RU2524430C1 - Vaccines for prevention of splenic fever and necrotic stomatitis in animals and method for its preparation - Google Patents
Vaccines for prevention of splenic fever and necrotic stomatitis in animals and method for its preparation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2524430C1 RU2524430C1 RU2013120594/10A RU2013120594A RU2524430C1 RU 2524430 C1 RU2524430 C1 RU 2524430C1 RU 2013120594/10 A RU2013120594/10 A RU 2013120594/10A RU 2013120594 A RU2013120594 A RU 2013120594A RU 2524430 C1 RU2524430 C1 RU 2524430C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- vaccine
- exotoxin
- fusobacterium necrophorum
- viev
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных.The invention relates to the field of veterinary medicine and biotechnology and for the production of a vaccine for the prevention of anthrax and animal necrobacteriosis.
Известна вакцина для профилактики некробактериоза рогатого скота, содержащая в равных объемных соотношениях инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из местных эпизоотических культур возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 1816348, А61К 39/00, 1995).A vaccine for the prevention of cattle necrobacteriosis is known, containing in equal volume proportions formalin-inactivated endotoxin and exotoxin obtained from local epizootic cultures of the causative agent of necrobacteriosis, and an adjuvant based on mineral oil and lanolin (Patent RU 1816348, A61K 39/00, 1995).
Однако известная вакцина не достаточно иммуногенна, так как требует двукратного введения и обеспечивает иммунитет только против некробактериоза в течение 3,5-4 мес. Кроме того, при получении вакцины осуществляют предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве.However, the known vaccine is not sufficiently immunogenic, since it requires two-time administration and provides immunity only against necrobacteriosis for 3.5-4 months. In addition, upon receipt of the vaccine, a preliminary selection of local strains for each particular farm is carried out, which is impossible in industrial production.
Известна вакцина против сибирской язвы животных, содержащая суспензию живых спор бескапсульного авирулентного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ возбудителя сибирской язвы (ТУ 9388-004-00008064-99). Известна также инактивированная вакцина против некробактериоза животных, содержащая инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из производственного штамма "0-1" ВИЭВ возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 2109519, А61К 39/02, 1998).A known vaccine against anthrax in animals containing a suspension of live spores of a capsule-free avirulent vaccine strain 55-VNIIIVViM of the causative agent of anthrax (TU 9388-004-00008064-99). Also known is an inactivated vaccine against animal necrobacteriosis containing formalin inactivated endotoxin and exotoxin obtained from the production strain "0-1" of the WIEV of the causative agent of necrobacteriosis, and an adjuvant based on mineral oil and lanolin (Patent RU 2109519, A61K 39/02, 1998).
Существующие моновакцины применяют независимо друг от друга и не создают иммунитет у животных одновременно против сибирской язвы и некробактериоза. Использование этих вакцин в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат и оказывает более сильное стрессовое состояние животных.Existing mono-vaccines are used independently of each other and do not create immunity in animals at the same time against anthrax and necrobacteriosis. The use of these vaccines separately requires twice the amount of labor and has a more stressful state of the animals.
Известна ассоциированная вакцина против сибирской язвы, анаэробной дизентерии и инфекционной энтеротоксемии овец, содержащая суспензию жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в исходной концентрации (3-4)×108 спор в 1 см3, анатоксины Cl. perfringens типов С с исходной активностью 100-150 ЕС в 1 см3 и Д с исходной активностью 60-80 ЕС в 1 см3 и физиологический раствор (Патент RU №2191599, МПК7 А61К 39/116, 2002).An associated vaccine against anthrax, anaerobic dysentery and infectious enterotoxemia of sheep is known, containing a suspension of viable spores of the anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM in the initial concentration of (3-4) × 10 8 spores in 1 cm 3 , Cl toxoid. perfringens type C with an initial activity of 100-150 EC in 1 cm 3 and D with an initial activity of 60-80 EC in 1 cm 3 and physiological saline (Patent RU No. 2191599, IPC 7 A61K 39/116, 2002).
Однако известная ассоциированная вакцина не обеспечивает создание достаточного иммунитета против сибирской язвы и некробактериоза.However, the known associated vaccine does not provide sufficient immunity against anthrax and necrobacteriosis.
Известны также вакцина против сибирской язвы и некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе и адъювант, причем инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин адсорбирован 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятом в конечной концентрации 1,8-2,0%, суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ используют с исходной концентрацией (5-5,2)×107 в 1 см3 физиологического раствора, а в качестве адъюванта содержит сапонин при определенном соотношении компонентов (Патент РФ №2480237, МПК А61К 39/116, опубл. БИ№10, 2013), и способ ее получения.A vaccine against anthrax and necrobacteriosis is also known, containing formalin inactivated leukocidin - exotoxin obtained from the industrial strain Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV, which is a highly purified protein with a molecular weight of 18-20 kDa and adsorbed on aluminum hydroxide, as well as a suspension of living spore of anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM in physiological saline and adjuvant, moreover, formalin inactivated leukocidin - exotoxin is adsorbed with 12-15% aluminum hydroxide in glycol buffer pH 8.4-8.6, taken at a final concentration of 1.8-2.0% suspension of living spores of the anthrax vaccine strain 55 VNIIVViM used with an initial concentration (5-5,2) × 10 7 V 1 cm 3 of physiologic solution, and as an adjuvant it contains saponin at a certain ratio of components (RF Patent No. 2480237, IPC AK61K 39/116, publ. BI No. 10, 2013), and a method for its preparation.
Задачей изобретения является повышение эффективности вакцины против сибирской язвы и некробактериоза за счет увеличения сроков иммунитета животных.The objective of the invention is to increase the effectiveness of the vaccine against anthrax and necrobacteriosis by increasing the duration of animal immunity.
Технический результат изобретения достигается в вакцине против сибирской язвы и некробактериоза, содержащей инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе и адъювант, отличающейся тем, что суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ используют с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, дополнительно содержит 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см, глицерин и смесь минерального масла Маркол-52 и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно при следующем соотношении компонентов, мас.%:The technical result of the invention is achieved in a vaccine against anthrax and necrobacteriosis containing formalin inactivated leukocidin - exotoxin obtained from the production strain Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV, which is a highly purified protein with a molecular weight of 18-20 kDa and adsorbed on aluminum hydroxide, and also a suspension of live spores of anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM in saline and an adjuvant, characterized in that the suspension of live spores of anthrax vaccine strain 55-VNIIIV They are used with an initial concentration (2,5-3,0) × 10 7 V 1 cm 3 of physiologic solution further comprises 1-10% inactivated bacterial mass strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" with a content of 7,0-7 VIEV, 7 billion cells per 1 cm, glycerin and a mixture of mineral oil Markol-52 and emulsifier, taken in weight ratios of 1: (0.9-1.1), respectively, with the following ratio of components, wt.%:
Технический результат изобретения достигается также в вакцине против сибирской язвы и некробактериоза, отличающейся тем, что в качестве эмульгатора содержит эмульгатор-139 или оксиэтилированный С7-С10 алкилфенол.The technical result of the invention is also achieved in a vaccine against anthrax and necrobacteriosis, characterized in that the emulsifier contains an emulsifier-139 or ethoxylated C 7 -C 10 alkyl phenol.
Технический результат изобретения достигается также в способе получения вакцины против сибирской язвы и некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделения из культуральной жидкости экзотоксина - лейкоцидина, его очистки, концентрирования ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбции на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере, добавления суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ и сапонина, отличающемся тем, что перед адсорбцией на гидроокиси алюминия к экзотоксину добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, а глицерин и смесь минерального масла Маркол-52 и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), соответственно, добавляют после добавления сапонина.The technical result of the invention is also achieved in a method for producing a vaccine against anthrax and necrobacteriosis by cultivating a strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV, inactivating it with formalin, separating the bacterial mass from the culture fluid by centrifugation, isolating exotoxin - leukocidin from the culture fluid, purifying it, concentrating ultrafiltration on hollow fibers and adsorption on aluminum hydroxide in glycol buffer, adding a suspension of live spores of anthrax vaccine strain 55- NIIVViM and saponin, characterized in that before the adsorption on aluminum hydroxide is added to 1-10% exotoxin inactivated bacterial mass strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV the content 7.0-7.7 billion cells per 1 cm 3, and glycerol and a mixture of mineral oil Markol-52 and emulsifier, taken in weight ratios of 1: (0.9-1.1), respectively, added after adding saponin.
Известно использование в качестве адъюванта смеси Маркола-52 с эмульгатором-139 в соотношении 9:1 (Патент RU №2337706, МПК А61К 39/00, бюл. №31, опубл. 10.11.2008).Known use as an adjuvant of a mixture of Markola-52 with emulsifier-139 in a ratio of 9: 1 (Patent RU No. 2337706, IPC A61K 39/00, bull. No. 31, publ. 10.11.2008).
Известно также использование в качестве эмульгатора ОП-7 и ОП-10 (ГОСТ 8433-81, Патент RU №2134964, МПК А01N 25/00, опубл. 27.08.1999) - оксиэтилированные С7-С10 алкилфенолы, используются для приготовления концентрированных эмульсий нерастворимых в воде ингредиентов.It is also known to use OP-7 and OP-10 as an emulsifier (GOST 8433-81, Patent RU No. 2134964, IPC A01N 25/00, publ. 08/27/1999) - ethoxylated C 7 -C 10 alkyl phenols used to prepare concentrated emulsions water insoluble ingredients.
Ассоциированную вакцину вводят однократно крупному рогатому скоту, овцам, козам, свиньям и северным оленям внутрикожно при помощи безыгольного инъектора в объеме 0,2-0,4 см3.The associated vaccine is administered once to cattle, sheep, goats, pigs and reindeer intradermally using a needleless injector in a volume of 0.2-0.4 cm 3 .
Предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза создает длительный иммунитет у привитых животных, при этом по иммуногенности она превосходит известную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза. Вакцина безвредна и авирулентна для лабораторных и сельскохозяйственных животных.The proposed associated vaccine against anthrax and necrobacteriosis creates a long-term immunity in vaccinated animals, while its immunogenicity is superior to the known vaccine against anthrax and necrobacteriosis. The vaccine is harmless and avirulent for laboratory and farm animals.
Вакцину против сибирской язвы и некробактериоза готовят следующим образом.The vaccine against anthrax and necrobacteriosis is prepared as follows.
Пример 1. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.Example 1. To obtain a necrobacteriotic antigen - leukocidin - exotoxin, a production strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV is taken, cultivated, inactivated with formalin at a final concentration of 0.4%, the Bakmass is separated from the culture fluid by centrifugation, exotoxin is isolated from the culture fluid, subjected to exposure high purification by ultrafiltration on hollow fibers with a pore size of 13-17 kDa and concentrated to a protein content (according to Lowry) of 5.5-7.0 mg% with a molecular weight of 18-20 kDa. Next, to the obtained antigen - leukocidin - endotoxin add 1-10% inactivated bacterial mass of the strain Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV with a content of 7.0-7.7 billion cells in 1 cm 3 then sorb on 12-15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 1.8-3.0%. After sorption of the antigen on alumina hydrate, the neutralization of the residual formalin is checked.
К 54,0 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5 мг%, адсорбированного 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,8%, добавляют 1,0 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 10,0 г сапонина, 20,0 г глицерина и 15,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и эмульгатора-139, взятых в весовых соотношениях 1:0,9, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:To 54.0 g of leukocidin inactivated by formalin - exotoxin with m.m. 18-20 kDa from Fusobacterium necrophorum strain "0-1" VIEV with a protein content of 5.5 mg% adsorbed by 12% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4, taken in a final concentration of 1.8%, add 1.0 g suspension of live spores of anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM with an initial concentration of (2.5-3.0) × 10 7 in 1 cm 3 of physiological saline, 10.0 g of saponin, 20.0 g of glycerol and 15.0 g of a mixture of mineral Markol-52 oil and emulsifier-139, taken in weight ratios of 1: 0.9, obtaining composition 1 in the following ratio of components, wt.%:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.The vaccine is emulsified in a homogenizer at 3500 rpm for 15 minutes.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.The resulting vaccine is a homogeneous white emulsion.
Пример 2. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,1 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.Example 2. To obtain a necrobacteriotic antigen - leukocidin - exotoxin, a production strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV is taken, cultivated, inactivated with formalin at a final concentration of 0.4%, the Bakmass is separated from the culture fluid by centrifugation, exotoxin is isolated from the culture fluid, subjected to exposure high purification by ultrafiltration on hollow fibers with a pore size of 13-17 kDa and concentrated to a protein content (according to Lowry) of 5.5-7.0 mg% with a molecular weight of 18-20 kDa. Next, to the obtained antigen - leukocidin - endotoxin add 1-10% inactivated bacterial mass of the strain Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV with a content of 7.0-7.1 billion cells in 1 cm 3 then sorb on 12-15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 1.8-3.0%. After sorption of the antigen on alumina hydrate, the neutralization of the residual formalin is checked.
К 33,8 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 7,0 мг%, адсорбированного 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 3,0%, добавляют 1,2 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 15 г сапонина, 30,0 г глицерина и 20,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и эмульгатора-139, взятых в весовых соотношениях 1:1,1, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:To 33.8 g of formalin inactivated leukocidin - exotoxin with m.m. 18-20 kDa from Fusobacterium necrophorum strain "0-1" VIEV with a protein content of 7.0 mg% adsorbed by 15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 3.0%, add 1.2 g of a suspension of live spores of the anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM with an initial concentration of (2.5-3.0) × 10 7 in 1 cm 3 of physiological saline, 15 g of saponin, 30.0 g of glycerol and 20.0 g a mixture of mineral oil Markol-52 and emulsifier-139, taken in weight ratios of 1: 1.1, obtaining composition 2 in the following ratio of components, wt.%:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.The vaccine is emulsified in a homogenizer at 5000 rpm for 20 minutes.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.The resulting vaccine is a homogeneous white emulsion.
Пример 3. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.Example 3. To obtain a necrobacteriotic antigen - leukocidin - exotoxin, a production strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV is taken, cultivated, inactivated with formalin at a final concentration of 0.4%, the Bakmass is separated from the culture fluid by centrifugation, exotoxin is isolated from the culture fluid, subjected to exposure high purification by ultrafiltration on hollow fibers with a pore size of 13-17 kDa and concentrated to a protein content (according to Lowry) of 5.5-7.0 mg% with a molecular weight of 18-20 kDa. Next, to the obtained antigen - leukocidin - endotoxin add 1-10% inactivated bacterial mass of the strain Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV with a content of 7.0-7.7 billion cells in 1 cm 3 then sorb on 12-15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 1.8-3.0%. After sorption of the antigen on alumina hydrate, the neutralization of the residual formalin is checked.
К 54,0 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5 мг%, адсорбированного 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,8%, добавляют 1,0 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 10,0 г сапонина, 20,0 г глицерина и 15,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и ОП-7, взятых в весовых соотношениях 1:0,9, получая состав 3 при следующем соотношении компонентов, мас.%:To 54.0 g of leukocidin inactivated by formalin - exotoxin with m.m. 18-20 kDa from Fusobacterium necrophorum strain "0-1" VIEV with a protein content of 5.5 mg% adsorbed by 12% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4, taken in a final concentration of 1.8%, add 1.0 g suspension of live spores of anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM with an initial concentration of (2.5-3.0) × 10 7 in 1 cm 3 of physiological saline, 10.0 g of saponin, 20.0 g of glycerol and 15.0 g of a mixture of mineral Markol-52 and OP-7 oils, taken in weight ratios of 1: 0.9, obtaining composition 3 in the following ratio of components, wt.%:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.The vaccine is emulsified in a homogenizer at 3500 rpm for 15 minutes.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.The resulting vaccine is a homogeneous white emulsion.
Пример 4. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.Example 4. To obtain a necrobacteriotic antigen - leukocidin - exotoxin, a production strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV is taken, cultivated, inactivated with formalin at a final concentration of 0.4%, the Bakmass is separated from the culture fluid by centrifugation, exotoxin is isolated from the culture fluid, subjected to exposure high purification by ultrafiltration on hollow fibers with a pore size of 13-17 kDa and concentrated to a protein content (according to Lowry) of 5.5-7.0 mg% with a molecular weight of 18-20 kDa. Next, to the obtained antigen - leukocidin - endotoxin add 1-10% inactivated bacterial mass of the strain Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV with a content of 7.0-7.7 billion cells in 1 cm 3 then sorb on 12-15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 1.8-3.0%. After sorption of the antigen on alumina hydrate, the neutralization of the residual formalin is checked.
К 33,8 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 7,0 мг%, адсорбированного 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 3,0%, добавляют 1,2 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 15 г сапонина, 30,0 г глицерина и 20,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и ОП-7, взятых в весовых соотношениях 1:1,1, получая состав 4 при следующем соотношении компонентов, мас.%:To 33.8 g of formalin inactivated leukocidin - exotoxin with m.m. 18-20 kDa from Fusobacterium necrophorum strain "0-1" VIEV with a protein content of 7.0 mg% adsorbed by 15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 3.0%, add 1.2 g of a suspension of live spores of the anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM with an initial concentration of (2.5-3.0) × 10 7 in 1 cm 3 of physiological saline, 15 g of saponin, 30.0 g of glycerol and 20.0 g a mixture of mineral oil Markol-52 and OP-7, taken in weight ratios of 1: 1.1, obtaining a composition of 4 in the following ratio of components, wt.%:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.The vaccine is emulsified in a homogenizer at 5000 rpm for 20 minutes.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.The resulting vaccine is a homogeneous white emulsion.
Пример 5. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.Example 5. To obtain a necrobacteriotic antigen - leukocidin - exotoxin, a production strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV is taken, cultivated, inactivated with formalin at a final concentration of 0.4%, the Bakmass is separated from the culture fluid by centrifugation, exotoxin is isolated from the culture fluid, exposed to it high purification by ultrafiltration on hollow fibers with a pore size of 13-17 kDa and concentrated to a protein content (according to Lowry) of 5.5-7.0 mg% with a molecular weight of 18-20 kDa. Next, to the obtained antigen - leukocidin - endotoxin add 1-10% inactivated bacterial mass of the strain Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV with a content of 7.0-7.7 billion cells in 1 cm 3 then sorb on 12-15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 1.8-3.0%. After sorption of the antigen on alumina hydrate, the neutralization of the residual formalin is checked.
К 54,0 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5 мг%, адсорбированного 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4, взятой в конечной концентрации 1,8%, добавляют 1,0 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 10,0 г сапонина, 20,0 г глицерина и 15,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и ОП-10, взятых в весовых соотношениях 1:0,9, получая состав 5 при следующем соотношении компонентов, мас.%:To 54.0 g of leukocidin inactivated by formalin - exotoxin with m.m. 18-20 kDa from Fusobacterium necrophorum strain "0-1" VIEV with a protein content of 5.5 mg% adsorbed by 12% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4, taken in a final concentration of 1.8%, add 1.0 g suspension of live spores of anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM with an initial concentration of (2.5-3.0) × 10 7 in 1 cm 3 of physiological saline, 10.0 g of saponin, 20.0 g of glycerol and 15.0 g of a mixture of mineral Markol-52 and OP-10 oils, taken in weight ratios of 1: 0.9, obtaining composition 5 in the following ratio of components, wt.%:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.The vaccine is emulsified in a homogenizer at 3500 rpm for 15 minutes.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.The resulting vaccine is a homogeneous white emulsion.
Пример 6. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксин берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - лейкоцидин - эндотоксин добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, затем сорбируют на 12-15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.Example 6. To obtain a necrobacteriotic antigen - leukocidin - exotoxin, a production strain of Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV is taken, cultivated, inactivated with formalin at a final concentration of 0.4%, the Bakmass is separated from the culture fluid by centrifugation, exotoxin is isolated from the culture fluid, subjected to exposure high purification by ultrafiltration on hollow fibers with a pore size of 13-17 kDa and concentrated to a protein content (according to Lowry) of 5.5-7.0 mg% with a molecular weight of 18-20 kDa. Next, to the obtained antigen - leukocidin - endotoxin add 1-10% inactivated bacterial mass of the strain Fusobacterium necrophorum "0-1" VIEV with a content of 7.0-7.7 billion cells in 1 cm 3 then sorb on 12-15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 1.8-3.0%. After sorption of the antigen on alumina hydrate, the neutralization of the residual formalin is checked.
К 33,8 г инактивированного формалином лейкоцидина - экзотоксина с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 7,0 мг%, адсорбированного 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 3,0%, добавляют 1,2 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,5-3,0)×107 в 1 см3 физиологического раствора, 15 г сапонина, 30,0 г глицерина и 20,0 г смеси минерального масла Маркол-52 и ОП-10, взятых в весовых соотношениях 1:1,1, получая состав 6 при следующем соотношении компонентов, мас.%:To 33.8 g of formalin inactivated leukocidin - exotoxin with m.m. 18-20 kDa from Fusobacterium necrophorum strain "0-1" VIEV with a protein content of 7.0 mg% adsorbed by 15% aluminum hydroxide in glycol buffer with a pH of 8.4-8.6, taken in a final concentration of 3.0%, add 1.2 g of a suspension of live spores of the anthrax vaccine strain 55-VNIIVViM with an initial concentration of (2.5-3.0) × 10 7 in 1 cm 3 of physiological saline, 15 g of saponin, 30.0 g of glycerol and 20.0 g mixtures of mineral oil Markol-52 and OP-10, taken in weight ratios of 1: 1.1, obtaining a composition of 6 in the following ratio of components, wt.%:
Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.The vaccine is emulsified in a homogenizer at 5000 rpm for 20 minutes.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.The resulting vaccine is a homogeneous white emulsion.
Пример 7. Полученные по примерам 1-6 составы 1-6 применяют для профилактических и вынужденных прививок клинически здоровых животных однократно. Молодняк, не достигший 3-месячного возраста, прививать ассоциированной вакциной не разрешается. Вакцину вводят внутрикожно с помощью безыгольного инъектора в бесшерстный участок тела крупному рогатому скоту и свиньям по 0,4 см3 (2 раза по 0,2 см3), овцам, козам и северным оленям по 0,2 см.Example 7. Obtained in examples 1-6, compositions 1-6 are used for prophylactic and forced vaccinations of clinically healthy animals once. Young animals under 3 months of age are not allowed to inoculate with the associated vaccine. The vaccine is injected intradermally with a needleless injector into the hairless body area of cattle and pigs of 0.4 cm 3 (2 times 0.2 cm 3 ), sheep, goats and reindeer 0.2 cm each.
Устойчивость к заражению сибирской язвой и некробактериозом сохраняется до 1,5 лет, что в 1,5 раза длительней, чем известная вакцина (полученная по прототипу) - что подтверждают данные таблицы.Resistance to infection by anthrax and necrobacteriosis persists for up to 1.5 years, which is 1.5 times longer than the known vaccine (obtained from the prototype) - which is confirmed by the data in the table.
Таблица. Сравнительная характеристика показателей иммуногенности известной и предлагаемой вакцины против сибирской язвы и некробактериоза через 1.5 года после вакцинации оленей в республике Саха (Якутия).Table. Comparative characteristics of the immunogenicity indicators of the known and proposed vaccines against anthrax and necrobacteriosis 1.5 years after vaccination of deer in the Republic of Sakha (Yakutia).
Таким образом, ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза является высокоэффективным препаратом, способным более длительно защитить животных одновременно от сибирской язвы и некробактериоза.Thus, the associated vaccine against anthrax and necrobacteriosis is a highly effective drug that can longer protect animals simultaneously from anthrax and necrobacteriosis.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013120594/10A RU2524430C1 (en) | 2013-05-07 | 2013-05-07 | Vaccines for prevention of splenic fever and necrotic stomatitis in animals and method for its preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013120594/10A RU2524430C1 (en) | 2013-05-07 | 2013-05-07 | Vaccines for prevention of splenic fever and necrotic stomatitis in animals and method for its preparation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2524430C1 true RU2524430C1 (en) | 2014-07-27 |
Family
ID=51265344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013120594/10A RU2524430C1 (en) | 2013-05-07 | 2013-05-07 | Vaccines for prevention of splenic fever and necrotic stomatitis in animals and method for its preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2524430C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2590596C1 (en) * | 2015-05-22 | 2016-07-10 | Федеральное казенное предприятие "Армавирская биологическая фабрика" (ФКП "Армавирская биофабрика") | Vaccine for animal necrobacteriosis prevention and its manufacturing method |
| RU2590598C1 (en) * | 2015-05-22 | 2016-07-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" /ФГБНУ ВНИТИБП/ | Vaccine for prevention of anthrax and necrobacillosis in animals and method for production thereof |
| RU2636454C2 (en) * | 2015-05-22 | 2017-11-23 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Vaccine for prevention necrobacteriosis in animals and method for obtaining thereof |
| RU2802204C2 (en) * | 2022-02-08 | 2023-08-22 | Лусине Гамлетовна Цатурян | Live anthrax vaccine for goats |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2191599C1 (en) * | 2001-11-01 | 2002-10-27 | Караваев Юрий Дмитриевич | Associated vaccine for prophylaxis of anthrax and necrobacteriosis in animals |
| RU2337706C1 (en) * | 2007-04-27 | 2008-11-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) | Method of antigen production for cattle and small cattle anaplasmosis vaccine preparation, method of anaplasmosis vaccine preparation, anaplasmosis vaccine and method of cattle and small cattle anaplasmosis prevention |
| RU2480237C1 (en) * | 2011-11-15 | 2013-04-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Associated vaccine for prevention of anthrax and necrobacillosis in animals |
-
2013
- 2013-05-07 RU RU2013120594/10A patent/RU2524430C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2191599C1 (en) * | 2001-11-01 | 2002-10-27 | Караваев Юрий Дмитриевич | Associated vaccine for prophylaxis of anthrax and necrobacteriosis in animals |
| RU2337706C1 (en) * | 2007-04-27 | 2008-11-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) | Method of antigen production for cattle and small cattle anaplasmosis vaccine preparation, method of anaplasmosis vaccine preparation, anaplasmosis vaccine and method of cattle and small cattle anaplasmosis prevention |
| RU2480237C1 (en) * | 2011-11-15 | 2013-04-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Associated vaccine for prevention of anthrax and necrobacillosis in animals |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2590596C1 (en) * | 2015-05-22 | 2016-07-10 | Федеральное казенное предприятие "Армавирская биологическая фабрика" (ФКП "Армавирская биофабрика") | Vaccine for animal necrobacteriosis prevention and its manufacturing method |
| RU2590598C1 (en) * | 2015-05-22 | 2016-07-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" /ФГБНУ ВНИТИБП/ | Vaccine for prevention of anthrax and necrobacillosis in animals and method for production thereof |
| RU2636454C2 (en) * | 2015-05-22 | 2017-11-23 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Vaccine for prevention necrobacteriosis in animals and method for obtaining thereof |
| RU2802204C2 (en) * | 2022-02-08 | 2023-08-22 | Лусине Гамлетовна Цатурян | Live anthrax vaccine for goats |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI376232B (en) | Novel vaccine formulations | |
| JP6449364B2 (en) | Mycoplasma vaccine production method | |
| RU2524430C1 (en) | Vaccines for prevention of splenic fever and necrotic stomatitis in animals and method for its preparation | |
| ES2808673T3 (en) | Immunogenic composition comprising mycoplasma antigens | |
| CA2931139C (en) | Swine vaccine against prrs and lawsonia intracellularis | |
| RU2480237C1 (en) | Associated vaccine for prevention of anthrax and necrobacillosis in animals | |
| CN104258389A (en) | Vaccine composition as well as preparation method and application thereof | |
| RU2329828C1 (en) | Method of production of vaccine for animal necrobacteriosis prevention and treatment, vaccine for animal necrobacteriosis prevention and treatment and method of animal necrobacteriosis prevention and treatment | |
| JP6712760B2 (en) | Salmonella vaccine | |
| RU2191599C1 (en) | Associated vaccine for prophylaxis of anthrax and necrobacteriosis in animals | |
| KR102077701B1 (en) | Vaccin composition containing novel inactivated Salmonella Gallinarum whole cells for preventing or treating Fowl Typhoid | |
| RU2590598C1 (en) | Vaccine for prevention of anthrax and necrobacillosis in animals and method for production thereof | |
| JP7089479B2 (en) | Multidose composition containing antibacterial polyamide or octenidin preservative | |
| CN107496914B (en) | Adjuvant composition and preparation method and application thereof | |
| PT1387693E (en) | Saponin inactivated mycoplasma vaccine | |
| RU2590596C1 (en) | Vaccine for animal necrobacteriosis prevention and its manufacturing method | |
| RU2227160C1 (en) | Strain of bacterium leptospira interrogans "mitronov" of serum group canicola for preparing vaccine | |
| ES2301230T3 (en) | ANTIGENS OF ERYSIPELOTHRIX RHUSIOPATHIAE AND VACCINE COMPOSITIONS. | |
| RU2517733C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine associated against adenoviral, herpes virus infection, parainfluenza-3 and viral diarrhea - mucosal disease of cattle | |
| RU2636454C2 (en) | Vaccine for prevention necrobacteriosis in animals and method for obtaining thereof | |
| JP5865839B2 (en) | Mucosal adjuvant composition | |
| RU2644339C2 (en) | Sorbed inactive dry vaccine against infectious rhinotracheitis of cattle | |
| RU2388488C1 (en) | Vaccine against pseudomonosis of nutrias | |
| RU2304447C1 (en) | Culture vaccine against poultry pox out of hen's virus (ospovac) (variants) | |
| RU2521513C1 (en) | Application of aethonium as adjuvant for production of sorbed foot-mouth disease vaccine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150508 |