RU2548766C1 - Method for determining clinical effectiveness in b-cell chronic lymphocytic leukaemia - Google Patents
Method for determining clinical effectiveness in b-cell chronic lymphocytic leukaemia Download PDFInfo
- Publication number
- RU2548766C1 RU2548766C1 RU2013156488/15A RU2013156488A RU2548766C1 RU 2548766 C1 RU2548766 C1 RU 2548766C1 RU 2013156488/15 A RU2013156488/15 A RU 2013156488/15A RU 2013156488 A RU2013156488 A RU 2013156488A RU 2548766 C1 RU2548766 C1 RU 2548766C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- positive
- cells
- antigen
- treatment
- fluorescence intensity
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для мониторинга эффективности противоопухолевого лечения больных В-клеточным хроническим лимфолейкозом (В-ХЛЛ).The invention relates to medicine, namely to oncohematology, and can be used to monitor the effectiveness of antitumor treatment of patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL).
Известен способ определения эффективности лечения больных В-ХЛЛ на основании ряда клинико-гематологических критериев: степени проявления лимфаденопатии, гепатомегалии, спленомегалии; изменений количества лимфоцитов, тромбоцитов, нейтрофилов периферической крови, уровня гемоглобина; изменений объема костномозгового инфильтрата или нодулярного поражения (Современная онкология, экстренный выпуск «Российские клинические рекомендации по диагностике и лечению лимфопролиферативных заболеваний», под руководством проф. И.В. Поддубной, проф. В.Г. Савченко, 2013 г., с. 57).A known method for determining the effectiveness of treatment of patients with B-CLL based on a number of clinical and hematological criteria: the degree of manifestation of lymphadenopathy, hepatomegaly, splenomegaly; changes in the number of lymphocytes, platelets, neutrophils of peripheral blood, hemoglobin level; changes in the volume of bone marrow infiltrate or nodular lesion (Modern Oncology, emergency issue “Russian Clinical Recommendations for the Diagnosis and Treatment of Lymphoproliferative Diseases”, under the guidance of Prof. IV Poddubnoy, Prof. VG Savchenko, 2013, p. 57 )
Недостатком этого способа является его относительная специфичность, поскольку оценка эффективности терапии с учетом динамики клинико-гематологических показателей отражает органные и/или гематологические изменения, не всегда связанные с изменением объема или количества клеток опухолевого клона. Изменение размеров и нарушение функции лимфоидных органов при В-ХЛЛ регистрируются намного позже, чем происходят молекулярные и иммунофенотипические изменения В-лимфоцитов на уровне отдельной клетки при опухолевой трансформации. В частности, увеличение периферических лимфоузлов может сохраняться довольно долго при ремиссии В-ХЛЛ, когда клетки опухолевого клона практически элиминированы (т.е. удалены) из периферической крови; увеличение печени может быть связано с сопутствующей патологией, а не с прогрессией основного заболевания; увеличение или снижение уровня лимфоцитов крови может быть связано с развитием каких-либо инфекционных или вирусных заболеваний. Динамику клеток опухолевого клона при В-ХЛЛ можно определить только иммунологическим методом, оценивая фенотипические особенности опухолевых В-лимфоцитов.The disadvantage of this method is its relative specificity, since the assessment of the effectiveness of therapy taking into account the dynamics of clinical and hematological parameters reflects organ and / or hematological changes that are not always associated with changes in the volume or number of tumor clone cells. Changes in the size and impaired function of lymphoid organs in B-CLL are recorded much later than molecular and immunophenotypic changes in B-lymphocytes occur at the level of a single cell during tumor transformation. In particular, the increase in peripheral lymph nodes can persist for quite a while in remission of B-CLL, when the cells of the tumor clone are practically eliminated (i.e. removed) from the peripheral blood; liver enlargement may be associated with concomitant pathology, and not with the progression of the underlying disease; an increase or decrease in the level of blood lymphocytes may be associated with the development of any infectious or viral diseases. The dynamics of tumor clone cells in B-CLL can only be determined by the immunological method, evaluating the phenotypic features of tumor B-lymphocytes.
Наиболее близким является способ оценки эффективности противоопухолевого лечения В-ХЛЛ методом проточной цитометрии по стандартизированному протоколу (Н.А. Купрышина, Л.Ю. Гривцова, Н.Н. Тупицин. «Определение минимальной резидуальной болезни при В-клеточном хроническом лимфолейкозе по стандартизированному европейско-американскому протоколу 2007», Иммунология гемопоэза, №2, 2008, с. 60-75), включающий иммунологическое исследование периферической крови с определением количества В-клеток, позитивных по антигену CD-20 после курса лечения. В основе метода лежит последовательное вычленение опухолевой популяции клеток из других и одновременная оценка коэкспрессии 3 пар антигенов: CD20/CD38, CD81/CD22, CD79b/CD43, определение которых в гейте CD19+/СВ5+лимфоцитов характеризуется наибольшей точностью выявления минимальной резидуальной болезни и минимальным числом ложно-положительных результатов. В целом для этой методики предложено использовать 5 проб биологического материала для каждого пациента, включающих применение в общей сложности 13 специфичностей моноклональных антител, меченных соответствующими флюорохромами для 4-цветной проточной цитометрии. Метод характеризуется высокой воспроизводимостью и чувствительностью 1 клетка В-ХЛЛ на 10000 лейкоцитов. Исследование выполняется на материале периферической крови, клетки выделяются методом лизирования эритроцитов с помощью лизирующего раствора с последующей отмывкой в фосфатно-солевом буфере, содержащем бычий сывороточный альбумин. При исследовании должно быть проанализировано не менее 500000 событий.The closest is a method for evaluating the effectiveness of anti-tumor treatment of B-CLL by flow cytometry according to a standardized protocol (N.A. Kupryshina, L.Yu. Grivtsova, NN Tupitsin. “Determination of the minimum residual disease in B-cell chronic lymphocytic leukemia according to standardized European American Protocol 2007 ”, Hematopoiesis Immunology, No. 2, 2008, pp. 60-75), including immunological examination of peripheral blood with determination of the number of B cells positive for CD-20 antigen after a course of treatment. The method is based on the sequential isolation of the tumor population of cells from others and the simultaneous assessment of coexpression of 3 pairs of antigens: CD20 / CD38, CD81 / CD22, CD79b / CD43, the determination of which in the CD19 + / CB5 + lymphocyte gate is characterized by the highest accuracy of detection of minimal residual disease and the minimum number false positive results. In general, for this technique, it was proposed to use 5 samples of biological material for each patient, including the use of a total of 13 specificities of monoclonal antibodies labeled with the corresponding fluorochromes for 4-color flow cytometry. The method is characterized by high reproducibility and sensitivity of 1 B-CLL cell per 10,000 leukocytes. The study is performed on peripheral blood material, the cells are isolated by red blood cell lysing using a lysing solution, followed by washing in phosphate-buffered saline containing bovine serum albumin. The study should be analyzed at least 500,000 events.
Данный метод имеет ряд существенных недостатков:This method has a number of significant disadvantages:
- Метод применим только после достижения больным В-ХЛЛ полной клинико-гематологической ремиссии; при уровне лейкоцитов периферической крови не менее 1,5Х109/л и при нормализации уровня циркулирующих В-лимфоцитов крови (5-19% или 100-500 кл/мкл), т.е. при ранних сроках после окончания курса лечения, когда больной не дает клинического ответа на терапию, или достигнут только частичный ответ, или в процессе лечения, когда количество В-лимфоцитов менее 5% или менее 100 кл/мкл и количество лейкоцитов крови менее 1,5Х109/л, данный метод не применяется.- The method is applicable only after patients with B-CLL complete clinical and hematological remission; at a peripheral blood leukocyte level of at least 1.5 × 10 9 / l and normalization of the level of circulating blood B-lymphocytes (5-19% or 100-500 cells / μl), i.e. in the early stages after the end of the course of treatment, when the patient does not give a clinical response to therapy, or only a partial response is achieved, or during treatment, when the number of B-lymphocytes is less than 5% or less than 100 cells / μl and the number of white blood cells is less than 1.5X10 9 / l, this method is not applicable.
- Проведение таких исследований возможно только при наличии проточного цитометра, имеющего как минимум 2 лазера и 4 канала регистрации флюоресценции. В соответствии со стандартным протоколом в наличии у исследователей должна быть полная панель из 13 специфичностей моноклональных антител, меченных 4 разными флюорохромами.- Such studies are possible only with a flow cytometer having at least 2 lasers and 4 fluorescence detection channels. According to the standard protocol, researchers should have a complete panel of 13 specificities of monoclonal antibodies labeled with 4 different fluorochromes.
- Данный метод не является простым в технологическом плане, т.к. требует анализа не менее 500000 событий, т.е. большего количества исследуемой периферической крови и расходных материалов и высокой квалификации персонала при проведении аналитического этапа исследования (владение последовательной стратегией гейтирования путем логического ограничения).- This method is not technologically simple, because requires analysis of at least 500,000 events, i.e. more peripheral blood and consumables being studied and highly qualified staff during the analytical phase of the study (possession of a consistent gating strategy by logical restriction).
Задачей предлагаемого изобретения является устранение указанных недостатков, повышение точности и достоверности определения эффективности проводимого лечения, в том числе и на ранних сроках терапии, упрощение технологии получения данных за счет более углубленного изучения дополнительных функциональных характеристик клеток опухолевого клона.The task of the invention is to eliminate these drawbacks, increase the accuracy and reliability of determining the effectiveness of treatment, including in the early stages of therapy, simplify the technology of obtaining data due to a more in-depth study of the additional functional characteristics of tumor clone cells.
Для решения поставленной задачи при определении эффективности лечения В-клеточного хронического лимфолейкоза, включающего иммунологическое исследование периферической крови с определением содержания B-клеток, позитивных по антигену CD20, проводимое после курса лечения, предложено дополнительно определять среднюю интенсивность флюоресценции антигена CD20 на B-лимфоцитах, а также содержание B-клеток, позитивных по антигену CD25. При выявлении значений CD20-позитивных B-клеток от 0 до 20%, CD25-позитивных B-клеток от 0 до 20%, средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 от 150 у.е. и более, определяют лечение как эффективное, при значениях CD20-позитивных B-клеток более 20%, CD25-позитивных B-клеток более 20%) и при значениях средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 менее 150 у.е. лечение считают неэффективным.To solve the problem in determining the effectiveness of treatment of chronic B-cell lymphocytic leukemia, including an immunological study of peripheral blood with the determination of the content of B-cells positive for the CD20 antigen, carried out after a course of treatment, it is proposed to additionally determine the average fluorescence intensity of the CD20 antigen on B-lymphocytes, and also the content of B-cells positive for the CD25 antigen. When detecting the values of CD20-positive B-cells from 0 to 20%, CD25-positive B-cells from 0 to 20%, the average fluorescence intensity of the CD20 antigen from 150 cu and more, the treatment is defined as effective, with CD20-positive B-cells more than 20%, CD25-positive B-cells more than 20%) and with average CD20 antigen fluorescence intensity less than 150 cu treatment is considered ineffective.
Предлагаемый способ основан на анализе меньшего количества событий, чем в прототипе, более простой стратегии гейтирования лимфоцитов, с применением нового показателя - оценки экспрессии антигена CD25 на B-лимфоцитах, отражающего пролиферативный потенциал B-клеток.The proposed method is based on the analysis of fewer events than in the prototype, a simpler strategy for gating lymphocytes, using a new indicator - evaluation of the expression of CD25 antigen on B-lymphocytes, reflecting the proliferative potential of B-cells.
На фиг. 1 представлены цитограммы пациентки К. (пример 1) после проведения 5 курсов иммунохимиотерапии (флюдарабин в сочетании с алемтузумабом):In FIG. 1 shows the cytograms of patient K. (example 1) after 5 courses of immunochemotherapy (fludarabine in combination with alemtuzumab):
Цитограмма A - % содержание CD20-позитивных B-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;Cytogram A -% content of CD20-positive B-lymphocytes and the average fluorescence intensity of the CD20 antigen;
Цитограмма B - % содержание CD25-позитивных B-лимфоцитов.Cytogram B -% content of CD25-positive B-lymphocytes.
На фиг. 2 представлены цитограммы пациентки К. (пример 1) после проведения 8 курсов иммунохимиотерапии в прежнем режиме:In FIG. 2 shows the cytograms of patient K. (example 1) after 8 courses of immunochemotherapy in the previous mode:
Цитограмма A - % содержание CD20-позитивных B-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;Cytogram A -% content of CD20-positive B-lymphocytes and the average fluorescence intensity of the CD20 antigen;
Цитограмма B - % содержание CD25-позитивных B-лимфоцитов.Cytogram B -% content of CD25-positive B-lymphocytes.
На фиг. 3 представлены цитограммы пациента О. (пример 2) после проведения 3 курсов иммунохимиотерапии, включающей введение флюдарабина в сочетании с алемтузумабом:In FIG. 3 shows the cytograms of patient O. (example 2) after 3 courses of immunochemotherapy, including the administration of fludarabine in combination with alemtuzumab:
Цитограмма A - % содержание CD20-позитивных B-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;Cytogram A -% content of CD20-positive B-lymphocytes and the average fluorescence intensity of the CD20 antigen;
Цитограмма В - % содержание CD25-позитивных В-лимфоцитов.Cytogram B -% content of CD25-positive B-lymphocytes.
На фиг. 4 представлены цитограммы пациента П. (пример 3) после проведения 2 курсов иммунохимиотерапии в режиме RFC (ритуксимаб, флюдара, циклофосфан):In FIG. 4 presents cytograms of patient P. (example 3) after 2 courses of immunochemotherapy in RFC mode (rituximab, fludar, cyclophosphamide):
Цитограмма А - % содержание CD20-позитивных В-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;Cytogram A -% content of CD20-positive B-lymphocytes and the average fluorescence intensity of the CD20 antigen;
Цитограмма В - % содержание CD25-позитивных В-лимфоцитов.Cytogram B -% content of CD25-positive B-lymphocytes.
На фиг. 5 представлены цитограммы пациента П. (пример 3) после проведения 3 курсов иммунохимиотерапии (флюдарабин в сочетании с алемтузумабом):In FIG. 5 presents the cytograms of patient P. (example 3) after 3 courses of immunochemotherapy (fludarabine in combination with alemtuzumab):
Цитограмма А - % содержание CD20-позитивных В-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;Cytogram A -% content of CD20-positive B-lymphocytes and the average fluorescence intensity of the CD20 antigen;
Цитограмма В - % содержание CD25-позитивных В-лимфоцитов.Cytogram B -% content of CD25-positive B-lymphocytes.
На фиг. 6 представлены цитограммы пациента П. (пример 3) после проведения 2 курсов мелфалана:In FIG. 6 presents cytograms of patient P. (example 3) after 2 courses of melphalan:
Цитограмма А - % содержание CD20-позитивных В-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;Cytogram A -% content of CD20-positive B-lymphocytes and the average fluorescence intensity of the CD20 antigen;
Цитограмма В - % содержание CD25-позитивных В-лимфоцитов.Cytogram B -% content of CD25-positive B-lymphocytes.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
Требуется наличие проточного цитометра с одним лазером и 3-мя каналами флюоресценции; достаточно иметь панель из 5 специфичностей моноклональных антител, меченных 3 флюорохромами.A flow cytometer with one laser and 3 fluorescence channels is required; it is enough to have a panel of 5 specificities of monoclonal antibodies labeled with 3 fluorochromes.
Кровь из вены, предварительно обработанную антикоагулянтом ЭДТА, в количестве 50 мкл смешивают с 20 мкл моноклональных антител определенной специфичности, конъюгированных с флюорохромными красителями (например, CD20-FITC, CD45-APC, CD19-Per-CP, CD25-PE).Blood from a vein pretreated with an EDTA anticoagulant in an amount of 50 μl is mixed with 20 μl of monoclonal antibodies of a specific specificity conjugated with fluorochrome dyes (for example, CD20-FITC, CD45-APC, CD19-Per-CP, CD25-PE).
Инкубируют пробы при комнатной температуре в темноте в течение 20-25 мин, затем добавляют 1000 мкл лизирующего раствора для освобождения от эритроцитов, инкубируют при комнатной температуре в темноте в течение 12 мин, добавляют 1000 мкл раствора фосфатно-солевого буфера с 0,1% раствора азида натрия для остановки лизиса, 500 мл фиксирующего раствора для стабилизации мембраны клеток и анализируют пробы на цитометре. Образец для исследования всасывается под давлением в потоке жидкости через специальную иглу прибора, проба подвергается анализу.Samples are incubated at room temperature in the dark for 20-25 minutes, then 1000 μl of lysing solution is added to free from red blood cells, incubated at room temperature in the dark for 12 minutes, 1000 μl of phosphate-saline buffer solution with 0.1% solution is added sodium azide to stop lysis, 500 ml of fixing solution to stabilize the cell membrane and analyze the samples on a cytometer. The test sample is absorbed under pressure in a fluid stream through a special needle of the device, the sample is analyzed.
В основе метода проточной цитометрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости лазерный луч монохроматического света.The method of flow cytometry is based on photometric and fluorescence measurements of individual cells crossing one laser radiation of monochromatic light one after another.
В результате все клеточные элементы крови, проходя через лазерный луч, распределяются по размеру и «гранулярности» на области гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов. Каналы флюоресценции регистрируют сигналы, исходящие при возбуждении флюорохромных красителей, связанных с моноклональными антителами, которые используются для изучения поверхностных клеточных маркеров. Флюоресцентные сигналы преобразуются в электрические с помощью фотоэлектронных умножителей и после цифровой обработки все искомые данные выводятся на дисплей компьютера в виде цитограмм-графического изображения клеток, меченных определенным комплексом моноклонального антитела с флюорохромом. Таким образом, оператор получает информацию о количестве клеток, позитивных по интересующим его маркерам.As a result, all cellular elements of blood passing through a laser beam are distributed by size and “granularity” in the area of granulocytes, monocytes and lymphocytes. Fluorescence channels record the signals emanating from the excitation of fluorochrome dyes associated with monoclonal antibodies, which are used to study surface cell markers. Fluorescent signals are converted into electrical signals using photoelectronic multipliers and, after digital processing, all the desired data is displayed on a computer display in the form of cytogram-graphic images of cells labeled with a specific complex of monoclonal antibody with fluorochrome. Thus, the operator receives information about the number of cells positive for the markers of interest to him.
При анализе проб лимфоцитарную популяцию гейтируют (т.е. выделяют область интересов) по пан-лейкоцитарному антигену CD45, регистрируют содержание CD20-позитивных и CD25-позитивных В-клеток в процентах от общего количества лимфоцитов, затем регистрируют среднюю интенсивность флюоресценции антигена CD20 в у.е. по параметру «mean» в статистических опциях программы, прилагаемой к прибору.When analyzing samples, the lymphocytic population is gated (i.e., the area of interest is identified) by the pan-leukocyte antigen CD45, the content of CD20-positive and CD25-positive B cells is recorded as a percentage of the total number of lymphocytes, then the average fluorescence intensity of the CD20 antigen in .e. by the “mean” parameter in the statistical options of the program attached to the device.
По полученным данным судят об эффективности проводимого лечения.According to the data obtained, they judge the effectiveness of the treatment.
Пример 1.Example 1
Больная К., 1934 г. р., страдает B-клеточным хроническим лимфолейкозом 2 стадии с 2009 г. Patient K., born in 1934, suffers from B-cell chronic stage 2 lymphocytic leukemia since 2009.
После проведения пациентке 5 курсов иммунохимиотерапии (флюдарабин в сочетании с алемтузумабом) проведено иммунофенотипическое исследование клеток крови по вышеописанной методике: выявлено 2 клона CD20-позитивных B-клеток: 1-ый клон (12,2%) с уровнем средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 68 у.е., 2-ой клон (2,4%) - с уровнем средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 462 у.е.. Средний уровень флюоресценции антигена CD20 определен как 265 у.е.; содержание CD20-позитивных B-клеток - 14,6%. Содержание CD25-позитивных B-клеток составило 14%. Сделан вывод об эффективности проводимого лечения. При дальнейшем обследовании у больной зарегистрирована частичная клинико-гематологическая ремиссия.After the patient had 5 courses of immunochemotherapy (fludarabine in combination with alemtuzumab), an immunophenotypic study of blood cells was performed according to the method described above: 2 clones of CD20-positive B cells were detected: 1st clone (12.2%) with a level of average fluorescence intensity of CD20 antigen 68 68 cu, the 2nd clone (2.4%) - with the average CD20 antigen fluorescence intensity of 462 cu. The average fluorescence of CD20 antigen is defined as 265 cu; the content of CD20-positive B cells is 14.6%. The content of CD25-positive B cells was 14%. The conclusion is drawn on the effectiveness of the treatment. Upon further examination, the patient registered a partial clinical and hematological remission.
В дальнейшем через 8 курсов терапии в прежнем режиме у больной проведено повторное иммунофенотипическое исследование по предлагаемому способу, содержание CD20-позитивных B-клеток составило 9,83%, в том числе 7,8% - со средней интенсивностью флюоресценции антигена CD20 71 у.е., а 2,03% клеток - со средней интенсивностью флюоресценции антигена CD20 291 у.е.; средний уровень флюоресценции антигена CD20 составил 181 у.е.; содержание CD25-позитивных B-клеток составило 8,4%. Сделан вывод об эффективности проведенной терапии - достигнуто снижение содержания CD20-позитивных B-клеток со слабой интенсивностью флюоресценции, т.е. опухолевых клеток. По клинико-гематологическим критериям состояние пациентки оценено как полная клиническая ремиссия.Later, after 8 courses of therapy in the previous regimen, the patient was re-immunophenotypic for the proposed method, the content of CD20-positive B cells was 9.83%, including 7.8% with an average fluorescence intensity of CD20 antigen of 71 cu ., and 2.03% of the cells with an average fluorescence intensity of CD20 antigen of 291 cu; the average level of CD20 antigen fluorescence was 181 cu; the content of CD25-positive B cells was 8.4%. A conclusion was drawn on the effectiveness of the therapy: a decrease in the content of CD20-positive B cells with a low fluorescence intensity was achieved, i.e. tumor cells. According to clinical and hematological criteria, the patient's condition was assessed as complete clinical remission.
При плановом обследовании через 6 месяцев состояние больной не изменилось.During a routine examination after 6 months, the patient's condition did not change.
Пример 2.Example 2
Пациент О., 1952 г. р., страдает B-клеточным хроническим лимфолейкозом 2 стадии с 2009 г. Patient O., born in 1952, suffers from stage 2 chronic B-cell lymphocytic leukemia since 2009.
После проведения 3 курсов иммунохимиотерапии, включающей введение флюдарабина в сочетании с алемтузумабом, при иммунологическом исследовании выявлено, что содержание CD20-позитивных B-клеток составляло 11,8%, выявлено 2 клона CD20-позитивных B-клеток: 1-ый (10,1%) - с интенсивностью флюоресценции антигена CD20 (63,8 у.е.) и 2-ой-(1,7%) со средней интенсивностью флюоресценции антигена CD20 (259 у.е.), что в среднем составило 162 у.е. При этом содержание CD25-позитивных B-клеток составило 8,1%. Иммунофенотипически лечение было оценено как эффективное.After 3 courses of immunochemotherapy, including the administration of fludarabine in combination with alemtuzumab, an immunological study revealed that the content of CD20-positive B cells was 11.8%, 2 clones of CD20-positive B cells were detected: 1st (10.1 %) - with the fluorescence intensity of the CD20 antigen (63.8 cu) and the 2nd (1.7%) with the average fluorescence intensity of the CD20 antigen (259 cu), which averaged 162 cu . The content of CD25-positive B-cells was 8.1%. Immunophenotypic treatment was rated as effective.
Цитометрически выявленная гетерогенность клона СО20-позитивных B-клеток с различной величиной средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 свидетельствует о процессе постепенного замещения опухолевого клона клеток, для которого характерна слабая интенсивность флюоресценции, на клон клеток с нормальной мембранной экспрессией антигена CD20, т.е. на неопухолевые лимфоциты. Этот факт может свидетельствовать о наличии положительного эффекта от проводимого лечения на данном этапе, в то время как клиническая картина еще не отражает положительных сдвигов в состоянии больного. В дальнейшем пациенту была продолжена противоопухолевая терапия в прежнем режиме, и после проведения 6 курсов у больного была достигнута частичная ремиссия, которая подтвердила наши предположения.The cytometrically detected heterogeneity of the clone of CO20-positive B cells with different values of the average fluorescence intensity of the CD20 antigen indicates a gradual replacement of the tumor clone of cells, which is characterized by a weak fluorescence intensity, to a clone of cells with normal membrane expression of the CD20 antigen, i.e. on non-tumor lymphocytes. This fact may indicate the presence of a positive effect of the treatment at this stage, while the clinical picture does not yet reflect the positive changes in the patient's condition. Subsequently, the patient continued the antitumor therapy in the previous regimen, and after 6 courses the patient had a partial remission, which confirmed our assumptions.
Пример №3.Example No. 3.
Пациент П., 1956 г. р., B-ХЛЛ 2 ст., болен с мая 2011 г. После проведения 2 курсов терапии в режиме RFC (ритуксимаб, флюдара, циклофосфан) проведено иммунофенотипическое исследование периферической крови по указанной методике. Было выявлено, что содержание CD20-позитивных клеток составляло 91% со средней интенсивностью флюоресценции антигена CD20 44,9 у.е. Содержание CD25-позитивны B-клеток составило 86%. Результат лечения был оценен как неэффективный. Больному была заменена тактика лечения и проведено 3 курса иммунохимиотерапии, включающей введение флюдарабина в сочетании с алемтузумабом.Patient P., born in 1956, B-CLL 2 tbsp., Sick since May 2011. After 2 courses of therapy in the RFC regimen (rituximab, fludar, cyclophosphamide), an immunophenotypic study of peripheral blood was performed according to the specified method. It was found that the content of CD20-positive cells was 91% with an average fluorescence intensity of CD20 antigen of 44.9 cu The content of CD25-positive B cells was 86%. The treatment outcome was rated as ineffective. The patient was replaced with treatment tactics and 3 courses of immunochemotherapy were carried out, including the administration of fludarabine in combination with alemtuzumab.
При иммунофенотипическом исследовании после лечения отмечено, что содержание CD20-позитивных клеток составляло 48%, средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20 - 61,7 у.е., т.е. наблюдалось некоторое снижение уровня CD20-позитивных клеток, но средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20 не изменилась. Содержание CD2 5-позитивных В-клеток составляло 39%. По иммунологическим критериям лечение оценено как неэффективное. В дальнейшем больному заменили схему лечения и провели 2 курса ритуксимаба в сочетании с флюдарабином и алемтузумабом. При иммунофенотипическом исследовании отмечено: содержание CD20-позитивных клеток выросло до 91%, средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20 составила 43 у.е. Содержание CD25-позитивных В-клеток увеличилось до 87,5%. Данные иммунофенотипирования лимфоцитов крови указывали на неэффективность проводимой терапии, что впоследствии проявилось в прогрессировании заболевания.An immunophenotypic study after treatment noted that the content of CD20-positive cells was 48%, the average fluorescence intensity of the CD20 antigen was 61.7 cu, i.e. a slight decrease in the level of CD20-positive cells was observed, but the average fluorescence intensity of the CD20 antigen did not change. The CD2 content of 5-positive B cells was 39%. According to immunological criteria, treatment was rated as ineffective. Subsequently, the patient was replaced with a treatment regimen and had 2 courses of rituximab in combination with fludarabine and alemtuzumab. An immunophenotypic study noted: the content of CD20-positive cells increased to 91%, the average fluorescence intensity of the CD20 antigen was 43 cu The content of CD25-positive B cells increased to 87.5%. The data of immunophenotyping of blood lymphocytes indicated the ineffectiveness of the therapy, which subsequently manifested itself in the progression of the disease.
Предлагаемым способом обследовано 130 пациентов, из них 75% больных показали хорошую эффективность лечения, 15% - отсутствие эффекта от проведенных режимов терапии на определенном этапе, что потребовало замены тактики лечения. В дальнейшем была получена положительная корреляция между данными иммунофенотипического исследования и клиническими показателями эффективности лечения, а также с помощью предлагаемого способа исследования подтверждена правильность выбранной тактики лечения.The proposed method examined 130 patients, of which 75% of patients showed good treatment efficiency, 15% - the lack of effect from the treatment regimen at a certain stage, which required the replacement of treatment tactics. In the future, a positive correlation was obtained between immunophenotypic study data and clinical indicators of treatment effectiveness, and the correctness of the chosen treatment tactics was confirmed using the proposed research method.
Предложенный метод позволяет сделать заключение об эффективности проводимых режимов терапии заболевания на более ранних сроках, еще до клинических проявлений, что позволит клиницисту своевременно скорректировать тактику лечебных мероприятий, сократит частоту возможных осложнений терапии (миелотоксичности и иммуносупрессии) при применении новых препаратов, будет способствовать сокращению сроков пребывания больного в стационаре и снижению экономических затрат. В конечном итоге более точная и ранняя оценка эффективности лечения позволит увеличить показатели безпрогрессивной и общей выживаемости пациентов, улучшить качество их жизни.The proposed method allows us to draw a conclusion about the effectiveness of the treatment regimen of the disease at an earlier date, even before clinical manifestations, which will allow the clinician to promptly adjust the tactics of therapeutic measures, reduce the frequency of possible complications of therapy (myelotoxicity and immunosuppression) when using new drugs, will reduce the length of stay patient in the hospital and reduce economic costs. Ultimately, a more accurate and early assessment of the effectiveness of treatment will increase the indicators of non-progressive and overall survival of patients, improve their quality of life.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013156488/15A RU2548766C1 (en) | 2013-12-19 | 2013-12-19 | Method for determining clinical effectiveness in b-cell chronic lymphocytic leukaemia |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013156488/15A RU2548766C1 (en) | 2013-12-19 | 2013-12-19 | Method for determining clinical effectiveness in b-cell chronic lymphocytic leukaemia |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2548766C1 true RU2548766C1 (en) | 2015-04-20 |
Family
ID=53289478
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013156488/15A RU2548766C1 (en) | 2013-12-19 | 2013-12-19 | Method for determining clinical effectiveness in b-cell chronic lymphocytic leukaemia |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2548766C1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2256921C1 (en) * | 2004-01-05 | 2005-07-20 | Государственное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Method for predicting the flow of chronic lympholeukosis |
| WO2010066891A2 (en) * | 2008-12-11 | 2010-06-17 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Method for predicting the response to treatment by tyrosine kinase inhibitors targeting the bcr-abl fusion protein in chronic myeloid leukaemia patients |
| RU2481583C1 (en) * | 2012-03-07 | 2013-05-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздравсоцразвития России) | Method for prediction of clinical effectiveness in chronic myeloid leukemia |
-
2013
- 2013-12-19 RU RU2013156488/15A patent/RU2548766C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2256921C1 (en) * | 2004-01-05 | 2005-07-20 | Государственное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Method for predicting the flow of chronic lympholeukosis |
| WO2010066891A2 (en) * | 2008-12-11 | 2010-06-17 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Method for predicting the response to treatment by tyrosine kinase inhibitors targeting the bcr-abl fusion protein in chronic myeloid leukaemia patients |
| RU2481583C1 (en) * | 2012-03-07 | 2013-05-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздравсоцразвития России) | Method for prediction of clinical effectiveness in chronic myeloid leukemia |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ВЕРШИНИНА М.Г. Оптимизация дифференциальной диагностики опухолей из зрелых В- и Т-клеток методом проточной цитометрии // Автореферат кмн, Санкт-Петербург, 2011, [он-лайн], [найдено 30.09. 2014]. Найдено из Интернет: * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stetler-Stevenson et al. | Diagnostic utility of flow cytometric immunophenotyping in myelodysplastic syndrome | |
| Centis et al. | The importance of erythroid expansion in determining the extent of apoptosis in erythroid precursors in patients with β-thalassemia major | |
| Kelton et al. | A prospective comparison of four techniques for measuring platelet‐associated IgG | |
| US5156951A (en) | Detecting immunological changes in HIV infected patient samples | |
| Wang et al. | Pleural effusion in multiple myeloma | |
| US20120264710A1 (en) | Systems and Methods for Detecting hENT1 Expression in Hematological Disorders | |
| Henel et al. | Basic theory and clinical applications of flow cytometry | |
| Boleslawski et al. | CD28 expression by peripheral blood lymphocytes as a potential predictor of the development of de novo malignancies in long‐term survivors after liver transplantation | |
| Manivannan et al. | Diagnosis of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria: recent advances | |
| Baker et al. | Detection of monocyte specific antigen on human acute leukaemia cells | |
| Sakakura et al. | Usefulness of measurement of reticulated platelets for diagnosis of idiopathic thrombocytopenic purpura | |
| RU2548766C1 (en) | Method for determining clinical effectiveness in b-cell chronic lymphocytic leukaemia | |
| Abrahamsen et al. | Flow cytometric assessment of peripheral blood contamination and proliferative activity of human bone marrow cell populations | |
| Sun et al. | Expression of leukocytic syncytin-1 in B-cell acute lymphoblastic leukemia and acute myeloid leukemia patients | |
| JP2014059299A (en) | Method of testing blast crisis easiness from chronic type adult human t-cell leukemia (atl) to acute type atl | |
| Hutchinson et al. | Mitogen‐induced T‐cell CD69 expression is a less sensitive measure of T‐cell function than [3H]‐thymidine uptake | |
| Comolli et al. | Neutrophil CD64 expression: a reliable diagnostic marker of infection in advanced cancer patients? | |
| Bender et al. | Flow cytometric analysis of human bone marrow | |
| CN101358964B (en) | Cancer diagnosing kit containing HLA-G monoclonal antibodies and use thereof | |
| Ahmad et al. | Flow cytometric analysis: four-year experience in a Tertiary Care Centre of Pakistan | |
| Pillay | Diagnosis of haematological malignancies in the era of total laboratory automation: comparison of the Advia 2120 to immunophenotyping and morphology | |
| Papadaki et al. | Non-Hodgkin's lymphoma in patients with systemic lupus erythematosus | |
| Fateen et al. | Blood group discrepancies in leukemia children: A cross sectional study. | |
| Arriaga-Pizano et al. | Report of the first national consensus meeting for acute leukemias immunophenotyping | |
| RU2488114C1 (en) | Method for platelet autoantibody test |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20151220 |