RU2475741C1 - СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК Coxiella burnetii - Google Patents
СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК Coxiella burnetii Download PDFInfo
- Publication number
- RU2475741C1 RU2475741C1 RU2011144557/15A RU2011144557A RU2475741C1 RU 2475741 C1 RU2475741 C1 RU 2475741C1 RU 2011144557/15 A RU2011144557/15 A RU 2011144557/15A RU 2011144557 A RU2011144557 A RU 2011144557A RU 2475741 C1 RU2475741 C1 RU 2475741C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- coxiella burnetii
- plasma
- dna
- chain reaction
- polymerase chain
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии, и может быть использовано для подготовки биологического материала для выделения ДНК Coxiella burnetii из тромбоцитов. Изобретение заключается в том, что 4-5 мл крови из кубитальной вены набирают в стандартные пробирки для полимеразной цепной реакции с напылением на стенках динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, которую отстаивают в течение трех часов для выпадения эритроцитов в осадок, затем отбирают 700-800 мкл плазмы и разводят 0,11% фосфатным буфером, содержащим 20 мМ динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, в соотношении 1:1, после чего центрифугируют в течение 10 минут при 700 g и получают верхние слои плазмы, содержащие тромбоциты, для выделения которых 800 мкл надосадочной плазмы соединяют с ACD-буфером в соотношении 8:1 и вновь центрифугируют в течение 10 минут при 12000 g, при этом получают осадок тромбоцитов, пригодных для выявления ДНК Coxiella burnetii методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Изобретение позволяет повысить качество выделения генома ДНК Coxiella burnetii. 19 ил., 6 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии, инфекционным болезням, и может быть использовано для подготовки биологического материала для выделения ДНК Coxiella burnetii из тромбоцитов.
Для постановки диагноза лихорадки КУ в практическом здравоохранении продолжают использовать серологические тесты (реакция связывания комплемента, метод флюоресцирующих антител, иммуноферментный анализ), в основу которых заложено обнаружение и рос титра антител на антиген Coxiella burnetii. Однако, как правило, антитела появляются в крови пациентов в конце второй, в начале третьей недели заболевания, что, безусловно, затрудняет диагностику данного риккетсиоза, для которого характерен полиморфизм клинической картины, длительность течения заболевания и специфичность лечения.
В настоящее время во всем мире широкое распространение получил метод выявления генома возбудителей инфекционных заболеваний в виде полимеразной цепной реакции, который обладает высокой специфичностью, чувствительностью и визуализацией результатов (Angelakis E, Raoult D. Q fever. // Vet Microbiol. - 2009. - №7. - Vol.8). При этом выделение генома инфекционного агента из исследуемого биологического материала позволяет утверждать о тропности возбудителя к данным клеткам органов и систем.
На сегодняшний день считается, что Coxiella burnetii паразитируют клетки соединительной ткани и ретикулоэндотелиальной системы, при этом гистиоциты и макрофаги используются как плацдарм для их размножения и, в свою очередь, лейкоциты являются носителями генома возбудителя. Это утверждение основывается на анализе многих клинических наблюдений и патоморфологических данных модели лихорадки КУ на животных (Лобан К.М. Важнейшие риккетсиозы человека (руководство для врачей). - Л.: Медицина, 1980. - 376 с., ил.; Хавкин Т.Н. Патологоанатомическое и экспериментальное изучение морфологии Куриккетсиоза // Архив патологии. - 1977. - №2. - Т.39. - Вып.2. - С.75-83; Балаева Н.М. Взаимодействие риккетсий с клетками - эукариотами // ЖМЭИ. - 1990. - №2. - С.80-86). Поэтому известный метод-прототип подготовки биологического материала для идентификации ДНК Coxiella burnetii в полимеразной цепной реакции основывается на получении лейкоцитарного осадка (Инструкция по применению тест-системы «АмплиСенс»). Он заключается в проведении двух этапов центрифугирования плазмы, полученной из цельной периферической крови с 6% раствором ЭДТА в соотношении 1:20. Для исследования лейкоцитарной фракции 1,5 мл крови с раствором ЭДТА переносят в пробирку типа эппендорф и центрифугируют на микроцентрифуге при 700 g в течение 10 минут. Затем отбирают 500-600 мкл плазмы и центрифугируют при 12000 g в течение 10 минут. После чего оставляют для выделения ДНК осадок клеток, состоящий преимущественно из лейкоцитов и 200 мкл надосадочной плазмы над клетками.
Однако недостатком данного метода является то, что в биологическом материале присутствуют примеси - ингибиторы полимеразной цепной реакции. Известно, что гемоглобин, высвобожденный из контаменированных эритроцитов, снижает активность ДНК-полимераз либо через связывание с ней, либо через нарушение ее пространственной структуры с последующей утратой активности (Костюк С.А., Кулага O.K., Хворик Д.Ф. Новые аспекты клинического применения полимеразной цепной реакции // Журнал «Медицинские новости». - 2006. - №5. - С.14-18). В результате существенно снижается качество реакции и возможны отрицательные результаты в диагностике лихорадки КУ.
Задачей предлагаемого способа подготовки биологического материала является выделение тромбоцитов как носителей геномной ДНК Coxiella burnetii для постановки полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.
Изобретение направлено на повышение качества выделения генома ДНК Coxiella burnetii для диагностики лихорадки КУ.
Указанный технический результат достигается тем, что 4-5 мл крови из кубитальной вены набирают в стандартные пробирки для полимеразной цепной реакции с напылением на стенках динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, которую отстаивают в течение трех часов для выпадения эритроцитов в осадок, а затем отбирают 700-800 мкл плазмы и разводят 0,11% фосфатным буфером, содержащим 20 мМ динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, в соотношении 1:1, после чего центрифугируют в течение 10 минут при 700g на микроцентрифуге «miniSpin» и получают верхние слои плазмы, содержащие тромбоциты, для выделения которых 800 мкл надосадочной плазмы соединяют с ACD-буфером в соотношении 8:1 и вновь центрифугируют на микроцентрифуге «miniSpin» в течение 10 минут при 12000 g, при этом получают осадок тромбоцитов, пригодных для выявления ДНК Coxiella burnetii методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.
Сущность изобретения выражена совокупностью существенных признаков, достаточных для обеспечиваемого изобретением технического результата.
Отличительной особенностью предлагаемого способа является то, что авторы впервые для выявления ДНК Coxiella burnetii использовали осадок тромбоцитов как носителей генома возбудителя, ссылаясь на данные клинических наблюдений с констатацией фактов патологических изменений в системе гемостаза в виде тромбоцитопении, кровотечений, геморрагической сыпи (Лобан К.М. Важнейшие риккетсиозы человека (руководство для врачей). - Л.: Медицина, 1980. - 376 с., ил.; Пашанина Т.П., Рыбкина Р.А., Смелянский В.П. Ку-лихорадка: Этиология, эпидемиология, клиника, лабораторная диагностика, лечение: Методические рекомендации. - Волгоград: Изд-во ВолГУ, 2004. - 28 с.).
Предлагаемый способ позволяет рассматривать тромбоциты как мишень паразитирования Coxiella burnetii и определяет новую биологическую среды для выделения возбудителя, в результате чего увеличивается процент регистрации лихорадки КУ среди больных инфекционного профиля с недифференцированными диагнозами.
Для исследования использовали венозную кровь 41 больного в возрасте 39,9±0,75 лет, у которых регистрировали характерные клинические симптомы лихорадки КУ. Забор крови производили в среднем на 5,7±0,38 день болезни.
Для улучшения диагностики лихорадки КУ в полимеразной цепной реакции необходимо блокировать ингибиторы ДНК-полимераз. В предлагаемом способе это достигается более длительным по времени осаждением эритроцитов и истощением активности контаминантных ферментов плазмы ACD- и фосфатным буферами. Исключить разрушение тромбоцитов возможно соблюдением предлагаемого режима центрифугирования.
Способ осуществлялся следующим образом: из локтевой вены 4-5 мл крови набирают в стандартные пробирки для полимеразной цепной реакции с напылением на стенках динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА-К3). Далее отстаивают кровь в течение трех часов для выпадения эритроцитов в осадок. Затем отбирают 700-800 мкл плазмы и разводят фосфатным буфером (0,11%), содержащим 20 мМ динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, в соотношении 1:1. Далее центрифугируют в течение 10 минут при 700g на микроцентрифуге «miniSpin». В результате этого этапа осаждаются лейкоциты, а верхние слои плазмы содержат тромбоциты. Для их выделения отбирают 800 мкл надосадочной плазмы и соединяют с ACD-буфером в соотношении 8:1 и вновь центрифугируют на микроцентрифуге «miniSpin» в течение 10 минут при 12000 g. В состав ACD-буфера входят: лимонная кислота (0,8%), цитрат натрия (2,2%), глюкоза (2,4%). В результате второго этапа получают осадок тромбоцитов, который и является биологическим материалом для выявления ДНК Coxiella burnetii методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени, изложенного в инструкции по применению тест-системы «АмплиСенс® С. burnetii» - FRT.
С целью контроля чистоты выделения тромбоцитов из осадка мы делали мазки, окрашенные по Романовскому. Частота выделения их составляла 99%.
Предлагаемый способ апробирован на базе Государственного учреждения здравоохранения «Областной инфекционной клинической больницы им.A.M.Ничоги» г.Астрахани, кафедры инфекционных болезней Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия», Федерального государственного учреждения науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора.
Ниже приводятся результаты апробации.
Пример №1.
Кровь из вены больного П., в возрасте 27 лет, медицинская карта №3535., на пятый день болезни набирали в две стандартные пробирки для полимеразной цепной реакции с напыление на стенках динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА-К3) в количестве 4 мл. Для исследования лейкоцитарной фракции из первой пробирки 1,5 мл крови переносили в пробирку типа эппендорф и центрифугировали на микроцентрифуге «miniSpin» при 700g в течение 10 минут. Затем отбирали приблизительно 600 мкл плазмы и центрифугировали при 12000 g в течение 10 минут. После чего проводили выделение ДНК из данного материала методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени согласно Инструкции по применению тест-системы «АмплиСенс».
Кровь во второй пробирке отстаивали в течение трех часов для выпадения эритроцитов в осадок. Затем отбирали 800 мкл плазмы и разводили фосфатным буфером, содержащим 20 мМ динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, в соотношении 1:1. Далее центрифугировали в течение 10 минут при 700 g на микроцентрифуге «miniSpin». Затем отбирали 800 мкл надосадочной плазмы и соединяли с ACD-буфером в соотношении 8:1 и вновь центрифугировали на микроцентрифуге «miniSpin» в течение 10 минут при 12000 g. Из полученного осадка проводили выделение ДНК методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени согласно Инструкции по применению тест-системы «АмплиСенс».
На рисунке 1а представлены кривые флуоресцентного сигнала в режиме реального времени внутреннего контроля (ВКО) тромбоцитов и лейкоцитов, а на рисунке 1б - амплификации Coxiella burnetii из них. В данном случае амплификация ДНК в лейкоцитах произошла раньше на 0,57, чем в тромбоцитах, так как уровень порогового цикла у тромбоцитов составлял «Ct» - 19,06, а лейкоцитов «Ct» - 18,49, но, тем не менее, ДНК Coxiella burnetii была выделена из обеих сред.
Пример №2
Кровь больного Д., в возрасте 25 лет, медицинская карта №3573, обрабатывали, как в примере 1. На рисунке 2а представлены кривые флуоресцентного сигнала в режиме реального времени внутреннего контроля тромбоцитов и лейкоцитов. В отличие от первого рисунка на 2б уровень порогового цикла тромбоцитов ниже, чем у лейкоцитов на 5,82, те самым подтверждает более высокую чувствительность определения генома возбудителя из тромбоцитов.
Пример №3
Кровь больного А., в возрасте 26 лет, медицинская карта №3589, обрабатывали, как в примере 1. На рисунке 3а представлены кривые флуоресцентного сигнала в режиме реального времени внутреннего контроля тромбоцитов и лейкоцитов. На рисунке 3б подобно предыдущему примеру отображена более ранняя амплификации Coxiella burnetii в тромбоцитах, чем в лейкоцитах, при этом разница в уровнях порогового цикла составляет 1,05, подтверждая более высокую чувствительность определения генома возбудителя из тромбоцитов.
Пример №4
Кровь больного Б., в возрасте 50 лет, медицинская карта №4352, обрабатывали, как в примере 1. На рисунке 4а представлена кривая флуоресцентного сигнала в режиме реального времени внутреннего контроля из лейкоцитов, а на рисунке 4б его нет. На основании этого можно утверждать об отсутствии ДНК Coxiella burnetii в выделенном осадке лейкоцитов, что позволит в клинической практике в данном случае снять диагноз лихорадка КУ. Однако из осадка тромбоцитов, выделенных предлагаемым методом, удалось детектировать флуоресцентный сигнал в режиме реального времени в «Ct» равном 26,36 (рис.4г), при их внутреннем контроле «Ct» - 16,56 (рис.4в). Таким образом, подтвердив клинический диагноз.
Пример №5
Кровь больного М., в возрасте 57 лет, медицинская карта №4723, обрабатывали, как в примере 1.
На рисунке 5а представлена кривая флуоресцентного сигнала в режиме реального времени внутреннего контроля из лейкоцитов. В данном случае подобно предыдущему был получен отрицательный результат амплификации ДНК Coxiella burnetii из лейкоцитов (рис.5б). Однако из осадка тромбоцитов была осуществлена детекция флуоресцентного сигнал в режиме реального времени в «Ct» равном 22,94 (рис.5г) при внутреннем контроле «Ct» - 15,8 (рис.5в)
Пример №6
Кровь больной Е., в возрасте 30 лет, медицинская карта №4539, обрабатывали, как в примере 1. В данном примере геном возбудителя был выделен только из лейкоцитов. На рисунке 6а представлена кривая флуоресцентного сигнала в режиме реального времени внутреннего контроля из осадка лейкоцитов, а на рисунке 6б - результат амплификации ДНК Coxiella burnetii. В данном случае из осадка тромбоцитов геном возбудителя лихорадки Ку был не выделен, что подтверждает отсутствие кривой флуоресцентного сигнала на рисунке 6 г, при внутреннем контроле «Ct» - 16,58 (рис.6в).
Сравнительное изучение эффективности выделения ДНК Coxiella burnetii из тромбоцитов и лейкоцитарного осадка выявило, что наибольшее число положительных результатов ПЦР наблюдалось в апробируемом варианте, так как в 18% случаев диагноз лихорадка КУ был снят из-за того, что возбудитель не был выделен из лейкоцитов (рис.7).
Таким образом, предлагаемый способ подготовки биологического материала для проведения выделения ДНК Coxiella burnetii улучшает качество выделения генома ДНК Coxiella burnetii, увеличивая результат диагностики лихорадки КУ в практическом здравоохранении и, особенно в период эпидемиологического подъема заболеваемости данного риккетсиоза.
Claims (1)
- Способ подготовки биологического материала для выделения ДНК Coxiella burnetii путем выделения тромбоцитов из крови пациентов, отличающийся тем, что 4-5 мл крови из кубитальной вены набирают в стандартные пробирки для полимеразной цепной реакции с напылением на стенках динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, которую отстаивают в течение трех часов для выпадения эритроцитов в осадок, а затем отбирают 700-800 мкл плазмы и разводят 0,11%-ным фосфатным буфером, содержащим 20 мМ динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, в соотношении 1:1, после чего центрифугируют в течение 10 мин при 700 g на микроцентрифуге «miniSpin» и получают верхние слои плазмы, содержащие тромбоциты, для выделения которых 800 мкл надосадочной плазмы соединяют с ACD-буфером в соотношении 8:1 и вновь центрифугируют на микроцентрифуге «miniSpin» в течение 10 мин при 12000 g, при этом получают осадок тромбоцитов, пригодных для выявления ДНК Coxiella burnetii методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011144557/15A RU2475741C1 (ru) | 2011-11-02 | 2011-11-02 | СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК Coxiella burnetii |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011144557/15A RU2475741C1 (ru) | 2011-11-02 | 2011-11-02 | СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК Coxiella burnetii |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2475741C1 true RU2475741C1 (ru) | 2013-02-20 |
Family
ID=49121084
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011144557/15A RU2475741C1 (ru) | 2011-11-02 | 2011-11-02 | СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК Coxiella burnetii |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2475741C1 (ru) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0131170B1 (de) * | 1983-07-01 | 1988-08-10 | Maschinenfabrik Rieter Ag | Verfahren und Vorrichtung zum Falschdrallspinnen |
RU2167674C2 (ru) * | 1999-07-13 | 2001-05-27 | Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера | Инактивированная вакцина против ку-лихорадки |
EP1668160B1 (en) * | 2003-09-12 | 2010-04-28 | BioControl Systems, Inc. | Methods, compositions, and kits for the concentration and detection of microorganisms |
-
2011
- 2011-11-02 RU RU2011144557/15A patent/RU2475741C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0131170B1 (de) * | 1983-07-01 | 1988-08-10 | Maschinenfabrik Rieter Ag | Verfahren und Vorrichtung zum Falschdrallspinnen |
RU2167674C2 (ru) * | 1999-07-13 | 2001-05-27 | Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера | Инактивированная вакцина против ку-лихорадки |
EP1668160B1 (en) * | 2003-09-12 | 2010-04-28 | BioControl Systems, Inc. | Methods, compositions, and kits for the concentration and detection of microorganisms |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
B.P.MARMION et al., Long-term persistence of Coxiella burnetii after acute primary Q fever, An International Journal of Medicine 2005, Vol.98, Iss.1, pp.7-20. ([найден 10.09.2011], найден в Интернет http://qjmed.oxfordjoumals. org/content/98/1/7.full). * |
B.P.MARMION et al., Long-term persistence of Coxiella burnetii after acute primary Q fever, An International Journal of Medicine 2005, Vol.98, Iss.1, pp.7-20. ([найден 10.09.2011], найден в Интернет http://qjmed.oxfordjoumals. org/content/98/1/7.full). М.PANNING et al., High throughput detection of Coxiella burnetii by real-time PCR with internal control system and automated DNA preparation, BMC Microbiology 2008, 8:77 ([найден 10.09.2011], найден в Интернет http://www.biomedcentral.com/content/pdf/1471-2180-8-77.pdf). G.Q.ZHANG, Clinical Evaluation of a New PCR Assay for Detection of Coxiella burnetii in Human Serum Samples, JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Jan. 1998, p.77-80. * |
G.Q.ZHANG, Clinical Evaluation of a New PCR Assay for Detection of Coxiella burnetii in Human Serum Samples, JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Jan. 1998, p.77-80. * |
М.PANNING et al., High throughput detection of Coxiella burnetii by real-time PCR with internal control system and automated DNA preparation, BMC Microbiology 2008, 8:77 ([найден 10.09.2011], найден в Интернет http://www.biomedcentral.com/content/pdf/1471-2180-8-77.pdf). * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Savoie et al. | Direct correlation between the load of Epstein-Barr virus-infected lymphocytes in the peripheral blood of pediatric transplant patients and risk of lymphoproliferative disease | |
Le Bourgeois et al. | Nonsteroidal anti-inflammatory drug without antibiotics for acute viral infection increases the empyema risk in children: a matched case-control study | |
DeLong et al. | Conceptual design of a universal donor screening approach for vaginal microbiota transplant | |
Arvelo et al. | Diagnostic performance of rectal swab versus bulk stool specimens for the detection of rotavirus and norovirus: implications for outbreak investigations | |
Nelson et al. | Francisella tularensis transmission by solid organ transplantation, 2017 | |
RU2607006C1 (ru) | Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae | |
Khalafalla | Zoonotic diseases transmitted from the camels | |
RU2475741C1 (ru) | СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК Coxiella burnetii | |
WO2013163935A1 (zh) | 一种纯净的胎儿完整基因组dna的分离获取方法 | |
Chen et al. | Epidemiological and genetic characteristics of rabies virus transmitted through organ transplantation | |
Gooskens et al. | Severe influenza resembling hemorrhagic shock and encephalopathy syndrome | |
Purwar et al. | Triad of infective endocarditis, splenic abscess, and septicemia caused by Brucella melitensis | |
Coleman et al. | Markers to differentiate between Kaposi's sarcoma and tuberculous pleural effusions in HIV-positive patients | |
CN103882134A (zh) | 一种用于检测阴道加德纳菌的引物对、试剂盒及其应用 | |
Antwi et al. | Urine dipstick as a screening test for urinary tract infection | |
Motse et al. | Predictors of urinary tract infection and their diagnostic performances among Cameroonian under-five | |
Salman et al. | ABO blood group and incidence of Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis infections among child bearing women in Kirkuk Province | |
US20210324330A1 (en) | Methods for noninvasive detection, diagnosis and treatment of disease | |
RU2533238C1 (ru) | Способ выявления днк mycoplasma hominis из образцов крови | |
Mastutik et al. | Detection of cytomegalovirus in urine specimen of cholestatic infants by polymerase chain reaction | |
Khalaf et al. | Clinical diagnosis of the first cases of extrapulmonary (GIT) COVID-19 in Thi-Qar, south of Iraq. | |
Saayman | Profiling Enterovirus and Parvovirus B19 in sudden and unexpected death in infancy (SUDI) at the Tygerberg Medico-legal Mortuary and the role of myocarditis as a possible cause of death | |
Alsayab et al. | Cytomegalovirus Infection in Multi-Transfused β-Thalassemia Major Patients in Basrah. Serology and Molecular Diagnosis | |
RU2817215C2 (ru) | Способ диагностики аллоиммунной тромбоцитопении новорожденных | |
Akhtar et al. | Gastrointestinal adenovirus infections in a tertiary referral centre in Saudi Arabia |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20131103 |