RU2439146C1 - Питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза - Google Patents
Питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2439146C1 RU2439146C1 RU2010123214/10A RU2010123214A RU2439146C1 RU 2439146 C1 RU2439146 C1 RU 2439146C1 RU 2010123214/10 A RU2010123214/10 A RU 2010123214/10A RU 2010123214 A RU2010123214 A RU 2010123214A RU 2439146 C1 RU2439146 C1 RU 2439146C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- paratuberculosis
- medium
- extract
- nutrient medium
- mycobacteria
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для культивирования микобактерий паратуберкулеза. Питательная среда содержит куриные яйца, 3%-ную вытяжку древесной золы, 2%-ный водный раствор малахитовой зелени и оксидат торфа. Изобретение позволяет сократить срок выявления микобактерий паратуберкулеза. 4 табл.
Description
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к культивированию микобактерий паратуберкулеза.
Известна плотная питательная среда Дюбо-Смита в модификации А.П. Аликаевой (Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики паратуберкулеза ГОСТ 26073-84 (СТ СЭВ 3458-81). - Москва, 1984 - с.8) для выращивания микобактерий паратуберкулеза, содержащая однозамещенный фосфорнокислый калий 1 г; двузамещенный фосфорнокислый натрий 6,25 г; сернокислый магний 0,01 г; хлористый кальций 0,0005 г; сернокислый цинк 0,0001 г; сернокислую медь 0,0001 г; лимоннокислое аммонийное железо 0,05 г; аспарагин 1 г; гидролизат казеина 80 см3; микобактин 20 см3; дистиллированную воду до 1 литра; стерильную не активированную сыворотку крупного рогатого скота (нормальную) 20%; пенициллин 50 ЕД/см3 среды.
Недостатком данной среды является длительный срок роста на ней микобактерий паратуберкулеза.
Наиболее близкой по сущности к заявляемому решению является плотная питательная среда Левенштейна-Йенсена с добавлением микобактина (Бюллетень ВИЭВ «Способы и средства диагностики и борьбы с туберкулезом, бруцеллезом и паратуберкулезом сельскохозяйственных животных». Москва, - вып.73-74. - с.73), состоящая из следующих компонентов: сернокислого магния 0,25 г; натрия лимоннокислого 0,5 г; железоаммиачных квасцов 0,025 г; калия фосфорнокислого однозамещенного - 10,0 г; аммония лимоннокислого однозамещенного 2,5 г; гликокола 5 г; спиртового экстракта M.phlei 20 мл; глицерина 2,5 мл; дистиллированной воды и картофельного экстракта до 250 мл; 16-18 яиц; 2%-ного водного раствора малахитовой зелени 18 мл.
Однако данная плотная питательная среда не позволяет получить рост микобактерий паратуберкулеза в ускоренные сроки, а приготовление микобактина является достаточно сложным технологическим процессом.
Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала питательных сред, используемых для культивирования микобактерий паратуберкулеза.
Поставленная задача решается тем, что питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза, включающая глицерин, 2%-ный водный раствор малахитовой зелени, минерально-солевую основу, яйца куриные, биологически активную добавку, согласно изобретению содержит в качестве биологически активной добавки оксидат торфа, а в качестве минерально-солевой основы - вытяжку древесной золы, при следующем соотношении компонентов:
Яйца куриные | 4-5 шт |
3%-ная вытяжка древесной золы | 100 мл |
2%-ный водный раствор малахитовой зелени | 4 мл |
Глицерин | 2,0 г |
Оксидат торфа | 2,0 г |
Приготовление среды производят следующим образом.
Берут 4-5 куриных яйца, моют щеткой с мылом и обрабатывают спиртом. Стерильным пинцетом разбивают яйца и выливают в стерильную колбу с бусами. Колбу встряхивают несколько минут после добавления каждого яйца до образования однородной массы. Добавляют 4 мл 2%-ного раствора малахитовой зелени и вводят в качестве солевой основы 100 мл вытяжки древесной золы, в которую добавлено 2,0 г глицерина. В качестве биологически-активной добавки в предлагаемую среду дополнительно вводят оксидат торфа (ТУ 88 БССР 135-88). Фильтруют через марлевый фильтр, разливают по 4-5 мл среды в пробирки и свертывают (нагревают) при температуре 85°С в течение 30 мин, в результате этого происходит денатурация белка и среда становится плотной.
С целью исследования информативности и эффективности приготовленных сред на них проводили посевы следующих субстанций: трехнедельного стандартизированного штамма M.paratuberculosis (Центрально-Любинский); изолята, полученного после посева обработанного биологического материала крупного рогатого скота и суспензии, полученной после обработки отдела толстого кишечника и лимфатических узлов крупного рогатого скота. Биоматериал обрабатывали методом А.П. Аликаевой («Практикум по ветеринарной микробиологии» под ред. Байрак В.А., Беляев В.М., Гительсон С.С и др. - Москва, 1980. - 62 с.). Культуры микобактерий для посева стандартизировали по стандарту мутности 500 млн кл/мл и засевали в пробирки со средами по 1 мл полученной суспензии.
Пример 1. Среду готовят следующим образом. 4-5 куриных яйца моют щеткой с мылом и обрабатывают спиртом. Стерильным пинцетом разбивают яйца и выливают в стерильную колбу с бусами. Колбу встряхивают несколько минут после добавления каждого яйца до образования однородной массы. Добавляют 4 мл 2%-ного раствора малахитовой зелени и вводят в качестве солевой основы 100 мл вытяжки древесной золы.
Вытяжку древесной золы готовят по следующей методике: берут 0,5 г золы, просеянной через сито, доливают до 100 мл дистиллированной водой, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, затем - через бумажный и автоклавируют при 1,5 атм 30 мин.
В состав вытяжки добавляют 2,0 г глицерина и 1,5 г оксидата торфа в качестве биологически активной добавки.
Среду разливают по 5 мл в пробирки и свертывают в специальном аппарате в наклонном положении при t 85°C в течение 30 минут. Вследствие свертывания в аппарате при высокой температуре происходит денатурация белка, и среда становится плотной.
Пример 2. Готовят среду в соответствии с примером 1 и добавляют 2,0 г оксидата торфа.
Пример 3. Готовят среду в соответствии с примером 1 и добавляют 2,5 г оксидата торфа
Сроки роста культур при посеве стандартизированного штамма M.paratuberculosis; изолята M.paratuberculosis, полученного из биоматериала и биоматериала, полученного от крупного рогатого скота, на средах, приготовленных в примерах 1, 2 и 3, представлены в таблице 1.
Из данных таблицы следует, что оптимальные сроки роста стандартизированного штамма M.paratuberculosis; изолята M.paratuberculosis, полученного из биоматериала и культур из биоматериала, полученного от крупного рогатого скота, получены на среде, стимулирующими ингредиентами которой являются 0,5%-ная вытяжка из древесной золы с добавлением 2,0 г оксидата торфа.
Пример 4. Среду готовят следующим образом. 4-5 куриных яйца моют щеткой с мылом и обрабатывают спиртом. Стерильным пинцетом разбивают яйца и выливают в стерильную колбу с бусами. Колбу встряхивают несколько минут после добавления каждого яйца до образования однородной массы. Добавляют 4 мл 2%-ного раствора малахитовой зелени и вводят в качестве солевой основы 100 мл вытяжки древесной золы.
Вытяжку древесной золы готовят по следующей методике: берут 1,5 г золы, просеянной через сито, доливают до 100 мл дистиллированной водой, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, затем - через бумажный и автоклавируют при 1,5 атм 30 мин.
В состав вытяжки добавляют 2,0 г глицерина и 1,5 г оксидата торфа в качестве биологически активной добавки.
Среду разливают по 5 мл в пробирки и свертывают в специальном аппарате в наклонном положении при t 85°C в течение 30 минут. Вследствие свертывания в аппарате при высокой температуре происходит денатурация белка, и среда становится плотной.
Пример 5. Среду готовят в соответствии с примером 4 и добавляют 2,0 г оксидата торфа.
Пример 6. Среду готовят в соответствии с примером 4 и добавляют 2,5 г оксидата торфа.
Результаты испытания питательных сред, приготовленных в примерах 4, 5 и 6, представлены в таблице 2.
Проведенные исследования показали, что первичный рост стандартизированного штамма M.paratuberculosis; изолята M.paratuberculosis, полученного из биоматериала и культур из биоматериала, полученного от крупного рогатого скота, в более короткие сроки получен на среде, стимулирующими ингредиентами которой являются 1,5%-ная вытяжка из древесной золы с добавлением 2,0 г оксидата торфа.
Пример 7. Среду готовят следующим образом. 4-5 куриных яйца моют щеткой с мылом и обрабатывают спиртом. Стерильным пинцетом разбивают яйца и выливают в стерильную колбу с бусами. Колбу встряхивают несколько минут после добавления каждого яйца до образования однородной массы. Добавляют 4 мл 2%-ного раствора малахитовой зелени и вводят в качестве солевой основы 100 мл вытяжки древесной золы.
Вытяжку древесной золы готовят по следующей методике: берут 3,0 г золы, просеянной через сито, доливают до 100 мл дистиллированной водой, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, затем - через бумажный и автоклавируют при 1,5 атм 30 мин.
В состав вытяжки добавляют 2,0 г глицерина и 1,5 г оксидата торфа в качестве биологически активной добавки.
Среду разливают по 5 мл в пробирки и свертывают в специальном аппарате в наклонном положении при t 85°C в течение 30 минут. Вследствие свертывания в аппарате при высокой температуре происходит денатурация белка, и среда становится плотной.
Пример 8. Среду готовят в соответствии с примером 7 и добавляют 2,0 г оксидата торфа.
Пример 9. Среду готовят в соответствии с примером 7 и добавляют 2,5 г оксидата торфа.
Результаты испытания питательных сред, приготовленных в примерах 7, 8 и 9, представлены в таблице 3.
Из полученных данных следует, что сокращение сроков появления первичного и интенсивного роста микобактерий паратуберкулеза происходит при использовании опытной среды следующего состава: яйца куриные 4-5 шт., 100 мл 3%-ной вытяжки древесной золы, 4 мл 2%-ного водного раствора малахитовой зелени, 2,0 г глицерина, 2,0 г оксидата торфа (пример 8).
С целью установления диагностической информативности и эффективности предлагаемой среды мы провели ее сравнительный анализ с известной средой Левенштейна-Йенсена с микобактином. Результаты исследования представлены в таблице 4.
На основании проведенных исследований установлено, что предлагаемая питательная среда, в состав которой входит минеральный комплекс - вытяжка из золы древесины березы - и биологическая добавка в виде оксидата торфа, позволяет стимулировать рост микобактерий паратуберкулеза при посеве стандартизированного штамма M.paratuberculosis; изолята и биологического материала (лимфатические узлы и отдел толстого кишечника).
Claims (1)
- Плотная питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза, включающая глицерин, 2%-ный водный раствор малахитовой зелени, минерально-солевую основу, яйца куриные, биологически активную добавку, отличающаяся тем, что содержит в качестве биологически активной добавки оксидат торфа, а в качестве минерально-солевой основы - вытяжку древесной золы при следующем соотношении компонентов:
Яйца куриные, шт 4-5 3%-ная Вытяжка древесной золы, мл 100 2%-ный Водный раствор малахитовой зелени, мл 4 Глицерин, г 2,0 Оксидат торфа, г 2,0
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010123214/10A RU2439146C1 (ru) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | Питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010123214/10A RU2439146C1 (ru) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | Питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2439146C1 true RU2439146C1 (ru) | 2012-01-10 |
Family
ID=45784036
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010123214/10A RU2439146C1 (ru) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | Питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2439146C1 (ru) |
-
2010
- 2010-06-07 RU RU2010123214/10A patent/RU2439146C1/ru active
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ПОЛЯК М.С., СУХАРЕВИЧ В.И., СУХАРЕВИЧ М.Э. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. - Санкт-Петербург Элби - СПб., 2008, с.133-146. ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ. Методы лабораторной диагностики паратуберкулеза. ГОСТ 26073-84, 09.01.1984. (tehstandart.com/ ГOCT 2026073-84). СИДОРЧУК В.А. Экспериментальное воспроизведение паратуберкулеза на мелком рогатом скоте // Научно-практический журнал Ветеринарная медицина. - 2009, N1, с.85-86. (vetermarymedicine.ru>num1-2-2009.pdf). * |
СИДОРОВ М.А., СКОРОДУМОВ Д.И, ФЕДОТОВ В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов // Справочник. - М.: Колос, 1995, с.151-157. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69726279T2 (de) | Stoff zur erhöhung der effizienz der vermehrung und der produktion von säugetieren | |
Klieneberger-Nobel | Focus on bacteria | |
RU2640500C1 (ru) | Способ дезинвазии против ооцист кокцидий птиц | |
Emmons | Cryptococcus neoformans strains from a severe outbreak of bovine mastitis | |
Muende et al. | Ringworm fungus growing as a saprophyte under natural conditions | |
CN101485300B (zh) | 一种拟丽突线虫的培养方法 | |
RU2439146C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза | |
CN103141425B (zh) | 无菌斑马鱼的生产方法 | |
RU2569456C1 (ru) | Питательная среда для выявления возбудителя некробактериоза | |
Bbockelman et al. | Rhabditis maupasi: occurrence in food snails and cultivation | |
Antychowicz et al. | Infection of African catfish (Clarias gariepinus) in an intensive culture facility Mycobacterium marinum | |
RU2410425C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза | |
JP2020010657A (ja) | ノトバイオートカイコの作製方法 | |
DE3206753A1 (de) | Vermehrung von virulentem treponema pallidum in gewebekulturen | |
RU2740195C1 (ru) | Питательная среда культивирования микобактерий туберкулеза | |
RU2413764C1 (ru) | Плотная питательная среда для культивирования микобактерий, выделенных из лепром больных лепрой | |
RU2295561C2 (ru) | Способ получения среды для выращивания микобактерий туберкулеза | |
CN109526884B (zh) | 一种培养Steinernema carpocapsae线虫的方法 | |
RU2328526C1 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза крупного рогатого скота | |
JP4210674B2 (ja) | マイコプラズマ・ガリセプティカム培養用培地 | |
EP2276831A1 (de) | Zusammensetzung zur kultivierung von anspruchsvollen bakterien | |
RU2654669C1 (ru) | Диагностическая питательная среда для дифференциации возбудителя сибирской язвы по капсуло- и токсинообразованию | |
Crookshank | A Textbook of Bacteriology: Including the Etiology and Prevention of Infective Diseases and a Short Account of Yeasts and Moulds, Haematoza, and Psorosperms | |
Uyei | Food Accessory Substances (Vitamins) and Tubercle Bacilli 1. Do Tubercle Bacilli Contain or Produce Growth Promoting Substances? | |
Molitor | An Investigation of the Effect of Antibiotic Use in Honeybee hives on the Resistance of Gut Microbiota in Honeybees, Apis mellifera L. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD4A | Correction of name of patent owner |