RU2536243C1 - Instant diagnostic technique for acute intestinal infections - Google Patents

Instant diagnostic technique for acute intestinal infections Download PDF

Info

Publication number
RU2536243C1
RU2536243C1 RU2013130195/15A RU2013130195A RU2536243C1 RU 2536243 C1 RU2536243 C1 RU 2536243C1 RU 2013130195/15 A RU2013130195/15 A RU 2013130195/15A RU 2013130195 A RU2013130195 A RU 2013130195A RU 2536243 C1 RU2536243 C1 RU 2536243C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
viral
bacterial
etiology
aetiology
aii
Prior art date
Application number
RU2013130195/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Светлана Николаевна БЕНИОВА
Марина Львовна Столина
Марина Германовна ШЕГЕДА
Наталья Петровна БЛОХИНА
Елена Сергеевна АБДУЛЛАЕВА
Антон Павлович Гулевич
Original Assignee
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тихоокеанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ТГМУ Минздрава России
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тихоокеанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ТГМУ Минздрава России filed Critical Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тихоокеанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ТГМУ Минздрава России
Priority to RU2013130195/15A priority Critical patent/RU2536243C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2536243C1 publication Critical patent/RU2536243C1/en

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention represents an instant diagnostic technique for acute intestinal infections (AIIs), involving detecting indication markers of the AII aetiology with the use of laboratory immunology tests, differing by the fact that the AII aetiology is stated in children of an early age category, preferentially in the newborn children; that is accompanied by measuring the concentration of cytokine, interleukin IL-10 in coprofiltrate and diagnosing chronic placental insufficiency (CPI); a probability (P) of the bacterial AII aetiology is calculated; the value P of more than 50% testifies to the bacterial AII aetiology, while the value P being less than 50% shows the absence of the bacterial AII aetiology, and enables considering the diagnostics second stage to be necessary, which implies measuring the concentration of cytokine, interleukin IL-4 in coprofiltrate; the time of latching the newborn child to the breast is established with considering the type of feeding; that is combined with calculating a probability (P) of the viral or viral-bacterial AII aetiology, with the value P of more than 50% testifying to the viral AII aetiology, while the value being less than 50% makes it possible to state the viral-bacterial AII aetiology.
EFFECT: more accurate diagnosing of the aetiology of acute intestinal infection and simplifying the diagnostic procedure.
2 tbl

Description

Изобретение относится к области медицинской диагностики, а именно к выявлению этиологии острых кишечных инфекций, предпочтительно у детей ранней возрастной категории, особенно у новорожденных.The invention relates to the field of medical diagnosis, and in particular to the identification of the etiology of acute intestinal infections, preferably in young children, especially in newborns.

От острой диареи погибают до 5 миллионов детей в год. Заболеваемость взрослых и детей ОКИ в РФ также высока. В структуре поражения желудочно-кишечного тракта у новорожденных одно из ведущих мест принадлежит синдрому диспепсии. Согласно данным ряда авторов, в структуре синдрома диспепсии преобладают ОКИ различной этиологии (Анохина В.А. и др., 2006; Мазанкова А.Н. и др., 2005, 2006). ОКИ занимают ведущее место в структуре инфекционной патологии детского возраста, являясь одной из главных причин летальности. Максимальную угрозу кишечные инфекции представляют для детей ранней возрастной категории, особенно для новорожденных.From acute diarrhea, up to 5 million children per year die. The incidence of ACI in children and adults in the Russian Federation is also high. In the structure of the defeat of the gastrointestinal tract in newborns, one of the leading places belongs to dyspepsia syndrome. According to several authors, the structure of dyspepsia syndrome is dominated by acute intestinal infections of various etiologies (Anokhina V.A. et al., 2006; Mazankova A.N. et al., 2005, 2006). AEI takes a leading place in the structure of childhood infectious pathology, being one of the main causes of mortality. Intestinal infections pose the greatest threat to children of an early age category, especially to newborns.

Этиологическая расшифровка ОКИ по клиническим данным в спорадических случаях затруднительна. Значительная роль в этиологии кишечных инфекций у детей принадлежит бактериальным агентам (Тихомирова О.В. с соавт., 2006). Вместе с тем, в последние годы появляется все больше фактов существенной роли условно-патогенных микроорганизмов, вирусов, грибов в этиологии острых кишечных инфекций у детей. Пока достоверность этиологической расшифровки острых кишечных инфекций остается низкой, что затрудняет проведение этиотропной терапии.The etiological interpretation of OCI according to clinical data in sporadic cases is difficult. A significant role in the etiology of intestinal infections in children belongs to bacterial agents (Tikhomirova O.V. et al., 2006). At the same time, in recent years, more and more facts have appeared of the significant role of opportunistic microorganisms, viruses, and fungi in the etiology of acute intestinal infections in children. So far, the reliability of the etiological decoding of acute intestinal infections remains low, which makes etiotropic therapy difficult.

Для подтверждения диагноза используют бактериологические методы исследования: посевы кала, крови, рвотных масс, а также серологические методы для выявления в динамике уровня специфических антител к бактериям (см. Инфекционные болезни у детей. Под ред. В. В. Ивановой, Изд-во: Медицинское информационное агентство, 2002, с.924).To confirm the diagnosis, bacteriological research methods are used: stool, blood, vomit cultures, as well as serological methods to detect the dynamics of the level of specific antibodies to bacteria (see Infectious diseases in children. Edited by V.V. Ivanova, Publisher: Medical News Agency, 2002, p. 924).

Недостаток названных методов - низкая оперативность и трудоемкость.The disadvantage of these methods is the low efficiency and complexity.

Известен способ выявления бактериальных инфекций, включающий проведение реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), включающий подготовку и исследование сыворотки с помощью специализированных диагностикумов, включающий инкубирование исследуемого и контрольного материалов при комнатной температуре 14-18 ч, с последующей оценкой результатов (см. RU №2329507, G01N 33/577, 2008). Этот метод позволяет получить хорошие результаты. Однако он занимает много времени (24 ч), трудоемок и для получения результатов требуется дополнительное оборудование (микропланшеты и спектрофотометр), препараты невозможно длительно хранить и фотографировать. В ряде случаев определение серологических маркеров малоэффективно: у новорожденных вследствие сформировавшейся иммунной системы, при угнетении иммунной системы и в начальной стадии болезни, т.к. антитела образуются отсроченно.A known method for detecting bacterial infections, including conducting an indirect hemagglutination reaction (RNGA), including the preparation and study of serum using specialized diagnostics, including incubating the test and control materials at room temperature for 14-18 hours, followed by evaluation of the results (see RU No. 23239507, G01N 33/577, 2008). This method allows you to get good results. However, it takes a lot of time (24 hours), it is laborious and additional equipment (microplates and spectrophotometer) is required to obtain results, it is impossible to store and photograph the preparations for a long time. In some cases, the determination of serological markers is ineffective: in newborns due to the formed immune system, with inhibition of the immune system and in the initial stage of the disease, because antibodies are formed delayed.

Известен также способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций, включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования (см. RU №2329507, G01N 33/577, 2008). Способ отличается тем, что осуществляют выявление антигенов возбудителей ОКИ, для чего исследуют лимфоцитарную взвесь (необходимо как минимум 0,05 мл лимфоцитарной взвеси) для приготовления мазка, проведения иммуноцитогистохимической окраски и адекватной оценки результата. В качестве системы детекции используют полимерный комплекс Super Sensitiv Polimer-HRP Detection System производства BioGenex, как более чувствительный.There is also a method for the rapid diagnosis of acute intestinal infections, including the identification of marker indicators of the etiology of acute intestinal infections, using an immunological laboratory test (see RU No. 23239507, G01N 33/577, 2008). The method is characterized in that they identify antigens of the causative agents of OCI, for which they examine the lymphocytic suspension (at least 0.05 ml of lymphocytic suspension is necessary) for the preparation of a smear, immunocytochemical staining and adequate assessment of the result. As the detection system, the polymer complex Super Sensitiv Polimer-HRP Detection System manufactured by BioGenex is used, as it is more sensitive.

Кровь является сложным и чувствительным объектом при проведении иммуногистоцитохимических исследований. В связи с этим предложенный новый способ диагностики ОКИ, основанный на выявлении антигенов возбудителей в клетках крови, требует выполнения комплекса, включающего 16 разработанных методических приемов, касающихся отбора крови, ее центрифугирования и нанесения на предметное стекло (мазок), высушивания при комнатной температуре, фиксации в чистом ацетоне, многократной промывки в фосфатно-солевом буфере, обработки в 3% H2O2, инкубации в нормальной блокирующей сыворотке (Power Block), нанесения на мазки поли- или моноклональных антител к искомым антигенам, инкубации с данными антителами при температуре 37°С, промывки в воде и новой промывки в фосфатно-солевом буфере, нанесения на мазки Super Enhacer, инкубации в темной камере при комнатной температуре, новой промывки в фосфатно-солевом буфере, нанесения на мазки SS Label, инкубации в темной камере при комнатной температуре, обработки материала в водном растворе, содержащем 0,05% 3,3-диаминобензидин тетрахлорида (ДАБ) и 0,025% перекиси водорода, слабой докраски гематоксилином, микроскопии.Blood is a complex and sensitive object during immunohistocytochemical studies. In this regard, the proposed new method for the diagnosis of acute intestinal infections, based on the identification of pathogen antigens in blood cells, requires a complex of 16 developed methodological techniques for blood sampling, centrifugation and application to a glass slide (smear), drying at room temperature, fixation in pure acetone, repeated washing in phosphate-buffered saline, treatment in 3% H 2 O 2 , incubation in normal blocking serum (Power Block), application of poly- or monoclonal antibodies to the desired ntigens, incubations with these antibodies at 37 ° C, washing in water and washing again in phosphate-buffered saline, applying Super Enhacer to smears, incubating in a dark chamber at room temperature, washing in phosphate-buffered saline, applying to SS smears Label, incubation in a dark chamber at room temperature, processing of the material in an aqueous solution containing 0.05% 3,3-diaminobenzidine tetrachloride (DAB) and 0.025% hydrogen peroxide, weakly stained with hematoxylin, microscopy.

Недостаток этого способа - его нацеленность на выявление этиологии бактериальных заболеваний (дизентерия, сальмонеллезы, брюшной тиф, кишечная коли-инфекция и др.) и невозможность выявления вирусной или вирусно-бактериальной этиологии.The disadvantage of this method is its focus on identifying the etiology of bacterial diseases (dysentery, salmonella, typhoid fever, intestinal coli infection, etc.) and the inability to identify viral or viral-bacterial etiology.

Задачей предлагаемого способа является обеспечение возможности оперативного выявления как бактериальной, так и вирусной или вирусно-бактериальной этиологии острой кишечной инфекции.The objective of the proposed method is to enable the rapid detection of both bacterial and viral or viral-bacterial etiology of acute intestinal infection.

Технический результат, получаемый при решении поставленной задачи, выражается в обеспечении возможности оперативного выявления как бактериальной, так и вирусной или вирусно-бактериальной этиологии острой кишечной инфекции. Кроме того, упрощается процедура диагностирования.The technical result obtained by solving the problem is expressed in providing the ability to quickly identify both bacterial and viral or viral-bacterial etiology of acute intestinal infection. In addition, the diagnostic procedure is simplified.

Для решения поставленной задачи способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность бактериальной этиологии ОКИ с использованием выражения:To solve this problem, a method for the rapid diagnosis of acute intestinal infections (ACI), including the identification of marker indicators of the etiology of acute intestinal infections, using an immunological laboratory study, characterized in that the etiology of acute intestinal infections is established in children of an early age category, preferably in newborns, and the concentration is determined in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-10 and the presence of chronic placental insufficiency (CKDF), after which the probability of bacterial etiology of acute intestinal infections with using the expression:

Р=(ey/(l+ey))*100%,P = (e y / (l + e y )) * 100%,

где Р - вероятность в % бактериальной этиологии ОКИ;where P is the probability in% of the bacterial etiology of AKI;

y=11,4796-5,6647·X1-1,251912·X2;y = 11.4796-5.6647; X 1 -1.251912; X 2 ;

X1 - наличие или отсутствие ХФПН, соответственно 1 или 0;X 1 - the presence or absence of CKPS, respectively 1 or 0;

X2 - концентрация в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10, пг/мл, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, для чего используют выражение:X 2 is the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-10, pg / ml, and a P value of more than 50% indicates a bacterial etiology of OCI, and less than 50% indicates the absence of a bacterial etiology of OCI, and the need for a second stage of diagnosis, which determines the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-4, determine the period of application to the breast, as well as the type of feeding, while calculating the probability of a viral or viral-bacterial etiology of OKI, for which the expression is used:

P=(ey/(1+ey))*100%,P = (e y / (1 + e y )) * 100%,

где P - вероятность в % вирусной или вирусно-бактериальной этиологии ОКИ;where P is the probability in% of the viral or viral-bacterial etiology of OKI;

y=-43,95582+2,05532·X3-4,11453·X4+7,01455·X5;y = -43.95582 + 2.05532 X 3 -4.111453 X 4 + 7.01455 X 5 ;

X3 - через какой срок от рождения ребенка прикладывали к груди, ч;X 3 - after what time from the birth of the child was applied to the chest, h;

X4 - вид вскармливания (или естественное или смешанное или искусственное), соответственно или 1, или 2, или 3;X 4 - type of feeding (either natural or mixed or artificial), respectively, or 1, or 2, or 3;

X5 - концентрация в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, пг/мл, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ.X 5 is the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-4, pg / ml, and a P value of more than 50% indicates a viral etiology of OKI, and less than 50% indicates a viral-bacterial OKI.

Сопоставительный анализ признаков заявленного решения с признаками прототипа и аналогов свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию ″новизна″.A comparative analysis of the features of the claimed solution with the signs of the prototype and analogues indicates the conformity of the claimed solution to the criterion of "novelty".

Признаки отличительной части формулы изобретения обеспечивают решение комплекса функциональных задач.The features of the characterizing part of the claims provide a solution to a set of functional tasks.

Признаки «этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно, у новорожденных» позволяют ставить диагноз детям самых ранних возрастов.The signs "the etiology of acute intestinal infections are established in children of an early age category, preferably in newborns," make it possible to diagnose children of the very youngest ages.

Признаки указывающие, что в качестве материала для исследований используют копрофильтрат, обеспечивают неинвазивность отбора биологического материала, кроме того, отбираемый материал максимально интенсивно контактирует с патогенной микрофлорой кишечника (например, по сравнению с мочой или кровью).Signs indicating that coprofiltrate is used as the material for research, ensure non-invasive selection of biological material, in addition, the selected material is most intensely in contact with pathogenic intestinal microflora (for example, compared with urine or blood).

Признаки указывающие, что «определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10», обеспечивают возможность определения противоспалительного цитокина, отражающего иммунный статус организма при инфекционных процессах, и тем самым получают один из параметров, позволяющий провести математическую оценку вероятности ОКИ бактериальной этиологии.Signs indicating that “they determine the concentration of the cytokine — interleukin IL-10 in the coprofiltrate” provide the ability to determine the anti-inflammatory cytokine, which reflects the body’s immune status in infectious processes, and thereby obtain one of the parameters that allows a mathematical assessment of the likelihood of acute intestinal infections of bacterial etiology.

Признаки указывающие, что «определяют наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН)» позволяют методом клинического опроса (без лабораторных исследований на данном этапе) получить второй параметр, позволяющий провести математическую оценку вероятности ОКИ бактериальной этиологии.Signs indicating that "determine the presence of chronic fetoplacental insufficiency (CKDF)" allow the method of clinical interrogation (without laboratory tests at this stage) to obtain a second parameter that allows a mathematical assessment of the likelihood of AEI of bacterial etiology.

Признаки указывающие, что после выявления названных индикаторных показателей «рассчитывают вероятность бактериальной этиологии с использованием выражения:Signs indicating that after identifying these indicator indicators "calculate the probability of bacterial etiology using the expression:

Р=(ey/(1+ey))*100%,P = (e y / (1 + e y )) * 100%,

где P - вероятность в % бактериальной этиологии заболевания;where P is the probability in% of the bacterial etiology of the disease;

y=11,4796-5,6647·X1-1,251912·X2;y = 11.4796-5.6647; X 1 -1.251912; X 2 ;

X1 - наличие или отсутствие ХФПН, соответственно, 1 или 0;X 1 - the presence or absence of CKF, respectively, 1 or 0;

X2 - концентрация в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10, пг/мл», обеспечивают расчетное получение диагностического критерия, позволяющего выявить наличие-отсутствие бактериальной этиологии ОКИ.X 2 is the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-10, pg / ml ”, provide a calculated diagnostic criterion that allows to detect the presence or absence of a bacterial etiology of acute intestinal infections.

Признаки указывающие, что «значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии заболевания, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии заболевания и необходимости проведения второго этапа диагностики» являются диагностическим критерием наличия-отсутствия бактериальной этиологии ОКИ.Signs indicating that "a value of P greater than 50% indicates a bacterial etiology of the disease, and less than 50% indicates the absence of a bacterial etiology of the disease and the need for a second stage of diagnosis" are diagnostic criteria for the presence or absence of a bacterial etiology of AEI.

Признаки указывающие, что «определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4», обеспечивают возможность определения противоспалительного цитокина, оказывающего противовоспалительный эффект при инфекционных процессах, и тем самым получают один из параметров, позволяющий провести математическую оценку вероятности заболевания вирусной или вирусно-бактериальной этиологии.Signs indicating that “determine the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-4”, provide the ability to determine the anti-inflammatory cytokine, which has an anti-inflammatory effect in infectious processes, and thereby receive one of the parameters that allows a mathematical assessment of the likelihood of a disease of viral or viral-bacterial etiology .

Признаки указывающие, что «выявляют срок прикладывания к груди», позволяют методом клинического опроса (без лабораторных исследований, на данном этапе) получить еще один параметр, позволяющий провести математическую оценку вероятности вирусной или вирусно-бактериальной этиологии ОКИ.Signs indicating that they “reveal the period of attachment to the breast” allow the method of clinical interrogation (without laboratory tests, at this stage) to obtain another parameter that allows a mathematical assessment of the likelihood of a viral or viral-bacterial etiology of acute intestinal infections.

Признаки указывающие, что выявляют «вид вскармливания», позволяют методом клинического опроса (без лабораторных исследований на данном этапе) получить один из параметров, позволяющий провести математическую оценку вероятности вирусной или вирусно-бактериальной этиологии ОКИ.Signs indicating that they identify the “type of feeding” allow one to obtain one of the parameters by the method of clinical interrogation (without laboratory tests at this stage), which allows a mathematical assessment of the likelihood of a viral or viral-bacterial etiology of acute intestinal infections.

Признаки указывающие, что «рассчитывают вероятность вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии, для чего используют выражение:Signs indicating that "calculate the probability of a viral or viral-bacterial etiology, for which use the expression:

P=(ey/(1+ey))*100%,P = (e y / (1 + e y )) * 100%,

где P - вероятность в % вирусной или вирусно-бактериальной этиологии ОКИ;where P is the probability in% of the viral or viral-bacterial etiology of OKI;

y=-43,95582+2,05532·X3-4,11453·Х4+7,01455·X5;y = -43.95582 + 2.05532 X 3 -4.111453 X 4 + 7.01455 X 5 ;

X3 - через какой срок от рождения ребенка прикладывали к груди, ч;X 3 - after what time from the birth of the child was applied to the chest, h;

X4 - вид вскармливание или естественное, или смешанное, или искусственное, соответственно или 1, или 2, или 3;X 4 - type of feeding, or natural, or mixed, or artificial, respectively, or 1, or 2, or 3;

X5 - концентрация в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, пг/мл», обеспечивают расчетное получение диагностического критерия, позволяющего выявить наличие вирусной или вирусно-бактериальной этиологии ОКИ.X 5 is the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-4, pg / ml ”, provides a calculated diagnostic criterion that allows to detect the presence of viral or viral-bacterial etiology of acute intestinal infections.

Признаки указывающие, что «значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии заболевания, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной этиологии заболевания», являются диагностическими критериями наличия вирусной или вирусно-бактериальной этиологии ОКИ.Signs indicating that "a P value of more than 50% indicates a viral etiology of the disease, and less than 50% indicates a viral and bacterial etiology of the disease," are diagnostic criteria for the presence of a viral or viral-bacterial etiology of acute intestinal infections.

Копрофильтрат готовили известным образом: пробу кала помещают в предварительно взвешенную, стерильную, вместимостью 10 мл пробирку, далее 100 мг кала интенсивно встряхивали с 5,0 мл физиологического раствора (NaCl 0,09%) раствора до образования гомогенной взвеси или гомогенизировали образцы на многопробирочном вортексе, энергично шейкируя (на самой высокой скорости) в течение 30 мин, далее переносили гомогенат в 2 мл микроцентрифужную пробирку и центрифугировали 5 мин на микроцентрифуге со скоростью 3000 об/мин, отбирали супернатант в чистую помеченную пробирку.Coprofiltrate was prepared in a known manner: a stool sample was placed in a pre-weighed, sterile 10 ml test tube, then 100 mg of stool was vigorously shaken with 5.0 ml of physiological saline (NaCl 0.09%) solution until a homogeneous suspension was formed or samples were homogenized on a multi-tube vortex vigorously shaking (at the highest speed) for 30 minutes, then homogenate was transferred to a 2 ml microcentrifuge tube and centrifuged for 5 minutes on a microcentrifuge at a speed of 3000 rpm, the supernatant was taken in a clean label test tube.

Концентрацию цитокинов в копрофильтрате: интерлейкина IL-10, IL-4 определяли известным образом, путем иммуноферментного анализа с использованием реактивов R&D Diagnostics Inc. (USA), согласно прилагаемой инструкции, на анализаторе Multiscan (Финляндия). Расчеты количества цитокинов IL-10, IL-4 проводили путем построения калибровочной кривой с помощью компьютерной программы. Количество выражали в пикограммах на миллилитр (пг/мл). Анализ уровней цитокинов проводят в максимально короткие сроки после начала заболевания (фактически сразу после доставки ребенка в медучреждение).The concentration of cytokines in coprofiltrate: interleukin IL-10, IL-4 was determined in a known manner, by enzyme-linked immunosorbent assay using reagents R&D Diagnostics Inc. (USA), according to the attached instruction, on the Multiscan analyzer (Finland). The calculation of the number of cytokines IL-10, IL-4 was carried out by constructing a calibration curve using a computer program. The amount was expressed in picograms per milliliter (pg / ml). The analysis of cytokine levels is carried out as soon as possible after the onset of the disease (actually immediately after the delivery of the child to the medical institution).

Кроме лабораторных исследований методом клинического опроса или изучения медицинской карты ребенка выявляют наличие-отсутствие хронической фетоплацентарной недостаточности, при этом наличие или отсутствие ХФПН соответствует значению 1 или 0 показателя X1.In addition to laboratory studies by clinical interrogation or by examining a child’s medical records, the presence or absence of chronic fetoplacental insufficiency is revealed, while the presence or absence of CKF corresponds to a value of 1 or 0 of indicator X 1 .

Далее, определив показатель X2 - концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10, в пг/мл, по первой из вышеприведенных формул осуществляют расчет вероятности бактериальной этиологии заболевания.Further, by determining the indicator X 2 - the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-10, in pg / ml, according to the first of the above formulas, the probability of the bacterial etiology of the disease is calculated.

Если расчет показывает, что значение Р больше 50%, это свидетельствует о бактериальной этиологии заболевания, если Р меньше 50%, это свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии заболевания и необходимости проведения второго этапа диагностики этиологии заболевания, чтобы установить его вирусную или вирусно-бактериальную этиологию.If the calculation shows that the P value is more than 50%, this indicates a bacterial etiology of the disease, if P is less than 50%, this indicates the absence of a bacterial etiology of the disease and the need for a second stage of diagnosis of the etiology of the disease in order to establish its viral or viral-bacterial etiology.

При проведении лабораторных исследований желательно сразу выявлять количество обоих цитокинов (и IL-4 и IL-10), поскольку продолжительность анализа в их отношении составляет 4 ч, что позволяет сэкономить время при неподтверждении предположения о бактериальной этиологии заболевания, кроме того, по этой же причине целесообразно на этом же этапе установить показатель X3 - сведения о том, через какой срок от рождения ребенка прикладывали к груди (измеряется в часах), а также показатель X4 - сведения о виде вскармливание, которое может быть или естественное, или смешанное, или искусственное (чему соответствуют значения показателя, пг/мл);When conducting laboratory tests, it is desirable to immediately identify the amount of both cytokines (and IL-4 and IL-10), since the analysis time in relation to them is 4 hours, which saves time if the assumption of a bacterial etiology of the disease is not confirmed, in addition, for the same reason it is advisable at the same stage to establish the indicator X 3 - information about how long after the birth of the baby was applied to the breast (measured in hours), as well as indicator X 4 - information about the type of feeding, which can be or is tween, or mixed, or artificial (which correspond to the values of the indicator, pg / ml);

Далее, определив показатель X5 - концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, в пг/мл, по второй из вышеприведенных формул осуществляют расчет вероятности вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии заболевания, при этом если значение Р больше 50%, это свидетельствует о вирусной этиологии заболевания, если значение Р меньше 50%, это свидетельствует о вирусно-бактериальной этиологии заболевания.Further, by determining the indicator X 5 - the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-4, in pg / ml, according to the second of the above formulas, the probability of a viral or viral-bacterial etiology of the disease is calculated, while if the P value is more than 50%, this indicates viral etiology of the disease, if the P value is less than 50%, this indicates a viral-bacterial etiology of the disease.

Примеры выявления бактериальной этиологии ОКИ приведены в табл.1.Examples of identifying the bacterial etiology of acute intestinal infections are given in Table 1.

Таблица 1Table 1 Результаты выявления ОКИ бактериальной этиологииThe results of the detection of acute bacterial etiology №No. ХФПНHFPN IL10IL10 Этиология заболеванияEtiology of the disease yy PP         7,0979087,097908 99,92%99.92% 22 00 5,65,6 4,46889284,4688928 98,87%98.87% 33 1one 3,63.6 1,30801681,3080168 78,72%78.72% 4four 1one 3,93.9 0,93244320.9324432 71,76%71.76% 55 00 38,838.8 небактериальнаяnon-bacterial -37,094586-37.094586 0,00%0.00% 66 1one 10,210,2 -6,9546024-6.9546024 0,10%0.10% 77 00 17,517.5 -10,42886-10,42886 0,00%0.00% 88 1one 7,97.9 -4,0752048-4.0752048 1,67%1.67% 99 00 10,210,2 -1,2899024-1.2899024 21,59%21.59% 1010 00 26,526.5 -21,696068-21.696068 0,00%0.00% 11eleven 00 17,917.9 -10,929625-10.929625 0,00%0.00% 1212 00 12,3412.34 -3,9689941-3.9689941 1,85%1.85%

Всего прогнозных диагнозов в отношении бактериальной этиологии, совпавших с фактическими, - 125 случаев из 128, (97,3%).In total, predictive diagnoses regarding bacterial etiology, which coincided with the actual ones, were 125 cases out of 128 (97.3%).

Отдельные примеры определения заболевания вирусной и вирусно-бактериальной этиологии приведены в табл.2.Some examples of determining the disease of viral and viral-bacterial etiology are given in table 2.

Таблица 2table 2 Результат выявления ОКИ вирусной и вирусно-бактериальной этиологииThe result of the detection of acute viral and viral-bacterial etiology №No. Приложили к груди через, часAttached to the chest in an hour Вид вскармливанияType of feeding IL4IL4 Этиология заболеванияEtiology of the disease УAt РR 1one 0,250.25 33 104,4104.4 вируснаяviral 676,5334676.5334 100,00%100.00% 22 0,250.25 33 11,411,4 24,1802924,18029 100,00%100.00% 33 4four 33 17,817.8 76,7808676,78086 100,00%100.00% 4four 2424 33 33 14,0719214.07192 100,00%100.00% 55 0,250.25 33 15,115.1 50,1341350,13413 100,00%100.00% 66 0,250.25 33 11,411,4 24,1802924,18029 100,00%100.00% 77 0,250.25 33 17,817.8 69,0734169.07341 100,00%100.00% 88 0,250.25 33 104,4104.4 676,5334676.5334 100,00%100.00% 99 0,250.25 33 11,411,4 24,1802924,18029 100,00%100.00% 1010 4four 33 17,817.8 76,7808676,78086 100,00%100.00% 11eleven 2424 33 33 14,0719214.07192 100,00%100.00% 1212 0,250.25 33 15,115.1 50,1341350,13413 100,00%100.00% 1313 0,250.25 33 11,411,4 24,1802924,18029 100,00%100.00% 14fourteen 0,250.25 33 17,817.8 69,0734169.07341 100,00%100.00% 15fifteen 4four 33 17,817.8 76,7808676,78086 100,00%100.00% 1616 2424 33 33 14,0719214.07192 100,00%100.00% 1717 0,250.25 33 15,115.1 50,1341350,13413 100,00%100.00% 18eighteen 0,250.25 33 11,411,4 24,1802924,18029 100,00%100.00% 1919 0,250.25 33 17,817.8 69,0734169.07341 100,00%100.00% 20twenty 0,250.25 33 104,4104.4 676,5334676.5334 100,00%100.00% 2121 0,250.25 33 2,72.7   -36,8463-36.8463 0,00%0.00% 2222 0,250.25 33 2,72.7 -36,8463-36.8463 0,00%0.00% 2323 1212 33 2,72.7 -12,6963-12.6963 0,00%0.00% 2424 0,250.25 22 2,72.7 -32,7318-32.7318 0,00%0.00% 2525 0,250.25 33 2,72.7 -36,8463-36.8463 0,00%0.00% 2626 1212 33 2,72.7 -12,6963-12.6963 0,00%0.00% 2727 0,250.25 33 2,72.7 -36,8463-36.8463 0,00%0.00% 2828 0,250.25 33 2,72.7 -36,8463-36.8463 0,00%0.00% 2929th 0,250.25 33 2,72.7 -36,8463-36.8463 0,00%0.00% 30thirty 0,250.25 22 2,72.7 -32,7318-32.7318 0,00%0.00% 3131 1212 33 2,72.7 -12,6963-12.6963 0,00%0.00% 3232 0,250.25 33 2,72.7 -36,8463-36.8463 0,00%0.00% 3333 0,250.25 22 2,72.7 -32,7318-32.7318 0,00%0.00% 3434 0,250.25 33 2,72.7 -36,8463-36.8463 0,00%0.00%

Согласно полученным данным таблицы из 51 случая, в 100% случаев прогнозные данные совпали с фактическими.According to the data obtained from the table of 51 cases, in 100% of cases the forecast data coincided with the actual ones.

Реально расчетные и учетные операции способа реализуются программным путем, с помощью Программы, представляющей собой стандартный файл офисного пакета MicrosoftExcel 2003.The actual settlement and accounting operations of the method are implemented programmatically, using the Program, which is a standard file of the Microsoft Office Excel 2003 office suite.

Программа позволяет хранить данные о результатах прогноза диагноза до 30 человек. Сохранение, копирование и размножение файла обеспечивается стандартными инструментами MicrosoftExcel 2003 и Window's 98.The program allows you to store data on the results of the diagnosis forecast for up to 30 people. File saving, copying and reproduction is provided by standard MicrosoftExcel 2003 and Window's 98 tools.

Файл состоит из 2 вкладок «I этап. Бактериальный» и «II этап. Вирусный».The file consists of 2 tabs “I stage. Bacterial "and" II stage. Viral".

При поступлении пациента пользователь программы открывает файл на вкладке «I этап. Бактериальный». Заполняются:When a patient arrives, the user of the program opens the file on the tab “I stage. Bacterial". Fill in:

1) В графу «ФИО пациента» вводится фамилию, имя и отчество пациента. Данное поле не является обязательным для заполнения;1) The surname, name and patronymic of the patient are entered in the column "Name of the patient". This field is optional;

2) В графу ХФПН (хроническая фетоплацентарная недостаточность) вводятся бинарные данные: 1 - есть, 0 - нет.2) Binary data is entered in the column of HFDP (chronic fetoplacental insufficiency): 1 - yes, 0 - no.

3) Графа «IL 10» заполняется по результатам лабораторного исследования, при этом в графу вводят соответствующее значение.3) The column "IL 10" is filled out according to the results of laboratory tests, while the corresponding value is entered in the column.

Далее в графах «Прогноз наличия заболевания бактериальной этиологии, в %» автоматически рассчитываются в процентах значения вероятности соответственно наличия у пациента заболевания бактериальной этиологииFurther, in the columns “Forecast of the presence of a disease of bacterial etiology, in%”, the probability values corresponding to the presence of a disease of a bacterial etiology in a patient are automatically calculated in percent

Если значение в графе «Прогноз наличия заболевания бактериальной этиологии, в %» более 50%, то считается, что у пациента бактериальная форма заболевания и дальнейшее исследование не требуется.If the value in the column “Forecast of the presence of a disease of bacterial etiology, in%” is more than 50%, then it is considered that the patient has a bacterial form of the disease and further investigation is not required.

В случае если значение в графе «Прогноз наличия заболевания бактериальной этиологии, в %» менее 50%, то считается, что у пациента форма заболевания, отличная от бактериальной, и требуется дальнейшее исследование. Для этого пользователь программы переходит на вкладку «II этап. Вирусный». Заполняются:If the value in the column "Forecast of the presence of a disease of bacterial etiology, in%" is less than 50%, then it is considered that the patient has a form of the disease that is different from the bacterial one, and further investigation is required. To do this, the user of the program goes to the tab "II stage. Viral". Fill in:

1) В графу «ФИО пациента» вводится фамилию, имя и отчество пациента. Данное поле не является обязательным для заполнения;1) The surname, name and patronymic of the patient are entered in the column "Name of the patient". This field is optional;

2) В графу «Срок прикладывания к груди через … часов» вводится количество часов от 1 до 24;2) In the column "Duration of attachment to the chest in ... hours" the number of hours from 1 to 24 is entered;

3) В графу «Вскармливание» вводятся следующие значения: 1 - естественное, 2 - смешанное, 3 - искусственное;3) In the column "Feeding" the following values are entered: 1 - natural, 2 - mixed, 3 - artificial;

4) В графу «IL 4» вводится значение соответствующее значение этого показателя.4) In the column "IL 4" is entered the value corresponding to the value of this indicator.

Далее в графах «Прогноз наличия заболевания вирусной этиологии, в %» и «Прогноз наличия заболевания вирусно-бактериальной этиологии, в %» автоматически рассчитываются в процентах значения вероятности соответственно наличия у пациента заболевания вирусной этиологии или вирусно-бактериальной этиологии.Further, in the columns “Prognosis of the presence of a disease of viral etiology, in%” and “Forecast of the presence of a disease of viral and bacterial etiology, in%”, the probability values corresponding to the presence of a patient of a disease of viral etiology or virus-bacterial etiology are automatically calculated as percentages.

В случае, если значение в графе «Прогноз наличия заболевания вирусной этиологии, в %» более 50%, то считается, что у пациента вирусная форма заболевания и дальнейшее исследование не требуется.If the value in the column "Forecast of the presence of a disease of viral etiology, in%" is more than 50%, then it is considered that the patient has the viral form of the disease and further research is not required.

В случае, если значение в графе «Прогноз наличия заболевания вирусной этиологии, в %» менее 50%, то считается, что у пациента вирусно-бактериальная форма заболевания.If the value in the column "Prognosis of the presence of a disease of viral etiology, in%" is less than 50%, then it is considered that the patient has a viral-bacterial form of the disease.

Дальнейшее исследование не требуется.No further investigation is required.

Claims (1)

Способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличающийся тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность бактериальной этиологии ОКИ с использованием выражения:
P=(ey/(1+ey))*100%,
где P - вероятность в % бактериальной этиологии ОКИ;
y=11,4796-5,6647·X1-1,251912·X2;
X1 - наличие или отсутствие ХФПН, соответственно 1 или 0;
X2 - концентрация в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10, пг/мл, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, для чего используют выражение:
P=(ey/(1+ey))*100%,
где Р - вероятность в % вирусной или вирусно-бактериальной этиологии ОКИ;
y=-43,95582+2,05532·X3-4,11453·X4+7,01455·X5;
X3 - через какой срок от рождения ребенка прикладывали к груди, ч;
X4 - вид вскармливания (или естественное, или смешанное, или искусственное), соответственно или 1, или 2, или 3;
X5 - концентрация в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, пг/мл, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ. A method for the rapid diagnosis of acute intestinal infections (OCI), including the identification of marker indicators of the etiology of OKI, using an immunological laboratory test, characterized in that the etiology of OKI is established in children of an early age category, preferably in newborns, and the concentration of cytokine in the coprofiltrate is determined - interleukin IL-10 and the presence of chronic placental insufficiency (CKDF), after which the probability of bacterial etiology of acute intestinal infections using the expression
P = (e y / (1 + e y )) * 100%,
where P is the probability in% of the bacterial etiology of OCI;
y = 11.4796-5.6647; X 1 -1.251912; X 2 ;
X 1 - the presence or absence of CKPS, respectively 1 or 0;
X 2 is the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-10, pg / ml, and a P value of more than 50% indicates a bacterial etiology of OCI, and less than 50% indicates the absence of a bacterial etiology of OCI, and the need for a second stage of diagnosis, which determines the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-4, determine the period of application to the breast, as well as the type of feeding, while calculating the probability of a viral or viral-bacterial etiology of OKI, for which the expression is used:
P = (e y / (1 + e y )) * 100%,
where P is the probability in% of the viral or viral-bacterial etiology of OKI;
y = -43.95582 + 2.05532 X 3 -4.111453 X 4 + 7.01455 X 5 ;
X 3 - after what time from the birth of the child was applied to the chest, h;
X 4 - type of feeding (either natural, or mixed, or artificial), respectively, or 1, or 2, or 3;
X 5 is the concentration in the coprofiltrate of the cytokine - interleukin IL-4, pg / ml, and a P value of more than 50% indicates a viral etiology of OKI, and less than 50% indicates a viral-bacterial OKI.
RU2013130195/15A 2013-07-01 2013-07-01 Instant diagnostic technique for acute intestinal infections RU2536243C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013130195/15A RU2536243C1 (en) 2013-07-01 2013-07-01 Instant diagnostic technique for acute intestinal infections

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013130195/15A RU2536243C1 (en) 2013-07-01 2013-07-01 Instant diagnostic technique for acute intestinal infections

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2536243C1 true RU2536243C1 (en) 2014-12-20

Family

ID=53286298

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013130195/15A RU2536243C1 (en) 2013-07-01 2013-07-01 Instant diagnostic technique for acute intestinal infections

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2536243C1 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Жидков Е.М. / Клинико-патогенетические особенности течения ротавирусной инфекции у детей на современном этапе / Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук / 2008. Мартынова Н.Н. / Клинико-патогенетическое значение провоспалительных цитокинов (ИЛ-1β, ИЛ-6 и ФНО-α) и противовоспалительного интерлейкина-10 у больных сальмонеллезом и острым шигеллезом / Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук / 2006. Гюлазян Н.М. / Клинико-патогенетическое значение бактериальных токсинов в развитии особенностей течения острых кишечных инфекций / Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук / 2009 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Serjeant et al. Outbreak of aplastic crises in sickle cell anaemia associated with parvovirus-like agent
Seth et al. Comparison of five blood-typing methods for the feline AB blood group system
LEWIS et al. Hemagglutination in the diagnosis of toxoplasmosis and amebiasis
Utagawa et al. Astrovirus as a cause of gastroenteritis in Japan
Reller et al. Leptospirosis as frequent cause of acute febrile illness in southern Sri Lanka
CN105388297A (en) Application of mycobacterium tuberculosis protein Rv1984c in preparing products for diagnosing latent phthisis infection
CN106191286A (en) Brucellar detection method, test kit and application thereof
Rahman et al. Prevalence of Caprine brucellosis in Anhui province, China
CN103698531B (en) The purposes of Rv1860, Rv0173 and/or Rv1812c albumen in the phthisical product of preparation diagnostic activities
RU2536243C1 (en) Instant diagnostic technique for acute intestinal infections
Takemura et al. SARS-CoV-2 infection in beaver farm, Mongolia, 2021
CN103698530B (en) The purposes of Mycobacterium tuberculosis albumen in the phthisical product of preparation diagnostic activities
CN103675293B (en) The purposes of Rv3872, Rv0164 and/or Rv1926c albumen in the phthisical product of preparation diagnostic activities
US20100279319A1 (en) Detection of plasmodium falciparum histidine-rich protein II in saliva malaria patients
CN103149356B (en) A kind of Test paper card utilizing sandwich method to detect Brucella abortus antigen
Dillner et al. Screening for high amounts of SARS-CoV-2 identifies pre-symptomatic subjects among healthy healthcare workers
CN103675292B (en) The purposes of Rv0174, Rv1729c and/or Rv3835 albumen in the phthisical product of preparation diagnostic activities
Chen et al. Comparison of Indirect Immunofluorescence and Passive Particle Agglutination for the Detection of Mycoplasma Pneumoniae Antibodies.
CN106290865A (en) Salmonella infects colloidal gold immunochromatographimethod 5-linked diagnostic kit
Alrodhan Serological Investigation Of Caprine Brucellosis At Saniyah District
Pooja et al. Seroprevalence of Mycoplasma pneumoniae and Clinical Profile of Affected Patients in a Tertiary Care Hospital.
Huang et al. Evaluation of AutoLumo A2000 Chemiluminescent Immunoassay for Detection of Respiratory Syncytial Virus and Adenovirus IgM Antibodies.
Welch et al. Comparison of the Huddleson slide test with a macroscopic tube test in undulant fever
PADMAJA et al. Diagnostic Algorithm Of Covid 19 Screening And Testing-A Review.
SU1394143A1 (en) Method of detecting bacteria-carriage of typhoid fever infection

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20160702