RU2484481C1 - Method to produce erythrocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis - Google Patents

Method to produce erythrocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis Download PDF

Info

Publication number
RU2484481C1
RU2484481C1 RU2011139996/15A RU2011139996A RU2484481C1 RU 2484481 C1 RU2484481 C1 RU 2484481C1 RU 2011139996/15 A RU2011139996/15 A RU 2011139996/15A RU 2011139996 A RU2011139996 A RU 2011139996A RU 2484481 C1 RU2484481 C1 RU 2484481C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
antigen
sensitin
brucellosis
erythrocytes
red blood
Prior art date
Application number
RU2011139996/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2011139996A (en
Inventor
Людмила Владимировна Дегтяренко
Мария Юрьевна Карлова
Олег Дмитриевич Скляров
Original Assignee
Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) filed Critical Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии)
Priority to RU2011139996/15A priority Critical patent/RU2484481C1/en
Publication of RU2011139996A publication Critical patent/RU2011139996A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2484481C1 publication Critical patent/RU2484481C1/en

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: veterinary science.
SUBSTANCE: method to produce erythocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis includes preparation of formalinised erythrocytes of sheep and their sensibilisation with sensitin produced by growth of bacterial brucella mass, its washout with hypertonic solution of sodium chloride, inactivation, extraction and separation of sensitin by centrifugation. At the same time formalinised erythrocytes of sheep are sensibilised with antigen made by exposure of the inactivated bacterial mass of the strain B.abortus 19 in the dose of 40-50 billion microbial cells per 1 ml of sodium dodecyl sulfate in 1% concentration at 70-72°C for 45 minutes, with further loading of erythrocytes with sensitin in terms of 0.2-0.4 ml of antigen per 1 ml of 5% suspension of erythrocytes.
EFFECT: method improvement.
4 tbl

Description

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к изготовлению диагностических препаратов, и может быть использовано для серологической диагностики бруцеллеза животных.The invention relates to the field of veterinary medicine, in particular to the manufacture of diagnostic products, and can be used for serological diagnosis of animal brucellosis.

Известен способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума путем дезинтеграции бруцелл ультразвуком с последующим выделением антигена и сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, при этом дезинтеграцию ведут при pH 8,0-9,0, сенсибилизацию эритроцитов проводят при 70-72ºС в течение 5-10 мин [А.с. №784879, 1980 г.]. Недостатком данного способа является то, что при изготовлении диагностикума необходимо проводить танизацию эритроцитов, что усложняет производственный процесс, а при использовании отдельных партий танина антиген может проявлять неспецифичность при исследовании в РНГА сыворотки крови здоровых животных, кроме того, диагностикум обладает недостаточной активностью.A known method of obtaining brucellosis erythrocyte diagnosticum by disintegrating brucella with ultrasound followed by antigen release and sensitization of formalized red blood cells, the disintegration is carried out at a pH of 8.0-9.0, erythrocyte sensitization is carried out at 70-72 ° C for 5-10 minutes [A. . No. 784879, 1980]. The disadvantage of this method is that in the manufacture of a diagnosticum it is necessary to carry out the redification of red blood cells, which complicates the production process, and when using separate batches of tannin, the antigen may be nonspecific when the blood serum of healthy animals is examined in RNGA, in addition, the diagnosticum has insufficient activity.

Наиболее близким аналогом является способ получения эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе, включающий приготовление формалинизированных эритроцитов с их последующей сенсибилизацией сенситином, полученным выращиванием бактериальной массы бруцелл, смыв ее гипертоническим раствором хлорида натрия, инактивацию, экстрагирование и отделение сенситина центрифугированием, при этом перед обработкой сенситином, формалинизированные эритроциты предварительно обрабатывают додецилсульфатом натрия в 1%-ной концентрации при 50-60ºС в течение 30 минут [RU 2283498 С1, 22.02.2005 г.]. Однако данный способ не позволяет получить антиген с высокой активностью, в связи с чем при диагностике бруцеллеза в неблагополучных хозяйствах РНГА с применением известного диагностикума недовыявляет часть больных животных, имеющих в сыворотке крови специфические гемагглютинины в диагностических титрах. Кроме того, производство эритроцитарного диагностикума этим способом дорогостоящее, т.к. требует большого количества исходного материала - бактериальной массы для извлечения сенситина и нагрузки им формалинизированных эритроцитов.The closest analogue is a method of producing an erythrocyte antigen for an indirect hemagglutination reaction during brucellosis, including the preparation of formalized red blood cells with their sensitization with sensitin obtained by growing the bacterial mass of brucella, washing it off with hypertonic sodium chloride solution, inactivating, extracting and centrifuging before sensitization sensitin, formalin erythrocytes are pre-treated with sodium dodecyl sulfate in 1 % concentration at 50-60 ° C for 30 minutes [RU 2283498 C1, 02.22.2005]. However, this method does not allow to obtain an antigen with high activity, and therefore, in the diagnosis of brucellosis in dysfunctional farms of RNGA using a known diagnosticum, some of the sick animals with specific hemagglutinins in diagnostic titers are not detected in the blood serum. In addition, the production of red blood cell diagnostic method in this way is expensive, because It requires a large amount of source material - a bacterial mass for the extraction of sensitin and its load of formalinized red blood cells.

Техническим результатом изобретения является разработка способа получения эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе (РНГА), обладающего более высокой активностью при обнаружении больных бруцеллезом животных при снижении экономических затрат на его производство.The technical result of the invention is the development of a method of producing an erythrocyte antigen for an indirect hemagglutination reaction in brucellosis (RNGA), which has higher activity in the detection of animals suffering from brucellosis while reducing the economic cost of its production.

Технический результат достигается тем, что приготавливают формалинизированные эритроциты барана и сенсибилизируют их сенситином, полученным выращиванием бактериальной массы бруцелл, смывом ее гипертоническим раствором хлорида натрия, инактивируют, экстрагируют и отделяют сенситин центрифугированием, при этом формалинизированные эритроциты барана сенсибилизируют антигеном, изготовленным при воздействии на инактивированную бактериальную массу штамма В.abortus 19 в дозе 40-50 млрд микробных клеток в 1 мл додецилсульфата натрия в 1%-ной концентрации при 70-72ºС в течение 45 минут с последующей нагрузкой эритроцитов сенситином из расчета 0,2-0,4 мл антигена на 1 мл 5%-ной взвеси эритроцитов.The technical result is achieved by preparing formalized sheep erythrocytes and sensitizing them with sensitin obtained by growing the bacterial mass of brucella, washing it with a hypertonic sodium chloride solution, inactivating, extracting and separating sensitin by centrifugation, while formalized sheep erythrocytes sensitized to produce an antigen the mass of strain B. abortus 19 at a dose of 40-50 billion microbial cells in 1 ml of sodium dodecyl sulfate in 1% conc centration at 70-72 ° C for 45 minutes followed by a load of red blood cells with sensitin at the rate of 0.2-0.4 ml of antigen per 1 ml of 5% suspension of red blood cells.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.The proposed method is as follows.

Трехсуточную агаровую культуру бруцелл штамма В.abortus 19 смывают 12%-ным раствором хлорида натрия, фильтруют и подвергают инактивации автоклавированием при 1 атм. (120ºС) в течение 30 минут, доводят концентрацию бруцелл до 40-50 млрд м.к. в 1 мл 12%-ным раствором NaCl. К бактериальной взвеси добавляют 1% додецилсульфата натрия, после чего ее нагревают в водяной бане при температуре 70-72ºС в течение 45 минут при периодическом перемешивании с интервалом 5 минут.A three-day agar culture of brucella strain B. abortus 19 is washed off with a 12% sodium chloride solution, filtered and subjected to inactivation by autoclaving at 1 atm. (120ºС) within 30 minutes, bring the concentration of brucella to 40-50 billion m.k. in 1 ml of 12% NaCl solution. To the bacterial suspension add 1% sodium dodecyl sulfate, after which it is heated in a water bath at a temperature of 70-72 ° C for 45 minutes with periodic stirring at intervals of 5 minutes.

Взвесь декантируют путем центрифугирования при 7-8 тыс об/мин в течение 30 минут, надосадочную жидкость (антиген) используют для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана.The suspension is decanted by centrifugation at 7-8 thousand rpm for 30 minutes, the supernatant (antigen) is used to sensitize the formalized sheep erythrocytes.

Сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят оптимальной дозой сенситина, которую определяют при титрации сенситина со стандартным образцом сыворотки антибруцелла абортус.The sensitization of formalin erythrocytes is carried out by the optimal dose of sensitin, which is determined by titration of sensitin with a standard sample of anti-Brucella abortus serum.

Специфичность и активность сенситина проверяют при исследовании в РНГА негативной сыворотки и стандартного образца сыворотки антибруцелла абортус.The specificity and activity of sensitin is checked by examining negative serum and a standard sample of anti-Brucella abortus serum in RNGA.

Пример определения оптимальных условий сенсибилизации формалинизированных эритроцитов сенситином, полученным при воздействии на бактериальную взвесь разных концентраций додецилсульфата, представлен в таблице 1. Данные таблицы 1 показывают, что оптимальной концентрацией додецилсульфата натрия при извлечении антигена является 1%-ная его концентрация, позволяющая получить активный сенситин с заданной активностью в РНГА не ниже титра 1:3200 с оценкой 4 креста при постановке со стандартным образцом сыворотки антибруцелла абортус и отрицательным результате с негативной сывороткой.An example of determining the optimal sensitization conditions for formalin erythrocytes with sensitin obtained by exposing the bacterial suspension to different concentrations of dodecyl sulfate is presented in Table 1. The data in Table 1 show that the optimal concentration of sodium dodecyl sulfate during antigen extraction is its 1% concentration, which makes it possible to obtain active sensitin with the specified activity in the RNGA is not lower than a titer of 1: 3200 with a score of 4 cross when staged with a standard sample of anti-Brucella abortus serum and negative negative result with negative serum.

Оптимальную сенсибилизирующую дозу сенситина, необходимую для получения эритроцитарного антигена для РНГА, определяют путем адсорбции его в возрастающих концентрациях на формалинизированных эритроцитах и испытания активности сенсибилизированных эритроцитов в РНГА при титрации со стандартным образцом сыворотки антибруцелла абортус, специфичности - с негативной сывороткой и физиологическим раствором.The optimal sensitizing dose of sensitin necessary to obtain an erythrocyte antigen for RNHA is determined by adsorbing it in increasing concentrations on formalin erythrocytes and testing the activity of sensitized erythrocytes in RNGA by titration with a standard sample of anti-Brucella abortus serum, specificity with saline and negative saline.

При титрации сенситина для сенсибилизации эритроцитов его добавляют в количествах 0,1; 0,2; 0,4; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 мл к 1 мл 5%-ной взвеси формалинизированных эритроцитов.When titrating sensitin to sensitize red blood cells, it is added in quantities of 0.1; 0.2; 0.4; 1.0; 1.5; 2.0; 3.0 ml to 1 ml of a 5% suspension of formalin erythrocytes.

Результаты проверки активности и специфичности антигена, полученного при сенсибилизации эритроцитов разными дозами сенситина, представлены в таблице 2. Анализ данных таблицы 2 показывает, что антиген, изготовленный путем обработки формалинизированных эритроцитов 1%-ной концентрацией додецилсульфата натрия с последующей их сенсибилизацией сенситином, извлеченным автоклавированием, обладает более низкой серологической активностью в сравнении с антигеном, полученным при сенсибилизации формалинизированных эритроцитов сенситином, извлеченным при воздействии 1%-ной концентрации додецилсульфата. Оптимальным количеством сенситина для обработки эритроцитов является 0,2-0,4 мл на 1 мл 5%-ной взвеси эритроцитов, эритроцитарный антиген обладает активностью (титр 1:6400-1:12800) и специфичностью (отрицательный результат с негативной сывороткой и физиологическим раствором).The results of checking the activity and specificity of the antigen obtained by sensitizing erythrocytes with different doses of sensitin are presented in Table 2. An analysis of the data in Table 2 shows that the antigen produced by processing formalized red blood cells with a 1% concentration of sodium dodecyl sulfate followed by their sensitization by autoclaving with sensitin, has a lower serological activity in comparison with the antigen obtained by sensitization of formalized red blood cells with sensitin, due to echennym when exposed to a 1% concentration of sodium dodecyl. The optimal amount of sensitin for the treatment of red blood cells is 0.2-0.4 ml per 1 ml of a 5% suspension of red blood cells, the red blood cell antigen has activity (titer 1: 6400-1: 12800) and specificity (negative result with negative serum and physiological saline )

При сенсибилизации эритроцитов, предварительно обработанных детергентом (по аналогу), для получения титра РНГА 1:3200 со стандартным образцом сыворотки антибруцелла абортус требуется 1,5 мл сенситина, т.е. в 7,5 раз больше, чем с предлагаемым антигеном.When sensitizing erythrocytes pretreated with a detergent (similar), 1.5 ml of sensitin is required to obtain an RNGA titer of 1: 3200 with a standard sample of anti-Brucella serum abortus, i.e. 7.5 times more than with the proposed antigen.

Следовательно, сенсибилизация формалинизированных эритроцитов сенситином, изготовленным предлагаемым способом, из расчета 0,2-0,4 мл его на 1 мл 5%-ной взвеси эритроцитов, позволяет получить специфичный и более активный (по сравнению с аналогом) бруцеллезный эритроцитарный антиген для РНГА.Therefore, the sensitization of formalized erythrocytes with sensitin made by the proposed method, at the rate of 0.2-0.4 ml of it per 1 ml of 5% suspension of erythrocytes, allows to obtain a specific and more active (in comparison with the analogue) brucellosis erythrocyte antigen for RNGA.

Результаты испытания специфичности и активности бруцеллезных эритроцитарных антигенов, изготовленных разными способами, представлены в таблицах 3, 4. Данные таблицы 3 и 4 показывают, что предлагаемый способ позволяет получить специфичный и более активный бруцеллезный эритроцитарный антиген в сравнении с аналогом.The results of testing the specificity and activity of brucellosis erythrocyte antigens produced by different methods are presented in tables 3, 4. The data in tables 3 and 4 show that the proposed method allows to obtain a specific and more active brucellosis erythrocyte antigen in comparison with the analogue.

Активность диагностикума повышена за счет воздействия на микробную взвесь химического детергента - 1% додецилсульфата натрия. Экономические затраты на производство снижены в два раза за счет уменьшения концентрации микробных клеток при извлечении сенситина и уменьшении его количества при нагрузке формалинизированных эритроцитов.The activity of the diagnosticum is increased due to exposure to a microbial suspension of a chemical detergent - 1% sodium dodecyl sulfate. The economic costs of production are halved due to a decrease in the concentration of microbial cells during the extraction of sensitin and a decrease in its quantity under the load of formalized red blood cells.

Эритроцитарный бруцеллезный антиген для РНГА, изготовленный по способу ВНИИБТЖ, испытан при проведении эпизоотического контроля за благополучием хозяйств по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота и оздоровлении неблагополучных пунктов с высоким экономическим и противоэпизоотическим эффектами в хозяйствах Омской области.The erythrocyte brucellosis antigen for RNGA, manufactured by the VNIIBTZ method, was tested during epizootic monitoring of the welfare of farms for brucellosis of cattle and small cattle and the rehabilitation of dysfunctional sites with high economic and anti-epizootic effects in the farms of the Omsk region.

Таблица 1Table 1 Влияние концентрации додецилсульфата натрия на активность и специфичность бруцеллезного эритроцитарного антигенаThe effect of sodium dodecyl sulfate concentration on the activity and specificity of brucellosis erythrocyte antigen Концентрация додецилсульфата натрияSodium dodecyl sulfate concentration Количество антигена на 1 мл 5,0% взвеси эритроцитовThe amount of antigen per 1 ml of 5.0% suspension of red blood cells Титр со стандартным образцом сыворотки антибруцелла абортусTitle with a standard sample of anti-brucella abortus serum Контроль с негативной сывороткойNegative Serum Control Контроль с физиологическим растворомSaline Control 0,25%0.25% 0,20.2 -- -- -- 0,40.4 -- -- -- 1one -- -- -- 22 1:400+++1: 400 +++ -- -- 33 1:800+++1: 800 +++ -- -- 0,5%0.5% 0,20.2 -- -- -- 0,40.4 1:200++++1: 200 ++++ -- -- 1one 1:200++++1: 200 ++++ -- -- 22 1:800++++1: 800 ++++ -- -- 33 1:1600++++1: 1600 ++++ -- -- 1,0%1,0% 0,20.2 1:6400++++1: 6400 ++++ -- -- 0,40.4 1:12800++++1: 12800 ++++ -- -- 1one 1:25600+++1: 25600 +++ -- -- 22 1:25600+++1: 25600 +++ -- -- 33 1:51200+++1: 51200 +++ -- -- 1,5%1.5% 0,20.2 1:3200++++1: 3200 ++++ -- ++++ 0,40.4 1:6400++++1: 6400 ++++ ++++ ++++++++ 1one 1:12800++++1: 12800 ++++ ++++++++ ++++++++ 22 1:25600++++1: 25600 ++++ ++++++++ ++++++++ 33 1:51200++++1: 51200 ++++ ++++++++ ++++++++ 2,0%2.0% 0,20.2 1:6400++++1: 6400 ++++ ++++++++ ++++++++ 0,40.4 1:25600++++1: 25600 ++++ ++++++++ ++++++++ 1one 1:51200++++1: 51200 ++++ ++++++++ ++++++++ 22 1:51200++++1: 51200 ++++ ++++++++ ++++++++ 33 1:51200++++1: 51200 ++++ ++++++++ ++++++++

Таблица 2table 2 Результаты титрации сенситина и проверки активности, специфичности эритроцитарных бруцеллезных антигенов в РНГАResults of titration of sensitin and verification of the activity, specificity of erythrocyte brucellosis antigens in RNGA Количество сенситина на 1мл 5% взвеси эритроциновThe amount of sensitin per 1ml 5% suspension of red blood cells Титр в РНГАCaption in RNGA со стандартным образцом сыворотки антибруцелла абортусwith a standard sample of anti-brucella abortus serum с негативной сывороткойwith negative serum с физ. растворомwith physical solution 1:2001: 200 1:4001: 400 1:8001: 800 1:16001: 1600 1:32001: 3200 1:64001: 6400 1:128001: 12800 1:256001: 25600 1:501:50 1:1001: 100 1:2001: 200 1:4001: 400 1one 22 33 4four 55 66 77 88 99 1010 11eleven 1212 1313 14fourteen с антигеном ВНИИБТЖwith antigen VNIIBTZH 0,10.1 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++ ++ -- -- -- -- -- -- -- 0,20.2 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++ ++ -- -- -- -- -- 0,40.4 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++ -- -- -- -- -- 1,01,0 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++ -- -- -- -- -- 1,51,5 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++ -- -- -- -- -- 2,02.0 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++ -- -- -- -- -- 3,03.0 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++ -- -- -- -- с антигеном Прикаспийского ЗНИВИwith antigen of the Caspian ZNIVI 0,10.1 -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- 0,20.2 -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- 0,40.4 ++++ ++++ ++++ ++++ -- -- -- -- -- -- -- -- -- 1,01,0 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++ ++ -- -- -- -- -- -- -- -- 1,51,5 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++ -- -- -- -- -- -- -- 2,02.0 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++ -- -- -- -- -- -- -- 3,03.0 ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++++ ++++++ ++++ -- -- -- -- -- --

Таблица 3Table 3 Результаты испытания специфичности бруцеллезных эритроцитарных антигеновBrucellosis erythrocyte antigen specificity test results № п/пNo. p / p Сыворотки крови, подвергнутые исследованиюExamined blood sera Количество исследованных пробThe number of samples studied Результат исследованияResearch result с антигеном НИИБТЖwith antigen NIIBTZH с антигеном Прикаспийского ЗНИВИ (аналог)with antigen of the Caspian ZNIVI (analogue) 1one здорового по бруцеллезу крупного рогатого скотаhealthy cattle brucellosis 25942594 -- -- 22 здорового по бруцеллезу мелкого рогатого скотаhealthy cattle brucellosis 666666 -- -- 33 здоровых по бруцеллезу свинейhealthy brucellosis pigs 748748 -- -- 4four больного лейкозом крупного рогатого скотаcattle leukemia 3636 -- -- 55 больного лептоспирозом крупного рогатого скотаcattle leptospirosis 20twenty -- -- 66 туляремийныеtularemia 33 -- -- 77 сальмонеллезныеsalmonella 4four -- -- 88 больного инфекционным эпидидимитом барановa patient with infectious sheep epididymitis 55 -- -- 99 больных бруцеллезом собак, вызванным В.canispatients with dog brucellosis caused by B.canis 1010 -- -- Всего исследованоTotal investigated 40864086 -- --

Таблица 4Table 4 Результаты сравнительного испытания активности бруцеллезных эритроцитарных антигеновThe results of a comparative test of the activity of brucellosis erythrocyte antigens Вид животногоKind of animal Количество исследованных пробThe number of samples studied Реагировали положительно в РНГАReacted positively in RNGA с антигеном ВНИИБТЖwith antigen VNIIBTZH с антигеном Прикаспийского ЗНИВИ (аналог)with antigen of the Caspian ZNIVI (analogue) абс.abs. %% средний титрaverage titer абс.abs. %% средний титрaverage titer крупный рогатый скот неблагополучных по бруцеллезу хозяйствcattle of brucellosis dysfunctional farms 7878 20twenty 25,625.6 1:2901: 290 15fifteen 19,219,2 1:2131: 213 мелкий рогатый скот неблагополучных по бруцеллезу хозяйствsmall cattle of dysfunctional brucellosis farms 157157 9292 58,658.6 1:1331: 133 5959 37,637.6 1:1011: 101

Claims (1)

Способ получения эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе, включающий приготовление формалинизированных эритроцитов барана с их последующей сенсибилизацией сенситином, полученным выращиванием бактериальной массы бруцелл, смывом ее гипертоническим раствором хлорида натрия, инактивацию, экстрагирование и отделение сенситина центрифугированием, отличающийся тем, что формалинизированные эритроциты барана сенсибилизируют антигеном, изготовленным при воздействии на инактивированную бактериальную массу штамма В. abortus 19 в дозе 40-50 млрд микробных клеток в 1 мл додецилсульфата натрия в 1%-ной концентрации при 70-72°С в течение 45 мин, с последующей нагрузкой эритроцитов сенситином из расчета 0,2-0,4 мл антигена на 1 мл 5%-ной взвеси эритроцитов. A method of producing an erythrocyte antigen for an indirect hemagglutination reaction in brucellosis, comprising preparing formalized ram red blood cells with sensitization obtained by growing the bacterial mass of brucella, washing it off with a hypertonic sodium chloride solution, inactivation, extraction and separation of sensitin with a centrifine barafitina that is centrifit sensitize with antigen produced by exposure to inactivated bacterial the mass of strain B. abortus 19 at a dose of 40-50 billion microbial cells in 1 ml of sodium dodecyl sulfate in 1% concentration at 70-72 ° C for 45 minutes, followed by a load of red blood cells with sensitin at a rate of 0.2-0, 4 ml of antigen per 1 ml of 5% suspension of red blood cells.
RU2011139996/15A 2011-09-30 2011-09-30 Method to produce erythrocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis RU2484481C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011139996/15A RU2484481C1 (en) 2011-09-30 2011-09-30 Method to produce erythrocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011139996/15A RU2484481C1 (en) 2011-09-30 2011-09-30 Method to produce erythrocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2011139996A RU2011139996A (en) 2013-04-10
RU2484481C1 true RU2484481C1 (en) 2013-06-10

Family

ID=48785826

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2011139996/15A RU2484481C1 (en) 2011-09-30 2011-09-30 Method to produce erythrocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2484481C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2667121C2 (en) * 2016-10-31 2018-09-14 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт" Method for producing brucellar erythrocytic diagnosticum for indirect hemagglutination test (ihgt)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2085212C1 (en) * 1996-08-15 1997-07-27 Николай Данилович Скичко Method of preparing the common brucellosis antigen for pa, pck and pdck
US6582699B2 (en) * 1999-12-15 2003-06-24 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence In Her Brittanic Majesty's Government Of The United Kingdom Of Great Britain And Northern Ireland Combination vaccine for enhancing immunity against brucellosis
RU2268748C2 (en) * 2003-07-15 2006-01-27 Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ) Method for production of diagnosis serum against l-form brucella
US7364745B2 (en) * 2004-02-06 2008-04-29 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Development of a live, attenuated, recombinant vaccine for Brucellosis

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2085212C1 (en) * 1996-08-15 1997-07-27 Николай Данилович Скичко Method of preparing the common brucellosis antigen for pa, pck and pdck
US6582699B2 (en) * 1999-12-15 2003-06-24 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence In Her Brittanic Majesty's Government Of The United Kingdom Of Great Britain And Northern Ireland Combination vaccine for enhancing immunity against brucellosis
RU2268748C2 (en) * 2003-07-15 2006-01-27 Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ) Method for production of diagnosis serum against l-form brucella
US7364745B2 (en) * 2004-02-06 2008-04-29 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Development of a live, attenuated, recombinant vaccine for Brucellosis

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2667121C2 (en) * 2016-10-31 2018-09-14 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт" Method for producing brucellar erythrocytic diagnosticum for indirect hemagglutination test (ihgt)

Also Published As

Publication number Publication date
RU2011139996A (en) 2013-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210190781A1 (en) Detection of Interaction Between an Assay Substance and Blood or Blood Components for Immune Status Evaluation and Immune-Related Disease Detection and Diagnosis
McKee et al. Complement fixation test in lymphogranuloma venereum
CN104258386B (en) A kind of mink viral enteritis inactivated vaccine-canine distemper live vaccine combination
RU2484481C1 (en) Method to produce erythrocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis
RU2425377C1 (en) Method to diagnose leukosis in cattle
CN102004151B (en) Avian influenza virus H9 subtype hemagglutination inhibition antigen standard substance and preparation method thereof
RU2283498C1 (en) Method for obtaining erythrocytic antigen for reaction of indirect hemagglutination in case of brucellosis
CN115267203A (en) Method for detecting content of specific IgG and IgM of brucellosis in sheep and application
RU2560684C1 (en) Agent for diagnostics of bovine leukaemia and method of its application
RU2491553C2 (en) Method of production of r-brucellar erythrocytic antigen for indirect hemagglutination test (iht)
RU2714305C1 (en) Method of producing a brucellous erythrocyte antigen for the indirect hemagglutination reaction (ihar)
US20220127339A1 (en) Streptococcus pneumoniae antiserum without cross-reactivity and method for producing the same
CN111707822A (en) Mycoplasma gallisepticum antibody detection reagent and preparation method and application thereof
RU2715900C1 (en) Method for indicating radiotoxins in irradiated food and feedstuffs
CN106033038A (en) A method of processing serum used for avian infectious bronchitis hemagglutination inhibition assays
RU2324176C1 (en) Method of detecting radiotoxines in radiation-exposed alimentary products
CN1235048C (en) Neonatal hemolytic disease detection kit and use thereof
Watson Dourine and the complement fixation test
RU2754465C1 (en) Method for obtaining an erythrocyte diagnosticum for the indirect hemagglutination reaction (ihar) with clostridiosis of animals
CN116297120B (en) Method for detecting drug antibody in sample
CN115541887A (en) Method for detecting content of specific IgG and IgM of brucellosis of cattle and application
SU533376A1 (en) The method of obtaining Toxoplasma antigen
RU2812350C1 (en) Method of obtaining diagnostic serum against brucella in r-form
Khairani-Bejo et al. Acute phase response in mice experimentally infected with whole cell and exotoxin (PLD) extracted from Corynebacterium pseudotuberculosis
Doostdari et al. Evaluation of humoral immune responses of sheep vaccinated with Razi Institute Rev. 1 brucellosis vaccine in comparison to a Spanish (CZV) Rev. 1 vaccine

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20141001