RU2524435C1 - Method of production of bacterial concentrate and its application as biologically active food supplement or inoculum for direct application for kurunga - Google Patents
Method of production of bacterial concentrate and its application as biologically active food supplement or inoculum for direct application for kurunga Download PDFInfo
- Publication number
- RU2524435C1 RU2524435C1 RU2012156993/10A RU2012156993A RU2524435C1 RU 2524435 C1 RU2524435 C1 RU 2524435C1 RU 2012156993/10 A RU2012156993/10 A RU 2012156993/10A RU 2012156993 A RU2012156993 A RU 2012156993A RU 2524435 C1 RU2524435 C1 RU 2524435C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacterial concentrate
- lactobacillus
- symbiotic
- nutrient medium
- inoculum
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии и молочной промышленности и может быть использовано для приготовления бактериальных концентратов, применяемых в качестве биологически активной добавки к пище, и закваски прямого внесения при производстве гетероферментативного продукта - курунга.The present invention relates to biotechnology and the dairy industry and can be used for the preparation of bacterial concentrates used as biologically active food additives, and for direct starter culture in the production of a heterofermentative product - kurung.
Известен способ получения закваски для приготовления кисломолочного напитка типа «Курунга», предусматривающий ферментацию обезжиренного молока кефирной грибковой закваской и хлебными крошками в соотношении 1,5:0,5 в течение 8 часов до образования сгустка кислотностью 120°Т в деревянной таре (см. RU №2059380, А23С 9/12, опубл. 10.05.96, бюл. №13).There is a method of producing starter culture for preparing a fermented milk drink of the Kurung type, which provides for the fermentation of skim milk with kefir fungal yeast and bread crumbs in a ratio of 1.5: 0.5 for 8 hours until a clot with an acidity of 120 ° T in a wooden container (see RU No. 2059380, A23C 9/12, publ. 05/10/96, bull. No. 13).
Однако кислотность продукта, полученного по вышеуказанному способу, низкая и не обеспечивает соответствие органолептическим свойствам курунги, которая должна иметь кислотность 180-200°Т. Следует отметить, что хлебные крошки являются источниками дрожжей Saccharomyces cere-visiae, не характерных для микрофлоры курунги. Данные о предпочтительном культивировании закваски в деревянной таре свидетельствуют о нестабильности симбиоза микрофлоры кефирной грибковой закваски и хлебных крошек. Предлагаемая продолжительность культивирования закваски - 8 часов, недостаточна для достижения наиболее активной стадии развития лактобактерий и дрожжей, продуцирующих антибиотические вещества, витамины и др.However, the acidity of the product obtained by the above method is low and does not ensure compliance with the organoleptic properties of karung, which should have an acidity of 180-200 ° T. It should be noted that breadcrumbs are sources of Saccharomyces cere-visiae yeast that are not characteristic of kurunga microflora. The data on the preferred cultivation of the starter culture in a wooden container indicate the instability of the symbiosis of the microflora of kefir fungal yeast and bread crumbs. The proposed duration of cultivation of the starter culture is 8 hours, insufficient to achieve the most active stage of development of lactobacilli and yeast producing antibiotic substances, vitamins, etc.
В связи с указанными причинами известный способ не позволяет получить закваску с характерными для курунги качественными показателями. Кроме этого вышеуказанный способ не обеспечивает стойкости заквасок к длительному хранению.In connection with these reasons, the known method does not allow to obtain a starter culture with characteristic quality indicators for karung. In addition, the above method does not provide resistance to starter cultures for long-term storage.
Известен способ приготовления бактериального концентрата, предусматривающий приготовление питательной среды на основе молочной сыворотки, внесение инокулята, культивирование, раскисление питательной среды, отделение полученной биомассы (см. SU 1082371 А, А23С 9/12; C12N 1/20, 30.03.84)A known method of preparing a bacterial concentrate, comprising the preparation of a nutrient medium based on whey, inoculum, cultivation, deoxidation of the nutrient medium, separation of the obtained biomass (see SU 1082371 A, A23C 9/12;
При использовании вышеуказанного способа в питательную среду вносят культуру уксуснокислых бактерий, после чего инокулируют молочнокислыми стрептококками, что не обеспечивает в готовом продукте необходимую кислотность, содержание спирта и летучих органических соединений.When using the above method, a culture of acetic acid bacteria is introduced into the nutrient medium, after which they are inoculated with lactic streptococci, which does not provide the required acidity, alcohol content and volatile organic compounds in the finished product.
Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является способ получения симбиотического бактериального концентрата, предусматривающий приготовление питательной среды на основе творожной сыворотки и картофельного отвара, внесение симбиотической закваски, полученной методом культивирования кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий (болгарской и ацидофильной палочек) при температуре (30±2)°С в течение 2-3 суток, накопление биомассы, раскисление питательной среды, отделение полученной биомассы, смешивание с защитной средой, розлив, замораживание. Кефирная грибковая закваска и термофильные лактобактерии могут быть использованы в следующих соотношениях 1:0,5:0,5 или 3:0,5:0,5 (см. RU 2287939 С2, А23С 9/12, 23.12.2004).The closest in technical essence to the present invention is a method for producing a symbiotic bacterial concentrate, which involves preparing a nutrient medium based on cottage cheese whey and potato broth, introducing a symbiotic starter culture obtained by cultivating kefir fungal starter culture and thermophilic lactobacilli (Bulgarian and acidophilus sticks) at a temperature of (30 ± 2) ° С for 2-3 days, biomass accumulation, deoxidation of the nutrient medium, separation of the obtained biomass, cm Shivani with a protective environment, bottling, freezing. Kefir fungal starter and thermophilic lactobacilli can be used in the following ratios 1: 0.5: 0.5 or 3: 0.5: 0.5 (see RU 2287939 C2, A23C 9/12, 12/23/2004).
К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании вышеуказанного способа, принятого за прототип, относится то, что в известном способе получения бактериального концентрата требуется длительное культивирование симбиотической закваски в течение 2-3 суток для получения оптимальной рН среды, а также небольшой выход биомассы.For reasons that impede the achievement of the following technical result when using the above method adopted as a prototype, the known method for producing a bacterial concentrate requires long-term cultivation of symbiotic starter culture for 2-3 days to obtain the optimal pH of the medium, as well as a small biomass yield .
Таким образом, при производстве симбиотического бактериального концентрата основной задачей является совершенствование условий получения симбиотической закваски и состава питательной среды для повышения эффективности технологии.Thus, in the production of symbiotic bacterial concentrate, the main task is to improve the conditions for obtaining symbiotic starter culture and the composition of the nutrient medium to increase the efficiency of the technology.
Технический результат предлагаемого изобретения заключается в сокращении продолжительности получения симбиотической закваски, повышении выхода биомассы и сохранении стабильности микрофлоры бактериального концентрата при длительном хранении.The technical result of the invention is to reduce the duration of the production of symbiotic starter culture, increase the biomass yield and maintain the stability of the microflora of the bacterial concentrate during long-term storage.
Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения бактериального концентрата, предусматривающем приготовление питательной среды на основе творожной сыворотки, внесение симбиотической закваски, полученной методом культивирования кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus при температуре (30±2)°C, накопление биомассы, раскисление питательной среды, отделение полученной биомассы и розлив, согласно изобретению в питательную среду вносят ржаную муку в количестве (2±0,5)% от объема питательной среды, в симбиотическую закваску дополнительно вводят Lactobacillus helveticus, при этом соотношение кефирной грибковой закваски, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus helveticus составляет 1:0,5:0,5:1 соответственно, культивирование симбиотической закваски ведут в течение 8-10 ч.The specified technical result is achieved by the fact that in the method for producing a bacterial concentrate, which provides the preparation of a nutrient medium based on cottage cheese whey, the introduction of a symbiotic starter culture obtained by cultivating kefir fungal starter culture and thermophilic lactobacilli Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus at a temperature of (30 ± 2) ° C, accumulation of biomass, deoxidation of the nutrient medium, separation of the resulting biomass and bottling, according to the invention, rye flour is added to the nutrient medium in an amount of (2 ± 0.5)% of the growth of the nutrient medium, Lactobacillus helveticus is additionally introduced into the symbiotic sourdough, while the ratio of kefir fungal sourdough, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus helveticus is 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, the cultivation of the symbiotic sourdough is carried out for 8-10 hours
Кроме того, особенность способа заключается в том, что жидкий бактериальный концентрат применяется в качестве биологически активной добавки к пище.In addition, a feature of the method is that a liquid bacterial concentrate is used as a biologically active food supplement.
Кроме того, особенность способа заключается в том, что замороженный бактериальный концентрат применяется в качестве закваски прямого внесения.In addition, a feature of the method lies in the fact that the frozen bacterial concentrate is used as a direct starter culture.
Отличительными признаками заявляемого изобретения являются количественный и качественный состав симбиотической закваски, а именно дополнительное введение в нее культуры Lactobacillus helveticus, оптимальное соотношение кефирной грибковой закваски Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus helveticus составляет 1:0,5:0,5:1 соответственно, что позволяет достичь оптимальной активной кислотности за 8-10 ч культивирования, а также внесение в питательную среду (2±0,5)% ржаной муки для активизации роста дрожжей.Distinctive features of the claimed invention are the quantitative and qualitative composition of the symbiotic starter culture, namely, the additional introduction of Lactobacillus helveticus culture into it, the optimal ratio of kefir fungal starter culture Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus helveticus is 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, which allows to achieve optimal active acidity in 8-10 hours of cultivation, as well as introducing into the nutrient medium (2 ± 0.5)% rye flour to activate the growth of yeast.
Кроме того, отличительной особенностью заявляемого изобретения является применение жидкого бактериального концентрата, полученного предлагаемым способом в качестве биологически активной добавки к пище, а замороженного бактериального концентрата в качестве закваски прямого внесения.In addition, a distinctive feature of the claimed invention is the use of a liquid bacterial concentrate obtained by the proposed method as a biologically active food supplement, and a frozen bacterial concentrate as a direct starter culture.
Для осуществления заявляемого способа были проведены экспериментальные исследования.For the implementation of the proposed method, experimental studies were conducted.
На первом этапе исследований авторами была изучена возможность сокращения продолжительности приготовления симбиотической закваски. Для этого при формировании микробного консорциума к комбинации кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий L.bulgaricus, L.acidophilus, взятых в соотношении 1:0,5:0,5 соответственно, добавили активный кислообразователь L.helveticus.At the first stage of the research, the authors studied the possibility of reducing the duration of the preparation of symbiotic starter culture. For this, during the formation of a microbial consortium, the active acidifier L.helveticus was added to the combination of kefir fungal starter culture and thermophilic lactobacilli L.bulgaricus, L.acidophilus, taken in a ratio of 1: 0.5: 0.5, respectively.
Известно, что L.helveticus встречается в составе естественно сложившихся популяций кисломолочных продуктов гетероферментативного брожения и находится в симбиозе с другими представителями их микрофлоры. Культура характеризуется высокой протеолитической активностью и скоростью свертывания молока.It is known that L.helveticus is found in naturally formed populations of fermented milk products of heteroenzymatic fermentation and is in symbiosis with other representatives of their microflora. The culture is characterized by high proteolytic activity and milk coagulation rate.
Результаты исследований представлены в таблице 1.The research results are presented in table 1.
Из таблицы 1 видно, что динамика титруемой и активной кислотности пропорциональна увеличению дозы L.helveticus в комбинированной закваске. Так, в опытах 1:0,5:0,5:1 и 1:0,5:0,5:1,5 титруемая кислотность за 8-10 ч достигла 120-140°Т, в контроле этот показатель составил 70°Т.From table 1 it can be seen that the dynamics of titratable and active acidity is proportional to the increase in the dose of L.helveticus in the combined starter culture. So, in experiments 1: 0.5: 0.5: 1 and 1: 0.5: 0.5: 1.5 the titratable acidity reached 120-140 ° T in 8-10 hours, in the control this indicator was 70 ° T.
При этом создается оптимальная активность среды (рН), способствующая росту дрожжей, так в опыте 1:0,5:0,5:1 количество дрожжей, сбраживающих лактозу, достигло 8·106 к.о.е./см3, не сбраживающих лактозу, - 4·104 к.о.е./см3. Дальнейшее повышение дозы L.helveticus приводило к уменьшению количества дрожжей.This creates the optimal activity of the medium (pH), which promotes the growth of yeast, so in the experiment 1: 0.5: 0.5: 1, the number of yeast fermenting lactose reached 8 · 10 6 cfu / cm 3 , not fermenting lactose - 4 · 10 4 cfu / cm 3 . A further increase in the dose of L.helveticus led to a decrease in the number of yeast.
Также во всех сочетаниях наблюдалось незначительное снижение содержания мезофильных лактобактерий, связанное с уменьшением количества кислотонеустойчивых мезофильных стрептокков.Also, in all combinations, a slight decrease in the content of mesophilic lactobacilli was observed, associated with a decrease in the number of acid-unstable mesophilic streptococci.
Перспективы совершенствования формируемого микробного консорциума заключаются в изучении внеклеточных метаболитов, синтезируемых микроорганизмами. В опыте с соотношением кефирной грибковой закваски, L.acidophilus, L.bulgaricus и L.helveticus, взятых в соотношении 1:0,5:0,5:1 соотвественно, наблюдается наиболее активное развитие спиртового брожения. Сбалансированное течение молочнокислого и спиртового брожения в микробном консорциуме способствует формированию характерных для гетероферментативного продукта курунга органолептических свойств.The prospects for improving the formed microbial consortium are the study of extracellular metabolites synthesized by microorganisms. In the experiment with the ratio of kefir fungal yeast, L. acidophilus, L. bulgaricus and L. helveticus, taken in a ratio of 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, the most active development of alcoholic fermentation is observed. The balanced course of lactic acid and alcoholic fermentation in the microbial consortium contributes to the formation of organoleptic properties characteristic of the heteroenzymatic Kurung product.
Протеолитическая активность может изменяться в зависимости от комбинации с другими культурами. Поэтому при подборе штаммов молочнокислых бактерий для создания бактериальных концентратов особенно важно учитывать помимо других показателей протеолитическую активность. Продукты протеолитического распада белков, в первую очередь аминокислоты, при накапливании в процессе ферментации молока оказывают значительное влияние на формирование консистенции, вкуса и запаха, а также биологическую ценность.Proteolytic activity may vary depending on combination with other cultures. Therefore, when selecting strains of lactic acid bacteria to create bacterial concentrates, it is especially important to consider proteolytic activity in addition to other indicators. The products of proteolytic decomposition of proteins, primarily amino acids, when accumulated during the fermentation of milk, have a significant effect on the formation of consistency, taste and smell, as well as biological value.
Согласно данным таблицы 1 между дозой L.helveticus скоростью свертывания молока и протеолитической активностью микробных консорциумов существует прямая зависимость. Наибольшая концентрация тирозина 165 и 185 мкг/мл была обнаружена в опытах 1:0.5:0.5:1 и 1:0.5:0.5:1,5 соответственно и наименьшая - в опыте 1:0.5:0.5 (прототип) - 155 мкг/мл. Повышение протеолитической активности микробных консорциумов способствует образованию характерного для курунги мелкодисперсного сгустка, в контроле сгусток имел более плотную консистенцию.According to table 1, there is a direct correlation between the dose of L.helveticus, the rate of milk coagulation and the proteolytic activity of microbial consortia. The highest tyrosine concentrations of 165 and 185 μg / ml were detected in experiments 1: 0.5: 0.5: 1 and 1: 0.5: 0.5: 1.5, respectively, and the lowest in experiments 1: 0.5: 0.5 (prototype) - 155 μg / ml. An increase in the proteolytic activity of microbial consortia promotes the formation of a fine clot characteristic of karung, in the control the clot had a denser consistency.
Таким образом, наиболее оптимальным соотношением кефирной грибковой закваски, L.bulgaricus, L.acidophilus, L.helveticus является 1:0,5:0,5:1 соответственно. Выбранное соотношение способствует увеличению количества дрожжей, сбраживающих лактозу, параллельному развитию молочнокислого и спиртового брожения, свойственному курунге, и обеспечивает достижение оптимальной рН среды за 8-10 ч, что сокращает продолжительность получения симбиотической закваски.Thus, the most optimal ratio of kefir fungal yeast, L.bulgaricus, L. acidophilus, L. helveticus is 1: 0.5: 0.5: 1, respectively. The selected ratio contributes to an increase in the number of yeast fermenting lactose, to the parallel development of lactic and alcoholic fermentation, characteristic of kurung, and ensures the achievement of an optimal pH of the medium in 8-10 hours, which reduces the duration of the production of symbiotic yeast.
Далее были проведены исследования по разработке жидкого бактериального концентрата на основе полученной симбиотической закваски.Next, studies were conducted to develop a liquid bacterial concentrate based on the resulting symbiotic sourdough.
Для приготовления питательной среды была использована творожная сыворотка, которая является наиболее сбалансированным и доступным источником углеродного и азотистого питания для развития молочнокислых бактерий и дрожжей.To prepare the nutrient medium, curd whey was used, which is the most balanced and affordable source of carbon and nitrogen nutrition for the development of lactic acid bacteria and yeast.
Для стимулирования роста дрожжей, не сбраживающих лактозу, в питательную среду для наращивания биомассы симбиотической закваски вводили ржаную муку.To stimulate the growth of yeast, not fermenting lactose, rye flour was introduced into the nutrient medium to increase the biomass of the symbiotic yeast.
Ржаная мука содержит все питательные вещества (углеводы, белковые вещества, минеральные вещества, витамины), необходимые для развития микрофлоры симбиотической закваски. Углеводы ржаной муки состоят из клетчатки, пентозанов, гемицеллюлоз, крахмала, декстринов, мальтозы, глюкозы и других сахаров. Значительная часть полисахаридов и белковых веществ являются водорастворимыми.Rye flour contains all the nutrients (carbohydrates, protein, minerals, vitamins) necessary for the development of microflora of symbiotic starter culture. Carbohydrates of rye flour are composed of fiber, pentosans, hemicelluloses, starch, dextrins, maltose, glucose and other sugars. A significant part of polysaccharides and protein substances are water soluble.
По аминокислотному составу белки ржаной муки характеризуются высоким содержанием незаменимых аминокислот - лизина, аргинина и треонина.By amino acid composition, rye flour proteins are characterized by a high content of essential amino acids - lysine, arginine and threonine.
Для контроля использовали питательную среду с добавлением 7-10% картофельного отвара (прототип). В качестве инокулята в опыте использовали симбиотическую закваску, состоящую из кефирной грибковой закваски, L.acidophilus, L.bulgaricus и L.helveticus, взятых в соотношении 1:0,5:0,5:1 соответственно. Результаты исследования количественного учета микроорганизмов биомассы, полученных на питательных средах с различной дозой ржаной муки, представлены на фиг.1а и 1б.For control, we used a nutrient medium with the addition of 7-10% of potato broth (prototype). In the experiment, we used a symbiotic starter culture consisting of kefir fungal starter culture, L. acidophilus, L. bulgaricus and L. helveticus, taken in the ratio 1: 0.5: 0.5: 1, respectively. The results of the study of the quantitative accounting of microorganisms of biomass obtained on nutrient media with different doses of rye flour are presented in figa and 1b.
Количественный учет дрожжей биомассы симбиотической закваски свидетельствует (фиг.1а), что внесение ржаной муки стимулирует рост дрожжевой микрофлоры. Так, внесение (2±0,5)% ржаной муки активизирует рост дрожжей, не сбраживающих лактозу, и повышает количество клеток до 1·1010 к.о.е./см3. Также наблюдался активный рост термофильных и мезофильных лактобактерий (фиг.1б). Вероятно, это связано с тем, что некоторые лактобактерии, входящие в состав формируемой симбиотической закваски, L.acidophilus, L.helveticus, L.casei, L.plantarum и др. обладают мальтазной активностью.Quantitative accounting of yeast biomass of symbiotic starter culture indicates (figa) that the introduction of rye flour stimulates the growth of yeast microflora. Thus, the introduction of (2 ± 0.5)% rye flour activates the growth of yeast that do not ferment lactose, and increases the number of cells to 1 · 10 10 cfu / cm 3 . Active growth of thermophilic and mesophilic lactobacilli was also observed (Fig. 1b). This is probably due to the fact that some lactobacilli that are part of the formed symbiotic sourdough L.acidophilus, L.helveticus, L.casei, L.plantarum and others have maltase activity.
Дальнейшее увеличение дозы ржаной муки до 3% оказывает несколько угнетающее действие на развитие микроорганизмов симбиотической закваски.A further increase in the dose of rye flour to 3% has a somewhat depressing effect on the development of microorganisms of symbiotic sourdough.
Изучение морфологических особенностей колоний микроорганизмов в опытах показали, что коллоидные свойства пентозанов и белков ржаной муки повышают вязкость системы и способствуют когезии клеток микроорганизмов (фиг.2).The study of the morphological features of the colonies of microorganisms in experiments showed that the colloidal properties of pentosans and rye flour proteins increase the viscosity of the system and promote cohesion of microorganism cells (figure 2).
Наиболее ярко когезия микробных клеток проявляется в питательной среде с (2±0,5)% ржаной муки. На фиг.2в видны большие скопления клеток дрожжей и лактобактерий, что свидетельствует о когезии клеток в микробном консорциуме. Следует отметить, меньшую агрегацию дрожжей в контроле (прототип) и опыте с 1% ржаной муки (фиг.2а и фиг.2б).The cohesion of microbial cells is most pronounced in a nutrient medium with (2 ± 0.5)% rye flour. Figure 2c shows large accumulations of yeast and lactobacillus cells, indicating cell cohesion in the microbial consortium. It should be noted less yeast aggregation in the control (prototype) and experience with 1% rye flour (figa and fig.2b).
В питательной среде с 3% ржаной муки (фиг.2г) были обнаружены мелкие клетки дрожжей. Очевидно, что увеличение дозы ржаной муки выше 2,5% отрицательно влияет на их развитие, хотя и способствует агрегации клеток микробного консорциума. Вероятно, это связано с высокой концентрацией сухих веществ в питательной среде и коллоидными свойствами крахмала. Известно, что преобладающее большинство бактерий и дрожжей являются гидрофитами.In a nutrient medium with 3% rye flour (Fig. 2d), small yeast cells were detected. Obviously, an increase in the dose of rye flour above 2.5% negatively affects their development, although it contributes to the aggregation of microbial consortium cells. This is probably due to the high concentration of solids in the nutrient medium and the colloidal properties of starch. The vast majority of bacteria and yeast are known to be hydrophytes.
Из данных фиг.3 видно, что внесение (2±0,5)% ржаной муки обеспечивает максимальное по сравнению с другими опытами увеличение оптической плотности 0,98 ед., превышающей на 0,55 ед. значение оптической плотности в контрольном опыте. Выход биомассы инокулята через 22-24 часа, культивируемой на питательной среде с (2±0,5)% ржаной муки, составил 27 г/л, в контроле - 16,6 г/л.From the data of figure 3 it is seen that the introduction of (2 ± 0.5)% rye flour provides a maximum in comparison with other experiments, the increase in optical density of 0.98 units, exceeding 0.55 units. the value of optical density in the control experiment. The yield of inoculum biomass after 22-24 hours, cultivated in a nutrient medium with (2 ± 0.5)% rye flour, was 27 g / l, in the control - 16.6 g / l.
Таким образом, оптимальным количеством ржаной муки, вносимой в питательную среду, является (2±0,5)%, обеспечивающим высокий выход биомассы и активный рост дрожжей и лактобактерий.Thus, the optimal amount of rye flour introduced into the nutrient medium is (2 ± 0.5)%, providing a high biomass yield and active growth of yeast and lactobacilli.
Микробный консорциум дает бактериальной клетке определенные преимущества, например повышение биохимической активности, а адаптация к факторам внешней среды обеспечивается механизмами, гарантирующими стабильность микробного консорциума. К таким механизмам относятся межклеточная когезия и адгезия бактерий.A microbial consortium gives certain advantages to a bacterial cell, for example, an increase in biochemical activity, and adaptation to environmental factors is ensured by mechanisms that guarantee the stability of the microbial consortium. Such mechanisms include intercellular cohesion and bacterial adhesion.
В таблице 2 представлены результаты исследования адгезивных свойств биомассы микробного консорциума, состоящего из кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий L.acidophilus, L.bulgaricus и L.helveticus, взятых в соотношении 1:0,5:0,5:1 соответственно, полученных на различных питательных средах: с добавлением (2±0,5)% ржаной муки и 7-10% картофельного отвара.Table 2 presents the results of the study of the adhesive properties of the biomass of a microbial consortium consisting of kefir fungal yeast and thermophilic lactobacilli L.acidophilus, L.bulgaricus and L.helveticus, taken in a ratio of 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, obtained on various nutrient media: with the addition of (2 ± 0.5)% rye flour and 7-10% of potato broth.
Представленные в таблице 2 данные свидетельствуют, что внесение ржаной муки в питательную среду для наращивания биомассы микробного консорциума повышает его адгезивные свойства, о чем свидетельствует индекс адгезивности (ИАМ) 5,4, а также средний показатель адгезии (СПА) 4,6 и коэффициент участия эритроцитов в адгезивном процессе (КУЭ) 85%.The data presented in table 2 indicate that the introduction of rye flour in a nutrient medium to increase the biomass of the microbial consortium increases its adhesive properties, as evidenced by the adhesion index (IAM) of 5.4, as well as the average adhesion index (SPA) of 4.6 and the participation coefficient erythrocytes in the adhesive process (CUE) 85%.
На основании этих данных можно считать, что изменение адгезивности связаны с повышением концентрации сухих веществ питательной среды и процессами формирования микробного консорциума. В состав микробного консорциума включены микроорганизмы, имеющие различные температурные оптимумы и устойчивость к активности среды (рН). Несмотря на отсутствие оптимальных условий популяции этих микроорганизмов активно развиваются в создаваемом микробном консорциуме. Очевидно, что микроорганизмы в ответ на экстремальные условия культивирования включают эволюционно выработанные механизмы адаптации к изменениям окружающей среды, выходящим за пределы толерантности для данного вида.Based on these data, we can assume that the change in adhesiveness is associated with an increase in the concentration of solids of the nutrient medium and the processes of formation of the microbial consortium. The composition of the microbial consortium includes microorganisms having different temperature optima and resistance to environmental activity (pH). Despite the lack of optimal conditions, the populations of these microorganisms are actively developing in the microbial consortium being created. It is obvious that microorganisms in response to extreme cultivation conditions include evolutionarily developed mechanisms of adaptation to environmental changes that go beyond tolerance for this species.
Присутствие в питательной среде с ржаной мукой твердых частиц клетчатки способствует иммобилизации микроорганизмов на их поверхностях. В составе агрегатов микроорганизмы находятся в тесном соседстве и погружены в матрикс, состоящий из поверхностных клеточных структур, экзомета-болитов и адсорбированных коллоидных компонентов ржаной муки. Матрикс не только пространственно удерживает микроорганизмы, но связывает их между собой, защищая от неблагоприятных физико-химических факторов, обеспечивая в целом стабильный сбалансированный состав микробного консорциума.The presence of solid particles of fiber in a nutrient medium with rye flour promotes the immobilization of microorganisms on their surfaces. As part of the aggregates, microorganisms are in close proximity and immersed in a matrix consisting of surface cell structures, exometa-bolites and the adsorbed colloidal components of rye flour. The matrix not only spatially holds microorganisms, but also binds them together, protecting against adverse physicochemical factors, providing a generally stable balanced composition of the microbial consortium.
Антибиотическую активность жидкого бактериального концентрата по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам определяли методом последовательных разведений по величине зон угнетения роста тест-культур. В качестве тест-культур использовали Escherichia coli I53 и Shigella sonnei 2848. Для контрольного опыта использовали исходные тест-культуры на гидролизованном молоке без добавления жидкого бактериального концентрата. Результаты исследований представлены в таблице 3.The antibiotic activity of the liquid bacterial concentrate in relation to pathogenic and opportunistic microorganisms was determined by the method of successive dilutions by the size of the zones of growth inhibition of test cultures. Escherichia coli I 53 and Shigella sonnei 2848 were used as test cultures. For the control experiment, the initial test cultures were used in hydrolyzed milk without the addition of a liquid bacterial concentrate. The research results are presented in table 3.
Как видно из данных таблицы 3, микрофлора жидкого бактериального концентрата обладает бактерицидными и бактериостатическими действиями по отношению к E.coli I53 и S.sonnei 2848. Бактерицидное действие по отношению к E.coli проявлялось в разведении 1:8, а к S.sonnei - 1:16. Бактериостатическое действие бакконцентрата отмечено в разведениях 1:64 и 1:128 соответственно.As can be seen from the data in Table 3, the microflora of the liquid bacterial concentrate has bactericidal and bacteriostatic effects in relation to E. coli I 53 and S.sonnei 2848. The bactericidal action in relation to E. coli was manifested in a 1: 8 dilution, and to S.sonnei - 1:16. The bacteriostatic effect of the concentrate was noted at dilutions of 1:64 and 1: 128, respectively.
Для изучения антибиотической активности бакконцентрата к туберкулезной палочке в качестве тест-культуры использовали Mycobacterium tuberculosis с посевом на среде Левенштейна-Йенсена мокроты больных активной формой туберкулеза. В качестве контроля использовался посев исходной тест культуры на гидролизованное молоко, без добавления жидкого бактериального концентрата. После выдержки посевов тест-культуры совместно с разведениями закваски на гидролизованном молоке в течение 7 сут, микрофлора пересевалась на среду для количественного учета микобактерий туберкулеза - Левенштейна-Йенсена. Результаты исследований антибиотической активности жидкого бактериального концентрата представлены в таблице 4.To study the antibiotic activity of the bacterial concentrate against tubercle bacillus, Mycobacterium tuberculosis was used as a test culture with inoculation of sputum in patients with active tuberculosis on Levenshtein-Jensen medium. As control was used sowing the initial test culture for hydrolyzed milk, without adding a liquid bacterial concentrate. After exposure to the test culture, together with dilutions of the starter culture on hydrolyzed milk for 7 days, the microflora was reseeded on Wednesday for quantitative accounting of Mycobacterium tuberculosis - Levenshtein-Jensen. The results of studies of the antibiotic activity of a liquid bacterial concentrate are presented in table 4.
Из данных таблицы 4 видно, что при разведении жидкого бактериального концентрата и гидролизованного молока в соотношении 1:1 наблюдалось бактерицидное действие на микобактерии туберкулеза, т.е. полное отсутствие роста, что подтверждалось также микрокопированием препарата с окрашиванием по Цилю-Нильсону. До разведения 1:32, включительно, наблюдается бактериостатическое действие, далее значительного подавления роста не наблюдается.From the data in table 4 it is seen that when diluting a liquid bacterial concentrate and hydrolyzed milk in a 1: 1 ratio, a bactericidal effect on tuberculosis mycobacteria was observed, i.e. complete lack of growth, which was also confirmed by microcopying the drug with Tsil-Nielson staining. Before breeding 1:32, inclusive, a bacteriostatic effect is observed, then there is no significant suppression of growth.
Высокая адгезивность и антибиотическая активность жидкого бактериального концентрата делает его перспективным для использования в качестве пробиотического продукта. Качественные показатели жидкого бактериального концентрата представлены в таблице 5.The high adhesiveness and antibiotic activity of the liquid bacterial concentrate makes it promising for use as a probiotic product. Qualitative indicators of liquid bacterial concentrate are presented in table 5.
Micro picture
Обобщая представленные в таблице 5 данные, можно сделать вывод, что полученный заявляемым способом жидкий бактериальный концентрат содержит высокое количество жизнеспособных клеток, обладает антибиотической и адгезивной активностью, что делает возможным его применение в качестве биологически активной добавки к пище.Summarizing the data presented in table 5, we can conclude that the liquid bacterial concentrate obtained by the claimed method contains a high number of viable cells, has antibiotic and adhesive activity, which makes it possible to use it as a biologically active food supplement.
Дальнейшие исследования были посвящены изучению сроков хранения жидкого симбиотического бактериального концентрата (табл.6).Further studies were devoted to the study of the shelf life of a liquid symbiotic bacterial concentrate (Table 6).
Из данных таблицы 6 видно, что количество жизнеспособных клеток жидкого бактериального концентрата, хранившегося при температуре (6-8)°С в течение 120 суток (4 месяца) соответствует свежему концентрату. Согласно данным таблицы 2 и фиг.2 внесение ржаной муки повышает адгезивность и когезию микрофлоры бактериального концентрата, вероятно, с этим связана высокая выживаемость микроорганизмов в течение длительного хранения.From the data of table 6 it is seen that the number of viable cells of the liquid bacterial concentrate stored at a temperature of (6-8) ° C for 120 days (4 months) corresponds to a fresh concentrate. According to the data of table 2 and figure 2, the introduction of rye flour increases the adhesion and cohesion of the microflora of the bacterial concentrate, probably associated with a high survival rate of microorganisms during long-term storage.
Дальнейшее хранение в течение 150 дней приводит к снижению содержания мезофильных лактобактерий и дрожжей, сбраживающих лактозу, а через 180 дней хранения уменьшается количество термофильных лактобактерий и дрожжей, не сбраживающих лактозу.Further storage for 150 days leads to a decrease in the content of mesophilic lactobacilli and yeast fermenting lactose, and after 180 days of storage, the number of thermophilic lactobacilli and yeast not fermenting lactose is reduced.
Таким образом, полученные результаты позволили определить оптимальный срок хранения жидкого бактериального концентрата, который составляет четыре месяца.Thus, the results obtained allowed us to determine the optimal shelf life of the liquid bacterial concentrate, which is four months.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом:The inventive method is as follows:
В осветленную творожную сыворотку вносят ржаную муку в количестве (2±0,5)% от объема питательной среды, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре (121±1)°C. Полученную питательную среду охлаждают до температуры (30±2)°С, вносят 5-7% симбиотической закваски, полученной методом культивирования в течение 8-10 часов кефирной грибковой закваски, L.bulgaricus, L.acidophilus, L.helveticus, взятых в соотношении 1:0,5:0,5:1 соответственно, и устанавливают рН среды в пределах 6,0-6,5.In clarified curd whey, rye flour is added in an amount of (2 ± 0.5)% of the volume of the nutrient medium, 1 g / l sodium trisodium citrate, 1 g / l monosubstituted potassium phosphate, 0.1 g / l magnesium sulfate, 0.5 g / l sucrose, 0.1 g / l ascorbic acid and sterilized at a temperature of (121 ± 1) ° C. The resulting nutrient medium is cooled to a temperature of (30 ± 2) ° C, 5-7% of the symbiotic starter culture obtained by culturing for 8-10 hours of kefir fungal starter culture, L. bulgaricus, L. acidophilus, L. helveticus, taken in the ratio 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, and set the pH of the medium in the range of 6.0-6.5.
Накопление биомассы симбиотической закваски производят в условиях периодического культивирования при двукратном раскислении среды через 12 и 24 часа культивирования. Продолжительность культивирования 22-24 часа при температуре (30±2)°С. Затем отделяют биомассу от культуральной жидкости. Полученную суспензию клеток охлаждают и разливают в асептических условиях в стерильные флаконы по 5 или 10 см3, укупоривают, охлаждают до (6±2)°С и хранят при этой температуре не более четырех месяцев.The accumulation of biomass of symbiotic sourdough is produced under conditions of periodic cultivation with a double deoxidation of the medium after 12 and 24 hours of cultivation. The cultivation duration is 22-24 hours at a temperature of (30 ± 2) ° C. The biomass is then separated from the culture fluid. The resulting cell suspension is cooled and poured under aseptic conditions into sterile bottles of 5 or 10 cm 3 , sealed, cooled to (6 ± 2) ° C and stored at this temperature for no more than four months.
Полученный жидкий симбиотический бактериальный концентрат используют в качестве биологически активной добавки к пище.The resulting liquid symbiotic bacterial concentrate is used as a biologically active food supplement.
Для получения замороженного бактериального концентрата после отделения биомассы от культуральной жидкости осуществляют смешивание биомассы с защитной средой в соотношении 1:1 и после укупорки ее замораживают при температуре не выше (-20)°С. Состав применяемой защитной среды приведен в таблице 7.To obtain a frozen bacterial concentrate after separation of the biomass from the culture fluid, the biomass is mixed with a protective medium in a ratio of 1: 1 and after capping it is frozen at a temperature of no higher than (-20) ° С. The composition of the protective medium used is given in table 7.
Добавление к среде натрия лимоннокислого создает буферную емкость, а защитное действие сахарозы объясняется способностью гидратироваться, понижать точку замораживания воды и замедлять скорость кристаллизации.Adding sodium citrate to the medium creates a buffer capacity, and the protective effect of sucrose is explained by the ability to hydrate, lower the freezing point of water, and slow down the crystallization rate.
После активизации замороженного концентрата определяли количество клеток и активность сквашивания молока. Полученные результаты представлены в таблице 8.After activation of the frozen concentrate, the number of cells and milk fermentation activity were determined. The results are presented in table 8.
Данные таблицы 8 свидетельствуют о высокой выживаемости клеток после замораживания, так лактобактерий выжило 1010 к.о.е./см3, а дрожжей 108 к.о.е./см3.The data in table 8 indicate a high survival rate of cells after freezing, so lactobacilli survived 10 10 cfu / cm 3 and
Продолжительность сквашивания молока после активизации замороженной суспензии на молоке составило 10-12 часов, что говорит о сохранении биохимической активности. Вероятно, это связано с положительным влиянием защитной среды. Защитное действие сахарозы при замораживании бактерий объясняется их способностью гидратироваться, понижать температуру замораживания воды и замедлять скорость ее кристаллизации. Добавление в среду лимоннокислого натрия обеспечивает установление реакции среды, близкой к нейтральной или слабокислой.The duration of milk fermentation after activating the frozen suspension in milk was 10-12 hours, which indicates the preservation of biochemical activity. This is probably due to the positive influence of the protective environment. The protective effect of sucrose during the freezing of bacteria is explained by their ability to hydrate, lower the freezing temperature of water and slow down its crystallization rate. The addition of sodium citrate into the medium ensures that the reaction of the medium is close to neutral or slightly acidic.
Высокая выживаемость пробиотических бактерий после замораживания также связана с присутствием в бакконцентрате ржаной муки, повышающей межклеточную когезию и адгезию. Когезия и адгезия являются эволюционно выработанными механизмами адаптации микроорганизмов к изменениям окружающей среды, позволяющие клеткам сохранять жизнеспособность в экстремальных условиях окружающей среды.The high survival rate of probiotic bacteria after freezing is also associated with the presence of rye flour in the concentrate, which increases intercellular cohesion and adhesion. Cohesion and adhesion are evolutionarily developed mechanisms for the adaptation of microorganisms to environmental changes, allowing cells to maintain viability in extreme environmental conditions.
На основании проведенных исследований выявлено, что при криоанабиозе количество клеток заквасочной микрофлоры снижается незначительно и сохраняется высокая биохимическая активность в течение шести месяцев хранения при температуре -18°С.Based on the studies, it was found that with cryoanabiosis, the number of starter microflora cells decreases slightly and high biochemical activity remains for six months at a temperature of -18 ° C.
Пример 1. Получение жидкого бактериального концентрата Example 1. Obtaining a liquid bacterial concentrate
В осветленную творожную сыворотку вносят ржаную муку в количестве 1,5% от объема питательной среды, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре 121°С в течение 30 минут. Полученную питательную среду охлаждают до температуры 30°С, вносят 5% симбиотической закваски (кефирная грибковая закваска, культуры L.bulgaricus, L.acidophilus, L.helveticus, взятые в соотношении 1:0,5:0,5:1 соответственно, время культивирования 10 часов при температуре 30°С). Устанавливают рН среды в пределах 6,0.In clarified curd whey, rye flour is added in an amount of 1.5% of the volume of the nutrient medium, 1 g / L sodium trisubstituted citric acid, 1 g / L monosubstituted potassium phosphate, 0.1 g / L magnesium sulfate, 0.5 g / L sucrose , 0.1 g / l of ascorbic acid and sterilized at a temperature of 121 ° C for 30 minutes. The resulting nutrient medium is cooled to a temperature of 30 ° C, 5% symbiotic starter culture is introduced (kefir fungal starter culture L.bulgaricus, L.acidophilus, L.helveticus, taken in a ratio of 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, time cultivation for 10 hours at a temperature of 30 ° C). Set the pH of the medium within 6.0.
Накопление биомассы производят в условиях периодического культивирования при двукратном раскислении среды через 12 и 24 часа культивирования. Продолжительность культивирования 24 часа, температура 30°С.The accumulation of biomass is produced under conditions of periodic cultivation with double deoxidation of the medium after 12 and 24 hours of cultivation. Duration of
После окончания процесса культивирования отделяют биомассу от культуральной жидкости. Полученную суспензию охлаждают и разливают в асептических условиях в стерильные флаконы по 5 и 10 см3 и укупоривают. Срок хранения жидкого бактериального концентрата при температуре (6±2)°С составляет четыре месяца.After the cultivation process, the biomass is separated from the culture fluid. The resulting suspension is cooled and poured under aseptic conditions into sterile bottles of 5 and 10 cm 3 and sealed. The shelf life of the liquid bacterial concentrate at a temperature of (6 ± 2) ° C is four months.
Пример 2. Получение жидкого бактериального концентратаExample 2. Obtaining a liquid bacterial concentrate
В осветленную творожную сыворотку вносят ржаную муку в количестве 2% от объема питательной среды, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре 121°С в течение 30 минут. Полученную питательную среду охлаждают до температуры 32°С, вносят 7% симбиотической закваски (кефирная грибковая закваска, культуры L.bulgaricus, L.acidophilus, L.helveticus, взятых в соотношении 1:0,5:0,5:1 соответственно, время культивирования 9 часов при температуре 32°С) и устанавливают рН среды в пределах 6,0.In clarified curd whey, rye flour is added in an amount of 2% of the volume of the nutrient medium, 1 g / l sodium trisodium citrate, 1 g / l monosubstituted potassium phosphate, 0.1 g / l magnesium sulfate, 0.5 g / l sucrose, 0 , 1 g / l of ascorbic acid and sterilized at a temperature of 121 ° C for 30 minutes. The resulting nutrient medium is cooled to a temperature of 32 ° C, 7% symbiotic starter culture (kefir fungal starter culture L. cultures, L. bulgaricus, L. acidophilus, L. helveticus taken in a ratio of 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, time cultivation for 9 hours at a temperature of 32 ° C) and set the pH of the medium within 6.0.
Накопление биомассы производят в условиях периодического культивирования при двукратном раскислении среды через 12 и 24 часа культивирования. Продолжительность культивирования 23 часа, температура 32°СThe accumulation of biomass is produced under conditions of periodic cultivation with double deoxidation of the medium after 12 and 24 hours of cultivation. Duration of cultivation 23 hours, temperature 32 ° C
После окончания процесса культивирования отделяют биомассу от культуральной жидкости. Полученную суспензию охлаждают и разливают в асептических условиях в стерильные флаконы по 5 и 10 см3 и укупоривают. Срок хранения жидкого бактериального концентрата при температуре (6±2)°С составляет четыре месяца.After the cultivation process, the biomass is separated from the culture fluid. The resulting suspension is cooled and poured under aseptic conditions into sterile bottles of 5 and 10 cm 3 and sealed. The shelf life of the liquid bacterial concentrate at a temperature of (6 ± 2) ° C is four months.
Пример 3. В осветленную творожную сыворотку вносят ржаную муку в количестве 2,5% от объема питательной среды, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре 121°С в течение 30 минут. Полученную питательную среду охлаждают до температуры 30°С, вносят 6% симбиотической закваски (кефирная грибковая закваска, L.bulgaricus, L.acidophilus и L.helveticus, взятых в соотношении 1:0,5:0,5:1 соответственно, время культивирования 8 часов при температуре 30°С) и устанавливают рН среды в пределах 6,0.Example 3. In the clarified curd whey make rye flour in an amount of 2.5% of the volume of the nutrient medium, 1 g / l sodium trisodium citrate, 1 g / l potassium phosphate monosubstituted, 0.1 g / l magnesium sulfate, 0.5 g / l sucrose, 0.1 g / l ascorbic acid and sterilized at a temperature of 121 ° C for 30 minutes. The resulting nutrient medium is cooled to a temperature of 30 ° C, 6% symbiotic starter culture is introduced (kefir fungal starter culture, L.bulgaricus, L. acidophilus and L. helveticus taken in the ratio 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, the cultivation time 8 hours at a temperature of 30 ° C) and set the pH of the medium within 6.0.
Накопление биомассы производят в условиях периодического культивирования при двукратном раскислении среды через 12 и 24 часа культивирования. Продолжительность культивирования 24 часа, температура 32°С.The accumulation of biomass is produced under conditions of periodic cultivation with double deoxidation of the medium after 12 and 24 hours of cultivation. Duration of
После окончания процесса культивирования отделяют биомассу от культуральной жидкости. Полученную суспензию охлаждают и разливают в асептических условиях в стерильные флаконы по 5 и 10 см3 и укупоривают. Срок хранения жидкого бактериального концентрата при температуре (6±2)°С составляет четыре месяца.After the cultivation process, the biomass is separated from the culture fluid. The resulting suspension is cooled and poured under aseptic conditions into sterile bottles of 5 and 10 cm 3 and sealed. The shelf life of the liquid bacterial concentrate at a temperature of (6 ± 2) ° C is four months.
Пример 4. В осветленную творожную сыворотку вносят ржаную муку в количестве 2,5% от объема питательной среды, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре 121°С в течение 30 минут. Полученную питательную среду охлаждают до температуры 32°С, вносят 7% симбиотической закваски (кефирная грибковая закваска, L.bulgaricus, L.acidophilus и L.helveticus, взятые в соотношении 1:0,5:0,5:1 соответственно, время культивирования 8 часов при температуре 32°С) и устанавливают рН среды в пределах 6,0.Example 4. In clarified curd whey make rye flour in an amount of 2.5% of the volume of the nutrient medium, 1 g / l sodium trisodium citrate, 1 g / l monosubstituted potassium phosphate, 0.1 g / l magnesium sulfate, 0.5 g / l sucrose, 0.1 g / l ascorbic acid and sterilized at a temperature of 121 ° C for 30 minutes. The resulting nutrient medium is cooled to a temperature of 32 ° C, 7% symbiotic starter culture is introduced (kefir fungal starter culture, L. bulgaricus, L. acidophilus and L. helveticus taken in the ratio 1: 0.5: 0.5: 1, respectively, the cultivation time 8 hours at a temperature of 32 ° C) and set the pH of the medium within 6.0.
Накопление биомассы производят в условиях периодического культивирования при двукратном раскислении среды через 12 и 24 часа культивирования. Продолжительность культивирования 24 часа, температура 32°С.The accumulation of biomass is produced under conditions of periodic cultivation with double deoxidation of the medium after 12 and 24 hours of cultivation. Duration of
После окончания процесса культивирования отделяют биомассу от культуральной жидкости центрифугированием. Полученную суспензию клеток смешивают с защитной средой в соотношении 1:1, разливают во флаконы по 2 мл (2 дозы) и замораживают в морозильной камере при температуре минус 20°С. Флаконы с замороженным препаратом закрывают резиновыми пробками и алюминиевыми колпачками. Срок хранения бактериального концентрата при температуре минус 18°С составляет шесть месяцев.After the cultivation process, the biomass is separated from the culture fluid by centrifugation. The resulting cell suspension is mixed with a protective medium in a 1: 1 ratio, poured into 2 ml vials (2 doses) and frozen in a freezer at a temperature of minus 20 ° C. Vials with a frozen preparation are closed with rubber stoppers and aluminum caps. The shelf life of the bacterial concentrate at a temperature of minus 18 ° C is six months.
Пример 5. Применение жидкого бактериального концентрата в качестве биологически активной добавки к пище.Example 5. The use of liquid bacterial concentrate as a biologically active food supplement.
Полученные жидкие бактериальные концентраты по примеру 1, 2 и 3 применяют в качестве биологически активной добавки к пище для восстановления микрофлоры желудочно-кишечного тракта, снятия побочных реакций на противотуберкулезные препараты и в качестве иммуномоделирующего средства.The obtained liquid bacterial concentrates according to examples 1, 2 and 3 are used as a biologically active food supplement to restore the microflora of the gastrointestinal tract, relieve adverse reactions to anti-TB drugs and as an immunomodulating agent.
Рекомендуется принимать в рационе питания детей старше 5 лет 3 раза в день по одной чайной ложке за 30 мин до или после приема пищи, для взрослых 3 раза в день по одной столовой ложке до или после приема пищи.It is recommended to take one teaspoon in the diet of children over 5 years old 3 times a day 30 minutes before or after meals, for
Пример 6. Применение замороженного бактериального концентрата в качестве закваски прямого внесения.Example 6. The use of frozen bacterial concentrate as a direct starter culture.
Замороженный бактериальный концентрат применяют в качестве закваски прямого внесения для производства гетероферментативного продукта - курунга. Рекомендуется вносить 4 дозы замороженного бактериального концентрата (4 мл) для ферментации 200 литров молока. При этом продолжительность ферментации молока составляет 10-12 ч.Frozen bacterial concentrate is used as a direct starter culture for the production of a heterofermentative product - kurung. It is recommended that 4 doses of frozen bacterial concentrate (4 ml) be added to ferment 200 ml of milk. The duration of milk fermentation is 10-12 hours.
Claims (4)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012156993/10A RU2524435C1 (en) | 2012-12-25 | 2012-12-25 | Method of production of bacterial concentrate and its application as biologically active food supplement or inoculum for direct application for kurunga |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012156993/10A RU2524435C1 (en) | 2012-12-25 | 2012-12-25 | Method of production of bacterial concentrate and its application as biologically active food supplement or inoculum for direct application for kurunga |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012156993A RU2012156993A (en) | 2014-06-27 |
RU2524435C1 true RU2524435C1 (en) | 2014-07-27 |
Family
ID=51216168
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012156993/10A RU2524435C1 (en) | 2012-12-25 | 2012-12-25 | Method of production of bacterial concentrate and its application as biologically active food supplement or inoculum for direct application for kurunga |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2524435C1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2776653C1 (en) * | 2021-11-16 | 2022-07-22 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления" | Method for obtaining bacterial starter culture |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2130269C1 (en) * | 1998-06-09 | 1999-05-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор | Method of preparing symbiotic fermented-milk product "bifacyl" |
RU2287939C2 (en) * | 2004-12-23 | 2006-11-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Восточно-Сибирский государственный технологический университет | Method for producing of symbiotic bacterial concentrate for obtaining of heterofermentative fermentation products |
RU2324359C2 (en) * | 2006-06-09 | 2008-05-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Восточно-Сибирский государственный технологический университет | Method of liquid bacterial concentrate receiving and its appliance as dietary supplements |
-
2012
- 2012-12-25 RU RU2012156993/10A patent/RU2524435C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2130269C1 (en) * | 1998-06-09 | 1999-05-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор | Method of preparing symbiotic fermented-milk product "bifacyl" |
RU2287939C2 (en) * | 2004-12-23 | 2006-11-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Восточно-Сибирский государственный технологический университет | Method for producing of symbiotic bacterial concentrate for obtaining of heterofermentative fermentation products |
RU2324359C2 (en) * | 2006-06-09 | 2008-05-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Восточно-Сибирский государственный технологический университет | Method of liquid bacterial concentrate receiving and its appliance as dietary supplements |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2776653C1 (en) * | 2021-11-16 | 2022-07-22 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления" | Method for obtaining bacterial starter culture |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2012156993A (en) | 2014-06-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9848615B2 (en) | Storage stable frozen lactic acid bacteria culture | |
CN110607255B (en) | Preparation method and application of lactobacillus delbrueckii and direct vat set lactobacillus delbrueckii starter | |
CN102191202B (en) | High-density culture method for lactic acid bacteria | |
CN101484573B (en) | Enhancer of proliferation of lactic acid bacterium, and agent for improvement in survivability of lactic acid bacterium | |
JP6317251B2 (en) | Fermented milk with suppressed increase in acidity and method for producing the same | |
CN102007968A (en) | Lactobacillus casei-containing active lactobacillus beverage and preparation method thereof | |
EP1945763B1 (en) | Bacterial growth enhancer | |
CN115851535A (en) | Lactobacillus rhamnosus WFP52 with function of regulating immunity and application thereof | |
CN108018248B (en) | Lactobacillus casei capable of regulating flora structural disorder caused by antibiotics | |
CN103131654B (en) | Application of Lactobacillus casei KL1 for producing bile salt hydrolase in functional sour milk | |
CN110250270B (en) | Method for improving fermented milk folic acid content by using lactobacillus plantarum | |
CN106190902A (en) | Active lactobacillus fermented dose of technique of rich selenium germanium | |
CN110742124A (en) | Method for improving comprehensive bacteriostatic ability of milk wine fermentation liquor | |
JP2001045968A (en) | Production of low-fat yogurt and low-fat yogurt produced by the method | |
RU2524435C1 (en) | Method of production of bacterial concentrate and its application as biologically active food supplement or inoculum for direct application for kurunga | |
CN1718009A (en) | Sour milk contg. high L-lactic acid, and its prepn. method | |
JP2012105577A (en) | Production method of whey fermented beverage | |
JP7053241B2 (en) | Fermented milk production method | |
RU2326939C2 (en) | Nutrient milk medium for preparation of bacteria-probiotics biomass | |
CN113995015A (en) | Method for controlling post acidification of yoghourt | |
RU2324359C2 (en) | Method of liquid bacterial concentrate receiving and its appliance as dietary supplements | |
EP1625794A1 (en) | Increased vitamin content in fermented milk product | |
CN106834172B (en) | Lactococcus lactis and application thereof | |
JP3993322B2 (en) | Lactic acid bacteria growth promoter and use thereof | |
RU2776653C1 (en) | Method for obtaining bacterial starter culture |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181226 |