RU2452774C1 - Method of evaluating bacterial load of urine, prostatic secretion, and ejaculate - Google Patents
Method of evaluating bacterial load of urine, prostatic secretion, and ejaculate Download PDFInfo
- Publication number
- RU2452774C1 RU2452774C1 RU2011103414/10A RU2011103414A RU2452774C1 RU 2452774 C1 RU2452774 C1 RU 2452774C1 RU 2011103414/10 A RU2011103414/10 A RU 2011103414/10A RU 2011103414 A RU2011103414 A RU 2011103414A RU 2452774 C1 RU2452774 C1 RU 2452774C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- agar
- chromogenic
- medium
- urine
- clostridial
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к бактериологии, а именно к способам определения обсемененности биологического материала (мочи, секрета предстательной железы, эякулята) микроорганизмами, и может быть использовано для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека.The invention relates to bacteriology, and in particular to methods for determining the contamination of biological material (urine, prostate secretion, ejaculate) with microorganisms, and can be used to establish the diagnostic significance of microorganisms in local infectious and inflammatory diseases and dysbiotic conditions of the human urogenital tract.
Отмеченный в последние годы рост иммунодефицитных состояний и изменение структуры инфекционной патологии, обусловленные неблагоприятными экологическими и социальными факторами способствует увеличению заболеваемости оппортунистическими инфекциями, передаваемыми половым путем, в том числе недостаточно изученными. Это связано с рядом особенностей урогенитальных инфекций и их возбудителей: их широким распространением и длительностью циркуляции антител после перенесенной инфекции (особенно IgG-антител, выявляемых в иммуноферментном анализе (ИФА)), наличием хронических и латентных форм, частыми микст-инфекциями, высокой серологической гетерогенностью и антигенной изменчивостью, широким спектром перекрестных серологических реакций, низкими титрами специфических иммуноглобулинов при локальных формах инфекций и др. Наибольшую диагностическую ценность имеют методы выявления возбудителей и их антигенов, в связи с чем бактериологическая диагностика приобретает решающую роль в распознавании урогенитальных инфекций. Появление большого числа новых диагностических препаратов и методов требует оптимизации лабораторной диагностики урогенитальных инфекций.The growth of immunodeficiency states and a change in the structure of infectious pathology noted in recent years, due to adverse environmental and social factors, contribute to an increase in the incidence of opportunistic sexually transmitted infections, including insufficiently studied ones. This is due to a number of features of urogenital infections and their pathogens: their widespread distribution and the duration of the circulation of antibodies after infection (especially IgG antibodies detected in an enzyme-linked immunosorbent assay), the presence of chronic and latent forms, frequent mixed infections, and high serological heterogeneity and antigenic variability, a wide range of cross-serological reactions, low titers of specific immunoglobulins in local forms of infections, etc. The greatest diagnostic value There are methods for identifying pathogens and their antigens, in connection with which bacteriological diagnosis acquires a decisive role in the recognition of urogenital infections. The emergence of a large number of new diagnostic drugs and methods requires the optimization of laboratory diagnosis of urogenital infections.
Описан способ оценки степени микробной обсемененности биологического материала, заключающийся в прижизненном окрашивании бактерий. В качестве красителя используется насыщенный спиртовый раствор метиленового синего в разведении 1:10000 [Кривошеина Ю.С. // Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней. М., 1986. - С.14-15]. Для этого на предметном стекле смешивают каплю из центрифугата субстрата с раствором красителя и накрывают покровным стеклом. Микроскопируют объективом ×40.Describes a method for assessing the degree of microbial contamination of biological material, which consists in intravital staining of bacteria. A saturated alcohol solution of methylene blue at a dilution of 1: 10000 is used as a dye [Krivosheina Yu.S. // Guide to practical exercises in medical microbiology and laboratory diagnosis of infectious diseases. M., 1986. - S.14-15]. For this, a drop from a centrifugate substrate with a dye solution is mixed on a glass slide and covered with a coverslip. Microscope with a × 40 lens.
Однако морфологические признаки бактерий при этом способе окрашивания трудно различимы, что позволяет использовать этот метод лишь для качественной оценки (подтверждения наличия или отсутствия) микробной флоры.However, the morphological signs of bacteria with this staining method are difficult to distinguish, which allows using this method only for a qualitative assessment (confirmation of the presence or absence) of microbial flora.
Известен способ диагностики урогенитальных инфекций, вызываемых Mycoplasma hominis (патент РФ №2261903, 10.10.2005), который включает введение питательной среды, способствующей обнаружению возбудителей заболеваний, в лунки культурального планшета, исследуемого материала, индикатора и вещества, создающего анаэробные условия и анализ изменения цвета питательной среды. В качестве питательной среды используют среду, содержащую питательную основу, стимуляторы роста, аргинин, лошадиную сыворотку и дистиллированную воду.A known method for the diagnosis of urogenital infections caused by Mycoplasma hominis (RF patent No. 2261903, 10.10.2005), which includes the introduction of a nutrient medium that facilitates the detection of pathogens in the wells of a culture plate, test material, indicator and substances that create anaerobic conditions and analysis of color changes nutrient medium. As a nutrient medium using a medium containing a nutrient base, growth stimulants, arginine, horse serum and distilled water.
Недостатки данного метода в том, что не определяется количество микоплазм, что является важным, так как они относятся к факультативной микрофлоре различных биотопов, в частности урогенитального тракта и их количество в норме составляет 103 КОЕ/мл.The disadvantages of this method are that the number of mycoplasmas is not determined, which is important, since they relate to the optional microflora of various biotopes, in particular the urogenital tract, and their number is normally 10 3 CFU / ml.
Известен способ выявления обсемененности объектов внешней среды (патент РФ №2372406, 10.11.2009) грамотрицательными бактериями рода Pseudomonas и Acinetobacter путем исследования смывов, отличающийся тем, что смывы фильтруют через бактериальные фильтры с диаметром пор 0,22 мкм, на которых концентрируются бактерии, содержащиеся в минимальных количествах, и/или покоящиеся формы, с последующим ПЦР-анализом элюстрированной тотальной ДНК с использованием родо- и видоспецифичных праймеров к данным бактериям.A known method for detecting contamination of environmental objects (RF patent No. 2372406, 10.11.2009) by gram-negative bacteria of the genus Pseudomonas and Acinetobacter by studying swabs, characterized in that the swabs are filtered through bacterial filters with a pore diameter of 0.22 μm, on which the bacteria contained are concentrated in minimal amounts, and / or resting forms, followed by PCR analysis of the eluted total DNA using rhodo- and species-specific primers for these bacteria.
Недостатки данного метода в том, что исследование является трудоемким, так как необходимо использовать специальные фильтры, которые отсутствуют в бактериологических лабораториях, а последующая ПЦР диагностика только регистрирует их наличие, но не количество, что является важным критерием для диагностики заболеваний, вызванных уропатогенной микрофлорой.The disadvantages of this method are that the study is time-consuming, since it is necessary to use special filters that are not available in bacteriological laboratories, and subsequent PCR diagnostics only detect their presence, but not quantity, which is an important criterion for the diagnosis of diseases caused by uropathogenic microflora.
Наиболее близким по совокупности признаков к заявляемому способу является способ дифференциации микрофлоры урогенитального тракта человека (патент РФ №2260054, 10.09.2005), который осуществляют путем забора исследуемого материала, его посева на селективные питательные среды (Columbia-agar, среда Эндо, желточно-солевой агар), выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов, определения у выделенных микроорганизмов способности к инактивации антимикробного белка тромбоцитов. К нормальной микрофлоре урогенитального тракта человека относят микроорганизмы, не обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов или обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов 20% и менее. Исследуют отделяемое уретры и/или секрет простаты, семенную жидкость. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24-48 часов.The closest set of features to the claimed method is a method of differentiating microflora of the human urogenital tract (RF patent No. 2260054, 09/10/2005), which is carried out by sampling the test material, seeding it on selective nutrient media (Columbia-agar, Endo medium, vitelline-salt agar), isolation and identification of pure cultures of microorganisms, determination of the ability of the isolated microorganisms to inactivate the antimicrobial protein of platelets. The normal microflora of the human urogenital tract include microorganisms that do not have the ability to inactivate the antimicrobial protein of platelets or have the ability to inactivate the antimicrobial protein of platelets of 20% or less. Examine urethral discharge and / or prostate secretion, seminal fluid. Crops are incubated at 37 ° C for 24-48 hours.
Недостатком прототипа является то, что необходимо выделять у каждого вида микроорганизма антимикробный фактор тромбоцитов и по наличию его в определенной концентрации в каждом из микробов или отсутствии можно судить о том, агрессивен ли микроб или он относится к нормальной флоре. Методика сложная, трудоемкая и не применима в широкой практике клинических лабораторий, а только в научно-исследовательских целях. При этом изучаются, в основном, факультативно-анаэробные уропатогенные бактерии, а многочисленная группа неклостридиально-анаэробных бактерий практически не учитывается при первичном посеве материала, что сужает круг бактерий этиологически причастных к развитию заболеваний.The disadvantage of the prototype is that it is necessary to isolate the antimicrobial factor of platelets in each type of microorganism and by the presence of it in a certain concentration in each of the microbes or in the absence, it can be judged whether the microbe is aggressive or it belongs to the normal flora. The technique is complex, time-consuming and not applicable in the wide practice of clinical laboratories, but only for research purposes. At the same time, facultatively anaerobic uropathogenic bacteria are studied, and a large group of non-clostridial-anaerobic bacteria is practically not taken into account during the initial seeding of the material, which narrows the circle of bacteria etiologically involved in the development of diseases.
Основной задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является повышение точности метода, расширение спектра определяемых факультативно-анаэробных и неклостридиально-анаэробных бактерий.The main task to be solved by the claimed invention is aimed at improving the accuracy of the method, expanding the spectrum of determined optional anaerobic and non-clostridial anaerobic bacteria.
Поставленная задача решается тем, что определение бактериологической обсемененности мочи, секрета предстательной железы и эякулята факультативно-анаэробными и неклостридиально-анаэробными бактериями, включает забор материала, его посев на селективные питательные среды, выделение и идентификацию культур микроорганизмов, при этом производят посев мочи, секрета предстательной железы и эякулята на среду Блаурокка, бульон Шадлера, агар Шадлера, кровяной агар (КА) на основе среды Мюллер-Хинтон, желчно-эскулиновый агар для бактероидов - для культивирования неклостридиально-анаэробных бактерий; среду Эндо, хромогенный селективный агар для энтерококков, хромогенный селективный агар для кандид, хромогенный селективный агар для клебсиелл, хромогенный селективный агар для стафилококков, КА на основе среды Мюллер-Хинтон - для культивирования факультативно-анаэробных бактерий в последовательных разведениях от 10-1 до 10-10 и выявляют факультативно-анаэробные и некло-стридиально-анаэробные бактерии и их концентрацию с минимального уровня разведении 10-1.The problem is solved in that the determination of bacteriological contamination of urine, prostate secretion and ejaculate with facultative anaerobic and non-clostridial anaerobic bacteria includes sampling the material, plating it on selective nutrient media, isolating and identifying cultures of microorganisms, while urine is sown, prostate secretion glands and ejaculates on Blaurock medium, Schadler’s broth, Schadler’s agar, blood agar (KA) based on Müller-Hinton medium, gall-esculin agar for bacteroids - for cultivation of non-clostridial anaerobic bacteria; Endo medium, chromogenic selective agar for enterococci, chromogenic selective agar for candida, chromogenic selective agar for Klebsiella, chromogenic selective agar for staphylococci, KA based on Muller-Hinton medium - for cultivation of facultative anaerobic bacteria in serial dilutions from 10 -1 to 10 -10 and identify facultative anaerobic and non-clostridial anaerobic bacteria and their concentration from a minimum dilution level of 10 -1 .
Неожиданный технический результат, достигаемый при осуществлении заявленного способа, заключается:The unexpected technical result achieved by the implementation of the claimed method is:
- в повышении точности диагностики за счет расширения спектра определяемых микроорганизмов, в частности, обширной и превалирующей во всех биотопах человеческого организма группы неклостридиально-анаэробных бактерий, которые не учитываются при рутинном бактериологическом исследовании мочи, секрета предстательной железы и эякулята.- to increase the accuracy of diagnosis by expanding the spectrum of microorganisms being determined, in particular, the group of non-clostridial-anaerobic bacteria, which is extensive and prevailing in all biotopes of the human body, which are not taken into account in routine bacteriological examination of urine, prostate secretion and ejaculate.
- в сокращении времени диагностики за счет использования нами хромогенных сред до 24 часов.- in reducing the time of diagnosis due to our use of chromogenic media up to 24 hours.
Так например, энтерококки стандартно культивируют на кровяном агаре и их идентификация проходит по биохимическим и антигенным свойствам.For example, enterococci are standardly cultivated on blood agar and their identification is based on biochemical and antigenic properties.
Использование нами хромогенной среды позволяет быстро дифференцировать данные микроорганизмы в моче, секрете предстательной железы, эякуляте, так как они специфически расщепляют присутствующие в среде хромогенного субстрата углеводы и по цвету колоний достаточно быстро и просто определить наиболее значимые роды (Enterococcus faecium, E.faecalis, E.hirae).Our use of a chromogenic medium allows us to quickly differentiate these microorganisms in urine, prostate secretion, and ejaculate, since they specifically break down the carbohydrates present in the environment of the chromogenic substrate and determine the most significant genera quickly and simply by the color of the colonies (Enterococcus faecium, E.faecalis, E .hirae).
Дрожжеподобные грибы рода Candida по стандарту культивируют на среде Сабуро, на которой не представляется возможности дифференцировать виды кандид.Yeast-like fungi of the genus Candida are cultivated according to the standard on Saburo medium, on which it is not possible to differentiate candida species.
Используемый нами хромогенный агар для дрожжеподобных грибов рода Candida является селективной и дифференциальной средой, которая способствует быстрому выделению грибов из смешанных культур и позволяет дифференцировать по цвету и морфологии колоний дрожжеподобные грибы рода Candida: C.albicans, C.krusei, C.glabrata, C.tropicalis, что удобно для быстрой идентификации дрожжеподобных грибов рода Candida в моче, секрете предстательной железы и эякуляте.The chromogenic agar we use for yeast-like fungi of the genus Candida is a selective and differential medium that promotes the rapid isolation of fungi from mixed cultures and allows us to differentiate the color and morphology of the colonies of yeast-like fungi of the genus Candida: C. albicans, C. krusei, C. glabrata, C. tropicalis, which is convenient for the rapid identification of yeast-like fungi of the genus Candida in urine, prostate secretion and ejaculate.
Аналогичные ситуации наблюдаются и при использовании хромогенных сред для стафилококков. В обычной лаборатории по стандарту стафилококки культивируют на желточно-солевом агаре и кровяном агаре, затем проводят их биохимическую идентификацию («Медицинская микробиология, вирусология и иммунология». /Под редакцией А.А.Воробьева. - М.: «МИА», 2004. - С.329).Similar situations are observed when using chromogenic media for staphylococci. In a standard laboratory, staphylococci are cultivated on yolk-salt agar and blood agar, then biochemical identification is carried out (“Medical Microbiology, Virology, and Immunology.” / Edited by A. A. Vorobyov. - M .: MIA, 2004. - S.329).
Использование нами хромогенного агара для стафилококков позволяет быстро выявить различные виды стафилококков по изменению цвета колонии.Our use of chromogenic agar for staphylococci allows you to quickly identify various types of staphylococci by changing the color of the colony.
Использование нами хромогенной среды для клебсиелл, также позволяет уже через 24 часа идентифицировать их в моче, секрете предстательной железы и эякуляте. Тогда как использование обычных питательных сред (МПА, Эндо) требует их окончательной идентификации, что удлиняет время бактериологического исследования («Медицинская микробиология, вирусология и иммунология». /Под редакцией А.А.Воробьева. - М.: «МИА», 2004. - С.359).Our use of a chromogenic medium for Klebsiella also allows us to identify them in urine, prostate secretion and ejaculate after 24 hours. Whereas the use of ordinary nutrient media (MPA, Endo) requires their final identification, which lengthens the time of bacteriological research (“Medical Microbiology, Virology and Immunology.” / Edited by A.A. Vorobyov. - M.: MIA, 2004. - S.359).
Агар Шадлера для культивирования неклостридиально-анаэробных бактерий («Медицинская микробиология». Учебное пособие, СПб, 1999. - С.155-159), по-нашему мнению, обладает преимуществом по сравнению с обычным анаэробным кровяным агаром, так как витамин K1 и 5% баранья кровь (а не человеческая, используемая для приготовления обычного кровяного агара) способствуют эффективному выделению бактероидов. Колистин и налидиксовая кислота, содержащиеся в агаре Шадлера, способствуют выделению грамположительных неклостридиально-анаэробных кокков - пепто-кокков и пептострептококков. Входящая в состав данной среды глюкоза является источником энергии, а гемин и витамин К позволяют культивировать превотеллы и другие бактерии. За счет широкого состава ингредиентов, входящих в данную среду, она, как показано нашими исследованиями, является более эффективной, чем обычный анаэробный кровяной агар.Shadler’s agar for the cultivation of non-clostridial-anaerobic bacteria (“Medical Microbiology.” Textbook, St. Petersburg, 1999. - P.155-159), in our opinion, has an advantage over conventional anaerobic blood agar, since vitamin K 1 and 5% lamb blood (and not human blood used to make conventional blood agar) promotes the efficient release of bacteroids. Colistin and nalidixic acid contained in the Chadler agar contribute to the release of gram-positive non-clostridial-anaerobic cocci - peptococci and peptostreptococci. Glucose, which is part of this medium, is a source of energy, and hemin and vitamin K allow the cultivation of Prevotella and other bacteria. Due to the wide composition of the ingredients included in this medium, it, as shown by our studies, is more effective than conventional anaerobic blood agar.
Предлагаемая нами для использования среда желчно-эскулиновый агар для бактероидов является исключительной средой только для этих микроорганизмов, так как она содержит гидролизат казеина, пептический перевар соевой муки и гемин, которые поддерживают рост бактероидов. Компонент Oxgall подавляет рост всех неклостридиально-анаэробных бактерий кроме бактероидов.The bile-esculin agar medium we offer for use is an exceptional medium only for these microorganisms, since it contains casein hydrolyzate, peptic digestion of soy flour and hemin, which support the growth of bacteroids. The Oxgall component inhibits the growth of all non-clostridial anaerobic bacteria except bacteroids.
Таким образом, предлагаемые нами среды для культивирования мочи, секрета предстательной железы и эякулята не только расширяют спектр выделяемых микробов, но и значительно сокращают время на проведение бактериологического исследования, что крайне важно для врача-клинициста.Thus, the media we offer for the cultivation of urine, prostate secretion and ejaculate not only expand the spectrum of excreted microbes, but also significantly reduce the time for bacteriological studies, which is extremely important for a clinician.
Заявляемый способ позволяет более быстро и качественно контролировать бактериальную обсемененность субстрата (мочи, секрета предстательной железы и эякулята) и адекватно корректировать тактику ведения больного.The inventive method allows you to more quickly and accurately control the bacterial contamination of the substrate (urine, prostate secretion and ejaculate) and adequately adjust the patient management tactics.
При контроле общей бактериальной обсемененности принято определять наиболее значимую и многочисленную группу микроорганизмов, а именно, количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ). Поэтому питательные среды должны обеспечивать оптимальный рост и развитие именно этой группы микроорганизмов. Однако обычно используемые среды являются питательными средами общего назначения. При изменении техники посева, условий культивирования и использования расширенного набора питательных сред могут быть выявлены иные группы микроорганизмов, в частности многочисленная группа неклостридиально-анаэробных бактерий, превалирующих во всех биотопах человеческого организма. Использование широкого набора питательных сред связано с тем, что эффективность и точность бактериологического метода диагностики в большей степени зависит от состава и качества используемых питательных сред. Разведение исследуемого материала от 10-1 до 10-10 позволяет точно определить количество микроорганизмов, что особенно важно при выделение бактерий в формально допустимых количествах или на границе нормы, но при наличии клинических симптомов у больного.When controlling the total bacterial contamination, it is customary to determine the most significant and numerous group of microorganisms, namely, the number of mesophilic aerobic and facultative anaerobic microorganisms (KMAFAnM). Therefore, nutrient media should ensure optimal growth and development of this particular group of microorganisms. However, commonly used media are general purpose nutrient media. With a change in the sowing technique, cultivation conditions and the use of an expanded set of nutrient media, other groups of microorganisms can be identified, in particular a large group of non-clostridial-anaerobic bacteria that prevail in all biotopes of the human body. The use of a wide range of culture media is due to the fact that the effectiveness and accuracy of the bacteriological diagnostic method is more dependent on the composition and quality of the culture media used. Dilution of the test material from 10 -1 to 10 -10 allows you to accurately determine the number of microorganisms, which is especially important when bacteria are isolated in formally acceptable amounts or at the normal range, but in the presence of clinical symptoms in the patient.
Подробное описание способа и примеры его клинического выполнения.A detailed description of the method and examples of its clinical implementation.
Способ обнаружения неклостридиально-анаэробных бактерий (НАБ) осуществляется следующим путем. На исследование забирают 10 мл средней порции утренней мочи или 0,5 мл эякулята или секрета предстательной железы. Готовят десятикратные разведения следующим образом. Расставляют 9 пробирок в штатив. В пробирку №1 стерильной пипеткой объемом, например, 1 мл с неповрежденным концом вносят 9 мл тиогликолевого буфера и 1 мл исследуемой мочи. Пробирку аккуратно встряхивают.Это первое десятикратное разведение. Далее, в расставленные в штативе пробирки (№№2-9) стерильной пипеткой вносят по 4,5 мл тиогликолевого буфера. Из первого разведения стерильной пипеткой объемом, например, 1 мл с неповрежденным концом переносят 0,5 мл материала в пробирку №2. При этом кончик пипетки прислоняют к внутренней стенке пробирки, не касаясь содержащейся в ней жидкости. Пробирку №2 аккуратно встряхивают. После этого пипетку помещают в дезинфицирующий раствор. Берут другую такую же пипетку и из пробирки №2 переносят 0,5 мл в следующую пробирку, соблюдая те же правила, пока не закончат подготовку всех разведений.A method for detecting non-clostridial anaerobic bacteria (NAB) is carried out in the following way. For the study, 10 ml of the average portion of morning urine or 0.5 ml of ejaculate or prostate secretion are taken. Prepare ten-fold dilutions as follows. Place 9 tubes in a rack. In test tube No. 1 with a sterile pipette, for example, 1 ml with an intact end, make 9 ml of thioglycol buffer and 1 ml of the studied urine. The tube is gently shaken. This is the first ten-fold dilution. Next, 4.5 ml of thioglycol buffer are added to a test tube placed in a test tube (No. 2-9) with a sterile pipette. From the first dilution with a sterile pipette, for example, 1 ml with an intact end, transfer 0.5 ml of material to test tube No. 2. In this case, the tip of the pipette is leaned against the inner wall of the tube, without touching the liquid contained in it. Tube No. 2 is gently shaken. After that, the pipette is placed in a disinfectant solution. Take another same pipette and transfer 0.5 ml from tube No. 2 to the next tube, observing the same rules, until all the dilutions are complete.
Из каждого разведения стерильной пипеткой с неповрежденным концом объемом 1 мл делают посевы по 1,0 мл на бульон Шадлера (HIMEDIA, Индия) и среду Блаурокка (Ростовский НИПЧИ) и по 0,1 мл на желчно-эскулиновый агар для бактероидов (HIMEDIA, Индия), агар Шадлера (HIMEDIA, Индия), кровяной агар (КА) на основе среды Мюллер-Хинтон (HIMEDIA, Индия) для неклостридиально-анаэробных бактерий. Для культивирования факультативно-анаэробной микрофлоры делается посев по 0,1 мл на среду Эндо (HIMEDIA, Индия), хромогенный селективный агар для энтерококков (HIMEDIA, Индия), хромогенный селективный агар для дрожжеподобных грибов рода Candida (HIMEDIA, Индия), хромогенный селективный агар для клебсиелл (HIMEDIA, Индия), хромогенный селективный агар для стафилококков (HIMEDIA, Индия), КА на основе среды Мюллер-Хинтон (HIMEDIA, Индия) /см. таблицу 1/.From each dilution with a sterile pipette with an intact 1 ml end, inoculations of 1.0 ml are made for Schadler’s broth (HIMEDIA, India) and Blauroka medium (Rostov NIPCHI) and 0.1 ml for gall-esculin agar for bacteroids (HIMEDIA, India ), Shadler agar (HIMEDIA, India), blood agar (KA) based on Muller-Hinton medium (HIMEDIA, India) for non-clostridial anaerobic bacteria. For cultivation of facultative anaerobic microflora, 0.1 ml of inoculation is made on Endo medium (HIMEDIA, India), chromogenic selective agar for enterococci (HIMEDIA, India), chromogenic selective agar for yeast-like fungi of the genus Candida (HIMEDIA, India), chromogenic selective agar for Klebsiella (HIMEDIA, India), chromogenic selective agar for staphylococci (HIMEDIA, India), spacecraft based on Mueller-Hinton medium (HIMEDIA, India) / cm. table 1 /.
Учет результатов посева на плотных питательных средах (желчно-эскулиновый агар для бактероидов (HIMEDIA, Индия), КА на основе среды Мюллер-Хинтон (HIMEDIA, Индия), агар Шадлера (HIMEDIA, Индия) для неклостридиально-анаэробных бактерий, среда Эндо (HIMEDIA, Индия), хромогенный селективный агар для энтерококков (HIMEDIA, Индия), хромогенный селективный агар для грибов (HIMEDIA, Индия), хромогенный селективный агар для клебсиелл (HIMEDIA, Индия), хромогенный селективный агар для стафилококков (HIMEDIA, Индия), КА на основе среды Мюллер-Хинтон (HIMEDIA, Индия)) для культивирования факультативно-анаэробных и неклостридиально-анаэробных бактерий проводили согласно методике, описанной в работе Меньшиков В.В. Методики клинических лабораторных исследований. - М.: Лабора, 2009. - С.68. Учет результатов посева на полужидких (среда Блаурокка (Ростовский НИПЧИ) и бульон Шадлера (HIMEDIA, Индия)) питательных средах для культивирования неклостридиально-анаэробных бактерий осуществляли согласно методике, описанной в работе Меньшиков В.В. Методики клинических лабораторных исследований. - М.: Лабора, 2009. - С.80. Работоспособность заявляемого способа подтверждается приводимыми клиническими примерами его использования.Accounting for the results of inoculation on solid nutrient media (gall-esculin agar for bacteroids (HIMEDIA, India), spacecraft based on Muller-Hinton medium (HIMEDIA, India), Shadler agar (HIMEDIA, India) for non-clostridial anaerobic bacteria, Endo medium (HIMEDIA , India), chromogenic selective agar for enterococci (HIMEDIA, India), chromogenic selective agar for fungi (HIMEDIA, India), chromogenic selective agar for Klebsiella (HIMEDIA, India), chromogenic selective agar for staphylococci (HIMEDIA, India), CA on Muller-Hinton medium (HIMEDIA, India) for cultivating fa of facultative anaerobic and non-clostridial anaerobic bacteria was carried out according to the method described in the work of V. Menshikov Methods of clinical laboratory research. - M .: Lab, 2009. - P.68. The results of seeding on semi-liquid (Blaurokka medium (Rostov NIPCH) and Chadler’s broth (HIMEDIA, India)) culture media for culturing non-clostridial-anaerobic bacteria were taken into account according to the method described in the work of V. V. Menshikov. Methods of clinical laboratory research. - M .: Lab, 2009 .-- S.80. The efficiency of the proposed method is confirmed by clinical examples of its use.
Клинический пример 1.Clinical example 1.
Больная Д-ева, 28 лет, история болезни №006000/504 от 21.05.2010. Страдает хроническим рецидивирующем пиелонефритом в течение 8 лет. В анамнезе 6 эпизодов двухстороннего необструктивного пиелонефрита. При неоднократных УЗИ почек и дважды внутривенной урографии обструкции верхних мочевых путей не выявлено. Пузырно-мочеточниковые рефлюксы - исключены. При стандартном бактериологическом исследовании средней порции мочи выделена культура Staphylococcus hominis 102 КОЕ/мл. При общем исследовании мочи: признаки воспалительного процесса, что не подтверждалось результатом бактериологического исследования, проведенного по стандартной методике 7 раз в течение 8 лет. При поступлении в урологическое отделение РостГМУ с очередным эпизодом острого пиелонефрита обструкции мочевых путей нет (УЗИ+СКТ почек). Выполнено бактериологическое исследование средней порции мочи с использованием расширенного набора питательных сред (11 сред): среда Блаурокка, бульон Шадлера, желчно-эскулиновый агар для бактероидов, агар Шадрера, КА на основе среды Мюллер-Хинтон - для неклостридиально-анаэробных бактерий; среда Эндо, хромогенный селективный агар для энтерококков, хромогенный селективный агар для грибов, хромогенный селективный агар для клебсиелл, хромогенный селективный агар для стафилококков, КА на основе среды Мюллер-Хинтон - для факультативно-анаэробных бактерий. В исследуемом материале регистрировалась ассоциация факультативно-анаэробных и неклостридиально-анаэробных микроорганизмов с превалированием неклостридиально-анаэробных бактерий с высокой концентрацией Propionibacterium sp.107 КОЕ/мл, Bacteroides sp.106 КОЕ/мл, Eubacterium sp.103 КОЕ/мл. Из аэробных бактерий выделена Klebsiella pneumoniae 103 КОЕ/мл. Пациентке проводилась комбинированная антибиотикотерапия с учетом чувствительности всех выделенных из мочи ассоциантов. При динамическом мониторинге у пациентки нормализовались показатели общего анализа мочи на 7 сутки. Через 14 дней после окончательной антибиотикотерапии бактериологическое исследование мочи соответствовало норме. При диспансерном наблюдении за пациенткой в течение 1 года активация мочевой инфекции не регистрировалась.Patient D-eva, 28 years old, medical history No. 006000/504 from 05/21/2010. Suffers from chronic recurrent pyelonephritis for 8 years. A history of 6 episodes of bilateral non-obstructive pyelonephritis. With repeated ultrasound of the kidneys and twice intravenous urography, obstruction of the upper urinary tract was not detected. Bladder-ureter refluxes are excluded. In a standard bacteriological study of the average portion of urine, a culture of Staphylococcus hominis 10 2 CFU / ml was isolated. With a general urine test: signs of an inflammatory process, which was not confirmed by the result of a bacteriological study carried out by a standard technique 7 times over 8 years. Upon admission to the urology department of Rostov State Medical University with another episode of acute pyelonephritis, there is no obstruction of the urinary tract (ultrasound + CT of the kidneys). A bacteriological study of the average portion of urine was performed using an expanded set of nutrient media (11 media): Blaurock medium, Schadler’s broth, gall-esculin agar for bacteroids, Schadrer's agar, spacecraft based on Mueller-Hinton medium — for non-clostridial anaerobic bacteria; Endo medium, chromogenic selective agar for enterococci, chromogenic selective agar for fungi, chromogenic selective agar for Klebsiella, chromogenic selective agar for staphylococci, spacecraft based on Muller-Hinton medium for facultative anaerobic bacteria. An association of facultative anaerobic and non-clostridial anaerobic microorganisms with a predominance of non-clostridial anaerobic bacteria with a high concentration of Propionibacterium sp.10 7 CFU / ml, Bacteroides sp.10 6 CFU / ml, Eubacterium sp.10 3 CFU / ml was recorded in the test material. Klebsiella pneumoniae 10 3 CFU / ml was isolated from aerobic bacteria. The patient underwent combination antibiotic therapy taking into account the sensitivity of all associates isolated from urine. During dynamic monitoring, the patient returned normal urine analysis values on day 7. 14 days after the final antibiotic therapy, the bacteriological examination of the urine was normal. During the follow-up of the patient for 1 year, the activation of urinary infection was not recorded.
Клинический пример 2.Clinical example 2.
Больной А-ев, 32 года, история болезни №4657/396 от 19.05.2009. Неоднократно лечился по поводу мужского бесплодия в течение 5 лет. По данным сонографических, гормональных, лабораторных (ПЦР и культуральные методы диагностики на ЗППП) исследований причины бесплодия не выявлены. Однако в неоднократных результатах спермограммы выявлена пиоспермия. При проведении стандартного бактериологического исследования эякулята микроорганизмы не выявлены. При поступлении в урологическое отделение РостГМУ проведено бактериологическое исследование эякулята с использованием расширенного набора питательных сред: среда Блаурокка, бульон Шадлера, желчно-эскулиновый агар для бактероидов, агар Шадлера, КА на основе среды Мюллер-Хинтон для неклостридиально-анаэробных бактерий; среда Эндо, хромогенный селективный агар для энтерококков, хромогенный селективный агар для грибов, хромогенный селективный агар для клебсиелл, хромогенный селективный агар для стафилококков, КА на основе среды Мюллер-Хинтон - для факультативно-анаэробных бактерий. В эякуляте обнаружена микст-инфекция, представленная неклостридиально-анаэробными бактериями: Bacteroides sp.103 КОЕ/мл, Peptostreptococcus sp.104 КОЕ/мл, дрожжеподобные грибы Candida albicans 103 КОЕ/мл. Пациенту проводилась антибиотикотерапия, соответствующая результатам индивидуальных антибиотикограмм. При контрольном бактериологическом исследовании эякулята пиоспермия и бактериальная обсемененность отсутствовали. В связи с беременностью супруги, наступившей в короткие сроки после проведенного лечения, диагноз мужское бесплодие пациенту был автоматически снят.Patient A-ev, 32 years old, medical history No. 4657/396 dated 05/19/2009. Repeatedly treated for male infertility for 5 years. According to sonographic, hormonal, laboratory (PCR and culture diagnostic methods for STDs) studies, the causes of infertility have not been identified. However, in repeated spermogram results, pyospermia was detected. During a standard bacteriological examination of the ejaculate, microorganisms were not detected. Upon admission to the urological department of Rostov State Medical University, a bacteriological study of the ejaculate was carried out using an expanded set of nutrient media: Blaurock medium, Chadler’s broth, gall-esculin agar for bacteroids, Schadler’s agar, spacecraft based on Muller-Hinton medium for non-clostridial anaerobic bacteria; Endo medium, chromogenic selective agar for enterococci, chromogenic selective agar for fungi, chromogenic selective agar for Klebsiella, chromogenic selective agar for staphylococci, spacecraft based on Muller-Hinton medium for facultative anaerobic bacteria. A mixed infection represented by non-clostridial anaerobic bacteria was found in the ejaculate: Bacteroides sp.10 3 CFU / ml, Peptostreptococcus sp.10 4 CFU / ml, yeast-like fungi Candida albicans 10 3 CFU / ml. The patient was given antibiotic therapy corresponding to the results of individual antibiograms. During the control bacteriological examination of the ejaculate, pyospermia and bacterial contamination were absent. Due to the pregnancy of the spouse, which occurred shortly after the treatment, the patient was automatically diagnosed with male infertility.
По заявляемой методике нами обследованы 78 больных по поводу инфекции верхних и нижних мочевых путей, а также половых органов:According to the claimed methodology, we examined 78 patients about infection of the upper and lower urinary tract, as well as genital organs:
Острый пиелонефрит: 10 больных,Acute pyelonephritis: 10 patients,
Хронический пиелонефрит: 7 больных,Chronic pyelonephritis: 7 patients,
Хронический цистит: 31 больных,Chronic cystitis: 31 patients,
Хронический простатит: 23 больных,Chronic prostatitis: 23 patients
Хронический везикулит: 3 больных,Chronic vesiculitis: 3 patients,
Хронический эпидидимит: 4 больных.Chronic epididymitis: 4 patients.
При стандартном и расширенном бактериологическом исследовании были получены следующие результаты, представленные в таблице 2.With standard and advanced bacteriological studies, the following results were obtained, presented in table 2.
Во всех случаях имела место микс-инфекция факультативно-анаэробных и неклостридиально-анаэробных бактерий. Лечение антибиотиками проводили в соответствии с чувствительностью как факультативно-анаэробных бактерий, так и неклостридиально-анаэробных бактерий. Чувствительность факультативно-анаэробных и неклостридиально-анаэробных бактерий не совпадала в 60% случаев. В этих ситуациях проводили лечение антибиотиками на основании индивидуальных антибиотикограмм препаратами, к которым была чувствительна анаэробная флора. Окончательные результаты лечения:In all cases, there was a mix infection of facultative anaerobic and non-clostridial anaerobic bacteria. Antibiotic treatment was carried out in accordance with the sensitivity of both facultative anaerobic bacteria and non-clostridial anaerobic bacteria. The sensitivity of facultative anaerobic and non-clostridial anaerobic bacteria did not coincide in 60% of cases. In these situations, antibiotic treatment was carried out on the basis of individual antibiograms with drugs to which the anaerobic flora was sensitive. Final treatment results:
Клиническое выздоровление - 90% случаев, бактериологическое 85% случаев.Clinical recovery - 90% of cases, bacteriological 85% of cases.
В результате использования предлагаемой методики был выявлен широкий спектр факультативно-анаэробных бактерий: представители семейства Enterobactaeriacae (E.coli, Klebsiella sp., Proteus sp., Enterobacter sp., Citrobacter sp.), коагулазоотрицательные стафилококки, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis и другие виды энтерококков, Corynebacterium sp., дрожжеподобные грибы рода Candida и другие. Streptococcus sp. И неклостридиально -анаэробные бактерии: Prevotella sp., Peptococcus sp., Peptostreptococcus sp., Propionibacterium sp., Bacteroides sp., Eubacterium sp., Fusobacterium sp., которые не выявляются при стандартной методике посева.As a result of using the proposed method, a wide range of facultative anaerobic bacteria was revealed: representatives of the Enterobactaeriacae family (E. coli, Klebsiella sp., Proteus sp., Enterobacter sp., Citrobacter sp.), Coagulase-negative staphylococci, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis enterococci, Corynebacterium sp., yeast-like fungi of the genus Candida and others. Streptococcus sp. And non-clostridially anaerobic bacteria: Prevotella sp., Peptococcus sp., Peptostreptococcus sp., Propionibacterium sp., Bacteroides sp., Eubacterium sp., Fusobacterium sp., Which are not detected by the standard culture technique.
Таким образом, заявляемый способ определения бактериологической обсемененности субстрата обладает следующими преимуществами по сравнению с известными: количественное определение широкого спектра не только наиболее изученных и легко культивируемых факультативно-анаэробных бактерий, но и определение количества неклостридиально-анаэробных бактерий, выделенных в различных субстратах.Thus, the inventive method for determining bacteriological contamination of a substrate has the following advantages compared with the known ones: quantitative determination of a wide range of not only the most studied and easily cultivated facultative anaerobic bacteria, but also the determination of the number of non-clostridial anaerobic bacteria isolated in various substrates.
Способ может применяться как для диагностики, так и для контроля лечения. Способ доступен в применении и может быть использован в условиях любой практической лаборатории.The method can be used both for diagnosis and for monitoring treatment. The method is available in application and can be used in any practical laboratory.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011103414/10A RU2452774C1 (en) | 2011-01-31 | 2011-01-31 | Method of evaluating bacterial load of urine, prostatic secretion, and ejaculate |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011103414/10A RU2452774C1 (en) | 2011-01-31 | 2011-01-31 | Method of evaluating bacterial load of urine, prostatic secretion, and ejaculate |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2452774C1 true RU2452774C1 (en) | 2012-06-10 |
Family
ID=46680011
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011103414/10A RU2452774C1 (en) | 2011-01-31 | 2011-01-31 | Method of evaluating bacterial load of urine, prostatic secretion, and ejaculate |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2452774C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2572713C1 (en) * | 2014-06-26 | 2016-01-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of treating symptom-free bacteriospermia |
| RU2788842C1 (en) * | 2022-03-09 | 2023-01-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тихоокеанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for identifying uropathogenic enterococcus faecalis in children |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2153672C1 (en) * | 1999-10-22 | 2000-07-27 | Московский областной научно-исследовательский клинический институт | Method for performing differential diagnosis of inflammatory processes in male urogenital paths |
| RU2255339C1 (en) * | 2004-03-25 | 2005-06-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова | Method for predicting the threat of abortion in the first trimester of pregnancy |
| US7632657B2 (en) * | 2002-09-23 | 2009-12-15 | Alain Rambach | Method of detecting meticillin-resistant microorganisms |
-
2011
- 2011-01-31 RU RU2011103414/10A patent/RU2452774C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2153672C1 (en) * | 1999-10-22 | 2000-07-27 | Московский областной научно-исследовательский клинический институт | Method for performing differential diagnosis of inflammatory processes in male urogenital paths |
| US7632657B2 (en) * | 2002-09-23 | 2009-12-15 | Alain Rambach | Method of detecting meticillin-resistant microorganisms |
| RU2255339C1 (en) * | 2004-03-25 | 2005-06-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова | Method for predicting the threat of abortion in the first trimester of pregnancy |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ТОНОЯН Л.А. Тактика ведения родов при преждевременном излитии околоплодных вод: Автореферат, 2007. ШАНГИЧЕВ В.А. Хирургическое лечение осложнений первичной уретропластики при гипоспадии: Автореферат. - Саратов, 2010, с.11-12. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника. Инструкция по применению. Министерство здравоохранения Республики Беларусь, 19.03.2010, регистрационный номер 086-0310. СИДОРОВ М.А. и др. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. Справочник. - М.: Колос, 1995, с.206. Нижегородская правда. Официальный отдел, вып.11 (499), 2010, 4 февраля, с.31. ТЕЦ В.В. Микроорганизмы и антибиотики. Заболевания мочевыводящих путей. - СПб.: КЛЕ-Т, 2005, с.157. СИВОЛОДСКИЙ Е.П. Систематика и идентификация энтеробактерий. Издание второе, переработанное и дополненное. - СПб., 2008, с.9, 13, 14. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2572713C1 (en) * | 2014-06-26 | 2016-01-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of treating symptom-free bacteriospermia |
| RU2788842C1 (en) * | 2022-03-09 | 2023-01-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тихоокеанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for identifying uropathogenic enterococcus faecalis in children |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Khasriya et al. | Spectrum of bacterial colonization associated with urothelial cells from patients with chronic lower urinary tract symptoms | |
| Cooper et al. | The isolation and identification of bacteria from wounds | |
| Carter | Isolation and identification of bacteria from clinical specimens | |
| US10550437B2 (en) | Clostridium difficile culture medium | |
| Elo-Ilo et al. | Prevalence of asymptomatic bacteriuria among pre-school children in Nnewi, South-East Nigeria | |
| RU2452774C1 (en) | Method of evaluating bacterial load of urine, prostatic secretion, and ejaculate | |
| Masover et al. | Detection of mycoplasmas in cell cultures by cultural methods | |
| Adeh et al. | Prevalence of bacterial gastroenteritis in children attending daycare centers within Kaduna Metropolis | |
| Windahl | Bacterial infections in dogs with special reference to urinary tract infections, surgical site infections and methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius | |
| Saadon et al. | Detection of Antibiotic Resistance among Gram-Negative Bacteria Isolated from Urinary Tract Infections | |
| US20110256583A1 (en) | Method and medium for accelerating target analyte growth in a test sample | |
| Cole et al. | Isolation and Identification of Aerobic and Anaerobic Bacteria | |
| RU2452773C1 (en) | Method of evaluating bacterial load of urine, prostatic secretion, ejaculate | |
| RU2553548C1 (en) | Kit for laboratory diagnosis of infections caused by mycoplasma hominis and ureaplasma urealyticum | |
| RU2822665C2 (en) | Set of bacterial strains for teaching microbiology and methods of laboratory diagnosis of tularemia | |
| Alhamadani et al. | Study of the sensitivity to different antibiotics for bacterial that isolated from vagina used Kirby-Bauer method | |
| Meghana | Evaluation of Chromogenic Media for Identification of Uropathogens Among Patients Admitted in Teritiary Care Hospital | |
| RU2261903C1 (en) | NUTRIENT MEDIUM FOR DETECTION OF Mycoplasma hominis AND METHOD FOR DIAGNOSIS OF UROGENITAL MYCOPLASMOSIS | |
| AL-Jumaa et al. | Laboratory Diagnosis of Mycoplasma spp. from the Upper Respiratory Tract and Conjunctival Infections in Shelter Cats | |
| Gronthoud | Understanding Microbiology Culture Results | |
| US20110275114A1 (en) | Method and medium for detecting the presence or absence of methicillin resistant staphylococcus aureus (mrsa) in a test sample | |
| Islam | Bacteriological profile and its antibiotic susceptibility in patients with Urinary Tract Infection in a diagnostic center in Dhaka | |
| Corper et al. | The Question of Tubercle Bacilli in the Blood in Advanced Pulmonary Tuberculosis: A Bacteriological Study | |
| UA136814U (en) | METHOD OF EXPRESS DIFFERENTIATION OF PSEUDOMONAS AERUGINOSA USING UV LIGHT | |
| Bartlett | Making optimum use of the microbiology laboratory: I. Use of the laboratory |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140201 |