RU2498307C2

RU2498307C2 - Method for evaluating risk of clinical complications of atherosclerosis

Info

Publication number: RU2498307C2
Application number: RU2011141403/15A
Authority: RU
Inventors: Гюльнара Тельмановна Лютфалиева
Priority date: 2011-10-12
Filing date: 2011-10-12
Publication date: 2013-11-10
Also published as: RU2011141403A

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: blood serum is tested by ELISA to find the content of oxidised low-density lipoproteins (oxLDL). If the oxLDL concentration exceeds 400 ng/ml, a high risk of the clinical complications of atherosclerosis is stated.

EFFECT: availability, low price and ease of the clinical trial using the ELISA widely used in laboratory diagnosis.

5 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, иммунологии, и может быть применено для дифференциального прогнозирования и определения степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза, что необходимо для определения дальнейшей тактики обследования, лечения пациентов, проведения превентивных мероприятий.The invention relates to medicine, in particular to cardiology, immunology, and can be used for differential prediction and determination of the degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis, which is necessary to determine further tactics of examination, treatment of patients, and preventive measures.

В последние десятилетия ведущей причиной смерти населения в индустриально развитых странах, в том числе и в России (около 55% общей смертности) являются сердечно-сосудистые заболевания, в основе развития которых лежит атеросклероз (Р.Г.Оганов, Г.Я.Масленникова. Профилактика сердечно-сосудистых и других неинфекционных заболеваний - основа улучшения демографической ситуации в России // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2005. - №3. - С.4-9). Результаты исследований, проведенных в Государственном научно-исследовательском центре профилактической медицины, показывают, что около 40% населения России в возрасте 30 лет и старше имеют те или иные факторы риска, из них только 1/3 знают об их наличии и меньше 10% занимаются эффективной профилактикой. Трудности своевременной диагностики и профилактики атеросклероза связаны с тем, что в клинику обращаются пациенты, как правило, с уже развившимися тяжелыми клиническими его проявлениями, такими как инфаркт миокарда, инсульт, облитерирующий атеросклероз нижних конечностей и др. Наиболее актуальной проблемой для проведения своевременных профилактических мероприятий остается раннее дифференциальное прогнозирование степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза.In recent decades, the leading cause of population death in industrialized countries, including Russia (about 55% of total mortality), is cardiovascular disease, the basis of which is atherosclerosis (R.G. Oganov, G.Ya. Maslennikova. Prevention of cardiovascular and other non-infectious diseases - the basis for improving the demographic situation in Russia // Cardiovascular therapy and prevention. - 2005. - No. 3. - P.4-9). The results of studies conducted at the State Research Center for Preventive Medicine show that about 40% of the population of Russia aged 30 years and older have certain risk factors, of which only 1/3 are aware of their presence and less than 10% are engaged in effective prevention. Difficulties in the timely diagnosis and prevention of atherosclerosis are associated with the fact that patients are referred to the clinic, as a rule, with severe clinical manifestations that have already developed, such as myocardial infarction, stroke, obliterating atherosclerosis of the lower extremities, etc. The most urgent problem for timely preventive measures remains early differential prediction of the degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis.

В настоящее время не существует стройной теории атеросклероза. Среди многочисленных факторов риска, способствующих развитию атеросклероза, ведущую роль многие исследователи отводят гиперхолестеринемии и дислипопротеинемиям (А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева. Липиды, липопротеиды и атеросклероз / - СПб.: Питер Пресс, 1995. - 304 с.; S. Yusuf, S. Hawken, S. Ounpuu et al. INTRHEART Stady Investigators. Effect of potentially modifiable risk factors associated with myocardial infarction in 52 countries (the INTERHEART study): case-control study / Lancet. - 2004. - 11. - 364 (9438). - Р.937-952). Однако диагностическая значимость этих биомаркеров не всегда информативна (N. Johnston, Т. Jernberg, В.Lagerqvist et al. Improved identification of pacients with coronary artery disease by the use of new lipid and lipoprotein biomarkers. / Am J Cardiol. - 2006. - Vol.97 (5). - P.640-645). Известно, что уровень ХС в ЛПНП не всегда можно использовать как надежный критерий наличия атеросклероза. Так, гиперхолестеринемия выявлена только в 43% умерших от ИБС, а у 57% умерших от ИБС определялось нормальное содержание ХС в плазме крови (С.Г. Аптекарь с соавт. Уровень липидов в плазме крови и артериальной стенке и степень атеросклероза аорты и коронарных артерий при внезапной сердечной смерти // Архив патологии. - 1980; - №10. - С.45-50). Данные последних лет указывают на то, что одним из основных механизмов, вовлеченных в патогенез атеросклероза и ишемической болезни сердца является окислительное превращение ЛПНП в окисленные липопротеины низкой плотности (оЛПНП) (О.А. Азизова. Роль окисленных липопротеидов в патогенезе атеросклероза // Эфферентная терапия. - 2000. - Т.6. - №1. - С.24-31; В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Е.М. Кумскова. Особенности модификации липопротеинов низкой плотности в развитии атеросклероза и сахарного диабета типа 2 // Кардиологический вестник. - 2008. - Том 3. - №1; U.P. Steinbrecher. Role of oxidatively modified LDL in atherosclerosis / U.P. Steinbrecher, H.F. Zhang, M. Lougheed // Free Radic Biol Med. - 1990.- Vol.9, N 2. - P.155-168). Окислительное превращение ЛПНП в оЛПНП в настоящее время признано ключевым моментом биологического процесса, который начинает и ускоряет развитие жировой прослойки, раннего атеросклеротического поражения (R. Stocker, J.F. Jr. Keaney. Role of oxidative modifications in atherosclerosis / Physiol. Rev. - 2004. - Vol.84, N 4. - P.1381-1478; E. Matsuura, G.R. Hughes, M.A. Khamashta. Oxidation of LDL and its clinical implication / Autoimmune Rev. - 2008. - Vol.7, N 7. - P.558-566). Установлено, что продукты, накапливающиеся при свободнорадикальном окислении ЛПНП, являются цитотоксичными для макрофагов, эндотелиальных и гладкомышечных клеток (S.J. Hardwick, L. Hegyi, K. Clare et al. Apoptosis in human monocyte-macrophages exposed to oxidised low-density lipoprotein // J Pathol. - 1996. - Vol.179. - P.294-302). Модифицированные ЛПНП усиленно захватываются моноцитами-макрофагами стенки сосуда, где перегруженные липидными включениями клетки образуют зоны липоидоза - первичного предатерогенного повреждения (Ланкин В.З., Вихерт А.М. Перекисное окисление липидов в этиологии и патогенезе атеросклероза. Архив патологии, 1989. - 51 (1). - С.80-84). Окисленные ЛПНП обнаруживаются в атеросклеротических бляшках при развитии атеросклероза различных локализаций и в атеросклеротически измененных аортальных клапанах (С. Napoli, F. de Nigris. W.J. Palinski Multiple role of reactive oxygen species in the arterial wall / J Cell Biochem. - 2001. - Vol.82. - P.674-682). Выявлено, что накопление оЛНП в плазме крови больных атеросклерозом ингибирует синтез простациклина в стенке сосуда, что может существенно повышать опасность возникновения тромбоза коронарных сосудов и инфаркта миокарда (S. Moncada. Prostacyclin and arterial wall biology / Arteriosclerosis. - 1982. - Vol.2. - P.193-207). Известно также, что оЛПНП являются высоко иммуногенными и могут запускать формирование аутоиммунных процессов (С.J. Binder Innate and acquired immunity in atherogenesis / Nat Med. - 2002. - N 8. - P.1218-1226).There is currently no coherent theory of atherosclerosis. Among the many risk factors contributing to the development of atherosclerosis, many researchers give the leading role to hypercholesterolemia and dyslipoproteinemia (A.N. Klimov, N.G. Nikulcheva. Lipids, lipoproteins and atherosclerosis / - St. Petersburg: Peter Press, 1995. - 304 p .; S. Yusuf, S. Hawken, S. Ounpuu et al. INTRHEART Stady Investigators. Effect of potentially modifiable risk factors associated with myocardial infarction in 52 countries (the INTERHEART study): case-control study / Lancet. - 2004 .-- 11. - 364 (9438) .- P.937-952). However, the diagnostic significance of these biomarkers is not always informative (N. Johnston, T. Jernberg, B. Lagerqvist et al. Improved identification of pacients with coronary artery disease by the use of new lipid and lipoprotein biomarkers. / Am J Cardiol. - 2006. - Vol. 97 (5). - P.640-645). It is known that the level of cholesterol in LDL can not always be used as a reliable criterion for the presence of atherosclerosis. So, hypercholesterolemia was detected only in 43% of those who died from coronary heart disease, and in 57% of those who died from coronary heart disease, the normal content of cholesterol in the blood plasma was determined (S.G. Pharmacist et al. Lipid levels in plasma and arterial wall and the degree of atherosclerosis of the aorta and coronary arteries with sudden cardiac death // Archive of Pathology. - 1980; - No. 10. - P.45-50). Recent data indicate that one of the main mechanisms involved in the pathogenesis of atherosclerosis and coronary heart disease is the oxidative conversion of LDL into oxidized low-density lipoproteins (LDL) (OA Azizova. The role of oxidized lipoproteins in the pathogenesis of atherosclerosis // Efferent therapy . - 2000. - T.6. - No. 1. - P.24-31; VZ Lankin, AK Tikhase, EM Kumskova. Features of the modification of low density lipoproteins in the development of atherosclerosis and type diabetes 2 // Cardiological Bulletin. - 2008. - Volume 3. - No. 1; UP Steinbreche R. Role of oxidatively modified LDL in atherosclerosis / U.P. Steinbrecher, H.F. Zhang, M. Lougheed // Free Radic Biol Med. - 1990.- Vol.9, N 2. - P.155-168). The oxidative conversion of LDL to LDL is now recognized as a key point in the biological process that begins and accelerates the development of the fat layer, early atherosclerotic lesion (R. Stocker, JF Jr. Keaney. Role of oxidative modifications in atherosclerosis / Physiol. Rev. - 2004. - Vol.84, N 4. - P.1381-1478; E. Matsuura, GR Hughes, MA Khamashta. Oxidation of LDL and its clinical implication / Autoimmune Rev. - 2008. - Vol.7, N 7. - P.558 -566). It has been established that products that accumulate during free radical oxidation of LDL are cytotoxic for macrophages, endothelial and smooth muscle cells (SJ Hardwick, L. Hegyi, K. Clare et al. Apoptosis in human monocyte macrophages exposed to oxidized low density lipoprotein // J Pathol. - 1996. - Vol. 179. - P.294-302). Modified LDL are intensely captured by monocyte macrophages of the vessel wall, where cells overloaded with lipid inclusions form zones of lipoidosis - the primary pre-atherogenic damage (Lankin V.Z., Vikhert A.M. Lipid peroxidation in the etiology and pathogenesis of atherosclerosis. Pathology archive, 1989. - 51 (1). - S.80-84). Oxidized LDL is found in atherosclerotic plaques during the development of atherosclerosis of various locations and in atherosclerotic altered aortic valves (C. Napoli, F. de Nigris. WJ Palinski Multiple role of reactive oxygen species in the arterial wall / J Cell Biochem. - 2001. - Vol. 82. - P.674-682). It was found that the accumulation of OLNP in the blood plasma of patients with atherosclerosis inhibits the synthesis of prostacyclin in the vessel wall, which can significantly increase the risk of coronary thrombosis and myocardial infarction (S. Moncada. Prostacyclin and arterial wall biology / Arteriosclerosis. - 1982. - Vol.2. - P.193-207). It is also known that LDLs are highly immunogenic and can trigger the formation of autoimmune processes (C. J. Binder Innate and acquired immunity in atherogenesis / Nat Med. - 2002. - N 8. - P.1218-1226).

Факт обнаружения прогностического значения оЛПНП в диагностике атеросклероза был подтвержден также результатами наших собственных исследований (Лютфалиева Г.Т. Роль аутоантител в регуляции функциональной активности липидтранспортной системы в поддержании метаболизма липидов у жителей Европейского Севера / Г.Т. Лютфалиева // Мир науки, культуры, образования. - 2011. - №3 (28). - С.327-330).The fact of detecting the prognostic value of LDL in the diagnosis of atherosclerosis was also confirmed by the results of our own studies (G. Lutfalieva. The role of autoantibodies in regulating the functional activity of the lipid transport system in maintaining lipid metabolism in the inhabitants of the European North / G.T. Lutfaliev // World of Science, Culture, education. - 2011. - No. 3 (28). - S.327-330).

Исходя из вышеизложенного, представляется вполне оправданным рассматривать оЛПНП более информативным биомаркером иммуновоспалительных, окислительных процессов, приводящим к формированию клинических осложнений атеросклероза; чем традиционное измерение липидов и липопротеинов.Based on the foregoing, it seems justifiable to consider LDL as a more informative biomarker of immuno-inflammatory, oxidative processes, leading to the formation of clinical complications of atherosclerosis; than the traditional measurement of lipids and lipoproteins.

Наиболее близкое отношение к изучаемой проблеме имеют работы Ланкина В.З. (2008 г.) и Азизовой О.А. (2000-2005 гг.), отражающие общий уровень проблемы - роль оЛПНП в патогенезе атеросклероза, но не являются особо релевантными. В работах Ланкина В.З. (2008 г.) показано, что накопление токсичных продуктов перекисного окисления липидов, приводит к атерогенной модификации ЛПНП, дисфункции эндотелия и другим сосудистым нарушениям, способствующим прогрессированию атеросклероза, у больных диабетом (В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Е.М. Кумскова / Особенности модификации липопротеинов низкой плотности в развитии атеросклероза и сахарного диабета типа 2 / Кардиологический вестник. - 2008. - Т.3. - №1).The closest relation to the studied problem is the work of V. Lankin. (2008) and Azizova O.A. (2000-2005), reflecting the general level of the problem - the role of LDL in the pathogenesis of atherosclerosis, but are not particularly relevant. In the works of Lankin V.Z. (2008) showed that the accumulation of toxic lipid peroxidation products leads to atherogenic modification of LDL, endothelial dysfunction and other vascular disorders that contribute to the progression of atherosclerosis in patients with diabetes (V.Z. Lankin, A.K. Tikhase, E. M. Kumskova / Features of the modification of low density lipoproteins in the development of atherosclerosis and type 2 diabetes mellitus / Cardiological Bulletin. - 2008. - T.3. - No. 1).

В исследованиях Азизовой О.А. изучались механизмы и роль свободно-радикальных процессов в патогенезе атеросклероза и тромбозов, влияние окислительно-модифицированного фибриногена на эндотелиальные клетки и взаимодействие между клетками крови, исследована значимость при различных сердечно-сосудистых патологиях свободно-радикальных процессов, интенсивность которых оценивалась по измерению первичных продуктов (гидроперекисей) и вторичных продуктов (ТБК-реактивных продуктов, диеновых конъюгатов). окисления липидов, а также с помощью определения окисленности белков по накоплению карбонильных групп (О.А. Азизова. Роль окисленных липопротеидов в патогенезе атеросклероза // Эфферентная терапия. - 2000. - Т.6. - №1. - С.24-31).In the research of Azizova O.A. studied the mechanisms and role of free radical processes in the pathogenesis of atherosclerosis and thrombosis, the effect of oxidatively modified fibrinogen on endothelial cells and the interaction between blood cells, the significance of free radical processes in various cardiovascular pathologies, the intensity of which was evaluated by measuring primary products (hydroperoxides) ) and secondary products (TBA-reactive products, diene conjugates). lipid oxidation, as well as by determining the oxidation of proteins by the accumulation of carbonyl groups (OA Azizova. The role of oxidized lipoproteins in the pathogenesis of atherosclerosis // Efferent therapy. - 2000. - T.6. - No. 1. - P.24-31 )

Однако клинические эффекты концентраций оЛПНП не изучены, клинические проявления атеросклероза не сопоставлялись с уровнем концентрации оЛПНП, что имеет большое значение в практическом здравоохранении и делает весьма актуальным предложенный нами дифференцированный подход к оценке количественного значения оЛПНП для оценки степени риска формирования клинических осложнений.However, the clinical effects of LDLP concentrations have not been studied, the clinical manifestations of atherosclerosis have not been compared with the level of LDLP concentration, which is of great importance in practical public health and makes our proposed differentiated approach to assessing the quantitative value of LDLP to assess the degree of risk of clinical complications.

Известен способ выявления предрасположенности к возникновению атеросклероза путем идентификации генетических полиморфных систем, в частности, фенотипов SS и FS локуса С'3 (патент РФ №2367956, опубл. 20.09.2009). Существует также способ диагностики риска развития атеросклероза, включающий определение у пациента полиморфизма на участке сигнального пептида препро-NPY человека, причем полиморфизм заключается в замене лейцина на пролин в 7-м положении на участке указанного сигнального пептида, что является индикатором повышенного риска развития атеросклероза (патент РФ №2238107, опубл. 20.10.2004). Таким образом, для осуществления указанных способов нужно сначала экстрагировать образцы ДНК, затем расщепить их на фрагменты и проанализировать методом электрофореза с использованием дорогостоящих тест-систем. Заявленное нами изобретение отличает доступность, дешевизна и простота в постановке исследования с применением широко используемого в лабораторной диагностике иммуноферментного метода исследования.There is a method of identifying a predisposition to the occurrence of atherosclerosis by identifying genetic polymorphic systems, in particular, phenotypes SS and FS of the C'3 locus (RF patent No. 2367956, publ. 09/20/2009). There is also a method for diagnosing the risk of developing atherosclerosis, including determining the patient’s polymorphism at the site of the human prepro-NPY signal peptide, the polymorphism of which is replacing leucine with proline in the 7th position at the site of the specified signal peptide, which is an indicator of the increased risk of developing atherosclerosis (patent RF №2238107, publ. 20.10.2004). Thus, for the implementation of these methods, you must first extract DNA samples, then split them into fragments and analyze by electrophoresis using expensive test systems. The invention claimed by us is distinguished by accessibility, cheapness and simplicity in the formulation of the study using the enzyme-linked immunosorbent assay method.

Известен способ ранней диагностики атеросклероза (патент UA 29360 (Донецкий государственный университет им. М. Горького, UF), 10.01.2008), который включает определение содержания общего холестерина, ЛПНП, ЛПВП, триглицеридов, а также проведение - ультразвукового дуплексного сканирования брахиоцефальных сосудов с измерением толщины комплекса интима-медиа общих сонных артерий для диагностики атеросклероза. Известен способ диагностики, определения прогноза или идентификации предрасположенности к атеросклерозу (патент РФ №2384847, опубл. 20.03.2010), включающий определение процентной частоты по меньшей мере двух субпопуляций Т-лимфоцитов (CD8 и CD4) и сравнение полученных данных с контрольными значениями. В предлагаемом нами изобретении необходимо использовать лишь 1 биохимический параметр, что сокращает пробоподготовку и снижает стоимость исследования.A known method for the early diagnosis of atherosclerosis (patent UA 29360 (Donetsk State University named after M. Gorky, UF), January 10, 2008), which includes determination of total cholesterol, LDL, HDL, triglycerides, as well as conducting ultrasound duplex scanning of brachiocephalic vessels with measuring the thickness of the intima-media complex of the common carotid arteries for the diagnosis of atherosclerosis. A known method for diagnosing, predicting or identifying a predisposition to atherosclerosis (RF patent No. 2384847, publ. March 20, 2010), comprising determining the percentage frequency of at least two subpopulations of T-lymphocytes (CD8 and CD4) and comparing the data with control values. In our invention, it is necessary to use only 1 biochemical parameter, which reduces sample preparation and reduces the cost of the study.

Прототипом является способ индивидуальной количественной оценки риска развития клинических проявлений атеросклероза (заявка на изобретение РФ №2007131472, опубл. 20.02.2009), который заключается в том, что на предварительном этапе проводят массовое обследование пациентов, входящих в интересующую популяцию на различных известных стадиях развития патологии, с определением значений биохимических, иммунологических, физиологических и клинических показателей, отличающийся тем, что на этом же этапе проводят дискриминантный анализ полученных значений показателей в результате которого получают весовые коэффициенты для каждого показателя и константу смещения. Далее определяют значения интегрального показателя состояния здоровья для каждого обследованного пациента как взвешенную сумму значений всех полученных показателей, умноженных на соответствующий им весовой коэффициент, и прибавленную к ней константу смещения. Затем по частоте заболеваемости определяют оценку риска развития клинических проявлений атеросклероза. В способе предлагается использовать 25 биохимических, иммунологические и физиологические показателей, что свидетельствует о трудоемкости, временной и экономической затратности описываемого прототипа изобретения.The prototype is a method for an individual quantitative assessment of the risk of developing clinical manifestations of atherosclerosis (application for invention of the Russian Federation No. 2007131472, publ. 02.20.2009), which consists in the fact that at the preliminary stage a mass examination of patients entering the population of interest at various known stages of the development of pathology is carried out , with the determination of the values of biochemical, immunological, physiological and clinical indicators, characterized in that at the same stage a discriminant analysis of the obtained values is carried out s performance is obtained in which the weights for each parameter and the offset constant. Next, the values of the integral indicator of the state of health for each examined patient are determined as the weighted sum of the values of all the indicators obtained, multiplied by the corresponding weight coefficient, and the displacement constant added to it. Then, according to the incidence rate, an assessment of the risk of developing clinical manifestations of atherosclerosis is determined. The method proposes to use 25 biochemical, immunological and physiological indicators, which indicates the complexity, time and cost of the described prototype of the invention.

Целью заявленного изобретения является определение степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза. Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии и иммунологии, и может использоваться для дифференциального прогнозирования и определения степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза.The aim of the claimed invention is to determine the degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis. The invention relates to medicine, in particular to cardiology and immunology, and can be used for differential forecasting and determining the degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis.

Технический результат достигается тем, что в сыворотке крови определяют содержание окисленных липопротеидов низкой плотности (оЛПНП); при концентрации оЛПНП более 400 нг/мл устанавливают повышенную степень риска формирования клинических осложнений атеросклероза. Технический результат предлагаемого способа заключается в том, что посредством дифференцированной оценки количественных значений оЛПНП в сыворотке крови определяют степень риска формирования клинических осложнений атеросклероза.The technical result is achieved by the fact that in the blood serum determine the content of oxidized low density lipoproteins (LDL); at an LDL concentration of more than 400 ng / ml, an increased degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis is established. The technical result of the proposed method is that through a differentiated assessment of the quantitative values of LDL in the blood serum, the degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis is determined.

Преимуществом предлагаемого изобретения является использование данных о содержании оЛПНП в сыворотке крови, методом иммуноферментного анализа, который широко используется в клинической практике и отличается доступностью, дешевизной и простотой в постановке исследования.An advantage of the invention is the use of data on the content of LDL in the blood serum, by enzyme-linked immunosorbent assay, which is widely used in clinical practice and is characterized by accessibility, cheapness and simplicity in the formulation of the study.

Совокупность существенных отличительных признаков является новой и повышает точность оценки степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза, а также расширяет контингент обследуемых с целью выявления лиц с повышенным риском развития осложнений атеросклероза, прогнозирования возможных их трансформаций в более опасные для жизни состояний, что необходимо для определении тактики лечения и проведения превентивных профилактических мероприятий.The set of essential distinguishing features is new and increases the accuracy of assessing the risk of developing clinical complications of atherosclerosis, and also expands the population of patients with the aim of identifying individuals with an increased risk of developing atherosclerosis complications, predicting their possible transformations into more life-threatening conditions, which is necessary to determine treatment tactics and preventive preventive measures.

Способ осуществляется следующим образом. Кровь для исследования берут из локтевой вены в объеме 1 мл в 9-10 часов утра, натощак; сыворотку отделяют от эритроцитов центрифугированием. Количественное определение окисленных липопротеинов низкой, плотности (оЛПНП) проводили методом «конкурентного» иммуноферментного анализа (ИФА) в микропланшетном формате, который проводился на автоматическом иммуноферментном анализаторе «Evolis» фирмы «Bio-Rad» (Германия-США) с использованием реактивов фирмы «Biomedica Gruppe».The method is as follows. Blood for examination is taken from the ulnar vein in a volume of 1 ml at 9-10 a.m., on an empty stomach; serum is separated from red blood cells by centrifugation. Quantitative determination of oxidized low-density lipoproteins (LDL) was performed by the method of "competitive" enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in a microplate format, which was carried out on an automatic enzyme-linked immunosorbent analyzer "Evolis" company "Bio-Rad" (Germany-USA) using reagents of the company "Biomedica Gruppe. "

Заявленным способом были обследованы 50 жителей г. Архангельска от 40 до 60 лет, обратившихся на прием к МК «Биокор». Диагноз устанавливался на основании данных клинического обследования - анализа жалоб пациента и анамнестических сведений, данных физикального обследования, результатов лабораторного и инструментальных методов исследования. Выполняли стандартную ЭКГ, ВЭМ, функциональные диагностические пробы, эхокардиографическое исследование, ультрозвуковое дуплексное сканирование сосудов. Исследование проводили с соблюдением основных норм биомедицинской этики. Результаты обработаны с использованием пакета прикладных программ «SPSS 13». Тип исследования ретроспективный, выборки случайные, одномоментные. Генеральная совокупность - жители севера европейской территории России. Распределение содержания оЛПНП отличалось от нормального, поэтому представлено в виде медианы, 25- и 75- квартилей. Достоверность различий между группами оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента для независимых выборок и непараметрического критерия Уилкоксона. Статистическая достоверность присваивалась при значении р<0,05.The claimed method was examined 50 residents of the city of Arkhangelsk from 40 to 60 years old, who applied for an appointment with MK Biokor. The diagnosis was established on the basis of clinical examination data - analysis of patient complaints and anamnestic information, physical examination data, laboratory and instrumental research methods. A standard ECG, VEM, functional diagnostic tests, echocardiography, ultrasonic duplex scanning of blood vessels were performed. The study was conducted in compliance with the basic standards of biomedical ethics. The results were processed using the SPSS 13 application package. The type of research is retrospective, samples are random, one-stage. The general population is the inhabitants of the north of the European territory of Russia. The distribution of LDLP content differed from normal, therefore it is presented as a median, 25- and 75-quartiles. The significance of differences between the groups was evaluated using the Student t-test for independent samples and the nonparametric Wilcoxon test. Statistical significance was assigned at p <0.05.

Наши исследования показали, что у лиц с уровнем оЛПНП до 200 нг/мл не определялись изменения липидного и углеводного обмена по результатам биохимических, иммунологических показателей. По данным клинического и инструментального исследования также не установлены факторы риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, поражения органов-мишеней и ассоциированных клинических состояний.Our studies showed that in individuals with an LDLP level of up to 200 ng / ml, changes in lipid and carbohydrate metabolism were not determined according to the results of biochemical, immunological parameters. According to clinical and instrumental studies, risk factors for the development of cardiovascular diseases, target organ damage, and associated clinical conditions have also not been established.

Анализ полученных результатов показал, что увеличение уровня оЛПНП ассоциируется с повышением концентрации циркулирующих антител к оЛПНП (р<0,01). С применением дисперсионного анализа выявлено влияние уровня оЛПНП на содержание AT к оЛПНП (р<0,001). Зарегистрированы положительные взаимосвязи между содержанием AT к оЛПНП и уровнем оЛПНП (r=0,42; р<0,01), которые усиливались на фоне повышения концентраций ОХС (r=0,48; р<0,05) и ХС ЛПНП (r=0,48; р<0,05). Известно, что гиперхолестеринемия ассоциирована с активацией перекисного окисления липидов и оксидативным стрессом (С. Napoli, 2001; P. Holvoet, 2008). Повышение уровня оЛПНП выше 400 нг/мл в сочетании с повышенными значениями ОХС ассоциировалось с высокими концентрациями аутоантител (714,92±485,08 мЕд/мл и 401,86±125,32 мЕд/мл соответственно; р<0,001), а также с увеличением коэффициента оЛПНП/ЛПВП (254,79(201,31-342,51) против 92,63(71,17-139,32); р<0,001) и дислипидемией. Определена значимая положительная связь оЛПНП (r=0,89; р<0,001) с соотношением оЛПНП/ЛПВП и индексом атерогенности (ИА) (r=0,53; р=0,012). Установлено, что при уровне оЛПНП выше 400 нг/мл содержание в периферической крови ИЛ-1β повышается на 57,58%, ИЛ-6 на 31,2%, достоверно чаще регистрируются повышенные концентраций ФНО-α (χ²=5,36; р<0,05), выше содержание IgM (3,13(1,49-3,95)мг/мл; р<0,05). Регистрируется увеличение абсолютного содержания Т-лимфоцитов с рецептором к трансферрину (CD71+) с 0,40±0,03×10⁹/л до 0,42±0,03×10⁹/л, р<0,05, что отражает активацию окислительно-восстановительных процессов, а также пролиферацию моноцитов. Повышение концентрации оЛПНП выше 400 нг/мл также сопровождается активизацией клеточно-опосредованной цитотоксичности, повышением уровня натуральных киллеров CD16+лимфоцитов (0,69±0,16×10⁹/л против 0,42±0,03×10%, р<0,05), регистрируются положительные корреляционные связи с одним из главных инициаторов лимфопролиферативных реакций - рецептором В-лимфоцитов к Fc-фрагменту IgE - CD23+(r=0,82; p<0,01).An analysis of the results showed that an increase in the level of LDLP is associated with an increase in the concentration of circulating antibodies to LDLP (p <0.01). Using analysis of variance, the effect of the level of LDLP on the content of AT to LDLP (p <0.001) was revealed. Positive relationships were found between the content of AT for LDL and the level of LDL (r = 0.42; p <0.01), which intensified against the background of increasing concentrations of total cholesterol (r = 0.48; p <0.05) and LDL cholesterol (r = 0.48; p <0.05). Hypercholesterolemia is known to be associated with activation of lipid peroxidation and oxidative stress (C. Napoli, 2001; P. Holvoet, 2008). An increase in the level of LDLP above 400 ng / ml in combination with increased values of OXC was associated with high concentrations of autoantibodies (714.92 ± 485.08 mU / ml and 401.86 ± 125.32 mU / ml, respectively; p <0.001), as well as with an increase in the coefficient of LDL / HDL (254.79 (201.31-342.51) versus 92.63 (71.17-139.32); p <0.001) and dyslipidemia. A significant positive relationship of LDLP (r = 0.89; p <0.001) with the ratio of LDLP / HDL and the atherogenic index (IA) (r = 0.53; p = 0.012) was determined. It was found that at the level of LDLP above 400 ng / ml, the content in the peripheral blood of IL-1β rises by 57.58%, IL-6 by 31.2%, significantly higher concentrations of TNF-α are recorded more often (χ ² = 5.36; p <0.05), higher IgM content (3.13 (1.49-3.95) mg / ml; p <0.05). An increase in the absolute content of T-lymphocytes with a transferrin receptor (CD71 +) from 0.40 ± 0.03 × 10 ⁹ / L to 0.42 ± 0.03 × 10 ⁹ / L, p <0.05, which reflects activation, is recorded redox processes, as well as the proliferation of monocytes. An increase in the concentration of LDLP above 400 ng / ml is also accompanied by activation of cell-mediated cytotoxicity, an increase in the level of natural killers of CD16 + lymphocytes (0.69 ± 0.16 × 10 ⁹ / L against 0.42 ± 0.03 × 10%, p < 0.05), positive correlation is recorded with one of the main initiators of lymphoproliferative reactions, the B-lymphocyte receptor for the IgE Fc fragment, CD23 + (r = 0.82; p <0.01).

Повышение уровня циркулирующих антител к оЛПНП, сывороточного иммуноглобулина IgM, провоспалительных цитокинов, активация лимфопролиферации и Т-клеточной цитотоксичности свидетельствует о развитии аутоиммунного ответа и отражает высокую степень иммуновоспалительных и деструктивных изменений на повышение концентрации оЛПНП более 400 нг/мл.An increase in the level of circulating anti-LDL antibodies, serum immunoglobulin IgM, pro-inflammatory cytokines, activation of lymphoproliferation and T-cell cytotoxicity indicates the development of an autoimmune response and reflects a high degree of immuno-inflammatory and destructive changes to increase the concentration of LDL in excess of 400 ng / ml.

Частота регистрации клинических осложнений атеросклероза у лиц с содержанием оЛПНП выше 400 нг/мл составила 97%. В структуре нозологии преобладали: Гипертоническая болезнь - 48%, ИБС - 32%. При этом в 21% случаев у лиц, отнесенных по уровню оЛПНП в группу с повышенным риском формирования клинических осложнений атеросклероза, отмечался нормальный уровень холестерина (согласно классификации и рекомендациям третьего Доклада (АТР III, 2001) экспертных групп Национальной образовательной программы по холестерину в США (National Cholesterol Education Program, NCEP) и Европейского общества по изучению атеросклероза.The frequency of registration of clinical complications of atherosclerosis in individuals with an LDLP content above 400 ng / ml was 97%. In the structure of nosology prevailed: Hypertension - 48%, CHD - 32%. At the same time, in 21% of cases, people assigned by the level of LDL to the group with an increased risk of clinical complications of atherosclerosis showed normal cholesterol levels (according to the classification and recommendations of the third Report (APR III, 2001) of the expert groups of the National Cholesterol Education Program in the USA ( National Cholesterol Education Program, NCEP) and the European Atherosclerosis Society.

Заявляемый способ повышает точность оценки повышенной степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза, а также расширяет контингент обследуемых за счет пациентов с нормальными показателями липидного и углеводного обмена, не установленных факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний и ассоциированных клинических состояний.The inventive method improves the accuracy of assessing the increased degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis, and also expands the contingent of patients with normal lipid and carbohydrate metabolism, undetermined risk factors for cardiovascular diseases and associated clinical conditions.

Приводим примеры конкретного выполнения заявляемого способа.We give examples of specific performance of the proposed method.

Пример 1. Пациентка Т., 42 года. Жалоб нет. АД-120/70 мм рт.ст. Не курит, наследственность по ИБС не отягощена. Индекс массы тела (ИМТ) - 22,5. Данные биохимического исследования: ОХС - 4,5 ммоль/л, ТГ - 0,89 г/л, ЛПНП - 3,96 ммоль/л, ЛПВП - 1,57 ммоль/л, индекс атерогенности (ИА) - 1,87. Уровень оЛПНП - 145,43 нг/мл.Example 1. Patient T., 42 years old. There are no complaints. AD-120/70 mm Hg Does not smoke; heredity in IHD is not burdened. Body mass index (BMI) is 22.5. Data from biochemical studies: total cholesterol - 4.5 mmol / L, TG - 0.89 g / L, LDL - 3.96 mmol / L, HDL - 1.57 mmol / L, atherogenicity index (IA) - 1.87. The level of LDLP is 145.43 ng / ml.

По уровню оЛПНП риск развития клинических осложнений атеросклероза в настоящее время отсутствует, что было подтверждено результатами дополнительного исследования:By the level of LDLP, the risk of developing clinical complications of atherosclerosis is currently absent, which was confirmed by the results of an additional study:

ЭКГ - Синусовый ритм, ЭОС не отклонена. ВЭМ: во время пробы достигнута нагрузка 125 Вт, выполнено 4 ступени нагрузки, продолжительность пробы составила 6 минут 05 секунд. На высоте нагрузки зафиксирована ЧСС 117 в минуту, АД 140/80 мм рт.ст. Причина прекращения пробы - общая усталость. Толерантность к нагрузке по результатам пробы - средняя. Реакция АД на физическую нагрузку - адекватная. Во время пробы не наблюдалось ишемических изменений сегмента ST. Тест - отрицательный. ЭхоКГ - без патологии.ECG - Sinus rhythm, EOS is not rejected. VEM: during the test, the load reached 125 W, 4 steps of the load were performed, the duration of the sample was 6 minutes 05 seconds. At a load height, a heart rate of 117 per minute was recorded, blood pressure 140/80 mm Hg. The reason for the termination of the test is general fatigue. The load tolerance according to the test results is average. The response of blood pressure to physical activity is adequate. No ischemic changes in the ST segment were observed during the sample. The test is negative. Echocardiography - without pathology.

По данным клинического, биохимического, инструментального исследования факторов риска, поражения органов-мишеней и ассоциированных с атеросклерозом клинических состояний не выявлено.According to clinical, biochemical, instrumental studies of risk factors, damage to target organs and clinical conditions associated with atherosclerosis have not been identified.

Пример 2. Пациентка Л., 49 лет. АД - 135/85 мм рт.ст. Жалоб нет. Не курит, наследственность по ИБС не отягощена. Антигипертензивные препараты не принимает. ИМТ - 25. При обследовании выявлено снижение уровня ЛПВП и повышение индекса атерогенности, повышение ИМТ. Данные биохимического исследования: ОХС - 4,87 ммоль/л, ТГ - 1,01 г/л, ЛПНП - 4,02 ммоль/л, ЛПВП - 0,79 ммоль/л, ИА - 5,16. Уровень оЛПНП - 400 нг/мл.Example 2. Patient L., 49 years old. HELL - 135/85 mm Hg There are no complaints. Does not smoke; heredity in IHD is not burdened. Does not take antihypertensive drugs. BMI - 25. The examination revealed a decrease in HDL and an increase in the atherogenic index, an increase in BMI. Data from biochemical studies: OXS - 4.87 mmol / L, TG - 1.01 g / L, LDL - 4.02 mmol / L, HDL - 0.79 mmol / L, IA - 5.16. The level of LDLP is 400 ng / ml.

Пациентка отнесена к группе с повышенным риском развития клинических осложнений атеросклероза, что было подтверждено результатами дополнительного исследования:The patient was assigned to a group with an increased risk of developing clinical complications of atherosclerosis, which was confirmed by the results of an additional study:

Данные инструментального исследования: ЭКГ - частичная блокада левой ножки п. Гисса. ВЭМ: во время пробы достигнута нагрузка 125 Вт, выполнено 4 ступени нагрузки, продолжительность пробы составила 6 минут 05 секунд. На высоте нагрузки зафиксирована ЧСС 117 в мин, АД 160/100 мм рт.ст. Причина прекращения пробы - общая усталость. Толерантность к нагрузке по результатам пробы - средняя. Реакция АД на физическую нагрузку - гипертензивная. Во время пробы не наблюдалось ишемических изменений сегмента ST. Тест - отрицательный. ЭхоКГ - гипертрофия левого желудочка.Instrumental research data: ECG - partial blockade of the left leg of p. Gissa. VEM: during the test, the load reached 125 W, 4 steps of the load were performed, the duration of the sample was 6 minutes 05 seconds. At a load height, a heart rate of 117 per minute was recorded, BP 160/100 mm Hg. The reason for the termination of the test is general fatigue. The load tolerance according to the test results is average. The reaction of blood pressure to physical activity is hypertensive. No ischemic changes in the ST segment were observed during the sample. The test is negative. Echocardiography - left ventricular hypertrophy.

Диагноз: Гипертоническая; болезнь Стадия 2. Дислипидемия. Гипертрофия левого желудочка. Риск 3 (высокий)Diagnosis: Hypertensive; Stage 2 disease. Dyslipidemia. Left ventricular hypertrophy. Risk 3 (high)

Пример 3. Пациентка С., 49 лет. АД - 140/90 мм рт.ст. Активно жалоб не предъявляет. Около 2 лет эпизодически повышается АД. Не курит, наследственность по ИБС не отягощена. ИМТ - 27. При обследовании регистрируется повышение уровня общего холестерина, ЛПНП и снижение концентрации ЛПВП, повышение ИА, ИМТ. Данные исследования: ОХС - 5,85 ммоль/л, ТГ - 1,74 г/л, ЛПНП - 6,03 ммоль/л, ЛПВП - 0,85 ммоль/л, ИА - 5,5. Уровень оЛПНП - 663,68 нг/мл.Example 3. Patient S., 49 years old. HELL - 140/90 mm Hg Actively does not show complaints. About 2 years, blood pressure rises occasionally. Does not smoke; heredity in IHD is not burdened. BMI - 27. During the examination, an increase in the level of total cholesterol, LDL and a decrease in the concentration of HDL, an increase in IA, BMI is recorded. Research data: total cholesterol - 5.85 mmol / l, TG - 1.74 g / l, LDL - 6.03 mmol / l, HDL - 0.85 mmol / l, IA - 5.5. The level of LDLP is 663.68 ng / ml.

Пациентка отнесена к группе с повышенным риском формирования клинических осложнений атеросклероза, что было подтверждено результатами дополнительного исследования:The patient is assigned to a group with an increased risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis, which was confirmed by the results of an additional study:

ЭКГ - гипертрофия левого желудочка. ВЭМ: во время пробы достигнута нагрузка 100 Вт, выполнено 3 ступени нагрузки, продолжительность пробы составила 4 минуты 05 секунд. На высоте нагрузки зафиксирована ЧСС 110 в мин, АД 180/100 мм рт.ст. Причина прекращения пробы - возникновение типичного ангинозного приступа при пороговой ЧСС 100 в мин. Толерантность к нагрузке по результатам пробы - низкая. Реакция АД на физическую нагрузку - гипертензивная. Во время пробы не наблюдалось ишемических изменений сегмента ST. ЭхоКГ - Гипертрофия левого желудочка. Атеросклероз аорты.ECG - left ventricular hypertrophy. VEM: during the test, a load of 100 W was reached, 3 load stages were performed, the duration of the sample was 4 minutes 05 seconds. At a load height, a heart rate of 110 in min, a blood pressure of 180/100 mm Hg was recorded. The reason for the cessation of the sample is the occurrence of a typical anginal attack with a threshold heart rate of 100 per minute. The load tolerance according to the test results is low. The reaction of blood pressure to physical activity is hypertensive. No ischemic changes in the ST segment were observed during the sample. Echocardiography - Left ventricular hypertrophy. Atherosclerosis of the aorta.

Диагноз: Гипертоническая болезнь III ст. Дислипидемия. Атеросклероз аорты. Риск 3 (высокий).Diagnosis: Hypertension III tbsp. Dyslipidemia. Atherosclerosis of the aorta. Risk 3 (high).

Пример 4. Пациент Г., 53 года. АД - 140/90 мм рт.ст. Боли в ногах при длительной ходьбе. Лекарств не принимает. Курит, наследственность по ИБС не отягощена. ИМТ - 19. При обследовании выявлено снижение ЛПВП и повышение индекса атерогенности. Данные биохимического исследования: ОХС - 3,64 ммоль/л, ТГ - 0,88 г/л, ЛПНП - 4,3 4 ммоль/л, ЛПВП - 0,65 ммоль/л, ИА - 4,6. Уровень оЛПНП - 856,36 нг/мл.Example 4. Patient G., 53 years old. HELL - 140/90 mm Hg Leg pain during long walks. He does not take medicine. Smokes, heredity for IHD is not burdened. BMI - 19. During the examination revealed a decrease in HDL and an increase in the atherogenic index. Data from biochemical studies: OXS - 3.64 mmol / L, TG - 0.88 g / L, LDL - 4.3 4 mmol / L, HDL - 0.65 mmol / L, IA - 4.6. The level of LDLP is 856.36 ng / ml.

Пациент отнесен к группе с повышенным риском формирования клинических осложнений атеросклероза, что было подтверждено результатами дополнительного исследования:The patient is assigned to a group with an increased risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis, which was confirmed by the results of an additional study:

ЭКГ - ЭОС отклонена влево, неполная блокада правой ножки п. Гисса. ВЭМ: во время пробы достигнута нагрузка 100 Вт, выполнено 3 ступени нагрузки, продолжительность пробы составила 3 минуты 45 секунд. На высоте нагрузки зафиксирована ЧСС 120 в мин, АД 180/100 мм рт.ст. Причина прекращения пробы - боли в ногах. Толерантность к нагрузке по результатам пробы - низкая. Реакция АД на физическую нагрузку - гипертензивная. ЭхоКГ - Гипертрофия левого желудочка. Атеросклероз аорты. УЗДГ сосудов нижних конечностей: Облитерирующий атеросклероз сосудов нижних конечностей.ECG - EOS is rejected to the left, incomplete blockade of the right leg of p. Gissa. VEM: during the test, a load of 100 W was reached, 3 load stages were performed, the duration of the sample was 3 minutes 45 seconds. At a load height, a heart rate of 120 in min, a blood pressure of 180/100 mm Hg was recorded. The reason for the termination of the test is pain in the legs. The load tolerance according to the test results is low. The reaction of blood pressure to physical activity is hypertensive. Echocardiography - Left ventricular hypertrophy. Atherosclerosis of the aorta. Ultrasound of the vessels of the lower extremities: Obliterating atherosclerosis of the vessels of the lower extremities.

Диагноз: Гипертоническая болезнь Степень I. Стадия III. Атеросклероз аорты. Облитерирующий атеросклероз сосудов нижних конечностей. Перемежающая хромота. Риск 4 (очень высокий).Diagnosis: Hypertension Degree I. Stage III. Atherosclerosis of the aorta. Obliterating atherosclerosis of the vessels of the lower extremities. Intermittent claudication. Risk 4 (very high).

Пример 5. Пациентка Ж., 55 лет. АД - 150/100 мм рт.ст. Повышение АД около 7 лет. Не курит, наследственность по ИБС не отягощена. ИМТ - 26,5. При обследовании выявлено повышение уровня общего холестерина, дислипидемия, повышение индекса атерогенности, ИМТ. Данные биохимического исследования: ОХС - 6,4 ммоль/л, ТГ - 3,2 г/л, ЛПНП - 5,34 ммоль/л, ЛПВП - 0,85 ммоль/л, ИА - 6,52. Уровень оЛПНП - 1694,38 нг/мл.Example 5. Patient J., 55 years old. HELL - 150/100 mm Hg Increased blood pressure about 7 years. Does not smoke; heredity in IHD is not burdened. BMI - 26.5. An examination revealed an increase in total cholesterol, dyslipidemia, an increase in the atherogenic index, and BMI. Data from biochemical studies: OXS - 6.4 mmol / L, TG - 3.2 g / L, LDL - 5.34 mmol / L, HDL - 0.85 mmol / L, IA - 6.52. The level of LDLP is 1694.38 ng / ml.

Данные инструментального исследования: ЭКГ - гипертрофия левого желудочка. ВЭМ: во время пробы достигнута нагрузка 100 Вт, выполнено 3 ступени нагрузки, продолжительность пробы составила 3 минуты 45 секунд. На высоте нагрузки зафиксирована ЧСС 120 в мин, АД 200/110 мм рт.ст. Причина прекращения пробы - возникновение типичного ангинозного приступа при пороговой ЧСС 100 в мин, динамика сегмента ST. Толерантность к нагрузке по результатам пробы - низкая. Реакция АД на физическую нагрузку - гипертензивная. Во время пробы наблюдалась горизональная депрессия сегмента ST в отведениях II, III, aVF на 1,0 мм от исходной. Тест положительный по клиническим и ЭКГ критериям. ЭхоКГ - гипертрофия левого желудочка.Instrumental research data: ECG - left ventricular hypertrophy. VEM: during the test, a load of 100 W was reached, 3 load stages were performed, the duration of the sample was 3 minutes 45 seconds. At a load height, a heart rate of 120 in min, a blood pressure of 200/110 mm Hg was recorded. The reason for the cessation of the sample is the occurrence of a typical anginal attack with a threshold heart rate of 100 per minute, the dynamics of the ST segment. The load tolerance according to the test results is low. The reaction of blood pressure to physical activity is hypertensive. During the test, horizontal depression of the ST segment was observed in leads II, III, aVF 1.0 mm from the original. The test is positive by clinical and ECG criteria. Echocardiography - left ventricular hypertrophy.

Диагноз: Гипертоническая болезнь III стадии. ИБС. Стенокардия напряжения II функциональный класс. Риск 4 (очень высокий).Diagnosis: Stage III hypertension. Ischemic heart disease. Angina pectoris II functional class. Risk 4 (very high).

Claims

A method for determining the degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis, characterized in that the method of enzyme immunoassay in the blood serum of people determines the content of oxidized low density lipoproteins (LDL); at an LDL concentration of more than 400 ng / ml, an increased degree of risk of the formation of clinical complications of atherosclerosis is established.