RU2526494C1 - Method of removing human immunodeficiency virus from male's sperm - Google Patents
Method of removing human immunodeficiency virus from male's sperm Download PDFInfo
- Publication number
- RU2526494C1 RU2526494C1 RU2013112282/10A RU2013112282A RU2526494C1 RU 2526494 C1 RU2526494 C1 RU 2526494C1 RU 2013112282/10 A RU2013112282/10 A RU 2013112282/10A RU 2013112282 A RU2013112282 A RU 2013112282A RU 2526494 C1 RU2526494 C1 RU 2526494C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sperm
- hiv
- minutes
- human immunodeficiency
- immunodeficiency virus
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Настоящее изобретение касается способа удаления вируса иммунодефицита человека из спермы мужчины перед проведением вспомогательных репродуктивных технологий.The present invention relates to a method for removing human immunodeficiency virus from the sperm of a man before assisted reproductive technologies.
Выделяют три основные составляющие спермы - сперматозоиды, спермоплазму и сопутствующие ядерные клетки. Из спермы ВИЧ-инфицированных мужчин был выделен вирус, а встроенная ДНК ВИЧ обнаруживалась в сопутствующих клетках и даже в неподвижных сперматозоидах. На основании результатов известных исследований был сделан вывод, что жизнеспособные подвижные сперматозоиды, как правило, не несут в себе ВИЧ (Weigel, 1999; Pena, 2003; Gilling-Smith, 2003). Подвижные жизнеспособные сперматозоиды можно выделить из эякулята стандартизованными методами. После отделения сперматозоидов от спермоплазмы и сопутствующих клеток их промывают дважды жидкой питательной средой, а затем помещают в свежую питательную среду и инкубируют в течение 20-60 минут. За это время подвижные сперматозоиды всплывают на поверхность среды, верхний слой которой (супернатант) забирают для проведения оплодотворения. Для того чтобы убедиться в отсутствии вирусных частиц в супернатанте, его проверяют на наличие нуклеиновой кислоты ВИЧ, используя высокочувствительные методы обнаружения ВИЧ (Weigel, 2001; Gilling-Smith, 2003). Поскольку теоретически не исключено, что после обработки спермы в супернатанте может содержаться ВИЧ, важно, чтобы способ удаления ВИЧ был настолько эффективен, чтобы концентрация вируса снижалась до неопределяемых значений.There are three main components of sperm - sperm, sperm plasma and related nuclear cells. A virus was isolated from the sperm of HIV-infected men, and the integrated HIV DNA was detected in concomitant cells and even in immobile sperm. Based on the results of well-known studies, it was concluded that viable motile sperm cells, as a rule, do not carry HIV (Weigel, 1999; Pena, 2003; Gilling-Smith, 2003). Motile viable sperm can be isolated from the ejaculate using standardized methods. After separation of the sperm from the sperm plasma and associated cells, they are washed twice with a liquid nutrient medium, and then placed in a fresh nutrient medium and incubated for 20-60 minutes. During this time, motile spermatozoa float to the surface of the medium, the upper layer of which (supernatant) is taken for fertilization. In order to verify the absence of viral particles in the supernatant, it is checked for the presence of HIV nucleic acid using highly sensitive HIV detection methods (Weigel, 2001; Gilling-Smith, 2003). Since it is theoretically possible that HIV can be contained in the supernatant after sperm treatment, it is important that the method of HIV removal is so effective that the virus concentration is reduced to undetectable values.
Для удаления ВИЧ из спермы известен способ, включающий процедуру центрифугирования и инкубации (Semprini А.Е, Levi-Setti P., Bozzo М., et al. Insemination of HIV-negative women with processed semen of HIV-positive partners. Lancet 1992; 340:1317-1319). Однако данный метод не гарантирует полного удаления ВИЧ из спермы.To remove HIV from semen, a method is known comprising a centrifugation and incubation procedure (Semprini A.E., Levi-Setti P., Bozzo M., et al. Insemination of HIV-negative women with processed semen of HIV-positive partners. Lancet 1992; 340: 1317-1319). However, this method does not guarantee complete removal of HIV from semen.
Задача изобретения - исключение заражения женщины ВИЧ-инфекцией за счет полного удаления вируса иммунодефицита человека.The objective of the invention is the elimination of infection of a woman with HIV infection due to the complete removal of the human immunodeficiency virus.
Указанная задача решается с помощью способа удаления вируса иммунодефицита человека из спермы мужчины, включающего отделение подвижных сперматозоидов от спермоплазмы и сопутствующих клеток путем центрифугирования и последующей инкубации в специальных средах с целью забора супернатанта, содержащего «отмытые» сперматозоиды, в котором согласно изобретению каждый этап обработки эякулята проводится в новой стерильной пробирке, цетрифугирование проводится при 300 g в растворах Sil-Select Plus в течение 20 минут, затем осадок, содержащий сперматозоиды, аспирируется пипеткой, не задевая стенок пробирки, и инкубируется в растворе среды FertiCult Flushing medium в течение 80-90 минут.This problem is solved by a method of removing human immunodeficiency virus from a man’s sperm, including separation of motile sperm from sperm plasma and associated cells by centrifugation and subsequent incubation in special media to collect supernatant containing “washed” sperm, in which, according to the invention, each stage of ejaculate treatment carried out in a new sterile tube, centrifugation is carried out at 300 g in Sil-Select Plus solutions for 20 minutes, then a pellet containing sperm oids, pipetted without touching the walls of the tube, and incubated in a solution of FertiCult Flushing medium for 80-90 minutes.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
1. Привести семенную жидкость и все необходимые для процедуры принадлежности к температуре 37°C.1. Bring the seminal fluid and all accessories necessary for the procedure to a temperature of 37 ° C.
2. Поместить 2,5 мл 40% раствора Sil-Select Plus в стерильную центрифужную пробирку (верхний слой).2. Place 2.5 ml of a 40% Sil-Select Plus solution in a sterile centrifuge tube (top layer).
3. Поместить 2,5 мл 80% раствора Sil-Select Plus под верхний слой.3. Place 2.5 ml of an 80% Sil-Select Plus solution under the top coat.
4. Поместить 2,5 мл спермы на верхний слой.4. Place 2.5 ml of semen on the top layer.
5. Центрифугировать 20 минут при 300 g.5. Centrifuge for 20 minutes at 300 g.
6. Удалить супернатант до осадка.6. Remove the supernatant to sediment.
7. Осадок аккуратно аспирировать пипеткой (не задевая стенок пробирки), поместить в другую стерильную пробирку, а затем добавить 3 мл среды для промывки спермы FertiCult Flushing medium и ресуспендировать осадок.7. Gently aspirate the pellet with a pipette (without touching the walls of the tube), place it in another sterile tube, and then add 3 ml of FertiCult Flushing medium sperm washing medium and resuspend the pellet.
8. Центрифугировать 10 минут при 300 g.8. Centrifuge for 10 minutes at 300 g.
9. Удалить супернатант до осадка.9. Discard supernatant to sediment.
10. Осадок аккуратно аспирировать пипеткой (не задевая стенок пробирки), поместить в другую стерильную пробирку, а затем добавить 3 мл среды для промывки спермы FertiCult Flushing medium и ресуспендировать осадок.10. Gently aspirate the pellet with a pipette (without touching the walls of the tube), place it in another sterile tube, and then add 3 ml of FertiCult Flushing medium sperm washing medium and resuspend the pellet.
11. Центрифугировать 10 минут при 300 g.11. Centrifuge for 10 minutes at 300 g.
12. Удалить супернатант до осадка.12. Remove supernatant to sediment.
13. Осадок аккуратно аспирировать пипеткой (не задевая стенок пробирки) и затем поместить в другую стерильную пробирку.13. Carefully aspirate the pellet with a pipette (without touching the walls of the tube) and then place it in another sterile tube.
14. Осадок, содержащий сперматозоиды, аккуратно покрыть 2 мл среды FertiCult Flushing medium, и пробирку поместить в инкубатор под углом 45° на 80-90 минут для того, чтобы позволить наиболее подвижным сперматозоидам передвинуться в среду. Затем 0,7 мл аспирировать.14. Sediment containing sperm, carefully cover 2 ml of FertiCult Flushing medium, and place the tube in the incubator at a 45 ° angle for 80-90 minutes in order to allow the most motile sperm to move into the medium. Then 0.7 ml aspirate.
15. В случае достаточного количества и качества сперматозоидов раствор делится на 2 равные части. Первая часть доставляется в ПЦР - лабораторию сразу же после процедуры обработки для тестирования на наличие РНК ВИЧ, вторая часть немедленно подвергается криоконсервации. При получении отрицательного анализа на ВИЧ проводится искусственное оплодотворение.15. In the case of a sufficient quantity and quality of sperm, the solution is divided into 2 equal parts. The first part is delivered to the PCR laboratory immediately after the processing procedure for testing for the presence of HIV RNA, the second part is immediately subjected to cryopreservation. Upon receipt of a negative HIV test, artificial insemination is performed.
Примеры конкретного осуществления.Examples of specific implementation.
Пример 1. Пациент А. В сперме методом ПЦР было определено 32500 копий РНК ВИЧ. Проводилось центрифугирование спермы в градиентных растворах Sil-Select Plus в течение 20 минут при скорости 300 g. После центрифугирования и забора супернатанта, в осадке, содержащем подвижные сперматозоиды, было обнаружено 1200 копий РНК ВИЧ. С учетом того, что на стенках остается небольшое количество супернатанта, содержащего ВИЧ, аспирация осадка проводилась пипеткой, не задевая стенок пробирки. Осадок переносился в другую стерильную пробирку. Затем к осадку добавляли среду для промывки FertiCult Flushing medium и проводили ресуспендирование. Промывку осадка проводили дважды при скорости 300 g в течение 10 минут. После окончания промывки, в осадке, содержащем подвижные сперматозоиды, обнаружено 150 копий РНК ВИЧ. Осадок аспирировался пипеткой (не задевая стенок пробирки) и затем помещался в другую стерильную пробирку.Example 1. Patient A. In sperm, 32,500 copies of HIV RNA were determined by PCR. Sperm was centrifuged in Sil-Select Plus gradient solutions for 20 minutes at a speed of 300 g. After centrifugation and collection of the supernatant, 1,200 copies of HIV RNA were found in the pellet containing motile sperm. Considering that a small amount of HIV-containing supernatant remains on the walls, the sediment was aspirated with a pipette without touching the walls of the tube. The pellet was transferred to another sterile tube. Then, FertiCult Flushing medium was added to the pellet and resuspended. The precipitate was washed twice at a speed of 300 g for 10 minutes. After washing, 150 copies of HIV RNA were found in the sediment containing motile sperm. The pellet was aspirated with a pipette (without touching the walls of the tube) and then placed in another sterile tube.
В новой пробирке осадок, содержащий сперматозоиды, медленно покрывался 2 миллилитрами среды FertiCult Flushing medium, а затем пробирку помещали в инкубатор под углом 45° на 80 минут для того, чтобы позволить наиболее подвижным сперматозоидам передвинуться в среду. По окончании времени инкубации проводилась аспирация 0,7 мл. супернатанта. В аспирированном супернатанте было определено 34 миллиона сперматозоидов с прогрессивным движением, что является достаточным количеством для проведения вспомогательных репродуктивных технологий. Раствор был разделен на 2 равные части. Первая часть была доставлена в ПЦР - лабораторию сразу же после процедуры обработки для тестирования на наличие РНК ВИЧ, вторая часть немедленно подверглась криоконсервации. При тестировании супернатанта копии РНК ВИЧ были не найдены (заключение лаборатории - target not detected).In a new tube, the sperm-containing pellet was slowly covered with 2 milliliters of FertiCult Flushing medium, and then the tube was placed in the incubator at a 45 ° angle for 80 minutes to allow the most motile sperm to move into the medium. At the end of the incubation time, 0.7 ml was aspirated. supernatant. The aspirated supernatant identified 34 million progressive movement spermatozoa, which is sufficient for assisted reproductive technology. The solution was divided into 2 equal parts. The first part was delivered to the PCR laboratory immediately after the treatment procedure for testing for the presence of HIV RNA, the second part immediately underwent cryopreservation. When testing the supernatant, copies of HIV RNA were not found (laboratory conclusion - target not detected).
Пример 2. Пациент В. В сперме методом ПЦР было определено 53500 копий РНК ВИЧ. Проводилось центрифугирование спермы в градиентных растворах Sil-Select Plus в течение 20 минут при скорости 300 g. После центрифугирования и забора супернатанта, в осадке, содержащем подвижные сперматозоиды, было обнаружено 18000 копий РНК ВИЧ. С учетом того, что на стенках остается небольшое количество супернатанта содержащего ВИЧ, аспирация осадка проводилась пипеткой, не задевая стенок пробирки. Осадок переносился в другую стерильную пробирку. Затем к осадку добавляли среду для промывки FertiCult Flushing medium и проводили ресуспендирование. Промывку осадка проводили дважды при скорости 300 g в течение 10 минут. После окончания промывки в осадке, содержащем подвижные сперматозоиды, обнаружено 1100 копий РНК ВИЧ. Осадок аспирировался пипеткой (не задевая стенок пробирки) и затем помещался в другую стерильную пробирку.Example 2. Patient B. In sperm, 53500 copies of HIV RNA were determined by PCR. Sperm was centrifuged in Sil-Select Plus gradient solutions for 20 minutes at a speed of 300 g. After centrifugation and collection of the supernatant, 18,000 copies of HIV RNA were found in the pellet containing motile spermatozoa. Given that a small amount of the HIV-containing supernatant remains on the walls, the sediment was aspirated with a pipette without touching the walls of the tube. The pellet was transferred to another sterile tube. Then, FertiCult Flushing medium was added to the pellet and resuspended. The precipitate was washed twice at a speed of 300 g for 10 minutes. After washing was completed, 1,100 copies of HIV RNA were detected in the sediment containing motile spermatozoa. The pellet was aspirated with a pipette (without touching the walls of the tube) and then placed in another sterile tube.
В новой пробирке осадок, содержащий сперматозоиды, медленно покрывался 2 миллилитрами среды FertiCult Flushing medium, а затем пробирку помещали в инкубатор под углом 45° на 90 минут для того, чтобы позволить наиболее подвижным сперматозоидам передвинуться в среду. По окончании времени инкубации проводилась аспирация 0,7 мл супернатанта. В аспирированном супернатанте было определено 19 миллионов сперматозоидов с прогрессивным движением, что является достаточным количеством для проведения вспомогательных репродуктивных технологий. Раствор был разделен на 2 равные части. Первая часть была доставлена в ПЦР - лабораторию сразу же после процедуры обработки для тестирования на наличие РНК ВИЧ, вторая часть немедленно подверглась криоконсервации. При тестировании супернатанта копии РНК ВИЧ были не найдены (заключение лаборатории - target not detected).In a new tube, the sperm-containing pellet was slowly covered with 2 milliliters of FertiCult Flushing medium, and then the tube was placed in the incubator at a 45 ° angle for 90 minutes to allow the most motile spermatozoa to move into the medium. At the end of the incubation time, 0.7 ml of the supernatant was aspirated. In the aspirated supernatant, 19 million progressive movement spermatozoa were identified, which is sufficient for assisted reproductive technologies. The solution was divided into 2 equal parts. The first part was delivered to the PCR laboratory immediately after the treatment procedure for testing for the presence of HIV RNA, the second part immediately underwent cryopreservation. When testing the supernatant, copies of HIV RNA were not found (laboratory conclusion - target not detected).
Было проведено 52 процедуры очистки спермы от ВИЧ. Во всех случаях после очистки РНК вируса иммунодефицита человека не определялась. Поэтому указанный способ удаления вируса иммунодефицита человека из спермы мужчины можно считать эффективным и безопасным.52 sperm purification procedures for HIV were performed. In all cases, after purification, the RNA of the human immunodeficiency virus was not determined. Therefore, this method of removing the human immunodeficiency virus from the sperm of a man can be considered effective and safe.
Выше было указано, для удаления ВИЧ из спермы известен способ, включающий процедуру центрифугирования и инкубации. Как правило, инкубация при применении такого способа проводится 20-60 минут. Однако данный метод не гарантирует полного удаления ВИЧ из спермы. Это является причиной отказа в использования спермы мужчины в процедуре внутриматочной инсеминации или экстракорпорального оплодотворения с интрацитоплазматической инъекцией сперматозоида.It was indicated above that a method involving centrifugation and incubation is known to remove HIV from sperm. Typically, incubation using this method takes 20-60 minutes. However, this method does not guarantee complete removal of HIV from semen. This is the reason for the refusal to use male sperm in the procedure of intrauterine insemination or in vitro fertilization with intracytoplasmic sperm injection.
Такая ненадежность способа обусловлена недостаточным временем инкубации. Это связано с тем, что за 60-минутное время инкубации подвижные сперматозоиды всплывают на поверхность среды, но некоторое количество вируса иммунодефицита человека может не опуститься на дно пробирки и оставаться во взвеси. Необходимо отметить, что при проведении центрифугирования менее 20 минут и при скорости менее 300 g, в осадке отмечается низкая концентрация сперматозоидов, недостаточная для оплодотворения яйцеклеток. При проведении центрифугирования более 20 минут и при скорости более 300 g значительно возрастало количество копий РНК ВИЧ.Such unreliability of the method is due to insufficient incubation time. This is due to the fact that in a 60-minute incubation time, motile spermatozoa float to the surface of the medium, but a certain amount of human immunodeficiency virus may not sink to the bottom of the tube and remain in suspension. It should be noted that when centrifugation is performed for less than 20 minutes and at a speed of less than 300 g, a low sperm concentration is observed in the sediment, which is insufficient to fertilize the eggs. When centrifuging for more than 20 minutes and at a speed of more than 300 g, the number of copies of HIV RNA increased significantly.
Таким образом, предлагаемый способ может быть использован для удаления вируса иммунодефицита человека из спермы мужчины перед проведением вспомогательных репродуктивных технологий.Thus, the proposed method can be used to remove the human immunodeficiency virus from the sperm of a man before assisted reproductive technologies.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013112282/10A RU2526494C1 (en) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Method of removing human immunodeficiency virus from male's sperm |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013112282/10A RU2526494C1 (en) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Method of removing human immunodeficiency virus from male's sperm |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2526494C1 true RU2526494C1 (en) | 2014-08-20 |
Family
ID=51384872
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013112282/10A RU2526494C1 (en) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Method of removing human immunodeficiency virus from male's sperm |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2526494C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2762489C1 (en) * | 2021-04-10 | 2021-12-21 | Общество с ограниченной ответственностью "НОВЕЛЛА-К" | Method for isolating spermatozoa from aspiration and/or biopsy material from an appendage and/or testicle for use in in vitro fertilization and/or cryopreservation programs |
| RU2770818C1 (en) * | 2021-09-21 | 2022-04-22 | Общество с ограниченной ответственностью "НОВЕЛЛА-К" | Method for isolating spermatozoa from the ejaculate of patients with impaired spermatogenesis for use in in vitro fertilization and/or cryopreservation programs |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2093579C1 (en) * | 1990-02-06 | 1997-10-20 | Санорелль Фарма ГмбХ Унд Ко. | Method of purification of biological material from viruses and/or pathogenic material and a method of assay of virus and/or pathogenic material removing degree from biological material |
| US20050233300A1 (en) * | 2004-04-15 | 2005-10-20 | Daniel Imoedemhe | Method for preserving sperm |
| RU2265059C2 (en) * | 2003-08-11 | 2005-11-27 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВС и ДВ СО РАСХН) | Method for evaluation of bull-sire semen for contamination with cattle infectious rhinotracheitis virus |
| RU2472804C2 (en) * | 2003-12-01 | 2013-01-20 | Ново Нордиск Хелс Кеа Аг | Method of removing viruses from liquid composition containing factor vii |
-
2013
- 2013-03-19 RU RU2013112282/10A patent/RU2526494C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2093579C1 (en) * | 1990-02-06 | 1997-10-20 | Санорелль Фарма ГмбХ Унд Ко. | Method of purification of biological material from viruses and/or pathogenic material and a method of assay of virus and/or pathogenic material removing degree from biological material |
| RU2265059C2 (en) * | 2003-08-11 | 2005-11-27 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВС и ДВ СО РАСХН) | Method for evaluation of bull-sire semen for contamination with cattle infectious rhinotracheitis virus |
| RU2472804C2 (en) * | 2003-12-01 | 2013-01-20 | Ново Нордиск Хелс Кеа Аг | Method of removing viruses from liquid composition containing factor vii |
| US20050233300A1 (en) * | 2004-04-15 | 2005-10-20 | Daniel Imoedemhe | Method for preserving sperm |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2762489C1 (en) * | 2021-04-10 | 2021-12-21 | Общество с ограниченной ответственностью "НОВЕЛЛА-К" | Method for isolating spermatozoa from aspiration and/or biopsy material from an appendage and/or testicle for use in in vitro fertilization and/or cryopreservation programs |
| RU2770818C1 (en) * | 2021-09-21 | 2022-04-22 | Общество с ограниченной ответственностью "НОВЕЛЛА-К" | Method for isolating spermatozoa from the ejaculate of patients with impaired spermatogenesis for use in in vitro fertilization and/or cryopreservation programs |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Malvezzi et al. | Sperm quality after density gradient centrifugation with three commercially available media: a controlled trial | |
| Asghar et al. | Selection of functional human sperm with higher DNA integrity and fewer reactive oxygen species | |
| CN111088319B (en) | Inactivated virus sample RNA preservation solution and preparation method thereof | |
| RU2017142155A (en) | METHOD FOR CARRYING OUT MULTI-ANALYSIS OF RARE CELLS EXTRACTED OR SEPARATED FROM BIOLOGICAL SAMPLES BY FILTRATION | |
| RU2526494C1 (en) | Method of removing human immunodeficiency virus from male's sperm | |
| US5498520A (en) | Method for testing blood units for viral contamination | |
| CN102876810A (en) | RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) detection kit and detection method for spring viraemia of carp virus | |
| Agca et al. | Detection of mouse parvovirus in Mus musculus gametes, embryos, and ovarian tissues by polymerase chain reaction assay | |
| Alves et al. | Bovine herpesvirus 1 can impact the bovine oocyte development during in vitro maturation | |
| RU2762489C1 (en) | Method for isolating spermatozoa from aspiration and/or biopsy material from an appendage and/or testicle for use in in vitro fertilization and/or cryopreservation programs | |
| Leruez-Ville et al. | Intracytoplasmic sperm injection with microsurgically retrieved spermatozoa in azoospermic men infected with human immunodeficiency virus 1 or hepatitis C virus: the EP43 AZONECO ANRS study | |
| CN102242173B (en) | Extraction method for envelope protein of grouper iridovirus | |
| Khajavi et al. | Can Zeta sperm selection method, recover sperm with higher DNA integrity compare to density gradient centrifugation? | |
| JP2017536839A (en) | Mitochondrial recovery and concentration and its use | |
| Rahi et al. | Cross flow coupled with inertial focusing for separation of human sperm cells from semen and simulated TESE samples | |
| Nie et al. | Assisted conception does not increase the risk for mother-to-child transmission of hepatitis B virus, compared with natural conception: a prospective cohort study | |
| JP2000288082A (en) | Tube for washing and thickening sperm and method for washing and thickening sperm | |
| JP6062055B2 (en) | A safe method for preparing purified stem cell fractions | |
| RU2770818C1 (en) | Method for isolating spermatozoa from the ejaculate of patients with impaired spermatogenesis for use in in vitro fertilization and/or cryopreservation programs | |
| Aliakbari et al. | Effect of semen washing methods on diminishing the transmission of viral infections in artificial reproductive technology | |
| Viloria et al. | Processing Sperm Samples in HIV-Positive Patients | |
| Fernandes et al. | Comparative sperm recovery rate after density gradient centrifugation with two media for in vitro fertilization | |
| JP7187175B2 (en) | Nucleic acid detection method for pathogenic microorganisms | |
| RU2582914C2 (en) | Method of diagnosing abnormal chromatin packing in male sterility and diagnostic agent for determining male sterility | |
| Sheikh et al. | Herpes Simplex & Cytomegalo Viruses inflicted semen substantiates infertility among men |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170320 |