одной рукой в положении флексии, а другой брали иглу диаметром 20G, соединенную со шприцем, содержащим 2500 Ед гепарина, разбавленного с 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 в объеме 1 мл, и после санации 70% этиловым спиртом перкутанно через хрящевые суставные мениски под надколенником осуществляли пункцию костномозговой полости. Костный мозг аспирировался в шприц путем поступательных движений иглы в полости вперед и назад в объеме от 1 до 1,5 мл. Затем мононуклеарную фракцию костного мозга выделяли по методу Boyum (Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow //Scand. J. Clin. Lab. Investig. - 1968. - Vol. 21 - Suppl. 97. p. 1-9), принцип которого основан на различии в плавучей плотности форменных элементов. Смесь полисахарида фиколла и рентгеноконтрастного вещества верографин создает градиент с такой плотностью, которая позволяет при центрифугировании разделить клетки костного мозга на мононуклеарную фракцию (МФ), в которую входят лимфоциты, субпопуляция моноцитов и бластные гемопоэтические клетки, и фракцию, содержащую гранулоциты и эритроциты. Мононуклеарная фракция обладает меньшей, чем градиент, плотностью и располагаются над градиентом. Плотность гранулоцитов и эритроцитов больше, чем плотность градиента, они проходят через градиент, опускаясь на дно пробирки.
Методика выделения мононуклеарной фракции из гепаринизированного костного мозга.
Костный мозг разводят физиологическим раствором (pH 7,2 )в соотношении 1:5; центрифугируют в градиенте плотности фиколл-верографин при 400g в течение 30 мин. Полученную мононуклеарную фракцию трижды отмывают в ЗФФР (физиологический раствор, забуференный с помощью фосфатно-солевого буфера) и ресуспендируют в среде RPMI-1640 в концентрации 106 клеток в мл. Жизнеспособность клеток, определяемая по методу окрашивания с трипановым синим, превышает 96%.
Полученную мононуклеарную фракцию аутологичного костного мозга 4×106 клеток в объеме 200 мкл в первой группе вводят в ишемизированную конечность бедра инфильтрационно из шести различных точек по ранее известной методике, наиболее близкой к заявленному способу, а во второй группе - из двух точек, в каждую из которых по 100 мкл: 1) забрюшинно непосредственно под паховую связку в ее средней трети в зону анатомического расположения коллатералей внутренней подвздошной артерии и ее ветвей; 2) интрамускулярно в икроножную мышцу переднелатеральной поверхности средней трети голени.
Животные выводились из эксперимента путем передозировки наркоза на 10, 21 и 28 сутки. Перед выведением из эксперимента у крыс контрольной и опытной серий оценивали динамику клинических и флоуметрических показателей при моделировании ишемии конечности на разных сроках. Полученные данные обработаны статистически: рассчитаны средние значения сдвигов (М), средняя ошибка средней арифметической (±m) и вероятность возможной ошибки (p). Различия оценивали как достоверные при p<0,05.
При клиническом обследовании у большинства животных зарегистрировано наличие болевого синдрома, гиперемия кожи голени и стопы, симптом «перемежающей хромоты», ограниченное участие конечности в передвижении.
Динамика оценки уровня микроциркуляции с помощью лазерной допплеровской флоуметрии у животных опытной серии (2 группы) в сравнении с контрольными и интактной группами отражена в таблице 1.
Как видно из данных таблицы 1, после операции уровень микроциркуляции резко и быстро снижается, а затем медленно восстанавливается, однако до 28 суток включительно остается достоверно ниже нормального значения, зафиксированного в группе интактных крыс. Прежних значений уровень микроциркуляции достигает только через 3 месяца после операции. По сравнению с группой интактных животных уровень микроциркуляции в 1 группе крыс, пролеченных по известной методике, на 28 сутки на уровне бедра был выше в 1,2 раза, на уровне голени - в 1,1 раза; по сравнению с контрольной - на уровне бедра был выше на 10 сутки - в 1,6 раза, на 21 сутки - в 1,4 раза, на 28 сутки - в 1,7 раза; на уровне голени уровень микроциркуляции возрастает в 1,5 раза, в 1,3 раза и в 1,7 раза соответственно на тех же сроках.
По сравнению с группой интактных животных уровень микроциркуляции во 2 группе крыс, пролеченных по заявленному способу, был выше в 1,2 раза на уровне бедра и в 1,1 раза на уровне голени уже на 21 сутки, на 28 сутки на уровне бедра - в 1,5 раза, а на уровне голени - в 1,4 раза, а по сравнению с контрольной на уровне бедра на 10 сутки возрастает в 1,8 раза, на 21 сутки - в 2 раза и на 28 сутки - в 2,1 раза; на уровне голени уровень микроциркуляции увеличивается в 1,7 раза, в 1,8 раза и в 2 раза соответственно на тех же сроках.
При сопоставлении данных показателей между 1 и 2 группами оказалось, что уровень микроциркуляции на уровне и бедра, и голени на 10 сутки выше в 1,1 раза, на 21 сутки - в 1,4 раза и на 28 сутки - в 1,2 раза, что свидетельствует о том, что сущность изобретения выражается в совокупности значимых признаков, достаточных для достижения обеспечиваемого изобретением технического результата.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Крысам опытной серии в группе №1 в эксперименте вводили мононуклеарную фракцию костного мозга на 7 сутки после моделирования хронической ишемии конечности по известной методике инфильтрационно из шести различных точек в пораженную мышцу бедра в дозе 4×106 клеток в объеме 200 мкл, что приводило к увеличению микроциркуляции в ишемизированной конечности на 10 сутки на уровне бедра до 366,86±17,7 п.е. и на уровне голени до 310,31±15,39 п.е.; на 21 сутки на уровне бедра до 496,92±26,93 п.е. и на уровне голени до 423,41±23,42 п.е.; на 28 сутки на уровне бедра до 717,46±37,11 п.е. и на уровне голени до 615,18±32,27 п.е.
Крысам опытной серии в группе №2 после моделирования хронической ишемии конечности на 7 сутки мононуклеарную фракцию костного мозга в дозе 4×106 клеток в объеме 200 мкл вводили по предложенной методике из двух точек, в каждую из которых по 100 мкл: забрюшинно непосредственно под паховую связку в ее средней трети в зону анатомического расположения коллатералей внутренней подвздошной артерии и ее ветвей и интрамускулярно в икроножную мышцу переднелатеральной поверхности средней трети голени. Это приводило к достоверному повышению уровня микроциркуляции в ишемизированной конечности на 10 сутки на уровне бедра до 420,28±22,86 п.е. и на уровне голени до 350,23±19,05 п.е.; на 21 сутки на уровне бедра до 695,47±46,6 п.е. и на уровне голени до 579,56±38.83 п.е.; на 28 сутки на уровне бедра до 873,98±43,72 п.е. и на уровне голени до 728,32±36,43 п.е., что выше по сравнению с 1 группой как на уровне бедра, так и на уровне голени на 10 сутки в 1,1 раза, на 21 сутки - в 1,4 раза и на 28 сутки - в 1,2 раза.
Таким образом, результаты экспериментального исследования свидетельствуют о том, что предложенный метод более эффективный при лечении ишемии конечности по сравнению с известным за счет стимуляции развития коллатерального кровотока в ишемизированной конечности и улучшения таким образом артериального притока крови из проксимальных отделов конечности в дистальные.
Claims (1)
- Способ лечения хронической ишемии конечности в эксперименте, включающий моделирование ишемии конечности у крысы-самца породы Вистар путем иссечения бедренной, подколенной артерий и начальных отделов артерий голени под наркозом хлоралгидратом в дозе 250-300 мг/кг с последующим введением полученной мононуклеарной фракции аутологичного костного мозга 4×106 клеток в объеме 200 мкл, отличающийся тем, что коррекцию патологии проводят введением мононуклеарной фракции в ишемизированную конечность из двух точек, в каждую по 100 мкл: непосредственно под паховую связку паравазально в зону анатомического расположения коллатералей внутренней подвздошной артерии и ее ветвей и интрамускулярно в икроножную мышцу переднелатеральной поверхности средней трети голени.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014113802/14A RU2556606C1 (ru) | 2014-04-08 | 2014-04-08 | Способ лечения хронической ишемии конечности в эксперименте |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014113802/14A RU2556606C1 (ru) | 2014-04-08 | 2014-04-08 | Способ лечения хронической ишемии конечности в эксперименте |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2556606C1 true RU2556606C1 (ru) | 2015-07-10 |
Family
ID=53538892
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014113802/14A RU2556606C1 (ru) | 2014-04-08 | 2014-04-08 | Способ лечения хронической ишемии конечности в эксперименте |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2556606C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2645407C1 (ru) * | 2017-04-04 | 2018-02-21 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ульяновский государственный университет" | Способ моделирования нарушения кровотока по магистральной артерии |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2286159C1 (ru) * | 2005-04-21 | 2006-10-27 | ЗАО "РеМеТэкс" | Биотрансплантат и способ лечения хронической ишемии нижних конечностей |
RU2376995C1 (ru) * | 2008-09-26 | 2009-12-27 | Евгений Владимирович Пыхтин | Способ лечения ишемии нижних конечностей |
-
2014
- 2014-04-08 RU RU2014113802/14A patent/RU2556606C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2286159C1 (ru) * | 2005-04-21 | 2006-10-27 | ЗАО "РеМеТэкс" | Биотрансплантат и способ лечения хронической ишемии нижних конечностей |
RU2376995C1 (ru) * | 2008-09-26 | 2009-12-27 | Евгений Владимирович Пыхтин | Способ лечения ишемии нижних конечностей |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЛАРИОНОВ П.М., и др. Стимуляция ангиогенеза внутримышечной имплантацией клеток мононуклеарной фракции аутологичного костного мозга при ишемии конечностей крысы. Клеточные технологии в биологии и медицине. 2010, N 4. http://www.nanonewsnet.ru/news/2011/kletochnaya-terapiya-pomogaet-pri-ishemii-konechnostei. ЛЕБЕДЕВ С.В. и др. Клеточная терапия критической ишемии нижних конечностей (проблемы и перспективы). Вестник РАМН, 2013, N3,с.33-44 . VAN TONGEREN R.B., et al. Intramuscular or combined intramuscular/intra-arterial administration of bone marrow mononuclear cells: a clinical trial in patients with advanced limb ischemia. J. Cardiovasc. Surg. (Torino). 2008; 49: 51"58 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2645407C1 (ru) * | 2017-04-04 | 2018-02-21 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ульяновский государственный университет" | Способ моделирования нарушения кровотока по магистральной артерии |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Say et al. | Platelet-rich plasma injection is more effective than hyaluronic acid in the treatment of knee osteoarthritis | |
Hassan et al. | Effectiveness of the intra-articular injection of platelet rich plasma in the treatment of patients with primary knee osteoarthritis | |
Silva et al. | Intra-articular injections of autologous platelet concentrates in dogs with surgical reparation of cranial cruciate ligament rupture | |
Carmona et al. | Autologous platelet concentrates as a treatment for shoulder injury in a horse | |
RU2455028C1 (ru) | Способ лечения остеоартроза коленного сустава | |
Monteiro et al. | Biologic strategies for intra-articular treatment and cartilage repair | |
Baastrup | The acute bone atrophy and its roentgen picture | |
JP2006232834A (ja) | 組織損傷の治療のための方法及びキット | |
RU2319492C2 (ru) | Способ лечения облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей | |
RU2556606C1 (ru) | Способ лечения хронической ишемии конечности в эксперименте | |
Haygood et al. | Atheromatous microembolism simulating polymyositis | |
Hofmann et al. | Allogeneic vascularized grafting of human knee joints under postoperative immunosuppression of the recipient | |
US20120171179A1 (en) | Apparatus, system, and method for compositions and methods for treating, preventing, or alleviating bone or cartilage diseases | |
Jaeger et al. | Efficiency of iloprost treatment for chemotherapy-associated osteonecrosis after childhood cancer | |
Robins | Platelet rich plasma: Current indications and use in orthopaedic care | |
RU2559937C1 (ru) | Способ фармакологической стимуляции неоангиогенеза в лечении острой экспериментальной ишемии конечности | |
JP6999196B2 (ja) | 幹細胞濾液製剤及びその調製方法 | |
Cockett et al. | Pathophysiology of bends and decompression sickness: An overview with emphasis on treatment | |
RU2519119C1 (ru) | Способ лечения дегенеративных и воспалительно-дегенеративных заболеваний суставов | |
CN103316143B (zh) | 一种抑制类风湿关节炎炎症和减少骨量丢失的中药组合物及其用途 | |
Kalbkhani et al. | The effect of autogenous platelet rich plasma on experimentally induced osteoarthritis in rabbit's stifles joint: a radiological assessment. | |
RU2735838C1 (ru) | Способ фармакологической коррекции экспериментальной критической ишемии скелетной мышцы комбинацией симвастатина и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга | |
Adam et al. | A novel treatment of knee degenerative disorders all-in-one intra-articular injection of platelet-rich plasma combined with hyaluronic acid | |
Thongrueang et al. | Adjunctive therapy for fetlock flexural deformities accompanied by a deep tissue injury in a calf: A case report | |
Malegowda | A Randomised Comparative Study of Platelet Rich Plasma Versus Corticosteroid in the Management of Plantar Fasciitis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160409 |