RU2582914C2 - Method of diagnosing abnormal chromatin packing in male sterility and diagnostic agent for determining male sterility - Google Patents
Method of diagnosing abnormal chromatin packing in male sterility and diagnostic agent for determining male sterility Download PDFInfo
- Publication number
- RU2582914C2 RU2582914C2 RU2014108512/15A RU2014108512A RU2582914C2 RU 2582914 C2 RU2582914 C2 RU 2582914C2 RU 2014108512/15 A RU2014108512/15 A RU 2014108512/15A RU 2014108512 A RU2014108512 A RU 2014108512A RU 2582914 C2 RU2582914 C2 RU 2582914C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sperm
- chromatin
- centrifugation
- precipitate
- ejaculate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно к области вспомогательных репродуктивных технологий, в частности для увеличения частоты наступления беременности, и может быть использовано при лечении бесплодия в программах экстракорпорального оплодотворения и гомологичной инсеминации за счет отбраковки образцов спермы, содержащих клетки с нарушенной упаковкой хроматина, и диагностики необходимости специфической терапии или восстановительных процедур при неблагоприятном прогнозе относительно эффективности вспомогательных репродуктивных технологий.The invention relates to the field of medicine and veterinary medicine, in particular to the field of assisted reproductive technologies, in particular to increase the frequency of pregnancy, and can be used in the treatment of infertility in in vitro fertilization and homologous insemination programs by rejecting semen samples containing cells with impaired chromatin packaging , and diagnosing the need for specific therapy or recovery procedures with an unfavorable prognosis regarding the effectiveness of auxiliary fertility reproductive technologies.
Известно, что снижение качества спермы обуславливает мужское бесплодие. В последние пятьдесят лет в большинстве развитых стран мира отмечено снижение качества спермы у мужчин фертильного возраста. Бесплодие мужчин приводит к росту бесплодных браков, малодетных семей, разводов и, в конечном итоге, к ухудшению демографических показателей. Удельный вес бесплодных браков в мире достигает 15%. При этом мужское бесплодие в структуре бесплодных супружеских пар составляет от 30% до 50%.It is known that a decrease in sperm quality causes male infertility. In the last fifty years, in most developed countries of the world, a decrease in sperm quality in men of fertile age has been noted. Infertility of men leads to an increase in barren marriages, small families, divorces, and, ultimately, to a deterioration in demographic indicators. The proportion of barren marriages in the world reaches 15%. At the same time, male infertility in the structure of infertile couples ranges from 30% to 50%.
Основным способом диагностики мужского бесплодия является (Лабораторная диагностика мужского бесплодия: Метод, рекомендации. - М., 1979. - 20 с.) макро- и микроскопическое исследования спермы. Этот способ позволяет провести подсчет сперматозоидов в 1 мл во всем эякуляте, определить количество подвижных сперматозоидов, процент морфологически измененных форм сперматозоидов и концентрацию лейкоцитов. Данный способ позволяет сделать вывод о видимой патологии спермы - наличии повышенного содержания лейкоцитов и эритроцитов, указывающих на воспалительные и инфекционные заболевания половых путей; наличии малого количества сперматозоидов или их полного отсутствия; наличии аномальных (патологических, дегенеративных) форм сперматозоидов; снижении процента подвижных сперматозоидов.The main way to diagnose male infertility is (Laboratory diagnosis of male infertility: Method, recommendations. - M., 1979. - 20 p.) Macro- and microscopic examination of sperm. This method allows you to count sperm in 1 ml throughout the ejaculate, to determine the number of motile sperm, the percentage of morphologically altered forms of sperm and the concentration of leukocytes. This method allows us to conclude that the visible pathology of sperm is the presence of an increased content of leukocytes and red blood cells, indicating inflammatory and infectious diseases of the genital tract; the presence of a small number of sperm or their complete absence; the presence of abnormal (pathological, degenerative) forms of sperm; a decrease in the percentage of motile sperm.
При использовании данного способа причины патологических изменений в сперме выявить не удается, следовательно, провести назначение адекватного лечения мужского бесплодия крайне затруднено.When using this method, the causes of pathological changes in sperm cannot be identified, therefore, it is extremely difficult to prescribe an adequate treatment for male infertility.
Известен (RU, патент 2118822, опубл. 1998) способ диагностики мужского бесплодия путем проточно-цитофлуориметрического анализа состояния хроматина сперматозоидов, причем состояние хроматина оценивают по интенсивности флуоресценции ядер клеток, окрашенных бромистым этидием до и после обработки гепарином, и при наличии образца спермы, в котором интенсивность флуоресценции повышена исходно более чем у 30% клеток, либо она возрастает более чем в 2 раза у более 50% клеток после обработки гепарином, диагностируют мужское бесплодие.Known (RU, patent 2118822, publ. 1998) is a method for diagnosing male infertility by flow-cytofluorimetric analysis of the state of sperm chromatin, and the state of chromatin is assessed by the fluorescence intensity of the nuclei of cells stained with ethidium bromide before and after treatment with heparin, and in the presence of a sperm sample, in in which the fluorescence intensity is increased initially in more than 30% of the cells, or it increases more than 2 times in more than 50% of the cells after treatment with heparin, male infertility is diagnosed.
Недостатком известного способа следует признать его недостаточную точность.The disadvantage of this method should be recognized as its lack of accuracy.
Известен (RU, патент 2437100, опубл. 2011) способ диагностики аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии, включающий исследование состояния хроматина с использованием флуоресцентного микроскопа и красителя. При реализации способа определяют количество сперматозоидов в 1 мл раствора, концентрацию сперматозоидов доводят до 10-50 млн/мл буфером PBS, покровные стекла покрывают слоем полилизина, проводят иммобилизацию сперматозоидов на подготовленных покровных стеклах площадью около 3×5 мм2, фиксируют и окрашивают ядра иммобилизированных сперматозоидов ДНК-связывающим флуорохромом DAPI с получением контрольных образцов, вторую часть иммобилизированных сперматозоидов обрабатывают микрококковой нуклеазой, проводят фиксацию и окрашивание ядер сперматозоидов, обработанных микрококковой нуклеазой, ДНК-связывающим флуорохромом DAPI, окрашенные препараты контрольных сперматозоидов и сперматозоидов, обработанных микрококковой нуклеазой, фотографируют с использованием микроскопа и анализируют полученные изображения путем сравнения яркости изображений сперматозоидов, причем об аномалии упаковки хроматина сперматозоида судят по количеству ДНК, расщепленной нуклеазой, относительно общего количества ДНК в контроле.Known (RU, patent 2437100, publ. 2011) is a method for diagnosing sperm chromatin packing abnormalities in male infertility, including a study of chromatin state using a fluorescence microscope and dye. When implementing the method, the number of sperm in 1 ml of solution is determined, the concentration of sperm is adjusted to 10-50 ml / ml with PBS buffer, the coverslips are coated with a polylysine layer, the sperm are immobilized on prepared coverslips with an area of about 3 × 5 mm 2 , the nuclei of the immobilized are fixed and stained sperm DNA-binding fluorochrome DAPI to obtain control samples, the second part of the immobilized sperm is treated with micrococcal nuclease, fixation and staining of nuclei c micrococcal nuclease-treated rmatozoa, DAPI DNA-binding fluorochrome, stained samples of control sperm and sperm treated with micrococcal nuclease are photographed using a microscope and the resulting images are analyzed by comparing the brightness of sperm images, and the anomalies of sperm chromatin packing are judged by sperm count, , relative to the total amount of DNA in the control.
Недостатком известного способа следует признать его недостаточную точность.The disadvantage of this method should be recognized as its lack of accuracy.
Наиболее близким аналогом разработанного способа можно признать (RU, патент 2426993, опубл. 2011) способ диагностики аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии, характеризуемый тем, что образец спермы очищают от сопутствующих соматических и недифференцированных клеток, очищенные сперматозоиды осаждают центрифугированием, промывают в буферном растворе с рН 7,6÷8,0, осадок ресуспендируют в буферном растворе с рН 7,8÷8,2 в присутствии 10÷15 мМ Трис-HCl, инкубируют при охлаждении, клетки осаждают центрифугированием с последующим промыванием осадка, промытый осадок ресуспендируют в растворе с рН 7,8-8,2 в присутствии 8,0-12 мМ Трис-HCl, к полученной суспензии добавляют микрококковую нуклеазу, образцы инкубируют при температуре от 10 до 40°С, останавливают гидролиз, с последующей гомогенизацией и повторным центрифугированием образцов с получением осадка, содержащего нерастворимый хроматин, и супернатанта, содержащего растворимый хроматин, и по процентному содержанию растворимого хроматина не менее 18,4% и нерастворимого хроматина не выше 81,4% диагностируют наличие аномалии упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии.The closest analogue of the developed method can be recognized (RU, patent 2426993, publ. 2011) as a method for diagnosing sperm chromatin packing abnormalities in male infertility, characterized in that the sperm sample is purified from concomitant somatic and undifferentiated cells, the purified sperm are precipitated by centrifugation, washed in a buffer solution with a pH of 7.6–8.0, the pellet is resuspended in a buffer solution with a pH of 7.8–8.2 in the presence of 10–15 mM Tris-HCl, incubated with cooling, the cells are pelleted by centrifugation, followed by by washing the precipitate, the washed precipitate is resuspended in a solution with a pH of 7.8-8.2 in the presence of 8.0-12 mm Tris-HCl, micrococcal nuclease is added to the resulting suspension, the samples are incubated at a temperature of 10 to 40 ° C, hydrolysis is stopped, followed by homogenization and re-centrifugation of the samples to obtain a precipitate containing insoluble chromatin, and a supernatant containing soluble chromatin, and the percentage of soluble chromatin not less than 18.4% and insoluble chromatin not higher than 81.4% diagnose the presence of anomalies in akovki chromatin of sperm in male infertility.
В данном случае критерием при определения мужского бесплодия является упаковка хроматин, хотя и измеренный со значительной ошибкой.In this case, the criterion for determining male infertility is the packing of chromatin, although measured with a significant error.
Недостатком ближайшего аналога следует признать его невысокую точность из-за малой точности определения количества сперматозоидов в исходной нативной сперме.The disadvantage of the closest analogue should be recognized as its low accuracy due to the low accuracy of determining the number of sperm in the original native sperm.
Техническая задача, решаемая посредством разработанного способа, состоит в создании диагностики аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии.The technical problem solved by the developed method is to create a diagnosis of abnormalities of sperm chromatin packing in case of male infertility.
Технический результат, достигаемый при реализации разработанного изобретения, состоит в повышении точности определения аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии.The technical result achieved by the implementation of the developed invention is to increase the accuracy of determination of sperm chromatin packing abnormalities in male infertility.
Для достижения указанного технического результата предложено в известном способе определения аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии использовать разработанный метод точного определения концентрации ДНК в эякуляте.To achieve the indicated technical result, it is proposed to use the developed method for accurately determining the concentration of DNA in the ejaculate in a known method for determining abnormalities of sperm chromatin packing in male infertility.
Реакция гидролиза ДНК экзогенной нуклеазой концентрационно зависима и изначально требует выбора соотношении ДНК : фермент, удовлетворяющего ряду условии: достоверность отбора пробы для гидролиза, достаточность количества ДНК (сперматозоидов) для корректного определения фракций после гидролиза и достаточного количества ДНК для спектрофотометрического определения. К сожалению, зачастую точность определения количества сперматозоидов в рутинных спермаграммах низкая. При подсчете концентрации клеток в микроскопической камере (типа камеры Горяева) велика ошибка при подсчете образцов с высоким содержанием клеток, что затрудняет подсчет подвижность сперматозоидов в нативной (не фиксированной) сперме.The reaction of DNA hydrolysis by exogenous nuclease is concentration dependent and initially requires a DNA: enzyme ratio that satisfies a number of conditions: reliability of sampling for hydrolysis, sufficient amount of DNA (sperm) for the correct determination of fractions after hydrolysis, and enough DNA for spectrophotometric determination. Unfortunately, the accuracy of sperm count in routine spermograms is often low. When calculating the concentration of cells in a microscopic chamber (such as a Goryaev camera), there is a large error in counting samples with a high cell content, which complicates the calculation of sperm motility in native (non-fixed) sperm.
Разработанный способ определения концентрации ДНК в эякуляте реализуют следующим образом.The developed method for determining the concentration of DNA in the ejaculate is implemented as follows.
В коническую микроцентрифужную пробирку с крышкой вносят 50 мкл эякулята и осаждают сперматозоиды в микроцентрифуге в течение 30 с при скорости вращения 3000-5000 об/мин, осадок промывают 1 раз однократным натрий-фосфатным буфером (1xPBS), затем повторно центрифугируют на микроцентрифуге в течение 30 с при скорости вращения 3000-5000 об/мин, удаляют супернатант, к осадку добавляют 1 мл 5% хлорной кислоты, кипятят на водяной бане в течение 9-11 мин с последующим осаждением материала на микроцентрифуге при скорости вращения 3000-5000 об/мин в течение 30 с. В отделенном супернатанте спектрофотометрически определяют концентрацию ДНК.50 μl of ejaculate is introduced into a conical microcentrifuge tube with a cap and the sperm are pelleted in a microcentrifuge for 30 s at a rotation speed of 3000-5000 rpm, the pellet is washed once with a single sodium phosphate buffer (1xPBS), then centrifuged again in a microcentrifuge for 30 s at a rotation speed of 3000-5000 rpm, the supernatant is removed, 1 ml of 5% perchloric acid is added to the precipitate, boiled in a water bath for 9-11 minutes, followed by precipitation of the material in a microcentrifuge at a rotation speed of 3000-5000 rpm within 30 s. In the separated supernatant, the concentration of DNA is determined spectrophotometrically.
В дальнейшем диагностику аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии проводят известным из ближайшего аналога образом.In the future, the diagnosis of sperm chromatin packing abnormalities in male infertility is carried out in a manner known from the closest analogue.
Аликвоту эякулята(10-20×106 сперматозоидов, 30-60 мкг по ДНК) переносим в коническую микроцентрифужную пробирку с крышкой, центрифугируем в микроцентрифуге 30 с при скорости 5000 об/мин. Осадок ресуспендируют в фосфатном буфере (PBS) с 5 мМ фенилметилсульфанилфторида (PMSF) и 1% Тритоном Х-100, инкубируют 5-10 мин на льду, клетки осаждают центрифугированием, осадок промывают 2 раза PBS с 5 мМ PMSF без Тритона Х-100. Полученный осадок ресуспендируют в растворе 20 мМ Трис-HCl (рН 8), 2 мМ CaCl2, 2 мМ MgCl2. Можно использовать 10 мМ Трис-HCl, однако в этом случае концентрация CaCl2, и MgCl2 должна составлять 1 мМ. К полученной суспензии добавляют микрококковую нуклеазу в диапазоне концентраций от 10 ед./мг до 50 ед./мг. Образцы инкубируют 3 мин при температуре не ниже 10 и не выше 40°С. Реакцию гидролиза останавливают добавлением ЭДТА до 10 мМ во льду, образцы гомогенизируют энергичным встряхиванием или в приборе «Вортекс» и затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5-10 мин. Полученный осадок (фракция 1) содержит нерастворимый хроматин, супернатант (фракция 2) содержит растворимый хроматин, содержание нерастворимого хроматина и растворимого хроматина определяют известными методами.An aliquot of ejaculate (10-20 × 10 6 sperm, 30-60 μg DNA) is transferred to a conical microcentrifuge tube with a cap, centrifuged in a microcentrifuge for 30 s at a speed of 5000 rpm. The pellet was resuspended in phosphate buffer (PBS) with 5 mM phenylmethylsulfanyl fluoride (PMSF) and 1% Triton X-100, incubated for 5-10 min on ice, the cells were pelleted by centrifugation, the pellet was washed 2 times with PBS with 5 mM PMSF without Triton X-100. The resulting precipitate was resuspended in a solution of 20 mm Tris-HCl (pH 8), 2 mm CaCl 2 , 2 mm MgCl 2 . You can use 10 mm Tris-HCl, however, in this case, the concentration of CaCl 2 and MgCl 2 should be 1 mm. Micrococcal nuclease is added to the resulting suspension in a concentration range from 10 units / mg to 50 units / mg. Samples are incubated for 3 min at a temperature not lower than 10 and not higher than 40 ° C. The hydrolysis reaction is stopped by adding EDTA up to 10 mM in ice, the samples are homogenized by vigorous shaking or in a Vortex apparatus, and then centrifuged at 3000 rpm for 5-10 minutes. The resulting precipitate (fraction 1) contains insoluble chromatin, the supernatant (fraction 2) contains soluble chromatin, the content of insoluble chromatin and soluble chromatin is determined by known methods.
В супернатанте можно дополнительно выделить кислоторастворимый хроматин путем добавления к супернатанту, содержащему растворимый хроматин, 5% HClO4. Полученную суспензию кипятят 15 мин и центрифугируют. Можно кипятить суспензию 10 мин. После центрифугирования концентрацию ДНК, характеризующую кислоторастворимый хроматин, определяют на спектрофотометре.In the supernatant, acid-soluble chromatin can be further isolated by adding 5% HClO 4 to the supernatant containing soluble chromatin. The resulting suspension is boiled for 15 minutes and centrifuged. You can boil the suspension for 10 minutes. After centrifugation, the concentration of DNA characterizing acid-soluble chromatin is determined on a spectrophotometer.
Используемый при реализации способа эякулят должен быть или свежим, или быть замороженным с криопротектором, или хранимый в холодильнике непосредственно после забора не свыше одних суток.The ejaculate used in the implementation of the method must be either fresh or frozen with a cryoprotectant, or stored in the refrigerator immediately after collection for no more than one day.
При наличии в семенной жидкости соматических клеток более 5% желательно предварительно провести очистку эякулята. Эта операция может быть проведена с использованием буфера, содержащего 0,5% SDS.If there is more than 5% somatic cells in the seminal fluid, it is advisable to pre-purify the ejaculate. This operation can be carried out using a buffer containing 0.5% SDS.
Экспериментально установлено, что использование нового приема определения концентрации сперматозоидов позволяет повысить точность разработанного способа примерно на 30-40%.It was experimentally established that the use of a new method for determining the concentration of sperm can increase the accuracy of the developed method by about 30-40%.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014108512/15A RU2582914C2 (en) | 2014-03-06 | 2014-03-06 | Method of diagnosing abnormal chromatin packing in male sterility and diagnostic agent for determining male sterility |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014108512/15A RU2582914C2 (en) | 2014-03-06 | 2014-03-06 | Method of diagnosing abnormal chromatin packing in male sterility and diagnostic agent for determining male sterility |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014108512A RU2014108512A (en) | 2015-09-20 |
| RU2582914C2 true RU2582914C2 (en) | 2016-04-27 |
Family
ID=54147387
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014108512/15A RU2582914C2 (en) | 2014-03-06 | 2014-03-06 | Method of diagnosing abnormal chromatin packing in male sterility and diagnostic agent for determining male sterility |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2582914C2 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2118822C1 (en) * | 1997-02-24 | 1998-09-10 | Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта РАМН | Method of the male sterility diagnosis |
| RU2328736C1 (en) * | 2007-02-01 | 2008-07-10 | Любовь Федоровна Курило | Method of cytological diagnostics of spematogenesis disorders |
| RU2362167C1 (en) * | 2008-04-16 | 2009-07-20 | Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Way of diagnostics of male sterility |
| RU2426993C2 (en) * | 2009-09-25 | 2011-08-20 | Глеб Иванович Кирьянов | Diagnostic technique for abnormal chromatin packaging in male infertility |
| RU2437100C1 (en) * | 2010-05-18 | 2011-12-20 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова | Diagnostic technique for abnormal chromatin packaging in male infertility |
-
2014
- 2014-03-06 RU RU2014108512/15A patent/RU2582914C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2118822C1 (en) * | 1997-02-24 | 1998-09-10 | Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта РАМН | Method of the male sterility diagnosis |
| RU2328736C1 (en) * | 2007-02-01 | 2008-07-10 | Любовь Федоровна Курило | Method of cytological diagnostics of spematogenesis disorders |
| RU2362167C1 (en) * | 2008-04-16 | 2009-07-20 | Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Way of diagnostics of male sterility |
| RU2426993C2 (en) * | 2009-09-25 | 2011-08-20 | Глеб Иванович Кирьянов | Diagnostic technique for abnormal chromatin packaging in male infertility |
| RU2437100C1 (en) * | 2010-05-18 | 2011-12-20 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова | Diagnostic technique for abnormal chromatin packaging in male infertility |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JORDI RIBAS-MAYNOU et al. Double Stranded Sperm DNA Breaks, Measured by Comet Assay, Are Associated with Unexplained Recurrent Miscarriage in Couples without a Female Factor. PLoS One. 2012; 7(9). e44679. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2014108512A (en) | 2015-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dieamant et al. | Semen parameters in men with varicocele: DNA fragmentation, chromatin packaging, mitochondrial membrane potential, and apoptosis | |
| Feijó et al. | Diagnostic accuracy of sperm chromatin dispersion test to evaluate sperm deoxyribonucleic acid damage in men with unexplained infertility | |
| Malvezzi et al. | Sperm quality after density gradient centrifugation with three commercially available media: a controlled trial | |
| Sellami et al. | Assessment of chromatin maturity in human spermatozoa: useful aniline blue assay for routine diagnosis of male infertility | |
| Jeyendran et al. | Selecting the most competent sperm for assisted reproductive technologies | |
| Enciso et al. | The ability of sperm selection techniques to remove single-or double-strand DNA damage | |
| Sivanarayana et al. | Sperm DNA fragmentation assay by sperm chromatin dispersion (SCD): correlation between DNA fragmentation and outcome of intracytoplasmic sperm injection | |
| Pinto et al. | Sperm selection strategies and their impact on assisted reproductive technology outcomes | |
| Hoogendijk et al. | A novel approach for the selection of human sperm using annexin V-binding and flow cytometry | |
| Zahedi et al. | Zeta potential vs apoptotic marker: which is more suitable for ICSI sperm selection? | |
| Ortega‐Ferrusola et al. | Flow cytometry in Spermatology: A bright future ahead | |
| Sá et al. | Sperm DNA fragmentation is related to sperm morphological staining patterns | |
| Štiavnická et al. | Non-invasive approaches to epigenetic-based sperm selection | |
| Faduola et al. | Sperm chromatin structure assay results in Nigerian men with unexplained infertility | |
| Liu et al. | Clinical value of sperm DNA damage should be assessed in motile sperm fraction rather than whole ejaculated sperm | |
| Martínez et al. | Sperm DNA fragmentation and male age: results of in vitro fertilization treatments | |
| JP6301310B2 (en) | Method for detecting intracellular infectious agents in sperm cells | |
| RU2437100C1 (en) | Diagnostic technique for abnormal chromatin packaging in male infertility | |
| RU2582914C2 (en) | Method of diagnosing abnormal chromatin packing in male sterility and diagnostic agent for determining male sterility | |
| RU2426993C2 (en) | Diagnostic technique for abnormal chromatin packaging in male infertility | |
| RU2595838C1 (en) | Method of determining anomalies of human spermatozoon chromatin packing in male infertility using biomedical test system | |
| Sereshki et al. | Can the Decreased Expression of Human Leukocyte Antigen Class Ⅰ and Ⅱ by Spermatozoa Lead to Recurrent Spontaneous Abortion? | |
| Fasano et al. | Comparison of sperm preparation methods to improve the recovery of mature spermatozoa in sub-fertile males | |
| WO2017156844A1 (en) | Kit for evaluating sperm quality after in vitro capacitation and method of use thereof | |
| Lee et al. | P-029 sperm DNA fragmentation measured by novel sperm chromatin dispersion-based assay is associated with semen parameter and embryo quality after IVF |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160418 |