RU2437649C2 - Method of obtaining dry liposomal preparations (versions) - Google Patents
Method of obtaining dry liposomal preparations (versions)Info
- Publication number
- RU2437649C2 RU2437649C2 RU2009140381/15A RU2009140381A RU2437649C2 RU 2437649 C2 RU2437649 C2 RU 2437649C2 RU 2009140381/15 A RU2009140381/15 A RU 2009140381/15A RU 2009140381 A RU2009140381 A RU 2009140381A RU 2437649 C2 RU2437649 C2 RU 2437649C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biologically active
- active substance
- subjected
- phospholipids
- jet mill
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области прикладной биотехнологии, а именно к способам получения высокодисперсных липосомальных препаратов для профилактики и лечения заболеваний человека и животных. Изобретение может быть использовано также в медицине, косметике, пищевой и химической промышленности, в сельском хозяйстве.The invention relates to the field of applied biotechnology, and in particular to methods for producing highly dispersed liposome preparations for the prevention and treatment of diseases of humans and animals. The invention can also be used in medicine, cosmetics, food and chemical industries, in agriculture.
В настоящее время существуют разнообразные методы приготовления липосом, позволяющие получать везикулы различного размера, состава, структуры и внутреннего объема, а также способы иммобилизации в них веществ (Liposomes, a practical approach. Ed. by R.R.C.New, Oxford etc., IRL Press, 1990).Currently, there are a variety of methods for preparing liposomes that make it possible to obtain vesicles of various sizes, compositions, structures and internal volumes, as well as methods for immobilizing substances in them (Liposomes, a practical approach. Ed. By RRCNew, Oxford etc., IRL Press, 1990 )
В частности, липосомы получают выпариванием фосфолипидов из органической фазы в виде тонкой пленки на внутренней стенке стеклянной колбы роторного испарителя, после чего в колбу вносят водяной или солевой раствор, содержащие лекарственное вещество. Диспергирование фосфолипидов в водной или солевой среде осуществляют путем встряхивания колбы со стеклянными шариками. В результате образуется суспензия, состоящая из замкнутых многослойных липосом с включенным во внутренний их объем лекарственным веществом. Для дальнейшего формирования липосом и улучшения их качеств используют такие приемы, как озвучивание, экструзия, замораживание - оттаивание, обработка детергентами и др. (Bangham A.D., Prog. Biophis. Mol. Biol., 1968, v.18, pp.29-95; Липосомы в биологических системах. Под ред. Грегориадиса Г. и Аллисона А.-М., Медицина, 1983; пат. Украины, №5654, 1995; пат. США №4883665, 1990; Ефременко В.И., Липосомы, Ставрополь, 1999).In particular, liposomes are obtained by evaporation of phospholipids from the organic phase in the form of a thin film on the inner wall of a glass flask of a rotary evaporator, after which an aqueous or saline solution containing the drug substance is introduced into the flask. Dispersion of phospholipids in an aqueous or salt medium is carried out by shaking the flask with glass balls. As a result, a suspension is formed, consisting of closed multilayer liposomes with a drug substance included in their internal volume. To further form liposomes and improve their qualities, techniques such as dubbing, extrusion, freezing - thawing, detergent treatment, etc. are used (Bangham AD, Prog. Biophis. Mol. Biol., 1968, v. 18, pp.29-95 ; Liposomes in biological systems. Edited by Gregoriadis G. and Allison A.-M., Medicine, 1983; Pat. Ukraine, No. 5644, 1995; Pat. USA No. 4883665, 1990; Efremenko V.I., Liposomes, Stavropol , 1999).
Известен способ получения липосом путем выпаривания и обращения фаз, когда фосфолипиды растворяют в органическом растворителе, который затем приводят в контакт с водной фазой, содержащей лекарственные вещества. После отгонки растворителя под вакуумом получают взвесь липосом с высокой эффективностью иммобилизации в них материала (Sada E.et.al., Biotechnol. and Bioeng., 1988, v.32, №6, pp.826-830; Szulc J. et. al., Farm. Pol, 1985, v.41, №6, pp.319-322).A known method of producing liposomes by evaporation and phase reversal, when the phospholipids are dissolved in an organic solvent, which is then brought into contact with the aqueous phase containing medicinal substances. After distillation of the solvent under vacuum, a suspension of liposomes is obtained with high efficiency of immobilization of the material in them (Sada E.et.al., Biotechnol. And Bioeng., 1988, v. 32, No. 6, pp. 826-830; Szulc J. et. al., Farm. Pol, 1985, v. 41, No. 6, pp. 319-322).
Крупные моноламеллярные липосомы получают в процессе многократно повторяющихся циклов замораживания водных фосфолипидных дисперсий с последующим оттаиванием в присутствии криопротекторов (Pick U., Arch. Biochem. a. Biophys., 1981, v.212, pp.186-194).Large monolamellar liposomes are obtained by repeatedly repeating freezing cycles of aqueous phospholipid dispersions followed by thawing in the presence of cryoprotectants (Pick U., Arch. Biochem. A. Biophys., 1981, v.212, pp.186-194).
Недостатками описанных способов являются: нестабильность получаемых водных дисперсий липосом с включенным в них лекарственным веществом, сложность в изготовлении, невозможность использовать данные способы для промышленного производства липосомальных препаратов.The disadvantages of the described methods are: the instability of the obtained aqueous dispersions of liposomes with the incorporated drug substance, the difficulty in manufacturing, the inability to use these methods for the industrial production of liposome preparations.
Наиболее перспективными для коммерческого применения являются сухие липосомальные препараты, основу которых составляет композиция, состоящая из порошка, приемлемого для организма наполнителя, хорошо растворимого в воде, фосфолипидов, высушенных в виде тонких пленок, и покрывающего частицы порошкообразного наполнителя, и биологически активного вещества. После добавления воды к сухому, покрытому фосфолипидами наполнителю (пролипосомам) он быстро растворяется, и из фосфолипидов образуются липосомы, которые включают биологически активное вещество в зависимости от его природы или во внутренний объем, или в бислойную оболочку липосом (Payne N.I. et al.:, J. Pharm. Sci., 1986, v.75, №4, pp.325-329; Preparation of liposomes. In: Liposomes, a practical approach, ed. by R.R.C.New. Oxford, IRL Press, 1990, pp.33-104). Технология получения заключается в том, что раствор фосфолипидов в хлороформе (или другом органическом растворителе) напыляют на тонко измельченный наполнитель (или другую подложку), находящийся в быстро вращающейся колбе роторного испарителя, погруженной в термостатируемую водяную баню при температуре 30-45°С. Гидрофобные биологически активные вещества растворяют вместе с фосфолипидами в растворителе. Гидрофильные соединения могут быть перемешаны с наполнителем. Раствор фосфолипидов в хлороформе распыляют небольшими порциями до тех пор, пока он весь не будет использован, после чего, чтобы избавиться от остатков органического растворителя, композицию досушивают под вакуумом или подвергают лиофилизации. Полученный сухой липосомальный препарат фасуют небольшими порциями в стеклянные флаконы, которые герметически укупоривают и хранят до использования. Препарат может храниться при температуре не выше плюс 10°С в течение года.The most promising for commercial use are dry liposomal preparations, the basis of which is a composition consisting of a powder, an excipient acceptable to the body, highly soluble in water, phospholipids dried in the form of thin films and a powder-coated excipient covering particles, and a biologically active substance. After adding water to a dry, phospholipid-coated excipient (proliposomes), it dissolves quickly and liposomes are formed from phospholipids, which include a biologically active substance, depending on its nature, either in the internal volume or in the bilayer membrane of liposomes (Payne NI et al.:, J. Pharm. Sci., 1986, v. 75, No. 4, pp. 325-329; Preparation of liposomes. In: Liposomes, a practical approach, ed. By RRCNew. Oxford, IRL Press, 1990, pp. 33 -104). The production technology consists in the fact that a solution of phospholipids in chloroform (or another organic solvent) is sprayed onto a finely ground filler (or other substrate) located in a rapidly rotating rotary evaporator flask immersed in a thermostatic water bath at a temperature of 30-45 ° С. Hydrophobic biologically active substances are dissolved together with phospholipids in a solvent. Hydrophilic compounds can be mixed with a filler. A solution of phospholipids in chloroform is sprayed in small portions until it is completely used, after which, to get rid of the residues of the organic solvent, the composition is dried under vacuum or lyophilized. The resulting dry liposomal preparation is Packed in small portions into glass bottles, which are hermetically sealed and stored until use. The drug can be stored at a temperature not exceeding plus 10 ° C for a year.
Недостатками данного способа являются ограниченность применения из-за негативного влияния растворителя на свойства получаемого препарата, невозможность соблюсти точную дозировку препарата из-за существенных потерь ингредиентов, трудность масштабирования и непригодность данного способа для промышленного использования.The disadvantages of this method are the limited use due to the negative influence of the solvent on the properties of the resulting preparation, the inability to maintain the exact dosage of the drug due to significant loss of ingredients, the difficulty of scaling and the unsuitability of this method for industrial use.
Наиболее близким к заявляемому способу по технической сущности и достигаемому результату является способ получения сухих липосомальных лекарственных препаратов, осуществляемый смешиванием в емкости биологически активного вещества (БАВ), фосфолипидов, растворителя и порошкообразного наполнителя до достижения однородности композиции, после чего получают липосомальный препарат путем отгонки растворителя при перемешивании в условиях пониженного давления (RU 2130771, 1999). Данный способ значительно упрощает и удешевляет приготовление липосомальных препаратов, а также обеспечивает достаточно высокий процент включения в липосомы биологически активных веществ.The closest to the claimed method according to the technical essence and the achieved result is a method for producing dry liposomal drugs, carried out by mixing in a container of a biologically active substance (BAS), phospholipids, a solvent and a powdery filler to achieve uniformity of the composition, after which a liposomal preparation is obtained by distillation of the solvent at stirring under reduced pressure (RU 2130771, 1999). This method greatly simplifies and cheapens the preparation of liposomal preparations, and also provides a sufficiently high percentage of inclusion of biologically active substances in liposomes.
Недостатками прототипа являются ограниченная область его применения в связи с возможностью потери активности многих биологически активных веществ, в частности белков и ферментов, из-за денатурирующего действия органических растворителей. Кроме того, при промышленном производстве использование токсичных органических растворителей может оказывать негативное влияние на экологию окружающей среды и требует повышенных мер безопасности.The disadvantages of the prototype are the limited scope of its application due to the possibility of loss of activity of many biologically active substances, in particular proteins and enzymes, due to the denaturing action of organic solvents. In addition, in industrial production, the use of toxic organic solvents can have a negative impact on the environment and requires increased safety measures.
Задачей настоящего изобретения являлась разработка более эффективной и безопасной промышленной технологии получения высокодисперсных активных липосомальных препаратов, применимой для включения в липосомы практически любых биологически активных веществ.The objective of the present invention was to develop a more effective and safe industrial technology for the preparation of highly dispersed active liposomal preparations, applicable for inclusion in liposomes of virtually any biologically active substances.
Технический результат достигается в результате использования одного из двух вариантов способа. По первому варианту смесь сухих фосфолипидов, водорастворимого порошкообразного наполнителя и БАВ смешивают в емкости, а затем подвергают обработке в струйной мельнице при давлении не менее 2,5 атм и расходе воздуха не менее 100 л/мин, после чего фракционируют полученный продукт, выделяя из него фракцию менее 50 мкм. Полученный продукт фасуют, хранят и перед применением регидратируют в воде или биологически приемлемой жидкости, в частности в водосодержащем растворителе, например физрастворе. Данный способ наиболее перспективен для получения липосом с БАД, растворимыми в неполярных растворителях, хотя применим и в случае использования полярных БАД.The technical result is achieved by using one of two variants of the method. According to the first embodiment, a mixture of dry phospholipids, a water-soluble powder filler and a biologically active substance are mixed in a container, and then subjected to processing in a jet mill at a pressure of at least 2.5 atm and an air flow rate of at least 100 l / min, after which the resulting product is fractionated, separating from it fraction less than 50 microns. The resulting product is Packed, stored and rehydrated before use in water or a biologically acceptable liquid, in particular in an aqueous solvent, such as saline. This method is most promising for the production of liposomes with dietary supplements soluble in non-polar solvents, although it is applicable in the case of using polar dietary supplements.
По второму варианту предварительно обработке в струйной мельнице подвергают смесь сухих фосфолипидов и водорастворимого порошкообразного наполнителя, а БАВ вводят в полученную смесь в виде водного раствора, после чего полученный продукт далее подвергают лиофильному высушиванию. При этом при необходимости перед высушиванием его подвергают кратковременному (около минуты) воздействию ультразвуком на частоте 40 кГц, что повышает дисперсность образующейся суспензии.According to the second variant, a mixture of dry phospholipids and a water-soluble powder filler is subjected to preliminary processing in a jet mill, and a biologically active substance is introduced into the resulting mixture in the form of an aqueous solution, after which the resulting product is then subjected to freeze drying. Moreover, if necessary, before drying it is subjected to short-term (about a minute) exposure to ultrasound at a frequency of 40 kHz, which increases the dispersion of the resulting suspension.
В качестве водорастворимого порошкообразного наполнителя используют разрешенные Минздравом для производства лекарств, легкорастворимые физиологически приемлемые для организма вещества, такие как: сахара и полисахариды (сахароза, глюкоза, манноза, декстраны и т.п.), полиолы (сорбит, маннит, ПВС и др.), хлористый натрий, глицин, поликлюкин и другие. Выбор используемого наполнителя определяется экспериментально, исходя из особенностей используемого БАД и требований к получаемому препарату. В качестве фосфолипидов могут быть использованы как конкретные фосфолипиды, так и их смеси, полученные из растительного, животного или микробиологического сырья. Конкретная рецептура липосомального препарата определяется в основном особенностями БАВ и требованиями к дисперсности получаемых липосомальных частиц. В частности, при получении липосомального препарата с размером частиц менее 20 мкм появляется возможность их использования для интранозального применения и т.п.As a water-soluble powder filler, substances approved by the Ministry of Health for the production of drugs are used, readily soluble physiologically acceptable substances for the body, such as sugars and polysaccharides (sucrose, glucose, mannose, dextrans, etc.), polyols (sorbitol, mannitol, PVA, etc.). ), sodium chloride, glycine, polyclucine and others. The choice of the filler used is determined experimentally, based on the characteristics of the used dietary supplement and the requirements for the resulting drug. As phospholipids, specific phospholipids and their mixtures obtained from plant, animal or microbiological raw materials can be used. The specific formulation of the liposomal preparation is determined mainly by the characteristics of the biologically active substances and the requirements for the dispersion of the resulting liposomal particles. In particular, upon receipt of a liposomal preparation with a particle size of less than 20 microns, it becomes possible to use them for intranasal use, etc.
Сущность заявляемого способа состоит в том, что в результате одновременного измельчения биологически активного вещества, фосфолипида и наполнителя получают композицию, содержащую относительно крупные частицы наполнителя (20-40 мкм) и высокодисперсные частицы (менее 10 мкм) биологически активного вещества и фосфолипида. В результате аутогезии, возникающей в условиях сочетания процессов измельчения наполнителя и образования при измельчении заряженных частиц с развитой поверхностью, а также интенсивного перемешивания всех компонентов, полученные высокодисперсные частицы биологически активного вещества и фосфолипидов прилипают к поверхности крупных частиц наполнителя, образуя сухой липосомальный препарат, состоящий из частиц сложной формы с развитой внешней поверхностью (см. фиг.1). После растворения препарата в водной среде или биологической жидкости наполнитель быстро растворяется, а из фосфолипидов образуются липосомы, в которые включается биологически активное вещество, находящееся в растворе (см. фиг.2).The essence of the proposed method is that as a result of simultaneous grinding of a biologically active substance, a phospholipid and a filler, a composition is obtained containing relatively large particles of a filler (20-40 microns) and fine particles (less than 10 microns) of the biologically active substance and phospholipid. As a result of autogesia, which occurs under the conditions of a combination of the processes of grinding the filler and the formation of charged particles with a developed surface during grinding, as well as intensive mixing of all components, the finely dispersed particles of the biologically active substance and phospholipids adhere to the surface of large particles of the filler, forming a dry liposomal preparation consisting of particles of complex shape with a developed external surface (see figure 1). After dissolving the drug in an aqueous medium or biological fluid, the filler quickly dissolves, and liposomes are formed from phospholipids, into which the biologically active substance in solution is included (see figure 2).
Во втором варианте сначала получают «пустой» липосомальный препарат путем смешивания в загрузочной емкости мельницы фосфолипида и наполнителя с последующей обработкой полученной смеси в струйной мельнице, при которой микрочастицы фосфолипидов сорбируются на поверхности частиц наполнителя. Затем высокодисперсную смесь обрабатывают раствором биологически активного вещества в полярном растворителе, например воде или физиологическом растворе. При этом наполнитель растворяется, а из фосфолипидов образуются везикулы, которые захватывают растворенные в воде БАВ и носитель, после чего полученный жидкий липосомальный препарат биологически активного вещества подвергают сублимационному высушиванию, фасуют, хранят и при необходимости дополнительно подвергают гидратации.In the second embodiment, an “empty” liposomal preparation is first obtained by mixing the phospholipid and the filler in the feed tank of the mill, followed by processing the resulting mixture in a jet mill, in which microparticles of phospholipids are adsorbed on the surface of the filler particles. The finely divided mixture is then treated with a solution of the biologically active substance in a polar solvent, for example water or physiological saline. In this case, the filler dissolves, and vesicles are formed from phospholipids, which capture the biologically active substances and the carrier dissolved in water, after which the resulting liquid liposomal preparation of the biologically active substance is freeze-dried, packaged, stored and, if necessary, additionally subjected to hydration.
Обработку смеси проводят на установке измельчения, содержащей последовательно соединенные струйную мельницу и два циклонных сепаратора. Проведение процесса измельчения при давлении менее 2,5 атм и расходе воздуха менее 100 л/мин не обеспечивает достаточную степень измельчения смеси и приводит к уменьшению количества БАВ, включаемого в липосомы, а также ведет к ухудшению ФДС и соответственно ухудшению биодоступности БАВ для организма.The processing of the mixture is carried out in a grinding plant containing a series-connected jet mill and two cyclone separators. The grinding process at a pressure of less than 2.5 atm and an air flow rate of less than 100 l / min does not provide a sufficient degree of grinding of the mixture and leads to a decrease in the amount of biologically active substances included in liposomes, and also leads to a deterioration in the FDS and, accordingly, a decrease in bioavailability of biologically active substances for the body.
Нв фиг.1 приведена микрофотография сухого липосомального интерлейкина - 2 при увеличении ×2000.Figure 1 shows a photomicrograph of dry liposomal interleukin-2 at a magnification of × 2000.
На фиг.2 приведена микрофотография регидратированного липосомального препарата интерлейкина - 2 при увеличении ×10000.Figure 2 shows a micrograph of a rehydrated liposome preparation of interleukin-2 at a magnification of × 10000.
Липосомальные препараты, полученные по каждому из предлагаемых вариантов, как показала экспериментальная проверка, обладают повышенной биологической активностью, которая сохраняется в препарате длительное время (до 1 года).The liposomal preparations obtained for each of the proposed options, as shown by experimental verification, have increased biological activity, which remains in the drug for a long time (up to 1 year).
Сущность и преимущества заявляемого способа иллюстрируются следующими примерами.The essence and advantages of the proposed method are illustrated by the following examples.
ПРИМЕР 1. Приготовление липосомального интерферона-альфа 2b (ИФН-альфа 2b).EXAMPLE 1. Preparation of liposomal interferon-alpha 2b (IFN-alpha 2b).
В загрузочный бункер струйной мельницы засыпали 10 г полиглюкина и 1,0 г сухого порошкообразного фосфолипида витол. Помол осуществляли потоком осушенного и фильтрованного сжатого воздуха под давлением 2,5±0,1 атм и расходе газа 234 л/мин.10 g of polyglucin and 1.0 g of dry powdered vitol phospholipid were poured into the feed hopper of the jet mill. The grinding was carried out by a stream of dried and filtered compressed air under a pressure of 2.5 ± 0.1 atm and a gas flow rate of 234 l / min.
В результате получали 10 г сухого липосомального препарата с диаметром частиц менее 40 мкм. Полученный порошок дисперговали в 10 мл воды, нагретой до (38±2)°С и растворяли в ней 2,5 мг рекомбинантного ИФН-альфа 2b с активностью 200×106 ME/мг. Полученную суспензию липосом, в которые включается ИФН-альфа 2b озвучивали ультазвуком на частоте 40 кГц в течение 1 минуты, а затем подвергали лиофильному высушиванию. В результате получали сухой липосомальный препарат с концентрацией ИНФ-альфа 2b 250 мкг/г и активностью 50×106 МЕ/г.The result was 10 g of dry liposome preparation with a particle diameter of less than 40 microns. The resulting powder was dispersed in 10 ml of water heated to (38 ± 2) ° C and 2.5 mg of recombinant IFN-alpha 2b with an activity of 200 × 10 6 ME / mg was dissolved in it. The resulting suspension of liposomes, into which IFN-alpha 2b is incorporated, was sonicated at 40 kHz for 1 minute, and then subjected to freeze drying. The result was a dry liposomal preparation with a concentration of INF-alpha 2b of 250 μg / g and an activity of 50 × 10 6 IU / g
С помощью метода гельфильтрации разделяли препарат на липосомальную и нелипосомальную фракции, в которых определяли содержание ИФН-альфа 2 методом ИФА. Результаты исследования показали, что с липосомами связано около 45% ИФН-альфа 2, использовавшегося для приготовления препарата.Using the gel filtration method, the preparation was divided into liposomal and non-liposomal fractions, in which the content of IFN-alpha 2 was determined by ELISA. The results of the study showed that about 45% of IFN-alpha 2 used to prepare the drug is associated with liposomes.
ПРИМЕР 2. Приготовление липосомальной супероксиддисмутазы (СОД). В загрузочную емкость струйной мельницы помещали 20,0 г порошкообразного сорбита, 2,0 г сухих фосфолипидов лецитина ПРО и 0,01 г лиофилизированной СОД.EXAMPLE 2. Preparation of liposomal superoxide dismutase (SOD). 20.0 g of powdered sorbitol, 2.0 g of dry phospholipids PRO lecithin and 0.01 g of lyophilized SOD were placed in the loading capacity of the jet mill.
Помол осуществляют струйным потоком сжатого воздуха под давлением 2,5±0,1 атм и расходе газа 100 л/мин.The grinding is carried out by a jet stream of compressed air under a pressure of 2.5 ± 0.1 atm and a gas flow rate of 100 l / min.
В результате получили 20,0 г сухого высокодисперсного порошка белого цвета с диаметром частиц менее 30 мкм, содержащего СОД в концентрации 500 мкг/г. Полученный сухой липосомальный препарат СОД характеризовался равномерным распределением СОД по всему объему порошка. Результаты спектрофотометрического исследования содержания СОД в навесках, взятых на разных уровнях объема препарата, показали 500±10 мкг/г. Результаты исследований показали, что с липосомами связано 42% СОД.As a result, 20.0 g of a dry, fine white powder with a particle diameter of less than 30 μm was obtained, containing SOD at a concentration of 500 μg / g. The resulting dry liposomal SOD preparation was characterized by a uniform distribution of SOD throughout the powder. The results of a spectrophotometric study of the content of SOD in samples taken at different levels of the drug volume showed 500 ± 10 μg / g. Studies have shown that 42% of SOD is associated with liposomes.
После растворения порошка в 50 мл нагретой до (38±2)°С воды образуется устойчивая в течение по крайней мере шести недель высокодисперсная суспензия липосом с включенной в них СОД.After the powder is dissolved in 50 ml of water heated to (38 ± 2) ° С, a highly dispersed suspension of liposomes with SOD incorporated in them is formed for at least six weeks.
ПРИМЕР 3. Приготовление липосомального интерлейкина-2 (ИЛ-2).EXAMPLE 3. Preparation of liposomal interleukin-2 (IL-2).
В емкость помещали 5,0 г полиглюкина, 0,5 г сухого гранулированного фосфолипида лецитин ПРО и содержимое 1 ампулы с лиофилизированным рекомбинантным ИЛ-2 (Proleukin, 18×106 ME/ампула), тщательно перемешивали и помещали в герметически закрытый бункер струйной мельницы. Помол осуществляли струйным потоком осушенного и фильтрованного сжатого воздуха под давлением 3,5±0,1 атм и расходе газа 235 л/мин. В результате получили 5,0 г сухого высоко дисперсного порошка белого цвета с диаметром частиц менее 40 мкм, содержащего 3,6×106 МБ ИЛ-2/г. Результаты исследования показали, что с липосомами связано 33% ИЛ-2, используемого для приготовления препарата.5.0 g of polyglucin, 0.5 g of dry granular phospholipid lecithin PRO and the contents of 1 ampoule with lyophilized recombinant IL-2 (Proleukin, 18 × 10 6 ME / ampoule) were placed in a container, mixed thoroughly and placed in a hermetically sealed jet mill hopper . The grinding was carried out by a jet stream of dried and filtered compressed air under a pressure of 3.5 ± 0.1 atm and a gas flow rate of 235 l / min. The result was 5.0 g of a dry, highly dispersed white powder with a particle diameter of less than 40 μm, containing 3.6 × 10 6 MB IL-2 / g. The results of the study showed that 33% of IL-2 used to prepare the drug is associated with liposomes.
ПРИМЕР 4. Приготовление липосомального интерлейкина-1 бета (ИЛ-1 бета).EXAMPLE 4. Preparation of liposomal interleukin-1 beta (IL-1 beta).
В загрузочный бункер мельницы помещали 20,0 г полиглюкина и 2,0 г сухого гранулированного фосфолипида витол. Помол осуществляли потоком осушенного и фильтрованного сжатого воздуха под давлением 3,5±0,1 атм и расходе газа 204 л/мин. В результате получили 20 г сухого порошка белого цвета с диаметром частиц менее 50 мкм.20.0 g of polyglucin and 2.0 g of dry granular phospholipid vitol were placed in the mill hopper. The grinding was carried out by a stream of dried and filtered compressed air under a pressure of 3.5 ± 0.1 atm and a gas flow rate of 204 l / min. The result was 20 g of a dry white powder with a particle diameter of less than 50 microns.
Полученный порошок диспергировали в 50 мл воды, нагретой до температуры (38±2)°С, в которой было предварительно растворено 400 мкг рекомбинантного ИЛ-1 бета с активностью 100×106 ME/мг и подвергали обработке ультразвуком на частоте 40 кГц в течение 1,5 минут. При этом образовалась суспензия высокодисперсных липосом с включенным в них ИЛ-1 бета. Полученную суспензию липосом подвергли затем лиофильному высушиванию, в результате чего был получен сухой липосомальный препарат ИЛ-1 бета с концентрацией последнего 20 мкг/г (2×10 6 ME/г). Результаты исследований показали, что с липосомами связано 37% ИЛ-1 бета, используемого для приготовления препаратаThe resulting powder was dispersed in 50 ml of water heated to a temperature of (38 ± 2) ° C, in which 400 μg of recombinant IL-1 beta with an activity of 100 × 10 6 ME / mg were previously dissolved and subjected to ultrasound treatment at a frequency of 40 kHz for 1.5 minutes. In this case, a suspension of highly dispersed liposomes with IL-1 beta incorporated in them was formed. The resulting liposome suspension was then freeze-dried, resulting in a dry liposome preparation IL-1 beta with a concentration of the latter of 20 μg / g (2 × 10 6 ME / g). The results of the studies showed that 37% of IL-1 beta used to prepare the drug is associated with liposomes.
ПРИМЕР 5. Изучение влияния природы ингредиентов и их соотношения на включение БАВ в липосомы на примере интерферона-альфа 2b.EXAMPLE 5. The study of the influence of the nature of the ingredients and their ratio on the inclusion of biologically active substances in liposomes on the example of interferon-alpha 2b.
В условиях примера 1 получали липосомальные препараты на основе использования различных наполнителей и фосфолипидов. Полученные результаты приведены в таблице 1.Under the conditions of Example 1, liposome preparations were prepared based on the use of various excipients and phospholipids. The results are shown in table 1.
Как следует из таблицы 1 для получения высокодисперсных липосом интерферона-альфа 2b (с высоким содержанием частиц менее 10 мкм), лучшие результаты достигаются при использовании в качестве фосфолипидов витола. Повышение содержания наполнителя в рецептуре способствует повышению дисперсности препарата.As follows from table 1 to obtain highly dispersed liposomes of interferon-alpha 2b (with a high particle content of less than 10 microns), the best results are achieved when using vitol as phospholipids. An increase in the filler content in the formulation helps to increase the dispersion of the drug.
ПРИМЕР 5. Влияние ультразвуковой обработки на размер частиц липосомального препарата.EXAMPLE 5. The effect of ultrasonic treatment on the particle size of the liposome preparation.
В условиях примера 4 проводились исследования на влияние ультразвуковой обработки при частоте 40 кГц на фракционно-дисперсный состав липосомального интерферона-альфа 2b. Полученные результаты приведены в таблице 2.In the conditions of example 4, studies were conducted on the effect of ultrasonic treatment at a frequency of 40 kHz on the fractionally dispersed composition of liposome interferon-alpha 2b. The results are shown in table 2.
Полученные результаты показали, что при использовании заявляемого способа удается получить высокодисперсные липосомальные препараты с большим содержанием БАВ по более простой и экологичной технологии.The results showed that when using the proposed method, it is possible to obtain highly dispersed liposome preparations with a high content of biologically active substances using a simpler and more environmentally friendly technology.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009140381/15A RU2437649C2 (en) | 2009-11-03 | 2009-11-03 | Method of obtaining dry liposomal preparations (versions) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009140381/15A RU2437649C2 (en) | 2009-11-03 | 2009-11-03 | Method of obtaining dry liposomal preparations (versions) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009140381A RU2009140381A (en) | 2011-05-10 |
| RU2437649C2 true RU2437649C2 (en) | 2011-12-27 |
Family
ID=44732257
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009140381/15A RU2437649C2 (en) | 2009-11-03 | 2009-11-03 | Method of obtaining dry liposomal preparations (versions) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2437649C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2784321C1 (en) * | 2022-05-16 | 2022-11-23 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for obtaining liposomal nanocontainers with immobilized enzyme |
-
2009
- 2009-11-03 RU RU2009140381/15A patent/RU2437649C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Кузякова Л.М., Конструирование трансдермальных липосомальных препаратов с заданными свойствами// Вест. Моск. Ун-та, сер. 2. - Химия, 2005, Т.46, №1, стр.74-79. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Технологические аспекты получения липосомальных препаратов в условиях GMP// Биофармацевтический журнал. - 2009, Т.1, №3, стр.18-29. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2784321C1 (en) * | 2022-05-16 | 2022-11-23 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for obtaining liposomal nanocontainers with immobilized enzyme |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2009140381A (en) | 2011-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1138536C (en) | Fat emulsions for inhalational administration | |
| CN101784267B (en) | Sustained-release chitosan capsules comprising chitosan and phytic acid | |
| JP5439366B2 (en) | Cellulose powder excellent in segregation preventing effect and composition thereof | |
| JP6751424B2 (en) | Cochleate made with soybean phosphatidylserine | |
| JP3303884B2 (en) | Novel lyophilized composition and oral administration of drugs, biologics, nutrients and foods | |
| KR101511196B1 (en) | Spray drying of an alcoholic aqueous solution for the manufacture of a water-insoluble active agent microparticle with a partial or complete amino acid and/or phospholipid coat | |
| JP2009519972A (en) | Method for producing a particle-based pharmaceutical for pulmonary or nasal administration | |
| KR20030081396A (en) | Method of preparing biological materials and preparation produced using same | |
| TWI617326B (en) | Composite particles containing cellulose, inorganic compounds and hydroxypropyl cellulose | |
| JP2011504410A (en) | Fine particle production apparatus and fine particle production method | |
| CN88102851A (en) | Method for preparing pharmaceutical composition | |
| KR20050042052A (en) | Spray drying methods and compositions thereof | |
| JPH01125318A (en) | Multivesicular liposome enclosing physiologically active substance in presence of hydrochloride | |
| KR101796340B1 (en) | Process for preparing products comprising stabilised actives and compositions comprising same | |
| KR20160118317A (en) | Nanosuspension of natural materials and preparation method thereof | |
| RU2437649C2 (en) | Method of obtaining dry liposomal preparations (versions) | |
| RU2694063C2 (en) | Finely dispersed insulin, finely dispersed insulin analogues and methods for their industrial production | |
| RU2130771C1 (en) | Method of preparing liposomal preparations | |
| CN1301747C (en) | Protein medicine microcapsule and inhalational aerosol thereof | |
| RU99326U1 (en) | DEVICE FOR PRODUCING LIPOSOMAL DRUGS | |
| JPH04265151A (en) | Water-containing liposomes | |
| EP2608774B1 (en) | Porous degradable polyelectrolyte microspheres as vaccine vector | |
| RU2291702C2 (en) | Ultradispersed unossified antler powder, method for production thereof, agent for balneotherapy based on the same and solution for balneotherapy | |
| RU2146525C1 (en) | Method of producing ultradispersed powder from velvet antlers for preparation of food additives or pharmaceutic and cosmetic preparations | |
| EP3222273B1 (en) | Method for producing porous particle |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191104 |