RU2510854C2

RU2510854C2 - METHOD OF PRODUCING PROTEIN-FREE BIOLOGICALLY ACTIVE HIGH-POLYMERIC RNA PREPARATION FROM DRY BAKER'S YEAST Saccharomyces cerevisiae

Info

Publication number: RU2510854C2
Application number: RU2010137129/10A
Authority: RU
Inventors: Татьяна Витальевна Ямковая; Станислав Николаевич Загребельный; Лев Евгеньевич Панин; Виталий Иванович Ямковой
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ"
Priority date: 2010-09-06
Filing date: 2010-09-06
Publication date: 2014-04-10
Also published as: RU2010137129A

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: invention relates to biotechnology and can be used to produce protein-free biologically active high-polymeric RNA preparation from dry baker's yeast Saccharomyces cerevisiae. The method involves suspending the yeast for 3 minutes in aqueous oleic acid with concentration of 15 g/l, titrated with 2.5 M NaOH, at suspension temperature not below 98°C. The suspension is boiled for 40 minutes at 98-100°C while stirring periodically. After 10, 20 and 30 of suspending the last portion of yeast, 2.5 M NaOH is added to the boiling suspension. After extraction, boiling water is added to the suspension, followed by stirring and settling the suspension at room temperature for 22 hours. The siphoned supernatant fluid is poured into vials, followed by freezing and freeze drying.

EFFECT: invention simplifies production of a high-polymeric RNA preparation from dry baker's yeast.

1 tbl, 1 ex

Description

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и может быть использовано для лечения кожных заболеваний вирусной этиологии и ОРВИ, в том числе гриппа.The invention relates to the field of biotechnology and medicine and can be used to treat skin diseases of viral etiology and acute respiratory viral infections, including influenza.

Наиболее близким к предлагаемому является раствор высокополимерной РНК, полученный из дрожжей путем суспендирования их в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-102°C в течение 40-60 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре, к слитой с помощью сифона надосадочной жидкости добавляют NaCl до концентрации 2-3 M, суспензию выдерживают 20-96 ч при комнатной температуре, центрифугируют (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), осадок-шрот промывают 2-мя порциями 2-3 М раствора NaCl и 5-ю порциями 92-96%-ного этанола путем последовательного его ресуспендирования при комнатной температуре и центрифугирования (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), из промытого шрота высокополимерную РНК экстрагируют дистиллированной водой [1].Closest to the proposed is a solution of high polymer RNA obtained from yeast by suspending them in an aqueous 1-2% solution of oleic acid, titrated with alkali to a pH of 7-8, the suspension is kept at 98-102 ° C for 40-60 minutes, the extract is sedimented for 20-24 hours at room temperature, NaCl is added to a concentration of 2-3 M using a siphon of the supernatant drained, the suspension is kept for 20-96 hours at room temperature, centrifuged (2500-3500 g, 5-15 minutes, without cooling), the cake is washed with 2 portions of a 2-3 M NaCl solution and 5- in portions of 92-96% ethanol by successively resuspending it at room temperature and centrifuging (2500-3500 g, 5-15 min, without cooling), the high-polymer RNA is extracted from the washed meal with distilled water [1].

Данным способом может быть получен раствор биологически активной высокополимерной РНК. Однако этот способ многостадиен и трудоемок.In this way, a solution of biologically active high polymer RNA can be obtained. However, this method is multistage and time consuming.

Предлагаемый способ получения дрожжевого экстракта, не уступающего по лечебным свойствам прототипу, прост и полностью безотходен.The proposed method for producing a yeast extract, not inferior in therapeutic properties to the prototype, is simple and completely waste-free.

Цель достигается тем, что сухие дрожжи суспендируют порциями в течение 3-5 мин в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-100°C в течение 40-45 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре и супернатант, содержащий в качестве основных компонентов, кроме воды, - высокополимерную РНК, низкополимерную РНК и олеат натрия, используют в лечебных целях. Выпавший же в осадок денатурированный белок может быть использован для приготовления белковых коктейлей для спортсменов.The goal is achieved in that the dry yeast is suspended in portions for 3-5 minutes in an aqueous 1-2% solution of oleic acid, titrated with alkali to a pH of 7-8, the suspension is kept at 98-100 ° C for 40-45 minutes, the extract is defended for 20-24 hours at room temperature and the supernatant containing, as the main components, in addition to water, high-polymer RNA, low-polymer RNA and sodium oleate is used for medicinal purposes. The denatured protein precipitated can be used to prepare protein shakes for athletes.

Пример осуществления предлагаемого способаAn example implementation of the proposed method

300 г свежих сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) суспендировали порциями (первые порции по щепотке) в течение 3 мин в 3 л кипящей воды, содержащей 45 г олеиновой кислоты, оттитрованной 20 мл 2,5 М NaOH таким образом, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 98°C. Суспензию кипятили 40 мин при 98-100°C, периодически перемешивая. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляли по 10 мл 2,5 М NaOH. По окончании экстракции суспензию доводили кипяченой водой до 4,5 л, перемешивали, переносили в высокий узкий стеклянный сосуд и отстаивали при комнатной температуре в течение 22 ч. Отстоявшийся супернатант (~2,9 л) сливали с помощью сифона в стеклянную емкость, после чего добавляли его в мазь или разливали в виалы по 2-4 мл, замораживали и лиофилизовали. Киселеобразный дрожжевой шлам, собирающийся на дне сосуда и содержащий до 70% денатурированного белка, сушили при 58-62°C обычным способом.300 g of fresh dry baker's yeast (Saccharomyces cerevisiae, Novosibirsk Yeast Plant, GOST 28483-90) was suspended in portions (the first portion by a pinch) for 3 min in 3 l of boiling water containing 45 g of oleic acid, titrated with 20 ml of 2.5 M NaOH so that the temperature of the suspension does not fall below 98 ° C. The suspension was boiled for 40 min at 98-100 ° C, stirring occasionally. After 10, 20 and 30 minutes after suspending the last portion of yeast, 10 ml of 2.5 M NaOH were added to the boiling suspension. At the end of the extraction, the suspension was brought to 4.5 L with boiled water, stirred, transferred to a high narrow glass vessel and left to stand at room temperature for 22 hours. The supernatant (~ 2.9 L) that was settled was poured into a glass container using a siphon, after which it was added to the ointment or poured into vials of 2-4 ml, frozen and lyophilized. A jelly-like yeast sludge collected at the bottom of the vessel and containing up to 70% of the denatured protein was dried at 58-62 ° C in the usual way.

Полученный предлагаемым способом дрожжевой экстракт, содержащий высокополимерную РНК (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2и), обладает такими же биологическими и лечебными свойствами, как и полученный по способу - прототипу [1]. Как видно из приведенной ниже таблицы его спектральные характеристики практически не отличаются от таковых для очищенной высокополимерной РНК. По крайней мере белка, способного вызвать аллергию, в препарате Виталанг-2и нет (см. соотношения D₂₈₀/D₂₆₀).Obtained by the proposed method, the yeast extract containing high polymer RNA (assumed market name - Vitalang-2i), has the same biological and therapeutic properties as obtained by the method prototype [1]. As can be seen from the table below, its spectral characteristics practically do not differ from those for purified high-polymeric RNA. At least there is no protein that can cause allergies in Vitalang-2 (see ratios D ₂₈₀ / D ₂₆₀ ).

Источник информацииThe source of information

1. Патент РФ №2392329.1. RF patent No. 2392329.

Спектральные характеристики экстракта высокополимерной (ВП) дрожжевой РНК, полученного нами с помощью олеиновой кислоты, и очищенной по способу-прототипу [1] высокополимерной РНКThe spectral characteristics of the extract of high polymer (VP) yeast RNA, obtained by us using oleic acid, and purified by the prototype method [1] of high polymer RNA Препарат ВП РНКThe drug VP RNA Спектральные отношенияSpectral relations D₂₃₀/D₂₆₀ D ₂₃₀ / D ₂₆₀ D₂₅₀/D₂₆₀ D ₂₅₀ / D ₂₆₀ D₂₈₀/D₂₆₀ D ₂₈₀ / D ₂₆₀ ЭкстрактExtract 0,600.60 0,910.91 0,530.53 Очищенный препаратPurified preparation 0,450.45 0,920.92 0,560.56

Claims

A method of obtaining a protein-free biologically active preparation of high polymer RNA from dry baker's yeast Saccharomyces cerevisiae, comprising suspending the yeast for 3 min in an aqueous solution of oleic acid, with an oleic acid concentration of 15 g / l, titrated with 2.5 M NaOH, at a suspension temperature of below 98 ° C, boiling the suspension for 40 minutes at 98-100 ° C with periodic stirring, adding 10, 20 and 30 minutes after suspending the last portion of yeast into a boiling suspension of 2.5 M NaOH, adding after extraction to uspenziyu boiling water, stirring, settling the suspension at room temperature for 22 hours, pouring the fused by siphoning the supernatant in vials, followed by freezing and lyophilization.