RU2542460C1 - Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий - Google Patents
Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2542460C1 RU2542460C1 RU2013146113/15A RU2013146113A RU2542460C1 RU 2542460 C1 RU2542460 C1 RU 2542460C1 RU 2013146113/15 A RU2013146113/15 A RU 2013146113/15A RU 2013146113 A RU2013146113 A RU 2013146113A RU 2542460 C1 RU2542460 C1 RU 2542460C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pathological material
- disinfectant
- mycobacteria
- minutes
- aqueous solution
- Prior art date
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и описывает способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий, включающий воздействие дезинфекционным средством, где в качестве дезинфекционного средства используют «Септустин», причем обработку проводят смешиванием водного раствора «Септустина» в концентрации 0,5% и патологического материала в объемном соотношении 1:2 в течение 30 минут при комнатной температуре с последующей двукратной в течение 15 минут отмывкой физиологическим раствором. Изобретение обеспечивает высокую выявляемость при чистоте посевов. 3 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к лабораторным исследованиям, касается способа предпосевной обработки патологического материала и может быть использовано для выявления микобактерий с целью лабораторной диагностики, выявления резервуаров и механизмов передачи возбудителей.
Трудности, связанные с выделением чистых культур микобактерий, обусловлены обсемененностью большинства анализируемых образцов микроорганизмами (сапрофитами, дрожжеподобными грибами и др.), размножающимися быстрее микобактерий.
Результативность бактериологического исследования на туберкулез во многом зависит от предварительной обработки патологического материала и качества питательной среды, используемой для культурального исследования. Особенностью микобактерий является то, что наличие большого количества миколовых кислот в клеточной стенке играет важную биологическую роль в повышенной резистенции микобактерий к воздействию кислот, щелочей, спиртов, антисептических веществ и дезинфектантов. На этой особенности строения клеточной стенки микобактерий и основаны все методы предпосевной обработки патматериала перечисленными выше химическими веществами, которые, с одной стороны, сохраняют жизнеспособность микобактерий, а с другой - подавляют рост неспецифической микрофлоры, которой инфицирован исследуемый материал. Однако при обработке патологического материала не только уничтожается побочная микрофлора, но и погибает часть микобактерий. Поэтому следует использовать такие вещества и в таких концентрациях, которые оказывали бы минимальное губительное действие на микобактерий и максимальное на сопутствующую микрофлору. Обнаружение таких веществ составляет одну из актуальных задач ветеринарной и гуманной медицины.
В практике микробиологических лабораторий в настоящее время используют растворы серной (А.Ф. Коржинская, 1926; К.К. Креслинг, 1929; А.Н. Маккавейская, 1956, метод А.П. Аликаевой, 1971), соляной (Ю.А. Юденич, 1928), щавелевой кислот (метод Гона, Левенштейна-Сумиоши), едкого натра (метод флотации О.В. Мартова, 1971), гипохлорита кальция и других растворов /1/. Недостатками перечисленных методов является достаточно губительное действие кислот и щелочей на микобактерий, что влияет на скорость появления и интенсивность первичного роста колоний,
Растворы кислот в малых концентрациях для обработки исследуемого материала на наличие микобактерий не обеспечивают освобождение его от сопутствующей микрофлоры. Так, при обработке 3% растворами серной, соляной и щавелевой кислот процент загрязнения посевов может составлять от 50 до 80. При обработке 5% раствором щавелевой кислоты процент загрязнения - 33. При обработке материала 5% раствором щавелевой кислоты без последующего промывания физиологическим раствором, как рекомендует Банникова Б.Н. (1980), роста микобактерий на средах Левенштейна-Йенсена и Финн II не происходит, так как рН среды в ней изменяется ниже 6,8. При обработке материала по методу А.П. Аликаевой растворами кислот более высокой концентрации (10-15%) с однократным промыванием (в течение 5 минут физиологическим раствором) в 70% случаев посевы уничтожаются. При использовании щелочей отмечается разбухание волокон тканей, затрудняющее отбор материала и его распределение по среде при посеве /2/. Кроме того, щелочи снижают вязкость гомогената, в связи с чем посевы на питательные среды становятся затруднительными, не полностью покрывают всю поверхность среды, и, вероятно, микобактерии, находящиеся в обволоченном слизью состоянии, не находят контакта с питательной средой /3/.
Используемые в медицинской практике для обработки мокроты такие детергенты, как двузамещенный фосфорнокислый натрий, трехзамещенный фосфорнокислый натрий и хлоргексидинглюконикум при воздействии на патологический материал (лимфатические узлы) в течение 30 минут, 1, 2 часов и 1 суток не обеспечивали подавление сопутствующей микрофлоры, а в 96% случаев посевы были загрязнены банальной микрофлорой.
Известно применение для обработки дезинфектантов, содержащих альдегиды («Лизоформин 3000», «Биодез-Р», «Септодор-форте», «Делаксон») и активный хлор («Хлорантоин», «Биохлор»). При обработке патологического материала 0,15% водным раствором «Делаксона», 0,2% водным раствором «Хлорантоина» и 0,5% водным раствором «Лизоформина» рост колоний M.bovis выявляли на 18 и 19 сутки, однако 0,15% водный раствор «Делаксона» в 10% случаев не полностью убивал сопутствующую микрофлору. 0,1% водный раствор «Септодор-форте» не полностью подавлял рост сопутствующей микрофлоры (пророст - 10%). При обработке биоматериала 0,25% водным раствором «Делаксона», 0,4% водным раствором «Септодора-форте» и 0,15% водным раствором «Биохлора» чистота посевов составляла 100%, срок появления колоний - 21 сутки, интенсивность роста снижена. 2 и 3% водные растворы «Биодеза-Р» задерживали рост М bovis, но не обеспечивали 100% чистоту (пророст 10 и 20% соответственно). Повышение концентрации водных растворов «Делаксона» и «Хлорантоина» до 0,5% «Лизоформина» до 1,0% и «Септодорафорте» до 0,4% губительно действовало на микобактерии /4/.
Цель изобретения - оптимизация предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий.
Поставленная цель достигается предпосевной обработкой патологического материала водным раствором дезинфекционного средства «Септустин».
Сущность способа заключается в предпосевной обработке патологического материала водным раствором дезинфекционного средства "Септустин" в концентрации 0,5% смешиванием в объемном соотношении 1:2 в течение 30 минут при комнатной температуре с последующей двукратной в течение 15 минут отмывкой физиологическим раствором.
Дезинфекционное средство «Септустин» (изготовитель ООО «Уралстинол БИО», Россия), рекомендован для дезинфекции объектов ветеринарного надзора. Данный препарат из группы катионных ПАВ содержит в качестве дезинфицирующего вещества катамин АБ, а также спирт изопропиловый, неионогенное ПАВ, гидрокарбонат натрия и бромфеноловый синий /5/, обладает широким спектром действия в отношении возбудителей инфекционных болезней бактериальной (включая туберкулез), вирусной и грибковой этиологии /5/.
Пример 1. Воздействие дезинфекционного средства «Септустин» в зависимости от концентрации и экспозиции определяли на культурах микроорганизмов, полученных из ГИСК им. Л.А. Тарасовича. Результаты представлены в таблице 1.
| Таблица 1 | ||||
| Воздействие дезинфекционного средства «Септустин» на культуры микроорганизмов в зависимости от концентрации и экспозиции | ||||
| Экспозиция, мин | ||||
| Культура | 15 | 30 | 60 | 120 |
| 0,1% водный раствор | ||||
| Е.coli №17 | + | - | - | - |
| Staph.aureus №6538 АТСС | + | - | - | - |
| M.avium (ГИСК) | + | + | + | + |
| M.tuberculosis(Academia) | + | + | + | + |
| M.bovis (Vallee) | + | + | + | + |
| 0,25% водный раствор | ||||
| Е.coli №17 | - | - | - | - |
| Staph.aureus №6538 АТСС | - | - | - | - |
| M.avium (ГИСК) | + | + | + | + |
| M.tuberculosis(Academia) | + | + | + | + |
| M.bovis (Vallee) | + | + | + | + |
| 0,5% водный раствор | ||||
| Е.coli№17 | - | - | - | - |
| Staph.aureus №6538 АТСС | - | - | - | - |
| M.avium (ГИСК) | + | + | + | + |
| M.tuberculosis(Academia) | + | + | + | + |
| M.bovis (Vallee) | + | + | + | + |
| Примечание: (+) - рост, (-) - отсутствие роста | ||||
Как видно из таблицы 1, бактерицидное действие дезинфекционного средства «Септустин» на микобактерии при испытанных концентрациях и экспозициях не отмечалось.
Пример 2. Патологический материал (сердце, почки, легкие) от мышей, зараженных М. avium (шт. ГИСК), измельчали в стерильной ступке стерильными ножницами, кусочки заливали раствором дезинфекционного средства «Септустин» 0,1, 0,25 и 0,5% концентрации в объемном соотношении 1:2 и оставляли на 30, 60 и 120 минут при комнатной температуре. Затем сливали надосадочную жидкость и промывали стерильным физиологическим раствором дважды в течение 15 минут, хорошо перемешивали и сливали, а кусочки растирали песком стерильным пестиком. Полученный гомогенат заливали стерильным физиологическим раствором, ступку закрывали стерильной пергаментной бумагой и через 5 минут отбирали верхний слой суспензии стерильной пипеткой и переносили в бактериологическую пробирку, из которой производили посев на питательную среду Левенштейна-Йенсена. Результаты представлены в таблице 2.
| Таблица 2 | ||||||||
| Результаты исследования патологического материала от мышей (М.avium) | ||||||||
| Концентрация дезинфекционного средства «Септустин», % | ||||||||
| 0,1 | 0,25 | 0,5 | ||||||
| Экспозиция, мин | ||||||||
| 30 | 60 | 120 | 30 | 60 | 120 | 30 | 60 | 120 |
| - | - | - | - | - | - | + | + | + |
Как видно из таблицы 2, микобактерии выделяли после обработки патологического материала водным раствором дезинфицирующего средства «Септустин» 0,5% концентрации с экспозицией 30 минут, причем увеличение экспозиции не влияло на выявляемость.
Пример 3. Провели культуральное исследование патологического материала (брыжеечные лимфатические узлы) от убитой с контрольно-диагностической целью коровы с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих без видимых патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза, в хозяйстве, благополучном по туберкулезу. Патологический материал измельчали в стерильной ступке стерильными ножницами, кусочки заливали раствором дезинфекционного средства «Септустин» 0,5% концентрации в объемном соотношении 1:2 и оставляли на 30 минут при комнатной температуре. Затем сливали надосадочную жидкость и промывали стерильным физиологическим раствором дважды в течение 15 минут, хорошо перемешивали и сливали, а кусочки растирали стерильным пестиком со стерильным песком. Полученный гомогенат залили стерильным физиологическим раствором и провели посев на питательную среду Левенштейна-Йенсена с последующим культивированием при температуре 37°С. Через 19 дней выросли мелкие колонии белого цвета, которые окрашивали по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам идентифицировали как микобактерии, что подтверждали исследованием жирно-кислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии. По хемотаксономическим характеристикам (по соотношению на хроматограммах эфиров миколовых кислот с числом атомов углерода больше 20, пик С24:0 больше пика С22:0, пик С26:0 отсутствовал) микобактерии идентифицировали как М.scrofulaceum.
Пример 4. Провели культуральное исследование патологического материала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные, лимфатические узлы, печень, легкие) от четырех коров с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих, как в примере 2. При просматривании посевов учитывали выделение культур и чистоту посевов. В качестве контроля выбран метод А.П. Аликаевой. Результаты представлены в таблице 3.
| Таблица 3 | |||||||
| Результаты исследования патологического материала от положительно реагировавших на ППД-туберкулин для млекопитающих коров | |||||||
| Показатели | Концентрация дезинфекционного средства «Септустин», % | 6% серная кислота, экспозиция - 30 мин, контроль | |||||
| 0,1 | 0,25 | 0,5 | |||||
| Экспозиция, мин | |||||||
| 30 | 60 | 30 | 60 | 30 | 60 | ||
| Количество проб | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| Количество засеянных пробирок, из них с проростом (%) | 40 12(30) | 40 10(25) | 40 4(10) | 40 2(5) | 40 | 40 | 40 |
| Обнаружен рост микобактерии, количество проб | - | - | - | 3 | 3 | 2 | - |
Как видно из таблицы 3, при обработке патологического материала водным раствором дезинфекционного средства «Септустин» концентрацией 0,5% с экспозицией 30 минут обеспечивалась 75% выявляемость микобактерий при 100% чистоте посевов. При увеличении экспозиции до 60 минут микобактерии выявлялись в 50% проб. В одной пробе рост мелких колоний белого цвета, не продуцирующих пигмент на свету и в темноте, отмечали на 7 сутки (на 10 сутки - в контроле). По результатам окраски по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам их идентифицировали как микобактерии, что подтверждали исследованием жирно-кислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии. По хемотаксономическим характеристикам (хорошо выражены пики ненасыщенных жирных кислот С22:0 и С24:0, преобладала тетракозановая кислота) микобактерии идентифицировали как М.fortuitum. В двух пробах на 7 сутки выросли слизистые блестящие колонии желтого цвета. По результатам окраски по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам их идентифицировали как микобактерии, что подтверждали исследованием жирно-кислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии. По хемотаксономическим характеристикам (четко выражены пики кислот с 17 и 19 атомами углерода и ненасыщенных жирных кислот с числом атомов углерода больше 20, преобладала бегеновая кислота С22:0, пик С26:0 отсутствовал) микобактерии идентифицировали как M.vaccae.
Проведенные исследования показали, что при предпосевной обработке биоматериала на выделение микобактерии туберкулеза наиболее эффективным является 0,5% раствор дезинфекционного средства «Септустин» при экспозиции 30 минут, что подтверждается высокой выявляемостью и чистотой посевов.
Источники информации
1. Дончеко Н.А. Усовершенствование средств и методов диагностики и профилактики туберкулеза крупного рогатого скота: автореф. дис… докт. вет. наук: 16.00.03, 16.00.04. - Новосибирск, 2008. - 36 с.
2. Гертман М.И. / Интенсификация молочного скотоводства и пути увеличения производства молока: Тез. докл. науч.-практ. конф. - Челябинск, 1986.
3. Патент РФ №2328526 С1, 2008.
4. http://www.nbuv.ua
5. Наставление по применению препарата «Септустин» для дезинфекции объектов ветнадзора. Уралстинол. - БИО. - 2002.
Claims (1)
- Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий, включающий воздействие дезинфекционным средством, отличающийся тем, что в качестве дезинфекционного средства используют «Септустин», причем обработку проводят смешиванием водного раствора «Септустина» в концентрации 0,5% и патологического материала в объемном соотношении 1:2 в течение 30 минут при комнатной температуре с последующей двукратной в течение 15 минут отмывкой физиологическим раствором.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013146113/15A RU2542460C1 (ru) | 2013-10-15 | 2013-10-15 | Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013146113/15A RU2542460C1 (ru) | 2013-10-15 | 2013-10-15 | Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2542460C1 true RU2542460C1 (ru) | 2015-02-20 |
Family
ID=53289028
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013146113/15A RU2542460C1 (ru) | 2013-10-15 | 2013-10-15 | Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2542460C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2619220C1 (ru) * | 2016-01-12 | 2017-05-12 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации" (ФГБНУ "НИВИ НЗ России") | Способ выявления микобактерий с поверхностей |
| RU2786394C1 (ru) * | 2022-03-15 | 2022-12-20 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | СПОСОБ СНИЖЕНИЯ УРОВНЯ КОНТАМИНАЦИИ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПРИ ПОСЕВЕ НА ПЛОТНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ Mycobacterium tuberculosis complex |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2190220C1 (ru) * | 2001-04-02 | 2002-09-27 | Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ | Способ выявления микобактерий туберкулеза |
| RU2321636C1 (ru) * | 2006-10-03 | 2008-04-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук | Способ бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов |
| RU2402781C1 (ru) * | 2009-06-23 | 2010-10-27 | Государственное научное учреждение "Прикаспийский зональный НИВИ" Россельхозакадемии | Способ предпосевной обработки проб, снятых с объектов внешней среды, на выделение микобактерий |
| RU2473906C1 (ru) * | 2011-12-14 | 2013-01-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина" | Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения l-форм микобактерий |
-
2013
- 2013-10-15 RU RU2013146113/15A patent/RU2542460C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2190220C1 (ru) * | 2001-04-02 | 2002-09-27 | Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ | Способ выявления микобактерий туберкулеза |
| RU2321636C1 (ru) * | 2006-10-03 | 2008-04-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук | Способ бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов |
| RU2402781C1 (ru) * | 2009-06-23 | 2010-10-27 | Государственное научное учреждение "Прикаспийский зональный НИВИ" Россельхозакадемии | Способ предпосевной обработки проб, снятых с объектов внешней среды, на выделение микобактерий |
| RU2473906C1 (ru) * | 2011-12-14 | 2013-01-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина" | Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения l-форм микобактерий |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| А.Л.Лазовская, Л.С.Финкельштейн, К.Н.Слинина. Предпосевная обработка патологического материала в противотуберкулезном диспансере //Проблема туберкулеза. - 2000. - 2. - С. 44-46. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2619220C1 (ru) * | 2016-01-12 | 2017-05-12 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации" (ФГБНУ "НИВИ НЗ России") | Способ выявления микобактерий с поверхностей |
| RU2786394C1 (ru) * | 2022-03-15 | 2022-12-20 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | СПОСОБ СНИЖЕНИЯ УРОВНЯ КОНТАМИНАЦИИ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПРИ ПОСЕВЕ НА ПЛОТНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ Mycobacterium tuberculosis complex |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhai et al. | Multiple modes of nematode control by volatiles of Pseudomonas putida 1A00316 from Antarctic soil against Meloidogyne incognita | |
| Islam et al. | Isolation and identification of Escherichia coli and Salmonella from poultry litter and feed | |
| Borick et al. | Alkalinized glutaraldehyde, a new antimicrobial agent | |
| Sun et al. | Effectiveness of Beauveria bassiana sensu lato strains for biological control against Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) in China | |
| Tyagi et al. | Identification and prevention of bacterial contimination on explant used in plant tissue culture labs | |
| JP6335021B2 (ja) | たもぎ茸等のきのこ類を用いた菌発酵液 | |
| Stern et al. | Effect of drinking water chlorination on Campylobacter spp. colonization of broilers | |
| Lassa et al. | Effect of different heat treatments and disinfectants on the survival of Prototheca zopfii | |
| Okore et al. | Antimicrobial efficacy of selected disinfectants | |
| RU2402781C1 (ru) | Способ предпосевной обработки проб, снятых с объектов внешней среды, на выделение микобактерий | |
| RU2542460C1 (ru) | Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий | |
| CN104798775A (zh) | 一种兽用的阳离子表面活性剂复合消毒剂 | |
| CN106942258A (zh) | 兽用阳离子表面活性剂复合消毒剂及其制备方法与应用 | |
| Quinet et al. | Antibacterial properties of contact defensive secretions in neotropical Crematogaster ants | |
| CN104886110B (zh) | 一种多用途的复合阳离子表面活性剂消毒剂 | |
| RU2610412C2 (ru) | Способ первичной идентификации микобактерий комплекса m.tuberculosis от нетуберкулёзных микобактерий | |
| Popova et al. | Investigation of the biocidal effect of electrochemically activated aqueous sodium chloride solution on Staphylococcus aureus. | |
| CN102939966A (zh) | 一种复方消毒剂，其制备方法及应用 | |
| Gonella et al. | Symbiotic control of Halyomorpha halys using a microbial biopesticide. | |
| RU2559523C1 (ru) | Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения нокардиоформных актиномицетов | |
| Shirakawa | Studies on control of seed borne bacterial vegetable disease: studies on epidemiology and control of cucurbits bacterial fruit blotch | |
| RU2190220C1 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза | |
| RU2321636C1 (ru) | Способ бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов | |
| RU2481126C1 (ru) | Дезинфицирующее средство | |
| Obi et al. | Antimicrobial activities of some household Disinfectants on selected human pathogens in Umuahia, Abia state, Nigeria |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20151016 |