RU2506310C1 - STRAIN OF DIPLOID CELLS OF SYNOVIAL MEMBRANE OF YOUNG PIG Sus scrofa, USED FOR VIROLOGY RESEARCH - Google Patents

STRAIN OF DIPLOID CELLS OF SYNOVIAL MEMBRANE OF YOUNG PIG Sus scrofa, USED FOR VIROLOGY RESEARCH Download PDF

Info

Publication number
RU2506310C1
RU2506310C1 RU2012131176/10A RU2012131176A RU2506310C1 RU 2506310 C1 RU2506310 C1 RU 2506310C1 RU 2012131176/10 A RU2012131176/10 A RU 2012131176/10A RU 2012131176 A RU2012131176 A RU 2012131176A RU 2506310 C1 RU2506310 C1 RU 2506310C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
synovial membrane
strain
cells
young pig
viruses
Prior art date
Application number
RU2012131176/10A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Ольга Львовна Колбасова
Сергей Григорьевич Юрков
Наталья Сергеевна Неверовская
Виктор Владимирович Дмитренко
Валентина Маркеловна Лыска
Original Assignee
Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии filed Critical Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии
Priority to RU2012131176/10A priority Critical patent/RU2506310C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2506310C1 publication Critical patent/RU2506310C1/en

Links

Abstract

FIELD: chemistry.
SUBSTANCE: invention relates to virology, particularly to culturing cells and tissue for producing and studying viruses. The strain of cells of the synovial membrane of a young pig is obtained by cultivating growing tissue explants of the synovial membrane of a young pig in a DMEM culture medium with 10% fetal bovine serum (FBS). The cell culture of the synovial membrane of a young pig is sensitive to viruses of classical swine fever, African swine fever, Aujeszky's disease and can be used to study viruses as well as in diagnostic studies. The strain of the synovial membrane of a young pig is stored in the collection of cell cultures of the National Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology of Russia under No.65 and is deposited in the Special Collection of Grafted Somatic Cell Cultures of Agricultural and Industrial Animals RKKK(P) (SKHZH RASKHN) of the Y.R. Kovalenko National Research Institute for Experimental Veterinary (VIEV) under No.81.
EFFECT: obtaining strain of cells of the synovial membrane of a young pig having stable biological properties, which is suitable for virology and diagnostic studies, which is sensitive to causal viruses of swine diseases such as African and classical swine fever and Aujeszky's disease.
2 ex

Description

Изобретение относится к вирусологии, в частности к культивированию клеток и тканей с целью изучения вирусов и использования в диагностических исследованиях.The invention relates to virology, in particular to the cultivation of cells and tissues in order to study viruses and use in diagnostic studies.

Для первичной изоляции вирусов африканской чумы свиней (АЧС), классической чумы свиней (КЧС), болезни Ауески (БА) и ряда других используются клетки гемопоэтической системы свиней, так как они являются естесственно-пермиссивными клеточными системами для их репродукции (1, 2, 3).For primary isolation of viruses of African swine fever (ASF), classical swine fever (CSF), Aujeszky's disease (AD) and a number of others, cells of the hematopoietic system of pigs are used, since they are natural-permissive cell systems for their reproduction (1, 2, 3 )

Эти культуры являются первичными, переживающими (не размножаются в культуре) и для их получения необходимо производить убой подсвинков для получения костной ткани или содержать доноров.These cultures are primary, experiencing (do not breed in the culture) and to obtain them, it is necessary to slaughter gilts to obtain bone tissue or contain donors.

Целью изобретения является получение штамма клеток синовиальной мембраны поросенка (СМП), стабильного по биологическим характеристикам, пригодного для вирусологических и диагностических исследований, обладающего чувствительностью к вирусам - возбудителям болезней свиней, таких как африканская и классическая чума, болезнь Ауески.The aim of the invention is to obtain a strain of cells of the synovial membrane of the piglet (SMP), stable in biological characteristics, suitable for virological and diagnostic studies, which is sensitive to viruses - pathogens of pig diseases, such as African and classical plague, Aujeszky's disease.

Штамм клеток СПМ получен методом культивирования растущих тканевых эксплантатов в питательной среде ДМЕМ с 10% фетальной сыворотки крови телят (FBS).The strain of SPM cells was obtained by culturing growing tissue explants in DMEM nutrient medium with 10% fetal calf blood serum (FBS).

В качестве анатомического источника эксплантатов синовиальной мембраны были использованы карпальные суставы донора.Donor carpal joints were used as an anatomical source of synovial membrane explants.

Исходная ткань гетерогенна в популяционном составе и включает клетки: макрофагальные синовиациты (А-клетки), фибробластические синовиациты (В-клетки) и промежуточные формы синовиацитов (С-клетки), а также тканевые макрофаги, фибробласты, плазматические клетки, тучные клетки и мононуклеарные клетки крови.The initial tissue is heterogeneous in the population composition and includes cells: macrophage synoviocytes (A cells), fibroblastic synoviocytes (B cells) and intermediate forms of synoviocytes (C cells), as well as tissue macrophages, fibroblasts, plasma cells, mast cells and mononuclear cells blood.

Для выделения и репродукции вируса африканской чумы свиней и производства диагностических препаратов в качестве клеточного субстрата используются культуры клеток костного мозга свиней (ККМС), лейкоцитов свиней (ЛС) и легочных альвеолярных макрофагов, которые является первичными, переживающими (не размножается в культуре) и для их получения необходимо производить убой подсвинков или содержать доноров. Преимуществом штамма диплоидных клеток синовиальной мембраны поросенка Sus scrofa (СМП) является то, что они размножаются в культуре и не нужно производить убой животных. Клетки СМП можно криоконсервировать в жидком азоте и после размораживания они сохраняют свои основные биологические свойства, включая чувствительность к вирусам.For isolation and reproduction of the African swine fever virus and production of diagnostic preparations, cell culture of pig bone marrow cells (PMS), pig leukocytes (PS) and pulmonary alveolar macrophages, which are primary, surviving (not propagated in the culture) and for their use, are used as a cell substrate receipt, it is necessary to slaughter gilts or contain donors. The advantage of the strain of diploid cells of the synovial membrane of the piglet Sus scrofa (SMP) is that they multiply in culture and there is no need to slaughter animals. SMP cells can be cryopreserved in liquid nitrogen and, after thawing, they retain their basic biological properties, including sensitivity to viruses.

Штамм СМП характеризуется следующими признаками.The strain of the NSR is characterized by the following features.

Культуралъные свойства. При посевной дозе - 150-200×103 клеток/мл монослой формируется на 2-3 сутки культивирования и сохраняется без смены среды в течение 9-10 дней на стекле и до 30 дней на пластике. Коэффициент пересева - 1:2-1:3.Cultural properties. At a seeding dose of 150-200 × 10 3 cells / ml, a monolayer is formed on 2-3 days of cultivation and remains without changing the medium for 9-10 days on glass and up to 30 days on plastic. Reseeding coefficient - 1: 2-1: 3.

Штамм СМП культивируют в монослойных культурах в среде ДМЕМ с 10% фетальной сыворотки крови телят (FBS). Для диспергирования клеточного пласта при пересевах используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 2:1 при температуре 37°C. Урожай клеток с литрового матраса составляет 45-50 млн. клеток.The SMP strain was cultured in monolayer cultures in DMEM with 10% fetal calf blood serum (FBS). A mixture of a 0.02% versene solution and 0.25% trypsin solution in a 2: 1 ratio at a temperature of 37 ° C is used to disperse the cell formation during reseeding. The harvest of cells from a liter mattress is 45-50 million cells.

Для криоконсервирования при температуре минус 196°C применяют смесь, состоящую из 70% среды ДМЕМ, 20% FBS и 10% диметилсульфоксида, при концентрации клеток 6-8×106 в мл. Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим после хранения в жидком азоте составляет 70-77%. Клетки восстанавливают исходные ростовые и морфологические свойства в течение 2-3 пассажей.For cryopreservation at a temperature of minus 196 ° C, a mixture is used consisting of 70% DMEM, 20% FBS and 10% dimethyl sulfoxide, at a cell concentration of 6-8 × 10 6 in ml. Cell viability according to the test of vital staining with trypan blue after storage in liquid nitrogen is 70-77%. Cells restore their original growth and morphological properties within 2-3 passages.

Создан банк рабочих клеток изготовителя (БРКИ) в количестве 100 млн. клеток. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 4, 5, 6 пассажа в ГНУ ВНИИВВиМ.The manufacturer’s bank of manufacturer’s working cells (BRKI) was created in the amount of 100 million cells. Cells are cryopreserved in liquid nitrogen at the level of passage 4, 5, 6 at GNU VNIIVViM.

Морфологические признаки. Культура клеток представлена эпителиоподобными клетками средних размеров с мелкозернистой цитоплазмой и четко очерченными границами. Ядро округлой формы с 1-3 ядрышками.Morphological signs. The cell culture is represented by medium-sized epithelial-like cells with a fine-grained cytoplasm and well-defined boundaries. The nucleus is round in shape with 1-3 nucleoli.

Кариологическая характеристика. (n=38) диплоидный набор хромосом.Karyological characteristic. (n = 38) diploid chromosome set.

Видовая идентичность подтверждена видоспецифической ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.Species identity is confirmed by species-specific PCR with real-time hybridization-fluorescence detection.

Прививаемость изогенным животным отсутствует.There is no vaccination with isogenic animals.

Контроль штамма СМП на посторонние контаминанты. При обследовании клеток штамма СПМ на стерильность (наличие бактерий, грибов, микоплазм) получены отрицательные результаты.Control of the strain of SMP on foreign contaminants. When examining the cells of the strain SPM for sterility (the presence of bacteria, fungi, mycoplasmas), negative results were obtained.

Чувствительность к вирусам.Susceptibility to viruses.

При изучении чувствительности культуры клеток СМП к вирусам используют культуры РК-15 и вирусы африканской чумы свиней (АЧС_, штамм 691/68, классической чумы свиней (КЧС), штамм ЛК-ВНИИВВиМ, болезни Ауески, штамм Бук-900. Накопление вирусных антигенов в клетках полученной культуры определяют методом прямой иммуноф люоресценции.When studying the sensitivity of the culture of SMP cells to viruses, cultures of PK-15 and viruses of African swine fever (ASF_, strain 691/68, classical swine fever (CSF), strain LK-VNIIVViM, Aujeszky’s disease, Buk-900 strain are used. The accumulation of viral antigens in cells of the culture obtained are determined by direct immunofluorescence.

Штамм диплоидных клеток синовиальной мембраны поросенка Sus scrofa (СМП) депонирован в Специализированной Коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных РККК(П) (СХЖ РАСХН) при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) 07.07. 2011 г. за №81. Изобретение иллюстрируется следующими примерами:The strain of diploid cells of the synovial membrane of the piglet Sus scrofa (SMP) was deposited in the Specialized Collection of transplantable somatic cell cultures of agricultural and commercial animals RKKK (P) (SKHZ RAAS) at the All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after Ya.R. Kovalenko (VIEV) 07.07. 2011 for No. 81. The invention is illustrated by the following examples:

Пример №1.Example No. 1.

Выделенную синовиальную мембрану 3-х кратно промывают средой DMEM (pH 7,2-7,4) с добавлением комплекса антибиотиков (пенициллин/стрептомицин) и измельчают в чашке Петри на фрагменты размером не более 2 мм. Далее, полученные эксплантаты еще раз трехкратно промывают и переносят в культуральные флаконы с питательной средой DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки крови телят и комплекс антибиотиков. Среду вносят небольшими количествами так, чтобы тканевые фрагменты не плавали в среде, а соприкасались с поверхностью матраса, но, в тоже время, и не подсыхали. Матрасы помещают в CO2-инкубатор с автоматическим регулированием и контролем температуры (37,0±0,5°C), повышенным до 5% содержанием углекислого газа и относительной влажностью 90%. Дважды в неделю производят смену питательной среды.The isolated synovial membrane is washed 3 times with DMEM medium (pH 7.2-7.4) with the addition of an antibiotic complex (penicillin / streptomycin) and ground in a Petri dish into fragments no larger than 2 mm in size. Further, the obtained explants are washed three times again and transferred to culture bottles with DMEM nutrient medium containing 10% fetal calf blood serum and a complex of antibiotics. The medium is introduced in small quantities so that tissue fragments do not float in the medium, but come in contact with the surface of the mattress, but at the same time, do not dry out. Mattresses are placed in a CO 2 incubator with automatic temperature control and control (37.0 ± 0.5 ° C), carbon dioxide content increased to 5% and relative humidity 90%. Twice a week, change the nutrient medium.

Пример №2.Example No. 2.

Для определения чувствительности культуры клеток к вирусу болезни Ауески используют вакцинный штамм Бук 900 с инфекционной активностью 7,5

Figure 00000001
в перевиваемой линии клеток почки поросенка РК-15. Максимальное накопление вируса БА в новой культуре клеток устанавливают через 48 часов культивирования по ЦПД и методом прямой иммунофлуоресценции (титр составляет 7,5
Figure 00000001
 и 7,5
Figure 00000002
 соответственно).To determine the sensitivity of cell culture to Aujeszky's disease virus, a Buk 900 vaccine strain with an infectious activity of 7.5 is used
Figure 00000001
 in the transplanted cell line of the kidney of the piglet RK-15. The maximum accumulation of BA virus in a new cell culture is established after 48 hours of cultivation by CPD and direct immunofluorescence (titer is 7.5
Figure 00000001
 and 7.5
Figure 00000002
 respectively).

Изучение чувствительности культуры клеток СМП к вирусу КЧС (штамм ЛК-ВНИИВВиМ) проводят в 3-5 последовательных пассажах. В качестве исходного инфекционного материала используют освеженный в 2-х пассажах в первичной культуре тестикул ягнят вирус с инфекционной активностью не ниже 5,5

Figure 00000003
. Инфекционную активность вируса КЧС каждого пассажа, выращенного в культуре СМП, определяют титрованием в перевиваемой линии клеток почки поросенка РК-15 методом прямой иммунофлуоресценции. Установлено, что культура клеток СМП без адаптации чувствительна к вирусу КЧС, накопление которого достигает 4,5-5,5
Figure 00000003
 The sensitivity of the culture of SMP cells to CoES virus (strain LK-VNIIVViM) is studied in 3-5 consecutive passages. As a source of infectious material, a virus with an infectious activity of at least 5.5, refreshed in 2 passages in the primary culture of testicles of lambs, is used.
Figure 00000003
 . The infectious activity of the CSF virus of each passage grown in an SMP culture is determined by titration in the transplanted line of kidney cells of the RK-15 piglet by direct immunofluorescence. It was established that the culture of SMP cells without adaptation is sensitive to the CSF virus, the accumulation of which reaches 4.5-5.5
Figure 00000003

При оценке пермиссивности культуры клеток СМП к вирусу АЧС (штамм 691/68) максимальное накопление вируса отмечают через 96 часов культивирования и титр вируса составляет 4,0

Figure 00000003
. Наличие антигенсодержащих клеток определяют методом прямой иммунофлуоресценции.When assessing the permissibility of the culture of SMP cells to ASF virus (strain 691/68), the maximum accumulation of the virus is noted after 96 hours of cultivation and the virus titer is 4.0
Figure 00000003
 . The presence of antigen-containing cells is determined by direct immunofluorescence.

При использовании перевиваемых линий клеток для наработки вирусного сырья и в диагностических исследованиях необходима адаптация вируса, особенно полевых изолятов, что влечет за собой изменение биологических свойств вируса. Штамм диплоидных клеток СМП является естественно пермиссивной системой и не требует адаптации вирусов.When using transplantable cell lines to produce viral raw materials and in diagnostic studies, adaptation of the virus, especially field isolates, is necessary, which entails a change in the biological properties of the virus. The strain of diploid cells of the NSR is a naturally permissive system and does not require the adaptation of viruses.

Таким образом, штамм клеток СМП может быть использован в вирусологических исследованиях для изучения вирусов классической чумы свиней, африканской чумы свиней, болезни Ауески, а также в диагностических целях.Thus, the strain of SMP cells can be used in virological studies to study the viruses of classical swine fever, African swine fever, Aujeszky's disease, as well as for diagnostic purposes.

Источники информации.Information sources.

1. Malmquist W.A., Hay D. Hemadsorption and cytopathic effect produced by african swine fever virus in swine bone marrow and buffy coat cultures // Amer. J. Vet. Res., 1960, v.21, 80, p.104-108.1. Malmquist W. A., Hay D. Hemadsorption and cytopathic effect produced by african swine fever virus in swine bone marrow and buffy coat cultures // Amer. J. Vet. Res., 1960, v. 21, 80, p. 104-108.

2. Mulder W.A.M., Priem J., Pol J.M.A., Kimman T.G., et. al. Expression of the envelope glycoprotein El of classical swin fever viruse by pseudorabies virus vector strains does not affect the in vitro replication of these vector viruses in porcine peripheral blood mononuclear cells // Immun. of viral infections, Proceeding 3rd Congress of the European Society for Veterinary Virology Interlaken, Switzerland, 4-7 September, 1994, 1995, p.74-78.2. Mulder W.A.M., Priem J., Pol J.M.A., Kimman T.G., et. al. Expression of the envelope glycoprotein El of classical swin fever viruse by pseudorabies virus vector strains does not affect the in vitro replication of these vector viruses in porcine peripheral blood mononuclear cells // Immun. of viral infections, Proceeding 3rd Congress of the European Society for Veterinary Virology Interlaken, Switzerland, 4-7 September, 1994, 1995, p. 74-78.

3. Boynton W.H. Preliminary report on the propagation of hog cholera virus in vitro // Vet. Med., 1946, (41), p.346-347.3. Boynton W.H. Preliminary report on the propagation of hog cholera virus in vitro // Vet. Med., 1946, (41), p. 346-347.

Claims (1)

Штамм диплоидных клеток синовиальной мембраны поросенка Sus scrofa (СМП) депонирован в Специализированной Коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных РККК(П) (СХЖ РАСХН) при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) за №81, используемый для вирусологических исследований. The strain of diploid cells of the synovial membrane of the piglet Sus scrofa (SMP) was deposited in the Specialized Collection of transplantable somatic cell cultures of agricultural and commercial animals RKKK (P) (SKHZ RAAS) at the All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after Ya.R. Kovalenko (VIEV) for No. 81, used for virological research.
RU2012131176/10A 2012-07-23 2012-07-23 STRAIN OF DIPLOID CELLS OF SYNOVIAL MEMBRANE OF YOUNG PIG Sus scrofa, USED FOR VIROLOGY RESEARCH RU2506310C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012131176/10A RU2506310C1 (en) 2012-07-23 2012-07-23 STRAIN OF DIPLOID CELLS OF SYNOVIAL MEMBRANE OF YOUNG PIG Sus scrofa, USED FOR VIROLOGY RESEARCH

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012131176/10A RU2506310C1 (en) 2012-07-23 2012-07-23 STRAIN OF DIPLOID CELLS OF SYNOVIAL MEMBRANE OF YOUNG PIG Sus scrofa, USED FOR VIROLOGY RESEARCH

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2506310C1 true RU2506310C1 (en) 2014-02-10

Family

ID=50032221

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012131176/10A RU2506310C1 (en) 2012-07-23 2012-07-23 STRAIN OF DIPLOID CELLS OF SYNOVIAL MEMBRANE OF YOUNG PIG Sus scrofa, USED FOR VIROLOGY RESEARCH

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2506310C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2545720C1 (en) * 2013-12-03 2015-04-10 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии FINITE HYBRID SUBLINE OF CELLS A4C2/9k SUS SCROFA, USED FOR VIROLOGICAL STUDIES OF AFRICAN SWINE FEVER VIRUS
RU2795135C2 (en) * 2021-10-18 2023-04-28 Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) Method for cultivation of fetal porcine cells for virology

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2335537C2 (en) * 2006-04-26 2008-10-10 Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") OVARIES CELL LINE OF GOAT Capra hircus L. YDK-04 FOR REPRODUCTION OF ANIMAL VIRUSES
RU2353650C1 (en) * 2007-08-28 2009-04-27 ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии Line of cells of immature carp (cyprinus carpio) ico ovaries for virological research
RU2009113671A (en) * 2006-09-15 2010-10-20 Медиммун, Ллк. (Us) MAIDINE DERBY DOG KID LINE CELLS SUPPORTING VIRUS GROWTH TO HIGH TITRES AND THE METHOD OF APPLICATION OF THESE CELLS IN THE BIOREACTOR

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2335537C2 (en) * 2006-04-26 2008-10-10 Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") OVARIES CELL LINE OF GOAT Capra hircus L. YDK-04 FOR REPRODUCTION OF ANIMAL VIRUSES
RU2009113671A (en) * 2006-09-15 2010-10-20 Медиммун, Ллк. (Us) MAIDINE DERBY DOG KID LINE CELLS SUPPORTING VIRUS GROWTH TO HIGH TITRES AND THE METHOD OF APPLICATION OF THESE CELLS IN THE BIOREACTOR
RU2353650C1 (en) * 2007-08-28 2009-04-27 ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии Line of cells of immature carp (cyprinus carpio) ico ovaries for virological research

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2545720C1 (en) * 2013-12-03 2015-04-10 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии FINITE HYBRID SUBLINE OF CELLS A4C2/9k SUS SCROFA, USED FOR VIROLOGICAL STUDIES OF AFRICAN SWINE FEVER VIRUS
RU2795135C2 (en) * 2021-10-18 2023-04-28 Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) Method for cultivation of fetal porcine cells for virology

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103667176B (en) Carassius auratus gibelio brain tissue cell line sensitive to cyprinid herpesvirus II, and establishing method and application thereof
CN101665781B (en) High-titer Porcine circovirus 2-type cultured cell, preparation method and use thereof
CN101979519A (en) Method for preparing pseudorabies vaccines
CN101869702B (en) Vaccine produced by suspended microcarrier cell culture system and method for producing vaccine
CN110093307A (en) The method for adapting to the BHK-21-SC cell strain of serum free suspension culture and preparing vaccine antigen with the cell strain
CN108220227A (en) A kind of method for the culture newcastle disease virus that suspended by the continuous cell line that suspends entirely
CN104152403B (en) A kind of method that establishing goose embryonic epithelium cell line and the goose embryonic epithelium cell line of foundation
CN109294974A (en) A kind of hybridized prussian carp myeloid tissue cell line and its construction method are applied with it
RU2506310C1 (en) STRAIN OF DIPLOID CELLS OF SYNOVIAL MEMBRANE OF YOUNG PIG Sus scrofa, USED FOR VIROLOGY RESEARCH
CN102727877A (en) Method for preparing highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome live vaccine (JXA1-R strain) by utilizing bioreactor and application thereof
CN104818241A (en) Skin tissue cell line of Epinephelus lanceolatus and establishing method thereof
CN102886043B (en) Binary inactivated vaccine against Japanese encephalitis virus and porcine parvovirus and preparation method thereof
CN109207422B (en) European eel kidney cell line EK and application thereof
CN104099291A (en) Method for improving proliferation ability and performance of umbilical cord blood OECs (outgrowth endothelial cells)
CN104293736B (en) A kind of telomerase immortalized bovine thyroid cell line and application thereof
CN110527661A (en) A kind of Xiphophorus helleri prelarva cell line and its construction method and application
RU2560569C2 (en) Alekseevskiy strain of swinepox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations
CN105582535A (en) Preparation method of CSF (Classical Swine Fever) and PR (Pseudorabies) bivalent live vaccine and product of CSF and PR bivalent live vaccine
CN104450630A (en) Method for culturing goose parvovirus by using goose embryo fibroblast line
CN103861096A (en) Preparation method of live vaccine for treating porcine reproductive and respiratory syndrome with high pathogenicity and live vaccine product
CN104388391A (en) Paneth cell hybridoma cell strain of mice as well as preparation method and application paneth cell hybridoma cell strain
CN103725644B (en) Cherry valley duck embryo epithelial cell line and method for building up thereof
RU2201959C2 (en) Strain of piglet kidney transplantable cell sus scrofa pk-15/b5 used for virology investigation
CN102174577A (en) Method for producing genetically modified water buffalos by utilizing lentiviral vector
CN102391990A (en) Breeding method for transgenic pigs expressing sIFITM3 genes

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20140724