RU2554405C2 - Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови - Google Patents
Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2554405C2 RU2554405C2 RU2012111734/13A RU2012111734A RU2554405C2 RU 2554405 C2 RU2554405 C2 RU 2554405C2 RU 2012111734/13 A RU2012111734/13 A RU 2012111734/13A RU 2012111734 A RU2012111734 A RU 2012111734A RU 2554405 C2 RU2554405 C2 RU 2554405C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- temperature
- sample
- stem cells
- freezing
- suspension
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности гематологии. Криоконсервирование гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови проводят при добавлении ограждающего раствора криопротектора - диметилсульфоксида - во взвесь ядросодержащих клеток с гемопоэтическими стволовыми клетками. Осуществляют подготовку к замораживанию путем охлаждения взвеси со стволовыми клетками в камере охлаждения до температуры +4°C. Многоэтапное замораживание взвеси со стволовыми клетками проводят при использовании криопротектора - раствора 55% диметилсульфоксида с 5% декстран 40, который вносят во взвесь лейкоцитарного концентрата со стволовыми клетками, размещенными в криопакете. Затем механически перемешивают в аппарате для перемешивания и добавляют криоконсервант при температуре +4°C, выпускают воздух из криопакета и часть взвеси, закрывают пакет, запаивают, помещают его в термоусадочный пакет и осуществляют программное многоэтапное замораживание. На первом этапе смесь взвеси со стволовыми клетками и криопротектором (далее образец) выдерживают 10 мин при температуре +4°C, затем охлаждают со скоростью 1°C/мин до температуры -12°C, далее охлаждают со скоростью 15°C/мин до температуры -60°C, после оттаивания образца со скоростью 10°C/мин его охлаждают со скоростью 1°C/мин до -60°C и в конце программы замораживания образец охлаждают со скоростью 3°C до температуры -100°C. После окончания программы замораживания образец, помещенный в криокоробку, размещают в карантинный сосуд Дьюара с жидким азотом до определения результатов тестов на наличие или отсутствие инфекционных агентов и бактериологической и грибковой контаминации, По истечении карантинного срока хранения образец с гемопоэтическими стволовыми клетками, полученными из пуповинной крови, переносят на длительное хранение при температуре не менее -150°C в сосуд Дьюара с жидким азотом при условии отрицательных результатов тестирования. Изобретение позволяет повысить жизнеспособность клеток. 1 табл., 1 ил.
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности гематологии, и может быть использовано как технология криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови.
Известен способ криоконсервации гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови Нью-Йорского Центра Крови, который включает в себя добавление в суспензию клеток криопротектора диметилсульфоксида, трехэтапное замораживание суспензии с последующим оттаиванием. На начальном этапе замораживание образца происходит со скоростью 10°С/мин до температуры -3°С, дальнейшее замораживание до температуры -12°С и последующее замораживание со скорость 2°С/мин до температуры -50°С/мин, после чего образец помещается в жидкий азот [Technicalservicesbulletin 040-017 BioArchiveFreezingCurveCordBlood].
Известен способ криоконсервации гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови, заключающийся в добавлении ограждающего раствора криопротектора диметилсульфоксида во взвесь ядросодержащих клеток с гемопоэтическими стволовыми клетками, подготовке к замораживанию, включающей охлаждение взвеси со стволовыми клетками в камере охлаждения до температуры +4°С и многоэтапное замораживание взвеси со стволовыми клетками, отличающийся тем, что в качестве криопротектора используют раствор 55% диметилсульфоксида с 5% декстран 40, который вносят во взвесь лейкоцитарного концентрата со стволовыми клетками, размещенными в криопакете, механически перемешивают в аппарате для перемешивания и добавляют криоконсервант при температуре +4°С, выпускают воздух из криопакета и часть взвеси, закрывают пакет, запаивают и помещают его в термоусадочный пакет и осуществляют программное многоэтапное замораживание, на первом этапе которого смесь взвеси со стволовыми клетками и криопротектором - образец замораживания - выдерживают 10 мин при температуре +4°С, затем охлаждают со скоростью 1°С/мин до температуры -12°С, далее охлаждают со скоростью 15°С/мин до температуры -60°С, после оттаивания образца со скоростью 15°С/мин до температуры -18°С охлаждают образец со скоростью 1°С/мин до -60°С и в конце программы замораживания образец охлаждают со скоростью 3°С до температуры -100°С, после окончания программы замораживания образец, помещенный в криокоробку, размещают в карантийный сосуд Дьюара с жидким азотом до определения результатов тестов на наличие или отсутствие инфекционных агентов и бактериологической и грибковой контаминации, по истечении карантинного срока хранения образец с гемопоэтическими стволовыми клетками, полученными из пуповинной крови, переносят на длительное хранение при температуре не менее -150°С в сосуд Дьюара с жидким азотом при условии отрицательных результатов тестирования, в случае положительных результатов тестов на инфекции и бактериальную и/или грибковую контаминацию образец с гемопоэтическими стволовыми клетками переносят в сосуд Дьюара для инфекционного материала длительного хранения. Патентное изобретение 2416197, класс изобретения A01N 1/02, А61К 35/14, А61К 35/44.
Недостатком указанного способа криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови является неудовлетворительная жизнеспособность клеток на выходе.
Цель изобретения - повысить жизнеспособность стволовых клеток.
Цель достигается тем, что способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови, заключающийся в добавлении ограждающего раствора криопротектора диметилсульфоксида во взвесь ядросодержащих клеток с гемопоэтическими стволовыми клетками, подготовке к замораживанию, включающей охлаждение взвеси со стволовыми клетками в камере охлаждения до температуры +4°С, и многоэтапное замораживание взвеси со стволовыми клетками, причем в качестве криопротектора используют раствор 55% диметилсульфоксида с 5% декстран 40, который вносят во взвесь лейкоцитарного концентрата со стволовыми клетками, размещенными в криопакете, механически перемешивают в аппарате для перемешивания и добавляют криоконсервант при температуре +4°С, выпускают воздух из криопакета и часть взвеси, закрывают пакет, запаивают и помещают его в термоусадочный пакет и осуществляют программное многоэтапное замораживание, на первом этапе которого смесь взвеси со стволовыми клетками и криопротектором - образец замораживания - выдерживают 10 мин при температуре +4°С, затем охлаждают со скоростью 1°С/мин до температуры -12°С, далее охлаждают со скоростью 15°С/мин до температуры -60°С, после оттаивания образца его охлаждают со скоростью 1°С/мин до -60°С и в конце программы замораживания образец охлаждают со скоростью 3° до температуры - 100°С, после окончания программы замораживания образец, помещенный в криокоробку, размещают в карантийный сосуд Дьюара с жидким азотом до определения результатов тестов на наличие или отсутствие инфекционных агентов и бактериологической и грибковой контаминации, по истечении карантийного срока хранения образец с гемопоэтическими стволовыми клетками, полученными из пуповинной крови, переносят на длительное хранение при температуре не менее -150°С в сосуд Дьюара с жидким азотом при условии отрицательных результатов тестирования, в случае положительных результатов тестов на инфекции и бактериальную и/или грибковую контаминацию образец с гемопоэтическими стволовыми клетками переносят в сосуд Дьюара для инфекционного материала длительного хранения, причем оттаивание образца осуществляется со скоростью 10°С/мин.
Способ реализуется следующим образом.
Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови, заключающийся в добавлении ограждающего раствора криопротектора диметилсульфоксид во взвесь ядросодержащих клеток с гемопоэтическими стволовыми клетками, подготовке к замораживанию, включающей охлаждение взвеси со стволовыми клетками в камере охлаждения до температуры +4°С, и многоэтапном замораживании взвеси со стволовыми клетками, причем в качестве криопротектора используют раствор 55% диметилсульфоксида с 5% декстран 40, который вносят во взвесь лейкоцитарного концентрата со стволовыми клетками, размещенными в криопакете, механически перемешивают в аппарате для перемешивания и добавляют криоконсервант при температуре +4°С, выпускают воздух из криопакета и часть взвеси, закрывают пакет, запаивают и помещают его в термоусадочный пакет и осуществляют программное многоэтапное замораживание, на первом этапе которого смесь взвеси со стволовыми клетками и криопротектором - образец замораживания - выдерживают 10 мин при температуре +4 C, затем охлаждают со скоростью 1°C 7 мин до температуры -12°C, далее охлаждают со скоростью 15°C/мин до температуры -60°C, после оттаивания образца его охлаждают со скоростью 1°С/мин до -60°С и в конце программы замораживания образец охлаждают со скоростью 3°C до температуры - 100°C, после окончания программы замораживания образец, помещенный в криокоробку, размещают в карантинный сосуд Дьюара с жидким азотом до определения результатов тестов на наличие или отсутствие инфекционных агентов и бактериологической и грибковой контаминации, по истечении карантинного срока хранения образец с гемопоэтическими стволовыми клетками, полученными из пуповинной крови, переносят на длительное хранение при температуре не менее -150°C в сосуд Дьюара с жидким азотом при условии отрицательных результатов тестирования, в случае положительных результатов тестов на инфекции и бактериальную и/или грибковую контаминацию образец с гемопоэтическими стволовыми клетками переносят в сосуд Дьюара для инфекционного материала длительного хранения, причем оттаивание образца осуществляется со скоростью 10°С/мин.
Приведем пример практической реализации предложенного способа.
В приведенной таблице 1 "Показатели концентрата пуповинной крови при выделении гемопоэтических стволовых клеток" показаны количественные изменения показателей концентрата пуповинной крови при выделении гемопоэтических стволовых клеток при двух различных способах криоконсервирования. Различие рассмотренных способов криоконсервации образцов заключается в заданной скорости оттаивания на программируемом замораживателе Кгуо 560-16 ("PlanerPlc". Великобритания). В первом способе скорость оттаивания составляла 15°C/мин, во втором - 10°C/мин. Из приведенной таблицы видно, что при криоконсервировании предложенным нами способом жизнеспособность клеток достоверно повысилась в среднем на 4.46% по сравнению с применяемым ранее способом криоконсервации гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови.
В исследование были включены 85 образцов концентрата лейкоцитарной фракции пуповипной крови. Перед замораживанием выделение лейкоцитарной фракции проводилось на аппарате SepaxSlOO (Biosafe, Швейцария). Криопакет (Pail. США) с концентратом и криопротектором (раствор ДМСО 10%) замораживался упакованный в термоусадочный пакет (Thermogenesis, США). Первый способ замораживания концентрата осуществлялся в программируемом замораживателе Сгуо 560-16 (Planer. Великобритания) по следующей схеме (Hubeletal.. 2003 [6], в модификации Покровского банка стволовых клеток (Патент №2416197. Приоритет изобретения от 11 декабря 2009 г. )):
1) стартовая температура +4°C - удерживается в течение 10 минут;
2) образец охлаждается со скоростью - 1°C/мин до -12°C;
3) образец охлаждается со скоростью 15°С/мин до -60°C:
4) образец нагревается со скоростью 15°С/мин до -18 С;
5) образец охлаждается со скоростью - 1°С/мин до 60°С;
6) образец охлаждается со скоростью - 3°С/мин до -100°С.
Второй способ производился по следующей программе:
1) стартовая температура +4°С - удерживается в течение 10 минут;
2) образец охлаждается со скоростью -1°С/мин до -12 С;
3) образец охлаждается со скоростью -20 С/мин до 60 С;
4) образец нагревается со скоростью 10°С/мин до -18 С;
5) образец охлаждается со скоростью -1°С/мин до -60°С;
6) образец охлаждается со скоростью -3°С/мин до -100°С.
После размораживания все образцы обрабатывали (отмывали от криопротектора - раствор ДМСО 10% (Pall, Великобритания)) и проводили исследование качественных показателей.
Во всех образцах определялось количество ядерных клеток, абсолютное количество CD34+/CD45+ клеток и жизнеспособность в концентрате лейкоцитарной фракции до замораживания, после размораживания и отмывки клеток от криопротектора.
После размораживания и отмывки от криопротектора концентрата лейкоцитарной взвеси проводился подсчет количества ядерных клеток при помощи гематологического анализатора «ACTdiff 2» BeckmanCulter («BeckmanCulter», США), и количества и жизнеспособности CD34/45+ клеток на проточном цитометре СуtomixFС500 (BeckmanCoulter).
Статистическая обработка данных осуществлялась по параметрическим статистическим методикам. Результаты представлены в виде М±m, где М - среднее арифметическое, m - стандартная ошибка среднего. Достоверными считались результаты при р<0,05. Статистический анализ полученных данных проводился с использованием пакета прикладных программ Microsoft Office Excel 2003 для Windows 2003 версия 1.0, IBM® SPSS® Statistics версия 19.0.
На графике "Зависимость температуры образца гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови от времени криовоздействия" представлепакривая замораживания концентрата пуповинной крови. По оси абсцисс задана продолжительность замораживания, по оси ординат - температура образца гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови.
Выделение лейкоцитарной фракции с гемопоэтическими стволовыми клетками из образца пуповинной крови проводится методом автоматической сепарации на аппарате SepaxS100 (Biosafe, Швейцария) с использованием седементирующего средства гидроксиэтилкрахмала (ГЭК). С целью сохранения максимального количества гемопоэтических стволовых клеток при замораживании в фазе кристаллизации используют протектор, обладающий ограждающей способностью, диметилсульфоксид. Предварительно в него добавляется раствор декстран для уменьшения токсичности раствора. Криопротектор - расвор 55% демитилсульфоксида с 5% декстран 40 - вводят в клеточную взвесь с гемопоэтическими стволовыми клетками. Дальнейшее механическое перемешивание и охлаждение до температуры 4°С производят на аппарате для перемешивания CollMixAS-210 (Швейцария). По окончании процесса перемешивания из криопакета с содержимым выпускают воздух и часть клеточной взвеси, закрывают его и запаивают в нескольких местах трубку, идущую к нему, в аппарате для запаивания термоусадочного пакета «CryoFlex» (Nunc, Дания), создавая тем самым так называемые "спутники". В качестве криопакета используется система для сбора и хранения пуповинной крови MacoPharma (Франция).
Криопакет с клеточной взвесью, стволовыми клетками и криопротектором (образец) маркируют индивидуальным штрих-кодом с указанной концентрацией содержимого, условием хранения, состава криопротектора, даты криозаморажнвания и названия банка, осуществляющего и сохраняющего стволовые клетки.
После криопакет с содержимым упаковывают в специальный термоусадочный пакет - "CryoFlex" (Nunc, Дания), помещают его с криопакетом в кассету для программного замораживания и размещают в программируемый замораживатель - PlanerKryo 560-16 ("PlanerPlc.", Великобритания). Замораживание осуществляется по специальной программе, заданной программируемому замораживателю. Начальную температуру в замораживателе устанавливают равной +4°С и удерживают в течение 10 минут. На первом этапе замораживания лейкоцитарный концентрат с гемопоэтическими стволовыми клетками и криопротектором охлаждают со скоростью 1°С до температуры -12°С. На втором этапе охлаждения образец охлаждают со скоростью 15°С до температуры -60°С. Для компенсации выброса латентного тепла, что приводит к кратковременному повышению температуры, процесс оттаивания происходит со скоростью 10°С/мин до температуры -18°С. Данный процесс дает большую возможность обойти точку кристаллизации путем уменьшения градиента температур для увеличения жизнеспособности гемопоэтических стволовых клеток как в процессе замораживания, так и после размораживания. На третьем этапе после оттаивания образец охлаждается со скоростью 1°С/мин до температуры -60°С, в конце процесса замораживания, на 4 этапе, образец охлаждается со скоростью -3°С/мин до температуры -100°С. Данные по процедуре замораживания регистрируют в протоколе программного замораживания образца с гемопоэтическими стволовыми клетками. После замораживания в программируемом замораживателе криопакет с лейкоцитарным концентратом гемопоэтических стволовых клеток и криопротектором помещают в криокоробку с последующим размещением в карантинном сосуде Дьюара с жидким азотом. Образец находится в карантинном сосуде Дьюара до предоставления результатов тестов на наличие или отсутствие инфекционных агентов, бактериологической и грибковой контаминации. По прошествии карантинного срока хранения и при условии отрицательных результатов тестирования замороженный образец помещают на длительное хранение в сосуд Дьюара с жидким азотом при температуре не ниже -150°С.
Результаты всех исследований, характеризующие образец заготовленной клеточной взвеси с гемопоэтическими стволовыми клетками пуповинной крови и раствором криопротектора, все действия, осуществляемые с данным образцом, такие как изъятие образца, изменение локализации образца, вносят в базу данных предприятия "ООО Покровский Банк Стволовых клеток" и базу данных FreezerWork под единым идентификационным номером образца.
Claims (1)
- Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови, заключающийся в добавлении ограждающего раствора криопротектора - диметилсульфоксида - во взвесь ядросодержащих клеток с гемопоэтическими стволовыми клетками, подготовке к замораживанию, включающий охлаждение взвеси со стволовыми клетками в камере охлаждения до температуры +4°C, и многоэтапное замораживание взвеси со стволовыми клетками, причем в качестве криопротектора используют раствор 55% диметилсульфоксида с 5% декстран 40, который вносят во взвесь лейкоцитарного концентрата со стволовыми клетками, размещенными в криопакете, затем механически перемешивают в аппарате для перемешивания и добавляют криоконсервант при температуре +4°C, выпускают воздух из криопакета и часть взвеси, закрывают пакет, запаивают, помещают его в термоусадочный пакет и осуществляют программное многоэтапное замораживание, на первом этапе которого смесь взвеси со стволовыми клетками и криопротектором (далее образец) выдерживают 10 мин при температуре +4°C, затем охлаждают со скоростью 1°C/мин до температуры -12°C, далее охлаждают со скоростью 15°C/мин до температуры -60°C, после оттаивания образца его охлаждают со скоростью 1°C/мин до -60°C и в конце программы замораживания образец охлаждают со скоростью 3°C до температуры -100°C, после окончания программы замораживания образец, помещенный в криокоробку, размещают в карантинный сосуд Дьюара с жидким азотом до определения результатов тестов на наличие или отсутствие инфекционных агентов и бактериологической и грибковой контаминации, по истечении карантинного срока хранения образец с гемопоэтическими стволовыми клетками, полученными из пуповинной крови, переносят на длительное хранение при температуре не менее -150°C в сосуд Дьюара с жидким азотом при условии отрицательных результатов тестирования, отличающийся тем, что оттаивание образца осуществляется со скоростью 10°C/мин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012111734/13A RU2554405C2 (ru) | 2012-03-22 | 2012-03-22 | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012111734/13A RU2554405C2 (ru) | 2012-03-22 | 2012-03-22 | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012111734A RU2012111734A (ru) | 2013-09-27 |
| RU2554405C2 true RU2554405C2 (ru) | 2015-06-27 |
Family
ID=49253792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012111734/13A RU2554405C2 (ru) | 2012-03-22 | 2012-03-22 | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2554405C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2639892C1 (ru) * | 2017-07-05 | 2017-12-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ криоконсервирования ядросодержащих клеток крови человека при температуре минус 80оС |
| RU2716574C1 (ru) * | 2019-01-24 | 2020-03-12 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80оС с раствором Гекмодиолит |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2547426C1 (ru) * | 2013-12-16 | 2015-04-10 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-Производственное Объединение "Тюменькриобанк" | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови |
| US20160100570A1 (en) * | 2014-09-18 | 2016-04-14 | Genzyme Corporation | Ultra-high density cell banking methods |
| CN114982744B (zh) * | 2022-07-07 | 2023-03-24 | 广州沙艾生物科技有限公司 | 一种脐带干细胞储存液及其制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989004168A1 (en) * | 1987-11-12 | 1989-05-18 | Biocyte Corporation | Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood |
| RU2263448C1 (ru) * | 2004-05-28 | 2005-11-10 | Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН | Способ криоконсервирования пуповинной крови |
| RU2416197C1 (ru) * | 2009-12-11 | 2011-04-20 | Александр Борисович Смолянинов | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови |
-
2012
- 2012-03-22 RU RU2012111734/13A patent/RU2554405C2/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989004168A1 (en) * | 1987-11-12 | 1989-05-18 | Biocyte Corporation | Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood |
| RU2263448C1 (ru) * | 2004-05-28 | 2005-11-10 | Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН | Способ криоконсервирования пуповинной крови |
| RU2416197C1 (ru) * | 2009-12-11 | 2011-04-20 | Александр Борисович Смолянинов | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2639892C1 (ru) * | 2017-07-05 | 2017-12-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ криоконсервирования ядросодержащих клеток крови человека при температуре минус 80оС |
| RU2716574C1 (ru) * | 2019-01-24 | 2020-03-12 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80оС с раствором Гекмодиолит |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012111734A (ru) | 2013-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2416197C1 (ru) | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови | |
| RU2554405C2 (ru) | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови | |
| AU2009228056B2 (en) | Materials and methods for hypothermic collection of whole blood | |
| US20170099832A1 (en) | Systems and methods for cryopreservation of cells | |
| JP5186676B2 (ja) | 細胞の凍結保存のための装置及び方法 | |
| JP2005535279A (ja) | 栄養サプリメンテーションによる冷蔵赤血球の有効貯蔵期間を延長するための方法 | |
| CN114073249B (zh) | 一种人t淋巴细胞的慢速冻存方法 | |
| RU2624214C1 (ru) | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток | |
| EP2928294B1 (en) | Cell preparation method | |
| Kilbride et al. | Recovery and post-thaw assessment of human umbilical cord blood cryopreserved as quality control segments and bulk samples | |
| CN108029679B (zh) | 一种用于冻存单个核细胞的冻存液 | |
| Yang et al. | Effects of interruptions of controlled‐rate freezing on the viability of umbilical cord blood stem cells | |
| Mohanna et al. | Validation of long-term handling and storage conditions for hematopoietic stem cell products for autologous transplants | |
| DK2611290T3 (en) | PROCEDURE FOR CRYOP PRESERVATION OF HUMAN SPERMA TOZOES WITHOUT SEAT PLASMA USING A QUICK AND SIMPLE ASEPTIC VITRIFICATION DEVITRIFICATION PROCESS | |
| JP2002233356A (ja) | 細胞の保存液および該保存液を用いた細胞の保存方法 | |
| Lionetti et al. | Factors affecting the stability of cryogenically preserved granulocytes | |
| CN102696577B (zh) | 一种牛精液保护剂 | |
| RU2795058C1 (ru) | Способ отмывания криоконсервированных-оттаянных тромбоцитов от ограждающего раствора | |
| Weinberg | Cryopreservation techniques and freezing solutions | |
| Samples | Cryopreservation of Sperm for IVF | |
| Gupta et al. | Haemopoietic Stem Cell Processing and Storage | |
| Milan et al. | Cryopreservation of Cells | |
| Dobrila et al. | Transient warming events and cell viability of placental/umbilical cord blood (“PCB”) | |
| Mian et al. | Haemopoietic Stem Cell Processing and Storage | |
| Dobrila et al. | EFFECT OF TRANSIENT WARMING EVENTS ON HEMATOPOIETIC PROGENITOR CELL VIABILITY IN CRYOPRESERVED UNITS OF UMBILICAL CORD BLOODS |